CHORUS ANTI-CCP REF REF 86094/12. DIESSE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose, Monteriggioni (Siena) Italy

Transcript

1 /GK/ 1/14 CHORUS ANTI-CCP REF REF 86094/12 DISE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose, Monteriggioni (Siena) Italy Modifications apportées à la révision courante Τροποποιήσεις που εισήχθησαν στην τρέχουσα διόρθωση Changes introduced in the current revision Chapitre Κεφάλαιο Section REF 5 9

2 2/14 4. PRECAUTIONS UNIQUEMT POUR DIAGNOSTIC IN VRO. INSTRUCTIONS POUR L UTILISATION CHORUS ANTI-CCP Pour la détermination semi-quantitative des anticorps IgG anti-ccp Uniquement pour diagnostic in vitro. 1. UTILISATION Méthode immunoenzymatique pour la détermination semiquantitative des anticorps IgG anti-peptides cycliques citrullinés. (anti-ccp) dans le sérum humain en utilisant un dispositif à usage unique appliqué aux appareils Chorus et Chorus TRIO. 2. INTRODUCTION L arthrite rhumatoïde (RA) représente la maladie inflammatoire articulaire la plus répandue, avec une prévalence qui oscille entre 0.5% et 1% à l échelle mondiale. Les anticorps dirigés contre le peptide cyclique citrulliné (anti- CCP) sont extrêmement spécifiques pour l arthrite rhumatoïde (RA); leur détermination a été introduite au nombre des critères de classification (ACR: American College of Rheumatolgy) et de diagnostic de la maladie. 3. PRINCIPE DE LA METHODE Le dispositif anti-ccp est prêt à l usage pour la détermination des anticorps anti-ccp dans les appareils CHORUS. Le test se base sur le principe ELISA. L antigène se lie à la phase solide. En le faisant incuber avec du sérum humain dilué, les immunoglobulines spécifiques se lient à l antigène. Après lavage pour éliminer les protéines qui n ont pas réagi, on effectue l incubation avec le conjugué constitué d anticorps antiimmunoglobulines humaines conjuguées avec du peroxyde de raifort. On élimine le conjugué qui ne s est pas lié et on ajoute le substrat TMB. La couleur qui se développe est proportionnelle à la concentration des anticorps spécifiques présents dans le sérum en examen. Les dispositifs à usage unique contiennent tous les réactifs pour réaliser le test lorsqu ils sont appliqués aux appareils Chorus. Ce coffret contient des matériaux d origine humaine qui ont été contrôlés et trouvés négatifs à la suite de l'exécution de tests approuvés par la FDA, tant pour le recherche de HbsAg que pour celles des anticorps anti- VIH-1/VIH-2 et anti-vhc. Etant donné qu'aucun test diagnostic ne peut offrir une garantie absolue quant à l'absence d'agents infectieux, tout matériel d'origine humaine doit être considéré comme étant potentiellement infecté. Tous les réactifs et échantillons doivent être maniés conformément aux normes de sécurité normalement adoptées par les laboratoires. Mise au rebut des résidus: les échantillons de sérum, les calibreurs et les bains utilisés doivent être traités comme étant des résidus infectés. Ils doivent donc être éliminés conformément aux réglementations légales en vigueur. Avertissements pour la sécurité personnelle 1. Ne pas pipeter avec la bouche. 2. Utiliser des gants à jeter et des lunettes de protection lors de la manipulation des échantillons et durant l essai. 3. Se laver soigneusement les mains une fois le test terminé. 4. Les réactifs suivants contiennent de faibles concentrations en substances nocives ou irritantes : a) Le conjugué et les contrôles contiennent du phénol b) Le substrat est acide. Si un réactif entre en contact avec la peau ou avec les yeux, les laver à grande eau. 5. Les acides neutralisés et les déchets liquides doivent être décontaminés avec un volume suffisant de solution d hypochlorite de sodium pour que la concentration finale soit de 1% minimum. Un contact de 30 minutes avec cette solution est nécessaire pour garantir une décontamination efficace. 6. En cas de renversement accidentel de matériaux potentiellement infectés, essuyer immédiatement avec du papier absorbant ; la zone contaminée devra être décontaminée avec, par exemple, de l hypochlorite de sodium (1%), avant de continuer le travail. En présence d un acide, veiller à bien essuyer le plan de travail avant d utiliser de l hypochlorite de sodium. Tout matériel (notamment les gants) utilisé pour décontaminer les zones salies par d éventuels renversements accidentels, doit être considéré comme potentiellement infecté et éliminé. Ne pas mettre en autoclave de matériaux contenant de l hypochlorite de sodium. Précautions analytiques Avant usage, laisser les dispositifs à utiliser à température ambiante ( C) et utiliser dans les 60 minutes. 1. Eliminer les dispositifs avec le substrat (puits 4) coloré de bleu.

