PREHºAD ANAL ZY PYRETHROIDOV MET DOU VYSOKO»INNEJ KVAPALINOVEJ CHROMATOGRAFIE

Transcript

1 PREHºAD ANAL ZY PYRETHROIDOV MET DOU VYSOKO»INNEJ KVAPALINOVEJ CHROMATOGRAFIE KRISTÕNA ROM NOV a MILAN HUTTA Katedra analytickej chèmie, PrÌrodovedeck fakulta, Univerzita KomenskÈho, Mlynsk dolina CH-2, Bratislava, Slovensk republika romanova@fns.uniba.sk, hutta@fns.uniba.sk Doölo dúa 21.VIII.2001 Kæ ËovÈ slov : HPLC, pyrethroidy, pesticìdy, achir lna separ cia, chir lna separ cia Obsah 1. vod 2. Anal za pyrethroidov 2.1. Achir lna separ cia na reverzn ch f zach 2.2. Achir lna separ cia na norm lnych f zach 2.3. Chir lne separ cie s vyuûitìm pol rnych mobiln ch f z 2.4. Chir lne separ cie s vyuûitìm nepol rnych a stredne pol rnych mobiln ch f z 3. Z ver 1. vod»lovek sa snaûì zlepöovaù svoje ûivotnè podmienky, ale jeho siliu zabezpeëiù si dostatoënè z soby potravy sa stavaj do cesty rùzny ökodcovia a choroby nap daj ce poænohospod rske plodiny, hospod rske zvierat a aj Ëloveka samotnèho 1. Proti t mto vplyvom sa neust le bojuje pouûìvanìm pesticìdov. PoslednÈ roky rastie spotreba rùznych pesticìdov, ktorè vzbudzuj st le v Ëöie problèmy a obavy zo zneëistenia ûivotnèho prostredia, ku ktorèmu doch dza ich aplik ciou. PesticÌdy sa najëastejöie delia podæa pouûitia proti ökodliv m Ëiniteæom. NajrozöÌrenejöÌmi skupinami s i) insekticìdy ñ pùsobiacena hmyz, ii) fungicìdy ñ niëiaceökodlivè parazitickè huby a pliesne, iii) herbicìdy ñ pouûìvanè proti burin m, ktorè sa vyskytuj v porastoch kult rnych rastlìn 1,2. OstatnÈ skupiny s menej v znamnè. Medzi najpouûìvanejöie insekticìdy patria pyrethroidy, s ktor mi sa beûne dost vame do kontaktu vo forme rozpraöova- Ëov, posypov, elektroodpudzovaëov pri niëenì hmyzu, alebo impregnaën ch roztokov pri penetrovanì stavebnèho materi - lu, papieru Ëi textìliì. Po neëakanom objave pyrethroidov tieto r chlo dosiahli komerën dùleûitosù a v s Ëasnosti zaberaj viac ako 20 % svetovèho trhu s insekticìdmi 3. Pyrethroidy s syntetickè insekticìdy odvodenè od Ëinn ch l tok vyskytuj cich sa v Chrysanthemum cinerariaefolium ako prìrodnè pyrethrìny 1. PyrethrÌny s biologickè produkty s niûöou toxicitou pre cicavce ako syntetickè pyrethroidy. PyrethrÌny s Ëasto pouûìvanè ako repelenty, ich nev hodou je vöak nedostatoën perzistencia, a preto sa musia zmieöavaù so synergick mi l tkami. Pr ve tento dùvod viedol k v robe vysoko aktìvnych a na svetle stabiln ch syntetick ch pyrethroidov. Pyrethroidy sa zaraôuj do triedy neuroaktìvnych insekticìdov 4,5 s kr tkou ûivotnosùou a s nìzkou toxicitou precicavce 6,7.Napriek tomu sa objavili inform cie o ich nepriaznivom vplyve na zdravie Ëloveka, priëom niektorè syntetickè pyrethroidy s uû podozrivè z karcinogenity 8. O toxicitepyrethroidn ch insekticìdov pre cicavce bolo popìsan ch niekoæko pr c 9ñ11. O syndrûmoch otravy, prejavoch a terapii pojedn va pr ca Raya 12. Z hæadiska chemickej ötrukt ry sa syntetickè pyrethroidy rozdeæuj do troch skupìn (obr. 1): a)sα-cn skupinou (napr. cypermethrin, cyfluthrin, deltamethrin), b) bez skupiny CN (napr. permethrin, allethrin), c) bez cykloprop novèho kruhu (napr. fenvalerat, τ-fluvalinat) 5. Pyrethroidy s syntetizovanè, testovanè, oznaëovanè a pouûìvanè ako jednoduchè, veæmi aktìvneizomèry, alebo ako izomèrna zmes obsahuj ca dva alebo viac rùznych stereoizomèrov z visl ch od poëtu chir lnych centier v molekul ch a spùsobu syntèzy 13. PouûÌvanie pyrethroidov je nevyhnutnè pre zabezpeëenie kvality ûivotnej rovne, a preto sa v dneönej dobe vynaklad silie na redukciu rizìk spojen ch s ich aplik ciou v ûivotnom prostredì. Jednou z moûnostì, ako znìûiù zaùaûenie ûivotnèho prostredia, je objav, v voj a zavedenie na trh tak ch biologicky Ëinn ch l tok, ktorè pùsobia selektìvne na urëitè biochemickè procesy v cieæov ch organizmoch. Hlavn m prostriedkom na dosiahnutietohoto cieæa sa javì pr vechiralita. So stereoizomèrmi, vr tane optick ch izomèrov, sa stret vame aj u pyrethroidov. V Ëöina vyr ban ch pyrethroidov je produko- Cl Cl Cl Cl Cl CN C CH CO 2 CH O CH 3 CH 3 C CH CO 2 CH O 2 CH 3 CH 3 I II CN CH CO 2 CH CH CH 3 2 III Obr. 1. PrÌklady ötrukt rnych vzorcov pyrethroidov z troch z - kladn ch skupìn; cypermethrin (I), permethrin (II), fenvalerat (III) O 738

