: ک ی ن و ر ت ک ل ا ت س پ

Transcript

1 م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب ر ک ی م ه ی ر ش ن : 9 2 ی پ ا ی پ ر د ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ی ر و ت س ا پ س و ک و ک و ل ی ف ا ت س ا ی ر ت ک ا ب ن ی م ا 2 *1 ی ن ی س ح ن ی م ا ر و خ ی ش ه د ن ا ی ز ر ب ل ا 1 س ا ن ش ر ا ک ن ی و ز ق ) ه ر ( ی ن ی م خ م ا م ا ی ل ل م ل ا ن ی ب ه ا گ ش ن ا د ی ز ر و ا ش ک ی ژ و ل و ن ک ت و ی ب د ش ر ا ن ی و ز ق ) ه ر ( ی ن ی م خ م ا م ا ی ل ل م ل ا ن ی ب ه ا گ ش ن ا د ی ز ر و ا ش ک ی ژ و ل و ن ک ت و ی ب ه و ر گ ی م ل ع ت ئ ی ه و ض ع 2 ن ا ر ی ا ن ی و ز ق ن ا ر ی ا ن ی و ز ق ر و ی ر ه ش 6 : ت ف ا ی ر د خ ی ر ا ت ن ا ب آ 9 2 : ش ر ی ذ پ خ ی ر ا ت ه د ی ک چ ی ا ه د ن و ی پ د ن ر د ا ق ه ک د ن ت س ه ا ه م ی ز ن آ ز ا ی ه و ر گ ) DNase( ا ه ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د د ن ر ا د ز ا ئ ل ک و ن ی ا ه م ی ز ن آ ه د ن ز ت ا د و ج و م م ا م ت ی ا ه ن و م ز آ و 16S rrna ر گ ن ا ش ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب Staphylococcus pasteuri ی ر ت ک ا ب د ن ن ک ش ب ا ر DNA ل و ک ل و م ر ت س ا ی د و ف س ف ی س ک ا د ی ا ه م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف د ی س ر ت ب ث ه ب NCBI/EMBL ه ا گ ی ا پ ن ژ ک ن ا ب ر د KC ی س ر ت س د ه ر ا م ش ا ب و ی ی ا س ا ن ش ی ی ا ی م ی ش و ی ب ی س ر ر ب حلقوی و ی ط خ DNA ی و ر م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف ی ر ت م و ت و ف و ت ک پ س ا ش و ر ه س ا ب ه د م آ ت س د ب S pasteuri ی ر ت ک ا ب ر د ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ر ا ر ق ی س ر ر ب د ر و م ا ه م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف ی و ر ز ی ن Mg 2 Ca 2 و Mn 2 Ca 2 Mg 2 کاتیونهای و NaCl ت ظ ل غ ph ی ا ه ر ا م ی ت ر ث ا د ش ش ر ب ر د ی م ی ز ن آ ی ا ه ی س ر ر ب ت س ا ی و ق ل ح DNA ل و ک ل و م ه ن ا گ ی ش ر ب ه ب ر د ا ق S pasteuri ی ر ت ک ا ب ز ا حاصل DNase م ی ز ن آ ت ف ر گ ن ی ا pet21a () د ی م س ال پ ش ر ب ش ی ا م ز آ ر د ه ک ی ر و ط ه ب د ن ک ی م ل م ع ی ص ا ص ت خ ا ت ر و ص ب م ی ز ن آ ن ی ا ه ک د ا د ن ا ش ن حلقوی DNA ه ب ط و ب ر م ش ر ا ز گ ن ی ل و ا ن ی ا د ر ا د ن ا ر ه ت ش ر و د DNA ل و ک ل و م ش ر ب ی ی ا ن ا و ت DNase م ی ز ن آ ن ی ا د ا د ش ر ب ا ر ه ط ق ن ک ی ا ه ن ت م ی ز ن آ ر و ض ح ر د و ph 5/5 ر ال و م 0/6 ت ظ ل غ ا ب NaCl ر و ض ح ر د م ی ز ن آ ت ی ل ا ع ف ن ی ر ت ش ی ب ت س ا S pasteuri ی ر ت ک ا ب در DNase ی ا ه م ی ز ن آ د ش ه د ه ا ش م 1 mm ت ظ ل غ ا ب Mg 2 Ca 2 ی ا ه ن و ی ت ا ک ن ا م ز م ه 16S rrna DNase ت ی ل ا ع ف Staphylococcus pasteuri ی ر ت ک ا ب : ی د ی ل ک ت ا م ل ک : ن ف ل ت ن ا ر ی ا ن ی و ز ق خ ی ش ه د ن ا ی ز ر ب ل ا ن ی م ا : ل و ئ س م ه د ن س ی و ن ن ی و ز ق ) ه ر ( ی ن ی م خ م ا م ا ی ل ل م ل ا ن ی ب ه ا گ ش ن ا د ی ز ر و ا ش ک ی ژ و ل و ن ک ت و ی ب ه و ر گ : س ر د آ aminalborzian@yahoocom : ک ی ن و ر ت ک ل ا ت س پ

2 9 2 ی پ ا ی پ م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن ه م د ق م ل ا س ر ر ر ر ر ر د ن ا ر ا ک م ه و و و و و و و ی ن س چ ا ر Staphylococcus pasteuri س ن ج د ن د ر ک شناسایی Staphylococcus 2 ی ا ر ا د س و ک و ک و ل ی ف ا ت س ا ت ف ه ز ا ه 3 ن و گ ه 9 ن و گ سلولللهای است ه ه ه ه ه ه ی و س ن ی ا ت ب ث م گرم کوکسی غیرمتحرک ا ز ر و پ س ا ر ی غ ی ر ت ک ا ب ο C ی ا ه ا م د ر د ی ی ا ت ر ا ه چ و جفت فرد ت ر و ص ب ز ا د ی س ک ا ت ب ث م ز آ ه ه ه ر و ا و ز ا ل ا ت ا ک د ن ک ی م د ش ر ه ج ر د و ز ر ا ک ا س ز ک و و و و و و و و ل گ ی ا ه د ن ق ف ر ص م ر د و ت س ا ی ی ف ن م ) )8 د ن ک ی م د ی ل و ت د ی س ا ز و ت ک و ر ف ن ی ل و ا ) DNase( ( ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ی ا ه م ی ز ن آ ی ی ا ی م ی ش و ی ب ت ر و ص ب ل ا س ر د د ر و م ی س ر ر ب ر ا ر ق ر ا ب ت ی م ه ا ز ا ی ص ا ص ت خ ا ز ا ئ ل ک و ن و د ن ا ای ه زیم ن آ ) )3 د ن ت ف ر گ ن و ن ک ا ت و ند ت س ه ر ا د ر و خ ر ب DNA گ ن ی ن و ل ک ر د ی ا ه ژ ی و ت ف ا ی ز ی ا م ت م ی ش ر ب ی ل ا و ت د و د ح ه د ش ه ع ل ا ط م و ج و ت ر ذ گیاهان در ا ه ز ا ئ ل ک و ن ت س ا ) 4 3 ( ( ( ( ) 9 2 و 0 1 ( د د ن ا ه ه د ش ا د ج ت ر ذ ع ع ا و ن ا ی خ ر ب ی ا ه ه ش ی ر ز ا II ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ز ا ئ ل ک و ن ن ی ا گردید خالص نسبی ر و ط ه ب و ا ت 5/4 7/0 د ا د نشان فعالیت ی ل و ک ل و م ن ز و ا ب ت ر ذ ه ش ی ر ت ن ج و م ه م ی ز ن آ ن ی ا د م آ ت س د ب ر د ز ا ر گ ی د م ی ز ن آ ک ی ت ی ل ا ع ف 6/2 ph ه ن ی ه ب