3 3/14 2. En ajoutant l échantillon dans le puits, il faut s'assurer qu il est parfaitement distribué sur le fond. 3. Contrôler la présence effective des réactifs dans le dispositif et l intégrité du dispositif. Il ne faut pas utiliser des dispositifs qui, au contrôle visuel, présentent l absence d'un réactif. 4. Les dispositifs doivent être utilisés avec l instrument Chorus, en suivant attentivement les instructions pour l usage et le Manuel de l instrument. 5. S'assurer que l instrument Chorus est réglé comme il se doit (voir le Manuel d utilisation Chorus). 6. Ne pas modifier le code à barres situé sur la poignée du dispositif à fin que l'instrument puisse le lire correctement. 7. Eviter l utilisation de congélateurs auto-dégivrants pour conserver les échantillons. 8. Les codes à barres défectueux peuvent être insérés manuellement dans l instrument. 9. Ne pas exposer les dispositifs à une forte illumination ni aux vapeurs d hypochlorite pendant la conservation et l usage. 10. Les échantillons fortement hémolysés, ou les échantillons présentant une contamination microbienne peuvent causer des résultats erronés. 11. Avant d insérer le dispositif dans l instrument Chorus, contrôler que le puits de réaction ne contient pas de corps étrangers. 12. Pipeter le sérum examiné (50 µl) dans le puits 1 du dispositif (voir la figure). 13. Ne pas utiliser le dispositif après la date de péremption. 14. Controller si l instrument a la connexion avec la Washing Buffer Autoimmunity REF COMPOSION DU COFET ET PREPARATION D REACTIFS Le coffret suffit pour réaliser 36 déterminations (REF 86094). Le coffret suffit pour réaliser 12 déterminations (REF 86094/12). DD DISPOSIFS 6 emballages contenant 6 dispositifs chacun (REF 86094). 2 emballages contenant 6 dispositifs chacun (REF 86094/12). Description: Position 8 : Place disponible pour l étiquette avec le code à barres Position 7 : Vide Position 6 : PUS DE LA MICROPLAQUE Sensibilisé avec des peptides synthétiques hautement purifiés contenant des résidus de citrulline Position 5 : PUS Non sensibilisé. Position 4 : SUBSTRAT TMB 0.3 ml Contenu : Tétraméthylbenzidine (à 0.26 mg/ml) et H2O2 à 0.01% stabilisés dans un tampon citrate (à 0.05 mol/l). ph = 3.8 Position 3 : DILUANT POUR L ECHANTILLONS 0.35 ml Contenu : solution saline protéique contenant du Proclin (0.1%) Position 2 : CONJUGUE 0.3 ml Contenu: anticorps monoclonaux anti-igg humaines marqués avec la peroxydase, dans une solution tamponnée au phosphate contenant du phénol à 0.05 % et du Bronidox à 0.02%. Position 1 : PUS VIDE dans lequel l utilisateur doit distribuer le sérum non dilué. Usage : équilibrer un sachet à température ambiante, découper le sachet, sortir les dispositifs nécessaires, et placer les autres non utilisées dans le sachet en plastique avec le gel de silice; chasser l air et fermer le sachet par pression sur la fermeture. Conserver à 2-8 C. CALIBRATOR CALIBRATEUR 1 x ml Contenuto: Sérum humain dilué. Prêt à l usage. CONTROL + CONTROLE POSIF 1 x ml Contenuto: Sérum humain dilué. Prêt à l usage. AUTRE MATERIEL NECSAIRE MAIS NON FOURNI WASHING BUFFER AUTOIMMUNY REF CLEANING SOLUTION 2000 REF SANIZING SOLUTION REF CHORUS NEGATIVE CONTROL/SAMPLE DILUT REF Eau distillée ou déionisée Instruments de laboratoire en verre normaux: cylindres, éprouvettes, etc. Micropipettes capables de prélever de façon précise des volumes de µl Gants à jeter Solution à 5 % d hypochlorite de sodium Récipients pour les matériaux potentiellement infectés. 6. MODAL DE CONSERVATION ET STABILE D REACTIFS Les réactifs doivent être conservés à +2-8 C. En cas de température de conservation incorrecte, il faut refaire le calibrage et contrôler l'exactitude du résultat en recourant au sérum de contrôle (voir section 9 : validation du test). La date de péremption est imprimée sur chaque composant et sur l étiquette apposée sur la confection. Les réactifs ont une stabilité limitée après ouverture et/ou préparation: DISPOSIFS CALIBRATEUR CONTROLE POSIF 8 semaines à 2/8 C 8 semaines à 2/8 C 8 semaines à 2/8 C

4 4/14 7. TYPE D ECHANTILLON ET CONSERVATION L échantillon est représenté par le sérum obtenu par du sang prélevé par prise de sang normale et manipulé comme recommandé dans les procédures standard de laboratoire. Le sérum frais peut être conservé pendant 4 jours entre 2 et 8 C, pour des périodes de conservation plus longues, congeler à - 20 C. Peut subir jusqu à un maximum de troi décongelations.l échantillon peut subir jusqu à un maximum de 3 décongélations. Eviter l utilisation de congélateurs autodégivrants pour conserver les échantillons. Après décongélation, agiter avec soin avant le dosage. La nonactivation à la chaleur peut provoquer des résultats erronés. La qualité de l échantillon peut être sérieusement influencée par la contamination microbienne qui peut porter à des résultats erronés. Des échantillons fortement lipémiques, ictériques, ou contaminés ne devraient pas être utilisés. Le test ne s applique pas au plasma humain. 8. PROCEDURE 1. Ouvrir le sachet (du côté contenant la fermeture à pression), et sortir le nombre de dispositifs nécessaires et conserver les autres dans le sachet après avoir chassé l air. 2. Contrôler visuellement l état du dispositif selon les indications reportées au paragraphe 4 : «Précautions analytiques». 3. Dispenser 50 µl de sérum non dilué dans le puits no. 1 de chaque dispositif à analyser; il faut utiliser un dispositif pour le calibrateur à chaque changement de lot. 4. Introduire les dispositifs dans l instrument Chorus. Effectuer le calibrage (si nécessaire) et le test selon les indications du Manuel d'instruction de l instrument. 9. VALIDATION DU TT Utiliser le sérum de contrôle pour vérifier l exactitude du résultat obtenu (on l utilise comme décrit dans le Manuel d utilisation du CHORUS). Si l instrument signale que le sérum de contrôle présente une valeur au dehors de la fourchette d acceptabilité, il faut refaire le calibrage. Les résultats précédents viennent corrigés automatiquement. Si le résultat du sérum de contrôle n est toujours pas compris dans la plage d'acceptabilité, contacter le Scientific Support. Tél. : Fax : scientificsupport@diesse.it 10. INTERPRETATION D RULTATS L appareil Chorus fournit le résultat en AU/ml résultat calculé sur base d un graphique dépendant du lot mémorisé dans l appareil. Les résultats peuvent être interprétés comme suit: POSIF quand le résultat est > 18.0 AU/ml NEGATIF quand le résultat est < 12.0 AU/ml DOUTEUX/ÉQUIVOQUE quand le résultat est compris entre 12.0 et 18.0 AU/ml En cas de résultat incertain, refaire le test. Si le résultat reste douteux, répéter l échantillon. 11. LIM DU TT Chaque résultat positif oblige à faire une interprétation attentive. Le test ne peut être utilisé seul pour un diagnostic clinique. Un résultat négatif n'exclut pas l éventualité d une infection. Le résultat du test doit toujours être évalué en tenant compte des données cliniques et provenant d'autres procédures diagnostiques. 12. PLAGE D ÉTALONNAGE Plage d Etalonnage AU/ml. Pour les échantillons >300AU/ml répéter le test en pré-diluant l'échantillon dans Negative Control/Sample Diluent (PF non fourni avec le kit). 13. SPÉCIFICÉ DE L'ANALYSE 5 échantillons ont été testés, auxquels les perturbateurs suivants ont été ajoutés: Facteur rhumatoïde ( UI/ml) Bilirubine ( mg/dl) Triglycérides ( mg/dl) Hémoglobine (5-30 mg/ml) La présence dans le sérum examiné des perturbateurs susmentionnés n altère pas le résultat du test. 14. RÉACTIONS CROISÉ 232 sérums provenant de la sérothèque et présentant une caractérisation clinique reproduite dans le tableau suivant ont été testés : Groupe d échantillons n TOT Nég < 12AU/ml Dout AU/ml Pos > 18AU/ml Donneurs sains Echantillons de routine ANA Thyroïdite IgM positifs pour la rubéole IgM positifs pour la Legionellose Positifs pour les chlamydia Positifs pour la salmonelle g. IgM positifs pour la toxoplasmose p. IgM positifs pour les mycoplasmes Positifs pour l Antistreptolysine

