IL-4-EASIA KAP1281. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium

Μέγεθος: px
Εμφάνιση ξεκινά από τη σελίδα:

Download "IL-4-EASIA KAP1281. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium"

Transcript

1 IL4EASIA KAP1281 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8 B14 Nivelles Belgium

2 : 955/1

3 en Read entire protocol before use. IL4EASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro quantitative measurement of human interleukin4 (IL4) in serum. II. GENERAL INFORMATION A. Proprietary name : DIAsource IL4EASIA Kit B. Catalogue number : KAP1281 : 96 tests C. Manufactured by : DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8, B14 Nivelles, Belgium. For technical assistance or ordering information contact : Tel : +32 () Fax : +32 () III. CLINICAL BACKGROUND A. Biological activities Interleukin4 (IL4) is a 1519 kda glycoprotein produced by the TH2 subtype of CD4+ Tlymphocytes and by mast cell precursors. IL4 down regulates the production of IFNγ by TH1 CD4+ Tlymphocytes, induces the proliferation of thymocytes and mature Tlymphocytes but blocks the IL2 induced proliferation of peripheral Tcells as well as the production of IL2 dependent LAK cells. On the Bcells, IL4 has a growth factor activity mediated via the production of soluble CD23, and a differentiation activity leading to the production of IgE, IgM and IgG1. On monocytes, IL4 induces an increased number of histocompatibility class II antigens and CD23 receptors but inhibits the expression of IgG receptors. IL4 blocks the production of IL1, IL6, TNFα, PGE2, GCSF and stimulates the production of MCSF and G CSF by the monocytes. IL4 has also an action on eosinophiles by increasing the expression of CD23 and inhibiting the expression of IgG receptors. By its pleiotropic activity, IL4 is a key cytokine in the cytokine network that shows antiinflammatory properties and is probably involved in mechanisms of allergy.

4 IV. PRINCIPLES OF THE METHOD The DIAsource IL4EASIA is a solid phase Enzyme Amplified Sensitivity Immunoassay performed on microtiterplate. The assay uses monoclonal antibodies (Ms) directed against distinct epitopes of IL4. Calibrators and samples react with the capture monoclonal antibody (M 1) coated on microtiter well and with a monoclonal antibody (M 2) labelled with horseradish peroxidase (HRP). After an incubation period allowing the formation of a sandwich: coated M 1 human IL4 M 2 HRP, the microtiterplate is washed to remove unbound enzyme labelled antibody. Bound enzymelabelled antibody is measured through a chromogenic reaction. Chromogenic solution (TMB) is added and incubated. The reaction is stopped with the addition of Stop Solution and the microtiterplate is then read at the appropriate wavelength. The amount of substrate turnover is determined colourimetrically by measuring the absorbance, which is proportional to the IL4 concentration. A calibration curve is plotted and IL4 concentration in samples is determined by interpolation from the calibration curve. The use of the EASIA reader (linearity up to 3 OD units) and a sophisticated data reduction method (polychromatic data reduction) result in a high sensitivity in the low range and in an extended calibration range. VI. SUPPLIES NOT PROVIDED The following material is required but not provided in the kit: 1. High quality distilled water 2. Pipettes for delivery of: 5 μl, µl, μl, 1 ml and 1 ml (the use of accurate pipettes with disposable plastic tips is recommended) 3. Vortex mixer 4. Magnetic stirrer 5. Horizontal microtiterplate shaker capable of 7 rpm ± rpm 6. Washer for Microtiterplates 7. Microtiterplate reader capable of reading at 45 nm, 49 nm and 65 nm (in case of polychromatic reading) or capable of reading at 45 nm and 65 nm (bichromatic reading) 8. Optional equipment: The ELISAAID necessary to read the plate according to polychromatic reading (see paragraph XI.A.) can be purchased from Robert Maciels Associates, Inc. Mass USA. VII. REAGENT PREPARATION V. REAGENTS PROVIDED Reagents Microtiterplate with 96 anti IL4 (monoclonal antibodies) coated wells HRP 96 tests Kit Color Code Reconstitution 96 wells blue Ready for use 1 vial 6 ml red Ready for use A. Calibrators: Reconstitute the zero calibrator with 5 ml distilled water and the other calibrators with 1 ml distilled water. B. Controls: Reconstitute the controls with 1 ml distilled water. C. Specimen diluent: Reconstitute Specimen diluent to the volume specified on the vial label with distilled water D. Working Wash solution: Prepare an adequate volume of Working Wash solution by adding 199 volumes of distilled water to 1 volume of Wash Solution (x). Use a magnetic stirrer to homogenize. Discard unused Working Wash solution at the end of the day. E. Revelation Solution: pipette.2 ml of the chromogen TMB into one of the vials of substrate buffer (H 2O 2 in acetate/citrate buffer). Extemporaneous preparation is recommended. Conjugate: HRP labelled antiil4 (monoclonal antibodies) in TRISMaleate buffer with bovine serum albumin and thymol CAL Zero Calibrator: human serum with benzamidin and thymol CAL Calibrator N = 1 to 5 (see exact values on vial labels) in human serum with benzamidin and thymol DIL Specimen Diluent: human serum with benzamidin and thymol INC Incubation Buffer: Phosphate buffer with bovine serum albumin and thymol WASH Wash Solution (TrisHCl) CONTROL Controls N = 1 or 2 in human serum with thymol CHROM Chromogen TMB (Tetramethylbenzydine) in Dimethylformamide N SPE SOLN TMB N CONC CONC 1 vial lyophil. 5 vials lyophil. 2 vials lyophil. 1 vial 11 ml 1 vial 1 ml 2 vials lyophil. 1 vial 1 ml yellow yellow black black brown silver Add 5 ml distilled water Add 1 ml distilled water Add distilled water (see on the label for the exact volume) Ready for use Dilute x with distilled water (use a magnetic stirrer). Add 1 ml distilled water green Dilute.2 ml into 1 vial of substrate buffer VIII. STORAGE AND EXPIRATION DATING OF REAGENTS Before opening or reconstitution, all kits components are stable until the expiry date, indicated on the vial label, if kept at 2 to 8 C. Unused strips must be stored, at 28 C, in a sealed bag containing a desiccant until expiration date. After reconstitution, calibrators, controls and Specimen diluent are stable for 4 days at 2 to 8 C. For longer storage periods, aliquots should be made and kept at C for maximum 2 months. Avoid successive freeze thaw cycles. The concentrated Wash Solution is stable at room temperature until expiration date. Freshly prepared Working Wash solution should be used on the same day. After its first use, the conjugate is stable until expiry date, if kept in the original wellclosed vial at 2 to 8 C. The freshly prepared revelation solution is stable, before use, for maximum 15 minutes at room temperature and must be discarded afterwards. Alterations in physical appearance of kit reagents may indicate instability or deterioration. IX. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Serum must be removed as soon as possible from the clot of red cells after clotting and centrifugation, and kept at 4 C. If the samples are not used immediately, they must be kept at C for maximum 2 months, and at 7 C for longer storage (maximum one year). Avoid subsequent freeze thaw cycles. Prior to use, all samples should be at room temperature. It is recommended to vortex the samples before use. Sampling conditions can affect values, therefore, strict precautions have to be taken during sampling to avoid impurities contained in sampling materials that would stimulate IL4 production by blood cells and thus falsely increase serum IL4 values. Collection tubes must be pyrogenfree. SUB 3 vials 21 ml white Ready for use Substrate buffer: H 2O 2 in acetate / citrate buffer STOP SOLN 1 vial 6 ml black Ready for use Stop Solution: H 2SO 4 1.8N Note: 1. Use Specimen diluent for sample dilutions pg of the calibrator preparation is equivalent to 1 mu of the NIBSC 1 st IS 88/656.