ph ر د ر ا ز ه 1 3 ن و ت ل ا د ن ا ش ن ه ن ی ه ب د و ب DNA و RNA ی اا ا ههههههه ته ش ر ز ی ل و ر د ی ه ه ب ر د ا ق و د ا د د ی س ا ک ی ل ر ب ی ژ ا ب و ج ه د ش ف ص ن ر ذ ب ن د ر ک ه ب و ک ن ا ) 0 1 ( ت ف ا ب ر د ا ر ا ه ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د و ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ت ی ل ا ع ف ی ا م د ر د ا ه ش ن ک ا و ن ی ا د ا د ش ی ا ز ف ا ن ر و ل آ ه ج ر د 5 5 د ح ه ب 6 ph ی اک ر و خ چ ار ق ) 9 2 ( ( ( ( )) ( ( ( ( ( د ی س ر د و خ ه ن ی به ز ی ن Lentinus edodes ش ر ب ا ب ا ه م ی ز ن آ ن ی ا د ن ک می و ن و م ن ی ن ا و گ ز ا ئ ل ک و ن و د ه ت ش ر د ی ل و ت ) 5GMP( ( ( ( ت ا ف س ف Le1 ک ی DNA د ی ل و ت Le3 و ی ا ه ت ن ا و ) 8 1 ( د د ن ن ک ممی م Rhizoctonia stolonifer چ ر ا ق ر د ی ر گ ی د ی ا ه ز ا ئ ل ک و ن ی ا ه ن ن و ی ر ی ثث ث أ ت ت ح ت ه ک ت س ا شده بررسی ی ز ل ف ر ا ر ق ز ا آنزیم این د ر ی گ می ت س ا ل و ل س ن و ر ب ع و ن ک ی شدهانددد بررسی ز ی ن حشرات در ا ه ز ا ئ ل ک و ن ی ز ا ئ ل ک و ن ا ب ) 2 3 ( ( ( ( (( ( ( ه ن ی ه ب ph ت ی ل ا ع ف ه ه ه ه ر ش ح لاور محتوای ر د 0 1 5/ شد شناسایی ه ج ر د 5 5 ی ا م د ر د Spodoptera litura ع و ن ت DNase ی ا ه م ی ز ن آ )2( ممممممی م م م م م ن ا ش ن ی ی ا ل ا ب ر ا ی س ب ی ر ت ک ا ب ز ا ه د م آ ت س د ب DNase م ی ز ن آ ل ا ث م ی ا ر ب د ن ه د ر ی ا س ز ا Micrococcus pyogenes ی ا ر ب م ی ز ن آ ن ی ا ت س ا ت و ا ف ت م ا ا ا DNaseه ن و ی به فعالیت ر ا ی س ب Ca 2 و ال ا ب ی ا ه ا م د ه ب ی ا ه ظ ح ال م ل ب ا ق ر و ط ب و د ر ا د ز ا ی ن ph 8/6 ت س ا ت م و ا ق م ن ژ ک ی ا ه ن ت ن و ن ک ا ت ) )9 ( ی ر ت ک ا ب ر د و ه د ش ی س ر ر ب S aureus ه ن و گ ) 3 2 ( ت س ا ه د ش ن و ل ک ر د ز ا ئ ل ک و ن E coli ن ژ شدهترین حفاظت ریبوزومی RNA ه ب ط و ب ر م ن ژ ی ی ی ب ا ی ی ی ی ل ا و ت rrna ن ژ ) 6 3 ( ( ( ( ( ( ( ت س ا ل و ل س ر ه ن و ر د مختلف موجودات ز ا شده نوکلئوتیدی ن ی ا د ن ه د می ن ا ش ن شباهت توجهی ه ک بدست توالللیهای م ه ا ب د ن ن ا و ت می ه د آم ت ر و ص ه ب و ه د ش ه س ی ا ق م ک ی ن ژ و ل ی ف ی م و ن و س ک ا ت ن ی ی ع ت ی ا ر ب ی ل ا و ت ن ی ا ر ب ا بن د و ش ه اد ف ت س ا ا ه اکتررری ب ل م ا ک ت ط ب ا و ر د ن ا و ت می و ه ب ل ب ا ق ر ر ر و ط ت س ا ی ن ع م ن ی ا ه ب ف ل ت خ م موجوددددددددددات از ی ا ههههههه ه ه هه ه ه د ر ت س گ ن ی ب ع و ن ت ن ی م خ ت 16S rrna ن ا ش ن ا ر اا ا مممممه م سم ی ن ا گ ر ا و ر ک ی م ن ی ب ی ک ش ز پ و ی ط ی ح م ی ر ت ک ا ب ر ا ز ه 16S rrna ی ل ا و ت د ه د ی ژ و ی ب ت ا نن ع ال ط ا ی نن ل م ز نن ک ر م م م ت ی ا س ر د NCBI ( ت س ا د و ج و م ) 6 3 ( د ر ا د ل و ط د ی ت و ئ ل ک و ن ر ظ ن د ر و م ی ل ا و ت ضر ا ح ق ی ق ح ت ف د ه ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ی س اک د ی ز ک ا خ ی ر ت ک ا ب ) DNase( ( ( ( ( ( ( ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ن ی ل و ا ن ی ا ت س ا Staphylococcus pasteuri ش ر ا ز گ ه ن و گ ن ی ا ر د ریییییییبونوکلئازی داکسی ت ی ل ا ع ف د ور م ر د ت س ا ی ر ت ک ا ب

3 ت) رک ش ی) و ا ح تمام) شامل ی) و ا ح ت) ک ر ش ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ا ه ش و ر و د ا و م ی ر ت ک ا ب ی ز ا س ا د ج و ک ا خ ه ن و م ن ی ر و آ ع م ج 1 ی ا ه ه ن و م ن سطحی 0 خاک گرمی سازی رقیق ش و ر ا ب شد برداشته ی ر ت م 1 ق م ع ا ت در سریالی ی 0 ت ن ا س ب آ ر و ظ ن م ه ب ه ک د م آ ت س د ب ن و ی ل ی م ر د ک ی ت ظ ل غ ل ی ر ت س ا ی تر ک ا ب ت ش ک ل و ل ح م ت س ا ب س ا ن م ت ش ک ط ی ح م ی و ر ر ب ک ی ن ی ا ز ا ر رر ر ر ر ر ر رر ر ر ر ر ر یت ل ی ل می Luria ( ( ( آگار LB ) Bertani Broth, Miller, HIMEDIA, M1245 ت د م ه ب ه ج ر د 7 3 ی ا م د ر د و ت ش ک ه ب و ک ن ا هفته یک ف ل ت خ م ی اا ا ییییییییه ی ی ی یی ن و ل ک ه ت ف ه ک ی ت ش ذ گ ز ا د ع ب د ش صفات نظر ز ا ه د م آ ت س د ب ی ک ی ژ و ل و ف ر و م ت س ت د ن ن ا م گرممم باکتریییییهااای شدند بررسی ی ر ت ک ا ب ل ک ش و م ر گ ه ب )Staphylococcus اال ن م ت ح ا ( ل ک ن ش ی و ر ن ک و ت ن ب ث م ا ت ر ث ک ا د ح ص و ل خ ه ب ن د ی س ر ر و ظ ن م ) 1 ل و د ج ( د ن د ش ت ش ک ا و ه ب ا ش م ج ا ر خ ت س ا ل س ن 4 ش ن ک ا و م ا ج ن ا و DNA 16S rrna ه ع ط ق ر ی ث ک ت ر د ط ی ا ر ش ی را ب PCR ن م و ی ن ش و ر ز ا اا ا یه ر ت ک ا ب ز ا DNA ج ا ر خ ت س ا ی ا ر ب ک ی ر و ظ ظ ن م ن ی ا ی ا ر ب ) 8 2 ( شد استفاده ن ا ر ا ک م ه ی ل ی م و و د ی ا ر ب g ر د ی ی ا ی ر ت ک ا ب سلول سوسپانسیون از ر ت ی ل ا ب ا ه ل و ل س ی و ر ع ی ا م ف ذ ح ز ا د ع ب د ش ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ه