Amersham WB system. Οδηγίες λειτουργίας. Μετάφραση από τα Αγγλικά

Transcript

1 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας Μετάφραση από τα Αγγλικά

2 Σκόπιμα κενή σελίδα

3 Πίνακας περιεχομένων Πίνακας περιεχομένων 1 Εισαγωγή Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Amersham WB Τεκμηρίωση system... 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια Προφυλάξεις ασφαλείας Ετικέτες Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης Πληροφορίες σχετικά με την ανακύκλωση... 3 Περιγραφή συστήματος Επισκόπηση του οργάνου Μονάδα Elpho & scan Μονάδα Western Επισκόπηση Διαμερίσματα μονάδας Western Διαδρομές ροής υγρών Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων Αναλώσιμα προσήμανσης Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB molecular weight markers Amersham WB gel card Amersham WB buffer strip και Amersham WB buffer strip holder Amersham WB paper comb Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Δευτεροταγή αντισώματα ανίχνευση Συγκρατητήρας αποξήρανσης Αποξήρανση της κάρτας PVDF Προσαρμογέας μεμβράνης Σάρωση κάρτας PVDF Άλλα εξαρτήματα Επισκόπηση λογισμικού... 4 Εγκατάσταση Προετοιμασία χώρου εγκατάστασης Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Εγκατάσταση του λογισμικού... 5 Εκτέλεση πειράματος Επισκόπηση Πραγματοποιήστε έναρξη του Amersham WB analyzer Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων Προετοιμασία του Amersham WB molecular weight markers Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 3

4 Πίνακας περιεχομένων 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Διαδικασίες μετά την ηλεκτροφόρηση και σάρωση της κάρτας γέλης Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Διαδικασίες μετά τη μεταφορά Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Εκτέλεση ανίχνευσης Διαδικασίες μετά την ανίχνευση Εκτέλεση αποξήρανσης Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων... 6 Συντήρηση Πρόγραμμα συντήρησης Οδηγίες συντήρησης Εβδομαδιαίος καθαρισμός των διαδρομών ροής μεταφοράς και ανίχνευσης Διαδικασίες αντικατάστασης Μετακίνηση των μονάδων του οργάνου... 7 Πληροφορίες αναφοράς Προδιαγραφές συστήματος Οδηγός χημικής αντοχής Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας Μεταφράσεις εξαρτημάτων και αναλώσιμων... Ευρετήριο Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

5 1 Εισαγωγή 1 Εισαγωγή Το Amersham WB system Το Amersham WB system είναι ένα ολοκληρωμένο σύστημα SDS-PAGE (ηλεκτροφόρησης σε γέλη πολυακρυλαμιδίου παρουσία δωδεκυλοθειικού νατρίου) και ανάλυσης πρωτεϊνών μέσω αποτύπωσης Western βάσει ανίχνευσης φθορισμού. Όλα τα βήματα ηλεκτροφόρησης, σάρωσης, μεταφοράς και αυτόματης ανίχνευσης εκτελούνται από το ίδιο σύστημα. Υπάρχουν διαθέσιμα αντιδραστήρια για προσήμανση και ανίχνευση αντισωμάτων, καθώς και γέλη και μεμβράνες ως αναλώσιμα. Το Amersham WB system περιλαμβάνει το όργανο, το Amersham WB analyzer, το Amersham WB software (λογισμικό), καθώς και σχετικά εξαρτήματα και αναλώσιμα. Το Amersham WB analyzer αποτελείται από δύο μονάδες, την Amersham WB elpho & scan και Amersham WB western. Το σύστημα υποστηρίζει πολλές εφαρμογές, από γρήγορη διαλογή της σύστασης ή της περίσσειας πρωτεϊνών έως προηγμένη ποσοτική ανάλυση για συγκρίσεις των επιπέδων πρωτεϊνών μεταξύ δειγμάτων. Οι πρωτεΐνες μπορούν να προσημανθούν με το αντιδραστήριο χρωστικής Amersham WB Cy 5 με αποτέλεσμα να είναι εφικτή η απευθείας ανίχνευσή τους στη γέλη μετά την ηλεκτροφόρηση. Στα πειράματα Western, τα μη σημασμένα ή προσημασμένα με Cy5 δείγματα πρωτεϊνών μεταφέρονται σε μεμβράνες, και οι πρωτεΐνες-στόχοι μπορούν να ανιχνευθούν με τη χρήση συζευγμένων δευτεροταγών αντισωμάτων Cy3 και/ή Cy5. Η ανίχνευση βάσει φθορισμού παρέχει υψηλή ευαισθησία και ευρύ δυναμικό φάσμα και επιτρέπει την πολλαπλή ανάλυση της ίδιας μεμβράνης αποτύπωσης Western. Η πολλαπλή ανάλυση ολικής πρωτεΐνης προσημασμένης με Cy5, καθώς και η στοχευμένη ανίχνευση με σημασμένα με Cy3 δευτεροταγή αντισώματα καθιστά εφικτή την κανονικοποίηση σημάτων-στόχων με χρήση ολικής πρωτεΐνης σε κάθε λωρίδα. Το σύστημα Amersham WB software είναι εύκολο στη χρήση και προορίζεται για έλεγχο των διαφορετικών βημάτων της ροής εργασίας και για αυτόματη ή μη αυτόματη αξιολόγηση των αποτελεσμάτων σας. Για τον κατάλογο με τις μεταφρασμένες ονομασίες εξαρτημάτων και αναλώσιμων, βλ. Ενότητα 7.4 Μεταφράσεις εξαρτημάτων και αναλώσιμων, στη σελίδα 243. Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιλαμβάνει τις παρακάτω ενότητες: Ενότητα 1.1 Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο Βλ. σελίδα 7 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 5

6 1 Εισαγωγή Ενότητα 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς 1.4 Amersham WB Τεκμηρίωση system Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

7 1 Εισαγωγή 1.1 Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο 1.1 Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο Σκοπός του παρόντος εγχειριδίου Οι οδηγίες λειτουργίας σας παρέχουν τις απαιτούμενες πληροφορίες για την εγκατάσταση, λειτουργία και συντήρηση του Amersham WB system με ασφαλή τρόπο. Σκοπός του παρόντος εγχειριδίου Οι οδηγίες λειτουργίας παρέχουν τις ακόλουθες πληροφορίες: πληροφορίες σχετικά με την ασφάλεια και τους κανονισμούς μια περιγραφή του συστήματος που περιλαμβάνει τα εξαρτήματα και τα αναλώσιμα που χρησιμοποιεί το σύστημα οδηγίες εγκατάστασης πληροφορίες σχετικά με τον τρόπο εκτέλεσης ενός πειράματος με ασφαλή τρόπο οδηγίες για εργασίες συντήρησης εκτελούμενες από το χρήστη προδιαγραφές και πρόσθετες πληροφορίες αναφοράς Τυπογραφικές συμβάσεις Τα στοιχεία λογισμικού επισημαίνονται στο κείμενο με έντονους πλάγιους χαρακτήρες. Τα διάφορα επίπεδα μενού διαχωρίζονται από άνω και κάτω τελεία, έτσι το στοιχείο File:Open αναφέρεται στην εντολή Open του μενού File. Τα στοιχεία υλικού εξοπλισμού επισημαίνονται στο κείμενο με έντονη γραφή (π.χ. διακόπτης Power). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 7

8 1 Εισαγωγή 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη Διαβάστε τα ακόλουθα προτού θέσετε σε λειτουργία το Amersham WB analyzer Όλοι οι χρήστες πρέπει να διαβάσουν όλες τις Οδηγίες λειτουργίας πριν από την εγκατάσταση, τη λειτουργία ή τη συντήρηση του οργάνου. Έχετε πάντα τις Οδηγίες λειτουργίας κοντά σας όταν χειρίζεστε το Amersham WB analyzer. Μην χρησιμοποιείτε το Amersham WB analyzer με διαφορετικό τρόπο από αυτόν που περιγράφεται στην τεκμηρίωση χρήστη. Σε αντίθετη περίπτωση, υπάρχει κίνδυνος τραυματισμού και πρόκλησης ζημιάς στον εξοπλισμό. Προβλεπόμενη χρήση Amersham WB Το system είναι ένα σύστημα ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών και αποτύπωσης Western το οποίο περιλαμβάνει σάρωση καρτών γέλης και καρτών PVDF. Οι πρωτεΐνες μπορούν να προσημανθούν με Cy5 και, κατά συνέπεια, μπορούν να ανιχνεύονται απευθείας στη γέλη μετά την ηλεκτροφόρηση. Στα πειράματα Western, τα μη σημασμένα ή προσημασμένα με Cy5 δείγματα πρωτεϊνών μεταφέρονται σε μεμβράνες, και οι πρωτεΐνες-στόχος μπορούν να ανιχνευθούν με τη χρήση συζευγμένων δευτεροταγών αντισωμάτων Cy3 και/ή Cy5. Η ανίχνευση βάσει φθορισμού παρέχει υψηλή ευαισθησία και ευρύ δυναμικό φάσμα και επιτρέπει την πολλαπλή ανάλυση της ίδιας μεμβράνης αποτύπωσης Western. Amersham WB Το system προορίζεται αποκλειστικά για ερευνητική χρήση και δεν πρέπει να χρησιμοποιείται σε κλινικές διαδικασίες ή για διαγνωστικούς σκοπούς. Προϋποθέσεις Για να διασφαλίζεται η λειτουργία του συστήματος με τον ενδεδειγμένο τρόπο, πρέπει να ισχύουν οι παρακάτω προϋποθέσεις: Πρέπει να διαθέτετε βασικές γνώσεις Η/Υ και Microsoft Windows. Πρέπει να κατανοείτε τις έννοιες της ηλεκτροφόρησης και της αποτύπωσης Western. 8 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

9 1 Εισαγωγή 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη Το όργανο και το λογισμικό πρέπει να εγκαθίσταται σύμφωνα με τις οδηγίες που παρέχονται στην ενότητα Κεφάλαιο 4 Εγκατάσταση, στη σελίδα 100. Συμβουλή: Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τις αρχές και τις μεθόδους της αποτύπωσης Western και για καθοδήγηση σχετικά με τον τρόπο εκτέλεσης επιτυχούς αποτύπωσης Western, κατεβάστε ή παραγγείλετε το εγχειρίδιο, Western Blotting Principles and Methods , από τη διεύθυνση Σημειώσεις που αφορούν την ασφάλεια Η παρούσα τεκμηρίωση χρήσης περιλαμβάνει σημειώσεις ασφαλείας (ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗ- ΣΕΙΣ, ΕΠΙΣΗΜΑΝΣΕΙΣ ΠΡΟΣΟΧΗΣ και ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ) σχετικά με την ασφαλή χρήση του προϊόντος. Ανατρέξτε στους παρακάτω ορισμούς. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Ο όρος ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ υποδεικνύει μια επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, μπορεί να προκαλέσει θάνατο ή σοβαρό τραυματισμό. Πρέπει να διακόψετε την εργασία σας, εάν οι προϋποθέσεις που αναφέρονται δεν ικανοποιούνται και δεν έχουν γίνει πλήρως κατανοητές. ΠΡΟΣΟΧΗ Ο όρος ΠΡΟΣΟΧΗ υποδεικνύει μια επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, μπορεί να προκαλέσει μικρό ή μέτριο τραυματισμό. Πρέπει να διακόψετε την εργασία σας, εάν οι προϋποθέσεις που αναφέρονται δεν ικανοποιούνται και δεν έχουν γίνει πλήρως κατανοητές. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Ο όρος ΣΗΜΕΙΩΣΗ υποδεικνύει οδηγίες που πρέπει να τηρήσετε, ώστε να αποφευχθεί η πρόκληση ζημιάς στο προϊόν ή σε άλλο εξοπλισμό. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 9

10 1 Εισαγωγή 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη Σημειώσεις και συμβουλές Σημείωση: Συμβουλή: Οι σημειώσεις χρησιμοποιούνται για την επισήμανση σημαντικών πληροφοριών που συμβάλλουν στη βέλτιστη και απρόσκοπτη χρήση του προϊόντος. Οι συμβουλές περιλαμβάνουν χρήσιμες πληροφορίες για τη βελτίωση ή τη βελτιστοποίηση των διαδικασιών σας. 10 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

11 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τις οδηγίες και τα πρότυπα με τα οποία συμμορφώνεται το Amersham WB system. Πληροφορίες σχετικά με την κατασκευή Στον παρακάτω πίνακα συνοψίζονται οι απαιτούμενες κατασκευαστικές πληροφορίες. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στο έγγραφο Δήλωσης Συμμόρφωσης ΕΕ. Απαιτήσεις Όνομα και διεύθυνση κατασκευαστή Περιεχόμενο GE Healthcare Bio-Sciences AB, Björkgatan 30, SE Uppsala, Sweden Συμμόρφωση με τις οδηγίες της ΕΕ Το προϊόν αυτό συμμορφώνεται με τις Ευρωπαϊκές οδηγίες που αναφέρονται στον πίνακα, καθώς πληροί τα σχετικά εναρμονισμένα πρότυπα. Οδηγία 2006/42/ΕΚ 2004/108/ΕΚ 2006/95/ΕΚ Τίτλος Οδηγία για τα μηχανήματα (MD) Οδηγία για την ηλεκτρομαγνητική συμβατότητα (ΗΜΣ) Οδηγία για τη χαμηλή τάση (LVD) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 11

12 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Σήμανση CE Η σήμανση CE και η σχετική Δήλωση συμμόρφωσης ΕE ισχύουν όταν το όργανο: Χρησιμοποιείται ως αυτόνομη μονάδα ή Συνδέεται σε άλλα προϊόντα που συνιστώνται ή αναφέρονται στην τεκμηρίωση χρήστη και Χρησιμοποιείται στην κατάσταση στην οποία παραδόθηκε από την GE, εξαιρουμένων τυχόν τροποποιήσεων που περιγράφονται στην τεκμηρίωση χρήστη. Διεθνή πρότυπα Οι τυπικές απαιτήσεις που ικανοποιούνται από αυτό το προϊόν συνοψίζονται στον παρακάτω πίνακα. Πρότυπο EN/IEC , UL , CAN/CSA-C22.2 Αρ EN/IEC (Εκπομπές κατά το πρότυπο CISPR 11, ομάδα 1, κατηγορία A) EN ISO Περιγραφή Απαιτήσεις ασφαλείας ηλεκτρικού εξοπλισμού για μετρήσεις, έλεγχο και εργαστηριακή χρήση. Ηλεκτρικός εξοπλισμός για μετρήσεις, έλεγχο και εργαστηριακή χρήση - Απαιτήσεις ΗΜΣ. Ασφάλεια μηχανικού εξοπλισμού. Γενικές αρχές σχεδιασμού. Αξιολόγηση κινδύνων και μείωση κινδύνων. Σημειώσεις Το πρότυπο EN είναι εναρμονισμένο με την Ευρωπαϊκή Οδηγία 2006/95/ΕΚ. Το πρότυπο EN είναι εναρμονισμένο με την Ευρωπαϊκή Οδηγία 2004/108/ΕΚ. Το πρότυπο EN ISO είναι εναρμονισμένο με την Οδηγία 2006/42/ΕΚ. 12 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

13 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Πρότυπο EN/IEC Περιγραφή Ασφάλεια προϊόντων λέιζερ. Σημειώσεις Το πρότυπο EN είναι εναρμονισμένο με την Ευρωπαϊκή Οδηγία 2006/95/ΕΚ. Κανονισμοί και πρότυπα που διέπουν τα προϊόντα λέιζερ Αυτός ο εξοπλισμός είναι προϊόν λέιζερ κατηγορίας 1 (IEC :2007/EN :2007). Αυτό το όργανο ικανοποιεί τις απαιτήσεις ασφαλείας για εξοπλισμό με ακτινοβολία λέιζερ οι οποίες καθορίζονται από τον κώδικα ομοσπονδιακών κανονισμών (ΤΙΤΛΟΣ 21 CFR, κεφάλαιο 1, υποκεφάλαιο J, μέρος Προϊόντα λέιζερ). Συμμόρφωση με τους Κανονισμούς FCC Η συσκευή αυτή συμμορφώνεται με την ενότητα 15 των Κανονισμών FCC. Η λειτουργία υπόκειται στις δύο παρακάτω προϋποθέσεις: (1) Η συσκευή αυτή δεν πρέπει να προκαλεί επιβλαβείς παρεμβολές και (2) η συσκευή αυτή πρέπει να αποδέχεται τυχόν παρεμβολές που λαμβάνει, συμπεριλαμβανομένων παρεμβολών που μπορεί να προκαλέσουν ανεπιθύμητη λειτουργία. Σημείωση: Ο χρήστης πρέπει να γνωρίζει ότι τυχόν αλλαγές ή τροποποιήσεις που δεν έχουν εγκριθεί ρητά από την GE μπορεί να οδηγήσουν σε ακύρωση του δικαιώματος χειρισμού του εξοπλισμού. Ο εξοπλισμός αυτός έχει ελεγχθεί και έχει διαπιστωθεί ότι συμμορφώνεται με τα όρια για ψηφιακές συσκευές κατηγορίας Α, σύμφωνα με την ενότητα 15 των Κανονισμών FCC. Τα όρια αυτά έχουν σχεδιαστεί ώστε να παρέχουν εύλογη προστασία από επιβλαβείς παρεμβολές, όταν ο εξοπλισμός λειτουργεί σε εμπορικό περιβάλλον. Ο εξοπλισμός αυτός παράγει, χρησιμοποιεί και εκπέμπει ενέργεια ραδιοσυχνοτήτων. Εάν δεν εγκατασταθεί και δεν χρησιμοποιηθεί σύμφωνα με το εγχειρίδιο οδηγιών, μπορεί να προκαλέσει επιβλαβείς παρεμβολές στις ραδιοεπικοινωνίες. Η λειτουργία του εξοπλισμού αυτού σε κατοικημένη περιοχή ενδέχεται να προκαλέσει επιβλαβείς παρεμβολές. Στην περίπτωση αυτή, ο χρήστης πρέπει να αποκαταστήσει τις παρεμβολές με δικά του έξοδα. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 13

14 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Περιβαλλοντική συμμόρφωση Ρύθμιση 2011/65/EU 2012/19/EΕ Κανονισμός (ΕΚ) αριθ. 1907/2006 ACPEIP Τίτλος Οδηγία σχετικά με τον περιορισμό της χρήσης ορισμένων επικίνδυνων ουσιών σε είδη ηλεκτρικού και ηλεκτρονικού εξοπλισμού (Οδηγία RoHS) Οδηγία σχετικά με τα απόβλητα ειδών ηλεκτρικού και ηλεκτρονικού εξοπλισμού (ΑΗΗΕ) για την καταχώριση, την αξιολόγηση, την αδειοδότηση και τους περιορισμούς των χημικών προϊόντων (REACH) Διοίκηση για τον έλεγχο της μόλυνσης που προκαλείται από προϊόντα ηλεκτρονικής πληροφόρησης, κινεζικός νόμος για τον περιορισμό των επικίνδυνων ουσιών Συμμόρφωση συνδεδεμένου εξοπλισμού με τους κανονισμούς Κάθε εξοπλισμός που είναι συνδεδεμένος στο Amersham WB analyzer πρέπει να πληροί τις απαιτήσεις για την ασφάλεια των προτύπων IEC/EN/UL/CSA , IEC/EN/UL/CSA , ή άλλων σχετικών εθνικών κανονισμών και προτύπων για την ασφάλεια. Η εγκατάσταση και η χρήση του εξοπλισμού πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εντός της Ε.Ε., ο συνδεδεμένος εξοπλισμός πρέπει να φέρει σήμανση CE. 14 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

15 1 Εισαγωγή 1.4 Amersham WB Τεκμηρίωση system 1.4 Amersham WB Τεκμηρίωση system Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει την τεκμηρίωση χρήστη και τη σχετική τεκμηρίωση για το Amersham WB system. Τεκμηρίωση χρήστη Ο παρακάτω πίνακας αναφέρει την τεκμηρίωση χρήστη που παρέχεται με το Amersham WB system: Έγγραφο Amersham WB analyzer Οδηγίες αποσυσκευασίας Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας Κύρια περιεχόμενα Οι οδηγίες αυτές περιγράφουν τον τρόπο αποσυσκευασίας του Amersham WB analyzer. Το εγχειρίδιο αυτό περιέχει τις πληροφορίες που απαιτούνται για εργασίες όπως: εγκατάσταση, χειρισμός και συντήρηση του Amersham WB system με ασφαλή τρόπο εκτέλεση τυπικού πειράματος με ασφαλή τρόπο Περιέχει επίσης πληροφορίες σχετικά με την ασφάλεια και τους κανονισμούς, μια περιγραφή του συστήματος και πληροφορίες αναφοράς. Διαθεσιμότητα Στο εσωτερικό του κιβωτίου παράδοσης του Amersham WB analyzer. Η αγγλική έκδοση σε έντυπη μορφή παρέχεται μαζί με το σύστημα. Οι μεταφρασμένες εκδόσεις είναι διαθέσιμες υπό μορφή αρχείου PDF στο CD Τεκμηρίωση χρήστη. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 15

16 1 Εισαγωγή 1.4 Amersham WB Τεκμηρίωση system Έγγραφο Amersham WB system User Manual Amersham WB software Help Κύρια περιεχόμενα Το εγχειρίδιο αυτό περιέχει τις πληροφορίες που απαιτούνται για εργασίες όπως: λειτουργία και συντήρηση του Amersham WB system με ασφαλή τρόπο προγραμματισμός, εκτέλεση και αξιολόγηση ηλεκτροφόρησης και πειραμάτων Western αντιμετώπιση προβλημάτων του συστήματος και αποτελέσματα Περιέχει επίσης περιγραφή του συστήματος, πληροφορίες αναφοράς και πληροφορίες για τον τρόπο παραγγελίας. Το Amersham WB software Help περιέχει πληροφορίες σχετικά με: ροές εργασιών χρήστη για εκτέλεση ηλεκτροφόρησης και πειραμάτων Western περιγραφές λογισμικού σύνδεσμοι προς το Amersham WB system User Manual για λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με το χειρισμό του οργάνου, των εξαρτημάτων και των αναλώσιμων Διαθεσιμότητα Έχει ενσωματωθεί στο Amersham WB software ως εγχειρίδιο οδηγιών χρήσης με μορφή αρχείου HTML στο μενού Βοήθεια. Διατίθεται επίσης υπό μορφή αρχείου PDF στο CD Τεκμηρίωση χρήστη. Έχει ενσωματωθεί στο Amersham WB software (στο δεξί πίνακα του λογισμικού). Εγχειρίδιο μεθόδων Το εγχειρίδιο Western Blotting Principles and Methods παρέχει οδηγίες για πλήρη ροή εργασιών αποτύπωσης Western. Περιγράφει θεωρητικές και πρακτικές πτυχές της τεχνικής, μαζί με χρήσιμες συμβουλές και υποδείξεις. Στόχος του εγχειριδίου είναι να παρέχει τόσο σε αρχάριους όσο και σε προχωρημένους χρήστες οδηγίες για μια επιτυχημένη αποτύπωση Western. Κατεβάστε ή παραγγείλετε το εγχειρίδιο Western Blotting Principles and Methods από τη διεύθυνση 16 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

17 1 Εισαγωγή 1.4 Amersham WB Τεκμηρίωση system Αρχεία δεδομένων και σημειώσεις εφαρμογής Μπορείτε να παραγγείλετε ή να κατεβάσετε τα αρχεία δεδομένων και τις σημειώσεις εφαρμογής από τη διεύθυνση Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 17

18 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το παρόν κεφάλαιο περιγράφει προληπτικά μέτρα ασφαλείας και διαδικασίες επείγοντος τερματισμού για το Amersham WB system. Περιγράφεται επίσης το περιεχόμενο των επισημάνσεων στα όργανα και παρέχονται πληροφορίες αναφορικά με την ανακύκλωση. Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιλαμβάνει τις παρακάτω ενότητες: Ενότητα 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας 2.2 Ετικέτες 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης 2.4 Πληροφορίες σχετικά με την ανακύκλωση Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

19 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας Εισαγωγή Το Amersham WB analyzer τροφοδοτείται με την τάση του κεντρικού δικτύου και χρησιμοποιεί υγρά που μπορεί να είναι επικίνδυνα. Πριν από την εγκατάσταση, τη λειτουργία ή τη συντήρηση των μονάδων του οργάνου, πρέπει να γνωρίζετε τους κινδύνους που περιγράφονται στο παρόν εγχειρίδιο. Τηρείτε πάντα τους τοπικούς κανονισμούς και τις οδηγίες κατά τη διάρκεια της λειτουργίας και συντήρησης του συστήματος και του χειρισμού χημικών προϊόντων με ασφαλή τρόπο. Τηρείτε τις παρεχόμενες οδηγίες, για να αποφεύγονται τραυματισμοί και πρόκληση ζημιάς στον εξοπλισμό. Οι προφυλάξεις ασφαλείας της παρούσας ενότητας χωρίζονται στις παρακάτω κατηγορίες: Γενικές προφυλάξεις Εύφλεκτα υγρά Ατομική προστασία Εγκατάσταση και μετακίνηση Λειτουργία συστήματος Συντήρηση Απόσυρση Γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μην θέτετε το Amersham WB analyzer σε λειτουργία με κανέναν άλλο τρόπο πέραν των περιγραφόμενων στο Οδηγίες λειτουργίας. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη χρησιμοποιείτε εξαρτήματα που δεν παρέχονται ή δεν συνιστώνται από την GE. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 19

20 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη χρησιμοποιείτε το Amersham WB analyzer εάν δεν λειτουργεί σωστά ή εάν έχει υποστεί ζημιά, όπως για παράδειγμα: Ζημιά στο καλώδιο τροφοδοσίας ή στο βύσμα του Ζημιά λόγω πτώσης του εξοπλισμού ζημιά σε άλλα μέρη η οποία μπορεί να επηρεάσει τη λειτουργία Εύφλεκτα υγρά ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Εάν χυθεί υγρό στο εξωτερικό περίβλημα της μονάδας Elpho & scan ή Western, αποσυνδέστε την από το ρεύμα και σκουπίστε το υγρό. Εάν στις μονάδες του οργάνου χυθεί υγρό το οποίο αρχίζει να εισχωρεί στο περίβλημα της μονάδας Elpho & scan ή Western, αποσυνδέστε το καλώδιο τροφοδοσίας που συνδέεται στις μονάδες και επικοινωνήστε με το τμήμα εξυπηρέτησης πελατών. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Πριν από την εκτέλεση μιας εργασίας, βεβαιωθείτε ότι οι σωλήνες αποβλήτων της μονάδας Western εκρέουν στη φιάλη αποβλήτων που βρίσκεται κάτω από τον πάγκο και δεν εμφανίζουν διαρροή. Απαιτείται να υπάρχει άδεια φιάλη αποβλήτων με χωρητικότητα τουλάχιστον 4 λίτρων. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Μην χρησιμοποιείτε ρυθμιστικά διαλύματα μεταφοράς με πάνω από 40% περιεκτικότητα σε αιθανόλη ή μεθανόλη. Συνιστάται να χρησιμοποιείτε ρυθμιστικά διαλύματα μεταφοράς με μόλις 20% περιεκτικότητα σε αιθανόλη. 20 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