2 van ch vo forme racemick ch zmesì a zmesì s rùznou enantiomèrnou Ëistotou, a to napriek skutoënosti, ûe len jeden enantiomèr jebiologicky aktìvny, k m druh sa mùûeprejaviù ako neëistota. Nahr dzanie racemick ch zmesì Ëist mi enantiomèrmi umoûúuje v znamn redukciu mnoûstva pyrethroidov aplikovan ch do ûivotnèho prostredia. ZnÌûenie koncentr cie a poëtu balastn ch l tok zaùaûuj cich ûivotnè prostredie vedie aj k znìûeniu pravdepodobnosti nepriaznivèho Ëinku t chto l tok a ich degradaën ch produktov na zdravie Ëloveka. Pri porovnanì biologick ch aktivìt stereoizomèrov syntetick ch pyrethroidov obsahuj cich zvyöok kyseliny chryzantèmovej sa zistilo, ûe deriv ty kyseliny chryzantèmovej, ktorè obsahuj (1R)-(+)-kysl zloûku, maj vyööiu insekticìdnu aktivitu ako tie, ktorè maj (S)-(ñ)-kysl ester 14.(1R)-izomÈr kyseliny chryzantèmovej je Ëasùou pyrethrinu, a preto nie je prekvapuj ce, ûe komerënè produkty s odvodenè od ötrukt ry (1R)- -chryzantèmovej kyseliny. Napriek tomu, ûe (R)-izomÈru prideæuj vyööiu insekticìdnu aktivitu, s rozdiely medzi (1R)- a(1s)- (a trans- a cis-) izomèrmi v ich toxiciteprecicavce malè 15. Pre v voj a testovanie nov ch prepar tov vo vyööie spomìnan ch oblastiach jepotrebnè maù k dispozìcii n strojepre anal zu chir lnych l tok. V s Ëasnosti jerozvìjan ch viac metûd pre anal zu chir lnych l tok a vysoko Ëinn kvapalinov chromatografia (HPLC) je jednou z efektìvne vyuûìvan ch metûd. HPLC je pouûìvan samostatne, ale aj v multidimenzion lnych separ ci ch. Z uvedenèho vypl va, ûe problematika anal zy pyrethroidn ch l tok v ûivotnom prostredì je aktu lnou tèmou pre vedeck v skum. 2. Anal za pyrethroidov Pre stanovenie pyrethroidov a pyrethrìnov boli pouûitè rùzne analytickè metûdy uvedenè aj v pr ci Dombeka 16. MetÛdy pre anal zu pyrethroidov v rùznych matriciach zah Úaj extrakciu pol rnym rozp öùadlom alebo extrakciu tuhou f zou, vyëistenie adsorpënou alebo gèlovou permeaënou chromatografiou. Stanoveniesa uskutoëúujeplynovou chromatografiou (GC)sdetektoromelektrÛnovÈhoz chytu(ecd)(cit. 17ñ25 ), s plameúovo ionizaën m detektorom (FID) (cit. 25ñ28 ), alebo hmotnostn m spektrometrick m detektorom (MS) (cit. 29,30 ), alebo HPLC so spektrofotometrickou detekciou v ultrafialovej oblasti spektra (UV) (cit. 31 ), infraëervenou spektroskopiou (I») (cit. 32 ), r diometrick m detektorom 33, r diometrick m detektorom s kvapaln m scintil torom 34 alebo polarimetrom 35. Tieto dve metûdy (GC a HPLC) s najpouûìvanejöie, ale okrem nich sa pouûìvaj aj inè aplik cie, ako je superkritick fluidn extrakcia 36ñ38, micel rna elektrokinetick chromatografia (MECC) (cit. 39 ), polarografia 40, voltametria 41,42, spektrofotometria 43, kapil rna elektroforèza (CE) s UV detektorom a fluorescenën m detektorom laserom indukovanej fluorescencie(lif) (cit. 44,45 ), izotachoforèza (ITP) (cit. 46,47 ) a imunoassay 48,49 metûdy. Di Muccio a spol. 50 ötudovali metûdu vyuûìvaj cu delenie na z klade dispergovania pevnej matrice (sorbentu) do tekut ch vzoriek (SMDP) a n slednom oddelenì tohto sorbentu filtr ciou v kombin cii s gèlovou chromatografiou na minikolûne pre anal zu pyrethroidn ch rezìduì v mastn ch matriciach (oleje a pod.). V ùaûnosù fluvalinatu a permethrinu nemohla byù vypoëìtan kvùli interferencii l - tok zo sûjovèho oleja, k m λ-cyhalothrin, esfenvalerat a tralomethrin d vaj nìzke v ùaûnosti. MetÛdou HPLC boli stanovovanè aj pyrethrìny v extrakte pyrethra 51 a v biologickom materi li, ktor m bola æudsk plazma 52. Podæa spùsobu separ cie mùûeme metûdy HPLC rozdeliù do t chto skupìn: ñ achir lna separ cia na reverzn ch f zach (RP), ñ achir lna separ cia na norm lnych f zach (NP), ñ ñ chir lne separ cie s vyuûitìm pol rnych mobiln ch f z, chir lne separ cie s vyuûitìm nepol rnych a stredne pol rnych mobiln ch f z. StruËnÈ charakteristiky t chto metûd s uvedenè v tabuæke I a II Achir lna separ cia na reverzn ch f zach T to metûda umoûúuje stanoviù pyrethroidy a ich diastereoizomèry v rùznych matriciach, resp. ich Ëistotu v technologick ch vzork ch. NiektorÈ syntetickè pyrethroidy 53 a synergikum piperonyl butoxid, zl Ëeniny ktorè sa beûne pouûìvaj ako ochrana pre skladovanè obilie, boli stanovovanè ako rezìdu v ryûi RP HPLC s UV detekciou pri 225 nm. Extrakcia pesticìdov a interferuj ceho materi lu z obilia bola roben tromi rùznymi extrahuj cimi rozp öùadlami: acetûnom, metanolom a hex - nom. AcetÛn bol z nich najvhodnejöì, pretoûe poskytuje kvantitatìvnu extrakciu (48-hodinov extrakcia) a neposkytuje vysok roveú balastnèho materi lu. Koncentr cia pyrethroidov v extrakte dosahuje roveú 5 µg.ml ñ1, Ëo umoûúujeich stanovenie priamym d vkovanìm. Pri niûöìch koncentr ci ch je potrebnè dodatoënè Ëistenie extraktu a zakoncentrovanie analytov. DokonalÈ vyëistenie acetûnov ch extraktov bolo uskutoënenè na predkolûnach plnen ch oxidom hlinit m, resp. kremiëitanom horeënat m a desaùn sobnè zakoncentrovanie bolo dosiahnutè sorpciou pesticìdov na predkolûne C18 alebo zahustenìm extraktu prostrednìctvom odparenia rozp öùadla. Na rozlìöenie prekr vaj cich sa chromatografick ch pìkov boli vyuûitè rùzne chemometrickè metûdy 54,55 ich dekonvol ciou a aplikovanè na stanovenie pyrethroidov ñ zmesi cypermethrinu, fenvalerate a cis-, trans-permethrinu HPLC. RezÌdu 56 fluvalinatu v mede boli analyzovanè po superkritickej fluidnej extrakcii (SFE) oxidom