5 X. PROCEDURE A. Handling notes Do not use the kit or components beyond expiry date. Do not mix materials from different kit lots. Bring all the reagents to room temperature prior to use. Thoroughly mix all reagents and samples by gentle agitation or swirling. Perform calibrators, controls and samples in duplicate. Vertical alignment is recommended. Use a clean plastic container to prepare the Wash Solution. In order to avoid crosscontamination, use a clean disposable pipette tip for the addition of each reagent and sample. For the dispensing of the Revelation Solution and the Stop Solution avoid pipettes with metal parts. High precision pipettes or automated pipetting equipment will improve the precision. Respect the incubation times. To avoid drift, the time between pipetting of the first calibrator and the last sample must be limited to the time mentioned in section XIII paragraph E (Time delay). Prepare a calibration curve for each run, do not use data from previous runs. The Revelation Solution should be colourless. If a blue colour develops within a few minutes after preparation, this indicates that the reagent is unusable, and must be discarded. Dispense the Revelation Solution within 15 minutes following the washing of the microtiterplate. During incubation with Revelation Solution, avoid direct sunlight on the microtiterplate. B. Procedure 1. Select the required number of strips for the run. The unused strips should be resealed in the bag with a desiccant and stored at 28 C. 2. Secure the strips into the holding frame. 3. Pipette µl of Incubation Buffer into all the wells 4. Pipette µl of each Calibrator, Control and Sample into the appropriate wells. 5. Pipette 5 µl of antiil4hrp conjugate into all the wells. 6. Incubate for 2 hours at room temperature on a horizontal shaker set at 7 rpm ± rpm. 7. Aspirate the liquid from each well. 8. Wash the plate 3 times by: Dispensing.4 ml of Wash Solution into each well Aspirating the content of each well 9. Pipette µl of the freshly prepared revelation solution into each well within 15 minutes following the washing step. 1. Incubate the microtiterplate for 3 minutes at room temperature on a horizontal shaker set at 7 rpm ± rpm, avoid direct sunlight. 11. Pipette 5 µl of Stop solution into each well. 12. Read the absorbencies at 45 nm and 49 nm (reference filter 63 nm or 65 nm) within 3 hours and calculate the results as described in section XI. 4. Read the concentration for each control and sample by interpolation on the calibration curve. 5. Computer assisted data reduction will simplify these calculations. If automatic result processing is used, a 4parameter logistic function curve fitting is recommended. XII. TYPICAL DATA The following data are for illustration only and should never be used instead of the real time calibration curve. Calibrator IL4EASIA pg/ml 14.5 pg/ml 51 pg/ml 156 pg/ml 552 pg/ml 1696 pg/ml XIII. PERFORMANCE AND LIMITATIONS OD units Polychromatic model A. Detection Limit Twenty zero calibrators were assayed along with a set of other calibrators. The detection limit, defined as the apparent concentration two standard deviations above the average OD at zero binding, was 1.2 pg/ml. B. Specificity No significant crossreaction was observed in presence of 5 ng of IL1α, IL1β, IL2, IL3, IL6, IL7, IL8, IL1, TNFβ, IFNα, TGFβ, GMCSF, MIP1α, MIP1β, MCP1, GCSF, RANTES, PF4, GRO, IP1 and SCF. This IL4 assay is specific for human natural and recombinant IL4. C. Precision INTRA ASSAY Serum N <X> ± SD A B ± ± 19.8 CV INTER ASSAY Serum N <X> ± SD A B SD: Standard Deviation; CV: Coefficient of variation D. Accuracy RECOVERY TEST ± ± 21.2 CV XI. CALCULATION OF RESULTS Sample Added IL4 Recovered IL4 Recovery A. Polychromatic Reading: 1. In this case, the ELISAAID software will do the data processing. 2. The plate is first read at 45 nm against a reference filter set at 65 nm (or 63 nm). 3. A second reading is performed at 49 nm against the same reference filter. 4. The ELISAAID Software will drive the reader automatically and will integrate both readings into a polychromatic model. This technique can generate OD s up to The principle of polychromatic data processing is as follows: Xi = OD at 45 nm Yi = OD at 49 nm Using a standard unweighted linear regression, the parameters A & B are calculated : Y = A*X + B If Xi < 3 OD units, then X calculated = Xi If Xi > 3 OD units, then X calculated = (YiB)/A A 4parameter logistic curve fitting is used to build up the calibration curve. The IL4 concentration in samples is determined by interpolation on the calibration curve. B. Bichromatic Reading 1. Read the plate at 45 nm against a reference filter set at 65 nm (or 63 nm). 2. Calculate the mean of duplicate determinations. 3. On semilogarithmic or linear graph paper plot the OD values (ordinate) for each calibrator against the corresponding concentration of IL4 (abscissa) and draw a calibration curve through the calibrator points by connecting the plotted points with straight lines. Serum DILUTION TEST Sample Dilution Theoretical Concent. Serum 1/1 1/2 1/4 1/8 1/ Samples were diluted with Specimen diluent Measured Concent