ق ی ق د mm NaCl 001 mm( STE ر ف ا ب ر ت ی ل و ر ک ی م ه ت س ش ر ا ب و د ) ph:8 و EDTA 1 mm و Tris/HCl01 د ن د ش ب و س ر و د ت د م ه ب g ر د ا اا له ل ل ل ل ل و ل س س پ س ه د ا د ذف ح رویی مایع د ن د ش ر ف با ر ت ی ل و ر ک ی م ر د ا اا ا ا به ب ب ب و س ر د ی د ر گ و ه ق ی ق د 0 1 mm( TE ph:8 و EDTA 1 mm Tris/HCl 0 5 ه ش ی ش ه ل و ل گ گرم میلی ه ز ا د ن ا ا ب ی ا و د ش ه ف ا ض ا ا ه ب و س ر ه ب ر ت م و ر ک ی م ا ب ه د ش ع ا ب ش ا ( سپس شدند حل ل ن ف ر ت ی ل و ر ک ی م ن ی ا ت ی ا ه ن ر د و د ش ه اف ض ا TrisHCl ه ل ح ر م ن ی ا ز ا د ع ب شد ورتکس ه ی ن ا ث 0 6 ت د م ه ب ل و ل ح م ی ا ر ب g ر د اا ا هه ن و م ن ت د م ی ا م د ر د ه ق ی ق د 5 ی ی و ر ع ی ا م ز ا ر ت ی ل و ر ک ی م و شدند سانتریفیوژ درجه ر ا د ق م د ن د ش ل ق ت ن م جدید میکروتیوب ه ب 4 ر ت ی ل و ر ک ی م 0 4 ه د ن ا س ر ر ت ی ل و ر ک ی م ه ب م ج ح و ه ف ا ض ا ن آ ه ب TE ر ف ا ب ر ا د ق م د ش ه ف ا ض ا ل و ل ح م ه ب م ر ف و ر ل ک ر ر ت ی ل و ر ک ی م ت د م ه ب g ر د ل و ل ح م س پ س و ه د ش ر د ه ق ی ق د 5 ع ی ا م ز ا ر ت ی ل و ر ک ی م د ن د ش ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ه ج ر د 4 ی ا م د ص ل ا خ DNA ن ا و ن ع ب ی ی و ر گردید جدا و ر د ی ا م د ی د ع ب آزمایشششششششهااای برای ه ج ر د 0 2 ت ی م ک و ص و ل خ A 260 A/ 280 سنجی طیف د ش ا ب ا ب د ش ی ر ا د ه گ ن ن ی ی ع ت DNA و 27F ) 8 3 ( ( ( ( ( ( ( ( ( ی ن ا ه ج ی ا ه ر گ ز ا غ آ ز ا ه د ا ف ت س ا 5AGAGTTTGATCATGGCTCAG3 27F( 1525R )5AAGGAGGTGATCCAACC3 1525R و 16S هههههه ه ه عه ط ق تکثیر برای ) ی ب و ن ج ه ر ک ر و ش ک Bioneer rrna ط ی ا ر ش ش ن ک ا و ق ب ا ط م PCR ت د م ه ب ه ج ر د 4 9 ه ی ل و ا سازی واسرشته ی ا م د د ش ن ی ی ع ت ر ی ز ت د م ه ب و ه ج ر د 49 چرخهها سازی واسرشته ی ا م د ت د م ه ب و ه ج ر د 4 5 ل ا ص ت ا ی ا م د ه ی ن ا ث ه ق ی ق د ی ا م د ه ی ن ا ث ی ی ا ه ن ر ی ث ک ت ی ا م د و ه ی ن ا ث 0 9 ت د م ه ب ه ج ر د 27 تکثیر 5 3 ش ن ک ا و چرخههای تعداد ه ق ی ق د 0 1 ت د م ه ب و ه ج ر د : ت ف ر ر ا ک ب ر ی ز د ا و م ش ن ک ا و ب و ی ت ر ه ر د د و ب 0 5 ng 0 2 pmol ت ف ر ر گ گ گ گ ز ا غ آ 0 2 pmol و گ ل ا DNA ر گ ز ا غ آ ت ش گ ر ب ت ی ک مستر میکرولیتر 7 و ه ز ی ن و ی د ب آ ر ت ی ل و ر ک ی م 0 1 KCl 0 5 mm PCR % 1 MgCl 2 2 mm ph 9 ا ب TrisHCl 0 1 mm ن و ت ی ر ت ) v/v( ل ر ت ن ک ) و گ ل ا ر ه ز ا ل و م و ر ک ی م X 0 1 ی گ ود ل آ عدم تایید ی ا ر ب ) ن ا ر ی ا ن اژ ن ی س ل ر ت ن ک و ز ا ر ی غ ه ب ش ن ک ا و ت ا ب ی ک ر ت م ا م ت ) dntp DNA ت ا ب ی ک ر ت ز ا ر ی غ ه ب س پ د ش م ا ج ن ا ش ن ک ا و ی ر س ر ه ر د ) ا ه ر گ ز ا غ آ ر ی ث ک ت ز ا

4 ت) خ ا س باز 0 جفت و) 9 2 ی پ ا ی پ م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن ی ز ا س ص ل ا خ و ب س ا ن م م ج ح ر د ر ظ ن د ر و م ه ع ط ق ل و ص ح م ص ل ا خ ت ی ک ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب PCR Accuprep شرکت به ی ب ا ی د و د ح آمده بدست ت ک ر ش ت س ی ز و و و پ ا ک ت ی ز ا س توالی برای ) Bioneer ل و ص ح م شدند ارسسسسسال ت اش د ل و ط ه د ا د ه ا گ ی ا پ ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب شده خوانده توالیهای ی س ر ر ب د ر و م د ی د ر گ ص خ ش م ت س ت ک ی ژ و ل و ی ز ی ف س ن ج و گرفته قرار ه ن و گ و NCBI اا ا ییییییییه ییی ی ری ت ک ا ب و ک ی ژ و ل و ف ر و م ی ا اا ا ا ته تت ت ت ت ت ت ت ت تت ت س ت م گر ز ال ا نن ت ا ک ی ر ت ک ا ات ک ی تر ک ا ب ل شک ی ا ر ب کشت محیط ر د ک م ن د ص ر د ل م ح ت ) 1 ل و د ج ( د ش م ا ج ن ا ن ی ئ ت و ر پ ج ا ر خ ت س ا د ی ی ا تت ت ی ی ا ه ن ی ر د ا ه ب ش و ر ز ا ا ه باکتری ز ا ن ی ئ ت و ر پ ج ا ر خ ت س ا ی ا ر ب استخراج برای ) 4( ( ( ( ( د ش ه د ا ف ت س ا : د ش ل م ع ر ی ز ل ح ا ر م ق ب ط ا ه ری ت ک ا ب ا د ت ب ا کشت محیط ( ر ر ر ا گ آ LB ن ی ئ ت و ر پ ز ا Luria Bertani ل ی ر ت س ا ) Broth, Miller, HIMEDIA, M1245 ه ی ه ت ی ا م د ا ب ر ر ز ی ر ف ر د شده ذخیره ک ت س ا ز ا ا ه ری ت ک ا ب د ش 0 8 ی و ر 2 ت د م ه ب ی ک ی ر ا ت و ه د ش ت ش ک ا اا نه آ ت 4 ع ا س ر د ی ا م د و ه ج ر د 7 3 ی ر ت ک ا ب ز ا س پ س د ش ه ب و ک ن ا ل ی ر ت س ا پ و ل ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب کلون تک ک ی ه ت ف ا ی د ش ر کشت مایع LB ط ی ح م ر د و ه ت ش ا د ر ب د ش ت د م ه ب ی ک ی ر ا ت ه ج ر د 7 3 ی ا م د ا ب شیکر انکوباتور ر د ت ع ا س سپس شد انکوبه rpm ر و د ا ب ر ک ی ش ی ر ت اک ب ی ا م د د ش ر ه ت ف یا ر و د و ه ج ر د 4 ژ و ی ف ی ر ت ن ا س و ر ک ی م ز ا ه اد ف ت س ا ا ب 4 2 ی ل ی م 0 1 ای ر ب rpm با ت ل پ و د ش ه ت خ ی ر ر و د ی