IMMUNORADIOMETRIC ASSAY FOR THE IN VITRO DETERMINATION OF FSH IN HUMAN SERUM AND PLASMA

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1 DiaSorin S.p.A. Strada per Crescentino - 34 Saluggia (Vercelli) - Italy Tel Fax FSH-CTK-4 P97 IMMUNORADIOMETRIC ASSAY FOR THE IN VITRO DETERMINATION OF FSH IN HUMAN SERUM AND PLASMA. PRINCIPLE OF THE ASSAY The immunoradiometric assay of FSH is a sandwich-type assay. In the kit, mouse monoclonal antibodies directed against two different epitopes of FSH and hence not competing are used. Samples or standards are incubated in tubes coated with the first monoclonal antibody in the presence of the second monoclonal antibody labeled with iodine 5. After incubation, the contents of the tubes is aspirated and rinsed so as to remove unbound 5 I-labeled antibody. The bound radioactivity is then determined in a gamma counter. The FSH concentrations in the samples are obtained by interpolation from the standard curve. The concentration of FSH in the samples is directly proportional to the radioactivity.. REAGENTS PROVIDED All reagents of the kit are stable until the expiry date indicated on the kit label, if stored at -8 C. Storage conditions for reagents after reconstitution or dilution are indicated in paragraph Assay Procedure... Anti-FSH monoclonal antibody coated tubes: x 5 tubes (ready-to-use).. 5 I-labeled monoclonal anti-fsh antibody: one 5.5 ml vial (ready-to-use) The vial contains 37 kbq, at the date of manufacture, of 5 I- labeled immunoglobulins in buffer with proteins, sodium azide (<.%; see Precautions) and a dye..3. Standards: six ml vials (ready-to-use) The standard vials contain from to 8 IU/L of human FSH in human serum (see Precautions). The exact concentration is indicated on each vial. The standards were calibrated against the international standard WHO 94/ Control sera: two vials (lyophilized) The vials contain human FSH lyophilized in human serum (see Precautions). The expected values are in the concentration range indicated on a supplement..5. Wash solution (x): one 5 ml vial Concentrated solution has to be diluted before use. Note: Temperatures and expiry dates printed on vial labels only apply to the long-term storage of components by the manufacturer only, prior to assembling of the kit. Do not take into account. 3. MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED In addition to standard laboratory equipment, the following items are required: - precision micropipet ( µl). - semi-automatic pipets (5 µl, ml). - vortex type mixer. - horizontal or orbital shaker. - aspiration system. - gamma counter set for 5 I-iodine. 4. PRECAUTIONS 4.. General remarks - Bring all reagents to room temperature before pipeting. - Do not mix the reagents from kits of different lots. - A standard curve must be included with each assay. - The correct setting of the shaker is very important for the reproducibility of the assay. - It is recommended to perform the assay in duplicate. 4.. Basic rules of radiation safety The purchase, possession, utilization, and transfer of radioactive material are subject to the regulations of the country of use. Adherence to the basic rules of radiation safety should provide adequate protection: - No eating, drinking, smoking or application of cosmetics should be carried out in the presence of radioactive materials. - No pipeting of radioactive solutions by mouth. - Avoid all contact with radioactive materials by using gloves and laboratory overalls. - All manipulation of radioactive substances should be done in an appropriate place, distant from corridors and other busy places. - Radioactive materials should be stored in the container provided in a designated area. - A record of receipt and storage of all radioactive products should be kept up to date. - Laboratory equipment and glassware which are subject to contamination should be segregated to prevent cross-contamination of different radioisotopes. - Each case of radioactive contamination or loss of radioactive material should be resolved according to established procedures. - Radioactive waste should be handled according to the rules established in the country of use Sodium azide Some reagents contain sodium azide as a preservative. Sodium azide can react with lead, copper or brass to form explosive metal azides. Dispose of the reagents by flushing with large amounts of water through the plumbing system Human serum The materials of human origin, contained in this kit, were found negative for the presence of antibodies to HIV- and HIV-, antibodies to HCV, as well as of Hepatitis B surface antigen (HBsAg). However, they should be handled as if capable of transmitting disease. No known test method can offer total assurance that no virus is present. Handle this kit with all necessary precautions. All serum and plasma samples should be handled as if capable of transmitting hepatitis or AIDS. 5. SAMPLE COLLECTION, PROCESSING, STORAGE AND DILUTION - Collect blood in tubes containing or not additives. - Separate serum or plasma from cells by centrifugation. - Serum and plasma samples may be stored at -8 C, if the assay is to be performed within 4 hours. For longer storage keep frozen (< -8 C) after aliquoting so as to avoid repeated freezing and thawing. - If samples have concentrations greater than the highest standard, they must be diluted in the zero standard.