21 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας Ατομική προστασία ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Χρησιμοποιείτε πάντα γάντια, προστατευτικά ενδύματα και γυαλιά κατά τον χειρισμό καρτών γέλης, καρτών PVDF και λοιπών αναλώσιμων που παρέχονται με το Amersham WB system. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κατά τις εργασίες προσήμανσης δειγμάτων πρωτεϊνών: Χρησιμοποιείτε πάντα προστατευτικά ενδύματα, γάντια και γυαλιά. Διαβάζετε το δελτίο δεδομένων ασφαλείας (SDS/MSDS) προτού προβείτε σε προσήμανση των δειγμάτων. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Το Amersham WB analyzer είναι προϊόν κατηγορίας Α. Σε οικιακό περιβάλλον, μπορεί να προκαλέσει ραδιοπαρεμβολές. Στην περίπτωση αυτή, ενδέχεται να καταστεί αναγκαία η λήψη κατάλληλων μέτρων από το χρήστη. ΠΡΟΣΟΧΗ Επικίνδυνες ουσίες. Κατά τη χρήση επικίνδυνων χημικών και βιολογικών παραγόντων, λαμβάνετε όλα τα κατάλληλα προστατευτικά μέτρα, όπως είναι η χρήση προστατευτικών γυαλιών και γαντιών ανθεκτικών στις ουσίες που χρησιμοποιούνται. Τηρείτε τους τοπικούς ή/και εθνικούς κανονισμούς σχετικά με την ασφαλή λειτουργία, τη συντήρηση και την απόσυρση του εξοπλισμού. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 21

22 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΣΟΧΗ Αφού ολοκληρωθεί η προσήμανση πρωτεϊνών σε δείγματα, ενδέχεται να εκλυθεί μια έντονη οσμή η οποία οφείλεται σε ίχνη διμεθυλικού σουλφιδίου (DMS) και διμεθυλικού σουλφοξειδίου (DMSO). Ενδέχεται να απαιτείται σύστημα τοπικού εξαερισμού. Για ασφαλή λειτουργία, βεβαιωθείτε ότι ακολουθείτε τους τοπικούς κανονισμούς και οδηγίες. ΠΡΟΣΟΧΗ Χρησιμοποιείτε πάντα γάντια, προστατευτικά ενδύματα και γυαλιά κατά τη λειτουργία και τη συντήρηση του συστήματος Amersham WB analyzer. ΠΡΟΣΟΧΗ Εξοπλισμός ατομικής προστασίας (PPE). Όταν συσκευάζετε, αποσυσκευάζετε, μεταφέρετε ή μετακινείτε το σύστημα, να φοράτε: Προστατευτικά υποδήματα, κατά προτίμηση με επένδυση από χάλυβα Γάντια εργασίας, για προστασία από αιχμηρές ακμές Προστατευτικά γυαλιά Εγκατάσταση και μετακίνηση ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μεθανόλη ή άλλα χημικά προϊόντα για τα οποία απαιτείται αερισμός, τοποθετήστε το Amersham WB analyzer σε χώρο με σύστημα εξαερισμού. 22 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

23 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Τάση παροχής. Προτού συνδέσετε το καλώδιο τροφοδοσίας, βεβαιωθείτε ότι η τάση παροχής στην επιτοίχια πρίζα είναι ίδια με την τάση που αναγράφεται στο όργανο. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Βεβαιωθείτε ότι το σύστημα έχει τοποθετηθεί σε σταθερό και επίπεδο πάγκο με επαρκή χώρο για αερισμό. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μην εμποδίζετε την πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας και το καλώδιο τροφοδοσίας. Η πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας πρέπει να είναι πάντα απρόσκοπτη. Το καλώδιο τροφοδοσίας με βύσμα πρέπει να αποσυνδέεται πάντα εύκολα. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Γείωση και καλώδιο τροφοδοσίας. Το Amersham WB analyzer πρέπει να συνδέεται πάντα σε γειωμένη πρίζα. Χρησιμοποιείτε μόνο εγκεκριμένα καλώδια τροφοδοσίας 3 συρμάτων που παρέχονται ή φέρουν την έγκριση της GE, ή συμμορφώνονται προς όλες τις ισχύουσες απαιτήσεις του τοπικού κώδικα περί ηλεκτρικών. ΠΡΟΣΟΧΗ Μην μετακινείτε ποτέ μια μονάδα Western πάνω στην οποία υπάρχουν όρθιες φιάλες. ΠΡΟΣΟΧΗ Βαρύ αντικείμενο. Για την ανύψωση των μονάδων του οργάνου με ασφάλεια χρειάζονται δύο άτομα. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 23

24 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΣΗΜΕΙΩΣΗ Κάθε υπολογιστής που χρησιμοποιείται με τον εξοπλισμό πρέπει να συμμορφώνεται με το πρότυπο IEC/EN/UL/CSA ή άλλους κανονισμούς για την ασφάλεια. Η εγκατάσταση και η χρήση πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Αποσυνδέετε τα καλώδια. Για την αποφυγή πρόκλησης ζημίας στον εξοπλισμό, βεβαιωθείτε ότι έχετε αποσυνδέσει τα καλώδια προτού μετακινήσετε μια μονάδα του οργάνου. Λειτουργία συστήματος ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εκρηγνυόμενο γυαλί. Μην θέτετε σε λειτουργία το σύστημα εάν το γυαλί στο καπάκι σφράγισης της μονάδας Elpho & scan είναι γρατζουνισμένο ή σπασμένο. Απενεργοποιήστε το όργανο, αποσυνδέστε το καλώδιο τροφοδοσίας και επικοινωνήστε με έναν εξουσιοδοτημένο μηχανικό συντήρησης. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος ηλεκτροπληξίας μετά από διαρροή κατά τη διάρκεια λειτουργίας. Εάν, σε περίπτωση διαρροής, υπάρχει κίνδυνος εισχώρησης υγρών στο περίβλημα του Amersham WB analyzer, απενεργοποιήστε αμέσως το όργανο, αποσυνδέστε το καλώδιο τροφοδοσίας και επικοινωνήστε με έναν εξουσιοδοτημένο μηχανικό συντήρησης. 24 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

25 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μετά την ηλεκτροφόρηση ή μετά τη μεταφορά (όταν το σάντουιτς μεταφοράς έχει ανοίξει και η κάρτα PVDF έχει τοποθετηθεί στο διαμέρισμα ανίχνευσης), απορρίψτε τη γέλη με ασφαλή τρόπο. Διαβάστε το δελτίο δεδομένων ασφαλείας (SDS/MSDS) της κάρτας γέλης για οδηγίες ασφαλείας σχετικά με τη γέλη και την απόρριψή της. ΠΡΟΣΟΧΗ Κινούμενα μέρη. Απαιτείται προσοχή όταν ανοίγετε/κλείνετε το φορτωτή ώστε να μην παγιδεύσετε τα δάκτυλα ή το ρουχισμό σας σε φορτωτή που βρίσκεται εν κινήσει. Μην τοποθετείτε ποτέ φιάλες ή φιαλίδια στην πρόσθια πλευρά της μονάδας Elpho & scan. Ενδέχεται να πέσουν όταν ανοίξει ο φορτωτής. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος ηλεκτροπληξίας. Να σταματάτε πάντα μια υπό εξέλιξη μεταφορά προτού σκουπίσετε το υγρό από το όργανο ή τον πάγκο. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος σύνθλιψης. Μην αγγίζετε τον κινούμενο θάλαμο ανίχνευσης κατά τη διάρκεια λειτουργίας της μονάδας. ΠΡΟΣΟΧΗ Μην αφαιρείτε τυχόν καλύμματα από τη μονάδα Elpho & scan. Στο εσωτερικό της μονάδας υπάρχει λέιζερ κατηγορίας 3Β. ΠΡΟΣΟΧΗ Για να αποφύγετε το πιτσίλισμα επικίνδυνων υγρών, χρησιμοποιείτε βαρέα φίλτρα εισαγωγής συνδεδεμένα με σωλήνες στις φιάλες. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 25

26 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΣΗΜΕΙΩΣΗ Μην χρησιμοποιείτε χημικά που δεν παρατίθενται στην ενότητα «Χημική αντοχή». Συντήρηση ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος ηλεκτροπληξίας. Όλες οι επισκευές πρέπει να εκτελούνται από προσωπικό συντήρησης εξουσιοδοτημένο από την GE. Μην ανοίγετε καλύμματα και μην αντικαθιστάτε εξαρτήματα, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αποσυνδέετε το όργανο από το ρεύμα. Αποσυνδέετε πάντα το όργανο από το ρεύμα πριν από την αντικατάσταση εξαρτημάτων του οργάνου, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αφαιρείτε τυχόν φιάλες από τη θήκη φιαλών προτού ανοίξετε το καπάκι διαμερίσματος επισκευής. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κατά τη χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών, αποφεύγετε τις διαρροές και φοράτε προστατευτικά γυαλιά και άλλο κατάλληλο εξοπλισμό ατομικής προστασίας. Για παράδειγμα, το NaOH είναι διαβρωτικό και, συνεπώς, επικίνδυνο για την υγεία. 26 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

27 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Για τη συντήρηση ή την επισκευή του συστήματος πρέπει να χρησιμοποιούνται μόνο ανταλλακτικά και αξεσουάρ που έχουν εγκριθεί ή παρέχονται από την GE. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αντικαθιστάτε τα καλώδια τροφοδοσίας που έχουν υποστεί φθορές με καλώδια ίδιου τύπου και διαστάσεων που να πληρούν όλες τις ισχύουσες απαιτήσεις του τοπικού κώδικα περί ηλεκτρικών και να έχουν εγκριθεί από την GE. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αποσυνδέετε πάντα το όργανο από το ηλεκτρικό δίκτυο πριν από την αντικατάσταση της ασφάλειας ηλεκτρικού δικτύου. Για συνεχή προστασία από τον κίνδυνο πυρκαγιάς, αντικαθιστάτε πάντα την παλιά ασφάλεια με μια νέα ίδιου τύπου και κατηγορίας με εκείνη που αναγράφεται στις επισημάνσεις της μονάδας του οργάνου. ΠΡΟΣΟΧΗ Κατά τη χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών, λαμβάνετε όλα τα κατάλληλα προστατευτικά μέτρα, όπως είναι η χρήση προστατευτικών γυαλιών και ανθεκτικών γαντιών στις χημικές ουσίες που χρησιμοποιούνται. Τηρείτε τους τοπικούς κανονισμούς και τις οδηγίες για την ασφαλή λειτουργία και συντήρηση του συστήματος. Επιδιόρθωση ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εκτελείτε απολύμανση του εξοπλισμού πριν από την επισκευή, ώστε να διασφαλίζεται η απομάκρυνση επικίνδυνων υπολειμμάτων. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 27

28 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας Απόσυρση ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εκτελείτε απολύμανση του εξοπλισμού πριν από την απόσυρση, ώστε να διασφαλίζεται η απομάκρυνση επικίνδυνων υπολειμμάτων. 28 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

29 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες 2.2 Ετικέτες Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τις επισημάνσεις ασφαλείας και τις επισημάνσεις για επικίνδυνες ουσίες που είναι τοποθετημένες στα Amersham WB analyzer. Για πληροφορίες σχετικά με τη σήμανση του εξοπλισμού του υπολογιστή, ανατρέξτε στις οδηγίες του κατασκευαστή. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 29

30 Märkskylt 1D Märkskylt WB Service tag 1D Service tag WB Märkskylt WB of the 1D-unit. CLASS 1 LASER PRODUCT Complies with 21 CFR and except for deviations pursuant to Laser Notice No. 50 dated July 24, IEC/EN :2007 Jan Feb Mar Apr May Jun Jul Aug Sep Oct Nov Dec 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες Θέση των επισημάνσεων στο Amersham WB analyzer Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζεται η θέση των επισημάνσεων στις μονάδες Elpho & scan και Western Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

31 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες Εξάρτημα Περιγραφή Computer Western unit Επισήμανση προϊόντος της μονάδας Amersham WB elpho & scan Επισήμανση για την ασφάλεια φωτός λέιζερ Επισήμανση προϊόντος της μονάδας Amersham WB western Elpho & scan unit Only for service Επισήμανση μονάδας Elpho & scan Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζεται ένα παράδειγμα της επισήμανσης προϊόντος που είναι τοποθετημένη στη μονάδα Elpho & scan. Η επισήμανση είναι τοποθετημένη στον οπίσθιο πίνακα της μονάδας του οργάνου. Märkskylt 1D Märkskylt WB Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 31 Service tag 1D

32 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες Επισήμανση μονάδας Western Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζεται ένα παράδειγμα της επισήμανσης προϊόντος που είναι τοποθετημένη στη μονάδα Western. Η επισήμανση είναι τοποθετημένη στον οπίσθιο πίνακα της μονάδας του οργάνου. Märkskylt WB Service tag 1D Σύμβολα ασφαλείας που χρησιμοποιούνται στις επισημάνσεις των μονάδων του οργάνου Service tag WB Στις επισημάνσεις χρησιμοποιούνται τα ακόλουθα σύμβολα για την ασφάλεια: Ετικέτα Περιγραφή Προειδοποίηση! Διαβάστε την τεκμηρίωση χρήστη πριν χρησιμοποιήσετε το σύστημα. Μην ανοίγετε καλύμματα και μην αντικαθιστάτε εξαρτήματα, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. Το σύστημα συμμορφώνεται με τις ισχύουσες ευρωπαϊκές οδηγίες. Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. Διεθνή πρότυπα, στη σελίδα12. Το σύστημα πληροί τις ισχύουσες απαιτήσεις για την Αυστραλία και τη Νέα Ζηλανδία. 32 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

33 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες Ετικέτα Περιγραφή Το σύμβολο αυτό υποδεικνύει ότι το Amersham WB system έχει πιστοποιηθεί από ένα Εθνικά Αναγνωρισμένο Εργαστήριο Δοκιμών (NRTL). NRTL είναι ένας φορέας που έχει αναγνωριστεί από τον Ευρωπαϊκό Οργανισμό για την Ασφάλεια και την Υγεία στην Εργασία (OSHA) ότι πληροί τις νομικές απαιτήσεις βάσει του Τίτλου 29 του Κώδικα Ομοσπονδιακών Κανονισμών (29 CFR), Μέρος Σύμβολα σχετικά με τις επικίνδυνες ουσίες που χρησιμοποιούνται στις επισημάνσεις των μονάδων του οργάνου Τα παρακάτω σύμβολα στις ετικέτες αφορούν επικίνδυνες ουσίες: Ετικέτα Περιγραφή Το σύμβολο αυτό υποδεικνύει ότι τα απόβλητα ειδών ηλεκτρικού και ηλεκτρονικού εξοπλισμού δεν πρέπει να απορρίπτονται χωρίς διαλογή, όπως τα αστικά απόβλητα. Τα απόβλητα αυτά πρέπει να συλλέγονται ξεχωριστά. Επικοινωνήστε με έναν εξουσιοδοτημένο αντιπρόσωπο του κατασκευαστή για πληροφορίες σχετικά με την απόσυρση του εξοπλισμού. Το σύμβολο αυτό υποδεικνύει ότι το προϊόν περιλαμβάνει επικίνδυνα υλικά άνω των ορίων που έχουν καθοριστεί στο κινεζικό πρότυπο SJ/T , «Απαιτήσεις για όρια συγκέντρωσης συγκεκριμένων επικίνδυνων ουσιών σε ηλεκτρονικές συσκευές». Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 33

34 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες Επισήμανση για την ασφάλεια φωτός λέιζερ Οι παρακάτω ετικέτες αφορούν το φως λέιζερ. Η πρώτη ετικέτα είναι τοποθετημένη στον οπίσθιο πίνακα της μονάδας Elpho & scan. Η δεύτερη είναι τοποθετημένη στο εσωτερικό του φορτωτή Elpho & scan: Ετικέτα Located on the back side of the 1D-unit. CLASS 1 LASER PRODUCT Complies with 21 CFR and except for deviations pursuant to Laser Notice No. 50 dated July 24, IEC/EN :2007 Jan Feb Mar Apr May Jun Jul Aug Sep Oct Nov Dec Περιγραφή Αυτός ο εξοπλισμός είναι προϊόν λέιζερ κατηγορίας 1 (IEC :2007/EN :2007). Αυτό το όργανο ικανοποιεί τις απαιτήσεις ασφαλείας για εξοπλισμό με ακτινοβολία λέιζερ που καθορίζονται από τον Κώδικα Ομοσπονδιακών Κανονισμών (ΤΙΤΛΟΣ 21 CFR, κεφάλαιο 1, υποκεφάλαιο J, μέρος Προϊόντα λέιζερ). Στην επισήμανση αναγράφεται επίσης ο μήνας κατασκευής. Located on the inside of the front lid of the 1D-unit Το σύμβολο εμφανίζεται όταν ανοίξει ο φορτωτής Elpho & scan. Label removed Should be placed on top of the inner sheet metal plate. 34 CAUTION - CLASS 2M LASER LIGHT WHEN OPEN AND INTERLOCKS DEFEATED DO NOT STARE DIRECTLY INTO BEAM OR VIEW DIRECTLY WITH OPTICAL INSTRUMENTS (MAGNIFIERS) Classified according to IEC 60825:2007 Maximum output of laser radiation: 10 mw at 532 nm and 10 mw at 635 nm Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

35 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο τερματισμού λειτουργίας του Amersham WB analyzer σε περίπτωση έκτακτης ανάγκης και τις επιπτώσεις μιας διακοπής ρεύματος στο σύστημα. Τερματισμός λειτουργίας σε έκτακτη ανάγκη Σε κατάσταση έκτακτης ανάγκης, αποσυνδέστε το καλώδιο τροφοδοσίας από τους οπίσθιους πίνακες των μονάδων Elpho & scan και Western. Με αυτόν τον τρόπο θα διασφαλιστεί η άμεση διακοπή του ρεύματος ακόμα και αν χρησιμοποιείται τροφοδοτικό αδιάλειπτης λειτουργίας (UPS). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 35

36 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης Διακοπή ρεύματος Παρακάτω περιγράφονται οι επιπτώσεις μιας διακοπής ρεύματος στο σύστημα: Διακοπή ρεύματος... Amersham WB analyzer Επιπτώσεις... Τυχόν πειράματα που εκτελούνται, διακόπτονται. Τα πειράματα δεν θα συνεχιστούν όταν επανέλθει το ρεύμα. Σημείωση: Μια υπομονάδα UPS μπορεί να εξαλείψει την απώλεια δεδομένων μετά από διακοπή ρεύματος και να παρέχει χρόνο για έναν ελεγχόμενο τερματισμό λειτουργίας του Amersham WB analyzer. Ο χρόνος της διακοπής θα καταγραφεί στο λογισμικό των μονάδων του οργάνου. Υπολογιστής Τερματίζεται η λειτουργία του υπολογιστή που είναι συνδεδεμένος με τη μονάδα Elpho & scan. Τυχόν παραδείγματα υπό εξέλιξη θα συνεχιστούν και θα ολοκληρωθούν, με την προϋπόθεση το όργανο να συνεχίσει να είναι συνδεδεμένο στο ρεύμα. Όταν επανεκκινηθεί ο υπολογιστής και αποκατασταθεί η σύνδεση, τα αποτελέσματα του παραδείγματος θα αποθηκευθούν. Εάν υπάρχουν εικόνες, θα σαρωθούν. 36 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

37 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης Επανεκκίνηση μετά από επείγοντα τερματισμό λειτουργίας ή διακοπή της παροχής ρεύματος στο όργανο Όταν η παροχή ρεύματος επανέλθει σε κανονική λειτουργία, δεν θα συνεχιστεί κανένα πείραμα που ήταν σε εξέλιξη κατά τη στιγμή του επείγοντα τερματισμού λειτουργίας. Συνεχίστε ως εξής: Βήμα Ενέργεια Εάν τα καλώδια τροφοδοσίας ρεύματος έχουν αποσυνδεθεί, συνδέστε τα καλώδια στους οπίσθιους πίνακες των μονάδων του οργάνου. Βεβαιωθείτε ότι οι διακόπτες τροφοδοσίας ρεύματος στους οπίσθιους πίνακες των μονάδων του οργάνου είναι ενεργοποιημένοι (I). Αποτέλεσμα: Εκκινούνται οι μονάδες του οργάνου. Έναρξη του υπολογιστή και του λογισμικού (βλ. Έναρξη του λογισμικού, στη σελίδα 133). Όταν συνδεθούν οι μονάδες του οργάνου, το συμβάν ημερολογίου θα αποθηκευτεί στο ημερολόγιο του πειράματος. Εάν επιθυμείτε να ολοκληρώσετε την εκτέλεση ενός πειράματος που διακόπηκε, ανοίξτε το αρχείο του σχετικού πειράματος. Στη συνέχεια, ανοίξτε το παράθυρο διαλόγου Experiment Information και επιλέξτε την καρτέλα Experiment log. Από την οθόνη Experiment log, ελέγξτε το βήμα κατά το οποίο διακόπηκε το πείραμα. Αφαιρέστε τα μέρη του βήματος που ολοκληρώθηκαν όταν διακόπηκε η εκτέλεσή του και προβείτε σε επανέναρξη του βήματος. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 37

38 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.4 Πληροφορίες σχετικά με την ανακύκλωση 2.4 Πληροφορίες σχετικά με την ανακύκλωση Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιέχει πληροφορίες σχετικά με την απόσυρση του Amersham WB analyzer. Απολύμανση Το Amersham WB analyzer πρέπει να απολυμαίνεται πριν από την απόσυρση ενώ επιπλέον πρέπει να τηρούνται όλοι οι τοπικοί κανονισμοί σχετικά με την απόσυρση του εξοπλισμού. Απόρριψη, γενικές οδηγίες Όταν το Amersham WB analyzer τεθεί εκτός λειτουργίας, τα διάφορα υλικά πρέπει να διαχωρίζονται και να ανακυκλώνονται σύμφωνα με τους εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς. Ανακύκλωση επικίνδυνων ουσιών Το Amersham WB analyzer περιέχει επικίνδυνες ουσίες. Λεπτομερείς πληροφορίες παρέχονται από τον αντιπρόσωπο της GE. Απόρριψη ηλεκτρικών εξαρτημάτων Τα απόβλητα ηλεκτρικού και ηλεκτρονικού εξοπλισμού δεν πρέπει να απορρίπτονται όπως τα αστικά απόβλητα χωρίς διαλογή. Αντιθέτως, η αποκομιδή τους πρέπει να πραγματοποιείται ξεχωριστά. Επικοινωνήστε με έναν εξουσιοδοτημένο αντιπρόσωπο του κατασκευαστή για πληροφορίες σχετικά με την απόσυρση του εξοπλισμού. 38 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

39 3 Περιγραφή συστήματος 3 Περιγραφή συστήματος Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό περιγράφει τα διαφορετικά μέρη του Amersham WB system. Το Amersham WB system αποτελείται από τα εξής μέρη: Amersham WB analyzer (δύο μονάδες) εξαρτήματα και αναλώσιμα προς χρήση με το όργανο έναν υπολογιστή (δεν περιλαμβάνεται στα παραδοτέα) Amersham WB software Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιλαμβάνει τις παρακάτω ενότητες: Ενότητα 3.1 Επισκόπηση του οργάνου 3.2 Μονάδα Elpho & scan 3.3 Μονάδα Western 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων 3.5 Αναλώσιμα προσήμανσης 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western 3.8 Άλλα εξαρτήματα 3.9 Επισκόπηση λογισμικού Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 39

40 3 Περιγραφή συστήματος 3.1 Επισκόπηση του οργάνου 3.1 Επισκόπηση του οργάνου Εισαγωγή Η ενότητα αυτή παρέχει μια επισκόπηση του Amersham WB analyzer. Το Amersham WB analyzer αποτελείται από δύο μονάδες: Amersham WB Μονάδα elpho & scan Amersham WB Μονάδα western Οι μονάδες του οργάνου ελέγχονται από Η/Υ ο οποίος χρησιμοποιεί Amersham WB software. Σημείωση: Οι μονάδες του οργάνου πρέπει πάντα να είναι συνδεδεμένες μεταξύ τους κατά τη διάρκεια της εκτέλεσης ενός πειράματος. Αμφότερες οι μονάδες πρέπει να είναι ενεργοποιημένες όταν εκτελείται κάποιο πείραμα στη μονάδα Western. Διακόπτες ασφαλείας Στο εσωτερικό της μονάδας Elpho & scan η τάση είναι υψηλή και υπάρχουν δύο συσκευές λέιζερ. Η μονάδα διαθέτει διπλούς διακόπτες ασφαλείας οι οποίοι διακόπτουν την παροχή ρεύματος στο μετατροπέα υψηλής τάσης και στις συσκευές λέιζερ όταν ο φορτωτής είναι ανοικτός. Στο εσωτερικό της δεξαμενής μεταφοράς στη μονάδα Western αναπτύσσεται υψηλή τάση. Η μονάδα διαθέτει διακόπτες ασφαλείας οι οποίοι διακόπτουν την παροχή ρεύματος όταν το καπάκι της δεξαμενής ασφαλείας είναι ανοικτό. 40 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

41 3 Περιγραφή συστήματος 3.1 Επισκόπηση του οργάνου Εικόνα του Amersham WB analyzer Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει το Amersham WB analyzer, με τη μονάδα Elpho & scan στα αριστερά και τη μονάδα Western στα δεξιά. Εικόνα των πινάκων του οργάνου Σε κάθε διαμέρισμα των μονάδων του οργάνου (ηλεκτροφόρηση και σάρωση, μεταφορά, ανίχνευση και αποξήρανση) υπάρχει η ίδια διαρρύθμιση λυχνιών ένδειξης. Όταν οι μονάδες του οργάνου είναι ενεργοποιημένες, είναι αναμμένες οι λυχνίες που εμφανίζουν τα ονόματα των διαμερισμάτων. Οι ενδεικτικές λυχνίες είναι τοποθετημένες στον πίνακα του οργάνου κάθε μονάδας. Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζονται οι πίνακες του οργάνου στις δύο μονάδες, με αναμμένα τα ονόματα των διαμερισμάτων. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 41

42 3 Περιγραφή συστήματος 3.1 Επισκόπηση του οργάνου Ενδείκτες στο όργανο Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει τις διαφορετικές ενδεικτικές λυχνίες. Οι ενδεικτικές λυχνίες (Έτοιμο/η εκτέλεση ολοκληρώθηκε, Εκτέλεση και Σφάλμα ή προειδοποίηση) είναι ίδιες για όλα τα διαμερίσματα της μονάδας του οργάνου. Στο παρόν παράδειγμα, περιγράφονται οι ενδεικτικές λυχνίες TRANSFER (Μεταφορά). Ενδεικτικές λυχνίες κατάστασης TRANSFER TRANSFER TRANSFER TRANSFER TRANSFER TRANSFER TRANSFER Κατάσταση Έναρξη Έτοιμο/η εκτέλεση ολοκληρώθηκε Περιγραφή Η επιγραφή είναι αναμμένη κατά την έναρξη της μονάδας και τη διενέργεια εσωτερικών δοκιμών. Η λυχνία είναι αναμμένη όταν: η μονάδα ή το διαμέρισμα είναι έτοιμο για νέο πείραμα ένα βήμα (π.χ. ηλεκτροφόρηση, σάρωση, μεταφορά, ανίχνευση ή αποξήρανση) έχει ολοκληρωθεί 42 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