uhliëit m s n slednou HPLC anal zou na kolûnec18. T to metûda jepodæa autorov jednoduchöia ako extrakcia organick mi rozp öùadlami, Ëistenie extraktov tenkovrstvovou chromatografiou a anal za plynovou chromatografiou. Kutter a Class 57 pozorovali na kolûnec18 RP poradie el cie izomèrov cis- a trans-allethrinu v mobilnej f ze metanol:voda (4:1). V prìpade cypermethrinu boli detegovanè len tri pìky miesto ötyroch pìkov diastereoizomèrov. Brouwer a spol. 58 stanovovali pyrethroidnè insekticìdy v povrchovej vode kvapalinovou chromatografiou so spektrofotometrickou detekciou detektorom s diûdov m poæom (DAD) pouûitìm priamej pravy vzorky technikou prep jania kolûn. Proced ra zah Úa automatickè on-line zakoncentrovanie na predkolûnkach obsahuj cich oktadecylsilikagèl. Adsorpcia na vn tornè steny a povrchy bola potlaëen prìdavkom neutr lneho surfaktantu Brij-35 do vodnej vzorky. Pri spracovanì 100 ml vzorky s detekënè limity na rovni 0,4 µg.l ñ1 pri 235 nm. Cyfluthrin 59 bol stanoven RP LC v kvapaln ch a pevn ch 739

3 Tabuæka I Achir lna HPLC anal za pyrethroidov Stacion rna f za Mobiln f za SeparovanÈ pyrethroidy Detekcia Matrica Lit. a detekën limit a prava vzorky Achir lna separ cia na reverzn ch f zach Waters Novapak C18 ACN-H 2 O (75:25) bioresmethrin, deltamethrin, fenvalerat, UV 225 nm ryûa, extrakcia 53 (150 3,9 mm) permethrin, phenothrin 0,05 µg.ml ñ1 Hypersil C18 ACN-H 2 O (85:15) cypermethrin, fenvalerat, permethrin UV 210 nm podzemn voda, pùda, 54 (150 4,6 mm, 5 µm) extrakcia Hypersil C18 ACN-H 2 O (95:5, 90:10, cypermethrin, fenvalerat, permethrin DAD ñ 55 (150 4,6 mm, 5 µm) 85:15, 80:20, 75:25) Novapak C18 ACN-H 2 Os14ml.l ñ1 fluvalinat UV 254 nm med, SFE 56 (150 4,6 mm) 0,01M-AcOH (80:20) 0,06 mg.l ñ1 LiChrosorb RP18 CH 3 O (4:1) allethrin UV 220 nm ñ 57 (120 4 mm, 5 µm) Supelcosil LC-PAH gradient A = H 2 O, B = ACN allethrin, cypermethrin, tetramethrin, UV 235 nm povrchov voda 58 (250 4,6 mm, 5 µg) 35 % A-65 % B po Ëas 12,5 permethrin, fenpropathrin, fenvalerat, 0,4 µg.l ñ1 min., line rna zmena na 20 % bifenthrin A-80 % B (20 min) Nucleosil C18 ACN-H 2 O (80:20) deltamethrin UV 275 nm voda z bazèna, pre oëistu 62 ([250+40] 4 mm, 5 µm) 0,2 mg.l ñ1 hov. dobytka, filtr cia Kyanopropyl ACN-H 2 O (55:45) cyfluthrin UV 230 nm kvapalnè a pevnè 59 modifikovan silikagèl pesticìdne formy (250 4,6 mm, 5 µm) Nucleosil C18 ACN-H 2 O (80:20) flumethrin, deltamethrin, cypermethrin, UV 266 nm mlieko a krv dojn ch 60,61 (250 4,6 mm) cyhalothrin 0,001 mg.kg ñ1 kr v, extrakcia µbondpak C18 ACN-H 2 O (75:25) bifenthrin, cypermethrin, fenpropathrin, UV 206 nm plodiny ovocia a zeleniny, 63 (300 3,9 mm, 10 µm) fenvalerat, flucythrinat, methotrin, 0,05 mg.kg ñ1 extrakcia permethrin, tetramethrin py-115 pre py-115 0,1 mg.kg ñ1 Separon SIX C18 CH 3 O (80:20) kadethrin, cypermethrin, permethrin UV 272 nm ovzduöie, extrakcia z PUF 64 (150 3,2 mm, 5 µm) 7,8ñ13,5 µg.ml ñ1 (20 µl) 740

4 Tabuæka I ñ pokraëovanie Stacion rna f za Mobiln f za SeparovanÈ pyrethroidy Detekcia Matrica Lit. a detekën limit a prava vzorky Purospher RP-18e rùzny gradient CH 3 O kadethrin, cypermethrin, permethrin UV 270 nm aerosûlovè spraye (125 4 mm, 5 µm) Separon SGX C18 CH 3 O (75:25) kadethrin, cypermethrin, permethrin UV 225 a 245 nm 65 (150 3 mm, 5 mm) Separon SIX CN CH 3 O (60:40) kadethrin, cypermethrin, permethrin UV 225 nm 65 (150 3 mm, 5 µm) Chromolith RP-18egradient CH 3 O kadethrin, cypermethrin, permethrin UV 220 nm 65 Performance (100 4,6 mm) Achir lna separ cia na norm lnych f zach Partisil hex n-chloroform-ipa (200:0,2:0,1) cypermethrin UV 281 nm ñ 67 (250 4,6 mm; 10 µm) hex n-thf-dietylèter (200:0,5:6) cypermethrin hex n-chloroform-dietylèr (200:1:6) cypermethrin, permethrin hex n-chloroform-ipa (200:1:6) cypermethrin LiChrospher Si 100 3% THF-hex n allethrin, cypermethrin UV 220 nm ñ 57 (120 4 mm, 5 µm) Nucleosil 5 NO 2 0,5% THF-hex n allethrin, cypermethrin UV 220 nm ñ 57 (120 4 mm, 5 µm) Lichrospher Si 60 hex n-benzèn (50:50) deltamethrin, cypermethrin, permethrin UV 280 nm, ñ 66 (250 4 mm, 10 µm) polarimeter Spherisorb S5W 0,7% etylacet t-izookt n α-cypermethrin, fenvalerat, deltamethrin, UV 275 nm pesticìdne formy, 68 (250 4,6 mm, 5 µm) fenpropathrin, esfenvalerat, cypermethrin, extrakcia permethrin Partisil 10 Si 7% IPA-hex n alphamethrin, cypermethrin, phenothrin, UV 235 nm pitn voda 69 (250 4,6 mm, 10 µm) deltamethrin, fenpropathrin, tetramethrin, 0,4ñ1,5 ppm fenvalerat, permethrin Separon SIX-CN 7% IPA-hept n alphamethrin, cypermethrin, phenothrin, UV 235 nm pitn voda 69 (150 3,3 mm, 5 µm) deltamethrin, fenpropathrin, tetramethrin, 0,75ñ5 ppm fenvalerat, permethrin 0,4% THF-hept n cypermethrin Silasorb 600 (5 µm) hex n-acetûn (30:1) cypermethrin, deltamethrin, λ-cyhalothrin UV 240 nm ñ