2 6. ASSAY PROCEDURE 6.. Preparation of reagents Bring all the reagents to room temperature Reconstitution of control sera The contents of the vials is reconstituted with the volume of distilled water indicated on the label. Wait for 3 min following reconstitution and mix gently to avoid foaming before dispensing. Store the reconstituted solutions at -8 C for one week or aliquoted at < -8 C for a longer time, until the expiry date of the kit Preparation of the wash solution Pour the contents of the vial into 95 ml of distilled water and homogenize. The diluted solution can be stored at -8 C until the expiry date of the kit. 6.. Assay procedure Step Additions * To antibody coated tubes add successively: - µl of standard, control or sample - 5 µl of tracer Mix Step Incubation Incubate 9 min at 8-5 C with shaking (> 8 rpm) or overnight (8 hours) at 8-5 C without shaking Step 3 Counting Aspirate carefully the contents of tubes (except the tubes «total cpm») Wash twice with ml of wash solution Count bound cpm (B) and total cpm (T) for minute * Add 5 µl of tracer to additional tubes to obtain total cpm. 7. RESULTS Results are obtained from the standard curve by interpolation. The standard curve serves for the determination of FSH concentrations in samples measured at the same time as the standards. 7. Standard curve The results in the package insert were calculated using a log-log curve fit ("spline" mode) with determined radioactivity (cpm std cpm std ) on vertical axis and the FSH concentration of the standards on the horizontal axis (IU/L). Other data reduction methods may give slightly different results. Total activity: 5538 cpm cpm Standards FSH (IU/L) cpm (n=3) B/T (%) std cpm std Example of standard curve, do not use for calculation. 7.. Samples For each sample or control, locate the (cpm sample cpm std ) value on the vertical axis and read off the corresponding FSH concentration on the horizontal axis. The concentrations of diluted samples must be corrected by the dilution factor. 8. QUALITY CONTROL Good laboratory practices imply that control samples be used regularly to ensure the quality of the results obtained. These samples must be processed exactly the same way as the assay samples, and it is recommended that their results be analyzed using appropriate statistical methods. 9. EXPECTED VALUES We recommend each laboratory to establish its own reference values. FSH concentrations measured in serum samples from healthy subjects in the following table are indicative only. n Minimum 5% Median 95% Maximum Men Women Follicular phase Periovulatory peak Luteal phase Postmenopausal FSH concentrations in sera from prepubertal children were found below IU/L.. PERFORMANCE CHARACTERISTICS for more details, see the data sheet APPENDIX.. Analytical sensitivity:. IU/L... Specificity The antibody used in the immunoassay is highly specific for FSH. Extremely low cross-reactivities were obtained with several related molecules (hlh, htsh, hcg)..3. Precision.3.. Intra-assay Samples were assayed 8 times in the same series. The coefficients of variation were found below or equal to.6%..3.. Inter-assay Samples were assayed in duplicate in 38 different series. Coefficients of variation were found below or equal to 6.3%..4. Accuracy.4.. Dilution test High-concentration samples were serially diluted with the zero standard. The accuracy of the test was evaluated by regression analysis: y (observed concentration) =.4 x (theoretical concentration) +.4; r =.98 (n = 4).4.. Recovery test Low-concentration samples were spiked with known quantities of FSH. The accuracy of the test was evaluated by regression analysis: y (observed concentration) =. x (theoretical concentration) +.; r =.99 (n = 5)

3 DiaSorin S.p.A. Strada per Crescentino - 34 Saluggia (Vercelli) - Italy Tel Fax FSH-CTK-4 P97 TROUSSE IMMUNORADIOMETRIQUE POUR LE DOSAGE IN VITRO DE LA FSH DANS LE SERUM ET LE PLASMA HUMAIN. PRINCIPE DU DOSAGE Le dosage immunoradiométrique de la FSH est un dosage de type sandwich. La trousse utilise des anticorps monoclonaux de souris dirigés contre deux épitopes différents de la molécule et réagissant sans compétition. Dans des tubes recouverts d un premier anticorps monoclonal, les échantillons ou les standards sont incubés en présence d un second anticorps monoclonal marqué à l iode 5. Après incubation, le contenu des tubes est vidé par aspiration, les tubes sont rincés pour éliminer les anticorps marqués non fixés et la radioactivité liée est mesurée. Les valeurs inconnues sont déterminées par interpolation à l aide de la courbe standard. La quantité de radioactivité est directement proportionnelle à la concentration de FSH dans l échantillon.. REACTIFS FOURNIS Tous les réactifs de la trousse conservés non ouverts à -8 C sont stables jusqu à la date de péremption mentionnée sur la trousse. Les conditions de conservation des réactifs après reconstitution ou dilution sont indiquées dans le paragraphe Mode Opératoire... Tubes revêtus d anticorps monoclonal anti-fsh: x 5 tubes (prêts à l emploi).. Anticorps monoclonal anti-fsh marqué à l iode-5: flacon de 5,5 ml (prêt à l emploi) Le flacon contient 37 kbq d immunoglobulines marquées à l iode 5, en début de lot, sous forme liquide avec du tampon, des protéines, de l azide de sodium (<,%; voir Précautions) et un colorant..3. Standards: 6 flacons de ml (prêts à l emploi) Les flacons des standards contiennent entre et 8 UI/L de FSH d origine humaine dans du sérum humain (voir Précautions). La concentration exacte est indiquée sur l étiquette de chaque flacon. Les standards ont été calibrés par rapport au standard international de l OMS 94/ Sérums de contrôle: flacons (lyophilisés) Les flacons contiennent de la FSH lyophilisée dans du sérum humain (voir Précautions). Les valeurs attendues sont comprises dans la fourchette de concentrations indiquée sur le supplément..5. Solution de lavage (x): flacon de 5 ml Solution concentrée, à diluer avant usage. Remarque: Les températures et dates d'expiration imprimées sur les étiquettes des flacons concernent uniquement le stockage à long terme des réactifs par le fabricant, avant l assemblage de la trousse. Ne pas en tenir compte. 3. MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI En plus de l équipement de laboratoire usuel, il est nécessaire d utiliser le matériel suivant: - micropipette de précision ( µl). - pipettes semi-automatiques (5 µl, ml). - mélangeur de type vortex. - agitateur à mouvement de va et vient horizontal. - système d aspiration. - compteur gamma calibré pour l iode PRECAUTIONS 4.. Précautions générales - Equilibrer les réactifs à température ambiante avant utilisation. - Ne pas mélanger des réactifs de lots différents. - Effectuer simultanément la courbe standard et le dosage des échantillons. - Le bon réglage de l agitateur est une condition importante pour la reproductibilité du dosage. - Il est recommandé de réaliser les dosages en doublets. 4.. Protection contre les rayonnements ionisants L achat, la possession, l utilisation et l échange de matières radioactives sont soumis aux réglementations en vigueur dans le pays de l utilisateur. L application des règles de base de protection contre les rayonnements ionisants assure une protection adéquate: - Ne pas manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer de cosmétiques dans les laboratoires où des produits radioactifs sont utilisés. - Ne pas pipeter des solutions radioactives avec la bouche. - Eviter le contact direct avec tout produit radioactif en utilisant des blouses et des gants de protection. - Toute manipulation de matières radioactives se fera dans un local approprié, éloigné de tout passage. - Les produits radioactifs seront stockés dans leur conditionnement d'origine dans un local approprié. - Un cahier de réception et de stockage de produits radioactifs sera tenu à jour. - Le matériel de laboratoire et la verrerie qui ont été contaminés doivent être éliminés au fur et à mesure afin d éviter une contamination croisée de plusieurs isotopes. - Chaque cas de contamination ou perte de substance radioactive devra être résolu selon les procédures établies. - Toute mise aux déchets de matière radioactive se fera en accord avec les règlements en vigueur Azide de sodium Certains réactifs contiennent de l azide de sodium comme agent conservateur. L azide de sodium peut réagir avec le plomb, le cuivre et le laiton, et former des azides métalliques explosifs. Lors du rejet de telles solutions à l évier, laisser couler un volume important d eau dans les canalisations. 4.4 Sérum humain Les produits d origine humaine contenus dans les réactifs de cette trousse ont subi un dépistage négatif, concernant les anticorps anti-vih-, et VIH-, les anticorps VHC, et l antigène de surface HBs, mais doivent cependant être manipulés comme des produits infectieux. En effet, aucune méthode connue ne peut assurer l absence complète de virus, c est pourquoi il est nécessaire de prendre des précautions lors de leur manipulation. Tous les échantillons de sérum ou de plasma doivent être manipulés comme étant susceptibles de contenir les virus de l hépatite ou du SIDA. 5. PRELEVEMENT, PREPARATION, CONSERVATION ET DILUTION DES ECHANTILLONS - Recueillir le sang dans des tubes secs avec ou sans additif. - Séparer le sérum ou le plasma des cellules par centrifugation. 3

4 - Les échantillons sériques ou plasmatiques peuvent être conservés à -8 C si le dosage est réalisé dans les 4 heures. Sinon, il est préférable de les conserver congelés (< -8 C) et de préférence aliquotés, afin d éviter les congélations et décongélations successives. - Si l échantillon analysé a une concentration supérieure au standard le plus élevé de la gamme, le diluer dans le standard zéro. 6. MODE OPERATOIRE 6.. Préparation des réactifs Equilibrer les réactifs à température ambiante Préparation des sérums de contrôle Reprendre par le volume d eau distillée indiqué sur les étiquettes des flacons. Attendre 3 minutes après reconstitution et agiter doucement en évitant la formation de mousse avant de répartir dans les tubes. Les flacons reconstitués peuvent être conservés une semaine à -8 C. Au-delà, il est préférable de les conserver congelés à une température inférieure à 8 C jusqu à la date d expiration de la trousse Préparation de la solution de lavage Verser le contenu du flacon dans 95 ml d eau distillée. Homogénéiser. La solution diluée peut être conservée à -8 C jusqu à la date de péremption de la trousse. 6. Mode opératoire Etape Répartition* Dans les tubes recouverts d anticorps, distribuer successivement: - µl de standard, de contrôle ou d échantillon et - 5 µl de traceur Agiter Etape Incubation Incuber 9 minutes à 8-5 C avec agitation (> 8 rpm) ou durant la nuit (8 heures) à 8-5 C sans agitation Etape 3 Comptage Aspirer soigneusement le contenu de chaque tube (sauf les tubes «cpm totaux») Laver deux fois avec ml de solution de lavage Compter les cpm liés (B) et les cpm totaux (T) pendant min * Ajouter 5 µl de traceur dans tubes supplémentaires pour obtenir les cpm totaux. 7. RESULTATS Les résultats sont déduits de la courbe standard par interpolation. La courbe sert à déterminer les taux de FSH de tous les échantillons mesurés en même temps que les standards. 7. Courbe standard Les résultats présentés dans cette notice ont été calculés en employant un mode de tracé log-log pour la gamme standard avec en ordonnée la radioactivité mesurée (cpm std - cpm std ) et en abscisse les concentrations en FSH des standards (UI/L). L utilisation d un autre mode de calcul peut conduire à des résultats légèrement différents. Activité totale: 5538 cpm cpm Standards FSH (UI/L) cpm (n=3) B/T (%) std 3 4 5, ,6,7,83 8,3 3,48 39,8 cpm std Exemple de courbe standard, ne pas utiliser pour les calculs. 7.. Echantillons Repérer la valeur (cpm échantillon cpm std ) sur l'axe vertical, puis le point correspondant de la courbe standard. En déduire la concentration en FSH de l'échantillon par lecture sur l'axe horizontal. Les concentrations pour les échantillons dilués doivent tenir compte du facteur de diluition. 8. CONTROLE DE QUALITE Les bonnes pratiques de laboratoire impliquent que des échantillons de contrôle soient utilisés dans chaque série de dosage pour s assurer de la qualité des résultats obtenus. Ces échantillons devront être traités de la même façon que les prélèvements à doser et il est recommandé d en analyser les résultats à l aide de méthodes statistiques appropriées. 