6 E. Time delay between last calibrator and sample dispensing As shown hereafter, assay results remain accurate even when a sample is dispensed 3 minutes after the calibrators have been added to the coated wells. TIME DELAY sample min 1 min min 3 min 4 min F. Hook effect A sample spiked with IL4 up to.5 µg/ml gives higher OD s than the last calibrator point. XIV. INTERNAL QUALITY CONTROL If the results obtained for Control 1 and/or Control 2 are not within the range specified on the vial label, the results cannot be used unless a satisfactory explanation for the discrepancy has been given. If desirable, each laboratory can make its own pools of control samples, which should be kept frozen in aliquots. Controls that contain azide will interfere with the enzymatic reaction and cannot be used. Acceptance criteria for the difference between the duplicate results of the samples should rely on Good Laboratory Practises It is recommended that controls be routinely assayed as unknown samples to measure assay variability. The performance of the assay should be monitored with quality control charts of the controls. It is good practise to check visually the curve fit selected by the computer. XV. REFERENCE INTERVALS These values are given only for guidance; each laboratory should establish its own normal range of values. For guidance, the results of 4 serum samples from apparently healthy persons with low CRP levels, ranged between and 38.7 pg/ml. 29 samples obtained values below the detection limit of the test (<1.2 pg/ml). XVI. PRECAUTIONS AND WARNINGS Safety For in vitro diagnostic use only. The human blood components included in this kit have been tested by European approved and/or FDA approved methods and found negative for HBsAg, anti HCV, antihiv1 and 2. No known method can offer complete assurance that human blood derivatives will not transmit hepatitis, AIDS or other infections. Therefore, handling of reagents, serum or plasma specimens should be in accordance with local safety procedures. All animal products and derivatives have been collected from healthy animals. Bovine components originate from countries where BSE has not been reported. Nevertheless, components containing animal substances should be treated as potentially infectious. Avoid any skin contact with all reagents, Stop Solution contains H 2SO 4, the chromogen contains TMB in Dimethylformamide, Substrate buffer contains H 2O 2. In case of contact, wash thoroughly with water. Do not smoke, drink, eat or apply cosmetics in the working area. Do not pipette by mouth. Use protective clothing and disposable gloves. XVII. BIBLIOGRAPHY 1. BANCHEREAU J., (199). Interleukin4 Médecine/Science, 6: MIOSSEC P. et al., (199). Low levels of interleukin4 and high levels of transforming growth factor ß in rheumatoid synovitis. Arth. Rheum., 33: YOKOTA T. et al., (1988). Molecular biology of IL4 and IL5 genes and biology of their products that stimulate Bcells, Tcells and hemopoietic cells. Immunol. Rev., 12: XVIII. SUMMARY OF THE PROTOCOL Incubation Buffer Calibrators (5) Samples, Controls AntiIL4 HRP conjugate CALIBRATORS (µl) 5 SAMPLE(S) CONTROLS (µl) 5 Incubate for 2 hours at room temperature with continuous shaking at 7 rpm. Aspirate the contents of each well. Wash 3 times with 4 µl of Wash Solution and aspirate. Revelation Solution Incubate for 3 min at room temperature with continuous shaking at 7 rpm. Stop Solution 5 5 Read on a microtiterplate reader and record the absorbance of each well at 45 nm (and 49 nm) versus 63 (or 65 nm) DIAsource Catalogue Nr : KAP1281 P.I. Number : 17593/en Revision nr : 955/1 Revision date : 955

7 fr Lire entièrement le protocole avant utilisation. IL4EASIA I. BUT DU DOSAGE Trousse de dosage immunoenzymatique pour la mesure quantitative in vitro de l interféron gamma humain (IL4) dans le sérum. II. INFORMATIONS GENERALES A. Nom du produit : DIAsource IL4EASIA kit B. Numéro de catalogue : KAP1281 : 96 tests C. Fabriqué par : DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8 B14 Nivelles Belgium. Pour une assistance technique ou une information sur une commande : Tel : +32 () Fax : +32 () III. CONTEXTE CLINIQUE A. Activités biologiques L interleukine4 (IL4) est une glycoprotéine produite par le soustype TH2 des lymphocytes T CD4+ et par les précurseurs des mastocytes. L IL4 inhibe la production d IFNγ par les lymphocytes T TH1 CD4+, induit la prolifération des thymocytes et des lymphocytes T matures mais bloque la prolifération des cellules T périphériques induite par l IL2 ainsi que la production d IL2 dépendant des cellules LAK. Sur les cellules B, l IL4 agit comme un facteur de croissance par l intermédiaire de la production de CD23 soluble et provoque la différenciation menant à la production d IgE, IgM et IgG1. Sur les monocytes, l IL4 induit l augmentation des antigènes d histocompatibilité de classe II et des récepteurs CD23, mais inhibe l expression des récepteurs des IgG. L IL4 bloque la production d IL1, IL6, TNFα, PGE2, GCSF et stimule la production de MCSF et de GCSF par les monocytes. L IL4 agit également sur les éosinophiles : elle augmente l expression du CD23 et inhibe l expression des récepteurs des IgG. Dans son activité pléiotropique, l IL4 est une cytokineclé dans le réseau des cytokines. Elle montre des propriétés antiinflammatoires et est probablement impliquée dans les mécanismes de l allergie.