ی و ر ع ی ا م د ش ه د ا د ب و س ر ر ت ی ل ه ق ی ق د 2 ه ی ه ت و 50 mm TrisHCl( ی و ا ح TE ر ف ا ب ر ت ی ل ی ل ی م 1 ر د ه د ش م ا د ک ر ه 52 mm NaEDTA و ز ا ه اد ف ت س ا ا ب ) ph 8 ی ر ت ک ا ب ب و س ر ی ا ر ب ا د د ج م گردید حل شدید ورتکس ژ و ی ف ی ر ت ان س ه ق ی ق د ی ر ت ک ا ب ی ا دم ا ب 1 ی ا ر ب rpm و ه ج ر د 4 پلت شد ریخته ر و د رویی مایع د ش م ا ج ن ا ر د ل ص ا ح ر ت ی ل ی ل ی م 1 کی م ن ت ا ف فس ر ف با اا ا ب ژ ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ا د د ج م د ش ل ح د ی د ش س ک ت ر و ا ب )PBS( د د د ش م ا ج ن ا ه ق ی ق د 1 ی ا ر ب rpm و ه ج ر د 4 ی ا م د ی ل ی م 0 1 ر د ل ص ا ح ی ا ه ت ل پ د ش ه ت خ ی ر ر و د ی ی و ر ع ی ا م ت د م ه ب و ه د ش ل ح سرد خالص استون ر ت ی ل ه ی ن ا ث ی ی ا م د اا ا ب سانتریفیوژ سپس شد انجام شدید ورتکس ع ای م د د ش م م م ا ج ن ا ه ق ی ق د 3 ی ی ی را ب rpm و ه ه ج ر د ض ر ع م ر د ا ه ت ل پ و د ش ه ت خ ی ر ر و د ی م ا ر آ ه ب ی ی و ر % 1 SDS ل و ل ح م ر ت ی ل ی ل ی م 1 شدند خشک ا و ه ل و ل ح م ا ی ه ف ا ض ا خشک باکتریایی ت ل پ ه ب ) mm ر ف ا ب ت ا ف س ف د ش ول ل ح م ا دد ج م س ک ت ر و ت مد ه ب د ی شد به ت د م و ه د ش م ا ج ن ا ه ی ن ا ث 0 2 ر د ه ق ی ق د 2 د ش ه ر خی ذ ق ا ت ا ی ا م د rpm و ه ه ج ر د 4 ی ی ی ا م د ا اا ب ژ ژ ژ ژ ژ و ی ف ی تر ن ا س ی ی و ر ع ی ا م د ش م ا ج ن ا ه ق ی ق د 5 ی ا ر ب ن ی ئ ت و ر پ ن ا و ن ع ه ب شد منتقل جدید استریل ب و ی ت ه ب ت ق د ا ب شده استخراج م ج ح 1/3 ن د و ز ف ا ( % 0 5 ل و ر س ی ل گ ک ت س ا ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب و ن ی ئ ت و ر پ ک ت س ا ) ن ی ئ ت و ر پ ه ب گلیسرول استک ز ا 2 1 5/ ل% رو س ی ل گ د ن د ش ل ق ت ن م 20 ر ز ی ر ف به ی ز ا س ه ر ی خ ذ ت جه و شد ه ی ه ت ن ی ئ ت و ر پ ت ی ف ی ک و ت ی م ک ن ی ی ع ت ی ا ه ن ی ئ ت و ر پ ت ظ ل غ ی س ر ر ب صورت بردفورد ت خ ا س UV ش و ر با شده استخراج ی و ا ح ر ت م و ت و ف و ر ت ک پ س ا ه ا گ ت س د ) )7 ( ( ( ت ف ر گ 595 nm جذبببب در Labomed شرکتتتتتتت ن ا و ن ع ه ب ج ا ر خ ت س ا ر ف ا ب 0 2 µl ی و ا ح ه ن و م ن ز ا د ش م ا ج ن ا ه د ا ف ت س ا ا ب د ر ا د ن ا ت س ا ر ا د و م ن م س ر د ش ه د ا ف ت س ا صفر نمونه Sigma ت ک ر ش ( گاوی آلبومین سرم مختلف ر ی د ا ق م ز ا د ش م ا ج ن ا ) ن ا م ل آ Aldrich

5 و) د ل) و ل ح م ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب ه ل ی س س س و ه ب ه د ش ج ا ر خ ت س ا ی ا ه ن ی ئ ت و ر پ ت ی ف ی ک ی س ر ر ب ل ی ر ک آ ی ل پ ل ژ ی و ر ی د و م ع ز ر و ف و ر ت ک ل ا ت ا ف ل و س ل ی س د و د م ی د س ی س ک ا د زیم ز ز ن آ ی س ر ر ب ز ر ا گ آ ی ا ر ج ا ق ب ط ش ی ا م ز آ ن ی ا )SDSPAGE( د ی م آ ی و ا ح 02( ( د ش م ا ج ن ا ل ژ ی و و و ر ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر دادهتوسط شرح روش ن ی ا ر د ) 6 1 ( ( ( د ش م ا ج ن ا ن ا ر ا ک م ه و ن ی و ک ن و د ب شده استخراج ن ی ئ ت و ر پ ز ا ر ف ا ب SDS mm ی ا ج ه ب ر د SDS ل ا ع ف ر ی غ ث ع ا ب SDS ا ر ی ز شد استفاده د د ر گ ممی م ر د ش ی ا م ز آ ن ی ا ب ا ی غ و ر و ض ح ر د pet21a () دو کاتتتیونهای ی ت ی ف ر ظ ش و ر ت ا ف س ف ) ج ج ج ج ج ا ر خ ت س ا ه ل ح ر م ن د ش ا ه م ی ز ز ز ن آ د ی مس ا ل پ و ی ط خ DNA ر ال و ن ن م ی ی ی ل ی م 1 Mn 2 Ca 2 ا ه م ی ز ز ن آ کوفاکتورهااای تا د ن د ش سری پالسمیدهای م ض ه Mg 2 و ) 9 3 ( ( ( ( گردند معرفی ع ق ا و ر د pet21a () ی ا ه ی ی ل ا و ت ن ا ی ب ی ال ا ب ح ط س و گ ن ی ن و ل ک طراحی هیستیدییییییییینی ی ل پ ه ل ا ب ن د ه ب ه د ش مع ج ت ل مح یک دارای پالسمید د ی م س ال پ ن ی ا ه ز ا د ن ا ت س ا ر د ل ی ل د د ر مو ش ی ا م آز ن ی ا ی ش ر ب ه ا گ ی ا ج ی ا ر ا د ت 3 ف ج ی د ی ت پ پ ه د ش ت ه ج ل ص ت م این اند برشی جایگاههههههههههههای و د ه ب و ت س ا ز ا ب 1 ت تت ت ت ت ت ت ت ت تت ت ت ت ف ر گ ار ر ق ه د ا تف س ا انواع برای د ا ی ز ی ش ر ب م ی ز ن آ 2 ش ش ش ر ب ز ا جلوگیری و ن ا س آ کاربرد برای ط س و ت م ه ز ا د ن ا ر د ی ف د ا ص ت ی ا ه ت ا ت س ا ش ن ک ا و ب و ی ت ر ه 0 1 mm م 0 ی د س E یcoli ر ت ک ا ب ی م و ن ژ DNA 0 4 µg ph 4/6 ا ب pet21a() د ی م س ال پ 0 4 µg ا ی و Mn 2 Ca 2 ی اا ا نه ن ن و ی ت ا ک ز ا 1 mm و ی م ی ز ن آ ه ن و م ن 5 µl و ف ل ت خ م ی ا ه ر ا م ی ت ) ) ف ل ت خ م ر ا م ی ت Mg 2 د و ج و ه ب ن ا و ن ع ت ش ا د 7 3 ο C ی ا م د ر د ا ه ب و ی ت د و ب 5 2 µl ش ن ک ا و ی ی ا ه ن م ج ح ه ب ب و ی ت 3 ر ا م ی ت ر ه ی ا ر ب د ن د ش ه ب و ک ن ا ت ع ا س ک ی ی ا ر ب ی س ر ر ب ر ا ر ک ت ن ا و ن ع د ش م ا م ت ا ز ا س پ ر ه ز ا 0 1 µl د ش ی س ر ر ب % 0/8 آگارز ل ژ ز ر و ف و ر ت ک ل ا ه ل ی س و