43 3 Περιγραφή συστήματος 3.1 Επισκόπηση του οργάνου TRANSFER TRANSFER Ενδεικτικές λυχνίες κατάστασης TRANSFER TRANSFER TRANSFER TRANSFER TRANSFER TRANSFER Κατάσταση Εκτέλεση Σφάλμα ή προειδοποίηση Περιγραφή Η λυχνία είναι αναμμένη: όταν η μονάδα ή το διαμέρισμα βρίσκεται σε λειτουργία κατά τη διάρκεια της μεταφοράς ή της ανίχνευσης διαδρομών ροής Σημείωση: Μην ανοίγετε κανένα καπάκι όταν η μονάδα βρίσκεται σε λειτουργία. Για παράδειγμα, με το άνοιγμα του καπακιού μεταφοράς κατά τη μεταφορά, θα διακοπεί η λειτουργία της μονάδας, γεγονός που μπορεί να επηρεάσει το αποτέλεσμα. Η λυχνία είναι αναμμένη όταν παρουσιαστεί κάποιο σφάλμα Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με το σφάλμα, ανατρέξτε στο Amersham WB software. Προτάσεις σχετικά με τον τρόπο διευθέτησης του προβλήματος παρέχονται από το λογισμικό. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 43

44 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Μονάδα Elpho & scan 3.2 Μονάδα Elpho & scan Εισαγωγή Η μονάδα Elpho & scan χρησιμοποιείται για το διαχωρισμό των επεξεργασμένων με SDS δειγμάτων πρωτεϊνών σε γέλη πολυακρυλαμιδίου. Χρησιμοποιείται επίσης για τη σάρωση τόσο των γελών μετά την ηλεκτροφόρηση όσο και των καρτών PVDF μετά την ανίχνευση και την αποξήρανση σε ένα πείραμα Western. Η ενότητα αυτή παρέχει μια επισκόπηση της μονάδας Elpho & scan. Εικόνα της μονάδας Elpho & scan Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζονται τα κύρια εξαρτήματα της μονάδας Elpho & scan: Εξάρτημα 1 2 Περιγραφή Πίνακας οργάνου (με ενδεικτικές λυχνίες κατάστασης) Φορτωτής Elpho & scan Για τη φόρτωση καρτών γέλης ή PVDF. 44 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

45 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Μονάδα Elpho & scan Εξάρτημα 3 Περιγραφή Πλήκτρο εξαγωγής Ανοίγει και κλείνει το φορτωτή της ηλεκτροφόρησης και του διαμερίσματος σάρωσης. Σημείωση: Ο φορτωτής μπορεί να ανοίξει μόνο όταν δεν υπάρχει υπό εξέλιξη πείραμα ηλεκτροφόρησης ή σάρωσης. Τυχόν υπό εξέλιξη πείραμα πρέπει πρώτα να διακοπεί με χρήση του κατάλληλου λογισμικού ώστε να είναι εφικτή η εξαγωγή του φορτωτή. 4 Υποπόδια με δυνατότητα προσαρμογής (4 υποπόδια, ένα σε κάθε γωνία) Εικόνα του οπίσθιου πίνακα της μονάδας Elpho & scan Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζονται τα κύρια εξαρτήματα του οπίσθιου πίνακα της μονάδας Elpho & scan: Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 45

46 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Μονάδα Elpho & scan Εξάρτημα Περιγραφή Σύνδεση καλωδίου USB (USB τύπου Β) Για σύνδεση της μονάδας Elpho & scan σε υπολογιστή. Σύνδεση επικοινωνίας για τη μονάδα Western (με χρήση καλωδίου ethernet) Βαλβίδα εισαγωγής αέρα Διακόπτης τροφοδοσίας κεντρικού δικτύου ON=I, OFF=O Συρτάρι ασφαλειών (5x20 mm) Σύνδεση καλωδίου τροφοδοσίας (60320/C14) Βαλβίδες εξαγωγής αέρα Φορτωτής Elpho & scan Ο φορτωτής Elpho & scan χρησιμοποιείται για τη φόρτωση: καρτών γέλης προς ηλεκτροφόρηση και σάρωση καρτών PVDF προς σάρωση. Κατά τη φόρτωση καρτών PVDF προς σάρωση, πρέπει πρώτα να τοποθετηθεί ένας προσαρμογέας Amersham WB membrane adapter στην πλακέτα κάρτας (για περισσότερες πληροφορίες βλ. Ενότητα 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων, στη σελίδα 198). Ο φορτωτής εξάγεται από τη μονάδα Elpho & scan πατώντας το κουμπί εξαγωγής στον εμπρόσθιο πίνακα. 46 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

47 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Μονάδα Elpho & scan Εικόνα του φορτωτή Elpho & scan Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει τη μονάδα Elpho & scan κατόπιν εξαγωγής του φορτωτή και ανοίγματος των καπακιών σφράγισης της αριστερής πλακέτας κάρτας Εξάρτημα Περιγραφή Ασφάλιση Για άνοιγμα του καπακιού σφράγισης. Καπάκι σφράγισης Ενδείκτης των θέσεων A και B Εσοχές Για συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος με ηλεκτρικές συνδέσεις για τα ηλεκτρόδια ρυθμιστικού διαλύματος. Πείροι οδήγησης Για την ορθή τοποθέτηση των καρτών γέλης ή των προσαρμογέων μεμβράνης, μεταξύ των οποίων οι κάρτες PVDF. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 47

48 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Μονάδα Elpho & scan Εξάρτημα 6 7 Περιγραφή Πλακέτα κάρτας Για την ψύξη των καρτών γέλης και για τη συγκράτηση των καρτών σε επίπεδη θέση κατά τη σάρωση. Προστατευτικό τζάμι 48 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

49 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western 3.3 Μονάδα Western Εισαγωγή Η μονάδα Western χρησιμοποιείται για τα εξής: μεταφορά των διαχωρισμένων πρωτεϊνών από τη γέλη στη μεμβράνη τοποθέτηση των πρωτεϊνών στη μεμβράνη με πρωτοταγή αντισώματα και, στη συνέχεια, με δευτεροταγή αντισώματα συζευγμένα με CyDye αποξήρανση των καρτών PVDF (πριν από τη σάρωση στη μονάδα Elpho & scan) Η ενότητα αυτή παρέχει μια επισκόπηση της μονάδας Western. Στην παρούσα ενότητα Η ενότητα αυτή περιλαμβάνει τις παρακάτω υποενότητες: Ενότητα Επισκόπηση Διαμερίσματα μονάδας Western Διαδρομές ροής υγρών Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 49

50 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Επισκόπηση Επισκόπηση Εισαγωγή Η ενότητα αυτή παρέχει μια επισκόπηση των εμπρόσθιων και οπίσθιων πινάκων της μονάδας Western. Εικόνα της μονάδας Western Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζονται τα κύρια εξαρτήματα της μονάδας Western: Εξάρτημα Περιγραφή Καπάκι διαμερίσματος αντισωμάτων Σημείο πίεσης για άνοιγμα του καπακιού διαμερίσματος αντισωμάτων Πίνακας οργάνου (για τις ενδεικτικές λυχνίες κατάστασης) Καπάκι δεξαμενής μεταφοράς 50 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

51 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Επισκόπηση Εξάρτημα 5 Περιγραφή Θήκη για φιάλες (και καπάκι διαμερίσματος επισκευής) Σημείωση: Αφαιρείτε τη θήκη φιαλών μόνο για επιθεώρηση των αντλιών και των σωλήνων ή για αντικατάσταση εξαρτημάτων, όπως περιγράφεται στην ενότητα Κεφάλαιο 6 Συντήρηση, στη σελίδα Συγκρατητήρες σωλήνα Καπάκι διαμερίσματος ανίχνευσης Καπάκι διαμερίσματος αποξήρανσης Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 51

52 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Επισκόπηση Εικόνα του οπίσθιου πίνακα της μονάδας Western Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζονται τα κύρια εξαρτήματα του οπίσθιου πίνακα της μονάδας Western: Εξάρτημα Περιγραφή Στόμια εξαγωγής για σωλήνες αποβλήτων και υπερχείλισης Σύνδεση επικοινωνίας για τη μονάδα Elpho & scan (με χρήση καλωδίου ethernet) Σύνδεση καλωδίου τροφοδοσίας (60320/C14) Συρτάρι ασφαλειών (5x20 mm) Διακόπτης τροφοδοσίας κεντρικού δικτύου (ON=I, OFF=O) 52 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

53 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Επισκόπηση Εξάρτημα 6 7 Περιγραφή Βαλβίδες εξαγωγής αέρα Βαλβίδα εισαγωγής αέρα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 53

54 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαμερίσματα μονάδας Western Διαμερίσματα μονάδας Western Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τα διαφορετικά διαμερίσματα της μονάδας Western με τα καπάκια ανοικτά. Εικόνα της δεξαμενής μεταφοράς Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει τη δεξαμενή μεταφοράς της μονάδας Western Εξάρτημα Περιγραφή Τροχιές οδήγησης του σάντουιτς Ενδείκτης των θέσεων A και B 54 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

55 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαμερίσματα μονάδας Western Εξάρτημα Περιγραφή Δεξί ηλεκτρόδιο μεταφοράς Φίλτρο δεξαμενής μεταφοράς Αριστερό ηλεκτρόδιο μεταφοράς Εικόνα του διαμερίσματος ανίχνευσης Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει το διαμέρισμα ανίχνευσης της μονάδας Western Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 55

56 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαμερίσματα μονάδας Western Εξάρτημα Περιγραφή Θάλαμος ανίχνευσης Καπάκι θαλάμου ανίχνευσης Ενδείκτης των θέσεων A και B Πείροι καθοδήγησης για την κάρτα PVDF (έχουν επισημανθεί με πορτοκαλί κύκλους) Καπάκι διαμερίσματος ανίχνευσης Ράβδος καπακιού θαλάμου ανίχνευσης Εικόνα του διαμερίσματος αποξήρανσης Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει το διαμέρισμα αποξήρανσης της μονάδας Western Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

57 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαμερίσματα μονάδας Western Εξάρτημα 1 2 Περιγραφή Οδηγοί ξηραντήρα μεμβράνης Ενδείκτης των θέσεων A και B Εικόνα του διαμερίσματος αντισωμάτων Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει το διαμέρισμα αντισωμάτων στο οποίο εισέρχονται οι σωλήνες περιεκτικότητας 15 ml με διάλυμα πρωτοταγών και δευτεροταγών αντισωμάτων πριν από την ανίχνευση (αριστερή πλευρά). Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. Σύνδεση των σωλήνων με διαλύματα αντισωμάτων, στη σελίδα 183. Η δεξιά πλευρά του διαμερίσματος χρησιμοποιείται για φύλαξη του Amersham WB membrane adapters (προσαρμογείς μεμβράνης) Εξάρτημα 1 Περιγραφή Συγκρατητήρας σωληναρίων Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 57

58 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαμερίσματα μονάδας Western Εξάρτημα Περιγραφή Σωλήνες Ασφάλιση θύρας (μαγνητική) Προσαρμογείς μεμβράνης Συγκρατητήρας προσαρμογέων μεμβρανών Ασφάλιση θύρας Ενδείκτης της θέσης του σωλήνα με διάλυμα αντισωμάτων A PRIMARY (Α Πρωτοταγές), A SECONDARY (Α Δευτεροταγές), B PRIMARY(Β Πρωτοταγές), και B SECONDARY (Β Δευτεροταγές). Εικόνα του διαμερίσματος επισκευής Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει το διαμέρισμα επισκευής της μονάδας Western Εξάρτημα 1 Περιγραφή Μπλοκ βαλβίδας μεταφοράς 58 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

59 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαμερίσματα μονάδας Western Εξάρτημα Περιγραφή Αντλία ανίχνευσης Αντλία μεταφοράς Καπάκι διαμερίσματος φίλτρου αέρα Μπλοκ βαλβίδας ανίχνευσης Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 59

60 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαδρομές ροής υγρών Διαδρομές ροής υγρών Εισαγωγή Η ενότητα αυτή δείχνει τις διαδρομές ροής του υγρού μεταφοράς και ανίχνευσης στη μονάδα Western και περιγράφει τις βασικές αρχές λειτουργίας. 60 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

61 Εικόνα της διαδρομής ροής υγρού μεταφοράς 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαδρομές ροής υγρών Η παρακάτω εικόνα παρουσιάζει ένα λεπτομερές διάγραμμα της ροής των διεργασιών μεταφοράς. Τα διαγράμματα ροής δείχνουν τις διασυνδέσεις μεταξύ των εξαρτημάτων του οργάνου. Οι λευκές ετικέτες αφορούν ετικέτες σωλήνων. Οι μπλε αριθμοί αφορούν εξαρτήματα του οργάνου. 5 T WASTE T BUFFER T WATER Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει τα εξαρτήματα στο διάγραμμα ροής: Εξάρτημα 1 Περιγραφή Μπλοκ βαλβίδας μεταφοράς Για επιλογή του διαλύματος που θα πρέπει να αναρροφηθεί με αντλία μέσω της διαδρομής ροής υγρών. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 61

62 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαδρομές ροής υγρών Εξάρτημα Περιγραφή Δεξαμενή μεταφοράς Αντλία μεταφοράς Για αναρρόφηση του διαλύματος με αντλία μέσω της διαδρομής ροής υγρών. Ψυκτική μονάδα μεταφοράς Για διατήρηση του διαλύματος μεταφοράς σε θερμοκρασία δωματίου. Υπερχείλιση της δεξαμενής μεταφοράς Βασική αρχή της διεργασίας μεταφοράς Κατά τη διάρκεια της μεταφοράς, πραγματοποιείται ηλεκτροφορητική μεταφορά των διαχωρισμένων πρωτεϊνών στη γέλη που βρίσκεται επάνω στη μεμβράνη. Παρακάτω περιγράφεται η βασική αρχή της διεργασίας μεταφοράς. Στάδιο Περιγραφή Όταν το Amersham WB transfer holder(s) (συγκρατητήρας μεταφοράς) έχει φορτωθεί στη δεξαμενή μεταφοράς, η δεξαμενή έχει πληρωθεί με διάλυμα μεταφοράς (σωλήνας με σήμανση T Buffer). Κατά τη διάρκεια της μεταφοράς, το διάλυμα μεταφοράς αναρροφάται με αντλία μέσω της δεξαμενής μεταφοράς, της ψυκτικής μονάδας μεταφοράς, της αντλίας μεταφοράς και του μπλοκ βαλβίδας μεταφοράς. Η ψυκτική μονάδα μεταφοράς διασφαλίζει ότι το διάλυμα μεταφοράς φυλάσσεται σε θερμοκρασία δωματίου όση ώρα βρίσκεται σε λειτουργία. Μετά την εκτέλεση του πειράματος, και μετά την αφαίρεση των συγκρατητήρων μεταφοράς, χρησιμοποιείτε υπερκάθαρο νερό για τον καθαρισμό της διαδρομής ροής υγρών (για τον καθαρισμό χρησιμοποιείται ο σωλήνας με σήμανση T Water ). 62 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

63 Εικόνα της διαδρομής ροής υγρού ανίχνευσης 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαδρομές ροής υγρών Η εικόνα απεικονίζει ένα λεπτομερές διάγραμμα ροής της διεργασίας ανίχνευσης. Το διάγραμμα ροής δείχνουν τις διασυνδέσεις μεταξύ των εξαρτημάτων του οργάνου. Οι λευκές ετικέτες αφορούν ετικέτες σωλήνων. Οι μπλε αριθμοί αφορούν εξαρτήματα του οργάνου. P WASTE P CUSTOM P WASTE P WATER P BLOCK P WASH P FINAL WASH Prim A Sec A Prim B Sec B A B Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει τα εξαρτήματα στο διάγραμμα ροής: Εξάρτημα 1 2 Περιγραφή Διαμέρισμα αντισωμάτων με σωλήνες με διαλύματα αντισωμάτων που περιέχουν πρωτοταγή και δευτεροταγή αντισώματα για τις θέσεις A και B. Μπλοκ βαλβίδας ανίχνευσης Χρησιμοποιείται για την επιλογή διαλύματος προς αναρρόφηση με αντλία μέσω της διαδρομής ροής. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 63

64 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Μονάδα Western Διαδρομές ροής υγρών Εξάρτημα Περιγραφή Αντλία ανίχνευσης Για αναρρόφηση του διαλύματος με αντλία μέσω της διαδρομής ροής υγρών. Αισθητήρας αέρα Για να ανιχνευθεί εάν υπάρχει αέρας στο σωλήνα. Ο ανιχνευτής αέρα διακόπτει την εκτέλεση εάν εντοπιστεί ότι υπάρχει άδεια φιάλη. Βαλβίδα επιλογής θαλάμου ανίχνευσης Για να επιλεγεί εάν θα κατευθυνθεί το διάλυμα στους θαλάμους ανίχνευσης ή από τους θαλάμους ανίχνευσης στο στόμιο εξαγωγής αποβλήτων. Θάλαμοι ανίχνευσης Βασική αρχή της διεργασίας ανίχνευσης Κατά την ανίχνευση, πρωτοταγή αντισώματα προσδένονται στις πρωτεΐνες στη μεμβράνη και, στη συνέχεια, δευτεροταγή αντισώματα που είναι συζευγμένα σε CyDye προσδένονται στα πρωτοταγή αντισώματα. Παρακάτω περιγράφεται η βασική αρχή της διεργασίας ανίχνευσης. Στάδιο 1 2 Περιγραφή Ο θάλαμος ανίχνευσης είναι προγεμισμένος με το πρώτο διάλυμα, σύμφωνα με το πρωτόκολλο ανίχνευσης στο λογισμικό (από προεπιλογή χρησιμοποιείται το διάλυμα αποκλεισμού). Το προγέμισμα του θαλάμου ανίχνευσης ξεκινά από το χρήστη με επιλογή του κατάλληλου λογισμικού. Οι κάρτες PVDF εισάγονται στους θαλάμους ανίχνευσης όπου εκτελούνται διαδοχικές επωάσεις (μεταξύ των οποίων βήματα πλύσης) της μεμβράνης με το διάλυμα αποκλεισμού, τα πρωτοταγή και δευτεροταγή αντισώματα. 64 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

65 3 Περιγραφή συστήματος 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων Εισαγωγή Η ενότητα αυτή παρέχει μια επισκόπηση των εξαρτημάτων και αναλώσιμων που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν με το Amersham WB analyzer. Περιέχει επίσης πληροφορίες φύλαξης των αναλώσιμων, καθώς και πληροφορίες σχετικά με τον τρόπο παραγγελίας αναλώσιμων. Εξαρτήματα και αναλώσιμα Ο παρακάτω πίνακας παραθέτει τα εξαρτήματα και αναλώσιμα που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν με το όργανο ανάλογα με την υπό εκτέλεση εργασία. Τα εξαρτήματα παρέχονται με το σύστημα ενώ τα αναλώσιμα παραγγέλνονται ξεχωριστά. Τα εξαρτήματα που πρέπει να εγκατασταθούν περιγράφονται στην ενότητα Ενότητα 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού, στη σελίδα 104 ενώ τα εξαρτήματα για εργασίες συντήρησης διενεργούμενες από το χρήστη περιγράφονται στην ενότητα Εξαρτήματα συντήρησης, στη σελίδα 217. Για μια λεπτομερή περιγραφή των εξαρτημάτων και των αναλώσιμων, ανατρέξτε στις ενότητες που ακολουθούν. Εργασία Απαιτούμενα αναλώσιμα Απαιτούμενα εξαρτήματα Για λεπτομέρειες, βλ.... Προσήμανση δειγμάτων Amersham WB Cy5 Amersham WB labeling buffer (ρυθμιστικό διάλυμα σήμανσης) Δ/Ι Ενότητα 3.5 Amersham WB loading buffer (διάλυμα φόρτωσης) Amersham WB MiniTrap kit (προαιρετικά) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 65

66 3 Περιγραφή συστήματος 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων Εργασία Απαιτούμενα αναλώσιμα Απαιτούμενα εξαρτήματα Για λεπτομέρειες, βλ.... Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Amersham WB molecular weight markers (δείκτες μοριακού βάρους) Amersham WB gel card (κάρτα γέλης) Amersham WB buffer strip (ταινία ρυθμιστικού διαλύματος) Amersham WB buffer strip holder 1 (συγκρατητήρας ταινίας ρυθμιστικού διαλύματος) Ενότητα 3.6 Amersham WB loading buffer Amersham WB paper comb (προαιρετικά) (Χάρτινο χτένι) Western βήματα αποτύπωσης Μεταφορά Amersham WB gel card από την εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Amersham WB PVDF card (κάρτα PVDF) Amersham WB transfer paper (χαρτί μεταφοράς) Amersham WB transfer holder 1 (συγκρατητήρας μεταφοράς) Ενότητα Amersham WB sponge (σπόγγος) Εργαστηριακά παρασκευασμένα διαλύματα μεταφοράς (για συνταγές, βλ. Συνταγές για διαλύματα μεταφοράς, στη σελίδα 157) 66 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

67 3 Περιγραφή συστήματος 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων Εργασία Απαιτούμενα αναλώσιμα Απαιτούμενα εξαρτήματα Για λεπτομέρειες, βλ.... Ανίχνευση Εργαστηριακά παρασκευασμένα διαλύματα πρωτοταγών αντισωμάτων Σωλήνες για διαλύματα αντισωμάτων 1 Ενότητα Δευτεροταγές αντίσωμα: Amersham WB goat anti-mouse Cy3/Cy5 (goat anti-mouse Cy3/Cy5, αντίσωμα αίγας έναντι Cy3/Cy5 μυός) ή Amersham WB goat anti-rabbit Cy3/Cy5 (goat anti-rabbit Cy3/Cy5, αντίσωμα αίγας έναντι Cy3/Cy5 κουνελιού) Κάρτα PVDF από το βήμα μεταφοράς Εργαστηριακά παρασκευασμένα διαλύματα ανίχνευσης (για συνταγές, βλ. Συνταγές για διαλύματα ανίχνευσης και αντισωμάτων, στη σελίδα 182) Αποξήρανση Κάρτα PVDF από το βήμα ανίχνευσης Amersham WB drying holder (συγκρατητήρας αποξήρανσης) Δ/Ι Σάρωση της κάρτας PVDF στη μονάδα Elpho & scan Κάρτα PVDF από το βήμα αποξήρανσης Amersham WB membrane adapter 1 (προσαρμογέας μεμβράνης) Ενότητα Άλλα Σάρωση των ετικετών μητρώου δεδομένων που βρίσκονται στις μοναδικές συσκευασίες των καρτών γέλης και PVDF (προαιρετικά) Δ/Ι Αναγνώστης ετικετών μητρώου (αντικείμενο ξεχωριστής παραγγελίας) Ενότητα Περιλαμβάνεται στην παράδοση του Amersham WB analyzer. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 67

68 3 Περιγραφή συστήματος 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων Παραγγελία αναλώσιμων Τα διάφορα πειράματα απαιτούν και τη χρήση διαφορετικού συνδυασμού αναλώσιμων. Στη διεύθυνση παρέχεται ένας οδηγός κατάρτισης κιτ αναλώσιμων. Για πληροφορίες σχετικά με την παραγγελία αναλώσιμων που διατίθενται ξεχωριστά, βλ. Amersham WB system User Manual. Φύλαξη αναλώσιμων Ο παρακάτω πίνακας συνοψίζει τις συνθήκες φύλαξης και περιβάλλοντος για τα διάφορα αναλώσιμα. Η ημερομηνία λήξης των αναλώσιμων αναγράφεται στη συσκευασία τους. Αναλώσιμο Αναλώσιμα προσήμανσης Θερμοκρασία αποθήκευσης -15 έως -30 Περιβάλλον Προστατεύστε το περιεχόμενο από το άμεσο ηλιακό φως. Αποφύγετε την κατ εξακολούθηση ψύξη-απόψυξη του αντιδραστήρα χρωστικής Cy5. Το αραιωμένο αντιδραστήριο χρωστικής Cy5 πρέπει να χρησιμοποιηθεί εντός 30 λεπτών και δεν πρέπει να καταψύχεται. 68 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

69 3 Περιγραφή συστήματος 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων Αναλώσιμο Amersham WB molecular weight markers Amersham WB gel card Amersham WB buffer strips Amersham WB PVDF card Amersham WB transfer paper Θερμοκρασία αποθήκευσης -15 έως έως 8 4 έως 8 Θερμοκρασία δωματίου Θερμοκρασία δωματίου Περιβάλλον Προστατεύστε τους δείκτες μοριακού βάρους από το άμεσο ηλιακό φως. Οι δείκτες μοριακού βάρους πρέπει να φυλάσσονται πάντα στην κατάψυξη. Ελαχιστοποιήστε το χρονικό διάστημα παραμονής σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση και αποφύγετε την εκ νέου κατάψυξη. Οι δείκτες μοριακού βάρους που έχουν αραιωθεί σε διάλυμα φόρτωσης με DTT μπορούν να διανεμηθούν σε υποπολλαπλάσια δείγματα μίας χρήσης, εφόσον καταψυχθούν απευθείας μετά την αραίωση. Τα υποπολλαπλάσια δείγματα δεν πρέπει να αποθηκεύονται για διάστημα μεγαλύτερο της μίας εβδομάδας. Φυλάσσετε στο ψυγείο ή σε ψυκτικό θάλαμο. Φυλάσσετε στο ψυγείο ή σε ψυκτικό θάλαμο. Φυλάσσετε την κάρτα PVDF στη μοναδική της συσκευασία, εντός του κουτιού στο οποίο παραδόθηκε. Φυλάσσετε το κιβώτιο σε καθαρό και ξηρό μέρος, προστατευμένο από το φως. Φυλάσσετε τα χαρτιά μεταφοράς σε ξηρό μέρος, εντός του κουτιού στο οποίο παραδόθηκαν. Προστατεύστε το προϊόν από τη σκόνη. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 69

70 3 Περιγραφή συστήματος 3.4 Επισκόπηση εξαρτημάτων και αναλώσιμων Αναλώσιμο Amersham WB paper comb Amersham WB sponge Amersham WB goat antimouse Cy3/Cy5 ή Amersham WB anti-rabbit Cy3/Cy5, λυοφιλιωμένο Ανασυσταθέντα δευτεροταγή αντισώματα (τα οποία ανασυστάθηκαν σε υπερκάθαρο νερό με συγκέντρωση 1 μg/μl) Πρωτοταγή αντισώματα Θερμοκρασία αποθήκευσης Θερμοκρασία δωματίου Θερμοκρασία δωματίου 2 έως 8 Φυλάσσετε τα υποπολλαπλάσια δείγματα σε θερμοκρασία -15 C έως -30 C Βλ. οδηγίες κατασκευαστή. Περιβάλλον Φυλάσσετε τα χάρτινα χτένια σε ξηρό μέρος, εντός του κουτιού στο οποίο παραδόθηκαν. Προστατεύστε το προϊόν από τη σκόνη. Προστατεύστε το περιεχόμενο από τη σκόνη και το άμεσο ηλιακό φως. Προστατεύστε τα δευτεροταγή αντισώματα από το φως. Προστατεύστε τα ανασυσταθέντα δευτεροταγή αντισώματα από το φως. Τα υποπολλαπλάσια δείγματα δεν πρέπει να αποθηκεύονται για διάστημα μεγαλύτερο των 6 μηνών. Αποφύγετε την κατ εξακολούθηση ψύξη-απόψυξη. Βλ. οδηγίες κατασκευαστή. 70 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