9. VALEURS ATTENDUES Il est conseillé à chaque laboratoire d'établir ses propres valeurs de référence. Les concentrations en FSH mesurées sur des échantillons sériques d individus présumés sains sont données dans le tableau suivant à titre indicatif. n Minimum 5% Mediane 95% Maximum Homme 67,3, 5,,5 Femme Phase folliculaire Phase préovulatoire Phase lutéale Menopause 36 8,,3 7 3,4 3,,7 3 6,5, 4, 7, Les concentrations sériques en FSH chez des enfants prépubères sont inférieures à UI/L.. CARACTERISTIQUES DU DOSAGE voir la feuille APPENDIX pour plus de détails.. Sensibilité analytique:, UI/L... Spécificité L anticorps utilisé dans ce dosage est hautement spécifique de la FSH. Des réactivités croisées extrêmement basses ont été obtenues vis-à-vis de nombreuses molécules apparentées (hlh, htsh, hcg)..3. Précision.3.. Intra-essai Des échantillons ont été dosés 8 fois dans une même série. Les coefficients de variation obtenus sont inférieurs ou égaux à %..3.. Inter-essais Des échantillons ont été dosés en doublets dans 38 séries différentes. Les coefficients de variation obtenus sont inférieurs ou égaux à 6,3%..4. Exactitude.4.. Epreuve de dilution Des échantillons de concentration élevée ont été dilués dans le standard zéro de la trousse. L éxactitude du test a été évaluée par une analyse de régression: y (concentration théorique) =,4 x (concentration observée) +,4; r =,98 (n = 4).4.. Epreuve de surcharge Des quantités connues de FSH ont été ajoutées à des sérums humains. L exactitude du test a été évaluée par une analyse de régression: y (concentration théorique) =, x (concentration observée) +,; r =,99 (n = 5) 4

5 DiaSorin S.p.A. Strada per Crescentino - 34 Saluggia (Vercelli) - Italy Tel Fax FSH-CTK-4 P97 RADIOIMMUNASSAY FÜR DIE IN-VITRO BESTIMMUNG VON FOLLIKELSTIMULIERENDEM HORMON (FSH) IN HUMANSERUM UND -PLASMA. TESTPRINZIP Der Radioimmunassay für die FSH-Bestimmung basiert auf dem typischen Sandwichprinzip. Der Kit verwendet zwei verschiedene monoklonale Mausantikörper, wobei es sich um nicht gegeneinander konkurrierende Epitope des FSH handelt. Die Proben bzw. Standards werden in Anwesenheit eines 5 J-markierten monoklonalen Antikörpers und eines an der Röhrchenwand immobilisierten Antikörpers inkubiert. Nach der Inkubation wird die Flüssigkeit abgesaugt, um die ungebundene Radioaktivität zu entfernen. Die gebundene Radioaktivität wird in einem Gamma- Counter gemessen. Unbekannte Probenwerte werden mittels Interpolation aus der Standardkurve bestimmt. Die FSH-Konzentration in den Proben ist direkt proportional zur gebundenen Radioaktivität.. REAGENZIEN Die Reagenzien sind bis zum Verfallsdatum stabil, wenn sie bei - 8 C gelagert werden. Lagerungskonditionen der Reagenzien nach der Wiederherstellung oder Verdünnung werden im Paragraphen Testdurchführung erläutert... Röhrchen mit Anti-FSH Antikörpern beschichtet: x 5 Röhrchen (gebrauchsfertig).. 5 J-markierte monoklonale Anti-FSH-Antikörper Lösung: ein 5,5 ml Fläschchen (gebrauchsfertig) Das Fläschchen enthält 37 kbq (am Tag der Herstellung) des 5 J-markierten Immunglobulins in Puffer mit Proteinen, Natriumazid (<,%; siehe Warnungen und Sicherheitshinweise) und einem Farbstoff..3. Standards: sechs ml Fläschchen (gebrauchsfertig) Die Standardfläschchen enthalten zwischen und 8 IE/L humanes FSH in Humanserum (siehe Warnungen und Sicherheitshinweise). Die genauen Konzentrationen sind auf jedem Fläschchen angegeben. Die Standards wurden gegen die internationale Standard-Präparation WHO 94/63 kalibriert..4. Kontrollseren: zwei Fläschchen (lyophilisiert) Die Fläschchen enthalten lyophilisiertes FSH in Humanserum. Der Konzentrationsbereich ist auf dem Etikett angegeben..5. Waschlösung (x): ein 5 ml Fläschchen Die konzentrierte Lösung muss vor Gebrauch verdünnt werden. Anmerkung: Auf die Fläschchen gedruckte Temperaturen und Verfallsdaten betreffen nur die Langzeitlagerung beim Hersteller, vor der Zusammensetzung des Kits. Bitte nicht beachten. 3. ERFORDERLICHE, ABER NICHT MITGELIEFERTE GERÄTE Zusätzlich zu der Standardlaborausstattung werden die folgenden Geräte benötigt: - Präzisionspipette ( µl). - Halbautomatische Pipetten (5 µl; ml). - Vortex-Mixer. - Horizontal- oder Orbitalschüttler. - Absaugsystem. - Gamma-Counter für 5 J. 4. WARNUNGEN UND SICHERHEITSHINWEISE 4.. Allgemeinhinweise - Die Reagenzien sollten vor dem Pipettieren Raumtemperatur haben. - Reagenzien aus Kits von verschiedenen Chargen sollten nicht miteinander vermischt werden. - Eine Standardkurve ist für jeden Assay notwendig. - Die korrekte Einstellung des Schüttlers ist sehr wichtig für die Reproduzierbarkheit des Assays. - Der Assay sollte als Doppelbestimmung stattfinden. 4.. Schutz vor radioaktiver Strahlung Annahme, Besitz und Verwendung, Lagerung, Transport und Beseitigung unterliegen den Vorschriften der Atomenergie- bzw. der jeweiligen staatlichen Behörde. Die Einhaltung der Grundregeln beim Umgang mit Radioaktivität sollte eine ausreichende Sicherheit gewährleisten: - In Räumen, in denen mit radioaktiven Materialien gearbeitet wird, sollte Essen, Trinken, Rauchen und Schminken vermieden werden. - Keine Mundpipette verwenden. - Direkter Kontakt mit radioaktiven Materialien sollte durch Tragen entsprechender Schutzkleidung (Laborkittel, Handschuhe) vermieden werden. - Das Arbeiten mit radioaktiven Stoffen muss in dafür speziell gekennzeichneten Bereichen, die vom normalen Laborbetrieb abgetrennt sind, erfolgen. - Radioaktive Materialien sollten in einem speziell gekennzeichneten Bereich gelagert werden. - Ein Register der Eingänge und Lagerung aller radioaktiven Produkte sollte ständig aktualisiert werden. - Kontaminierte Labor- und Glasgeräte sollten isoliert werden, um eine Kreuzkontamination von verschiedenen Radioisotopen zu verhindern. - Kontaminationen des Arbeitsplatzes müssen unverzüglich sorgfältig nach den üblichen Verfahren entfernt werden. - Radioaktiver Abfall muss entsprechend den Richtlinien jedes Einsatzortes entsorgt werden Natriumazid Zur Vermeidung mikrobieller Kontamination enthalten einige Reagenzien Natriumazid. Natriumazid kann mit Blei, Kupfer oder Messing zu explosiven Metallaziden reagieren. Um dies zu vermeiden, sollte bei einer Entsorgung über Rohrleitungen mit viel Wasser nachgespült werden Humanserum Bestandteile menschlichen Ursprungs, die für diesen Kit verwendet wurden, sind auf HIV-- und HIV--Antikörper, HCV- Antikörper und Hepatitis B Oberflächen-Antigen (HBsAg) getestet und als nicht reaktiv befunden worden. Es ist so vorzugehen, als ob eine tatsächliche Ansteckungsgefahr bestehen würde. Keine Testmethode kann völlige Sicherheit bieten. Der Kit sollte mit allen notwendigen Sicherheitsvorkehrungen behandelt werden. Mit allen Serum- und Plasmaproben ist so vorzugehen, als ob eine tatsächliche Ansteckungsgefahr mit Hepatitis oder AIDS bestehen würde. 5. PROBENENTNAHME, -BEHANDLUNG, -LAGERUNG UND VERDÜNNUNG - Sammeln Sie das Blut in Röhrchen mit oder ohne Antikoagulanzien. - Trennen Sie die Zellen vom Serum oder Plasma durch Zentrifugation. 5