5 5/14 IgM-positifs pour l EBV IgM-positifs pour le parvovirus IgM-réactifsLUE La spécificité clinique est la suivante : Donneurs sains 88/90 = 97.8 % (CI95%: %) Echantillons de routine 58/58 = 100 % (CI95%: %) Maladies auto-immunes 33/34 = 97.1% (CI95%: %) Maladies infectieuses 50/50 = 100% (CI95%: %) 15. ÉTUD DE COMPARAISON Dans le cadre d un protocole d expérimentation, 174 échantillons caractérisés à l aide d un kit en vente dans le commerce ont été analysés. Diesse Référence + - Total Total Percent Positive Agreement (~Sensibilité diagnostique):88.9% CI95%: Percent Negative Agreement: (~Spécificité diagnostique): 97.8% CI95%: BIBLIOAPHIE 1. The use of citrullinated peptides and proteins for the diagnosis of rheumatoid arthritis Ger JM Pruijnet et al., Arthritis Research & Therapy 2010, 12: Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritis-specific autoantibodies.g A Schellekens et al. J Clin Invest January 1; 101(1): Rheumatoid arthritis classification criteria: an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative iniziative D. Aletaha et al. Ann Rheum Dis 2010;69: doi: /ard Anti-CCP antibodies: the past, the present and the future Walther J. van Venrooij et al. Nature Reviews Rheumatology 7, (July 2011) Fabriqué par DISE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose Monteriggioni (Siena) Italy Le taux de concordance entre les deux méthodes est excellent, avec une valeur de K (Cofficient Kappa de Cohen) de PRECISION ET REPRODUCTIBILÉ INTRA-SÉANCE INTER-SÉANC Echantillon Moyenne Moyenne Echantillon Moyenne INTER-LOTS TRE INSTRUMTS Moyenne

6 GK 6/14 4. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΜΟΝΟ ΓΙΑ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΧΡΗΣΗ IN VRO. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ CHORUS ANTI-CCP Για τον ημιποσοτικό προσδιορισμό των αντισωμάτων IgG έναντι CCP Μόνο για διαγνωστική χρήση in vitro 1. ΧΡΗΣΗ Ανοσοενζυμική μέθοδος για τον ημιποσοτικό προσδιορισμό των αντισωμάτων IgG έναντι του κυκλικού κιτρουλλινοποιημένου πεπτιδίου (αντι-ccp) στον ανθρώπινο ορό με διάταξη μίας χρήσης που χρησιμοποιείται μαζί με τους αναλυτές Chorus και Chorus TRIO. 2. ΕΙΣΑΓΩΓΗ Η ρευματοειδής αρθρίτιδα (Ρ.Α.) είναι η πιο κοινή φλεγμονώδης πάθηση των αρθρώσεων, με επίπτωση που κυμαίνεται μεταξύ 0,5% και 1% παγκοσμίως. Τα αντισώματα έναντι του κυκλικού κιτρουλλινοποιημένου πεπτιδίου (αντι-ccp) έχουν υψηλή ειδικότητα για τη ρευματοειδή αρθρίτιδα (Ρ.Α.). Ο προσδιορισμός των αντισωμάτων αυτών συμπεριλήφθηκε στα κριτήρια ταξινόμησης (ACR: American College of Rheumatolgy) και διάγνωσης της πάθησης. 3. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ Το σετ anti-ccp είναι έτοιμο για χρήση με σκοπό τον προσδιορισμό των αντισωμάτων αντι-ccp στους αναλυτές CHORUS. Το τεστ βασίζεται στη μέθοδο ELISA. Το αντιγόνο καθηλώνεται στη στερεά φάση. Μέσω επώασης με αραιωμένο ανθρώπινο ορό, οι ειδικές ανοσοσφαιρίνες συνδέονται με το αντιγόνο. Μετά από εκπλύσεις για να απομακρυνθούν οι πρωτεΐνες που δεν αντέδρασαν γίνεται η επώαση με το σύμπλοκο, που αποτελείται από ανθρώπινα αντισώματα αντιανοσοσφαιρινών συζευγμένων με υπεροξειδάση ραφανίδων. Απομακρύνεται το σύμπλοκο που δεν αντέδρασε και προστίθεται το υπόστρωμα TMB. Το χρώμα που σχηματίζεται, είναι ανάλογο προς την συγκέντρωση των ειδικών αντισωμάτων που βρίσκονται στον υπό εξέταση ορό. Τα σετ ταινιών μίας χρήσης περιέχουν όλα τα αντιδραστήρια που είναι απαραίτητα για την εκτέλεση του τεστ, όταν χρησιμοποιούνται στη συσκευή Chorus. Αυτό το κιτ περιέχει υλικά ανθρώπινης προέλευσης που έχουν περάσει από τεστ και έχουν βρεθεί αρνητικά σε εγκεκριμένα από την FDA τεστ, τόσο όσον αφορά την ανίχνευση του HbsAg όσο και για τα αντισώματα αντι-hiv- 1, αντι-hiv-2 και αντι-hcv. Επειδή κανένα διαγνωστικό τεστ δεν προσφέρει απόλυτη εγγύηση απουσίας μολυσματικών παραγόντων, κάθε υλικό ανθρώπινης προέλευσης πρέπει να θεωρείται ως δυνητικά μολυσματικό. Χρησιμοποιείτε όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα παίρνοντας όλες τις προφυλάξεις που προβλέπονται από τους κανονισμούς ασφαλείας του εργαστηρίου. Διάθεση αποβλήτων: τα δείγματα ορού, οι βαθμονομητές και οι ταινίες που χρησιμοποιούνται πρέπει να επεξεργάζονται ως μολυσματικά απόβλητα και στη συνέχεια να διατίθενται σύμφωνα με τις διατάξεις των ισχυόντων νόμων. Οδηγίες για την προσωπική σας ασφάλεια 1. Μην κάνετε αναρρόφηση με το στόμα. 2. Χρησιμοποιείτε γάντια μίας χρήσης και προστατευτικά γυαλιά όταν χειρίζεστε τα δείγματα και κατά τη διάρκεια της ανάλυσης. 3. Πλένετε πολύ καλά τα χέρια σας μόλις τελειώσετε το τεστ. 4. Η περιεκτικότητα των παρακάτω αντιδραστηρίων σε βλαβερές ή ερεθιστικές ουσίες, είναι χαμηλή: a)το σύμπλοκο και τα αντιδραστήρια ελέγχου περιέχουν φαινόλη b)το υπόστρωμα είναι όξινο Αν ένα αντιδραστήριο έρθει σε επαφή με το δέρμα ή με τα μάτια, ξεπλύνατε με άφθονο νερό. 5. Εξουδετερωμένα οξέα και άλλα υγρά απόβλητα πρέπει να απολυμαίνονται προσθέτοντας υποχλωριώδες νάτριο, τόσο όσο χρειάζεται ώστε η τελική συγκέντρωση να είναι τουλάχιστον 1%. Μια έκθεση σε υποχλωριώδες νάτριο στο 1% για 30 λεπτά, υπό κανονικές συνθήκες είναι αρκετή για να υπάρξει μία αποτελεσματική απολύμανση. 6. Χυμένα υγρά, δυνητικά μολυσματικά, πρέπει να καθαρίζονται αμέσως με απορροφητικό χαρτί και η ζώνη που έχει μολυνθεί θα πρέπει να απολυμαίνεται, για παράδειγμα με υποχλωριώδες νάτριο 1%, πριν να συνεχίσετε την εργασία. Παρουσία οξέος, το υποχλωριώδες νάτριο δεν πρέπει να χρησιμοποιείται πριν να στεγνώσει η ζώνη. Όλα τα υλικά, που χρησιμοποιήθηκαν για να καθαριστούν τυχόν χυμένα υγρά, πρέπει να απορρίπτονται ως δυνητικά μολυσματικά απόβλητα. Μην βάζετε στον κλίβανο υλικά που περιέχουν υποχλωριώδες νάτριο.