71 3 Περιγραφή συστήματος 3.5 Αναλώσιμα προσήμανσης 3.5 Αναλώσιμα προσήμανσης Εισαγωγή Τα αναλώσιμα προσήμανσης χρησιμοποιούνται για την προσήμανση δειγμάτων πρωτεϊνών με χρωστική φθορισμού. Προσήμανση δειγμάτων με φθορισμό: επιτρέπει την ανίχνευση ολικής πρωτεΐνης κατά τη σάρωση της κάρτας γέλης, καταργεί την ανάγκη για εκ των υστέρων κηλίδωση της γέλης. Πότε πρέπει να χρησιμοποιείται η προσήμανση πρωτεϊνών Η προσήμανση πρωτεϊνών εκτελείται πάντα πριν από την ηλεκτροφόρηση κατά τη διενέργεια: πειραμάτων ηλεκτροφόρησης, πειραμάτων Western με κανονικοποίηση ολικής πρωτεΐνης. Αναλώσιμα προσήμανσης Τα αναλώσιμα προσήμανσης συσκευάζονται σε ξεχωριστούς ασκούς από φύλλο αλουμινίου. Κάθε ασκός από φύλλο αλουμινίου περιέχει διάλυμα αντιδραστηρίων επαρκές για χρήση 10 καρτών γέλης (στον οποίο φορτώνονται 14 λωρίδες με προσημασμένα δείγματα ανά κάρτα γέλης), που μας δίνει 140 ξεχωριστές αντιδράσεις σήμανσης. Ο παρακάτω πίνακας συνοψίζει το περιεχόμενο των αναλώσιμων προσήμανσης. Αναλώσιμα προσήμανσης Amersham WB Cy5 Amersham WB labeling buffer (ρυθμιστικό διάλυμα σήμανσης) Περιεχόμενο 0,25 mg/ml (περίπου 250 pmol/μl) χρωστικής Cy5 σε DMSO Ρυθμιστικό διάλυμα με βάση τo τρι(υδροξυμεθυλ) αμινομεθάνιο που περιέχει SDS με ph 8,7 (σε θερμοκρασία 25 C) Ποσότητα 5 φιαλίδια (μπλε πώματα) 35 μl διαλύματος χρωστικής Cy5 ανά φιαλίδιο (επαρκές για δύο κάρτες γέλης) 5 φιαλίδια (μαύρα πώματα) 0,7 ml διαλύματος σήμανσης ανά φιαλίδιο (ποσότητα επαρκής για δύο κάρτες γέλης) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 71

72 3 Περιγραφή συστήματος 3.5 Αναλώσιμα προσήμανσης Αναλώσιμα προσήμανσης Amersham WB loading buffer (διάλυμα φόρτωσης) Περιεχόμενο 50 mm Tris-Cl, 0,25% (w/v) Πορτοκαλί G, 4% SDS, 0,5 mm λυσίνης Ποσότητα 5 φιαλίδια (πορτοκαλί πώματα) 0,7 ml διαλύματος φόρτωσης ανά φιαλίδιο (ποσότητα επαρκής για δύο κάρτες γέλης) Αναλώσιμα για την προετοιμασία δειγμάτων Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει το Amersham WB MiniTrap kit. Αναλώσιμα για την προετοιμασία δειγμάτων Amersham WB MiniTrap kit Λειτουργία Το κιτ είναι σχεδιασμένο για εύκολο και ταχύ καθαρισμό των δειγμάτων πρωτεϊνών (>5000 M r ) που περιέχουν παρεμβαλλόμενες ουσίες, π.χ., ιμιδαζόλη. Ποσότητα 30 προσυσκευασμένες στήλες PD MiniTrap G-25 μίας χρήσης που περιέχουν μέσο Sephadex G-25 1 φιάλη 10 Amersham WB labeling buffer (14 ml διαλύματος παρακαταθήκης) Με ενσωματωμένη βάση στήλης, δίσκο αποβλήτων και συγκρατητήρα σωλήνα 72 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

73 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Εισαγωγή Τα ακόλουθα εξαρτήματα και αναλώσιμα είναι απαραίτητα για ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών: Amersham WB buffer strip Amersham WB buffer strip holder Amersham WB molecular weight markers Amersham WB gel card Amersham WB paper comb, εφόσον πρόκειται να διενεργηθεί καθαρισμός των υποδοχών δειγμάτων Amersham WB loading buffer (για πληροφορίες σχετικά με το διάλυμα φόρτωσης, βλ. Ενότητα 3.5 Αναλώσιμα προσήμανσης, στη σελίδα 71) Στην παρούσα ενότητα Η ενότητα αυτή περιλαμβάνει τις παρακάτω υποενότητες: Ενότητα Amersham WB molecular weight markers Amersham WB gel card Amersham WB buffer strip και Amersham WB buffer strip holder Amersham WB paper comb Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 73

74 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB molecular weight markers Amersham WB molecular weight markers Εισαγωγή Amersham WB Τα molecular weight markers είναι ένα μείγμα εννέα φυσικών και ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών, M r : έως , με ετικέτα Cy3 και Cy5, για καθορισμό του μοριακού βάρους πρωτεϊνών σε σαρωμένες κάρτες γέλης και PVDF. Το λογισμικό υπολογίζει τις καμπύλες βαθμονόμησης του μοριακού βάρους. Όταν χρησιμοποιούνται δύο καμπύλες βαθμονόμησης μοριακού βάρους, τα παρεμβαλλόμενα δεδομένα των καμπύλων χρησιμοποιούνται για τη δημιουργία καμπυλών βαθμονόμησης των λωρίδων δειγμάτων. Στη συνέχεια, υπολογίζεται το μοριακό βάρος όλων των ανιχνευμένων δεσμών σε κάθε λωρίδα. Περιεχόμενο Κάθε συσκευασία Amersham WB molecular weight markers περιέχει διάλυμα για 10 κάρτες γέλης (στην οποία φορτώνονται 2 λωρίδες Amersham WB molecular weight markers ανά κάρτα γέλης). 74 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

75 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB molecular weight markers Εικόνα των δεικτών μοριακού βάρους Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει τα μεγέθη των Amersham WB molecular weight markers διαχωρισμένα σε διαβαθμισμένη (αριστερή εικόνα) και ομογενή κάρτα γέλης (δεξιά εικόνα): M r Πρωτεΐνες και δείκτες μοριακού βάρους Ο παρακάτω πίνακας δείχνει τις πρωτεΐνες που περιλαμβάνονται: Πρωτεΐνη Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη Φωσφορυλάση β, μυς λαγού Αλβουμίνη, βόειος ορός Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη Αναστολέας της τρυψίνης, σπέρματα σόγιας Αλφα-λακταλβουμίνη, βόειο γάλα Μοριακό βάρος (M r 10 3 ) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 75

76 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB molecular weight markers Πρωτεΐνη Ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη Μοριακό βάρος (M r 10 3 ) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

77 3.6.2 Amersham WB gel card 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB gel card Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τα στοιχεία της κάρτας γέλης Τύποι κάρτας γέλης Υπάρχουν δύο τύποι καρτών γέλης: Ομογενής κάρτα γέλης: Amersham WB gel card 14, 13.5% Διαβαθμισμένη κάρτα γέλης: Amersham WB gel card 14, 8-18% Σύσταση γέλης Οι γέλες έχουν προεγχυθεί στο φυσίγγι της κάρτας γέλης. Οι γέλες είναι πηκτές πολυακρυλαμιδίου/δις-ακρυλαμιδίου που περιέχουν τρι-οξεικό ρυθμιστικό διάλυμα. Ευκρίνεια διαχωρισμού πρωτεϊνών Ο παρακάτω πίνακας παραθέτει την ευκρίνεια διαχωρισμού πρωτεϊνών για του δύο τύπους κάρτας γέλης: Τύπος κάρτας γέλης Amersham WB gel card 14, 13.5%, Ομογενής Amersham WB gel card 14, 8-18%, Διαβαθμισμένη Ευκρίνεια διαχωρισμού, M r έως έως 225 (προσημασμένες πρωτεΐνες) 3,5 έως 225 (πειράματα Western, ανίχνευση αντισωμάτων) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 77

78 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB gel card Εικόνα της πρόσθιας πλευράς μιας κάρτας γέλης Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει την πρόσθια πλευρά της κάρτας γέλης: Εξάρτημα 1 Περιγραφή Επιφάνεια καταγραφής προσωπικών σχολίων Σημείωση: Χρησιμοποιείτε πάντα μολύβι για την καταγραφή σχολίων. Τα σχόλια μπορούν επίσης να καταχωριστούν στο λογισμικό Επισήμανση του τύπου κάρτας γέλης Κάλυμμα υποδοχής δείγματος το οποίο πρέπει να αφαιρεθεί όταν κλείσει το καπάκι σφράγισης της μονάδας Elpho & scan, πριν από τη χρήση των δειγμάτων. Λαβές γέλης για εύκολο χειρισμό της γέλης μετά την αφαίρεση από το στήριγμα για αποτύπωση Western. 78 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

79 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB gel card Εξάρτημα 5 6 Περιγραφή Οπές καθοδήγησης για την ορθή τοποθέτηση των καρτών γέλης στο φορτωτή Elpho & scan και το συγκρατητήρα μεταφοράς. Εικόνα της οπίσθιας πλευράς μιας κάρτας γέλης Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει την οπίσθια πλευρά μιας κάρτας γέλης: Επισήμανση με ετικέτα μητρώου δεδομένων, αριθμό παρτίδας και αναγνωριστικό Εξάρτημα 1 2 Περιγραφή Προστατευτικές μεμβράνες οι οποίες αφαιρούνται πριν από την ηλεκτροφόρηση ώστε να επιτρέπουν την επαφή της γέλης με τις ταινίες ρυθμιστικού διαλύματος. Προστατευτική μεμβράνη η οποία αφαιρείται κατά την προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς (ισχύει μόνο για πειράματα Western). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 79

80 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB buffer strip και Amersham WB buffer strip holder Amersham WB buffer strip και Amersham WB buffer strip holder Εισαγωγή Οι συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος συγκρατούν τις ταινίες ρυθμιστικού διαλύματος στη θέση τους κατά τη διάρκεια της εκτέλεσης μιας ηλεκτροφόρησης. Οι συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος έχουν ενσωματωμένα ηλεκτρόδια τα οποία εξασφαλίζουν την επαφή μεταξύ του ηλεκτροδίου και της ταινίας ρυθμιστικού διαλύματος, γεγονός που επιτρέπει τη διέλευση ηλεκτρικού ρεύματος για την ηλεκτροφόρηση. Οι ταινίες ρυθμιστικού διαλύματος φορτώνονται στους συγκρατητήρες πριν από την έναρξη της ηλεκτροφόρησης και απορρίπτονται μετά την ολοκλήρωσή της. Το σχήμα του συγκρατητήρα βοηθά το χρήστη να βρει τόσο το σημείο τοποθέτησης των ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος στους συγκρατητήρες όσο και το σημείο τοποθέτησης των συγκρατητήρων στη μονάδα Elpho & scan. Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. Προετοιμασία πριν από την έναρξη της ηλεκτροφόρησης, στη σελίδα 144. Ρυθμιστικό διάλυμα που χρησιμοποιείται στις ταινίες Το ρυθμιστικό διάλυμα που χρησιμοποιείται στις ταινίες είναι η τρι-τρισίνη. Εικόνα των ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος Στην παρακάτω εικόνα απεικονίζεται μια ταινία ρυθμιστικού διαλύματος. 80 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

81 Εικόνα των συγκρατητήρων ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB buffer strip και Amersham WB buffer strip holder Στην παρακάτω εικόνα απεικονίζεται ένας συγκρατητήρας ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 81

82 3 Περιγραφή συστήματος 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση Amersham WB paper comb Amersham WB paper comb Εισαγωγή Το χάρτινο χτένι χρησιμοποιείται για τον καθαρισμό των υποδοχών δειγμάτων όταν οι πρωτεΐνες μετακινηθούν σε γέλη για λίγα λεπτά. Ο καθαρισμός των υποδοχών δειγμάτων συνιστάται για την απομάκρυνση τυχόν περίσσειας χρωστικής όταν χρησιμοποιούνται προσημασμένα δείγματα. Αυτό μειώνει το υπόβαθρο, γεγονός που βελτιώνει την ανίχνευση και την ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών σε χαμηλή αφθονία (<1 ng/δέσμη) και πρωτεϊνών χαμηλού μοριακού βάρους (M r <40 000). Ο καθαρισμός των υποδοχέων του δείγματος βελτιώνει εν γένει την ευκρίνεια της δέσμης, ακόμα για μη σημασμένα δείγματα με υψηλή περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες ή για μεγάλο όγκο δειγμάτων. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τον τρόπο χρήσης του χάρτινου χτενιού, βλ. Έναρξη και παρακολούθηση ηλεκτροφόρησης και σάρωση γέλης, στη σελίδα 151. Εικόνα του χάρτινου χτενιού Στην παρακάτω εικόνα απεικονίζεται ένα χάρτινο χτένι. 82 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

83 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Εισαγωγή Η εν λόγω ενότητα περιγράφει τα εξαρτήματα και αναλώσιμα που χρησιμοποιούνται για τη μεταφορά πρωτεϊνών από τη γέλη στη μεμβράνη, την ανίχνευση της μεμβράνης με πρωτοταγή και δευτεροταγή αντισώματα και τη σάρωση των καρτών PVDF. Στην παρούσα ενότητα Η ενότητα αυτή περιλαμβάνει τις παρακάτω υποενότητες: Ενότητα Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Δευτεροταγή αντισώματα ανίχνευση Συγκρατητήρας αποξήρανσης Αποξήρανση της κάρτας PVDF Προσαρμογέας μεμβράνης Σάρωση κάρτας PVDF Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 83

84 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τα εξής: Amersham WB transfer holder (εξάρτημα) Amersham WB PVDF card (αναλώσιμο) Amersham WB transfer paper (αναλώσιμο) Amersham WB sponge (αναλώσιμο) Amersham WB transfer holder Ο συγκρατητήρας μεταφοράς χρησιμοποιείται κατά τη διάρκεια της μεταφοράς. Περιέχει το σάντουιτς μεταφοράς (σπόγγο, χαρτί μεταφοράς, κάρτα γέλης, κάρτα PVDF, χαρτί μεταφοράς και σπόγγο) που έχει προετοιμαστεί πριν από την έναρξη της μεταφοράς. Οι διαχωρισμένες πρωτεΐνες μεταφέρονται από τη γέλη στη μεμβράνη κατά τη διάρκεια της μεταφοράς. Οι πείροι καθοδήγησης του συγκρατητήρα μεταφοράς διασφαλίζουν ότι οι κάρτες γέλης και PVDF τοποθετούνται στην ορθή θέση κατά την προετοιμασία του σάντουιτς μεταφοράς. Χρησιμοποιώντας τον ενσωματωμένο κύλινδρο (κατά τη μετακίνηση του κυλίνδρου επάνω από το σάντουιτς στον κυλινδρομεταφορέα), οι αεροκυψέλες θα αφαιρεθούν και θα εφαρμοστεί αναπαραγώγιμη πίεση στις κάρτες γέλης και PVDF για τη διασφάλισης της ομαλής διεργασίας μεταφοράς. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τον τρόπο προετοιμασίας του σάντουιτς μεταφοράς, βλ. Έναρξη κατασκευής του σάντουιτς μεταφοράς, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

85 Εικόνα του συγκρατητήρα μεταφοράς σε κλειστή θέση 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει το συγκρατητήρα μεταφοράς σε κλειστή θέση: Εικόνα του συγκρατητήρα μεταφοράς σε αποσυναρμολόγηση Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει το συγκρατητήρα μεταφοράς σε αποσυναρμολόγηση Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει τα διάφορα μέρη του συγκρατητήρα μεταφοράς. 7 Εξάρτημα Λειτουργία Κάτω μέρος (μαύρο καπάκι) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 85

86 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Εξάρτημα Λειτουργία Μάνδαλοι Πείροι καθοδήγησης για την κάρτα γέλης και την κάρτα PVDF Κυλινδρομεταφορείς (για πείρους με σφαιροειδή κεφαλή) Άνω μέρος (λευκό καπάκι) Πείροι με σφαιροειδή κεφαλή (τοποθετούνται σε κυλινδρομεταφορείς για τη συναρμολόγηση των καπακιών) Κύλινδρος Λαβή Οπές για τους μανδάλους Amersham WB PVDF card Κάρτα Κατά το βήμα μεταφοράς, οι πρωτεΐνες μεταφέρονται από τη γέλη στην περιοχή αποτύπωσης της κάρτας PVDF. Η κάρτα PVDF είναι μια μεμβράνη PVDF χαμηλού φθορισμού. Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζονται τα διάφορα μέρη της κάρτας PVDF και της μοναδικής συσκευασίας κάρτας PDVF Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

87 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει τα διάφορα μέρη της κάρτας PVDF και της μοναδικής συσκευασίας κάρτας PDVF. Εξάρτημα 1 Περιγραφή Οπές καθοδήγησης Σημείωση: Οι οπές καθοδήγησης βοηθούν στην ορθή τοποθέτηση της κάρτας στο συγκρατητήρα μεταφοράς, το θάλαμο ανίχνευσης, το συγκρατητήρα αποξήρανσης και το φορτωτή Elpho & scan. 2 Επιφάνεια καταγραφής προσωπικών σχολίων Σημείωση: Χρησιμοποιείτε πάντα μολύβι για την καταγραφή σχολίων. Τα σχόλια μπορούν επίσης να καταχωριστούν στο λογισμικό Λαβές κάρτας Περιοχή αποτύπωσης Μοναδική συσκευασία κάρτας PDVF Κάρτα PDVF με προστατευτικά χαρτιά Επισήμανση με τον κωδικό προϊόντος, τον αριθμό παρτίδας, τον αριθμό αναγνώρισης και την ετικέτα μητρώου δεδομένων (περιέχει τον κωδικό προϊόντος, τον αριθμό παρτίδας και το αναγνωριστικό) Amersham WB transfer paper Τα χαρτιά μεταφοράς χρησιμοποιούνται κατά την προετοιμασία του σάντουιτς μεταφοράς. Στην παρακάτω εικόνα απεικονίζεται ένα χαρτί μεταφοράς: Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 87

88 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Εξαρτήματα και αναλώσιμα για μεταφορά Amersham WB sponge Κατά την προετοιμασία του σάντουιτς μεταφοράς χρησιμοποιούνται δύο σπόγγοι. Οι σπόγγοι πρέπει να αντικαθίστανται μετά από κάθε εκτέλεση. Στην παρακάτω εικόνα εικονίζεται ένας σπόγγος. 88 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

89 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Δευτεροταγή αντισώματα ανίχνευση Δευτεροταγή αντισώματα ανίχνευση Εισαγωγή Οι πρωτεΐνες-στόχοι ταυτοποιούνται μέσω της ανίχνευσης μεμβράνης τόσο με πρωτοταγή αντισώματα όσο και με συζευγμένα με CyDye δευτεροταγή αντισώματα ειδικά ως προς το είδος. Χρησιμοποιώντας δύο διαφορετικά είδη πρωτοταγών αντισωμάτων (μυός και λαγού), ένα συζευγμένο με Cy3 δευτεροταγές αντίσωμα και ένα συζευγμένο με Cy5 δευτεροταγές αντίσωμα, μπορεί να εκτελεστεί ένα πολλαπλό πείραμα για την ταυτόχρονη ανίχνευση δύο πρωτεϊνών στην ίδια μεμβράνη. Διατίθενται οι παρακάτω παραλλαγές συζευγμένων δευτεροταγών αντισωμάτων CyDye: Amersham WB goat anti-mouse Cy3 (goat anti-mouse Cy3, αντίσωμα αίγας έναντι Cy3 μυός) Amersham WB goat anti-rabbit Cy3 (goat anti-rabbit Cy3, αντίσωμα αίγας έναντι Cy3 κουνελιού) Amersham WB goat anti-mouse Cy5 (goat anti-mouse Cy5, αντίσωμα αίγας έναντι Cy5 μυός) Amersham WB goat anti-rabbit Cy5 (goat anti-rabbit Cy5, αντίσωμα αίγας έναντι Cy5 κουνελιού) CyDye (συζευγμένο με τα δευτεροταγή αντισώματα) Τα CyDye που είναι συζευγμένα με τα δευτεροταγή αντισώματα διαθέτουν τα δικά τους ειδικά μήκη κύματος διέγερσης και εκπομπής στα φάσματα ορατού φωτός και διαφοροποιούνται σε επίπεδο φάσματος, γεγονός που οδηγεί σε ελάχιστες διασταυρώσεις (βλ. παρακάτω πίνακα). CyDye Cy3 Cy5 Μήκος κύματος διέγερσης 550 nm 649 nm Μήκος κύματος εκπομπής 570 nm 670 nm Μετά τη διέγερση, τα απορρέοντα σήματα εκπομπής φθορισμού λαμβάνονται με χρήση ενός πολυκάναλου σαρωτή φθορισμού στη μονάδα Elpho & scan. Τα CyDye έχουν υψηλή φωτοσταθερότητα. Το σήμα στην ανιχνευμένη μεμβράνη παραμένει σταθερό για διάστημα >3 μηνών, εφόσον φυλάσσεται στο σκοτάδι. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 89

90 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Δευτεροταγή αντισώματα ανίχνευση Προετοιμασία και φύλαξη ανασυσταθέντων δευτεροταγών αντισωμάτων Η ανασύσταση των δευτεροταγών αντισωμάτων πραγματοποιείται σε 150 μl υπερκάθαρου νερού ανά φιαλίδιο, με συγκέντρωση 1 μg/μl. Στροβιλίστε και μειώστε σταδιακά την ταχύτητα της δίνης των ανασυσταθέντων δευτεροταγών αντισωμάτων. Συνιστάται να φυλάσσετε τα δευτεροταγή αντισώματα σε υποπολλαπλάσια δείγματα σε θερμοκρασία -15 C έως -30 C, προστατευμένα από το φως. Αποφύγετε την κατ εξακολούθηση ψύξη-απόψυξη. 90 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

91 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Συγκρατητήρας αποξήρανσης Αποξήρανση της κάρτας PVDF Συγκρατητήρας αποξήρανσης Αποξήρανση της κάρτας PVDF Εισαγωγή Το προϊόν Amersham WB drying holder (συγκρατητήρας αποξήρανσης) κατευθύνει και στερεώνει την κάρτα PVDF στην ορθή θέση για την επίτευξη του βέλτιστου δυνατού αποτελέσματος αποξήρανσης. Εικόνα συγκρατητήρα αποξήρανσης Οι παρακάτω εικόνες απεικονίζουν το συγκρατητήρα αποξήρανσης σε κλειστή (επάνω εικόνα) και ανοιχτή θέση (κάτω εικόνα). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 91

92 3 Περιγραφή συστήματος 3.7 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για τα βήματα αποτύπωσης Western Προσαρμογέας μεμβράνης Σάρωση κάρτας PVDF Προσαρμογέας μεμβράνης Σάρωση κάρτας PVDF Εισαγωγή Το προϊόν Amersham WB membrane adapter (προσαρμογέας μεμβράνης) κατευθύνει και στερεώνει την κάρτα PVDF στην ορθή θέση για την καλύτερη δυνατή σάρωση και ανίχνευση στη μονάδα Elpho & scan. Εικόνα προσαρμογέα μεμβράνης Οι παρακάτω εικόνες απεικονίζουν τον προσαρμογέα μεμβράνης σε κλειστή (αριστερά) και ανοιχτή θέση (δεξιά): 92 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

93 3 Περιγραφή συστήματος 3.8 Άλλα εξαρτήματα 3.8 Άλλα εξαρτήματα Αναγνώστης ετικετών μητρώου Ο αναγνώστης ετικετών μητρώου χρησιμοποιείται για καταχώριση των στοιχείων των καρτών γέλης και PVDF (κωδικός προϊόντος, αναγνωριστικό και αριθμός παρτίδας) στο λογισμικό μέσω της σάρωσης των ετικετών μητρώου δεδομένων που βρίσκονται στη μοναδική επισήμανση συσκευασίας στις κάρτες γέλης και PVDF. Ο αναγνώστης αποτελεί αντικείμενο ξεχωριστής παραγγελίας (βλ. Πληροφορίες σχετικά με την παραγγελία στο Amersham WB system User Manual). Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει τον αναγνώστη ετικετών μητρώου. Συγκρατητήρας φίλτρου εισαγωγής Οι συγκρατητήρες φίλτρου εισαγωγής, μαζί με φίλτρα εισαγωγής, προσαρτώνται στους σωλήνες εισαγωγής που τοποθετούνται στις φιάλες οι οποίες στερεώνονται στην ειδική θήκη. Τα σωματίδια διηθούνται από το φίλτρο εισαγωγής και ο συγκρατητήρας φίλτρου εισαγωγής είναι ένα βαρίδιο που συγκρατεί το σωλήνα στη θέση του, στον πυθμένα των φιαλών. Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει ένα συγκρατητήρα φίλτρου εισαγωγής, με ένα φίλτρο εισαγωγής στερεωμένο και προσαρτημένο στο σωλήνα. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 93

94 3 Περιγραφή συστήματος 3.8 Άλλα εξαρτήματα Συγκρατητήρες σωλήνα Για μείωση της τάσης όταν οι σωλήνες είναι τοποθετημένοι σε φιάλες και για αποφυγή της πτώσης των φιαλών όταν μειώνεται η στάθμη του υγρού, πρέπει στους σωλήνες να προσαρτώνται συγκρατητήρες. Βλ. παρακάτω εικόνα: Πρόσθετα εξαρτήματα προοριζόμενα για εγκατάσταση από το χρήστη Τα ηλεκτρόδια μεταφοράς και οι οδηγοί ξηραντήρα μεμβράνης πρέπει να εγκαθίστανται από το χρήστη. Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. Εγκατάσταση των ηλεκτροδίων μεταφοράς, στη σελίδα107 και Εγκατάσταση οδηγών ξηραντήρα μεμβρανών στο διαμέρισμα αποξήρανσης, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

95 3 Περιγραφή συστήματος 3.8 Άλλα εξαρτήματα Εξαρτήματα που υποβάλλονται σε συντήρηση από το χρήστη Για μια περιγραφή των εξαρτημάτων που υποβάλλονται σε συντήρηση από το χρήστη, βλ. Εξαρτήματα συντήρησης, στη σελίδα 217. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 95

96 3 Περιγραφή συστήματος 3.9 Επισκόπηση λογισμικού 3.9 Επισκόπηση λογισμικού Εισαγωγή Η ενότητα αυτή παρέχει μια επισκόπηση του Amersham WB software. Εικόνα της οθόνης έναρξης του λογισμικού Από την οθόνη έναρξης του λογισμικού μπορείτε να δημιουργείτε νέα και να ανοίγετε αποθηκευμένα πειράματα. Για πληροφορίες σχετικά με τον τρόπο δημιουργίας και ρύθμισης των παραμέτρων ενός πειράματος, βλ. Δημιουργία και ρύθμιση παραμέτρων ενός πειράματος, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

97 3 Περιγραφή συστήματος 3.9 Επισκόπηση λογισμικού Απεικόνιση της κύριας οθόνης του λογισμικού Η παρακάτω εικόνα απεικονίζει την κύρια οθόνη του λογισμικού για ένα πείραμα Western. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 97