6 - Serum- und Plasmaproben können bei -8 C gelagert werden, wenn der Assay innerhalb von 4 Std. durchgeführt wird. Für eine längere Lagerung sollte die Probe portioniert und eingefroren werden (< -8 C). Wiederholtes Auftauen und Einfrieren sollte vermieden werden. - Wenn die Proben Konzentration über dem höchsten Standardwert haben, müssen sie in Nullstandard verdünnt werden. 6. TESTDURCHFÜHRUNG 6.. Präparation der Reagenzien Die Reagenzien sollten Raumtemperatur haben Wiederaufnahme der Kontrollseren Der Inhalt der Fläschchen wird mit einem auf dem Etikett angegebenen Volumen destillierten Wassers wiederaufgenommen. Eine Wartezeit von 3 Minuten und leichtes Mischen sollten jegliches Schäumen vor dem Verteilen vermeiden. Die wiederaufgenommenen Lösungen können bei -8 C für eine Woche, oder portioniert bei < -8 C für eine längere Zeit, bis zum Verfallsdatum des Kits, gelagert werden Präparation der Waschlösung Den Inhalt des Fläschchens in 95 ml destilliertes Wasser schütteln und homogenisieren. Die verdünnte Lösung ist bei -8 C bis zum Verfallsdatum haltbar. 6.. Testdurchführung Schritt Zugabe * Zugabe zu den mit Antikörpern beschichteten Röhrchen (in dieser Reihenfolge): - µl Standard, Kontrollserum oder Probe und - 5 µl Tracer Mischen Schritt Inkubation 9 Minuten bei 8-5 C unter Schütteln (8 U/m) oder über Nacht (8 Stunden) bei 8-5 C ohne Schütteln Schritt 3 Messung Den Inhalt der Röhrchen Vorsichtig absaugen (außer den zwei Röhrchen für Totalaktivität) Zweimal mit ml Waschlösung waschen Gebundene cpm (B) und Totalaktivität (T) fϋr Min bestimmen * Fügen Sie 5 µl Tracer in zusätzliche Röhrchen hinzu, um die Totalaktivität zu erhalten. 7. ERGEBNISSE Die Ergebnisse werden aus der Standardkurve mittels Interpolation ermittelt. Die Kurve kann für die Bestimmung der FSH-Konzentration in den Proben dienen, die zur gleichen Zeit wie die Standardkurve gemessen wurden. 7.. Standardkurve Die Ergebnisse in der Packungsbeilage wurden mittels einer loglog Kurvenanpassung ("spline" mode) aus der bestimmten Radioaktivität (cpm std cpm std ) auf der y-achse und den FSH- Konzentrationen der Standards auf der x-achse (IE/L) errechnet. Andere Datenreduktions-Methoden können zu leicht abweichenden Ergebnissen führen. Totalaktivität: 5538 cpm Standards FSH (IE/L) cpm (n=3) B/T (%) 3 4 5, ,6,7,83 8,3 3,48 39,8 cpm std cpm std Beispiel einer Standardkurve, nicht zur Berechnung benutzen. 7.. Proben Für jede Probe wird der ( cpm probe cpm std )-Wert auf der y-achse bestimmt und die entsprechende FSH-Konzentration (in IE/L) auf der x-achse abgelesen. Die erhaltenen Konzentrationen müssen mit dem Verdünnungsfaktor korrigiert werden. 8. QUALITÄTSKONTROLLE Zur Einhaltung der Laborgrundregeln sollten regelmäßig Kontrollproben benutzt werden, um die Qualität der Ergebnisse zu sichern. Diese Proben müssen in genau derselben Weise wie die Assay-Proben getestet werden, und die Analyse der Ergebnisse sollte mit angemessenen statistischen Methoden stattfinden. 9. ERWARTETE WERTE Jedes Labor sollte seinen eigenen Normalbereich aus Gruppen von gesunden Testpersonen festlegen. Die hier angegebenen FSH-Werte dienen nur als Richtlinie. n Min. 5 % Median 95% Max. Männer 67,3, 5,,5 Frauen Follikelreifungsphase Follikelsprung Lutealphase Postmenopause 36 8,,3 7 3,4 3,,7 3 6,5, 4, 7, Die FSH-Konzentrationen in präpubertären Kinderseren liegen unter IE/L. 5. SPEZIFISCHE LEISTUNGSMERKMALE für weitere Details, siehe die Beilage APPENDIX.. Analytische Sensitivität: <, IE/L... Spezifität Der in diesem Immunassay verwendete Antikörper ist höchst spezifisch für FSH. Extrem niedrige Kreuzreaktionen wurden gegen einige verwandte Moleküle (hlh, htsh, hcg) gemessen..3. Präzision.3.. Intra-Assay Proben aus derselben Serie wurden 8-mal getestet. Der Variationskoeffizient war jeweils niedriger oder gleich %..3.. Inter-Assay Proben aus 38 verschiedenen Serien wurden als Doppelbestimmungen getestet. Der Variationskoeffizient war jeweils niedriger oder gleich 6,3%..4. Genauigkeit.4.. Verdünnungstest Hoch konzentrierte FSH-Proben wurden mit Nullstandard verdünnt. Das Verhältnis zwischen erwarteter und gemessener Konzentration ist wie folgt ermittelt worden: y =,4 x +,4 ; r =,98 (n = 4) wobei x gemessene Konzentration y erwartete Konzentration..4.. Wiederfindungstest Schwach konzentrierte Proben wurden mit definierten FSH- Mengen vermischt. Die erhaltene Wiederfindung ist wie folgt ermittelt worden: y =, x +, ; r =,99 (n = 5) wobei x bestimmte Konzentration y erwartete Konzentration. 6

7 DiaSorin S.p.A. Strada per Crescentino - 34 Saluggia (Vercelli) - Italy Tel Fax FSH-CTK-4 P97 KIT IMMUNORADIOMETRICO PER LA DETERMINAZIONE IN VITRO DEL FSH IN SIERO E PLASMA UMANI. PRINCIPIO DEL METODO Il dosaggio del FSH è un metodo immunoradiometrico tipo sandwich". Nel kit sono utilizzati anticorpi monoclonali da topo, diretti contro due differenti epitopi del FSH e, quindi, non in competizione fra loro. Campioni e standard vengono incubati in provette sensibilizzate con il primo anticorpo monoclonale in presenza del secondo anticorpo monoclonale, marcato con 5 I. Al termine dell incubazione le provette vengono aspirate per rimuovere l anticorpo marcato 5 I non legato. La radioattività legata viene quindi misurata con un contatore gamma. Le concentrazioni di FSH nei campioni vengono ricavate per interpolazione dalla curva standard. La concentrazione di FSH nei campioni è direttamente proporzionale alla radioattività.. CONTENUTO DEL KIT I reattivi, conservati a -8 C, sono stabili fino alla data di scadenza riportata sul kit. Le modalità di conservazione dei reattivi dopo ricostituzione o diluizione sono riportate nel paragrafo Metodo del dosaggio... Provette sensibilizzate con anticorpo monoclonale anti- FSH: x 5 provette (pronte per l uso).. Anticorpo monoclonale anti-fsh- 