5 Tabuæka II Chir lna HPLC anal za pyrethroidov Stacion rna f za Mobiln f za SeparovanÈ pyrethroidy Detekcia Matrica Lit. a detekën limit a prava vzorky Chir lne separ cie s vyuûitìm pol rnych mobiln ch f z ChiraDex 150 mm trietylamìn s H 2 SO 4 α-cypermethrin UV 210 nm ñ 39 (250 4 mm, 5 µm) v H 2 O (ph 3,5):CH 3 OH (45:55) cypermethrin mm trietylamìn s H 2 SO 4 permethrin 39 vh 2 O (ph 3,5):ACN (60:40) Cyclobond I mm trietylamìn s H 3 PO 4 α-cypermethrin, cypermethrin UV 210 nm ñ 71 (250 4,6 mm, 5 µm) v H 2 O (ph 3,5):CH 3 OH (50:50) (+) (5R,8S,0R)1-(3-20 mm octanov tlmiv roztok resmethrin, permethrin, cyfluthrin, UV 230 nm ñ 72 Aminopropyl)-terguride (ph 4)-ACN (6:4) bifenthrin, phenothrin (150 4,6 mm) 20 mm octanov tlmiv roztok deltamethrin (ph 4)-ACN (4:6) 20 mm octanov tlmiv roztok cyfluthrin UV 230 nm pùda, extrakcia 72 (ph3,7)-acn(7:3) Cyclobond I ACN-H 2 O (25:75) cypermethrin UV 220 nm ñ 57 β-cyklodextrìn ACN-H 2 O (22:78) allethrin (250 4,6 mm, 5 mm) Chir lne separ cie s vyuûitìm nepol rnych a stredne pol rnych mobiln ch f z Pirklova iûnov kolûna 0,15% IPA-hex n dl-allethrin, d-allethrin, α-cypermethrin, UV 230 nm ñ 73 1-A (250 4,6 mm) cypermethrin, fenpropathrin, fenvalerat, tetramethrin 0,05% IPA-hex n permethrin, d-phenothrin, resmethrin Pirklova kovalentn 0,15% IPA-hex n λ-cyhalothrin, cyhalothrin, α-cypermethrin, UV 230 nm ñ 73 kolûna (250 4,6 mm) fenvalerat 0,05% IPA-hex n cyfluthrin, flucythrinat, flumethrin I a (250 4 mm) hex n-1,2-dichlûret n-etanol terallethrin UV 230 nm ñ 74 (500:30:0,15) 742

6 Tabuæka II ñ pokraëovanie Stacion rna f za Mobiln f za SeparovanÈ pyrethroidy Detekcia Matrica Lit. a detekën limit a prava vzorky II b hex n-1,2-dichlûret n-etanol allethrin, bioallethrin 74 (500:30:0,15) hex n-1,2-dichlûret n-etanol fenvalerat (500:30:0,05) hex n-1,2-dichlûret n-etanol cypermethrin, fenpropathrin (500:10:0,05) III c hex n-1,2-dichlûret n-etanol fenvalerat, tetramethrin 74 (500:30:0,15) hex n-1,2-dichlûret n permethrin, phenothrin, (500:1) resmethrin OA-2000 hex n-1,2-dichlûret n-etanol fenvalerat 74 (500:30:0,15) OA-4700 hex n-1,2-dichlûret n-etanol cypermethrin 74 (500:10:0,05) II+OA-4700 hex n-1,2-dichlûret n-etanol cypermethrin 74 (500:10:0,05) Daicel Chiralcel OD hex n-ipa (250:5) cypermethrin, α-cypermethrin, permethrin UV 280 nm ñ 67 (250 4,6 mm, 10 µm) Chiraspher hex n-etanol (99,5:0,5) bifenthrin, fenpropathrin UV 230 nm, ñ 76 (250 4 mm, 5 µm) polarimeter Whelk-O hex n resmethrin UV 254 nm ñ 75 (250 4,6 mm) 2% IPA-hex n tetramethrin 0,2% IPA-hex n permethrin Chiral-2 0,05% trifluoroctov kyselina cypermethrin UV 220 nm ñ 57 (250 4 mm, 5 µm) a 0,05% IPA-hex n Whelk-01 1% IPA-hept n cypermethrin, permethrin UV 240 nm ñ 64 (250 4mm, 5 µm) a Typ I odvoden od deriv tu (S)-1-(α-naftyl)etylamÌnu s (S)-valÌnom chemicky viazan na 3-aminopropyl silikagèl, b typ II odvoden od deriv tu (S)-1-(α-naftyl)etylamÌnu s (S)-terc.leucÌnom chemicky viazan na 3-aminopropyl silikagèl, c typ III (R)-A-(3,5-dinitrobenzoyl)-1-naftylglycÌn iûnovo viazan na 3-aminopropyl silikagèl 743

7 form ch. Plochy pìkov pretestovaciu vzorku a ötandard cyfluthrinu boli porovnanè pouûitìm dekanofenûnu ako vn tornèho ötandardu. Na stanovenie rezìduì syntetick ch pyrethroidov v mlieku a krvi dojn ch kr v bola vyvinut citliv metûda 60,61. Extrakcia bola uskutoënen acetonitrilom, rozdeæovanie n-hex nom a silikagèlov kolûna bola vyëisten n-hex nom a dietylèterom. V ùaûnosù pyrethroidov bola 78ñ91 % s minim lne detegovateænou koncentr ciou 0,001 mg.kg ñ1. Pavan a spol. v pr ci 62 navrhli postup, kdevzorka dezinsekënèho roztoku z bazèna pre oëistu hov dzieho dobytka bola odstreôovanìm a filtr ciou rozdelen na kvapaln a pevn podiel. Tieto podiely vzorky boli analyzovanè HPLC so spektrofotometrick m detektorom pri 275 nm, priëom detekën limit bol 0,2 mg.l ñ1. Autori deklaruj celkov v ùaûnosù 81,2ñ 84,95 %, priëom 20 % deltamethrinu bolo distribuovanè do kvapalnèho podielu vzorky a v pevnom podiely vzorky sa nach dzalo zvyön ch 61,2ñ64,95 %. RezÌdu 63 deviatich pyrethroidov z ovocia a zeleniny boli extrahovanè metanolom, reextrahovanè toluènom a vyëistenè na kolûne obsahuj cej zmes Florisilu a aktìvneho uhlia. V ùaûnosti celèho postupu sa pohybovali pre jednotlivè pyrethroidy v rozmedzì 62,7ñ129,2 %. V pr ci 64 bolo ötudovanè retenënè spr vanie sa zvolenej skupiny pyrethroidov RP HPLC. V mobilnej f ze metanol/ voda (80:20) na oktadecylsilikagèlovej kolûne sa dosiahla pln skupinov separ cia kadethrinu, cypermethrinu, ako aj ËiastoËn separ cia diastereoizomèrov cypermethrinu a pln separ cia diastereoizomèrov permethrinu. ModelovÈ zmesi a aplikaënè formy (komerënè prìpravky) pyrethroidov sa analyzovali v ovzduöì, vyuûitìm sorpciepyrethroidov na polyuret nov penu (PUF) umiestnen vo vzorkovaëi