7 GK 7/14 Αναλυτικές οδηγίες Πριν από την χρήση φέρτε τα σετ σε θερμοκρασία περιβάλλοντος (18-30 C) και χρησιμοποιήστε τα μέσα σε 60 λεπτά. 1. Απορρίψτε τις ταινίες όπου το υπόστρωμα (θέση 4) έχει γίνει μπλε 2. Αφού ρίξετε το δείγμα στην κυψελίδα, ελέγξτε αν έχει κατανεμηθεί ομοιόμορφα στον πυθμένα. 3. Ελέγξτε αν υπάρχουν στο σετ όλα τα αντιδραστήρια και αν το σετ είναι άθικτο. Μην χρησιμοποιήστε εκείνα τα σετ που, μετά από έναν οπτικό έλεγχο, παρουσιάζουν έλλειψη κάποιου αντιδραστηρίου. 4. Τα σετ πρέπει να χρησιμοποιούνται αποκλειστικά με την συσκευή Chorus, ακολουθώντας σχολαστικά τις Οδηγίες Χρήσης και το Εγχειρίδιο του οργάνου. 5. Ελέγξτε αν η συσκευή Chorus είναι ρυθμισμένη σωστά ( βλ. Εγχειρίδιο Χρήσης του Chorus). 6. Μην αλλοιώνετε με κανένα τρόπο των γραμμωτό κωδικό στη λαβή του σετ, ώστε να μπορεί ο αναγνώστης του γραμμικού κώδικα να τον διαβάσει σωστά. 7. Αποφύγετε τη χρήση καταψυκτών αυτόματης απόψυξης για την αποθήκευση των δειγμάτων. 8. Τους γραμμωτούς κωδικούς που δεν διαβάζονται σωστά, μπορείτε να τους περάσετε με το χέρι. 9. Μην εκθέτετε τα σετ σε δυνατό φως ούτε σε υποχλωριώδεις ατμούς κατά τη χρήση ή την αποθήκευσή τους. 10. Τα δείγματα που παρουσιάζουν ισχυρή αιμόλυση, καθώς και εκείνα που παρουσιάζουν μικροβιακή μόλυνση, μπορεί να δώσουν λανθασμένα αποτελέσματα. 11. Πριν τοποθετήσετε το σετ στη συσκευή Chorus βεβαιωθείτε ότι η κυψελίδα αντίδρασης δεν περιέχει ξένα σώματα. 12. Εισάγετε τον ορό που θα αναλυθεί (50 ul) στην κυψελίδα 1 του σετ με σιφώνιο (βλ. εικόνα). 13. Μην χρησιμοποιείτε τα σετ μετά την ημερομηνία λήξης τους. 14. Βεβαιωθείτε ότι η συσκευή είναι συνδεδεμένη με τον Washing Buffer Autoimmunity ΚΩΔ ΣΥΝΘΕΣΗ ΤΟΥ ΚΙΤ ΚΑΙ ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Το κιτ καλύπτει 36 προσδιορισμούς (REF 86094). Το κιτ καλύπτει 12 προσδιορισμούς (REF 86094/12). DD ΣΕΤ 6 πακέτα των 6 σετ το κάθε ένα (REF 86094). 2 πακέτα των 6 σετ το κάθε ένα (REF 86094/12). Περιγραφή: Θέση 8: Διαθέσιμος χώρος για ετικέτα γραμμωτού κώδικα Θέση 7: Κενή Θέση 6: ΚΥΨΕΛΙΔΑ ΜΙΚΡΟΠΛΑΚΙΔΙΟΥ Ευαισθητοποιημένο με συνθετικά πεπτίδια υψηλής καθαρότητας που περιέχουν υπολείμματα κιτρουλλίνης Θέση 5: ΚΥΨΕΛΙΔΑ Μη ευαισθητοποιημένη. Θέση 4: ΥΠΟΣΤΡΩΜΑ TMB 0.3 ml Περιεχόμενο: Τετραμεθυλβενζιδίνη 0.26 mg/ml και H2O2 0.01% σταθεροποιημένα σε ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού οξέος 0.05 mol/l (ph 3.8) Θέση 3: ΔΙΑΛΥΤΗΣ ΓΙΑ ΤΑ ΔΕΙΓΜΑΤΑ 0.35 ml Περιεχόμενο: ρυθμιστικό πρωτεϊνικό διάλυμα που περιέχει Proclin (0,1%) Θέση 2: ΣΥΜΠΛΟΚΟ 0.3 ml Περιεχόμενο: Ανθρώπινα μονοκλωνικά αντισώματα αντί-igg μαρκαρισμένα με υπεροξειδάση, σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα που εμπεριέχει φαινόλη 0.05% και Bronidox 0.02%. Θέση 1: ΑΔΕΙΑ ΚΥΨΕΛΙΔΑ όπου ο χρήστης πρέπει να ρίξει τον μη διαλυμένο ορό. Χρήση: Αφήστε να ισορροπήσει μία σακούλα σε θερμοκρασία περιβάλλοντος, ανοίξτε τη σακούλα, βγάλτε όσα σετ χρειάζεστε και βάλτε τα υπόλοιπα πίσω στη σακούλα, που περιέχει γέλη πυριτίου, αφαιρέστε τον αέρα και σφραγίστε την πιέζοντας το ειδικό σύστημα κλεισίματος. Αποθηκεύστε στους 2/8 C. CALIBRATOR ΒΑΘΜΟΝΟΜΗΤΗΣ 1 x ml Περιεχόμενο: Αραιωμένος ανθρώπινος ορός. Έτοιμος για χρήση CONTROL + ΘΕΤΙΚΟ ΠΡΟΤΥΠΟ ΕΛΕΓΧΟΥ 1 x ml Περιεχόμενο: Αραιωμένος ανθρώπινος ορός. Έτοιμος για χρήση ΑΛΛΟ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΟ ΑΛΛΑ ΜΗ ΣΥΝΟΔΕΥΤΙΚΟ ΥΛΙΚΟ WASHING BUFFER AUTOIMMUNY REF CLEANING SOLUTION 2000 REF SANIZING SOLUTION REF CHORUS NEGATIVE CONTROL/SAMPLE DILUT REF Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό Στάνταρντ υάλινος εξοπλισμός εργαστηρίου: κύλινδροι, δοκιμαστικοί σωλήνες, κ.λ.π. Μικροπιπέτες που αναρροφούν με ακρίβεια όγκους μl Γάντια μίας χρήσης Διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 5% Δοχεία για την απόρριψη των δυνητικά μολυσματικών υλικών. 6. ΤΡΟΠΟΣ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗΣ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Τα αντιδραστήρια πρέπει να αποθηκεύονται στους 2/8 C. Σε περίπτωση που αποθηκεύτηκαν σε λανθασμένη θερμοκρασία, πρέπει να επαναληφθεί η βαθμονόμηση και