ه ب ه ن و م ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر داکسی آنزیم ی س ر ر ب ر ت م و ت و ف و ر ت ک پ س ا کوین روش ق ب ط ش ی ا م ز آ و د ق ا ف ن ی ئ ت و ر پ ز ا ز ی ن ش ی ا م ز آ ن ی ا ر د ) 6 1 ( ( ( د ش ل م ا ش و 1 ml ش ن ک ا و حجم شد استفاده م ا ج ن ا ن ا ا ا ر ا ک م ه SDS DNA 0 4 µg ت ا ت س ا م و ی ن و م آ ر د ل و ل ح م ه د ش ه ت ش ر ک ت گاوی تیموس 0 5 mm ی ا ه ن و ی ت ت ت ا ک ت ظ ل غ ا ب Ca 2 Mg 2 و Mg 2 Mn 2 Ca 2 ه ب ph 5/5 ا ب 1 mm EDTA و 1 mm س پ د و ب ی م ی ز ن آ ه ر ا ص ع 0 2 µl ه ف ا ض ا ز ا ن د و م ن ه ف ا ض ا ر د ا ه ب و ی ت و ه د ش م ا ج ن ا شدید ورتکس ی م ی ز ن آ ه ر ا ص ع ر ا م ی ت ر ه د ن د ش ه ب و ک ن ا ه ق ی ق د 0 3 ت د م ه ب 7 3 ο C ی ا م د د و ب ر ا ر ک ت 3 ل م ا ش % 5 د ی س ا ک ی ر ل ک ر پ 1 ml گذاری گرما اتمام ز ا س پ خ ی ی و ر ش ن ک ا و ل و ل ح م ه ب ه ب ه د م آ ت س د ب ل و ل ح م د و ش ف ق و ت م ش ن ک ا و ا ت د ش ه ف ا ض ا ت د م ت ح ت ه ق ی ق د 5 1 g س 0 پ س د ش ژ و ی ف ی ر ت ن ا س ل و ل ح م ز ا ر ت ی ل ی ل ی م ک ی ی و ا ح ر ف ص ه ن و م ن شد بررسی ر ت م و ن ا ن ج و م ل و ط ر د ی م ی ز ن آ ه ر ا ص ع ز ج ب د ا و م م ا م ت د و ب ه ک ق ب ط کرد طی ش ی ا م ز آ ی ا ه ه ن و م ن د ن ن ا م م ا م ت ل ح ا ر م ا ر کوین نتایج و ب ذ ذ ذ ج ر د ه ق ی ق د ر ب 0/1 0 0 ف ال ت خ ا ر ه ) 6 1 ( ن ا ر ا ک م ه ت س ا ن ی ئ ت و ر پ ت ظ ل غ ر ب م ی ز ن آ د ح ا و ک ی ل د ا ع م )min((( ن ا م ز / ) mg/ml( ( ( ( ( ( ( ی م ی ز ن آ عصاره غلظت ی م ی ز ن آ د ح ا و ) U/ml( Δ0= 6 2 / ر ت م و ت و ف و ر ت ک پ س ا ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ی م ی ز ن آ ی ا ه ی س ر ر ب ی ا ر ب ب ل ا ق ز ا ا ه ش ی ا م ز آ م ا م ت ر د ح ر ط ا ب صتادفی کاملا ر ا ز ف ا م ر ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب ا ه ه د ا د ل ی ل ح ت د ش ه د ا ف ت س ا ر ا ر ک ت ر ا ز ف ا م ر ن ز ا ه د ا ف ت س ا ا ب اا ا رره ر ا د و م ن م س ر و SAS ل ی ل ح ت ر د د ش ام ج ن ا ب ی ر ض ز ا ج ی ا ت ن تمام واریانس 3 Excel د ش ه د ا ف ت س ا % 99 اطمینان

6 8 4 1 ن ش ر ی ه م ی ک ر و ب ی و ل و ژ ی د ا م پ ز ش ک ی / د و ر ه د ه م ش م ا ر ه د و م پ ی ا پ ی 9 2 ج د و ل : 1 م ق ا ی س ه پ ا س خ ه ا ی ب ا ک ت ر ی Staphylococcus pasteuri ش ن ا س ا ی ی ش د ه د ر آ ز م ا ی ش ب ا 7 ا س ت ر ی ن ا ز ا ی ن ب ا ک ت ر ی )8 ) ت س ت ب ا ک ت ر ی ا و ر ه آ ز ر ش د ب ی ه و ا ز ی ق ط ر ک ل و ن ی > mm 5 * ر ن گ ی ز ه م ا ل ت و ز م ا ن ی ت و ل ا ک س ی د ا ز S pasteuri 7 S pasteuri BM S pasteuri BM S pasteuri BM S pateuri BM S pasteuri BM S pasteuri BM BM10427 ن ت ا ی ج ب ا ک ت ر ی S pasteuri ش ن ا س ا ی ی ش د ه * ب ه م ع ن ا ی pigment ب ا ک ت ر ی : ن ت ی ج ه م ن ف ی : ن ت ی ج ه م ث ب ت DNase ر و ی DNA خ ط ی د ر ش ک ل 3 د ی د ه م ی ی ی ش و د ن ت ا ی ج ش ن ا س ا ی ی ب ا ک ت ر ی ب ا ن د ت ک ث ی ر ش د ه ا ز ژ ن 16S rrna ب ه ص و ر ت و ا ض ح ب د س ت آ م د ه و ا ن د ا ز ه آ ن ه ا ب ا اندازه مورد انتظار یعنی ج ف ت ب ا ز م ط ا ب ق ت د ا ش ت ( ش ک ل ) 1 پ س ی ا ب ی ق ط ع ا ت ت ک ث ی ر ی ت و ا ل ی ی ی ی ی ی ی ی ی ی یییه ا ا ا د ر NCBI/EMBL م ور د ب ر ر س ی و ه م ر د ی ف ش د ند د ر ج ن س ن ه ا ی ت Staphylococcus و گ و ن ه ا ز ت و ا ل ی پ ا ی گ ا ه د ا د ه pasteuri ع ن و ا ن ن ز د ی ک ت ر ی ن باکتری طبق ن ت ا ی ج ه م ر د ی ف ی ت و ا ل ی 16S rrna ب د س ت آ م د ب ا ک ت ر ی گ ر م م ث ب ت ک و ک س ی ب ه شکل کاتاالز م ث ب ت و ا ک س ی د ا ز م ن ف ی ب و د و ت ا 5 1 د ر ص د ن م ک ر ا ت ح م ل ( ج د و ل ن م و د ) 1 ی ک ش ا خ ص م ه م درStaphylococcus ت ح م ل 5 1 د ر ص د ن م ک د ر م ح ی ط ک ش ت ا س ت )8 ) ژ ن 16S rrna ب ا ک ت ر ی د ر پ ا ی گ ا ه NCBI/EMBL ب ا ش م ا ر ه گ ر د ی د نتایج بررسی آ گ ا ر ز پ ر و ت ئ ی ن ه ا ی ا س ت خ ر ا ج ی آ ن ز ی م م مم م م مم ه ا ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri KC ث ب ت DNase ر و ی ژ ل S pasteuri ر و ی ژ ل 2 1 SDSPAGE کیفیت خوبی% غ ل ظ ت پ ر و ت ئ ی ن ب د س ت آ م د ه ط ب ق ن ت ا ی ج ن ش ا ن د ا د ( ش ک ل ا س پ ک ر و ف و ت و م ت ر ) / 1 µg/ml ب و د ن ت ا ی ج ب ر ر س ی ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م م م م م ه ا ی ه م ا ن ط و ر د ر ش ک ل د ی د ه م ی ش و د ه ی چ گ و ن ه ب ر ش ی د ر م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه ا ی ج ا د ن ش د ه ا س ت ب ر ر س ی ه ض م DNA پ ال س م ی د ی ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز پ ل سا م ی د pet21a () انجام شد ب ر ر س ی ه ا ی ه ض م آ ن ز ی م ی پ ال س م ی د د ر ش ک ل 4 د ی د ه م ی ش و د