98 3 Περιγραφή συστήματος 3.9 Επισκόπηση λογισμικού Εμβαδόν 1 Περιγραφή Γραμμή μενού Η γραμμή μενού αποτελείται από τέσσερα μενού: File: Δημιουργία, άνοιγμα και αποθήκευση πειραμάτων. Εκτύπωση πληροφοριών και έξοδος από το λογισμικό. Control: Ματαίωση της εκτέλεσης, άδειασμα του θαλάμου μεταφοράς και ανίχνευσης, έναρξη καθαρισμού των διαδρομών ροής μεταφοράς και ανίχνευσης. Remote: Σύνδεση και αποσύνδεση από το σύστημα απομακρυσμένης πρόσβασης του οργάνου. Ανάκτηση των κωδικών πρόσβασης στα όργανα και διαχείριση απομακρυσμένου χρήστη. Επεξεργασία της ρύθμισης παραμέτρων απομακρυσμένης σύνδεσης. Σημείωση: Οι επιλογές είναι ορατές μόνο όταν είναι συνδεδεμένο ένα όργανο. Help: Δημιουργία αναφορών συστήματος. Ανοίξτε τον πίνακα βοήθειας, το εγχειρίδιο οδηγιών χρήσης και το παράθυρο διαλόγου About Amersham WB (Σχετικά με το Amersham WB). 2 Πίνακας ροής εργασιών Ο πίνακας ροής εργασιών δείχνει τα διαφορετικά βήματα ροής εργασιών στο λογισμικό για ένα πείραμα. Μπορείτε να μεταβαίνετε μπρος και πίσω για να βλέπετε και να επεξεργάζεστε πληροφορίες και παραμέτρους στα διάφορα βήματα ροής εργασιών πριν από την έναρξη της εκτέλεσης μιας εργασίας (όπως ηλεκτροφόρησης, μεταφοράς, ανίχνευσης, αποξήρανσης ή σάρωσης μεμβράνης). Μπορείτε ανά πάσα στιγμή να μεταβαίνετε πίσω και να επεξεργάζεστε το κείμενο των ενημερωτικών πεδίων στα διάφορα βήματα ροής εργασιών κατά τη διάρκεια και μετά την εκτέλεση μιας εργασίας. Για παράδειγμα, ο πίνακας δειγμάτων μπορεί να συμπληρωθεί μετά την εκκίνηση της ηλεκτροφόρησης. Σημείωση: Για ένα πείραμα ηλεκτροφόρησης, τα βήματα ροής εργασιών TRANSFER (Μεταφορά), PROBING & DRYING (Ανίχνευση & Αποξήρανση) και MEMBRANE SCANNING (Σάρωση μεμβρανών) εμφανίζονται με αχνά γράμματα. Τα βήματα αυτά περιλαμβάνονται μόνο σε πειράματα Western. 3 Περιοχή εργασίας Η περιοχή εργασίας εμφανίζει τις πληροφορίες κειμένου, τις παραμέτρους και τους ελέγχους για το εμφανιζόμενο βήμα ροής εργασιών. 98 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

99 3 Περιγραφή συστήματος 3.9 Επισκόπηση λογισμικού Εμβαδόν 4 5 Περιγραφή Πίνακας κατάστασης οργάνου Ο πίνακας κατάστασης οργάνου εμφανίζει την κατάσταση σύνδεσης του οργάνου. Όταν το όργανο είναι συνδεδεμένο, εμφανίζεται η κατάσταση κάθε μονάδας υλικού (διαμέρισμα ηλεκτροφόρησης και σάρωσης, δεξαμενή μεταφοράς, διαμέρισμα ανίχνευσης και διαμέρισμα αποξήρανσης), καθώς και η πρόοδος της εκτέλεσης κάθε εργασίας. Είναι εφικτό να είναι ανοικτά πολλά πειράματα ταυτόχρονα. Για κάθε πείραμα απαιτείται άνοιγμα του λογισμικού σε νέο παράθυρο. Ο πίνακας κατάστασης οργάνου εμφανίζει την κατάσταση του οργάνου για όλα τα ανοικτά πειράματα. Κάθε πείραμα μπορεί να χρησιμοποιεί μόνο μία μονάδα του υλικού τη φορά. Αυτό σημαίνει ότι μπορούν να εκτελούνται ταυτόχρονα τέσσερα διαφορετικά βήματα ροής εργασιών από τέσσερα διαφορετικά πειράματα. Πίνακας βοήθειας Ο πίνακας βοήθειας εμφανίζει τις οδηγίες βοήθειας για την οθόνη που εμφανίζεται εκείνη τη στιγμή στην περιοχή εργασίας. Κατά την επιλογή ενός νέου βήματος στη ροή εργασιών, ενημερώνονται αυτόματα οι οδηγίες βοήθειας ώστε να εμφανίζουν το σχετικό πίνακα βοήθειας για την οθόνη που είναι ανοικτή. Συμβουλή: Για προβολή του εγχειριδίου οδηγιών χρήσης που περιέχει λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με το σύστημα, επιλέξτε Help:View user manual (Βοήθεια: Προβολή εγχειριδίου οδηγιών χρήσης) από τη γραμμή μενού, ή πατήστε Ctrl+F1. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 99

100 4 Εγκατάσταση 4 Εγκατάσταση Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό περιγράφει την εγκατάσταση του Amersham WB system. Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιλαμβάνει τις παρακάτω ενότητες: Ενότητα 4.1 Προετοιμασία χώρου εγκατάστασης 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού 4.3 Εγκατάσταση του λογισμικού Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

101 4 Εγκατάσταση 4.1 Προετοιμασία χώρου εγκατάστασης 4.1 Προετοιμασία χώρου εγκατάστασης Προετοιμασία χώρου εγκατάστασης Η θέσης τοποθέτησης στο εργαστήριο πρέπει να σχεδιαστεί και να έχει προετοιμαστεί πριν από την εγκατάσταση του συστήματος Amersham WB system. Η τήρηση των προδιαγραφών απόδοσης του συστήματος είναι δυνατή μόνο αν το εργαστηριακό περιβάλλον πληροί τις απαιτήσεις που αναφέρονται σε αυτήν την ενότητα. Ακολουθείτε πάντα τυχόν τοπικούς κανονισμούς για την ασφάλεια. Απαιτήσεις χώρου εγκατάστασης ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μεθανόλη ή άλλα χημικά προϊόντα για τα οποία απαιτείται αερισμός, τοποθετήστε το Amersham WB analyzer σε χώρο με σύστημα εξαερισμού. Οι μονάδες του οργάνου δεν πρέπει να εκτίθενται σε άμεσο ηλιακό φως. Η σκόνη στην ατμόσφαιρα πρέπει να διατηρείται σε ελάχιστα επίπεδα. Το επιτρεπόμενο εύρος θερμοκρασίας και υγρασίας περιγράφεται στον παρακάτω πίνακα. Παράμετρος Επιτρεπόμενο εύρος Θερμοκρασία περιβάλλοντος, για λειτουργία 15 C έως 32 C Για βέλτιστη απόδοση: 16 έως 28 Θερμοκρασία περιβάλλοντος, φύλαξη και μεταφορά Σχετική υγρασία, για λειτουργία Υψόμετρο Περιβάλλον -25 C έως +60 C 20% έως 80%, χωρίς συμπύκνωση υδρατμών Για βέλτιστη απόδοση: 20% έως 70%, χωρίς συμπύκνωση υδρατμών Μέγιστο 2000 m Χρήση μόνο σε εσωτερικούς χώρους Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 101

102 4 Εγκατάσταση 4.1 Προετοιμασία χώρου εγκατάστασης Απαιτήσεις χώρου ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μην εμποδίζετε την πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας και το καλώδιο τροφοδοσίας. Η πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας πρέπει να είναι πάντα απρόσκοπτη. Το καλώδιο τροφοδοσίας με βύσμα πρέπει να αποσυνδέεται πάντα εύκολα. Οι μονάδες του οργάνου πρέπει να τοποθετούνται σε πάγκο εργαστηρίου. Ο πάγκος πρέπει να είναι καθαρός, επίπεδος, οριζοντιωμένος, σταθερός και ικανός να αντέξει το βάρος του Amersham WB system (μονάδες οργάνου: 45 kg + βάρος φορητού υπολογιστή και υγρών που τοποθετούνται στη μονάδα Western). Για τις απαιτήσεις χώρου, βλ. παρακάτω. Βεβαιωθείτε ότι υπάρχουν τουλάχιστον 10 cm κενού χώρου πίσω από τις μονάδες του οργάνου, ώστε να αερίζονται. Ο χώρος που απαιτείται για δύο μονάδες είναι 90 cm. Ωστόσο συνιστάται η χρήση πάγκου 140 cm ώστε να υπάρχει επιπλέον χώρος για την παρασκευή των αντιδραστηρίων, το χειρισμό των καρτών γέλης κ.λπ. 60 cm 140 cm Απαιτήσεις ισχύος Ανατρέξτε στην ενότητα Ενότητα 7.1 Προδιαγραφές συστήματος, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

103 4 Εγκατάσταση 4.1 Προετοιμασία χώρου εγκατάστασης Απαιτήσεις υπολογιστή Παράμετρος Λειτουργικό σύστημα Πρόγραμμα περιήγησης στο διαδίκτυο Ανάλυση οθόνης Απόδοση Δεδομένα Windows 7 Professional, 32-bit or 64-bit, αγγλική έκδοση Windows Internet Explorer 8 ή μεταγενέστερη έκδοση ανάλυση τουλάχιστον Κατά το ελάχιστο: φυσική μνήμη 2 GB Σύσταση: φυσική μνήμη 4 GB Σημείωση: Ο υπολογιστής πρέπει να εγκαθίσταται, να τοποθετείται και να χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες και τις προδιαγραφές που παρέχονται από τον κατασκευαστή του υπολογιστή. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 103

104 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Αποσυσκευάστε το Amersham WB analyzer Βλ. Amersham WB analyzer Οδηγίες αποσυσκευασίας. Ανασηκώστε τις μονάδες οργάνου και τοποθετήστε τες στον πάγκο ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Βεβαιωθείτε ότι το σύστημα έχει τοποθετηθεί σε σταθερό και επίπεδο πάγκο με επαρκή χώρο για αερισμό. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μην εμποδίζετε την πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας και το καλώδιο τροφοδοσίας. Η πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας πρέπει να είναι πάντα απρόσκοπτη. Το καλώδιο τροφοδοσίας με βύσμα πρέπει να αποσυνδέεται πάντα εύκολα. ΠΡΟΣΟΧΗ Εξοπλισμός ατομικής προστασίας (PPE). Όταν συσκευάζετε, αποσυσκευάζετε, μεταφέρετε ή μετακινείτε το σύστημα, να φοράτε: Προστατευτικά υποδήματα, κατά προτίμηση με επένδυση από χάλυβα Γάντια εργασίας, για προστασία από αιχμηρές ακμές Προστατευτικά γυαλιά ΠΡΟΣΟΧΗ Βαρύ αντικείμενο. Για την ανύψωση των μονάδων του οργάνου με ασφάλεια χρειάζονται δύο άτομα. 104 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

105 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα 1 2 Ενέργεια Ανασηκώστε τις μονάδες οργάνου με το χέρι χρησιμοποιώντας το χώρο ανύψωσης δίπλα από τις μονάδες. Βεβαιωθείτε ότι οι μονάδες τοποθετούνται σε σταθερό, επίπεδο πάγκο. Ανασηκώστε την πρώτη μονάδα του οργάνου. Πιάστε το όργανο από τις εσοχές από αφρώδες υλικό που βρίσκονται κάτω και στα πλαϊνά. Τοποθετήστε την πάνω σε έναν πάγκο εργαστηρίου. 3 Ανασηκώστε την άλλη μονάδα του οργάνου και τοποθετήστε την πάνω σε πάγκο εργαστηρίου. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 105

106 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα Ενέργεια Προκειμένου να αερίζεται σωστά το σύστημα, η μονάδα Elpho & scan πρέπει να τοποθετηθεί στα αριστερά και η μονάδα Western στα δεξιά. Αφήστε τουλάχιστον 10 cm κενού χώρου πίσω από τις μονάδες του οργάνου, ώστε να αερίζονται. Μην εμποδίζετε την πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας και το καλώδιο τροφοδοσίας. Προσαρμόστε τα υποπόδια ώστε οι μονάδες να βρίσκονται στο ίδιο ύψος. Αυτό είναι ιδιαίτερα σημαντικό για τη μονάδα Western. Αν δεν θέτει περιορισμούς ο κατασκευαστής και αν ο υπολογιστής είναι φορητός, μπορεί να τοποθετηθεί επάνω στη μονάδα Elpho & scan. Βλ. προδιαγραφές υπολογιστών σχετικά με το περιβάλλον. Εάν χρησιμοποιείται επιτραπέζιος υπολογιστής, η οθόνη και το πληκτρολόγιο μπορούν να τοποθετηθούν επάνω στη μονάδα Elpho & scan. Ο πύργος του υπολογιστή όμως δεν πρέπει να τοποθετείται επάνω στη μονάδα. 106 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

107 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Αφαιρέστε την ασφάλεια μεταφοράς από τη μονάδα Elpho & scan Για την προστασία των εύθραυστων εξαρτημάτων του σαρωτή, υπάρχει μια ασφάλεια μεταφοράς προσαρτημένη στη μονάδα Elpho & scan. Αφαιρέστε την ασφάλεια μεταφοράς προσεκτικά προτού ανοίξετε το διακόπτη τροφοδοσίας ρεύματος. Εγκατάσταση των ηλεκτροδίων μεταφοράς ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αποσυνδέετε το όργανο από το ρεύμα. Αποσυνδέετε πάντα το όργανο από το ρεύμα πριν από την αντικατάσταση εξαρτημάτων του οργάνου, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. Βήμα 1 Ενέργεια Ανοίξτε το καπάκι της δεξαμενής μεταφοράς. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 107

108 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα 2 Ενέργεια Εισαγάγετε το αριστερό ηλεκτρόδιο μεταφοράς στην τέρμα αριστερή πλευρά της δεξαμενής μεταφοράς και πιέστε προς τα κάτω. 3 Εισαγάγετε το δεξί ηλεκτρόδιο μεταφοράς στην τέρμα δεξιά πλευρά της δεξαμενής μεταφοράς και πιέστε προς τα κάτω. 4 Κλείστε το καπάκι της δεξαμενής μεταφοράς. 108 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

109 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Συνδέστε τις μονάδες του οργάνου με τον υπολογιστή και τα καλώδια τροφοδοσίας. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Γείωση και καλώδιο τροφοδοσίας. Το Amersham WB analyzer πρέπει να συνδέεται πάντα σε γειωμένη πρίζα. Χρησιμοποιείτε μόνο εγκεκριμένα καλώδια τροφοδοσίας 3 συρμάτων που παρέχονται ή φέρουν την έγκριση της GE, ή συμμορφώνονται προς όλες τις ισχύουσες απαιτήσεις του τοπικού κώδικα περί ηλεκτρικών. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Τάση παροχής. Προτού συνδέσετε το καλώδιο τροφοδοσίας, βεβαιωθείτε ότι η τάση παροχής στην επιτοίχια πρίζα είναι ίδια με την τάση που αναγράφεται στο όργανο. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Κάθε υπολογιστής που χρησιμοποιείται με τον εξοπλισμό πρέπει να συμμορφώνεται με το πρότυπο IEC/EN/UL/CSA ή άλλους κανονισμούς για την ασφάλεια. Η εγκατάσταση και η χρήση πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 109

110 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα 1 Ενέργεια Σύνδεση του υπολογιστή με τη μονάδα Elpho & scan (επαφή: Computer) με χρήση του παρεχόμενου καλωδίου USB. Σημείωση: Όταν συνδέεται τον υπολογιστή με το Amersham WB analyzer, συνιστάται να απενεργοποιείτε την κατάσταση αναμονής ή να την ορίζετε στις 3 ώρες. Όταν ο υπολογιστής εισέρχεται σε κατάσταση αναμονής, η σύνδεση με την απομακρυσμένη πρόσβαση του οργάνου διακόπτεται, γεγονός που σημαίνει ότι η κατάσταση εκτέλεσης δεν θα αποσταλεί έως την εκ νέου ενεργοποίηση του υπολογιστή. 2 Σύνδεση της μονάδας Elpho & scan (επαφή: Western unit) με τη μονάδα Western (επαφή: Elpho and scan unit) με χρήση του παρεχόμενου καλωδίου Ethernet. 110 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

111 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα 3 Ενέργεια Συνδέστε τα καλώδια τροφοδοσίας με τις συνδέσεις των καλωδίων τροφοδοσίας των μονάδων. 4 Συνδέστε τα καλώδια τροφοδοσίας σε γειωμένη επιτοίχια πρίζα. Για πληροφορίες σχετικά με την τάση και τη συχνότητα, βλ. Ενότητα 7.1 Προδιαγραφές συστήματος, στη σελίδα 233. Σημείωση: Μην ενεργοποιείτε τους διακόπτες τροφοδοσίας κεντρικού δικτύου πριν από την πραγματοποίηση όλων των συνδέσεων. Συναρμολογήστε τους κυλινδρικούς πυλώνες της μονάδας Western Οι κυλινδρικοί πυλώνες για τη διασωλήνωση της μονάδας Western δεν είναι συναρμολογημένοι κατά την παραλαβή του προϊόντος και πρέπει να συναρμολογηθούν από το χρήστη. Βήμα 1 Ενέργεια Ανοίξτε τον πλαστικό ασκό με τους πυλώνες και τους σωλήνες. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 111

112 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα 2 Ενέργεια Πιέστε κάθε πυλώνα προς τα κάτω στο άνοιγμα και γυρίστε τον δεξιόστροφα έως ότου ακουστεί ένα χαρακτηριστικό κλικ. Οι σωλήνες πρέπει να εγκατασταθούν ως εξής: Θέση πυλώνα (προβολή από την πρόσθια όψη του οργάνου) Αριστερά Μέση Δεξιά Σωλήνες T buffer και T water P water, P block, και P wash P Final wash, και P Custom Σημείωση: Προσέξτε να μην αφαιρεθούν εκ παραδρομής οι επισημάνσεις των σωλήνων κατά τη στερέωση των πυλώνων. 112 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

113 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Τοποθέτηση συγκρατητήρων σωλήνα Για μείωση της τάσης όταν οι σωλήνες είναι τοποθετημένοι σε φιάλες και για αποφυγή της πτώσης των φιαλών όταν μειώνεται η στάθμη του υγρού, πρέπει στους σωλήνες να προσαρτώνται συγκρατητήρες. Σημείωση: Οι συγκρατητήρες σωλήνων πρέπει να τοποθετούνται σε όλους του σωλήνες πριν από την προσάρτηση των φίλτρων εισαγωγής. Βήμα 1 2 Ενέργεια Εισαγάγετε ένα σωλήνα στην οπή του συγκρατητήρα σωλήνα. Συνεχίστε να πιέζετε το ανοικτό άκρο του σωλήνα στην εσοχή του συγκρατητήρα σωλήνα. Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι οι επισημάνσεις του σωλήνα παραμένουν προσαρτημένες σε αυτόν. Δεν είναι απαραίτητο η επισήμανση να βρίσκεται εντός του συγκρατητήρα. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 113

114 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Τοποθέτηση φίλτρων εισαγωγής στους σωλήνες Εισαγάγετε το σωλήνα στο συγκρατητήρα με το φίλτρο εισαγωγής και περιστρέψτε το συγκρατητήρα ώστε να στερεωθεί ο σωλήνας. Τοποθετήστε τους σωλήνες αποβλήτων και υπερχείλισης ΠΡΟΣΟΧΗ Οι σωλήνες αποβλήτων και υπερχείλισης πρέπει να είναι στερεωμένοι σωστά ώστε να αποφεύγεται ο κίνδυνος πτώσης σωλήνων εκτός του κάδου αποβλήτων. Τοποθετήστε το σωλήνα αποβλήτων και υπερχείλισης έτσι ώστε τα στόμια εξαγωγής να βρίσκονται χαμηλότερα από τον πάγκο στον οποίο είναι τοποθετημένο τοamersham WB analyzer. Κόψτε τους σωλήνες στο κατάλληλο μήκος και στερεώστε τους ώστε να αποφεύγεται ο κίνδυνος πτώσης των σωλήνων εκτός του κάδου αποβλήτων. 114 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

115 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Εγκατάσταση οδηγών ξηραντήρα μεμβρανών στο διαμέρισμα αποξήρανσης Βήμα 1 Ενέργεια Ανοίξτε τον πλαστικό ασκό με τους δύο οδηγούς ξηραντήρα μεμβρανών. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 115

116 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα 2 Ενέργεια Ανοίξτε το καπάκι του διαμερίσματος αποξήρανσης. 116 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

117 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Βήμα 3 Ενέργεια Τοποθετήστε τους οδηγούς ξηραντήρα μεμβρανών στις δύο εσοχές. 4 Φυλάξτε τους συγκρατητήρες αποξήρανσης στο διαμέρισμα αποξήρανσης. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 117

118 4 Εγκατάσταση 4.2 Εγκατάσταση υλικού εξοπλισμού Εγκατάσταση του αναγνώστη ετικετών μητρώου (προαιρετικά) Βήμα Ενέργεια Συνδέστε το καλώδιο USB με τον αναγνώστη ετικέτας μητρώου. Συνδέστε το καλώδιο USB με τον υπολογιστή. Προγραμματίστε και επιβεβαιώστε τη λειτουργία του αναγνώστη ετικετών μητρώου, σύμφωνα με την τεκμηρίωση χρήστη αναγνώστη ετικετών μητρώου. 118 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

119 4 Εγκατάσταση 4.3 Εγκατάσταση του λογισμικού 4.3 Εγκατάσταση του λογισμικού Εγκατάσταση του Amersham WB software Για την εγκατάσταση του λογισμικού σε υπολογιστή με Windows 7 Professional: Σημείωση: Συνιστάται να εγκαταστήσετε τυχόν ενημερώσεις Windows που βρίσκονται σε εκκρεμότητα πριν από την εγκατάσταση του λογισμικού και να ακολουθήσετε τις οδηγίες στα εμφανιζόμενα μηνύματα. Συνιστάται να ολοκληρωθεί ολόκληρη η διαδικασία της εγκατάστασης (χωρίς διακοπές) μετά την επιλογή του στοιχείου Install. Βήμα 1 Ενέργεια Εισαγάγετε το DVD του λογισμικού στον υπολογιστή. Όταν εμφανιστεί το πρώτο παράθυρο διαλόγου του οδηγού, κάντε κλικ στο πλήκτρο Install για να εγκαταστήσετε τις απαιτήσεις λογισμικού. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 119

120 4 Εγκατάσταση 4.3 Εγκατάσταση του λογισμικού Βήμα 2 Ενέργεια Όταν εμφανιστεί το παράθυρο διαλόγου Windows Security κάντε κλικ στο πλήκτρο Install (Εγκατάσταση). 3 Όταν εγκατασταθούν όλα τα απαιτούμενα χαρακτηριστικά, ξεκινήστε την εγκατάσταση του λογισμικού κάνοντας κλικ στο πλήκτρο Next (Επόμενο) στο παράθυρο διαλόγου Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software (Καλώς ήλθατε στον οδηγό εγκατάστασης InstallShield του λογισμικού Amersham WB). 120 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

121 4 Εγκατάσταση 4.3 Εγκατάσταση του λογισμικού Βήμα 4 Ενέργεια Διαβάστε την άδεια χρήσης του λογισμικού. Αφού έχετε διαβάσει και αποδεχθεί τους όρους της άδειας χρήσης, επιλέξτε I accept... (Δέχομαι...) και κάντε κλικ στο πλήκτρο Next (Επόμενο). 5 Για να αλλάξετε τον προεπιλεγμένο κατάλογο (δεν συνιστάται), κάντε κλικ στο πλήκτρο Change +(Αλλαγή) και περιηγηθείτε στον επιθυμητό κατάλογο. Κάντε κλικ στο Next (Επόμενο) Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 121

122 4 Εγκατάσταση 4.3 Εγκατάσταση του λογισμικού Βήμα 6 Ενέργεια Για να δείτε ή να αλλάξετε τις ρυθμίσεις εγκατάστασης, κάντε κλικ στο Back (Προηγούμενο). Για να ξεκινήσει η εγκατάσταση, κάντε κλικ στο Install (Εγκατάσταση). 7 Κάντε κλικ στο Finish (Τέλος)για να πραγματοποιήσετε έξοδο από τον οδηγό εγκατάστασης. 122 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

123 4 Εγκατάσταση 4.3 Εγκατάσταση του λογισμικού Έλεγχος της επικοινωνίας με το όργανο Βήμα 1 2 Ενέργεια Ενεργοποιήστε τον υπολογιστή, καθώς και τις μονάδες Elpho & scan και Western. Ενεργοποιήστε το Amersham WB software. Αποτέλεσμα: Το λογισμικό θα εμφανίσει την επικοινωνία με τις μονάδες του οργάνου. Εάν δεν διασφαλιστεί η επικοινωνία: Ενδέχεται να υπάρχει πρόβλημα με τις συνδέσεις ενός ή περισσότερων καλωδίων: Ελέγξτε ότι το υλικό έχει εγκατασταθεί σωστά. Ενδέχεται να είναι εσφαλμένη η σύνδεση του οδηγού USB: Συνδέστε το καλώδιο σε άλλη θύρα USB του υπολογιστή. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 123

124 5 Εκτέλεση πειράματος 5 Εκτέλεση πειράματος Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό παρέχει μια επισκόπηση των δύο βασικών τύπων πειραμάτων που μπορούν να εκτελεστούν με τη χρήση του Amersham WB system. Περιγράφει επίσης τη ροή εργασιών του πειράματος Western with total protein normalization. Προφυλάξεις ΠΡΟΣΟΧΗ Χρησιμοποιείτε πάντα γάντια, προστατευτικά ενδύματα και γυαλιά κατά τη λειτουργία και τη συντήρηση του συστήματος Amersham WB analyzer. Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιέχει τις ακόλουθες ενότητες: Ενότητα 5.1 Επισκόπηση 5.2 Πραγματοποιήστε έναρξη του Amersham WB analyzer 5.3 Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό 5.4 Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων 5.5 Προετοιμασία του Amersham WB molecular weight markers 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

125 5 Εκτέλεση πειράματος Ενότητα 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων Βλ. σελίδα 198 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 125

126 5 Εκτέλεση πειράματος 5.1 Επισκόπηση 5.1 Επισκόπηση Εισαγωγή Η ενότητα αυτή παρέχει μια επισκόπηση των δύο βασικών τύπων πειραμάτων που μπορούν να εκτελεστούν: πειράματα ηλεκτροφόρησης πειράματα Western (περιλαμβάνουν ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών) Η ενότητα αυτή περιγράφει επίσης τη ροή εργασιών εντός τυπικού πειράματος (που περιγράφεται σε μετέπειτα ενότητες), με εικόνες του πειράματος Western with total protein normalization. Πειράματα ηλεκτροφόρησης Σε πειράματα ηλεκτροφόρησης, τα δείγματα πριν από την ηλεκτροφόρηση υποβάλλονται σε προσήμανση με χρήση αντιδραστηρίου χρωστικής Cy5. Αυτό επιτρέπει την άμεση ανίχνευση των σημασμένων πρωτεϊνών στο δείγμα και καταργεί την ανάγκη για εκ των υστέρων κηλίδωση της γέλης. Στο βήμα Αξιολόγηση που εκτελείται μετά τη σάρωση της γέλης, εκτελείται αυτόματη ανάλυση των δεσμών πρωτεϊνών, τα αποτελέσματα της οποίας παρουσιάζονται στο λογισμικό. Πειράματα Western Σε πειράματα Western, οι μη σημασμένες ή προσημασμένες με Cy5 πρωτεΐνες διαχωρίζονται στη γέλη κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης και, στη συνέχεια, μεταφέρονται από τη γέλη σε μια μεμβράνη. Στη μεμβράνη τοποθετούνται πρωτοταγή και δευτεροταγή αντισώματα συζευγμένα με χρωστική Cy3 ή Cy5 για ανίχνευση της πρωτεΐνηςστόχου. Προκειμένου να ανιχνευθεί η ολική πρωτεΐνη, το δείγμα έχει υποβληθεί σε προσήμανση με Cy5. Μετά την ανίχνευση, η μεμβράνη αποξηραίνεται και εν συνεχεία υποβάλλεται σε σάρωση. Στο βήμα Αξιολόγηση, εκτελείται αυτόματη ανάλυση των δεσμών πρωτεϊνών, τα αποτελέσματα της οποίας παρουσιάζονται στο λογισμικό. 126 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