8 IV. PRINCIPES DU DOSAGE La DIAsource IL4EASIA est une «Enzyme Amplified Sensitivity Immunoassay» en phase solide effectuée sur des microplaques. L analyse utilise des anticorps monoclonaux (AcM) dirigés contre des épitopes distincts de l IL4. Les calibrateurs et les échantillons réagissent avec l anticorps de capture monoclonal (AcM 1) recouvrant les puits et avec un anticorps monoclonal (AcM 2) marqué avec la peroxydase (HRP). Après une période d incubation permettant la formation d un sandwich: AcM 1 recouvert IL4 AcM 2 HRP, la microplaque est lavée afin d enlever l anticorps libre marqué enzymatiquement. L anticorps lié marqué enzymatiquement est mesuré avec une réaction chromogénique. Une solution chromogénique (TMB H 2O 2) est ajoutée et incubée. La réaction est arrêtée avec l addition de Solution d arrêt et la microplaque est alors lue à la longueur d onde appropriée. La quantité de remplacement de substrat est déterminée colorimétriquement par la mesure de l absorbance, qui est proportionnelle à la concentration en IL4. Une courbe de calibration est dessinée et la concentration en IL4 dans les échantillons est déterminée par interpolation de la courbe de calibration. L utilisation du lecteur EASIA (linéarité jusque 3 unités de DO) et une méthode de réduction de données sophistiquée (réduction de données polychromatique) résultent en une haute sensitivité dans la portée basse et en une portée de calibration étendue. V. REACTIFS FOURNIS Réactifs Conjugué: antiil4 marqué avec de l HRP (anticorps monoclonal) dans un tampon TRISmaléate avec de l'albumine bovine et du thymol Calibrateur zéro dans du sérum humain avec de la benzamidine et du thymol Calibrateur N = 1 à 5 (cfr. Valeurs exactes sur chaque flacon) dans du sérum humain avec de la benzamidine et du thymol Diluant du spécimen dans du sérum humain avec de la benzamidine et du thymol Tampon d incubation: Tampon phosphate avec de l'albumine bovine et du thymol Solution de Lavage (TrisHCl) Contrôles N = 1 ou 2 dans du sérum humain avec du thymol Chromogène TMB (Tetramethylbenzydine) dans Dimethylformamide Tampon substrat: H 2O 2 dans tampon acétate / citrate Solution d arrêt: H 2SO 4 1.8N Note: CAL CAL WASH CONTROL SUB STOP DIL INC CHROM Microplaque de titration avec 96 puits recouvert d anti IL4 (anticorps monoclonal) HRP N SOLN TMB SOLN SPE N CONC CONC 96 tests Kit Code Couleur Reconstitution 96 puits bleu Prêt à l emploi 1 flacon 6 ml 1 flacon lyophilisé 5 flacons lyophilisés 2 flacons lyophilisés 1 flacon 11 ml 1 flacon 1 ml 2 flacons lyophilisés 1 flacon 1 ml 3 flacons 21 ml 1 flacon 6 ml Rouge Jaune Jaune Noir Noir Brun Gris Prêt à l emploi Ajouter 5 ml d eau distillée Ajouter 1 ml d eau distillée Ajouter de l eau distillée (voir le volume exact sur l étiquette) Prêt à l emploi Diluer x avec de l eau distillée (utiliser un agitateur magnétique). Ajouter 1 ml d eau distillée Vert Diluer,2 ml dans 1 flacon de tampon substrat Blanc Noir Prêt à l emploi Prêt à l emploi 1. Utiliser le diluant du spécimen pour la dilution des échantillons pg de la préparation du calibrateur est équivalent à 1 mu du 1st IS NIBSC 88/656. VI. MATERIELS NON FOURNIS Le matériel mentionné cidessous est requis mais non fourni avec la trousse: 1. Eau distillée d une haute qualité 2. Pipettes pour distribuer: 5 μl, µl, µl, 1 ml et 1 ml (l utilisation de pipettes précises et de pointes en plastique est recommandée) 3. Agitateur vortex 4. Agitateur magnétique 5. Agitateur de microplaques horizontal capable de 7 rpm ± rpm 6. Laveur de microplaques 7. Lecteur de microplaques capable de lire à 45 nm, 49 nm et 65 nm (en cas de lecture polychromatique) ou capable de lire à 45 nm et 65 nm (lecture monochromatique) 8. Equipement supplémentaire: le ELISAAID nécessaire pour lire la plaque selon la lecture polychromatique (voir paragraphe XI.A.) peut être acheté chez Robert Maciels Associates, Inc. Mass USA. VII. PREPARATION DES REACTIFS A. Calibrateurs : Reconstituer les calibrateur zéro avec 5 ml d eau distillée et les autres calibrateurs avec 1 ml d eau distillée. B. Contrôles : Reconstituer les contrôles avec 1 ml d eau distillée. C. Diluant du spécimen : Reconstituer le Diluant du spécimen avec le volume d eau distillée spécifié sur l étiquette du flacon. D. Solution de Lavage : Préparer un volume adéquat de Solution de Lavage en ajoutant 199 volumes d eau distillée à 1 volume de Solution de Lavage (x). Utiliser un agitateur magnétique pour homogénéiser. Eliminer la Solution de Lavage non utilisée à la fin de la journée. E. Solution de Révélation: pipeter.2 ml du chromogène TMB dans un des flacons avec du tampon substrat (H 2O 2 dans tampon acétate/citrate). Une préparation extemporanée est recommandée. VIII. STOCKAGE ET DATE D EXPIRATION DES REACTIFS Avant l ouverture ou la reconstitution, tous les composants de la trousse sont stables jusqu à la date d expiration, indiquée sur l étiquette, si la trousse est conservée entre 2 et 8 C. Des barrettes inutilisées doivent être gardées, à 28 C, dans un sachet cacheté contenant un dessiccatif jusqu à la date d expiration. Après reconstitution, les calibrateurs, le Diluant du spécimen et les contrôles sont stables pendant 4 jours entre 2 et 8 C. Pour de plus longues périodes de stockage, des aliquotes devront être réalisées et cellesci seront gardées à C pendant 2 mois. Eviter des cycles de congélation et décongélation successifs. La Solution de Lavage concentrée est stable à température ambiante jusqu à la date d expiration. La Solution de Lavage préparée doit être utilisée le jour même. Après la première utilisation, le conjugué est stable jusqu à la date d expiration, si celuici est conservé entre 2 et 8 C dans le flacon d origine correctement fermé. La Solution de Révélation qui vient d être préparée est stable, avant l utilisation, pour 15 minutes au maximum à température ambiante et doit être jetée après. Des altérations dans l apparence physique des réactifs de la trousse peuvent indiquer une instabilité ou une détérioration. IX. PREPARATION ET STABILITE DE L ECHANTILLON Le sérum doit être débarrassé le plus rapidement possible du caillot de globules rouges après coagulation et centrifugation. Il doit être conservé à 4 C. Si les échantillons ne sont pas tout de suite utilisés, ils doivent être conservés à 7 C, au maximum pendant 1 an. Eviter des cycles de congélation et décongélation successifs. Avant l utilisation des échantillons, ceuxci doivent être à température ambiante. On recommande de vortexer les échantillons avant de les utiliser. Les conditions de la prise d échantillon pouvant affecter les résultats, il faut prendre de strictes précautions pendant la prise d échantillon afin d éviter que des impuretés contenues dans le matériel de prélèvement ne stimulent la production d IL4 par les cellules sanguines et ne fassent faussement augmenter les taux sériques d IL4. Les tubes de prélèvement doivent être pyrogenfree. X. MODE OPERATOIRE A. Notes de manipulation Ne pas utiliser la trousse ou ses composants après avoir dépassé la date d expiration. Ne pas mélanger du matériel provenant de trousses de lots différents. Mettre tous les réactifs à température ambiante avant utilisation. Mélangez tous les réactifs et les échantillons sous agitation douce.