8 GK 8/14 να ελεγχθεί το αποτέλεσμα με τον ορό ελέγχου (βλ. κεφ. 9: Εγκυρότητα του τεστ). Η ημερομηνία λήξης είναι τυπωμένη σε κάθε συνιστόν μέρος και πάνω στην εξωτερική ετικέτα της συσκευασίας. Τα Αντιδραστήρια έχουν περιορισμένη διάρκεια ζωής μετά το άνοιγμα και/ή την προετοιμασία ΣΕΤ ΒΑΘΜΟΝΟΜΗΤΗΣ ΘΕΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ 8 εβδομάδες σε 2/8 C 8 εβδομάδες σε 2/8 C 8 εβδομάδες σε 2/8 C 7. ΕΙΔΟΣ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ ΚΑΙ ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ Το δείγμα αποτελείται από ορό που έχει συλλεχθεί με φλεβική λήψη και που έχει περάσει από όλες τις διαδικασίες που προβλέπονται από τους βασικούς κανονισμούς του εργαστηρίου. Ο νωπός ορός μπορεί να διατηρηθεί για 4 ημέρες στους 2/8 C. Για μεγαλύτερη χρονική περίοδο καταψύξτε στους 20 C. Το δείγμα μπορεί να αποψυχθεί το πολύ 3 φορές. Αποφεύγετε τη χρήση αυτο-αποψυχόμενων ψυγείων για τη συντήρηση των δειγμάτων. Μετά από την απόψυξη ανακινήστε το καλά πριν το ρίξετε στην κυψελίδα. Η αδρανοποίηση λόγω θερμότητας μπορεί να δώσει λανθασμένα αποτελέσματα. Η μικροβιακή μόλυνση μπορεί να επηρεάσει σε μεγάλο βαθμό την ποιότητα του δείγματος και να δώσει λανθασμένα αποτελέσματα. Δείγματα με ισχυρή λιπαιμία, με ίκτερο, με αιμόλυση ή μολυσμένα δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται. Το τεστ δεν μπορεί να εφαρμοστεί σε ανθρώπινο πλάσμα. 8. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ 1. Ανοίξτε την συσκευασία (από την πλευρά του κλείστρου με πίεση), πάρτε όσα σετ χρειάζεστε για την ανάλυση και φυλάξτε τα υπόλοιπα κλείνοντας την σακούλα, αφού πρώτα αφαιρέσετε τον αέρα. 2. Ελέγξτε προσεκτικά την κατάσταση του σετ ακολουθώντας τις υποδείξεις που αναφέρονται στο κεφ. 4 Αναλυτικές Οδηγίες, 3. Ρίξτε στην κυψελίδα 1 καθενός σετ, 50 μl μη αραιωμένο ορό για ανάλυση. Σε κάθε αλλαγή παρτίδας, χρησιμοποιήστε ένα σετ για τον βαθμονομητή. 4. Τοποθετήστε τα σετ στη συσκευή Chorus. Κάνετε την βαθμονόμηση (αν είναι αναγκαίο) και τα τεστ, ακολουθώντας τις οδηγίες του Εγχειριδίου Χρήσης της συσκευής. 9. ΕΓΚΥΡΟΤΗΤΑ ΤΟΥ ΤΕΣΤ Χρησιμοποιήστε τον ορό ελέγχου για να εξακριβώσετε την ακρίβεια του ληφθέντος αποτελέσματος, ακολουθώντας τις οδηγίες του εγχειριδίου χρήσης της συσκευής. Αν η συσκευή επισημάνει ό,τι ο ορός ελέγχου έχει τιμή έξω από το όριο ανεκτής διακυμάνσεως, πρέπει να κάνετε και πάλι την βαθμονόμηση. Τα προηγούμενα αποτελέσματα θα διορθωθούν αυτόματα. Αν το αποτέλεσμα του ορού ελέγχου εξακολουθεί να βρίσκεται εκτός των αποδεκτών ορίων, επικοινωνήστε με το Τμήμα Επιστημονικής Υποστήριξης. Τηλ.: Φαξ: scientificsupport@diesse.it 10. ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ Ο αναλυτής Chorus υπολογίζει το αποτέλεσμα με βάση μια καμπύλη (ειδική για κάθε παρτίδα) που είναι αποθηκευμένη στη μνήμη του μηχανήματος. Το αποτέλεσμα εκφράζεται σε αυθαίρετες μονάδες. Τα αποτελέσματα εξέτασης των αναλυόμενων δειγμάτων ορού μπορούν να ερμηνευθούν ως εξής: ΘΕΤΙΚΟ όταν το αποτέλεσμα είναι > 18.0 AU/ml ΑΡΝΗΤΙΚΟ όταν το αποτέλεσμα είναι < 12.0 AU/ml ΑΜΦΙΒΟΛΟ/ΑΣΑΦΕΣ όταν το αποτέλεσμα είναι AU/ml Σε περίπτωση αμφίβολου αποτελέσματος, επαναλάβατε το τεστ. Αν το αποτέλεσμα παραμείνει αμφίβολο επαναλάβατε την αιμοληψία. 11. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΟΥ ΤΕΣΤ Όλα τα θετικά αποτελέσματα χρειάζονται μία προσεκτική ερμηνεία. Η εξέταση δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί αυτόνομα για κλινική διάγνωση. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν αποκλείει το ενδεχόμενο μόλυνσης. Το αποτέλεσμα του τεστ πρέπει ακόμη να αξιολογηθεί μαζί με κλινικά δεδομένα και από άλλες διαγνωστικές διαδικασίες. 12. ΕΥΡΟΣ ΒΑΘΜΟΝΟΜΗΣΗΣ Ευρος Βαθμονομησης AU/ml. Για δείγματα >300AU/ml επαναλάβετε τη δοκιμασία, προαραιώνοντας το δείγμα με Negative Control Sample Diuent (PF δεν παρέχεται με το κιτ). 13. ΑΝΑΛΥΤΙΚΗ ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ Υποβλήθηκαν σε δοκιμασία προσδιορισμού 5 δείγματα στα οποία προστέθηκαν οι ακόλουθες ουσίες παρεμβολής: Ρευματοειδής παράγοντας ( UI/ml) Χολερυθρίνη ( mg/dl), Τριγλυκερίδια ( mg/dl) Αιμοσφαιρίνη (5-30 mg/ml) Η παρουσία των ανωτέρω ουσιών παρεμβολής στον εξεταζόμενο ορό δεν μεταβάλλει το αποτέλεσμα της δοκιμασίας προσδιορισμού. 14. ΔΙΑΣΤΑΥΡΟΥΜΕΝΕΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΕΙΣ Εξετάστηκαν 232 αποθηκευμένα δείγματα ορού, τα οποία ανήκαν στις κλινικές κατηγορίες που αναφέρονται στον παρακάτω πίνακα:

9 GK 9/14 Ομάδα δειγμάτων Σύνολο Αρνητικό < 12AU/ml Αμφίβολο AU/ml Θετικό > 18AU/ml Υγιείς δότες Δείγματα ρουτίνας ANA Θυρεοειδίτιδες Θετικά για IgM έναντι ερυθράς Θετικά για IgM έναντι λεγεωνέλας Θετικά για χλαμύδια Θετικά για σαλμονέλα Θετικά για IgM έναντι τοξοπλάσματος g. Θετικά για IgM έναντι μυκοπλάσματος πνευμονίας Θετικά για αντιστρεπτολυσίνη Θετικά για IgM έναντι EBV Θετικά για IgM έναντι παρβοϊού Αντιδραστικά για IgM έναντι σύφιλης Η ειδικότητα της μεθόδου όπως προκύπτει από τα κλινικά αποτελέσματα είναι: Υγιείς δότες 88/90 = 97.8% (CI95%: %) Δείγματα ρουτίνας 58/58 = 100% (CI95%: %) Αυτοάνοσες παθήσεις 33/34 = 97.1% (CI95%: %) Μολυσματικές παθήσεις 50/50 = 100% (CI95%: %) 15. ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΕΣ ΜΕΛΕΤΕΣ Κατά τη διεξαγωγή δοκιμής, αναλύθηκαν 174 δείγματα που είχαν ταυτοποιηθεί με κιτ του εμπορίου. Diesse Αναφορά + - Σύνολο Σύνολο Percent Positive Agreement (~Διαγνωστική ευαισθησία): 88.9% CI95%: Percent Negative Agreement: (~Διαγνωστική ειδικότητα): 97.8% CI95%: ΠΙΣΤΟΤΗΤΑ ΚΑΙ ΕΠΑΝΑΛΗΨΙΜΟΤΗΤΑ Δείγμα ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΣΤΟ ΕΣΩΤΕΡΙΚΟ ΤΗΣ ΘΕΣΗΣ Μέση Τ. ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΑΝΑΜΕΣΑ ΣΕ ΘΕΣΕΙΣ Μέση Τ Δείγμα ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΜΕΤΑΞΥ ΠΑΡΤΙΔΩΝ Μέση Τ. ΑΚΡΙΒΕΙΑ ΜΕΤΑΞΥ ΣΥΣΚΕΥΩΝ Μέση Τ ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. The use of citrullinated peptides and proteins for the diagnosis of rheumatoid arthritis Ger JM Pruijnet et al., Arthritis Research & Therapy 2010, 12: Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritis-specific autoantibodies.g A Schellekens et al. J Clin Invest January 1; 101(1): Rheumatoid arthritis classification criteria: an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative iniziative D. Aletaha et al. Ann Rheum Dis 2010;69: doi: /ard Anti-CCP antibodies: the past, the present and the future Walther J. van Venrooij et al. Nature Reviews Rheumatology 7, (July 2011) Παρασκευάζεται από: DISE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose Monteriggioni (Siena) Italy Ο βαθμός συμφωνίας μεταξύ των δύο μεθόδων, όπως προκύπτει από τα αποτελέσματα, είναι βέλτιστος, με τιμή K (σταθερά του Cohen) 0,88.