د د ه ض م ی ا ب ر ش پ ل ا س یم د ب ا ت ی م ا ر ه ا ی مختلف کاتیونی ب ر ا ی تعین کوفاکتور ا خ ت ص ا ص ی آ ن ز ی م برشی صورت گرفت ا م ا د ر ن ه ا ی ت ه ی چ ا خ ت ل ا ف ی ب ر ش ب ا کوفاکتورهای مختلف م ش ا ه د ه ن ش د آ ن ز ی م ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri ب ا ع ث ا ف ز ا ی ش غ ل ظ ت ر ح ا ل ت ب ر ش ت ک ر ش ت ه ا ز پالسمید شده ک ه ا ی ن ب د ل ی ل و ج و د آنزیم نیکازاست ( ش ک ل ع ص ا ر ه ) 4 د ر ح ض و ر ت م ا م ک ا ت ی و ن ه ا ن ی ز ا ی ن ب ر ش دیده شد ب ا ت و ج ه ب ه ت ع د ا د ب ا ل یا ت ک را ر آ ز م ا ی ش و ن ی ز آ ز مو ن س ه کاتیون مختلف م ی ت و ا ن آ ن ز ی م ه ا ی ب ا ک ت ر ی ی ه ا ی S pasteuri ر ا ا ز ن و ع ن ی ک ا ز د ا ن س ت ن ی ک ا ز ه ا برش دهنده اختصاصی ی ک ک ال س ج د ی د ا ز آ ن ز ی م م ه ا ه س س س ت ن د ک ه ج ا ی گ ا ه ب ر ش ی ر ا ر و ی م و ل ک و ل DNA ت ش خ ی ص م ی د ه ن د و ت ن ه ا ی ک ر ش ت ه ا ز DNA ر ا ب ر ش م ی د ه ن د ا ز ا ی ن د س ت ه ا ز آ ن ز ی م ه ا ت ع د ا د ب س ی ا ر ک م ی ک ش ف ش د ه ا س ت ( 4 ) 2

7 د و) ب ر ر س ی ف ع ا ل ی ت د ا ک س ی ر ی ب و ن و ک ل ئ ا ز ی ش ک ل 1: ب ا ن د م و ر د ا ن ت ظ ا ر ژ ن 6 1 S rrna ب ا ا س ت ف ا د ه ا ز آ غ ا ز گ ر ه ا ی ش ک ل : 4 ه ض م م و ل ک و ل DNA پ ال س م ی د () pet21a ب ا آ ن ز ی م ه ا ی 1 پ ال س م ی د ب د و ن آ ن ز ی م S pasteuri ا ز ب ا ک ت ر ی DNase 2 پ ال س م ی د د ر ح ض و ر ع ص ا ر ه پ ر و ت ئ ی ن ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri DNA م ا ر ک ر M A پ ال س م ی د ب ر ش خ و ر د ه ب ا آ ن ز ی م ن ی ک ا ز B پ ال س م ی د ح ل ق ه ب ا ز C پ ال س م ی د خ ط ی ( ب ر ش ی ا ف ت ه ) D پ ال س م ی د س و پ ر ک و ی ل E پ ال س م ی د ح ل ق ه ا ی ت ک ر ش ت ه S pasteuri 1 DNA 1 kb م ا ر ک ر M 1525R و 27F ن ت ا ی ج ح ا ص ل ا ز ا س پ ک ت ر و ف و ت و م ت ر ی ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ع ص ا ر ه ب ا ک ت ر ی S pasteuri ش ک ل : 2 ع ص ا ر ه پ ر و ت ئ ی ن ی ا س ت خ ر ا ج ش د ه ا ز ب ا ک ت ر ی S pasteuri ر و ی ژ ل M SDSPAGE م ا ر ک ر م و ل ک و ل ی 1 و 2 ا ل گ و ی ب ا ن د ی پ ر و ت ئ ی ن ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri ت ک ر ا ر ) در حضور کاتیونهای م ن ی ز ی م ب ص و ر ت م ع ن ی دار کاهش ی ا ف ت د ر ح ض و ر ک ا ت ی و ن ه ا ی ک ل س ی م و م ن گ ن ز ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م ی ت غ ی ی ر م ع ن ی د ا ر ی ن ش ا ن ن د ا د ( ن م و د ا ر ) 1 ب ا ا ع م ا ل ت ی م ا ر 2 Mg 2 Ca د ر غ ل ظ ت 1 mm ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م ت ا چ ه ا ر ب ر ا ب ر ا ف ز ا ی ش ن ش ا ن د ا د غ ل ظ ت ه ا ی م خ ت ل ف ن م ک ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ا ی ن ب ا ک ت ر ی ر ا ب ط و ر م ع ن ی د ا ر د ر س ط ح % 9 9 ا ف ز ا ی ش د ا د غ ل ظ ت 0/6 م و ال ر ن م ک ب ا ع ث ب ی ش ت ر ی ن ا ف ز ا ی ش د ر ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ش د ف ع ا ل ی ت ph آ ن ز ی م DNase ب ط و ر م ع ن ی د ا ر ق ر ا ر ن ی ز ت ا ث ی ر ت ح ت 9 7 گ ر ف ت ن ش ا ن ت غ ی ی ر ی و ph ه ا ی د ر آ ن ز ی م ف ع ا ل ی ت ش ک ل : 3 ه ض م م و ل ک و ل DNA خ ط ی ب ا آ ن ز ی م ه ا ی DNase ا ز ب ا ک ت ر ی S 1 م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه ب د و ن آ ن ز ی م DNA م ا ر ک ر M pasteuri 2 م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه د ر ح ض و ر ع ص ا ر ه پ ر و ت ئ ی ن ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri 3 م و ل ک و ل DNA د و ر ش ت ه د ر ح ض و ر آ ن ز ی م EcoRI ن د ا د د ر ح ا ل ی ک ه د ر ph ه ا ی 3 و 5 ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م DNase ب ا ا ط م ی ن ا ن % 9 9 ک ا ه ش پ ی د ا ک ر د ب ح ث ب ا ک ت ر ی Staphylococcus pasteuri ا ز خ ا ک س ط ح ی ج د ا و خ ا ل ص س ا ز ی ش د ا ی ن ب ا ک ت ر ی ب ا ش م ا ر ه

8 0 5 1 ن ش ر ی ه م ی ک ر و ب ی و ل و ژ ی د ا م پ ز ش ک ی / د و ر ه د ه م ش م ا ر ه د و م پ ی ا پ ی 9 2 NCBI/EMBL د س ت ر س ی KC پ ا ی گ ا ه د ر ب ه آ ن ز ی م ا ی ن د ا د ب ر ش ب ر ش ت و ا ن ا ی ی م و ل ک و ل DNase ث ب ت ر س ی د آ ن ز ی م DNase ب ا ک ت ر ی S pasteuri ق ا د ر ب ه DNA د و ر ش ت ه ر ا ن د ا ر د ا ی ن ا و ل ی ن گ ز ا ر ش م ر ب و ط ب ه ر ش ت ه ب ر ش DNA آ ن ز ی م ا ی ن ا س ت ی گ ا ن ه ج ز ا ح ت م ا ال آ ن ز ی م ه ا ی ب ا ک ت ر ی د ر S pasteuri ا س ت DNase 0/6 آ ن ز ی م ه ا ی ا س ت ن ی ک ا ز ب ر ر س ی ه ا ی ب ر ش د ر آ ن ز ی م ی ب ی ش ت ر ی ن ف ع ا ل ی ت آ ن ز ی م د ر ح ض و ر NaCl ب ا غ ل ظ ت آ ن ز ی م ا ی ن ک ه م ی د ه د ن ش ا ن ح ل ق و ی ب ص و ر