9 Réaliser les calibrateurs, les contrôles et les échantillons en double. Un alignement vertical est recommandé. Utiliser un récipient en plastic propre pour préparer la Solution de Lavage. Pour éviter toute contamination croisée, utiliser une nouvelle pointe de pipette pour l addition de chaque réactif et échantillon. Pour la distribution de la Solution de Révélation et de la Solution d arrêt, éviter des pipettes avec des parties en métal. Des pipettes de haute précision ou un équipement de pipetage automatique permettent d augmenter la précision. Respecter les temps d incubation. Afin d éviter des anomalies, le délai entre le pipetage du premier calibrateur et celui du dernier échantillon doit être limité au délai indiqué à la section XIII paragraphe E (Délai). Préparer une courbe d étalonnage pour chaque nouvelle série d expériences, ne pas utiliser les données d expériences précédentes. Distribuer la Solution de Révélation dans les 15 minutes après le lavage de la microplaque de titration. Eviter exposition à la lumière du soleil lors de l incubation avec la Solution de Révélation. B. Mode opératoire 1. Sélectionner le nombre de barrettes nécessaires pour le test. Les barrettes inutilisées doivent être cachetées de nouveau dans le sachet avec un dessiccatif et gardées à 28 C. 2. Placer les barrettes dans le support. 3. Pipeter µl du tampon d incubation dans tous les puits. 4. Pipeter µl de chaque Calibrateur, Contrôle et Echantillon dans les puits appropriés. 5. Pipeter 5 µl du conjugué antiil4hrp dans tous les puits. 6. Incuber pendant 2 heures à température ambiante dans un agitateur horizontal mis à 7 rpm ± rpm. 7. Aspirer le liquide de chaque puits. 8. Laver la plaque 3 fois en: distribuant.4 ml de la Solution de Lavage dans chaque puits aspirant le contenu de chaque puits 9. Pipeter µl de la Solution de Révélation qui vient d être préparée dans chaque puits dans les 15 minutes après la phase de lavage. 1. Incuber la microplaque pendant 3 minutes à température ambiante dans un agitateur horizontal mis à 7 rpm ± rpm, éviter exposition à la lumière du soleil. 11. Pipeter 5 µl de la Solution d arrêt dans chaque puits. 12. Lire les absorbances à 45 nm et 49 nm (filtre de référence 63 nm ou 65 nm) dans 3 heures et calculer les résultats comme décrits dans la section XI. XI. CALCUL DES RESULTATS A. Lecture polychromatique: 1. En ce cas, le software ELISAAID fera le traitement des données. 2. La plaque est lue d abord à 45 nm contre un filtre de référence mis à 65 nm (ou 63 nm). 3. Une seconde lecture est effectuée à 49 nm contre le même filtre de référence. 4. Le software ELISAAID manœuvrera le lecteur automatiquement et intégrera les deux lectures dans un modèle polychromatique. Cette technique peut générer des DO jusqu à Le principe du traitement de données polychromatique est le suivant: Xi = DO à 45 nm Yi = DO à 49 nm Utilisant une régression linéaire non pondérée standard, les paramètres A & B sont calculés : Y = A*X + B Si Xi < 3 unités DO, X calculé = Xi Si Xi > 3 unités DO, X calculé = (YiB)/A Un lissage de courbes «4 paramètres» est utilisé pour la courbe de calibration. La concentration en IL4 des échantillons est déterminée par interpolation sur la courbe de calibration. B. Lecture bichromatique 1. Lire la plaque à 45 nm contre un filtre de référence mis à 65 nm (ou 63 nm). 2. Calculer la moyenne de chaque détermination réalisée en double. 3. Dessiner sur un graphique linéaire ou semilogarithmique les cpm (ordonnées) pour chaque calibrateur contre la concentration correspondante en IL4 (abscisses) et dessiner une courbe de calibration à l aide des points de calibration, en connectant les points avec des lignes droites. 4. Lire la concentration pour chaque contrôle et échantillon par interpolation sur la courbe de calibration. 5. L analyse informatique des données simplifiera les calculs. Si un système d analyse de traitement informatique des données est utilisé, il est recommandé d utiliser la fonction «4 paramètres» du lissage de courbes. Les données représentées cidessous sont fournies pour information et ne peuvent jamais être utilisées à la place d une courbe d étalonnage. Calibrateur IL4EASIA XIII. PERFORMANCE ET LIMITES pg/ml 14.5 pg/ml 51 pg/ml 156 pg/ml 552 pg/ml 1696 pg/ml Unités DO modèle polychromatique,36,89,7,571 1,79 3,631 A. Sensibilité Vingt calibrateurs zéro ont été testés en parallèle avec un assortiment d autres calibrateurs. La limite de détection, définie comme la concentration apparente située 2 déviations standards audessus de la moyenne DO déterminée à la fixation zéro, était de 1,2 pg/ml. B. Spécificité On n a pas constaté de réaction croisée significative en présence de 5 ng IL1α, IL1β, IL2, IL3, IL6, IL7, IL8, IL1, TNFβ, IFNα, TGFβ, GMCSF, MIP1α, MIP1β, MCP1, GCSF, RANTES, PF4, GRO, IP1 et SCF. Ce dosage de l IL4 est spécifique de l IL4 humaine naturelle et recombinante. C. Précision INTRAESSAI Sérum N <X> ± SD A B 141,1 ± 5,4 536,3 ± 19,8 CV 3,8 3,7 INTERESSAI Sérum N <X> ± SD A B SD : Déviation Standard; CV: Coefficient de variation D. Exactitude Echantillon TEST DE RECUPERATION IL4 ajoutée Sérum 8, ,8 8, ,8 TEST DE DILUTION IL4 récupérée Echantillon Dilution Concent. théorique Sérum 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 633,2 316,6 158,3 79, ,3 877, ,4 876 Les échantillons ont été dilués avec le Diluant du spécimen. 118,7 ± 5,4 381,5 ± 21,2 CV 4,5 5,6 Récupération Concent. Mesurée 1266,4 531,5 253,1 122,2 65,3 XII. DONNEES TYPES

10 E. Délai entre la distribution du dernier calibrateur et celle de l échantillon Comme montré cidessous, les résultats d un essai restent précis même quand un échantillon est distribué 3 minutes après que le calibrateur a été ajouté aux tubes avec l anticorps. DELAI échantillons min 1 min min 3 min 4 min ,5 78,1 351,1 985, 37,1 73,3 346, 871,9 34, 67,6 345,1 899,6 33,7 68,3 328,3 894,6 35,2 69,2 338,7 98, F. Effet crochet Un échantillon dopé avec de l IL4 jusqu à,5 µg/ml donne des DO supérieurs au dernier point de calibration. XIV. CONTROLE DE QUALITE INTERNE Si les résultats obtenus pour le(s) contrôle(s) 1 et/ou 2 ne sont pas dans l intervalle spécifié sur l étiquette du flacon, les résultats ne peuvent pas être utilisés à moins que l'on ait donné une explication satisfaisante de la nonconformité. Chaque laboratoire est libre de faire ses propres stocks d échantillons contrôles, lesquels doivent être congelés aliquotés. Des contrôles qui contiennent de l azoture influenceront la réaction enzymatique et ne peuvent pas être utilisés. Les critères d acceptation pour les écarts des valeurs en double des échantillons doivent être basés sur les pratiques de laboratoire courantes. On recommande que les contrôles soient testés de façon routinière comme des échantillons inconnus pour mesurer la variabilité du test. La réalisation du test doit être suivie avec des fichiers de contrôle de qualité des contrôles. On recommande de vérifier visuellement la courbe sélectionnée par l ordinateur. XV. VALEURS ATTENDUES Les valeurs sont données à titre d information; chaque laboratoire doit établir ses propres fourchettes de valeurs normales. A titre indicatif, les résultats de 4 échantillons de sérum de personnes apparemment saines avec de faibles niveaux de CRP se situaient entre et 38,7 pg/ml. 29 échantillons ont montré des valeurs inférieures à la limité de détection (<1,2 pg/ml). XVI. PRECAUTIONS ET AVERTISSEMENTS Sécurité Pour utilisation en diagnostic in vitro uniquement. Les composants de sang humain inclus dans ce kit ont été évalués par des méthodes approuvées par l Europe et/ou la FDA et trouvés négatifs pour HBsAg, l antihcv, l antihiv1 et 2. Aucune méthode connue ne peut offrir l'assurance complète que des dérivés de sang humain ne transmettront pas d hépatite, le sida ou toute autre infection. Donc, le traitement des réactifs, du sérum ou des échantillons de plasma devra être conforme aux procédures locales de sécurité. Tous les produits animaux et leurs dérivés ont été collectés d'animaux sains. Les composants bovins proviennent de pays où l ESB n'a pas été détectée. Néanmoins, les composants contenant des substances animales devront être traités comme potentiellement infectieux. Eviter le contact de la peau avec tous les réactifs. La Solution d arrêt contient de l H 2SO 4, le chromogène contient de la TMB dans de la Diméthylformamide, le Tampon Substrat contient de l H 2O 2. En cas de contact, laver avec beaucoup d eau. Ne pas fumer, ni boire, ni manger ni appliquer de produits cosmétiques dans les laboratoires. Ne pas pipeter avec la bouche. Utiliser des vêtements protecteurs et des gants à usage unique. XVII. BIBLIOGRAPHIE 1. BANCHEREAU J., (199). Interleukin4 Médecine/Science, 6: MIOSSEC P. et al., (199). Low levels of interleukin4 and high levels of transforming growth factor ß in rheumatoid synovitis. Arth. Rheum., 33: YOKOTA T. et al., (1988). Molecular biology of IL4 and IL5 genes and biology of their products that stimulate Bcells, Tcells and hemopoietic cells. Immunol. Rev., 12: XVIII. RESUME DU PROTOCOLE Tampon d incubation Calibrateurs (5) Echantillons, Contrôles Conjugué AntiIL4HRP CALIBRATEURS (µl) 5 ECHANTILLON(S) CONTROLES (µl) 5 Incuber pendant 2 heures à température ambiante avec agitation continue à 7 rpm. Aspirer le contenu de chaque puits. Laver 3 fois avec 4 µl de la Solution de Lavage et aspirer. Solution de Révélation Incuber pendant 3 min à température ambiante avec agitation continue à 7 rpm. Solution d arrêt 5 5 Lire sur un lecteur de microplaques et enregistrer l absorbance de chaque puits à 45 nm (contre 63 ou 65 nm) et 49 nm (contre 63 ou 65 nm) DIAsource Catalogue Nr : KAP1281 P.I. Number : 17593/fr Revision nr : 955/1 Date de révision : 955