10 10/14 INSTRUCTIONS FOR USE CHORUS ANTI-CCP For the semiquantitative determination of IgG antibodies anti-ccp For In Vitro Diagnostic Use Only 1. INTDED USE Immunoenzymatic method for the semiquantitative determination of IgG class antibodies against cyclic citrullinated peptide (anti-ccp) in human serum, using a disposable device applied on the chorus and Chorus TRIO instruments. 2. INTRODUCTION Rheumatoid Arthritis (RA) is the most common inflammatory joints disease with a prevalence ranging between 0.5% and 1% worldwide. Antibodies against cyclic citrullinated peptide (anti-ccp) are highly specific for Rheumatoid Arthritis (RA) and their detection is one of the ACR-criteria for classification of RA (ACR : American College of Rheumatology). 3. PRINCIPLE OF THE METHOD The anti-ccp device is ready to use for the detection of antibodies against CCP in the CHORUS instruments. The test is based on the ELISA principle (Enzyme linked Immunosorbent Assay). The antigen is bound to the solid phase. The specific immunoglobulins are bound to the antigen through incubation with diluted human serum. After washing to eliminate the proteins which have not reacted, incubation is performed with the conjugate, composed of antihuman immunoglobulins conjugated to horse radish peroxidase. The unbound conjugate is eliminated and the TMB substrate is added. The colour which develops is proportional to the concentration of specific antibodies present in the serum sample. The disposable devices contain all the reagents to perform the test in the Chorus instruments. 4. WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VRO DIAGNOSTIC USE ONLY This kit contains materials of human origin which have been tested and gave a negative response by FDAapproved methods for the presence of HBsAg and for anti- HIV-1, anti-hiv-2 and anti-hcv antibodies. As no diagnostic test can offer a complete guarantee regarding the absence of infective agents, all material of human origin must be handled as potentially infectious. All precautions normally adopted in laboratory practice should be followed when handling material of human origin. Waste disposal: serum samples, calibrators and strips, once used, must be treated as infectious residuals and eliminated according to law. Health and Safety Information 1. Do not pipette by mouth. 2. Wear disposable gloves and eye protection while handling specimens. 3. Wash hands thoroughly after placing the devices in the CHORUS instrument. 4. The following reagents contain low concentrations of harmful or irritant substances: a) The conjugate contains phenol b) The substrate is acid If any of the reagents come into contact with the skin or eyes, wash the area extensively with water. 5. Neutralized acids and other liquid waste should be decontaminated by adding a sufficient volume of sodium hypochlorite to obtain a final concentration of at least 1%. A 30 minute exposure to 1% sodium hypochlorite may be necessary to ensure effective decontamination. 6. Spillage of potentially infectious materials should be removed immediately with adsorbent paper tissue and the contaminated area swabbed with, for example, 1.0% sodium hypochlorite before work is continued. Sodium hypochlorite should not be used on acid-containing spills unless the spill area is first wiped dry. Materials used to clean spills, including gloves, should be disposed of as potentially biohazardous waste. Do not autoclave materials containing sodium hypochlorite. Analytical Precautions Bring the devices to room temperature (18-30 C) before use; use within 60 min. 1. Discard devices which show the substrate (well 4) blue colored. 2. Adding the sample into the well verify that it is perfectly distributed on the bottom. 3. Check for the presence of the reagents in the device and that the device is not damaged; do not use devices which are lacking a reagent. 4. The devices are for use with the Chorus instrument; the instructions for use must be carefully followed and the instrument operating manual must be consulted. 5. Check that the Chorus instrument is set up correctly (see Chorus Operating Manual). 6. Do not alter the bar code placed on the handle of the device in order to allow correct reading by the instrument. 7. Avoid using self-defrosting freezers for the storage of the samples.

11 11/14 8. Defective barcodes can be inserted manually in the instrument. 9. Do not expose the devices to strong light or to hypochlorite vapors during storage and use. 10. The use of strongly hemolyzed samples or samples presenting microbial contamination may all constitute sources of error. 11. Before inserting the devices in the instrument, check that the reaction well does not contain foreign bodies. 12. Pipette the test serum (50 μl) in well 1 of the device (see figure). 13. Do not use the device after the expiry date. 14. Make sure that the instrument is connected to the Washing Buffer Autoimmunity REF K COMPOSION AND REAGT PREPARATION The kit is sufficient for 36 tests (REF 86094). The kit is sufficient for 12 tests. (REF 86094/12). DD DEVIC 6 packages each containing 6 devices (REF 86094). 2 packages each containing 6 devices (REF 86094/12). Description: MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED WASHING BUFFER AUTOIMMUNY REF CLEANING SOLUTION 2000 REF SANIZING SOLUTION REF CHORUS NEGATIVE CONTROL/SAMPLE DILUT REF Distilled or deionised water Normal laboratory glassware: cylinders, test-tubes etc. Micropipettes for the accurate collection of µl solution Disposable gloves Sodium Hypochlorite solution (5%) Containers for collection of potentially infectious materials 6. STORAGE AND STABILY OF REAGTS Reagents must be stored at 2/8 C. In the case of storage at an incorrect temperature the calibration must be repeated and the run validated using the control serum (see section 9, Test validation). The expiry date is printed on each component and on the kit label. Reagents have a limited stability after opening: DEVIC CALIBRATOR POSIVE CONTROL 8 weeks at 2/8 C 8 weeks at 2/8 C 8 weeks at 2/8 C Position 8: Space for application of bar code label Position 7: Empty Position 6: MICROPLATE WELL coated with highly purified synthetic peptides containing citrulline residues Position 5: Uncoated MICROPLATE WELL Position 4: TMB SUBSTRATE 0.3 ml. Contents: Tetramethylbenzidine 0.26 mg/ml and H2O2 0.01% stabilized in 0.05 mol/l citrate buffer (ph 3.8) Position 3: SAMPLE DILUT 0.35 ml Contents: saline proteic solution with Proclin (0.1%) Positon 2: CONJUGATE 0.3 ml Contents: anti-human IgG monoclonal antibodies labeled with horse radish peroxidase, in phosphate buffer containing phenol 0.05% and Bronidox 0.02%. Position 1: EMY WELL in which undiluted serum must be added Use: equilibrate a package at room temperature, open the package and remove the required devices; replace the others in the bag with the silica gel, expel the air and seal by pressing the closure. Store at 2-8 C. CALIBRATOR CALIBRATOR 1 x ml Contents: Diluted human serum, ready for use. CONTROL + POSIVE CONTROL 1 x ml Contents: Diluted human serum, ready for use. 7. SPECIM COLLECTION AND STORAGE The sample is composed of serum collected in the normal manner from the vein and handled with all precautions dictated by good laboratory practice. The fresh serum may be stored for 4 days at 2/8 C, or frozen for longer periods at 20 C, and can be thawed a maximum of 3 times. Do not keep the samples in auto-defrosting freezers. Heat-inactivation can rise to erroneous results. Defrosted samples must be shaken carefully before use. The quality of the sample can be seriously affected by microbial contamination which leads to erroneous results. Strongly lipemic, icteric, hemolyzed or contaminated samples cannot be used. The test cannot be applied to plasma. 8. ASSAY PROCEDURE 1. Open the package (on the side containing the pressure-closure), remove the number of devices required and seal the rest in the bag after expelling the air. 2. Check the state of the device according to the indications reported in chapter 4, Analytical Precautions. 3. Dispense (add) 50 µl of undiluted test serum in well no. 1 of each device; at each change of batch, use a device for the calibrator. 4. Place the devices in the Chorus instrument. Perform the calibration (if necessary) and the test as reported in the Chorus Operating Manual.