ovzduöia. Problematika zlepöenia separ cie diastereoizomèrov pyrethroidov metûdou RP HPLC bola rieöen 65 na rùznych ötyroch typoch kolûn s a bez prìdavku kovov ch katiûnov Zn 2+ aag +. V raznè rozlìöenie diastereoizomèrov bolo dosiahnutè na dvoch oktadecylov ch kolûnach zapojen ch za sebou s mobilnou f zou metanol/voda s 21,2 mmol.l ñ1 prìdavkom katiûnov Ag +. Bol pouûit aj nov druh chromatografickej kolûny (Chromolith RP-18e Performance). Na tejto kolûne rozlìöenie jednotliv ch pyrethroidov ako aj ich diastereoizomèrov dosahovalo hodnoty v Ëöie ako 1,3 v Ëase do desaù min t. Jedin m nedostatkom bola koel cia dvoch diastereoizomèrov cypermethrinu Achir lna separ cia na norm lnych f zach Norm lnef zov mûd umoûúuje separ ciu diastereoizomèrov alebo pyrethroidov, poprìpade ich oddelenie od interferentov. V hodou tohto mûdu je, ûe ide o adsorpën chromatografiu, kde tvarov selektivita je vöeobecne lepöia ako v rozdeæovacej chromatografii. Diaz a spol. 66 delili stereoizomèry deltamethrinu, cypermethrinu a permethrinu na kolûne Lichrospher Si 60 v mobilnej f ze hex nñbenzèn pouûitìm dvoch detektorov: UV spektrofotometra a polarimetra s diûdov m laserom. VyuûitÌm stereoöpecifickèho polarimetrickèho detektora boli schopnì analyzovaù jednotlivè enantiomèry rozseparovan ch diastereoizomèrov pyrethroidov. RelatÌvne r chla (<30 min t), robustn a nie prìliö drah metûda bola vyvinut pre separ ciu diastereoizomèrov cypermethrinu 67. SilikagÈlov kolûna Partisil a mobiln f za hex nñ chloroformñdietylèter (200:1:6) boli pouûitè pre anal zu a prìpravu kaûdèho diastereoizomèru zberom frakciì. T to metûda sa pouûila aj pri separ cii geometrick ch izomèrov permethrinu za eluën Ëas kratöì ako desaù min t. Pre cypermethrin d vaj ötyri rùzne druhy mobiln ch f z rùznu selektivitu separ cie izomèrov, aleniejedostatoën prezmenu eluënèho poradia. Tieto metûdy poskytuj uûitoënè alternatìvy, ak sa v extraktoch biologick ch materi lov nach dzaj koeluuj ce pìky. NP HPLC (cit. 57 ) sa separoval cypermethrin a cyfluthrin (4-fluorobenzylov analûg cypermethrinu) na silikagèli a na silikagèli modifikovanom NO 2 na ötyri p ry enantiomèrov. EluËnÈ poradie allethrinu na silikagèli (3% tetrahydrofur n (THF) v hex ne) je takè, ûe cis- eluuje pred trans-allethrinom a na silikagèli modifikovanom NO 2 (0,5% THF v hex ne) cis-allethrin izomèryeluuj predtrans-izomèrmi ñ predstavuj ce bioallethrin. S separovanè v eluënom poradì [1R, trans, αs]-allethrin pred [1R, trans, αr]-allethrinom. MetÛda uveden v pr ci Koppena 68 bola vyuûit presedem pyrethroidov prìtomn ch ako jednoduchè pyrethroidy aktìvnych ingredienciì v jednej z troch foriem: emulzia, suspenzia alebo vo vode dispergovateænè granule. PredbeûnÈ experimenty pouk zali na separ cie λ-cyhalothrinu a ötyroch diastereoizomèrov cyfluthrinu pod 20 min t. Rieger 69 vo svojej pr ci popìsal separ ciu a stanovenie niektor ch pyrethroidov vo vode na silikagèlovej kolûne a na kolûnes viazan m nitrilom pouûitìm IPA v hex nealebo hept ne ako mobiln ch f z. Pre pln separ ciu ötyroch enantiomèrnych p rov cypermethrinu na kolûne s pol rnou ñcn viazanou f zou bola ako optimum vybran mobiln f za 0,4% THF v hept ne. Zmes pyrethroidov sa v pr ci Davidyuka a spol. 70 mobilnou f zou n-hex nñacetûn (40:1 a 6:1) na kolûne Silasorb 600 neseparovala. Tvar chromatografick ch pìkov detegovan ch pri 240 nm bol pri mobiln ch f zach n-hex nñacetûn (10:1 a 20:1) skreslen, Ëo komplikuje kvantitatìve vyhodnotenie. SelektÌvna separ cia bola dosiahnut pri mobilnej f ze (30:1). Bolo zistenè, ûe pouûitie mobilnej f zy je najlepöie pri teplote pod 20 C. Pokles teploty pod 20 C mal za n sledok zv öenie retencie syntetick ch pyrethroidov Chir lnesepar cie s vyuûitìm pol rnych mobiln ch f z Chir lne separ cie sa vyuûìvaj na delenie racemick ch alebo enantiomèrne obohaten ch zmesì na ich enantiomèry. äevëìk a spol. 39 separovali pyrethroidy s vyuûitìm cyklodextrìnov ako chir lnych selektorov metûdou HPLC a MECC. V porovnanì s HPLC, MECC umoûúuje enantiosepar ciu fenpropathrinu a lepöiu separ ciu cypermethrinu. Na druhej strane HPLC pon ka lepöie moûnosti pri anal ze permethrinu. Pri niûöej teplote sa lepöie separuje prv enantiomèrny p r permethrinu. Pri vyööej teplote t to separ cia nie je vyhovuj ca z pohæadu separ cie vöetk ch enantiomèrov, ale d va dobrè moûnosti pre separ ciu druhèho enantiomèrneho p ru. V pr ci Lemra a spol. 71 bol ötudovan vplyv rùznych experiment lnych parametrov (zloûenie mobilnej f zy, prietok, teplota a d vkovanè mnoûstvo) na chir lnu separ ciu pouûitìm dvoch stacion rnych f z β-cyklodextrìnov viazan ch na silikagèli. Skonötatovalo sa, ûekaûd parameter pri- 744