127 5 Εκτέλεση πειράματος 5.1 Επισκόπηση Γενική επισκόπηση της ροής εργασιών Στο παρακάτω σχήμα παρουσιάζονται τα βασικά βήματα των πειραμάτων ηλεκτροφόρησης και Western. Πείραμα ηλεκτροφόρησης Πείραμα Western Έναρξη οργάνου Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Εκτέλεση προσήμανσης Ή Προετοιμασία μη σημασμένων δειγμάτων για φόρτωση Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης & σάρωσης γέλης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Αξιολόγηση αποτελεσμάτων Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Εκτέλεση ανίχνευσης & αποξήρανσης Σάρωση μεμβράνης ή μεμβρανών Αξιολόγηση αποτελεσμάτων Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 127

128 5 Εκτέλεση πειράματος 5.1 Επισκόπηση Ροή εργασιών Πείραμα Western με κανονικοποίηση ολικής πρωτεΐνης Η παρακάτω εικόνα παραθέτει τα βασικά βήματα ενός πειράματος Western with total protein normalization. Η εν λόγω ροή εργασιών χρησιμοποιείται ως παράδειγμα του τρόπου εκτέλεσης ενός τυπικού παραδείγματος και αναλύεται περαιτέρω στις ενότητες που ακολουθούν. Για άλλους τύπους παραδειγμάτων, βλ. Amersham WB system User Manual. Πείραμα Western - Western με κανονικοποίηση ολικής πρωτεΐνης Έναρξη οργάνου Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Εκτέλεση προσήμανσης Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης & σάρωσης γέλης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Εκτέλεση ανίχνευσης & αποξήρανσης Σάρωση μεμβράνης ή μεμβρανών & προβολή αποτελεσμάτων 128 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

129 5 Εκτέλεση πειράματος 5.1 Επισκόπηση Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει τις ενότητες στις οποίες περιγράφονται τα εκάστοτε βήματα. Βήμα Έναρξη οργάνου Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Εκτέλεση προσήμανσης Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης και σάρωσης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βλ... Ενότητα 5.2 Πραγματοποιήστε έναρξη του Amersham WB analyzer, στη σελίδα 131 Ενότητα 5.3 Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό, στη σελίδα 133 Ενότητα 5.4 Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων, στη σελίδα 137 Ενότητα 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών, στη σελίδα 143 Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς, στη σελίδα 157 Ενότητα 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς, στη σελίδα 156 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων, στη σελίδα 182 Ενότητα 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης, στη σελίδα 181 Ενότητα 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων, στη σελίδα 198 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 129

130 5 Εκτέλεση πειράματος 5.1 Επισκόπηση Εύρεση περισσότερων πληροφοριών Για γενικές και λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τον τρόπο προγραμματισμού πειραμάτων, ανατρέξτε στο Amersham WB system User Manual. Για να το προσπελάσετε, επιλέξτε Help:View user manual από τη γραμμή μενού. Για λεπτομέρειες σχετικά με το λογισμικό, ανατρέξτε στο Amersham WB software help που είναι ενσωματωμένο στο λογισμικό (διαθέσιμο στο δεξί πίνακα του λογισμικού). 130 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

131 5 Εκτέλεση πειράματος 5.2 Πραγματοποιήστε έναρξη του Amersham WB analyzer 5.2 Πραγματοποιήστε έναρξη του Amersham WB analyzer Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο έναρξης των μονάδων Amersham WB analyzer. Η ρύθμιση των παραμέτρων ενός πειράματος μπορεί να πραγματοποιηθεί εκ των προτέρων σε υπολογιστή που δεν είναι συνδεδεμένος στο εργαλείο. Σημείωση: Αμφότερες οι μονάδες του οργάνου πρέπει να είναι πάντα ενεργοποιημένες κατά τη διάρκεια της εκτέλεσης ενός πειράματος. Έναρξη της μονάδας Amersham WB elpho & scan Βήμα 1 Ενέργεια Από τον οπίσθιο πίνακα της μονάδας Elpho & scan, γυρίστε το διακόπτη τροφοδοσίας κεντρικού δικτύου στο I (ON). Αποτέλεσμα: Πραγματοποιήθηκε εκκίνηση της μονάδας Elpho & scan. 2 Κατά τη διάρκεια της εκκίνησης, ο πίνακας ενδεικτών εμφανίζει τα ακόλουθα: Όταν η μονάδα του οργάνου είναι έτοιμη προς χρήση, εμφανίζεται ένα λευκό τετράγωνο. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 131

132 5 Εκτέλεση πειράματος 5.2 Πραγματοποιήστε έναρξη του Amersham WB analyzer Έναρξη της μονάδας Amersham WB western Βήμα 1 Ενέργεια Από τον οπίσθιο πίνακα της μονάδας Western, γυρίστε το διακόπτη τροφοδοσίας κεντρικού δικτύου στο I (ON). Σημείωση: Οι μονάδες του Elpho & scan πρέπει να είναι ενεργοποιημένες προτού καταστεί εφικτή η θέση της μονάδας Western σε λειτουργία. Αποτέλεσμα: Πραγματοποιήθηκε εκκίνηση της μονάδας Western. 2 Κατά τη διάρκεια της εκκίνησης, ο πίνακας ενδεικτών εμφανίζει τα ακόλουθα: Όταν τα διαμερίσματα της μονάδας Western είναι έτοιμα προς χρήση, εμφανίζεται ένα λευκό τετράγωνο σε καθένα από τα τρία διαμερίσματα (μεταφορά, ανίχνευση και αποξήρανση). 132 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

133 5 Εκτέλεση πειράματος 5.3 Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό 5.3 Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει συνοπτικά τον τρόπο έναρξης του Amersham WB software και ρύθμισης των παραμέτρων του πειράματος Amersham WB στο λογισμικό. Για λεπτομερείς πληροφορίες, βλ. Amersham WB software Help στο δεξί πίνακα του λογισμικού. Έναρξη του λογισμικού Βήμα 1 2 Ενέργεια Ενεργοποιήστε τον υπολογιστή και συνδεθείτε στα Microsoft Windows. Κάντε διπλό κλικ στο εικονίδιο Amersham WB software στην επιφάνεια εργασίας. Αποτέλεσμα: Εμφανίζεται η οθόνη έναρξης του λογισμικού. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 133

134 5 Εκτέλεση πειράματος 5.3 Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Συμβουλή: Για προβολή του παραθύρου βοήθειας με οδηγίες για την ενεργή οθόνη, κάντε κλικ στο πλήκτρο βοήθεια ή πιέστε F1. Για να ανοίξετε το εγχειρίδιο οδηγιών χρήσης, επιλέξτε Help:View user manual ή πιέστε Ctrl + F1. Δημιουργία και ρύθμιση παραμέτρων ενός πειράματος Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Επιλέξτε τύπο πειράματος και κάντε κλικ στο Create (Δημιουργία). Στο παρόν παράδειγμα, Western with total protein normalization. Αποτέλεσμα: Η κύρια οθόνη του λογισμικού ανοίγει εμφανίζοντας το βήμα ροής εργασιών EXPERIMENT & SAMPLES (Πείραμα & Δείγματα). Για πληροφορίες επισκόπησης σχετικά με την κύρια οθόνη, βλ. Ενότητα 3.9 Επισκόπηση λογισμικού, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

135 5 Εκτέλεση πειράματος 5.3 Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Βήμα 2 3 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Επιλέξτε τον αριθμό καρτών γέλης για το πείραμα. Επιλέξτε τον κατάλληλο τύπο κάρτας γέλης. Για πληροφορίες σχετικά με τα διαστήματα διαχωρισμού πρωτεϊνών, βλ. Ευκρίνεια διαχωρισμού πρωτεϊνών, στη σελίδα 77. Αποτέλεσμα: Ενεργοποιείται ο πίνακας Gel card A (Κάρτας γέλης Α) και οι επιλογές στην περιοχή Antibodies for Membrane A (Αντισώματα για τη μεμβράνη Α). Καταχωρίστε τα στοιχεία του δείγματος και σχετικά σχόλια στον πίνακα Gel card A (Κάρτα γέλης Α) (προαιρετικά). Βλ. ενότητα Ενότητα Amersham WB molecular weight markers, στη σελίδα 74 για πληροφορίες σχετικά με τους δείκτες μοριακού βάρους και για αυτόματο υπολογισμό της καμπύλης βαθμονόμησης μοριακού βάρους. Συμβουλή: Ο πίνακας δειγμάτων δεν είναι κλειδωμένος κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης. Κατά συνέπεια, εάν υπάρχει χρονική πίεση, μπορείτε να συμπληρώσετε τον εν λόγω πίνακα μετά την έναρξη της ηλεκτροφόρησης. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 135

136 5 Εκτέλεση πειράματος 5.3 Ρύθμιση των παραμέτρων του πειράματος στο λογισμικό Βήμα 4 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Καταχώριση ονόματος/περιγραφή της διαδικασίας Primary ab (against target) (προαιρετικά) και επιλέξτε την κατάλληλη διαδικασία Labeled secondary ab από την καρτέλα Gel card A (κάρτα γέλης Α). Στον παρόν πρωτόκολλο, χρησιμοποιήθηκε Cy5 για προσήμανση. Επιλέξτε δευτεροταγές αντίσωμα συζευγμένο με Cy3. Επαναλάβετε τα βήματα 3-4 για την κάρτα γέλης Β, εφόσον περιλαμβάνεται στο πείραμα. Συμβουλή: Μπορείτε να εκτυπώσετε το πρωτόκολλο και να ανατρέχετε σε αυτό κατά την παρασκευή και προσήμανση των δειγμάτων. Για να εκτυπώσετε το πρωτόκολλο, κάντε κλικ στο εικονίδιο δεξιά των καρτελών κάρτας γέλης ή πιέστε Ctrl + P. 136 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

137 5 Εκτέλεση πειράματος 5.4 Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων 5.4 Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων Εισαγωγή Απαιτείται η προσήμανση των δειγμάτων για ανίχνευση κατά την εκτέλεση πειραμάτων ηλεκτροφόρησης. Προσήμανση απαιτείται επίσης σε πειράματα Western κατά την ανίχνευση της ολικής πρωτεΐνης σε μεμβράνη. Η ενότητα αυτή περιγράφει τα εξής: προϋποθέσεις για προσήμανση απαιτούμενα υλικά για προσήμανση προετοιμασία πριν από την έναρξη της προσήμανσης σήμανση δειγμάτων (πρωτόκολλο προσήμανσης) Σε αυτό το παράδειγμα, έχει πραγματοποιηθεί προσήμανση των δειγμάτων λύσης κυττάρων/ιστών που θα χρησιμοποιηθούν σε ένα πείραμα Western with total protein normalization. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με την προσήμανση, βλ. Amersham WB system User Manual. Προφυλάξεις ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κατά τις εργασίες προσήμανσης δειγμάτων πρωτεϊνών: Χρησιμοποιείτε πάντα προστατευτικά ενδύματα, γάντια και γυαλιά. Διαβάζετε το δελτίο δεδομένων ασφαλείας (SDS/MSDS) προτού προβείτε σε προσήμανση των δειγμάτων. ΠΡΟΣΟΧΗ Αφού ολοκληρωθεί η προσήμανση πρωτεϊνών σε δείγματα, ενδέχεται να εκλυθεί μια έντονη οσμή η οποία οφείλεται σε ίχνη διμεθυλικού σουλφιδίου (DMS) και διμεθυλικού σουλφοξειδίου (DMSO). Ενδέχεται να απαιτείται σύστημα τοπικού εξαερισμού. Για ασφαλή λειτουργία, βεβαιωθείτε ότι ακολουθείτε τους τοπικούς κανονισμούς και οδηγίες. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 137

138 5 Εκτέλεση πειράματος 5.4 Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων Σημείωση: Για την απόκτηση σημάνσεων με συγκρίσιμη αποδοτικότητα, σημαντικές παράμετροι, όπως το ph, ο όγκος αντίδρασης, η θερμοκρασία και τα ρυθμιστικά άλατα πρέπει να παραμένουν αμετάβλητοι. Η αποδοτικότητα της σήμανσης ποικίλλει από πρωτεΐνη σε πρωτεΐνη. Προϋποθέσεις για προσήμανση δειγμάτων με χρήση του πρωτοκόλλου προσήμανσης Western Συμβατικά ρυθμιστικά διαλύματα λύσης Τα κοινά ρυθμιστικά διαλύματα λύσης με βάση τo τρι(υδροξυμεθυλ) αμινομεθάνιο, ph 7 έως 9 και διάφορα απορρυπαντικά και άλατα είναι συμβατά με την προσήμανση δειγμάτων κυττάρων/ιστού, για παράδειγμα: Ρυθμιστικό διάλυμα εξαγωγής πρωτεϊνών θηλαστικών της GE Ρυθμιστικό διάλυμα RIPA ph δείγματος Το ph του δείγματος πρέπει να κυμαίνεται μεταξύ 7 και 9. Η επίτευξη βέλτιστου ph για λύματα κυττάρων και εκχυλίσματα ιστών δεν είναι θεμελιώδους σημασίας, αφού δεν απαιτείται υψηλή ευαισθησία για το σήμα ολικής πρωτεΐνης. Το σήμα ολικής πρωτεΐνης σε πείραμα Western με κανονικοποίηση ολικής πρωτεΐνης θα πρέπει να είναι ανάλογο της ποσότητας πρωτεϊνών (και να μην εξαρτάται από υψηλή ευαισθησία). Απαιτούμενα διαλύματα και υλικά Τα ακόλουθα διαλύματα και υλικά είναι απαραίτητα για την προσήμανση των πρωτεϊνών: Αναλώσιμα προσήμανσης: αντιδραστήριο χρωστικής Cy5, ρυθμιστικό διάλυμα σήμανσης, διάλυμα φόρτωσης 1 M DTT (διθειοθρεϊτόλη) διάλυμα παρακαταθήκης (DTT και υπερκάθαρο νερό) αν πρόκειται να εκτελεστεί SDS-PAGE Υπερκάθαρο νερό για αραίωση του αντιδραστηρίου χρωστικής Cy5 Αρχικό ρυθμιστικό διάλυμα λύσης για προσαρμογή του όγκου αντίδρασης (μόνο για πειράματα Western) 138 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

139 5 Εκτέλεση πειράματος 5.4 Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων μικροφυγοκεντρικοί σωλήνες 0,5 ml Μπλοκ θέρμανσης Σωλήνας περιδίνισης Φυγόκεντρο Προετοιμασία πριν από την έναρξη της προσήμανσης Βήμα 1 Ενέργεια Βγάλτε από την κατάψυξη ένα από καθένα από τα ακόλουθα φιαλίδια (με επαρκή ποσότητα για χρήση δύο καρτών γέλης): - 1 φιαλίδιο Amersham WB Cy5-1 φιαλίδιο Amersham WB loading buffer Αποψύξτε πλήρως τα εξαρτήματα προσήμανσης. Βεβαιωθείτε ότι το φιαλίδιο Cy5 έχει περιέλθει σε θερμοκρασία δωματίου προτού το ανοίξετε για να αποφεύγεται τυχόν συμπύκνωση υγρασίας Περιστρέψτε το υγρό αντιδραστήριο χρωστικής Cy5 με φυγοκέντρηση. Ορίστε τη θερμοκρασία του μπλοκ θέρμανσης στους 95ºC. Για εκτέλεση SDS-PAGE, προσθέστε μειωτικό παράγοντα στο διάλυμα φόρτωσης: Προσθέστε 29 μl διαλύματος παρακαταθήκης 1 M DTT σε 0,7 ml (ένα φιαλίδιο) διαλύματος φόρτωσης, και στροβιλίστε για να αναμειχθεί το διάλυμα. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 139

140 5 Εκτέλεση πειράματος 5.4 Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων Εκτέλεση προσήμανσης δειγμάτων (πρωτόκολλο προσήμανσης Western) Συμβουλή: Το παρακάτω πρωτόκολλο μπορεί να κλιμακωθεί. Βήμα 1 Ενέργεια Εκτέλεση της αντίδρασης σήμανσης σε μικροφυγοκεντρικό σωλήνα 0,5 ml: Προσθέστε δείγμα λύματος κυττάρων ή εκχυλίσματος ιστού 2-19 μl (μέγιστη ολική πρωτεΐνη 40 μg), και πληρώστε με 19 μl του αρχικού ρυθμιστικού διαλύματος λύσης του δείγματος. Προσθέστε 1 μl αντιδραστηρίου χρωστικής Cy5 αραιωμένο με υπερκάθαρο νερό σε αναλογία 1:10. Σημείωση: Η αραιωμένη χρωστική πρέπει προετοιμαστεί και να χρησιμοποιηθεί εντός 30 λεπτών. Δεν δύναται να καταψυχθεί και να επαναχρησιμοποιηθεί. Στροβιλίστε σύντομα για να αναμειχθεί καλά το διάλυμα. 2 Αφήστε να επωαστεί σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείται ο ίδιος χρόνος σήμανσης και όγκος για όλα τα δείγματα. Για δείγματα που είναι ευαίσθητα σε θερμοκρασία, η επώαση θα πρέπει να πραγματοποιηθεί σε πάγο για 30 λεπτά Προσθέστε 20 μl διαλύματος φόρτωσης. Ζεστάνετε τα δείγματα στους 95ºC για 3 λεπτά. Περιστρέψτε τα δείγματα. Ο συνολικός όγκος του δείγματος είναι 40 μl ανά αντίδραση (ο συνιστώμενος όγκος φόρτωσης είναι 20 μl). Συνεχίστε με τη φόρτωση των δειγμάτων, όπως περιγράφεται στην ενότητα Προετοιμασία πριν από την έναρξη της ηλεκτροφόρησης, στη σελίδα 144. Εάν η ανάλυση της ηλεκτροφόρησης πρόκειται να εκτελεστεί σε μεταγενέστερο στάδιο, αποθηκεύστε τα προσημασμένα δείγματα στους -20 C. 140 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

141 5 Εκτέλεση πειράματος 5.5 Προετοιμασία του Amersham WB molecular weight markers 5.5 Προετοιμασία του Amersham WB molecular weight markers Εισαγωγή Βγάλτε από την κατάψυξη ένα φιαλίδιο Amersham WB molecular weight markers (δείκτες μοριακού βάρους) (με επαρκή ποσότητα για τη χρήση δύο καρτών γέλης) και αποψύξτε το εντελώς. Πειράματα Western Στα πειράματα Western, το Amersham WB molecular weight markers πρέπει να αραιωθεί σε διάλυμα φόρτωσης με αναλογία 1:20 πριν από την τοποθέτηση στην κάρτα γέλης. Πριν από τη χρήση, το παρεχόμενο διάλυμα φόρτωσης πρέπει να αραιωθεί με υπερκάθαρο νερό και να περιέχει προσθήκη DTT. Βήμα Ενέργεια Προσθέστε 29 μl διαλύματος παρακαταθήκης 1 M DTT σε 0,7 ml (ένα φιαλίδιο) διαλύματος φόρτωσης. Στροβιλίστε για να αναμειχθεί. Αραιώστε το διάλυμα φόρτωσης που περιέχει DTT με ισοδύναμο όγκο υπερκάθαρου νερού. Στροβιλίστε για να αναμειχθεί. Αραιώστε τους δείκτες μοριακού βάρους με το παρασκευασμένο διάλυμα φόρτωσης σε αναλογία 1:20. Σημείωση: Οι δείκτες μοριακού βάρους μπορούν να αραιωθούν περαιτέρω σε παρασκευασμένο διάλυμα φόρτωσης ώστε να αντιστοιχίζονται στα δείγματα με αδύναμα σήματα. Ωστόσο, πρέπει να ενεργοποιηθεί η επιλογή Stop electrophoresis on time. Πειράματα ηλεκτροφόρησης Στα πειράματα ηλεκτροφόρησης συνήθως δεν υπάρχει η ανάγκη για αραίωση του Amersham WB molecular weight markers. Εάν χρειαστεί, αραιώστε τους δείκτες μοριακούς βάρους με διάλυμα φόρτωσης που περιέχει DTT (αραιωμένο με ισοδύναμο όγκο υπερκάθαρου νερού). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 141

142 5 Εκτέλεση πειράματος 5.5 Προετοιμασία του Amersham WB molecular weight markers Αντίγραφα Συνιστάται να περιλαμβάνονται δύο λωρίδες δεικτών κατά την εκτέλεση του πειράματος για απόκτηση των βέλτιστων δυνατών αποτελεσμάτων στην αυτόματη βαθμονόμηση του μοριακού βάρους των δειγμάτων πρωτεϊνών στο βήμα αξιολόγησης. 142 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

143 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο διενέργειας ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών με οδηγίες μεταξύ άλλων για: προετοιμασία πριν από την έναρξη της ηλεκτροφόρησης διενέργεια καθαρισμού των υποδοχών δειγμάτων έναρξη και παρακολούθηση της ηλεκτροφόρησης και σάρωση της κάρτας γέλης διαδικασίες μετά την ηλεκτροφόρηση και σάρωση της κάρτας γέλης Στην παρούσα ενότητα Η ενότητα αυτή περιλαμβάνει τις παρακάτω υποενότητες: Ενότητα Πριν από την ηλεκτροφόρηση Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Διαδικασίες μετά την ηλεκτροφόρηση και σάρωση της κάρτας γέλης Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 143

144 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Πριν από την ηλεκτροφόρηση Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο φόρτωσης ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος, καρτών γέλης, παρασκευασμένων Amersham WB molecular weight markers και δειγμάτων για την εκτέλεση της ηλεκτροφόρησης. Προετοιμασία πριν από την έναρξη της ηλεκτροφόρησης ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εκρηγνυόμενο γυαλί. Μην θέτετε σε λειτουργία το σύστημα εάν το γυαλί στο καπάκι σφράγισης της μονάδας Elpho & scan είναι γρατζουνισμένο ή σπασμένο. Απενεργοποιήστε το όργανο, αποσυνδέστε το καλώδιο τροφοδοσίας και επικοινωνήστε με έναν εξουσιοδοτημένο μηχανικό συντήρησης. ΠΡΟΣΟΧΗ Κινούμενα μέρη. Απαιτείται προσοχή όταν ανοίγετε/κλείνετε το φορτωτή ώστε να μην παγιδεύσετε τα δάκτυλα ή το ρουχισμό σας σε φορτωτή που βρίσκεται εν κινήσει. Μην τοποθετείτε ποτέ φιάλες ή φιαλίδια στην πρόσθια πλευρά της μονάδας Elpho & scan. Ενδέχεται να πέσουν όταν ανοίξει ο φορτωτής. 144 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

145 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Βήμα 1 2 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Τοποθετήστε τους συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος πιέζοντας δύο ταινίες ρυθμιστικού διαλύματος από τη συσκευασία τους απευθείας στους συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος. Σημείωση: Για την αποφυγή της επιμόλυνσης των ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος, μην ακουμπάτε τις ταινίες ή βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείτε καθαρά γάντια. Πατήστε το πλήκτρο εξαγωγής στη μονάδα Elpho & scan. Αποτέλεσμα: Εξέρχεται ο φορτωτής. 3 Ανοίξτε το καπάκι σφράγισης χρησιμοποιώντας το μάνδαλο. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 145

146 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Βήμα 4 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Τοποθετήστε τους συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος στις εσοχές της πλακέτας κάρτας του φορτωτή. 5 Αφαιρέστε μια κάρτα γέλης από τη συσκευασία της (με την πρόσθια πλευρά προς τα επάνω). Προαιρετικά: Τοποθετήστε το δρομέα στο πεδίο ID (αναγνωριστικό) στο λογισμικού, στο βήμα ροής εργασιών ELECTROPHORESIS & GELSCANNING (Ηλεκτροφόρηση και σάρωση γέλης) και σαρώστε την ετικέτα μητρώου δεδομένων της κάρτας γέλης (η οποία υποδεικνύεται με έναν πορτοκαλί κύκλο) με τη χρήση του αναγνώστη ετικετών μητρώου. Εναλλακτικά, πληκτρολογήστε το πενταψήφιο αναγνωριστικό (π.χ ). 146 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

147 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Βήμα 6 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Γυρίστε την κάρτα γέλης ανάποδα (οι λαβές μπλε γέλης χωρίς επισήμανση να βλέπουν προς τα πάνω). Πιάστε το άκρο της προστατευτικής μεμβράνης στο κάτω μέρος της κάρτας γέλης και αφαιρέστε το προσεκτικά. Πιάστε το άκρο της προστατευτικής μεμβράνης στο πάνω μέρος της κάρτας γέλης και αφαιρέστε το προσεκτικά. Με την αφαίρεση των προστατευτικών μεμβρανών και την τοποθέτηση της κάρτας γέλης στην πλακέτα κάρτας, έρχονται σε επαφή η γέλη και το ρυθμιστικό διάλυμα. Προσέξτε να μην ακουμπήσετε τις εκτεθειμένες επιφάνειες γέλης. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 147

148 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Βήμα 7 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Γυρίστε την κάρτα γέλης ανάποδα (δηλ. το κάλυμμα της υποδοχής δείγματος να βλέπει προς τα πάνω). Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι η πλακέτα κάρτας είναι εντελώς στεγνή. Τοποθετήστε την κάρτα γέλης στην πλακέτα κάρτας ευθυγραμμίζοντας τις οπές του πλαισίου της κάρτας με τους πείρους καθοδήγησης που έχουν επισημανθεί με πορτοκαλί κύκλους. Σημείωση: Προσέξτε να μην γρατζουνίσετε την πλακέτα κάρτας με αιχμηρά αντικείμενα. 148 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

149 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Βήμα 8 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Κλείστε το καπάκι σφράγισης. Πιάστε το άκρο του καλύμματος υποδοχής δείγματος και αφαιρέστε το προσεκτικά. Συμβουλή: Αλλάζετε το κράτημα ενώ αφαιρείτε το κάλυμμα υποδοχής δείγματος για να είστε σε θέση να το κρατάτε όσο πιο κοντά στις υποδοχές γίνεται. Σημείωση: Εάν το κάλυμμα υποδοχής δείγματος σπάσει: Αφήστε την κάρτα γέλης στο φορτωτή με το καπάκι σφράγισης κλειστό. Χρησιμοποιήστε π.χ. ένα τσιμπιδάκι για να αφαιρέσετε τυχόν υπολείμματα από το κάλυμμα της υποδοχής. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 149

150 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Πριν από την ηλεκτροφόρηση Βήμα 9 10 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Φορτώστε τα δείγματα, το διάλυμα φόρτωσης και/ή το δείκτες μοριακού βάρους στις υποδοχές (κατά κανόνα 20 μl/υποδοχή) όπως ορίζεται στην οθόνη EXPERIMENT & SAMPLES (Πείραμα & Δείγματα) του λογισμικού. Σημείωση: Ποτέ μην ανοίγετε το καπάκι μετά τη φόρτωση των δειγμάτων. Σημείωση: Σε όλες τις υποδοχές πρέπει να φορτωθεί ένα δείγμα, ρυθμιστικό διάλυμα φόρτωσης (αραιωμένο με ισοδύναμο όγκο υπερκάθαρου νερού) ή δείκτες μοριακού βάρους. Συνιστάται να τοποθετείτε διάλυμα φόρτωσης στις υποδοχές 1 και 16, και δείκτες μοριακού βάρους στις υποδοχές 2 και 15. Όταν φορτωθούν όλα τα δείγματα, πατήστε το πλήκτρο εξαγωγής. Αποτέλεσμα: Ο φορτωτής έχει εισαχθεί στη μονάδα Elpho & scan. 150 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