12 12/14 9. TT VALIDATION Use the control serum to check the validity of the results obtained. It should be used as reported in the operating manual. If the instrument signals that the control serum has a value outside the acceptable range, the calibration must be repeated. The previous results will be automatically corrected. If the result of the control serum continues to be outside the acceptable range, contact the Scientific Support. Tel: Fax: scientificsupport@diesse.it 10. INTERPRETATION OF THE RULTS The Chorus instrument expresses the result in AU/ml calculated on the basis of a lot-dependent graph stored in the instrument. The results can be interpreted as follows: POSIVE: when the concentration in the sample is > 18 AU/ml NEGATIVE: when the concentration in the sample is < 12 AU/ml. DOUBTFUL/EQUIVOCAL: when the concentration in the sample is between 12 and 18 AU/ml If the result is doubtful, repeat the test. If it remains doubtful, collect a new serum sample. 11. LIMATIONS All the positive results require careful interpretation. The test can not be used alone for a clinical diagnosis. A negative result does not preclude the possibility of disease. The test result should be evaluated together with the patient history and other clinical diagnostic evaluation 12. CALIBRATION RANGE Calibration range of AU / ml. For samples > 300AU/ml retest the diluted sample in the Negative Control Sample Diluent (PF83607-not supplied with the kit). 13.ANALICAL SPECIFICY 5 samples were spiked with the following potentially interfering factors and then tested: Rheumatoid factor ( IU/ml) Bilirubin ( mg/dl) Triglycerides ( mg/dl) Hemoglobin (5-30 mg/ml) The presence in the serum sample of interfering substances described above do not affect the test result. Samples Group n TOT Neg < Dub 12- Pos > 12AU/ml 18 AU/ml 18AU/ml Healthy Donors Routine samples ANA Thyroiditis Rubella IgM Positive Legionella IgM Positive Chlamydia Positive Salmonella Positive Toxoplasma g. IgM Positive Mycoplasma p. IgM Positive Anti-streptolysin Positive EBV IgM Positive Parvovirus IgM Positive LUE IgM Reactive The clinical specificity is : Healthy Donors 88/90 = 97.8% (CI95%: %) Routine Samples 58/58 = 100% (CI95%: %) Autoimmune Disease 33/34 = 97.1%(CI95%: %) Infectious Disease 50/50 = 100%(CI95% %) 15. METHOD COMPARISON 174 samples have been tested with Diesse kit and with a competitor kit.data are summarized in the following table: Diesse Reference + - Tot Tot Percent Positive Agreement (~Diagnostic Sensitivity):88.9% CI95%: Percent Negative Agreement: (~Diagnostic Specificity): 97.8% CI95%: The agreement between the two methods is high with a Cohen s Kappa of CROSS REACTION 232 samples from the sera collection were tested, their clinical characteristics are listed in the following table:

13 13/14 16.PRECISION AND REPEATIBILY Sample Average Within run Average Between run Sample Average Between lots Between Instruments Average REFERC 1. The use of citrullinated peptides and proteins for the diagnosis of rheumatoid arthritis Ger JM Pruijnet et al., Arthritis Research & Therapy 2010, 12: Citrulline is an essential constituent of antigenic determinants recognized by rheumatoid arthritisspecific autoantibodies.g A Schellekens et al. J Clin Invest January 1; 101(1): Rheumatoid arthritis classification criteria: an American College of Rheumatology/European League Against Rheumatism collaborative iniziative D. Aletaha et al. Ann Rheum Dis 2010;69: doi: /ard Anti-CCP antibodies: the past, the present and the future Walther J. van Venrooij et al. Nature Reviews Rheumatology 7, (July 2011) Manufactured by DISE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose Monteriggioni (Siena) Italy

14 14/14 Date of manufacture Fecha de fabricación Data di fabbricazione Date de fabrication Ημερομηνία Παραγωγής Data de fabrico Use By Fecha de caducidad Utilizzare entro Utiliser jusque Ημερομηνία λήξης Prazo de validade Do not reuse No reutilizar Non riutilizzare Ne pas réutiliser Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Não reutilizar Caution,consult accompanying documents Atención,ver instrucciones de uso Attenzione, vedere le istruzioni per l'uso Attention voir notice d'instructions Προειδοποίηση, συμβουλευτείτε τα συνοδά έντυπα Atenção, consulte a documentação incluída Manufacturer Fabricante Fabbricante Fabricant Κατασκευαστής Fabricante Contains sufficient for <n> tests Contenido suficiente para <n> ensayos Contenuto sufficiente per "n" saggi Contenu suffisant pour "n"tests Περιεχόμενο επαρκές για «ν» εξετάσεις Conteúdo suficiente para n ensaios Temperature limitation Límite de temperatura Limiti di temperatura Limites de température Περιορισμοί θερμοκρασίας Limites de temperatura Consult Instructions for Use Consulte las instrucciones de uso Consultare le istruzioni per l'uso Consulter les instructions d'utilisation Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης Consulte as instruções de utilização Biological risks Riesgo biológico Rischio biologico Risques biologiques Βιολογικοί κίνδυνοι Risco biológico Catalogue number Número de catálogo Numero di catalogo Référence du catalogue Αριθμός καταλόγου Referência de catálogo In Vitro Diagnostic Medical Device Producto sanitario para diagnóstico in vitro Dispositivo medico-diagnostico in vitro Dispositif médical de diagnostic in vitro In Vitro Διαγνωστικό Ιατροτεχνολογικό προϊόν Dispositivo médico para diagnóstico in vitro Batch code Código de lote Codice del lotto Code du lot Αριθμός Παρτίδας Código do lote