8 spieva k fin lnemu v sledku. Pyrethroidy s neutr lne l tky, a toto jedùvod, preëo vplyv ph niejeoëak van. Napriek tomu u α-cypermethrinu zv öenie ph viedlo k znìûeniu relatìvnej retencie pre jeho enantiomèry z 1,53 na 1,43 na kolûne ChiraDex. KolÛna Cyclobond I umoûúuje delenie oboch enantiomèrov, ale stanovenie jednèho v nadbytku toho druhèho nie jemoûnè. PouûitÌm kolûny Cyclobond I bolo rozlìöen ch viacero pìkov v porovnanì s kolûnou plnenou f zou ChiraDex. Priame 72 enantiosepar cie kyseliny chryzantèmovej [2,2- -dimetyl-3-(2-metylpropenyl)-cykloprop nkarboxylov kyselina] a jej halogèn-substituovan ch analûgov boli systematicky ötudovanè HPLC pouûitìm chir lnej stacion rnej f zy s naviazan m alkaloidom ñ deriv tom terguridu v kombin cii s DAD a chiroptick m detektorom. IzomÈry s konfigur ciou (1R) vûdy eluuj pred izomèrmi s konfigur ciou (1S). Selektivita separ cie cis- a trans-izomèrov bola silneovplyvnen ph mobilnej f zy, k m enantioselektivita zostala bez zmeny. T to metûda bola pouûit pre monitorovanie hydrolytick ch degradaën ch produktov cyfluthrinu v pùde pri laboratûrnych podmienkach. Vöetky ötyri 57 trans-izomèry allethrinu boli separovanè na chir lnej kolûne Cyclobond I. Cis-izomÈry koeluovali v jednom pìku. Na cyklodextrìnovej chir lnej kolûne Cyclobond I bolo pozorovan ch p ù pìkov, ak boli d vkovanè roztoky cypermethrinu v metanole alebo acetonitrile Chir lnesepar cie s vyuûitìm nepol rnych a stredne pol rnych mobiln ch f z Norm lnef zov mûd sa pre chir lne separ cie pouûìva Ëastejöie pre lepöiu enantioselektivitu pre jednotlivè enantiomèry. Je v hodn pre prìpravu Ëist ch enantiomèrov. PouûitÌm Pirklov ch kolûn iûnovèho typu 1-A ((R)-N- -(3,5-dinitrobenzoyl)fenylglycÌnov chir lna stacion rna f za viazan iûnovou v zbou na aminopropylsilikagèl) a novöieho kovalentne viazanèho typu ((R)-N-(3,5-dinitrobenzoyl)fenylglycÌnov chir lna stacion rna f za viazan kovalentnou v zbou na aminopropylsilikagèl ako amid) bolo sk man ch p tn sù syntetick ch pyrethroidov. plnè rozdelenie pìkov enantiomèrov bolo dosiahnutè takmer vo vöetk ch prìpadoch 73. VyvinutÈ boli tieû chir lne stacion rne f zy (CSP) klasifikovanè ako deriv ty moëoviny (typ I a II) (cit. 74 ). Typ I je odvoden od deriv tu (S)-1-(α-naftyl)etylamÌnu s (S)-valÌnom a typ II od deriv tov (S)-1-(α-naftyl)etylamÌnu s (S)-terc.leucÌnom. V obidvoch typoch stacion rnych f z s funkënè skupiny chemicky viazanè na 3-aminopropyl silikagèl. Tieto typy CSP s ËinnÈ pre separ ciu racemick ch zl ËenÌn. Taktieû bol vyvinut modifikovan typ Pirklovej kolûny: (R)-N-(3,5- -dinitrobenzoyl)-1-naftylglycìn iûnovo viazan na 3-aminopropyl silikagèl (III). Chir lnestacion rnef zy IñIII s ËinnÈ pre enantiomèrnu separ ciu insekticìdov. Zlepöenie rozlìöenia bolo dosiahnutè pre rùzne substituovanè pyrethroidy obsahuj ce jedno aû tri chir lne centr. EnantiomÈry 75 niektor ch agrochemik liì obsahuj cich π- -aromatick systèm s akceptorom vodìkovej v zby blìzko stereogènneho centra boli separovanè na chir lnej stacion rnej f ze Whelk-O. Na tejto f ze boli delenè trans-diastereoizomèry resmethrinu a tetramethrinu. Permethrin s dvoma chir lnymi centrami bol rozdelen na ötyri enantiomèry. S nchez 76 separoval enantiomèry bifenthrinu a fenpropathrinu na kolûne Chiraspher a analyty detegoval UV fotometrick m detektorom a polarimetrom s diûdov m laserom. RozlÌöenie enantiomèrov t chto dvoch pyrethroidov sa pohybovalo v rozmedzì 0,66ñ1,04 a najlepöì polarimetrick sign l bol zìskan pri zmesi hex nñetanol (95,5:0,5). Tri diastereoizomèry 67 cypermethrinu boli separovanè na z kladn lìniu na ich enantiomèrne p ry s Ëasom anal zy pod 50 min t. Jeden diastereoizomèr nebol rozlìöen na enantiomèry. IzomÈry boli plne separovanè pri mobilnej f ze hex nñ2-propanol (IPA) (250:1), ale s podstatne dlhöìm eluën m Ëasom (cca70 min). T to metûda je vhodn pre prìpravu enantiomèrov cypermethrinu frakën m zberom. Pouûit chir lna kolûna bola nevhodn pre anal zu ötyroch enantiomèrov permethrinu, ale v born pre separ ciu α-cypermethrinu. DiastereoizomÈrna 56 a enantiomèrna selektivita bola pozorovan pre cypermethrin na chir lnej stacion rnej f ze Pirklovho typu, avöak pre allethrin separ cia nebola pozorovan. DÙvodom s veæmi silnè interakcie so stacion rnou f zou, maj ce za n sledok dlhè retenënè Ëasy a ireverzibiln adsorpciu. Boli optimalizovanè podmienky 63 separ cie cypermethrinu a permethrinu na chir lnej kolûne Whelk-01 (R,R) v1% IPA v n-hept ne. Z v sledkov vyplynulo, ûe trans-diastereoizomèr permethrinu bol rozseparovan, k m cis- nebol. Cypermethrin bol rozseparovan len na diastereoizomèry bez enantiosepar cie. 3. Z ver Rozsiahleaplik cieinsekticìdnych pyrethroidov a ich ötrukt rneërty si pri v voji validovan ch metûd HPLC preich anal zu vyûaduj rieöiù viacero okruhov problèmov. Separ - cia diastereoizomèrov pyrethroidov sa uskutoëúuje metûdami achir lnej HPLC v NP a RP systèmoch, priëom