11 de Vor Gebrauch des Kits lesen Sie bitte diese Packungsbeilage. IL4EASIA I. VERWENDUNGSZWECK Ein immunenzymetrisches Assay für die quantitative in vitro Bestimmung von humanem Interleukin 4 (IL4) in Serum. II. ALLGEMEINE INFORMATION A. Handelsbezeichnung : DIAsource IL4EASIA Kit B. Katalognummer : KAP1281 : 96 Tests C. Hergestellt von: DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8, B14 Nivelles, Belgien. Für technische Unterstützung oder Bestellungen wenden Sie sich bitte an: Tel : +32 () Fax : +32 () Für Deutschland : Kostenfreie Rufnummer : Kostenfreie Faxnummer : Ordering : ordering@diasource.be III. KLINISCHER HINTERGRUND A. Biologische Aktivität Interleukin4 (IL4) ist ein 1519 kda Glykoprotein, das von TH2, einer Unterart von CD4+ TLymphozyten und von Vorstufen der Mastzelle produziert wird. IL4 vermindert die Produktion von IFNγ durch TH1 CD4+ TLymphozyten, induziert die Proliferation von Thymozyten und reifen TLymphozyten, blockiert aber die IL2 induzierte Proliferation peripheraler TZellen ebenso wie die Produktion von IL2 abhängigen LAKZellen. Auf B Zellen verfügt IL4 über eine Wachstumsfaktoraktivität vermittelt über die Produktion von löslichem CD23, und eine differenzierte Aktivität führt zu Produktion von IgE, IgM und IgG1. Auf Monozyten induziert IL4 eine vermehrte Anzahl von Histokompatibilitätsantigenen Klasse II und CD23 Rezeptoren, verhindert aber die Expression von IgG Rezeptoren. IL4 blockiert die Produktion von IL1, IL6, TNFα, PGE2, GCSF und stimuliert die Produktion von MCSF und GCSF durch Monozyten. IL4 wirkt ebenso auf Eosinophile durch die ansteigende Expression von CD23 und die Unterdrückung der Expression von IgG Rezeptoren Durch seine pleophänische Aktivität ist IL4 ein Schlüsselzytokin im Zytokinnetzwerk, das antiinflammatorische Fähigkeiten zeigt und möglicherweise in die Mechanismen der Allergie involviert ist.