5 I: un flacone (5,5 ml) (pronto per l uso) Il flacone contiene 37 kbq, alla data di marcatura, di immunoglobuline marcate con 5 I in tampone con proteine, sodio azide (<,%; vedi Precauzioni) e un colorante inerte..3. Standard: sei flaconi ( ml) (pronti per l uso). I flaconi contengono FSH umano in siero umano (<,%; vedi Precauzioni) a concentrazioni comprese tra e 8 IU/L. L esatta concentrazione degli standard è riportata sulle etichette dei flaconi. Gli standard sono calibrati contro lo standard internazionale WHO 94/ Sieri di controllo: due flaconi (liofilizzati) I flaconi contengono FSH liofilizzato in siero umano (vedi Precauzioni). L intervallo dei valori attesi è riportato sul foglio del controllo di qualità..5. Soluzione di lavaggio (x): un flacone (5 ml) Soluzione concentrata da diluire prima dell uso. Nota: Le temperature di conservazione e le date di scadenza riportate sulle etichette di ciascun flacone si riferiscono alla conservazione dei reattivi stabilita in produzione, prima del loro inserimento nei kit. Non tenerne conto. 3. MATERIALE RICHIESTO MA NON FORNITO Oltre alla normale attrezzatura da laboratorio, è richiesto il materiale seguente: - micropipette di precisione ( µl). - pipette semi-automatiche (5 µl, ml). - agitatore tipo vortex. - agitatore oscillante per provette. - sistema di aspirazione. - contatore gamma programmato per leggere 5 I. 4. PRECAUZIONI 4.. Considerazioni generali - Prima dell uso lasciare equilibrare i reattivi a temperatura ambiente. - Non utilizzare reattivi di lotti diversi. - Inserire la curva standard in ogni esperimento. - Per ottenere una migliore riproducibilità, è necessario programmare l agitatore oscillante a 35 rpm. - Eseguire il dosaggio in duplicato. 4.. Norme di radioprotezione L acquisto, la detenzione, l utilizzo e il trasporto di materiale radioattivo sono soggetti a regolamentazione locale. Lo scrupoloso rispetto delle norme per l uso di sostanze radioattive fornisce una protezione adeguata agli utilizzatori: - Nei luoghi dove si usano sostanze radioattive non è consentito consumare cibi o bevande, fumare o usare cosmetici. - Non pipettare materiale radioattivo con pipette a bocca. - Usare sempre guanti e camici da laboratorio quando si manipola materiale radioattivo. - Le sostanze radioattive devono essere conservate in propri contenitori in appositi locali che devono essere interdetti alle persone non autorizzate. - Deve essere tenuto un registro di carico e scarico del materiale radioattivo. - Il materiale di laboratorio e la vetreria devono essere dedicati all uso di isotopi specifici per evitare cross-contaminazioni. - In caso di contaminazione o dispersione di materiale radioattivo, fare riferimento alle norme locali di radioprotezione. - I rifiuti radioattivi devono essere smaltiti secondo le norme locali di radioprotezione Sodio azide Alcuni reattivi contengono sodio azide come conservante, che può reagire con piombo, rame o ottone presenti nelle tubature di scarico per formare metallo-azidi esplosive. Smaltire questi reattivi facendo scorrere abbondante acqua negli scarichi Siero umano Alcuni reattivi presenti nel kit sono di origine umana e si sono rivelati negativi per anti-hiv- e HIV-, anti-hcv e antigene di superficie del virus dell epatite B (HBsAg). Questi reattivi devono essere manipolati come in grado di trasmettere malattie infettive. Non sono disponibili metodi in grado di offrire la certezza assoluta che questi o altri agenti infettivi siano assenti. Manipolare questi reattivi come potenziali fonti di infezioni. Manipolare tutti i campioni di sangue come potenziali fonti di infezioni. (Ad es. epatite o AIDS). 5. RACCOLTA, MANIPOLAZIONE, CONSERVAZIONE E DILUIZIONE DEI CAMPIONI - Raccogliere i campioni in provette senza anticoagulante o con anticoagulante. - Separare per centrifugazione il siero o il plasma dalla parte corpuscolata. - I campioni possono essere conservati fino a 4 ore a -8 C o, suddivisi in aliquote, a - C o a temperature inferiori per periodi più lunghi. Evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento dei campioni. 7

8 - Diluire con standard zero i campioni con concentrazioni di FSH superiori a quelle dell ultimo standard. 6. METODO DEL DOSAGGIO 6.. Preparazione dei reattivi Portare i reattivi a temperatura ambiente Ricostituzione di sieri di controllo Ricostituire il contenuto dei flaconi con il volume di acqua distillata riportato sull etichetta di ciascun flacone. Lasciar riposare per almeno 3 minuti e controllare la completa dissoluzione del liofilizzato invertendo più volte i flaconi. Gli standard e i controlli ricostituiti sono stabili per una settimana a -8 C e, suddivisi in aliquote, a < -8 C o a temperature inferiori per periodi più lunghi, ma entro la scadenza del kit Preparazione della soluzione di lavaggio Diluire il contenuto del flacone con 95 ml e agitare con cura. La soluzione diluita è stabile a -8 C fino alla scadenza del kit. 6.. Schema del dosaggio Fase Dispensazione * Aggiungere in successione alle provette sensibilizzate: - µl di standard, controlli o campioni - 5 µl di marcato Agitare Fase Incubazione Incubare 9 minuti a 8-5 C in agitazione (> 8 rpm) oppure 8 ore a 8-5 C senza agitazione Fase 3 Conteggio Aspirare con cura il contenuto delle provette (eccetto le provette per l attività totale) Lavare volte con ml di soluzione di lavaggio Contare la radioattività legata (B) e l attività totale (T) per un minuto * Aggiungere 5 µl di marcato a provette non sensibilizzate per la determinazione dell attività totale. 7. RISULTATI Le concentrazioni di FSH in campioni e controlli vengono calcolate per interpolazione sulla curva standard. Campioni e controlli devono essere dosati insieme agli standard. 7.. Curva standard I risultati contenuti nelle istruzioni sono stati calcolati usando una curva logaritmica-logaritmica (modo spline ) con la radioattività determinata (cpm std - cpm std ) sull asse verticale (asse delle ordinate) e la concentrazione di FSH degli standard (IU/L) sull asse orizzontale (asse delle ascisse). Altri metodi di interpolazione dei dati possono dare risultati leggermente differenti. Attività totale: 5538 cpm cpm Standard FSH (IU/L) cpm (n=3) B/T (%) std , ,6,7,83 8,3 3,48 39,8 cpm std Esempio di curva standard. Non usare per calcolare il valore dei propri campioni. 