za NP podmienok s diastereoizomèry pyrethroidov æahöie separovateænè 77,78. Separ cia enantiomèrov sa robì v systèmoch chir lnej chromatografie vyuûìvaj cich rùznorodè chir lne stacion rnef zy, priëom v Ëöina sa uskutoëúujev nepol rnych a stredne pol rnych mobiln ch f zach. speönosù NP systèmov vypl va priamo zo ötrukt rnych Ë t pyrethroidov, kde NP systèmy HPLC s vyuûìvanè hlavne pre anal zu modelov ch zmesì pyrethroidov a anal zu pyrethroidov v technologick ch vzork ch a produktoch. Naproti tomu preanal zu pyrethroidov v komplexn ch re lnych vzork ch (potraviny, pùda, voda, ovzduöie) sa viac vyuûìva RP systèm, Ëo pravdepodobne s visì s jeho v Ëöou robustnosùou a odolnosùou voëi vzorkou zaprìëinen m zmen m systèmu. Schopnosù pol rnych mobiln ch f z rozruöovaù interakcie pyrethroidov s matricov mi zloûkami hr v znamn lohu nielen pri anal ze diastereoizomèrov, ale aj enantiomèrov pyrethroidov. NajËastejöie pouûìvanou detekënou technikou je spektrofotometria v UV oblasti (220ñ281 nm), prìpadne sa vyuûìva polarimetrick detektor. Pretoûe pyrethroidy v komerën ch produktoch pozost vaj zo zmesi oboch optick ch (1R; 1S alebo +; ñ) a geometrick ch (cis-, trans-) izomèrov, s Ëasn trend smeruje k potrebe enantiomèrnych stanovenì, a t m k zv öenèmu poëtu chir lnych separ ciì. Z uveden ch Ël nkov vypl va, ûe v Ëöina separ ciì je zameran na optimaliz ciu separ cie ötandardn ch l tok, len niekoæko pr c sa zaober stanovenìm rezìduì pyrethroidov, dùvo- 745

9 dom Ëoho mùûebyù znaën obtiaûnosù spracovania matrìc. Preto je t to problematika pre analytick ch chemikov neust le aktu lna. Zoznam skratiek ECD FID MECC CE LIF RP NP DAD SFE IPA ACN THF detektor s elektrûnov m z chytom plameúovoionizaën detektor micel rna elektrokinetick chromatografia kapil rna elektroforèza laserom indukovan fluorescencia reverznef zov norm lnef zov detektor s diûdov m poæom superkritick fluidn extrakcia 2-propanol acetonitril tetrahydrofur n T to pr ca vznikla za podpory VEGA projektu Ë. 1/6222/ 99 a grantu UK Ë. 66/2001/UK. LITERAT RA 1. Cremlyn R.: Pesticidy. SNTL, Praha Pac k J.: vod do studia organickè chemie. SNTL, Praha Williams A.: Agrochemical Chirality. Agrow Reports DS70, str. 41. PJB Publications, Richmond Matsumura F.: 6 th IUPAC Congress of Pesticide Chemistry, Ottawa, 10ñ15 August 1986 (Greenhalgh R., Roberts T. R., ed.), str Blackwell Scientific Publications, Oxford Buser H. P., Francotte E., v knihe: Chiral Separations: Applications and Technology (Ahuja S., ed.), str American Chemical Society, Washington, D.C Casida J. E., Ruzo L. O.: Pestic. Sci. 11, 257 (1980). 7. Demoute J. P.: Pestic. Sci. 27, 375 (1989). 8. Tvendten S.: The Best Control, 2. vyd. na CD ROM; Vijverberg H. P. M., Vandenbercken J.: Crit. Rev. Toxicol. 21, 105 (1990). 10. AldridgeW. N.: Crit. Rev. Toxicol. 21, 89 (1990). 11. Ray D. E., v knihe: Handbook of Pesticide Toxicology (Hayes W. J., Laws E. R., ed.), str Academic Press, San Diego Ray D. E., Forshaw P. J.: Clinical Toxicology 38, 95 (2000). 13. Papadopoulou-Mourkidou E.: Anal. Methods Pestic. Plant Growth Regul. 16, 179 (1988). 14. Yoshioka H., Miyamoto J.: Kagaku-to-Seibutu (Chemistry and Biology) 14, 427 (1976). 15. Miyamoto J., Yoshioka H.: Kagaku-to-Seibutsu (Chemistry and Biology) 14, 549 (1976). 16. Dombek V.: Chem. Listy 82, 1163 (1982). 17. Wan H. B., Wong M. K., Lim P. Y., Mok C. Y.: J. Chromatogr., A 662, 147 (1994). 18. Navickiene S., Kato M. H., Polese L., Minelli E. V., RiberioM.L.:FreseniusíJ.Anal.Chem.360, 252 (1998). 19. Jin H., Webster G. R. B.: Freseniusí J. Anal. Chem. 360, 573 (1998). 20. Hadfield T., Sadler J. K., Bolygo E., Hill I. R.: Pestic. Sci. 34, 207 (1992). 21. Nakamura Y., Tonogai Y., Tsumura Y., Ito Y.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 76, 1348 (1993). 22. Woin P.: Sci. Total. Environ. 156, 67 (1994). 23. Pang G. F., Fan C. L., Chao Y. Z., Zhao T. S.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 77, 738 (1994). 24. Pang G. F., Chao Y. Z., Fan C. L., Zhang J. J., Li X. M.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 78, 1481 (1995). 25. Class T. J., Kintrup J.: Freseniusí J. Anal. Chem. 340, 446 (1991). 26. Simonaitas R. A., Cail R. S.: Chromatographia 18, 556 (1984). 27. Bland P. D.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 68, 592 (1985). 28. Ogierman L., Sobocik A.: Chem. Anal. (Warsaw) 36, 97 (1991). 29. GutiÈrez A. F., Vidal J. L. M., LiÈbanas F. J. A., Casado A. G., VÌlchez J. L.: Freseniusí J. Anal. Chem. 360, 568 (1998). 30. VÌlchez J. L., Espinosa P., Arrebola F. J., Casado A. G.: Anal. Sci. 13, 817 (1997). 31. Cayley G. R., Simpson B. W.: J. Chromatogr., A 356, 123 (1986). 32. Papadopoulou-Mourkidou E., Iwata Y., Gunter F.: J. Agric. Food Chem. 31, 629 (1983). 