12 IV. GRUNDSÄTZLICHES ZUR DURCHFÜHRUNG Der DIAsource IL4EASIA ist ein solid phaseenzyme Amplified Sensitive Immunoassay (EASIA) im Mikrotiterplattenformat. Derr Assay benutzt monoklonale Antikörper (Ms), die gegen verschiedene Epitope von IL4 gerichtet sind. Kalibratoren und Proben reagieren mit dem primären monoklonalen Antikörper (MAk 1), mit dem die Wells der Mikrotiterplatte beschichtet sind, und mit einem monoklonalen Antikörper (MAk 2), der mit MeerrettichPeroxidase (MRP) markiert ist. Nach einer Inkubationsphase bildet sich ein SandwichKomplex: MAk 1 IL4 MAk 2 MRP; nicht gebundene enzymbeschriftete Antikörper werden durch Waschen der Mikrotiterplatte entfernt. Gebundene enzymbeschriftete Antikörper werden durch eine Farbreaktion gemessen. Farblösung (TMB H 2O 2) wird hinzugefügt und inkubiert. Die Reaktion wird durch Hinzufügen einer Stopplösung beendet und die Mikrotiterplatte wird bei adäquater Wellenlänge ausgewertet. Die Menge an Substratumsatz wird kolorimetrisch durch Messung der sorption bestimmt, die proportional zur IL4Konzentration ist. Es wird eine Kalibrationskurve erstellt und die IL4Konzentration in den Proben wird durch Interpolation von der Kalibrationskurve bestimmt. Die Verwendung des EASIALesegeräts (Linearität bis zu 3 ODEinheiten) und eine komplexe Datenreduktionsmethode (polychromatische Datenreduktion) ergeben eine hohe Sensibilität im niedrigen Bereich und einen breiten Kalibrationsbereich. V. MITGELIEFERTE REAGENZIEN Reagenzien Konjugat: MRP beschriftete Anti IL4 (monoklonale Antikörper) in TRISMaleatpuffer mit Rinderserumalbumin und Thymol CAL NullKalibrator in Humanserum mit Benzamidin und Thymol CAL Kalibrator N = 1 bis 5 (genaue Werte auf Gefäß Etiketten) in Humanserum mit Benzamidin und Thymol Probenverdünner: Humanserum mit Benzamidin und Thymol Inkubationspuffer: Phosphatpuffer mit Rinderserumalbumin und Thymol WASH Waschlösung (TrisHCl) CONTROL Kontrollen N = 1 oder 2 Humanserum mit Thymol Chromogenes TMB (Tetramethylbenzydin) in Dimethylformamid SUB Substratpuffer: H 2O 2 in Azetat /Zitratpuffer STOP DIL INC CHROM Mikrotiterplatte mit 96 anti IL4 beschichtete Wells (monoklonale Antikörper) HRP Stopplösung: H 2SO 4 1,8N N SOLN TMB SOLN SPE N CONC CONC 96 Test Kit Farb Code Rekonstitution 96 Wells Blau gebrauchsfertig 1 Gefäß 6 ml 1 Gefäß lyophilisiert 5 Gefäße lyophilisiert 2 Gefäße lyophilisiert 1 Gefäß 11 ml 1 Gefäß 1 ml 2 Gefäße lyophilisiert 1 Gefäß 1 ml 3 Gefäße 21 ml 1 Gefäß 6 ml Rot Gelb Gelb Schwarz Schwarz Braun Silber Grün Weiß Schwarz gebrauchsfertig 5 ml dest. Wasser zugeben 1 ml dest. Wasser zugeben Dest. Wasser zugeben( das exakte Volumen bitte dem Etikett entnehmen) gebrauchsfertig x mit dest. Wasser verdünnen (Magnetrührer benutzen). 1 ml dest. Wasser zugeben,2 ml in 1 Fläschchen Substratpuffer verdünnen gebrauchsfertig gebrauchsfertig Bemerkung: 1. Benutzen Sie den Probenverdünner zur Probenverdünnung pg der Kalibratorzubereitung ist äquivalent zu 1 mu des NIBSC 1st IS 88/656. VI. ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL Folgendes Material wird benötigt, aber nicht mit dem Kit mitgeliefert: 1. Hochwertiges destilliertes Wasser 2. Pipetten: 5 μl, µl, µl, 1 ml und 1 ml (Verwendung von Präzisionspipetten mit Einwegplastikspitzen wird empfohlen) 3. Vortex Mixer 4. Magnetrührer 5. Horizontaler Schüttler für Mikrotiterplatte Kap. 7 rpm ± rpm 6. Waschgerät für Mikrotiterplatten 7. MikrotiterplattenLesegerät zur Auswertung bei 45 nm, 49 nm und 65 nm (bei polychromatischer Auswertung) oder zur Auswertung bei 45 nm und 65 nm (monochromatische Auswertung) 8. Optional: ELISAAID zur Auswertung der Platte nach polychromatischer Methode (siehe schnitt XI.A.), erhältlich bei Robert Maciels Associates, Inc. Mass USA. VII. VORBEREITUNG DER REAGENZIEN A. Kalibratoren: Rekonstituieren Sie den NullKalibrator mit 5 ml dest. Wasser, die anderen Kalibratoren mit 1 ml dest. Wasser. B. Kontrollen: Rekonstituieren Sie die Kontrollen mit 1 ml dest. Wasser. C. Probenverdünner: Rekonstituieren Sie den Probenverdünner bis zu dem genau auf dem Ettikett des Fläschchens angegebenen Volumen mit dest. Wasser D. Waschlösung: Bereiten Sie ein angemessenes Volumen Waschlösung aus einem Anteil Waschlösung (x) mit 199 Anteilen dest. Wasser zu. Verwenden Sie einen Magnetrührer zum gleichmäßigen Durchmischen. Werfen Sie die nicht benutzte Waschlösung am Ende des Tages weg. E. Substratlösung: Pipettieren Sie,2 ml chromogenes TMB in eine der Fläschchen Substratpuffer (H 2O 2 in Azetat/Zitratpuffer). Frisch herstellen. VIII. AUFBEWAHRUNG UND LAGERUNG DER REAGENZIEN Vor dem Öffnen oder der Rekonstitution sind die Reagenzien des Kits bis zum laufdatum (Angaben auf Etikett) bei Lagerung bei 2 C bis 8 C stabil. Nicht verwendete Mikrotiterstreifen sollten bis zum Verfallsdatum dicht in der Folie verschlossen mit Trockenmittel bei 2 bis 8 C gelagert werden. Nach der Rekonstitution sind die Kalibratoren, Probenverdünner und Kontrollen bei 2 C bis 8 C 4 Tage stabil. Aliquots müssen bei längerer Aufbewahrung bei C eingefroren werden, dann sind Sie 2 Monate haltbar. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen. Die konzentrierte Waschlösung ist bei Raumtemperatur bis zum Verfallsdatum haltbar. Frisch zubereitete Waschlösung sollte am selben Tag benutzt werden. Nach der ersten Benutzung ist das Konjugat bei Aufbewahrung im Originalgefäß und bei 2 bis 8 C bis zum laufdatum stabil. Die frisch hergestellte Substratlösung ist vor Gebrauch bei Raumtemperatur höchstens 15 Minuten stabil und ist danach zu entsorgen. Veränderungen im Aussehen der Kitkomponenten können ein Anzeichen für Instabilität oder Zerfall sein. IX. PROBENSAMMLUNG UND VORBEREITUNG Das Serum muss so schnell wie möglich vom Blutgerinnsell der roten Zellen nach Gerinnung und Zentifugation getrennt und bei 4 C aufbewahrt werden. Werden die Proben nicht direkt benutzt, müssen sie bei 7 C für maximal 1 Jahr gelagert werden. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen. Vor Gebrauch müssen alle Proben Raumtemperatur erreichen. Vortexmischen der Proben wird vor Gebrauch empfohlen. Die Bedingungen der Probennahme können Werte beeinflussen, weshalb strenge Vorsichtsmaßnahmen während des Sammelns ergriffen werden müssen, um Unreinheiten im gesammelten Material, die die IL4 Produktion durch Blutzellen stimulieren und somit Serum IL4 Werte fälschlich steigerrn könnten, zu vermeiden. Sammelröhrchen dürfen kein Pyrogen enthalten. X. DURCHFÜHRUNG A. Bemerkungen zur Durchführung Verwenden Sie den Kit oder dessen Komponenten nicht nach laufdatum. Vermischen Sie Materialien von unterschiedlichen KitChargen nicht. Bringen Sie alle Reagenzien vor der Verwendung auf Raumtemperatur. Mischen Sie alle Reagenzien und Proben gründlich durch sanftes Schütteln oder Rühren.