7.. Campioni Per ogni campione o controllo, riportare il valore (cpm campione - cpm std ) sull asse delle ordinate e leggere le concentrazioni di FSH sull asse delle ascisse. Le concentrazioni dei campioni diluiti devono essere corrette per il fattore di diluizione. 8. CONTROLLO DI QUALITÀ Si consiglia ad ogni laboratorio di dosare regolarmente sieri di controllo per verificare la qualità dei risultati ottenuti. Questi campioni devono essere manipolati esattamente come i campioni in esame; i risultati devono essere analizzati con metodi statistici appropriati. 9. VALORI ATTESI Ogni laboratorio deve stabilire i propri limiti di riferimento. Si prega di considerare solo come guida i valori delle concentrazioni di FSH sotto riportati, ottenuti da soggetti apparentemente sani. n Min. 5% Media 95% Max. Uomini 67,3, 5,,5 Donne Fase follicolare Picco preovulatorio Fase luteale Postmenopausa 36 8,,3 7 3,4 3,,7 3 6,5, 4, 7, Le concentrazioni di FSH in sieri di bambini prepuberi sono state riscontrate inferiori a IU/L.. CARATTERISTICHE DEL DOSAGGIO Ulteriori dati sono riportati in Appendice... Sensibilità analitica:, IU/L... Specificità L anticorpo utilizzato nel kit è altamente specifico per FSH. Le cross-reazioni con diverse molecole correlate (hlh, htsh, hcg) sono molto basse..3. Precisione.3.. Intra-saggio Alcuni campioni sono stati analizzati 8 volte in uno stesso esperimento; è stato trovato un coefficiente di variazione del % o inferiore..3.. Inter-saggio Alcuni campioni sono stati analizzati in duplicato in 38 esperimenti differenti; è stato trovato un coefficiente di variazione del 6,3% o inferiore..4. Accuratezza.4.. Test di diluizione Alcuni campioni ad alta concentrazione di FSH sono stati diluiti con diluizioni seriali con lo standard zero. L accuratezza del test è stata valutata mediante analisi di regressione: y (concentrazione rilevata) =,4 x (concentraz. teorica) +,4; r =,98 (n = 4).4.. Test di recupero Ad alcuni campioni a bassa concentrazione di FSH sono state aggiunte quantità note di FSH. L accuratezza del test è stata valutata mediante analisi di regressione: y (concentrazione rilevata) =, x (concentraz. teorica) +,; r =,99 (n = 5) 8

9 DiaSorin S.p.A. Strada per Crescentino - 34 Saluggia (Vercelli) - Italy Tel Fax FSH-CTK-4 P97 ENSAYO INMUNORADIOMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN IN VITRO DE LA FSH EN SUERO Y PLASMA HUMANOS. PRINCIPIO DEL ENSAYO El ensayo inmunoradiométrico de la FSH es de tipo sandwich. El equipo utiliza anticuerpos monoclonales de ratón dirigidos contra dos diferentes epítopos de la molécula que reaccionan sin competición. Las muestras y los estándares se incuban en los tubos recubiertos con el primer anticuerpo monoclonal en presencia del segundo anticuerpo monoclonal el cual está marcado con I 5. Después de la incubación se aspira el contenido en los tubos y estos se lavan para eliminar los anticuerpos marcados no fijados y se mide la radiactividad enlazada. Los valores desconocidos son determinados por interpolación con la ayuda de la curva estándar. La cantidad de radioactividad es directamente proporcional a la concentración de FSH en la muestra.. REACTIVOS PROPORCIONADOS Todos los reactivos del equipo conservados sin abrir a -8 C son estables hasta la fecha de caducidad mencionada en el equipo. Las condiciones de conservación de los reactivos después de la preconstitución o dilución son indicadas en el párrafo Procedimiento del ensayo... Tubos recubiertos de anticuerpo monoclonal anti-fsh: x 5 tubos (listos para su uso).. Anticuerpo monoclonal anti-fsh marcado con I 5 : un frasco de 5,5 ml (listo para su uso) El frasco contiene 37 kbq (en la fecha de fabricación) de inmunoglobulinas marcadas con I 5 en forma líquida con tampón, proteínas, azida de sodio (<,%; vease el apartado de precauciones) y un colorante..3. Estándares: 6 frascos de ml (listos para su uso) Los frascos de estándar contienen entre y 8 UI/L de FSH de origen humano en suero humano (vease el apartado de precauciones). La concentración exacta se indica en la etiqueta de cada frasco. Los estándares han sido calibrados de acuerdo con el estándar internacional de la OMS 94/ Sueros de control: frascos (liofilizados) Los controles contienen FSH liofilizada en suero humano (véase el apartado de precauciones). Los valores esperados se encuentran en el intervalo de concentración que se indica en el suplemento..5. Solución de lavado (x): un frasco de 5 ml La solución concentrada debe diluirse antes de utilizarla. Nota: La fechas de caducidad y las temperaturas impresas en las etiquetas de los reactivos son válidas sólo para el fabricante, durante su almacenamiento a largo plazo hasta antes del ensamblaje del equipo. No tomar en cuenta. 3. MATERIAL NECESARIO PERO NO PROPORCIONADO Además del equipo normal de laboratorio, es necesario utilizar el material siguiente: - micropipetas de precisión ( µl). - pipetas semi-automáticas (5 µl, ml). - agitador tipo Vórtex. - agitador con movimiento horizontal u orbital. - sistema de aspiración. - contador gamma calibrado para I PRECAUCIONES 4.. Precauciones generales - Dejar que todos los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de su utilización. - No mezclar los reactivos de lotes diferentes. - Realizar simultáneamente la curva estándar y el analisis de las muestras. - La calibración correcta del agitador es muy importante para la reproducibilidad del análisis. - Se recomienda realizar el ensayo por duplicado. 