33. Mao J., Erstfeld K. M., Fackler P. H.: J. Agric. Food Chem. 41, 596 (1993). 34. Meinard C., Bruneau P., Roche M.: J. Chromatogr., A 349, 105 (1985). 35. Meinard C., Bruneau P., Perronnet J.: J. Chromatogr., A 349, 109 (1985). 36. Ashraf S., BartleK. D., Clifford A. A., Davies I. L., Moulder R.: Chromatographia 30, 618 (1990). 37. Nishikawa Y.: Anal. Sci. 7, 637 (1991). 38. Nishikawa Y.: Anal. Sci. 8, 817 (1992). 39. äevëìk J., Lemr K., Str nsky Z., VeËe a T., Hlav Ë J.: Chirality 9, 162 (1997). 40. Corbini G., Biondi C., Proietti D., Dreassi E., Corti P.: Analyst 118, 183 (1993). 41. Hern ndez P., Vicente J., Hern ndez L.: Freseniusí J. Anal. Chem. 334, 550 (1989). 42. Coomber D. C., Tucker D. J., Bond A. M.: Anal. Chem. 68, 1267 (1996). 43. Raju R. V. P., Naidu R. R.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 77, 748 (1994). 44. KarcherA.,ElRassiZ.:Electrophoresis18, 1173 (1997). 45. KarcherA.,ElRassiZ.:Electrophoresis21, 2043 (2000). 46. Dombek V.: J. Chromatogr. 545, 427 (1991). 47. Coly A., Aaron J. J.: Analyst 119, 1205 (1994). 48. Hill A. S., Mcdam D. P., Edward S. L., Skerritt J. H.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 41, 2011 (1993). 49. Wengatz I., Stoutamire D. W., Gee S. J., Hammock B. D.: J. Agric. Food Chem. 46, 2211 (1998). 50. Di Muccio A., Pelosi P., Barbini D. A.: J. Chromatogr., A 833, 19 (1999). 51. Wang I.-H., Subramanian V., Moorman R., Burleson J., Ko J.: J. Chromatogr., A 766, 277 (1997). 52. Wintersteiger R., Ofner B., Juan H., Windisch M.: J. Chromatogr., A 660, 205 (1994). 746

10 53. Haddad P. R., Brayan J. G., Sharp G. J., Dilli S.: J. Chromatogr., A 461, 337 (1989). 54. Frenich A. G., Galera M. M., Vidal J. L. M., GarcÌa M. D. G.: J. Chromatogr., A 727, 27 (1996). 55. Galera M. M., Vidal J. L. M., Frenich A. G., GarcÌa M. D. G.: J. Chromatogr., A 727, 39 (1996). 56. Atienza J., JimÈnez J. J., Bernal J. L., MartÌn M. T.: J. Chromatogr., A 655, 95 (1993). 57. Kutter J. P., Class T. J.: Chromatographia 33, 103 (1992). 58. Brouwer E. R., Struys E. A., Vreuls J. J., Brinkman U. A. T.: Freseniusí J. Anal. Chem. 350, 487 (1994). 59. Harbin D. N.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 78, 1335 (1995). 60. Bissacot D. Z., Vassilieff I.: Vet. Human. Toxicol. 39, 6 (1997). 61. Bissacot D. Z., Vassilieff I.: J. Anal. Toxicol. 21, 397 (1997). 62. Pavan F. A., Dallago R. M., Zanella R., Martins A. F.: J. Agric. Food Chem. 47, 174 (1999). 63. Pang G. F., Chao Y. Z., Liu X.S., Fan C. L.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 78, 1474 (1995). 64. Rom nov K.: Diplomov pr ca. PriF UK, Bratislava Koöick M.: Diplomov pr ca. PriF UK, Bratislava DÌaz A. N., S nchez F. G., Pareja A. G.: J. Chromatogr. Sci. 36, 210 (1998). 67. Edwards D. P., Ford M. G.: J. Chromatogr., A 777, 363 (1997). 68. Koppen B.: J. Assoc. Off. Anal. Chem. 77, 810 (1994). 69. Rieger S.: Acta Univ. Palacki, Olomouc, Fac. Rerum Nat., Chem. 29, 111 (1990). 70. Davidyuk E. I., Demchenko V. F., Klisenko M. A.: J. Anal. Chem. (Moscow) 52, 1058 (1997). 71. Lemr K., äevëìk J., Friedeck D., Jonakov A., Jirovsk D.: Acta Univ. Palacki, Olomouc, Fac. Rerum Nat., Chem. 38, 41 (1999). 72. Dondi M., Flieger M., Olöovsk J.: J. Chromatogr., A 859, 133 (1999). 73. Lisseter S. G., Hambling S. G.: J. Chromatogr., A 539, 207 (1991). 74. i N., Kitahara H., Kira R.: J. Chromatogr., 515, 441 (1990). 75. Welch Ch. J., Szczerba T.: Enantiomer 3, 37 (1998). 76. S nchez F. G., DÌaz A. N., Pareja A. G.: J. Chromatogr. 754, 97 (1996). 77. Mourot D., DelÈpine B., Boisseau J., Gayot G.: J. Chromatogr., A 168, 277 (1979). 78. Sapiets A., Swaine H., Tandy M. J., v knihe: Analytical Methods for Pesticides and Plant Growth Regulators XIII.: Synthetic Pyrethroids and Other Pesticides (Yweig G., Sherma J., ed.), str. 33. Academic Press, Orlando K. Rom nov and M. Hutta (Department of Analytical Chemistry, Faculty of Natural Sciences, Comenius University, Bratislava, Slovak Republic): HPLC Analysis of Pyrethroids Applications of HPLC and determination of pyrethroids in different matrices (soil, water, air, fruits, vegetables and others) are reviewed. Their analysis still attracts attention due to their wide use as both household and industrial insecticides on one hand and controversial nature of their use on the other. From theanalytical point of view, theproblems liein difficult separation of enantiomers and diastereoisomers because almost all pyrethroids are chiral compounds with 1ñ4 chirality centers. Zaveden farmaceutick firma hled do v zkumnèho oddïlenì absolventy Väñspecialisty na v voj a validaceanalytick ch metod (HPLC, GC, titrace). Praxe v oboru a znalost AJ nutn. é dosti s profesnìm ûivotopisem zaölete na Interpharma Praha, a.s., Komo ansk 955, Praha 12, fax 02/ , interpharma@interpharma-praha.cz, 747