ت م و ال ر ز م ا ن ه م ح ض و ر د ر و ک ا ت ی و ن ه ا ی ph 5/5 DNA ا خ ت ص ا ص ی ع م ل م ی ک ن د ب ه ط و ر ی ک ه د ر آ ز م ا ی ش ب ر ش 2 Mg 2 Ca ب ا غ ل ظ ت 1 mm م ش ا ه د ه ش د پ ال س م ی د () pet21a ر ا ن ق ط ه ی ک ت ن ه ا آ ن ز ی م ا ی ن ن م و د ا ر : 1 ن م و د ا ر ه ا ی ن ت ا ی ج ت ی م ا ر ه ا ی م خ ت ل ف NaCl ph و ک ا ت ی و ن ر و ی ع ص ا ر ه آ ن ز ی م ی ب ا ک ت ر ی S pasteuri 5 Bickle, TA, Krüger, DH (1993) Biology of DNA restriction FEMS Microbiology Reviews 57: Bourniquel, AA, Bickle, TA (2002) Complex restriction enzymes: NTPdriven molecular motors Biochimie 84: Bradford, MM (1976) A rapid and sensitive for the quantitation of microgram quantitites of protein utilizing the principle of proteindye binding Analytical Biochemistry 72: Chesneau, O, Morvan, A, Grimont, F, Labischinski, H, El Solh, N (1993) Staphylococcus pasteuri sp nov, isolated from human, animal, and food specimens International Journal of Systematbica Cteriologay 43: م ن ا ب ع 1 Abdurashitov, MA, Belitchenko, OA, Shevchenko, AV, Degtiarev, S (1996) NBstSE a sitespecific nickase from Bacillus stearothermophilus SE589 Journal of Molecular Biology 30: Ahmad, NS, Hadi, SM (1983) Purification and properties of a glycoprotein alkaline nuclease from the larvae of the army worm Spodoptera litura Insect Biochemistry 13: Bernard, EA (1969) Ribonucleases Annual Review of Biochemistry 38: Bhaduri, S, Paul, HD (1983) Simple and rapid method for disruption of bacteria for protein studies Applied and Environmental Microbiology 46: 9413

9 1 5 1 ی ز ا ئ ل ک و ن و ب ی ر ی س ک ا د ت ی ل ا ع ف ی س ر ر ب 19 Kunitz, M (1940) Crystalline ribonuclease The Journal of General Physiology 24: Laemmli, UK, Favre, M (1973) Gel electrophoresis of protein Journal of Molecular Biology 80: Lai, B, Li, Y, Cao, A, Lai, L (2003) Metal ion binding and enzymatic mechanism of Methanococcus jannaschii RNase HII Biochemistry 42: Laskowski, M (1959) Enzymes hydrolyzing DNA Annals of the New York Academy of Sciences 81: Lin, LF, Posfai, J, Roberts, RJ, Kong, H (2001) Comparative genomics of the restrictionmodification systems in Helicobacter pylori Proceedings of the National Academy of Sciences 98: McCleland, SE, Sczcelkun, MD (2004) The type I and III restriction endonucleases: structural elements in molecular motors that process DNA Nucleic Acids and Molecular Biology 14: Morgan, RD, Calvet, C, Demeter, M, Agra, R, Kong, H (2000) Characterization of the specific DNA nicking activity of restriction endonuclease NBstNBI The Journal of Biological Chemistry 381: Murray, NE (2000) Type I restriction systems: sophisticated molecular machines (a legacy of Bertani and Weigle) Microbiology and Molecular Biology Reviews 64: Neumann, B, Pospiech, A, Schairrer, HU (1992) Rapid isolation of genomic DNA from gramnegative bacteria Trends in Genetics 8: Patel, JB (2001) 16S rrna gene sequencing for bacterial pathogen identification in the clinical laboratory Journal of Molecular Diagnostics 6: Pingoud, A, Fuxreiter, M, Pingouda, V, Wende, W (2005) Type II restriction endonucleases: structure and 9 Cunningham, L, Laskowski, M (1953) Presence of two different por desoxyribonucleode polymerases in veal kidney Biochimica et Biophysica Acta 11: Curtis, MW (1968) Plant nucleases I separation and purification of two ribonucleases and one nuclease from corn Plant Physiology 43: Desreux, V, Hacha, R, Fredericq, E (1962) Activation of deoxyribonucleases by divalent cations Journal of General Physiology 45: Feinstein, R N (1960) Activation of the neutral deoxyribonuclease The Journal of Biological Chemistry 235: Goedken, ER, Marqusee, S (2001) Cocrystal of Escherichia coli RNase HI with Mn 2 ions reveals two divalent metals bound in the active site The Journal of Biological Chemistry 276: Higgens, LS, Besnier, C, Kong, H (2001) The nicking endonuclease NBstNBI is closely related to type IIs restriction endonucleases MlyI and PleI Nucleic Acids Research 29: Keck, JL, Goedken, ER, Marqusee, S (1998) Activation/attenuation model for RNase H A onemetal mechanism with secondmetal inhibition The Journal of Biological Chemistry 273: Kevin, PB, Will, F, Baron, W, Henzel, J, Steven, AS (1998) Molecular cloning and characterization of human and murine DNase II Gene 215: Kobayashi, H, Fumi, K, Tadashi, I, Takashi, K, Norio, I (2000) Nuclease Lel 1 and 2 Study Bioscience, Biotechnology, Biochemistry 64: Koerner, JF, Sinsheimer, RL (1957) Deoxyribonuclease from calf spleen I Purification and properties The Journal of Biological Chemistry 228: 1039