151 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο έναρξης και παρακολούθησης μιας ηλεκτροφόρησης. Έναρξη και παρακολούθηση ηλεκτροφόρησης και σάρωση γέλης Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Από το βήμα ροής εργασιών ELECTROPHORESIS & GEL SCANNING, χρησιμοποιήστε τις προεπιλεγμένες ρυθμίσεις για ηλεκτροφόρηση και σάρωση των καρτών γέλης, όπως φαίνεται στο στιγμιότυπο οθόνης. Προαιρετικά: Επιλέξτε Pause for sample well cleanup after 5 minutes, αν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί το χάρτινο χτένι. Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. Ενότητα 3.6 Εξαρτήματα και αναλώσιμα για ηλεκτροφόρηση, στη σελίδα 73. Ο χρόνος έως την παύση υπολογίζεται από τις ρυθμίσεις τάσης και ρεύματος. Ο προεπιλεγμένος χρόνος είναι τα 5 λεπτά. Προαιρετικά: Εισαγάγετε ένα σημείωμα σχετικά με τις κάρτες γέλης στα πεδία Note (Σημειώσεις). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 151

152 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Βήμα 2 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Κάντε κλικ στο Start (Έναρξη) στην περιοχή Electrophoresis (Ηλεκτροφόρηση). Αποτέλεσμα: Ξεκινά η εκτέλεση της ηλεκτροφόρησης. Η πρόοδος της εκτέλεσης εμφανίζεται στις καμπύλες που δείχνουν το ρεύμα, την τάση, την επίδραση ή τη θερμοκρασία. Εμφανίζεται επίσης ο χρόνος που έχει παρέλθει από την έναρξη της ηλεκτροφόρησης. Συμβουλή: Κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης, υπάρχει χρόνος για την προετοιμασία των ρυθμιστικών διαλυμάτων και των διαλυμάτων για τα βήματα Western. Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς, στη σελίδα 157 και Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

153 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης Βήμα 3 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Εάν έχει επιλεγεί το Pause for sample well cleanup after 5 minutes (Παύση για καθαρισμό υποδοχών δειγμάτων μετά από 5 λεπτά) ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες. 1 Ανοίξτε το φορτωτή. 2 Τοποθετήστε το χτένι στις υποδοχές δειγμάτων και κρατήστε το εκεί για περίπου 5 δευτερόλεπτα. 3 Κλείστε το φορτωτή και συνεχίστε την εκτέλεση. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 153

154 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Διαδικασίες μετά την ηλεκτροφόρηση και σάρωση της κάρτας γέλης Διαδικασίες μετά την ηλεκτροφόρηση και σάρωση της κάρτας γέλης Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει πώς να αφαιρείτε την κάρτα γέλης και να καθαρίζετε τη μονάδα Elpho & scan μετά την ηλεκτροφόρηση. Αφαίρεση καρτών γέλης ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μετά την ηλεκτροφόρηση ή μετά τη μεταφορά (όταν το σάντουιτς μεταφοράς έχει ανοίξει και η κάρτα PVDF έχει τοποθετηθεί στο διαμέρισμα ανίχνευσης), απορρίψτε τη γέλη με ασφαλή τρόπο. Διαβάστε το δελτίο δεδομένων ασφαλείας (SDS/MSDS) της κάρτας γέλης για οδηγίες ασφαλείας σχετικά με τη γέλη και την απόρριψή της. Σημείωση: Η εκτέλεση της μεταφοράς πρέπει να εκκινείται εντός μίας ώρας από την ολοκλήρωση της ηλεκτροφόρησης. Βήμα Ενέργεια Όταν η ηλεκτροφόρηση ολοκληρωθεί και ανάψει η λευκή λυχνία ένδειξης ετοιμότητας στον πίνακα του οργάνου, πιέστε το πλήκτρο εξαγωγής στη μονάδα Elpho & scan. Αποτέλεσμα: Εξέρχεται ο φορτωτής. Ανοίξτε το καπάκι σφράγισης χρησιμοποιώντας το μάνδαλο. Αφαιρέστε την κάρτα γέλης και τοποθετήστε την ανάποδα στον πάγκο. Συνεχίστε με την ενότητα Καθαρισμός της μονάδας Elpho & scan, στη σελίδα 155. Σημείωση: Συνιστάται να καθαρίζετε τη μονάδα Elpho & scan μετά από κάθε χρήση. Ωστόσο, εάν ο χρόνος δεν σας το επιτρέπει, μπορείτε να προβείτε σε μεταφορά και να καθαρίσετε τη μονάδα σε μεταγενέστερο στάδιο του πειράματος. 154 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

155 5 Εκτέλεση πειράματος 5.6 Εκτέλεση ηλεκτροφόρησης πρωτεϊνών Διαδικασίες μετά την ηλεκτροφόρηση και σάρωση της κάρτας γέλης Καθαρισμός της μονάδας Elpho & scan Βήμα Ενέργεια Αφαιρέστε τους συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος από το φορτωτή και απορρίψτε τις ταινίες. Σκουπίστε τυχόν υγρό από την πλακέτα κάρτας χρησιμοποιώντας ένα πανί που δεν αφήνει χνούδι, εμποτισμένο αν χρειάζεται με υγρό με 50% περιεκτικότητα σε αιθανόλη. Σκουπίστε τυχόν υγρό και ακαθαρσίες από το προστατευτικό τζάμι χρησιμοποιώντας ένα πανί που δεν αφήνει χνούδι, εμποτισμένο αν χρειάζεται με υγρό με 50% περιεκτικότητα σε αιθανόλη. Σημείωση: Είναι σημαντικό να διατηρείτε το προστατευτικό τζάμι καθαρό προκειμένου να λάβατε καλό αποτέλεσμα κατά τη σάρωση των καρτών γέλης και PVDF. 4 5 Κλείστε το καπάκι σφράγισης και πατήστε το πλήκτρο εξαγωγής στη μονάδα Elpho & scan. Αποτέλεσμα: Εισάγεται ο φορτωτής στη μονάδα. Καθαρίστε τους συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος χρησιμοποιώντας τρεχούμενο νερό για να αφαιρέσετε τυχόν άλατα και υπολείμματα ρυθμιστικού διαλύματος. Τοποθετήστε τους συγκρατητήρες ταινιών ρυθμιστικού διαλύματος ανάποδα να στεγνώσουν καλά. Συνέχεια στη μεταφορά Προβείτε σε ένα από τα ακόλουθα βήματα: Εάν τα διαλύματα μεταφοράς έχουν παρασκευαστεί και συνδεθεί με τη μονάδα Western, συνεχίστε ακολουθώντας τις οδηγίες στην ενότητα Ενότητα Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς, στη σελίδα 159. διαφορετικά Συνεχίστε ακολουθώντας τις οδηγίες στην ενότητα Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς, στη σελίδα 157. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 155

156 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο προετοιμασίας του σάντουιτς μεταφοράς, τον τρόπο εκκίνησης και παρακολούθησης της εκτέλεσης μεταφοράς, καθώς και τις διαδικασίες που πρόκειται να εκτελεστούν μετά τη μεταφορά. Στην παρούσα ενότητα Η ενότητα αυτή περιλαμβάνει τις παρακάτω υποενότητες: Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Διαδικασίες μετά τη μεταφορά Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

157 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο προετοιμασίας και σύνδεσης ρυθμιστικών και άλλων διαλυμάτων για τη μεταφορά. Τα διαλύματα μεταφοράς μπορούν να προετοιμαστούν κατά τη διάρκεια της εκτέλεσης της ηλεκτροφόρησης, αλλά πρέπει να συνδεθούν πριν από την έναρξη της μεταφοράς. Συνταγές για διαλύματα μεταφοράς ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εάν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί μεθανόλη ή άλλα χημικά προϊόντα για τα οποία απαιτείται αερισμός, τοποθετήστε το Amersham WB analyzer σε χώρο με σύστημα εξαερισμού. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Μην χρησιμοποιείτε ρυθμιστικά διαλύματα μεταφοράς με πάνω από 40% περιεκτικότητα σε αιθανόλη ή μεθανόλη. Συνιστάται να χρησιμοποιείτε ρυθμιστικά διαλύματα μεταφοράς με μόλις 20% περιεκτικότητα σε αιθανόλη. Διάλυμα Ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς Συνταγή 25 mm τρι(υδροξυμεθυλ) αμινομεθάνιο, 192 mm γλυκίνη, 20% αιθανόλη ph 8,3 Μπορείτε να χρησιμοποιείτε μεθανόλη αντί αιθανόλης στο ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς. Σημείωση: Ορισμένες αιθανόλες διαθέτουν ιδιότητες αυτοφθορισμού οι οποίες δημιουργούν ένα υπόβαθρο με υψηλή περιεκτικότητα σε μεμβράνες. Βεβαιωθείτε ότι η αιθανόλη που χρησιμοποιείται κατά τη διάρκεια της μεταφοράς δεν έχει ιδιότητες αυτοφθορισμού. Ποσότητα/εκτέλεση ml Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 157

158 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων μεταφοράς Διάλυμα Υπερκάθαρο νερό (χρησιμοποιείται για καθαρισμό) Συνταγή Υπερκάθαρο νερό Ποσότητα/εκτέλεση ml Συνδέστε το σωλήνα με το ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και το υπερκάθαρο νερό στη θήκη φιαλών ΠΡΟΣΟΧΗ Για να αποφύγετε το πιτσίλισμα επικίνδυνων υγρών, χρησιμοποιείτε βαρέα φίλτρα εισαγωγής συνδεδεμένα με σωλήνες στις φιάλες. Για περιγραφές των φίλτρων εισαγωγής και των συγκρατητήρων σωλήνα, βλ. Ενότητα 3.8 Άλλα εξαρτήματα, στη σελίδα93. Για τον τρόπο προσάρτησης των εξαρτημάτων, βλ. ενότητα Τοποθέτηση συγκρατητήρων σωλήνα, στη σελίδα 113 Πριν από την έναρξη της μεταφοράς, συνδέστε τους σωλήνες με το ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και το υπερκάθαρο νερό (που χρησιμοποιείται για καθαρισμό της δεξαμενής μεταφοράς) ως εξής: Βήμα 1 2 Ενέργεια Από τον αριστερό κυλινδρικό πυλώνα, τοποθετήστε το σωλήνα με σήμανση T Buffer σε φιάλη ml με ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς. Τοποθετήστε το σωλήνα με σήμανση T Water σε φιάλη ml με υπερκάθαρο νερό. 158 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

159 5.7.2 Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Απαιτούμενα υλικά Κατά την προετοιμασία ενός σάντουιτς μεταφοράς απαιτούνται τα ακόλουθα αναλώσιμα και εξαρτήματα: 1 συγκρατητήρας μεταφοράς 1 χρησιμοποιημένη κάρτα γέλης 1 κάρτα PVDF 2 σπόγγοι 2 χαρτιά μεταφοράς 1 δοχείο με ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς για εμποτισμό των χαρτιών μεταφοράς 1 δοχείο με τουλάχιστον 96% περιεκτικότητα σε αιθανόλη για προεμποτισμό της κάρτας PVDF 1 δοχείο με ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς για εξισορρόπηση της κάρτας PVDF Σημείωση: Ορισμένες αιθανόλες διαθέτουν ιδιότητες αυτοφθορισμού οι οποίες δημιουργούν ένα υπόβαθρο με υψηλή περιεκτικότητα σε μεμβράνες. Βεβαιωθείτε ότι η αιθανόλη που χρησιμοποιείται κατά τη διάρκεια της μεταφοράς δεν έχει ιδιότητες αυτοφθορισμού. Προφυλάξεις ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Χρησιμοποιείτε πάντα γάντια, προστατευτικά ενδύματα και γυαλιά κατά τον χειρισμό καρτών γέλης, καρτών PVDF και λοιπών αναλώσιμων που παρέχονται με το Amersham WB system. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 159

160 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Επισκόπηση εικόνας συγκροτήματος σάντουιτς μεταφοράς Η παρακάτω εικόνα παρουσιάζει μια επισκόπηση του συγκροτήματος σάντουιτς μεταφοράς. Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει εν συντομία τη διεργασία προετοιμασίας ενός σάντουιτς μεταφοράς: Στάδιο Περιγραφή Η κάρτα PVDF προεμποτίζεται με αιθανόλη και, στη συνέχεια, υποβάλλεται σε εξισορρόπηση σε ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς. Ένας σπόγγος τοποθετείται στον πυθμένα του συγκρατητήρα μεταφοράς (μαύρο καπάκι). Το χαρτί μεταφοράς προεμποτίζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και, στη συνέχεια, τοποθετείται σε συγκρατητήρα μεταφοράς. Το πλαίσιο γέλης, το οποίο περιλαμβάνει τη γέλη με διαχωρισμένες πρωτεΐνες αφαιρείται από το στήριγμα του πλαισίου γέλης και τοποθετείται στο συγκρατητήρα μεταφοράς. Η κάρτα PVDF τοποθετείται στο συγκρατητήρα μεταφοράς. Το δεύτερο χαρτί μεταφοράς προεμποτίζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και, στη συνέχεια, τοποθετείται σε συγκρατητήρα μεταφοράς. Οι αεροκυψέλες αφαιρούνται με τη χρήση ενσωματωμένου κυλίνδρου στο συγκρατητήρα μεταφοράς. 160 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

161 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Στάδιο 8 9 Περιγραφή Ένας δεύτερος σπόγγος τοποθετείται στο χαρτί μεταφοράς. Ο συγκρατητήρας μεταφοράς κλείνει. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 161

162 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Προετοιμασία της κάρτας PVDF Οι παρακάτω οδηγίες περιγράφουν τον τρόπο προετοιμασίας για την κατασκευής ενός σάντουιτς μεταφοράς: Βήμα 1 Ενέργεια Αφαιρέστε μια μοναδική συσκευασίας κάρτας PVDF από το κιβώτιο καρτών PVDF. Σημείωση: Φυλάξτε τη συσκευασία με το αναγνωριστικό της εκάστοτε κάρτας PVDF, μεταξύ άλλων για μεταγενέστερη αποθήκευσή της. 2 Αφαιρέστε την κάρτα PVDF από τη συσκευασία και αφαιρέστε το πρώτο μπλε προστατευτικό χαρτί. 162 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

163 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 3 Ενέργεια Προαιρετικά: Πριν από την αφαίρεση του δεύτερου μπλε προστατευτικού χαρτιού, καταχωρίστε ένα σχόλιο (με μολύβι) στην ενδεδειγμένη επιφάνεια της κάρτας PVDF. Συμβουλή: Η επιφάνεια αυτή μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την καταχώριση της θέσης (A ή B) στην οποία χρησιμοποιήθηκε η κάρτα PVDF. Επιλέξτε το βήμα ροής εργασιών TRANSFER (Μεταφορά) στο λογισμικό. Τοποθετήστε το δρομέα στο κατάλληλο πεδίο Note (Σημειώσεις) και πληκτρολογήστε το κείμενο. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 163

164 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 4 Ενέργεια Αφαιρέστε το δεύτερο μπλε προστατευτικό χαρτί. Σημείωση: Μην ακουμπάτε την περιοχή αποτύπωσης (έχει επισημανθεί με κόκκινο τετράγωνο στην εικόνα) με τα δάκτυλά σας. Κρατήστε την κάρτα PVDF από τις λαβές. 164 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

165 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 5 Ενέργεια Προαιρετικά: Καταχωρίστε τα στοιχεία της κάρτας PVDF στο λογισμικό. Επιλέξτε το βήμα ροής εργασιών TRANSFER (Μεταφορά) στο λογισμικό. Στην περιοχή Gel Cards & Membranes (Κάρτες γέλης & Μεμβράνες) τοποθετήστε το δρομέα στο κατάλληλο πεδίο ID (Αναγνωριστικό). Πληκτρολογήστε τον αριθμό αναγνώρισης χειροκίνητα ή σαρώστε την ετικέτα μητρώου δεδομένων που βρίσκεται στην επισήμανση της μοναδικής συσκευασίας της κάρτας PVDF. Για να καταχωρίσετε μια σημείωση σχετικά με τη μεμβράνη, τοποθετήστε το δρομέα στο πεδίο Note (Σημειώσεις) και πληκτρολογήστε τη σημείωση. Συμβουλή: Καταχωρίστε τον αριθμό παρτίδας. Ο εν λόγω αριθμός δεν περιλαμβάνεται στο μητρώο δεδομένων, αλλά αναγράφεται στην επισήμανση του κιβωτίου των καρτών PVDF. 6 7 Κρατήστε την κάρτα PVDF από τις λαβές και προεμποτίστε την σε αιθανόλη αφήνοντάς την σε δίσκο με αιθανόλη για περίπου 20 δευτερόλεπτα. Μετακινήστε την κάρτα PVDF στο δοχείο με το ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς κάρτας PVDF και αφήστε εκεί για εξισορρόπηση για τουλάχιστον 5 λέπτα. Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι η κάρτα PVDF παραμένει καλυμμένη με ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς καθ όλη τη διάρκεια αυτού του διαστήματος. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 165

166 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Έναρξη κατασκευής του σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 1 2 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Τοποθετήστε το συγκρατητήρα μεταφοράς με τη μαύρη πλευρά προς τα επάνω. Ανοίξτε το συγκρατητήρα μεταφοράς πιέζοντας τους μανδάλους και ανασηκώνοντας το λευκό καπάκι. Πιέστε το καπάκι έως ότου οι πείροι με σφαιροειδή κεφαλή φτάσουν τις δύο εσοχές (που επισημαίνονται με πορτοκαλί κύκλους στην εικόνα). Αφαιρέστε το λευκό καπάκι ανασηκώνοντάς το από τις δύο εσοχές. 3 Τοποθετήστε τον πρώτο σπόγγο στο μαύρο καπάκι. 4 Προεμποτίστε ένα χαρτί μεταφοράς στο ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και τοποθετήστε το στο σπόγγο που βρίσκεται πάνω στο μαύρο καπάκι (η λαβή του χαρτιού μεταφοράς θα πρέπει να είναι τοποθετημένη μεταξύ των πείρων καθοδήγησης). 166 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

167 Επισκόπηση εικόνας της κάρτας γέλης σε αποσυναρμολόγηση Η παρακάτω εικόνα δείχνει τα μέρη της κάρτας γέλης που πρόκειται να αποσυναρμολογηθούν μετά την εκτέλεση της ηλεκτροφόρησης. 1 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς 2 3 Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει εν συντομία τα μέρη της κάρτας γέλης που πρόκειται να αποσυναρμολογηθούν. Στάδιο Περιγραφή Προστατευτική μεμβράνη. Η μεμβράνη αυτή αφαιρείται πρώτη. Πλαίσιο γέλης Τα άκρα του πλαισίου γέλης αποδεσμεύονται από το στήριγμά του (υποδεικνύεται με τον αριθμό 3 στην εικόνα) και, στη συνέχεια, το πλαίσιο αφαιρείται προσεκτικά. Το στήριγμα του πλαισίου γέλης παραμένει στον πάγκο. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 167

168 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Αποδέσμευση του πλαισίου γέλης από το στήριγμά του και τοποθέτησή του στο συγκρατητήρα μεταφοράς Σημείωση: Μην ακουμπάτε την περιοχή γέλης (επισημαίνεται με κόκκινο σταυρό) κατά την αποδέσμευση του πλαισίου γέλης από το στήριγμά του. Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Κρατήστε σταθερά την κάρτα γέλης. Αφαιρέστε την προστατευτική μεμβράνη κρατώντας το άκρο που επισημαίνεται με πορτοκαλί βέλος και τραβώντας το διαγώνια, όπως δείχνει το βέλος. 168 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

169 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 2 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Τοποθετήστε την κάρτα γέλης στον πάγκο (με την εκτεθειμένη γέλη να βλέπει προς τα επάνω), όπως φαίνεται στην εικόνα. 3 4 Κρατήστε τα άκρα του κάτω πλαισίου της γέλης και τραβήξτε το πλαίσιο από τις δύο κάτω γωνίες στην κατεύθυνση του υποδεικνύουν τα βέλη και έως τη διακεκομμένη γραμμή. Σημείωση: Καθώς μετακινείτε το πλαίσιο γέλης, συνεχίστε να πιέζετε την κάρτα γέλης προς τον πάγκο με τα δάκτυλά σας. Κρατήστε τις άνω γωνίες του πλαισίου γέλης και τραβήξτε το πλαίσιο, έως τη διακεκομμένη γραμμή που φαίνεται στην εικόνα. Βεβαιωθείτε ότι το πλαίσιο γέλης έχει αποδεσμευτεί πλήρως από το παρέμβυσμα από λευκό καουτσούκ (όπως υποδεικνύεται από το άνω πορτοκαλί βέλος). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 169

170 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 5 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Συνεχίστε να αποδεσμεύετε προσεκτικά το πλαίσιο γέλης από τα άκρα της κάρτας γέλης, με κατεύθυνση από επάνω προς τα κάτω, έως ότου αποδεσμεύσετε πλήρως το πλαίσιο γέλης. Σημείωση: Καθώς μετακινείτε το πλαίσιο γέλης, συνεχίστε να πιέζετε την κάρτα γέλης προς τον πάγκο με τα δάκτυλά σας. Σημείωση: Προσέξτε να μην ακουμπήσετε τη γέλη. 6 Πιάστε τις λαβές του πλαισίου γέλης και ανασηκώστε προσεκτικά τη γέλη από το στήριγμα του πλαισίου. 170 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

171 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 7 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Τοποθετήστε το πλαίσιο γέλης στο χαρτί μεταφοράς στερεώνοντας τις οπές καθοδήγησης του πλαισίου γέλης στους πείρους καθοδήγησης και τοποθετώντας το πλαίσιο γέλης σιγά-σιγά στο χαρτί μεταφοράς. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 171

172 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Τοποθετήστε την κάρτα PVDF και ολοκληρώστε την κατασκευή του σάντουιτς μεταφοράς Βήμα Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Πιάστε και τις δύο λαβές της κάρτας PVDF με τα δάκτυλά σας, ή με τη βοήθεια μιας λαβίδας με επίπεδα ρύγχη. Αφαιρέστε την κάρτα από το δίσκο ρυθμιστικού διαλύματος μεταφοράς. Σημείωση: Μην ακουμπάτε την περιοχή αποτύπωσης της κάρτας PVDF (έχει επισημανθεί με κόκκινο τετράγωνο στην εικόνα). Τοποθετήστε την κάρτα PVDF στην κάρτα γέλης στερεώνοντας τις οπές καθοδήγησης της κάρτας PVDF στους πείρους καθοδήγησης και τοποθετώντας την κάρτα PVDF σιγά-σιγά πάνω στη γέλη. Σημείωση: Μην προσαρμόζετε τη θέση της κάρτας PVDF μετά την τοποθέτησή της στην κάρτα γέλης. Προεμποτίστε ένα χαρτί μεταφοράς στο ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και τοποθετήστε το στην κάρτα PVDF (η λαβή του χαρτιού μεταφοράς πρέπει να τοποθετηθεί μεταξύ των πείρων καθοδήγησης). 172 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

173 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Προετοιμασία σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 4 5 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Αφαιρέστε τυχόν αεροκυψέλες ως εξής: Αφαιρέστε το λευκό καπάκι και τοποθετήστε το στις δύο εσοχές (αριστερή εικόνα). Πιάστε τις λαβές του χαρτιού μεταφοράς με το αριστερό σας χέρι και με το δεξί σας, σύρετε τον κύλινδρο στις τροχιές του συγκρατητήρα προς την άλλη πλευρά του συγκρατητήρα μεταφοράς. Τοποθετήστε το δεύτερο σπόγγο στο χαρτί μεταφοράς. 6 Κλείστε το συγκρατητήρα μεταφοράς πιέζοντας το καπάκι έως ότου μπει στη θέση του και ακουστεί ο χαρακτηριστικός ήχος κλικ. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 173

174 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τα εξής: τρόπος φόρτωσης του συγκρατητήρα μεταφοράς στη δεξαμενή μεταφοράς τρόπος έναρξης και παρακολούθησης της μεταφοράς διαδικασίες που πρέπει να εκτελεστούν μετά τη μεταφορά Πριν από τη μεταφορά Πριν από την εκτέλεση της μεταφοράς, βεβαιωθείτε ότι έχει συνδεθεί το ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και το υπερκάθαρο νερό. Για πληροφορίες, βλ. Συνδέστε το σωλήνα με το ρυθμιστικό διάλυμα μεταφοράς και το υπερκάθαρο νερό στη θήκη φιαλών, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

175 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Φόρτωση των σάντουιτς μεταφοράς Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Ανοίξτε το καπάκι της δεξαμενής μεταφοράς. 2 Εισαγάγετε τους συγκρατητήρες μεταφοράς στη δεξαμενή. Βεβαιωθείτε ότι το λευκό βέλος δείχνει προς το βέλος στο όργανο (προς τα εσάς). 3 Κλείστε το καπάκι της δεξαμενής μεταφοράς. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 175

176 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Έναρξη και παρακολούθηση μεταφοράς ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος ηλεκτροπληξίας. Να σταματάτε πάντα μια υπό εξέλιξη μεταφορά προτού σκουπίσετε το υγρό από το όργανο ή τον πάγκο. Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Από την κύρια οθόνη του λογισμικού, κάντε κλικ στο βήμα ροής εργασιών TRANSFER (Μεταφορά). 2 Χρησιμοποιήστε τις προεπιλεγμένες ρυθμίσεις για Transfer Protocol (Βήματα μεταφοράς) όπως φαίνεται στο στιγμιότυπο. 176 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

177 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Εκτέλεση μεταφοράς Βήμα 3 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Κάντε κλικ στο Start (Έναρξη) στην περιοχή Transfer (Μεταφορά). Σημείωση: Κατά τη διάρκεια της μεταφοράς, συνιστάται να παρασκευάσετε και να συνδέσετε τα διαλύματα που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν στο βήμα ανίχνευσης. Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων, στη σελίδα 182. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 177

178 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Διαδικασίες μετά τη μεταφορά Διαδικασίες μετά τη μεταφορά Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τις διαδικασίες καθαρισμού που πρόκειται να εκτελεστούν μετά τη μεταφορά Αφαίρεση ενός ή περισσότερων συγκρατητήρων μεταφοράς Βήμα 1 2 Ενέργεια Ανοίξτε το καπάκι της δεξαμενής μεταφοράς. Αφαιρέστε τους συγκρατητήρες μεταφοράς. Αναρτήστε τους σε διαγώνια διάταξη στο εσωτερικό πρόσθιο τμήμα της δεξαμενής μεταφοράς, πάνω από το υγρό. Σημείωση: Προκειμένου να μην αποξηραθούν οι μεμβράνες, μην ανοίγετε ακόμα τους συγκρατητήρες μεταφοράς. 178 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