4.. Protección contra las radiaciones ionizantes La compra, posesión, uso y transferencia de material radiactivo están sujetas a las disposiciones legales del país en el que se utiliza. El cumplimiento de las normas básicas de seguridad radiológica asegura una protección adecuada. - No se debe comer, beber, fumar o aplicarse cosméticos en los laboratorios donde los productos radiactivos son utilizados. - No pipetear las soluciones radiactivas con la boca. - Evitar cualquier contacto directo con todo producto radiactivo mediante el uso de guantes y bata de protección. - Toda manipulación de material radiactivo debe realizarse en el lugar adecuado, alejado de pasillos y espacios ocupados. - Los productos radiactivos deben almacenarse en su condicionamiento de origen en una zona adecuada. - Se debe llevar y conservar actualizado un registro de las entradas y almacenamiento de todos los productos radiactivos. - El equipo y material de vidrio de laboratorio que son objeto de contaminación se deben eliminar con el fin de evitar la contaminación cruzada con otros isótopos. - Cada caso de contaminación o de pérdida de sustancia radiactiva deberá ser resuelta de acuerdo con los procedimientos establecidos. - Toda manipulación de desechos de materia radiactiva debe hacerse de acuerdo a las reglas en vigor Azida de sodio Algunos reactivos contienen azida de sodio como agente conservante. La azida de sodio puede reaccionar con el plomo, el cobre y el bronce y formar azidas metálicas explosivas. Después de desechar las soluciones por el sumidero, dejar correr un volumen importante de agua Suero humano Los productos de origen humano contenidos en los reactivos de este equipo han sufrido un diagnóstico negativo, frente a los anticuerpos anti-hiv-, y HIV-, los anticuerpos HCV, y el antígeno de superficie HBs. Sin embargo, deben ser manipulados como productos infecciosos. De hecho, ninguna prueba puede asegurar la ausencia completa de virus, por lo cual es necesario tomar las precauciones durante la manipulación. Todas las muestras de suero o de plasma deben manejarse como si fueran capaces de transmitir los virus de la hepatitis o del SIDA. 5. COLECCIÓN, PREPARACIÓN, ALMACENAMIENTO Y DILUCIÓN DE LAS MUESTRAS - Recoger la sangre en tubos secos con o sin aditivos. - Separar el suero o el plasma de las células mediante centrifugación. 9

10 - Las muestras séricas o plasmáticas pueden ser conservadas a -8 C, si el ensayo se realiza en 4 horas. Sino, es preferible conservarlas congeladas (< -8 C) y preferiblemente en alícuotas, con el fin de evitar congelaciones y descongelaciones sucesivas. - Aquellas muestras que presenten una concentración superior al estándar de mayor concentración, se diluirán con el estándar cero. 6. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO 6.. Preparación de los reactivos Poner los reactivos a la temperatura del laboratorio Preparación de los sueros de control Añadir el volumen de agua destilada indicado las etiquetas de los frascos. Esperar 3 minutos después de la reconstitución y agitar suavemente evitando la formación de espuma antes de pipetear los estándares en los tubos. Los frascos reconstituidos pueden ser conservados una semana a -8 C; para periodos más largos, es preferible conservarlos congelados a una temperatura inferior a -8 C hasta la fecha de caducidad del equipo Preparación de la solución de lavado Verter el contenido del frasco en 95 ml de agua destilada y homogeneizar. La solución diluida se puede conservar a -8 C hasta la fecha de caducidad del equipo. 6.. Procedimiento del ensayo PASO Adiciones* En los tubos recubiertos de anticuerpos, añadir sucesivamente: - µl de estándar, control o muestra y - 5 µl de trazador Mezclar PASO Incubación Incubar 9 minutos a 8-5ºC con agitación (>8 rpm) o durante la noche (8 horas) a 8-5 C sin agitación PASO 3 Conteo Aspirar con cuidado el contenido de cada tubo (excepto el de los dos tubos de la cpm total) Lavar dos veces con ml de solución de lavado Contar las cpm enlazadas (B) y las cpm totales (T) durante minuto. *Añadir 5 µl de trazador en tubos suplementarios para obtener las cpm totales. 7. RESULTADOS Los resultados se obtienen a partir de la curva estándar por interpolación. La curva sirve para determinar las concentraciones de FSH de todas las muestras medidas al mismo tiempo que los estándares. 7.. Curva estándar Los resultados presentados en este folleto han sido calculados usando una curva log-log (modo spline), representando la radioactividad medida en el eje de ordenadas (cpm std cpm std ) y en abscisa las concentraciones de FSH de los estándares (UI/L). La utilización de otro modo de cálculo puede conducir a resultados ligeramente diferentes. Actividad total: 5538 cpm cpm Estándares FSH (UI/L) cpm (n=3) B/T (%) std , ,6,7,83 8,3 3,48 39,8 cpm std Ejemplo de curva estándar, no utilizar para realizar los cálculos. 7. Muestras Marcar el valor (cpm muestra - cpm std ) sobre el eje vertical luego el punto correspondiente a la curva estándar. Deducir la concentración de FSH de la muestra por la lectura sobre el eje horizontal. Las concentraciones para las muestras diluidas deben tener en cuenta el factor de dilución. 8. CONTROL DE CALIDAD Las prácticas correctas de laboratorio implican que los controles sean utilizados en cada serie de análisis para asegurar la calidad de los resultados obtenidos. Dichos controles deben ser tratados de la misma forma que las muestras a analizar y se recomienda analizar los resultados con la ayuda de métodos estadísticos apropiados. 9. VALORES ESPERADOS Se recomienda a cada laboratorio establecer sus propios valores de referencia. Las concentraciones de FSH medidas sobre muestras séricas obtenidas de individuos considerados sanos son dadas en la siguiente tabla a título indicativo. n Mínimo 5% Mediano 95% Máx. Hombres 67,3, 5,,5 Mujeres Fase folicular Pico preovulatorio Fase luteínica Post-menopausia 36 8,,3 7 3,4 3,,7 3 6,5, 4, 7, Las concentraciones séricas de FSH en niños pre púberos son inferiores a UI/L.. CARACTERÍSTICAS DEL ANÁLISIS para mayores detalles vease la página «APÉNDICES».. Sensibilidad analítica:, UI/L... Especificidad El anticuerpo utilizado en este análisis es altamente específico de la FSH. Las reactividades cruzadas que se obtuvieron frente a numerosas moléculas relacionadas (hlh, htsh, hcg) fueron extremadamente bajas..3. Precisión.3.. Intra-análisis Las muestras han sido analizadas 8 veces en una misma serie. Los coeficientes de variación obtenidos son inferiores o iguales a %..3.. Inter-análisis Las muestras han sido analizadas por duplicado en 38 series diferentes. Los coeficientes de variación obtenidos son inferiores o iguales a 6,3%..4. Exactitud.4.. Prueba de dilución Las muestras con concentración elevada se diluyeron con el estándar cero del equipo. La exactitud del test ha sido evaluada por un análisis de regresión: y (concentración teórica) =,4 x (concentración observada) +,4; r =,98 (n = 4).4.. Prueba de recuperación Cantidades conocidas de FSH se añadieron a sueros humanos. La exactitud del test ha sido evaluada por un análisis de regresión: y (concentración teórica) =, x (concentración observada) +,; r =,99 (n = 5)