10 9 2 ی پ ا ی پ م و د ه ر ا م ش م ه د ه ر و د / ی ک ش ز پ م ا د ی ژ و ل و ی ب و ر ک ی م ه ی ر ش ن Xia, YN, Morgan, R, Schildkraut, I, Van Etten, JL (1988) A sitespecific single strand endonuclease activity induced by NYs1 virus infection of a Chlorellalike green alga Nucleic Acids Research 16: Zhang, Y, Nelson, M, Nietfeldt, J, Xia, Y, Burbank, D, Ropp, S, Van Etten, JL (1998) Chlorella virus NY 2A encodes at least 12 DNA endonuclease/methyltransferase genes Virology 240: Zheleznaya, LA, Perevyazova, TA, Zheleznyakova, EN, Matvienko, NI (2002) Some properties of sitespecific nickase bspd6i and the possibility of its use in hybridization analysis of DNA Biochemistry 67: mechanism Cellular and Molecular Life Sciences 62: Raleigh, EA, Brooks, JE (1998) Restriction modification systems: where they are and what they do Bacterial Genomes Rangrajan, S, Shankar, V (1999) Extracellular nuclease from Rhizopus stolonifer purification and characteristics of single strand preferential deoxyribose nuclease activity Biochimica et Biophysica Acta 1473: Roberts, RJ, Belfort, M, Bestor, T, Bhagwat, AS, Bickle, TA, Bitinaite, J et al (2003) A nomenclature for restriction enzymes, DNA methyltransferases, homing endonucleases and their genes Nucleic Acids Research 31: Roberts, RJ, Vincze, T, Posfai, J, Macelis, D (2005) REBASE restriction enzymes and DNA methyltransferases Nucleic Acids Research 33: Shimomura, M, Laskowski, M (1957) Purification of deoxyribonuclease II from spleen Biochimica et Biophysica Acta 26: Torsvik, V, Jostein, G (1990) High Diversity in DNA of Soil Bacteria Applied and Environmental Microbiology 56: Van Etten, JL (2003) Unusual life style of giant chlorella viruses Annual Review of Genetics 37: Virginia, W, Campbell, D, Jackson A (1980) The effect of divalent cations on the mode of action of DNase I Journal of Biologic Chemistry 255: Weisburg, WG, Barns, SM, Pelletier, DA, Lane DJ (1991) 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study Journal of Bacteriology 173: Wiberg, JS, (1958) On the mechanism of metal activation of deoxyribonuclease I Archives of Biochemistry and Biophysics 73: 337

11 Journal of Veterinary Microbiology, Volume 10, Issue 2, 2014 A Study on the Staphylococcus pasteuri Deoxyribonuclease Activity AlborzianDehSheikh, A* 1, Hosseini, R 2 1 MSc of Agricultural Biotechnology, Imam Khomeini International University Qazvin, Qazvin, Iran 2 Faculty member of Agricultural Biotechnology, Imam Khomeini International University Qazvin, Qazvin, Iran Received Date:29 August 2013 Accepted Date: 16 November 2013 Abstract: All organisms have nuclease Deoxyribonucleases (DNase) are from enzyme group that are able to hydrolase phosphodiester bounds of DNA molecule bonds Staphylococcus pasteuri identified by 16S rrna marker and biochemical tests, and submitted to GenBank/EMBL with KC accession number The activity of DNase enzyme was detected through three spectrophotometric, detection of DNase activity on circular and double strand DNA molecule on agarose gel methods The effects of ph, NaCl and cations like Mg2, Ca2,Mn2andMg2Ca2 treatments were considered S pasteuri DNase was able to cut single strand of circular DNA S pasteuri DNase was able to cut single strand DNA Studies on circular DNA showed that the enzyme may nick specifically, whereas pet 21a () was restricted to one point The DNase does not cut double strand DNA This is the first report about S pasteuri DNase activity The most important activity of enzyme was observed in the presence of 06 M NaCl, 1mM Mg2Ca2 and ph 55 Keywords: Staphylococcus pasteuri, DNase activity, 16S rrna *Corresponding author: AlborzianDehSheikh, A Address: Imam Khomeini International University Qazvin, Qazvin, Iran Tel: aminalborzian@yahoocom

12