179 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Διαδικασίες μετά τη μεταφορά Καθαρισμός της διαδρομής ροής μεταφοράς Σημείωση: Προτού προβείτε σε καθαρισμό, αφαιρέστε το συγκρατητήρα μεταφοράς. Βήμα 1 Ενέργεια Όταν ολοκληρωθεί η μεταφορά, ανοίγει το παράθυρο διαλόγου Transfer Completed Clean Transfer Flow Path (Η μεταφορά ολοκληρώθηκε - Καθαρισμός συντήρησης της διαδρομής ροής μεταφοράς). Σημείωση: Συνιστάται να καθαρίζετε τη διαδρομή ροής μεταφοράς μετά από κάθε εκτέλεση. Εάν επιλέξετε να παραλείψετε το στάδιο καθαρισμού της διαδρομής ροής μεταφοράς, κάντε κλικ στο Cancel (Ακύρωση) και προχωρήστε με την Συνέχεια στην ανίχνευση, στη σελίδα180. Ωστόσο, μην ξεχάσετε να καθαρίσετε τη διαδρομή ροής μεταφοράς σε μεταγενέστερο στάδιο του πειράματος. Ο καθαρισμός μπορεί να πραγματοποιηθεί επιλέγοντας Control:Clean Transfer flow path (Έλεγχος: Καθαρισμός της διαδρομής ροής μεταφοράς) από τη γραμμή μενού. Εάν παραληφθεί το βήμα του καθαρισμού, η διαδρομή ροής μεταφοράς πρέπει να αδειάσει χειροκίνητα, επιλέγοντας Empty Transfer tank (Άδειασμα δεξαμενής μεταφοράς) από το μενού Control (Έλεγχος). 2 3 Μετακινήστε το σωλήνα T Buffer στη φιάλη νερού που περιέχει ml υπερκάθαρου νερού (μαζί με το σωλήνα T Water ). Κάντε κλικ στο Start clean (Έναρξη καθαρισμού) στο παράθυρο διαλόγου Transfer Completed Clean Transfer Flow Path (Η μεταφορά ολοκληρώθηκε - Καθαρισμός διαδρομής ροής μεταφοράς). Ξεκινά η διαδικασία καθαρισμού, η οποία θα διαρκέσει περίπου 9 λεπτά. Σημείωση: Η ανίχνευση μπορεί να ξεκινήσει κατά τον καθαρισμό της διαδρομής ροής μεταφοράς (βλ. Συνέχεια στην ανίχνευση, στη σελίδα 180) Απορρίψτε το διάλυμα σε φιάλη νερού και τοποθετήστε το σωλήνα σε μια άδεια φιάλη. Σκουπίστε το άνω μέρος του εσωτερικού της δεξαμενής μεταφοράς με ένα βρεμένο πανί που δεν αφήνει χνούδι. Αφαιρέστε τυχόν σωματίδια, ίνες και τμήματα γέλης που φαίνονται με μια λαβίδα. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 179

180 5 Εκτέλεση πειράματος 5.7 Εκτέλεση μεταφοράς Διαδικασίες μετά τη μεταφορά Καθαρισμός του συγκρατητήρα μεταφοράς ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μετά την ηλεκτροφόρηση ή μετά τη μεταφορά (όταν το σάντουιτς μεταφοράς έχει ανοίξει και η κάρτα PVDF έχει τοποθετηθεί στο διαμέρισμα ανίχνευσης), απορρίψτε τη γέλη με ασφαλή τρόπο. Διαβάστε το δελτίο δεδομένων ασφαλείας (SDS/MSDS) της κάρτας γέλης για οδηγίες ασφαλείας σχετικά με τη γέλη και την απόρριψή της. Σημείωση: Εκτελέστε το παρόν βήμα όταν το σάντουιτς μεταφοράς έχει ανοίξει και η κάρτα PVDF έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ανίχνευσης. Βήμα Ενέργεια Αφαιρέστε τη γέλη από το σάντουιτς μεταφοράς. Απορρίψτε τη γέλη σύμφωνα με τις οδηγίες στο δελτίο SDS/MSDS και τις τοπικές διαδικασίες διαχείρισης αποβλήτων. Αφαιρέστε και απορρίψτε τους σπόγγους και τα χαρτιά μεταφοράς. Καθαρίστε τα διάφορα μέρη του στήριγμα μεταφοράς χρησιμοποιώντας τρεχούμενο νερό. Αφήστε το στήριγμα μεταφοράς να στεγνώσει καλά. Συνέχεια στην ανίχνευση Προβείτε σε ένα από τα ακόλουθα βήματα: Εάν τα διαλύματα ανίχνευσης και αντισωμάτων έχουν παρασκευαστεί και συνδεθεί με τη μονάδα Western, συνεχίστε ακολουθώντας τις οδηγίες στην ενότητα Ενότητα Εκτέλεση ανίχνευσης, στη σελίδα 187 διαφορετικά Συνεχίστε ακολουθώντας τις οδηγίες στην ενότητα Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων, στη σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

181 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο εκτέλεσης ανίχνευσης και αποξήρανσης. Στην παρούσα ενότητα Η ενότητα αυτή περιλαμβάνει τις παρακάτω υποενότητες: Ενότητα Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Εκτέλεση ανίχνευσης Διαδικασίες μετά την ανίχνευση Εκτέλεση αποξήρανσης Βλ. σελίδα Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 181

182 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο παρασκευής και σύνδεσης ρυθμιστικών και άλλων διαλυμάτων για εκτέλεση ανίχνευσης. Τα διαλύματα ανίχνευσης και αντισωμάτων μπορούν να παρασκευαστούν κατά τη διάρκεια της εκτέλεσης μεταφοράς, αλλά πρέπει να συνδεθούν πριν από την έναρξη της εκτέλεσης ανίχνευσης. Συνταγές για διαλύματα ανίχνευσης και αντισωμάτων Διάλυμα Διάλυμα αποκλεισμού Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης Ρυθμιστικό διάλυμα τελικής πλύσης Διάλυμα αντισωμάτων Υπερκάθαρο νερό (χρησιμοποιείται για έκπλυση μεταξύ των βημάτων ανίχνευσης και για καθαρισμό της διαδρομής ροής ανίχνευσης) Συνταγή Το σύστημα είναι συμβατό με τα περισσότερα διαλύματα αποκλεισμού, για παράδειγμα με παράγοντα ECL PRIME 2% σε PBS-T (0,1% Tween -20 σε 1 PBS) ή με αλβουμίνη βόειου ορού 5% σε PBS. Χρησιμοποιήστε διαλύματα αποκλεισμού με χαμηλό αυτοφθορισμό. Για σχετικές συστάσεις, βλ. εγχειρίδιο Western Blotting Principles and Methods. PBS-T (0,1% Tween-20 σε 1 PBS) PBS ph 7,4 Αντισώματα σε PBS-T (0,1% Tween-20 σε 1 PBS). Για τον τρόπο καθορισμού των βέλτιστων συγκεντρώσεων αντισωμάτων, βλ. Amersham WB system User Manual. Υπερκάθαρο νερό Ποσότητα/εκτέλεση 70 ml 560 ml 290 ml 5 έως 12 ml 760 ml 182 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

183 Σύνδεση σωλήνων με τα διαλύματα ανίχνευσης στη θήκη για φιάλες 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων ΠΡΟΣΟΧΗ Για να αποφύγετε το πιτσίλισμα επικίνδυνων υγρών, χρησιμοποιείτε βαρέα φίλτρα εισαγωγής συνδεδεμένα με σωλήνες στις φιάλες. Για περιγραφές των φίλτρων εισαγωγής και των συγκρατητήρων σωλήνα, βλ. Ενότητα 3.8 Άλλα εξαρτήματα, στη σελίδα93. Για τον τρόπο προσάρτησης των εξαρτημάτων, βλ. ενότητα Τοποθέτηση συγκρατητήρων σωλήνα, στη σελίδα 113 Πριν από την έναρξη της ανίχνευσης, συνδέστε το σωλήνα των μεσαίων και δεξιών κυλινδρικών πυλώνων στα διαλύματα που χρησιμοποιούνται για την εκτέλεση της ανίχνευσης ως εξής: Βήμα 1 Ενέργεια Από τον κεντρικό κυλινδρικό πυλώνα, τοποθετήστε το σωλήνα που φέρει σήμανση: P Water σε φιάλη ml με υπερκάθαρο νερό P Block σε φιάλη 100 ml με διάλυμα αποκλεισμού 2 Από το δεξί κυλινδρικό πυλώνα, τοποθετήστε το σωλήνα που φέρει σήμανση: P Wash σε φιάλη ml με διάλυμα πλύσης (PBS-T) P Final Wash σε φιάλη 500 ml με διάλυμα τελικής πλύσης (PBS) 3 Πριν από την έναρξη της ανίχνευσης, συνδέστε τους σωλήνες με τα διαλύματα αντισωμάτων στο διαμέρισμα αντισωμάτων (για πληροφορίες, βλ. παρακάτω). Σύνδεση των σωλήνων με διαλύματα αντισωμάτων Σημείωση: Τα διαλύματα αντισωμάτων θα πρέπει να παρασκευάζονται και να συνδέονται λίγο μετά την έναρξη της ανίχνευσης. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 183

184 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Βήμα 1 Ενέργεια Ανοίξτε το διαμέρισμα αντισωμάτων στη μονάδα Western πιέζοντας το σύμβολο εξαγωγής στο καπάκι του διαμερίσματος αντισωμάτων. 184 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

185 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Βήμα 2 Ενέργεια Εισαγάγετε κάθε σωλήνα με διάλυμα αντισωμάτων στην κατάλληλη θέση έως ότου ασφαλιστεί. Ο παρακάτω πίνακας περιγράφει τη θέση του κάθε σωλήνα στον οποίο πρέπει να τοποθετούνται τα εκάστοτε αντισώματα στο διαμέρισμα των αντισωμάτων. Θέση A PRIMARY A SECONDARY B PRIMARY B SECONDARY Περιγραφή Θέση που πρέπει να χρησιμοποιηθεί για πρωτοταγή αντισώματα που κατευθύνονται προς τη μεμβράνη στη θέση Α του θαλάμου ανίχνευσης. Θέση που πρέπει να χρησιμοποιηθεί για δευτεροταγή αντισώματα που κατευθύνονται προς τη μεμβράνη στη θέση Α του θαλάμου ανίχνευσης. Θέση που πρέπει να χρησιμοποιηθεί για πρωτοταγή αντισώματα που κατευθύνονται προς τη μεμβράνη στη θέση Β του θαλάμου ανίχνευσης. Θέση που πρέπει να χρησιμοποιηθεί για δευτεροταγή αντισώματα που κατευθύνονται προς τη μεμβράνη στη θέση Β του θαλάμου ανίχνευσης. 3 Κλείστε το καπάκι του διαμερίσματος αντισωμάτων. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 185

186 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Προετοιμασία και σύνδεση διαλυμάτων ανίχνευσης και αντισωμάτων Σημείωση: Για κάθε μεμβράνη, υπάρχει ένας σωλήνας αντισωμάτων για τα πρωτοταγή αντισώματα και ένας για τα δευτεροταγή. Αυτό σημαίνει, για παράδειγμα, ότι εάν επιλεγούν δύο πρωτοταγή αντισώματα για σήμανση της μεμβράνης στη θέση Position A(Θέση Α) αναμειγνύονται στον ίδιο σωλήνα αντισωμάτων και τοποθετούνται στη θέση A PRI- MARY (Α Πρωτοταγή). 186 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

187 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εκτέλεση ανίχνευσης Εκτέλεση ανίχνευσης Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τα εξής: τοποθέτηση καρτών PVDF στους θαλάμους ανίχνευσης έναρξη και παρακολούθηση ανίχνευσης Προφυλάξεις ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μετά την ηλεκτροφόρηση ή μετά τη μεταφορά (όταν το σάντουιτς μεταφοράς έχει ανοίξει και η κάρτα PVDF έχει τοποθετηθεί στο διαμέρισμα ανίχνευσης), απορρίψτε τη γέλη με ασφαλή τρόπο. Διαβάστε το δελτίο δεδομένων ασφαλείας (SDS/MSDS) της κάρτας γέλης για οδηγίες ασφαλείας σχετικά με τη γέλη και την απόρριψή της. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος σύνθλιψης. Μην αγγίζετε τον κινούμενο θάλαμο ανίχνευσης κατά τη διάρκεια λειτουργίας της μονάδας. Πριν από την ανίχνευση Βεβαιωθείτε ότι τα ρυθμιστικά διαλύματα, το υπερκάθαρο νερό, το αντίσωμα, τα διαλύματα αποκλεισμού και πλύσης είναι συνδεδεμένα πριν από την έναρξη της ανίχνευσης. Σημείωση: Το υπερκάθαρο νερό πρέπει να είναι πάντα συνδεδεμένο διότι χρησιμοποιείται για έκπλυση μεταξύ των βημάτων ανίχνευσης. Το διάλυμα πλύσης χρησιμοποιείται για έκπλυση μεταξύ των πρωτοταγών αντισωμάτων στη θέση A και B. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 187

188 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εκτέλεση ανίχνευσης Προγέμισμα του θαλάμου ανίχνευσης και φόρτωση των καρτών PVDF Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Προγέμισμα του θαλάμου ανίχνευσης: Κάντε κλικ στο βήμα ροής εργασιών PROBING & DRYING (Ανίχνευση & Αποξήρανση) στο λογισμικό. Κάντε κλικ στο Pre-Fill (Προγέμισμα) στην περιοχή Probing (Ανίχνευση). Αποτέλεσμα: Ο θάλαμος ανίχνευσης είναι προγεμισμένος με λίγα χιλιοστόλιτρα του πρώτου διαλύματος στον πίνακα ακολουθίας ανίχνευσης (από προεπιλογή χρησιμοποιείται το διάλυμα αποκλεισμού). Σημείωση: Μετά το προγέμισμα του θαλάμου ανίχνευσης: Δεν είναι πλέον δυνατόν να αλλάξετε το είδος του πρώτου βήματος στον πίνακα ακολουθίας ανίχνευσης. Ωστόσο, μπορούν να επεξεργαστούν οι επιλογές Dur. [min] (Διάρκεια σε λεπτά) και Repeat (Επανάληψη). Το πλήκτρο Pre-Fill (Προγέμισμα) αλλάζει σε πλήκτρο Start (Έναρξη) και εμφανίζεται το μήνυμα κατάστασης Ready for Probing (Έτοιμο προς ανίχνευση). 188 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

189 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εκτέλεση ανίχνευσης Βήμα 2 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Ανοίξτε το καπάκι του διαμερίσματος ανίχνευσης και χρησιμοποιήστε το μάνδαλο για να ανοίξετε το καπάκι του θαλάμου ανίχνευσης. 3 Ανοίξτε το συγκρατητήρα μεταφοράς και αφαιρέστε το σπόγγο και το χαρτί μεταφοράς επάνω από την κάρτα PVDF. 4 Αφαιρέστε την κάρτα PVDF από το συγκρατητήραμεταφοράς. Πιάστε τις λαβές της κάρτας PVDF με τα δάκτυλά σας ή με μια λαβίδα με επίπεδα ρύγχη. Τοποθετήστε την κάρτα PVDF στο θάλαμο ανίχνευσης, σύμφωνα με τις οδηγίες στο βήμα 5. Για οδηγίες σχετικά με τον καθαρισμό του συγκρατητήρα μεταφοράς και τη διαχείριση των αποβλήτων, βλ. Καθαρισμός του συγκρατητήρα μεταφοράς, στη σελίδα 180. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 189

190 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εκτέλεση ανίχνευσης Βήμα 5 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Τοποθετήστε την κάρτα PVDF στον προγεμισμένο θάλαμο ανίχνευσης στερεώνοντας τις οπές της κάρτας PVDF στους πείρους καθοδήγησης (που έχουν επισημανθεί με πορτοκαλί κύκλους) και ξετυλίγοντας την κάρτα PVDF προς τα κάτω στο θάλαμο ανίχνευσης. Σημείωση: Προσέξτε να μην ακουμπήσετε την περιοχή αποτύπωσης της κάρτας PVDF. 6 Κλείστε το καπάκι του διαμερίσματος ανίχνευσης. Βεβαιωθείτε ότι το καπάκι του θαλάμου ανίχνευσης είναι ασφαλισμένο με το μάνδαλο. 190 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

191 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εκτέλεση ανίχνευσης Έναρξη και παρακολούθηση ανίχνευσης Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Στο λογισμικό, κάντε κλικ στο βήμα ροής εργασιών PROBING & DRYING (Ανίχνευση & Αποξήρανση). 2 Χρησιμοποιήστε τις προεπιλεγμένες ρυθμίσεις για Probing steps (Βήματα ανίχνευσης) στην περιοχή Probing (Ανίχνευση) όπως φαίνεται στο στιγμιότυπο. Κάντε κλικ στο Start (Έναρξη). 3 Αποτέλεσμα: Ξεκινά η ανίχνευση. Το υπό εξέλιξη βήμα ανίχνευσης εμφανίζεται στην περιοχή Probing (Ανίχνευση). Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 191

192 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Διαδικασίες μετά την ανίχνευση Διαδικασίες μετά την ανίχνευση Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τα εξής: τοποθέτηση της κάρτας PVDF στο συγκρατητήρα αποξήρανσης τοποθέτηση του συγκρατητήρα αποξήρανσης στο αντίστοιχο διαμέρισμα και έναρξη της αποξήρανσης καθαρισμός της διαδρομής ροής ανίχνευσης Μετακινήστε την ή τις κάρτες PVDF στο διαμέρισμα αποξήρανσης Βήμα 1 Ενέργεια Αφαιρέστε ένα Amersham WB drying holder (συγκρατητήρα αποξήρανσης) από το διαμέρισμα αποξήρανσης και ανοίξτε το. 2 Κρατήστε τις λαβές κάρτας PVDF με τα δάκτυλά σας ή με μια λαβίδα με επίπεδα ρύγχη και ανασηκώστε την κάρτα PVDF από το θάλαμο ανίχνευσης. 192 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

193 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Διαδικασίες μετά την ανίχνευση Βήμα 3 Ενέργεια Τοποθετήστε την κάρτα PVDF στο συγκρατητήρα αποξήρανσης στερεώνοντας τις οπές της κάρτας PDVF στους τρεις πείρους καθοδήγησης. 4 Κλείστε το συγκρατητήρα αποξήρανσης. Βεβαιωθείτε ότι ο συγκρατητήρας αποξήρανσης είναι ασφαλισμένος με το μάνδαλο. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 193

194 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Διαδικασίες μετά την ανίχνευση Βήμα 5 Ενέργεια Τοποθετήστε το ή τους συγκρατητήρες αποξήρανσης στην κατάλληλη θέση στο διαμέρισμα αποξήρανσης (δηλ. κάρτα PVDF στη θέση ανίχνευσης A έως τη θέση αποξήρανσης A). Καθαρισμός της διαδρομής ροής ανίχνευσης Σημείωση: Προτού προβείτε σε καθαρισμό, μετακινήστε την ή τις κάρτες PVDF στο διαμέρισμα αποξήρανσης (βλ. οδηγίες παραπάνω). Βήμα 1 Ενέργεια Όταν ολοκληρωθεί η ανίχνευση, ανοίγει το παράθυρο διαλόγου Probing Completed Clean Probing Flow Path (Η ανίχνευση ολοκληρώθηκε - Καθαρισμός συντήρησης της διαδρομής ροής ανίχνευσης). Σημείωση: Συνιστάται να καθαρίζετε τη διαδρομή ροής ανίχνευσης μετά από κάθε εκτέλεση. Εάν επιλέξετε να παραλείψετε το στάδιο καθαρισμού της διαδρομής ροής ανίχνευσης, κάντε κλικ στο Cancel (Ακύρωση) και προχωρήστε με το στάδιο Ενότητα Εκτέλεση αποξήρανσης, στη σελίδα196. Ωστόσο, μην ξεχάσετε να καθαρίσετε τη διαδρομή ροής ανίχνευσης σε μεταγενέστερο στάδιο του πειράματος. Ο καθαρισμός μπορεί να πραγματοποιηθεί επιλέγοντας Control:Clean Probing flow path (Έλεγχος: Καθαρισμός της διαδρομής ροής ανίχνευσης) από τη γραμμή μενού. Εάν παραληφθεί το βήμα του καθαρισμού, η διαδρομή ροής ανίχνευσης πρέπει να αδειάσει χειροκίνητα, επιλέγοντας Empty Probing chamber (Άδειασμα του θαλάμου ανίχνευσης) από το μενού Control (Έλεγχος). 194 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

195 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Διαδικασίες μετά την ανίχνευση Βήμα 2 Ενέργεια Εισαγάγετε νέους άδειους σωλήνες με διαλύματα αντισωμάτων στο διαμέρισμα αντισωμάτων. Σημείωση: Εισάγετε πάντα τέσσερις νέους άδειους σωλήνες. 3 4 Σκουπίστε το σωλήνα ανίχνευσης P Block, P Wash και P Final Wash με ένα βρεγμένο πανί και μετακινήστε το σωλήνα στη φιάλη με υπέρκαθαρο νερό (η οποία περιέχει το σωλήνα P Water ). Ελέγξτε την ποσότητα υπερκάθαρου νερού που χρειάζεται για καθαρισμό στο παράθυρο διαλόγου του λογισμικού και βεβαιωθείτε ότι η φιάλη περιέχει τουλάχιστον την αναφερόμενη ποσότητα νερού. Κάντε κλικ στο Start clean (Έναρξη καθαρισμού) από το παράθυρο διαλόγου Probing completed clean probing system (Η ανίχνευση ολοκληρώθηκε - καθαρισμός συστήματος ανίχνευσης). Ξεκινά η διαδικασία καθαρισμού η οποία θα διαρκέσει περίπου 13 λεπτά. Σημείωση: Η αποξήρανση των μεμβρανών μπορεί να ξεκινήσει κατά τον καθαρισμό της διαδρομής ροής ανίχνευσης. 5 Όταν ολοκληρωθεί ο καθαρισμός, απορρίψτε το διάλυμα στη φιάλη με το νερό και απορρίψτε τα λύματα στους σωλήνες με τα διαλύματα αντισωμάτων. Τοποθετήστε τους σωλήνες σε μια κενή φιάλη. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 195

196 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εκτέλεση αποξήρανσης Εκτέλεση αποξήρανσης Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο εκτέλεσης της αποξήρανσης των καρτών PDVF. Η αποξήρανση της κάρτας PVDF θα δημιουργήσει ένα ομοιόμορφο και χαμηλό υπόβαθρο, με ισχυρότερα σήματα. Εκτέλεση αποξήρανσης Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Βεβαιωθείτε ότι οι συγκρατητήρες αποξήρανσης με μία ή περισσότερες κάρτες PVDF έχουν τοποθετηθεί στο διαμέρισμα αποξήρανσης στις ορθές θέσεις (δηλ. κάρτα PVDF στη θέση ανίχνευσης A έως τη θέση αποξήρανσης A). 2 Από το βήμα ροής εργασιών PROBING & DRYING (Ανίχνευση & Αποξήρανση) στο λογισμικό, κάντε κλικ στο Start στην περιοχή Drying (Αποξήρανση). 196 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

197 5 Εκτέλεση πειράματος 5.8 Εκτέλεση ανίχνευσης και αποξήρανσης Εκτέλεση αποξήρανσης Βήμα 3 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Όταν ολοκληρωθεί η αποξήρανση: Ανοίξτε το καπάκι του διαμερίσματος αποξήρανσης. Αφαιρέστε το ή τους συγκρατητήρες αποξήρανσης. Η κάρτα PVDF είναι έτοιμη προς σάρωση. Προβείτε σε Ενότητα 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων, στη σελίδα 198. Σημείωση: Εάν οι μεμβράνες δεν είναι εντελώς στεγνές, κάντε κλικ στο Start (Έναρξη) στην περιοχή Drying (Αποξήρανση) για εκτέλεση νέου κύκλου αποξήρανσης. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 197

198 5 Εκτέλεση πειράματος 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιγράφει τον τρόπο εκτέλεσης των εξής εργασιών: τοποθέτηση της κάρτας PVDF στη μονάδα Elpho & scan έναρξη και παρακολούθηση της σάρωσης προβολή των αποτελεσμάτων της σάρωσης Τοποθέτηση της κάρτας PVDF στο φορτωτή ΠΡΟΣΟΧΗ Κινούμενα μέρη. Απαιτείται προσοχή όταν ανοίγετε/κλείνετε το φορτωτή ώστε να μην παγιδεύσετε τα δάκτυλα ή το ρουχισμό σας σε φορτωτή που βρίσκεται εν κινήσει. Μην τοποθετείτε ποτέ φιάλες ή φιαλίδια στην πρόσθια πλευρά της μονάδας Elpho & scan. Ενδέχεται να πέσουν όταν ανοίξει ο φορτωτής. Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Πατήστε το πλήκτρο εξαγωγής στη μονάδα Elpho & scan. Αποτέλεσμα: Εξέρχεται ο φορτωτής. 2 Γυρίστε το μάνδαλο προς τα επάνω και ανοίξτε το καπάκι σφράγισης. Σκουπίστε τυχόν υγρό και ακαθαρσίες από το προστατευτικό τζάμι της πλακέτας κάρτας χρησιμοποιώντας ένα πανί που δεν αφήνει χνούδι. 198 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

199 5 Εκτέλεση πειράματος 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων Βήμα 3 4 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Αφαιρέστε τον προσαρμογέα μεμβράνης από το διαμέρισμα αντισωμάτων της μονάδας Western. Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι ο προσαρμογέας μεμβράνης είναι στεγνός και καθαρός. Ανοίξτε τον προσαρμογέα μεμβράνης και τοποθετήστε τον στην πλακέτα κάρτας στερεώνοντας τις οπές καθοδήγησης του προσαρμογέα στους πείρους καθοδήγησης. Σημείωση: Προσέξτε να μην γρατζουνίσετε την πλακέτα κάρτας με αιχμηρά αντικείμενα. Ανοίξτε το συγκρατητήρα αποξήρανσης. 5 Αφαιρέστε την κάρτα PVDF από το συγκρατητήρα αποξήρανσης και τοποθετήστε την κάρτα στον προσαρμογέα μεμβράνης στερεώνοντας τις οπές καθοδήγησης στους πείρους καθοδήγησης. Σημείωση: Προσέξτε να μην ακουμπήσετε την περιοχή αποτύπωσης στην κάρτα PVDF. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 199

200 5 Εκτέλεση πειράματος 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων Βήμα 6 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Κλείστε τον προσαρμογέα μεμβράνης. 7 Κλείστε το καπάκι σφράγισης. 8 Πατήστε το πλήκτρο εξαγωγής στη μονάδα Elpho & scan. Αποτέλεσμα: Ο φορτωτής κλείνει. Έναρξη και παρακολούθηση σάρωσης μεμβρανών Βήμα 1 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Στο λογισμικό, κάντε κλικ στο βήμα ροής εργασιών MEMBRANE SCANNING (Σάρωση μεμβρανών). 200 Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE

201 5 Εκτέλεση πειράματος 5.9 Σάρωση μεμβρανών και προβολή αποτελεσμάτων Βήμα 2 Εικόνα του βήματος Ενέργειες διαχειριστή Χρησιμοποιήστε τις προεπιλεγμένες ρυθμίσεις για σάρωση μεμβρανών, όπως φαίνεται στο στιγμιότυπο. 3 Κάντε κλικ στο Scan (Σάρωση) στην περιοχή Membrane Scanning (Σάρωση μεμβρανών). Αποτέλεσμα: Ξεκινά η σάρωση των μεμβρανών. 4 Η πρόοδος των σαρώσεων εμφανίζεται στην περιοχή Membrane Scanning (Σάρωση μεμβρανών). Όταν ολοκληρωθεί η σάρωση, οι εικόνες των μεμβρανών εμφανίζονται στην περιοχή Membrane Scanning (Σάρωση μεμβρανών). Προβολή αποτελεσμάτων Βήμα 1 Ενέργεια Κάντε κλικ στο βήμα ροής εργασιών EVALUATION (Αξιολόγηση) στο λογισμικό. Αποτέλεσμα: Πραγματοποιείται αξιολόγηση στην περιοχή Membrane Scanning (Σάρωση μεμβρανών). Η πρόοδος της αξιολόγησης εμφανίζεται στη γραμμή προόδου. Amersham WB system Οδηγίες λειτουργίας AE 201