13 Führen Sie Kalibratoren, Kontrollen und Proben doppelt aus. Vertikale Ausrichtung wird empfohlen. Verwenden Sie zur Zubereitung der Waschlösung reinen Kunststoffbehälter. Verwenden Sie saubere Einwegpipettenspitzen, um Kreuzkontamination zu vermeiden. Verwenden Sie zur Pipettierung der Substratlösung und der Stopplösung keine Pipetten mit Metallteilen. Präzisionspipetten oder ein automatisches Pipettiersystem erhöhen die Präzision. Achten Sie auf die Einhaltung der Inkubationszeiten. Zur Vermeidung von Drift muss die Zeit zwischen dem Pipettieren des ersten Kalibrators und der letzten Probe auf die Zeit beschränkt werden, die in schnitt XIII satz E (Zeitverzögerung) erwähnt wird. Erstellen Sie für jeden Durchlauf eine Kalibrationskurve, verwenden Sie nicht die Daten von früheren Durchläufen. Pipettieren Sie die Substratlösung innerhalb von 15 Minuten nach dem Waschen der Mikrotiterplatte. Während der Inkubation mit der Substratlösung ist die Mikrotiterplatte vor direktem Sonnenlicht zu schützen. B. Durchführung 1. Wählen Sie die erforderliche Anzahl der Streifen für den Lauf aus. Nicht verwendete Mikrotiterstreifen sollten wieder dicht in der Folie verschlossen mit Trockenmittel bei 2 bis 8 C gelagert werden. 2. Befestigen Sie die Streifen im Halterahmen. 3. Pipettieren Sie µl Inkubationspuffer in alle Wells. 4. Pipettieren Sie jeweils µl Kalibrator, Kontrolle und Probe in die entsprechenden Wells. 5. Pipettieren Sie 5 µl AntiIL4MRPKonjugat in alle Wells. 6. Inkubieren Sie 2 Stunden bei Raumtemperatur auf horizontalem Schüttler bei 7 rpm ± rpm. 7. Saugen Sie die Flüssigkeit aus jedem Well ab. 8. Waschen Sie die Platte dreimal: pipettieren Sie,4 ml Waschlösung in jeden Well saugen Sie der Inhalt jedes Wells ab 9. Pipettieren Sie µl der frisch hergestellten Substratlösung innerhalb von 15 Minuten nach dem Waschvorgang in jeden Well. 1. Inkubieren Sie die Mikrotiterplatte 3 Minuten bei Raumtemperatur auf horizontalem Schüttler bei 7 rpm ± rpm; vermeiden Sie direktes Sonnenlicht. 11. Pipettieren Sie 5 µl der Stopplösung in jeden Well. 12. Werten Sie die sorptionen bei 45 nm und 49 nm (Referenzfilter 63 nm oder 65 nm) innerhalb 3 Stunden aus und berechnen Sie die Resultate wie in schnitt XI beschrieben. XI. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE A. Polychromatische Auswertung: 1. In diesem Fall werden die Daten durch die ELISAAID Software verarbeitet. 2. Die Platte wird zunächst bei 45 nm gegen einen Referenzfilter auf 65 nm (oder 63 nm) ausgewertet. 3. Eine zweite Auswertung erfolgt bei 49 nm gegen denselben Referenzfilter. 4. Die ELISAAID Software steuert das Lesegerät automatisch und integriert beide Auswertungen in ein polychromatisches Modell. Diese Technik kann ODs bis 1 erstellen. 5. Das Prinzip der polychromatischen Datenauswertung funktioniert wie folgt: Xi = OD bei 45 nm Yi = OD bei 49 nm Standard nicht gewichtet lineare Regression, Parameter A & B werden berechnet: Y = A*X + B Wenn Xi < 3 OD Einheiten, dann X berechnet = Xi Wenn Xi > 3 OD Einheiten, dann X berechnet = (YiB)/A Die Kalibrationskurve wird unter Verwendung einer 4 Parameter logistischen Kurve erstellt. Die IL4Konzentration in den Proben wird durch Interpolation auf der Kalibrationskurve bestimmt. B. Bichromatische Auswertung: 1. Werten Sie die Platte bei 45 nm gegen einen Referenzfilter auf 65 nm (oder 63 nm) aus. 2. Berechnen Sie den Durchschnitt aus den Doppelbestimmungen. 3. Tragen Sie auf semilogarithmischem oder linearem Millimeterpapier den c.p.m. (Ordinate) für jeden Standard gegen die entsprechende Konzentration IL4 (szisse) und zeichnen Sie eine Kalibrationskurve durch die Kalibrationspunkte, indem Sie die eingetragenen Punkte durch gerade Linien verbinden. 4. Berechnen Sie die Konzentration für jede Kontrolle und Probe durch Interpolation aus der Kalibrationskurve. 5. Computergestützte Methoden können ebenfalls zur Erstellung der Kalibrationskurve verwendet werden. Falls die Ergebnisberechnung mit dem Computer durchgeführt wird, empfehlen wir die Berechnung mit einer 4 Parameter Kurvenfunktion. XII. TYPISCHE WERTE Die folgenden Daten dienen nur zu Demonstrationszwecken und können nicht als Ersatz für die Echtzeitstandardkurve verwendet werden. Kalibrator IL4EASIA pg/ml 14.5 pg/ml 51 pg/ml 156 pg/ml 552 pg/ml 1696 pg/ml OD Einheiten Polychromatisches Modell,36,89,7,571 1,79 3,631 XIII. LEISTUNGSMERKMALE UND GRENZEN DER METHODIK A. Nachweisgrenze Zwanzig NullKalibratoren wurden zusammen mit einem Satz anderer Kalibratoren gemessen. Die Nachweisgrenze, definiert als die scheinbare Konzentration bei zwei Standardabweichungen über dem gemessenen Durchschnittswert bei Nullbindung, entsprach 1,2 pg/ml. B. Spezifität Es wurde keine signifikante Kreuzreaktion beobachtet beim Vorhandensein von 5 ng von IL1α, IL1β, IL2, IL3, IL6, IL7, IL8, IL1, TNFβ, IFNα, TGFβ, GMCSF, MIP1α, MIP1β, MCP1, GCSF, RANTES, PF4, GRO, IP1 und SCF. Dieses IL4 Assay ist spezifisch für humanes natürliches und rekombinantes IL4. C. Präzision INTRA ASSAY Serum N <X> ± SD A B 141,1 ± 5,4 536,3 ± 19,8 CV 3,8 3,7 INTER ASSAY Serum N <X> ± SD A B SD : Standardabweichung; CV: Variationskoeffizient D. Genauigkeit Probe WIEDERFINDUNGSTEST Zugeg. IL4 Serum 8, ,8 8, ,8 Wiedergef. IL4 VERDÜNNUNGSTEST Probe Verdünn. Theoret. Konzent. Serum 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 633,2 316,6 158,3 79,1 Die Proben wurden mit Probenverdünner verdünnt ,3 877, , ,7 ± 5,4 381,5 ± 21,2 CV 4,5 5,6 Wiedergefunden Gemess. Konzent. 1266,4 531,5 253,1 122,2 65,3

14 E. Zeitverzögerung zwischen letzter Kalibrator und Probenzugabe Es wird im Folgenden gezeigt, dass die Genauigkeit der Tests selbst dann gewährleistet ist, wenn die Probe 3 Minuten nach Zugabe des Kalibrators in die beschichteten Röhrchen zugegeben wird. ZEITDIFFERENCE Proben min 1 min min 3 min 4 min ,5 78,1 351,1 985, 37,1 73,3 346, 871,9 34, 67,6 345,1 899,6 33,7 68,3 328,3 894,6 35,2 69,2 338,7 98, F. HookEffekt Eine Probe mit IL4 bis zu,5 µg/ml liefert höhere Messwerte als der letzte Kalibratormeßwert. XIV INTERNE QUALITÄTSKONTROLLE Entsprechen die IstWerte nicht den auf den Fläschchen angegebenen Soll Werten, können die Werte, ohne treffende Erklärung der weichungen, nicht weiterverarbeitet werden. Falls zusätzliche Kontrollen erwünscht sind, kann jedes Labor seinen eigenen Pool herstellen, der in Aliquots eingefroren werden sollte. Kontrollen mit erhöhten Azidkonzentrationen stören die Enzymreaktion und können nicht verwendet werden. Akzeptanzkriterien für die Differenz zwischen den Resultaten der Wiederholungstests anhand der Proben müssen auf Guter Laborpraxis beruhen. Es wird empfohlen, Kontrollen im Assay routinemäßig wie unbekannte Proben zu behandeln, um die Assayvarianz zu messen. Die Leistung des Assay muss mit den Qualitätskontrollkarten der Kontrollen überprüft werden. Es hat sich bewährt, die durch den Computer ausgewählte Kurvenanpassung visuell zu überprüfen. XV. REFERENZ INTERVALLE Diese Werte sind nur Richtwerte; jedes Labor muss seinen eigenen Normalwertbereich ermitteln. Zur Orientierung: Die Ergebnisse von 4 Serumproben augenscheinlich gesunder Personen mit niedrigen CRP Werten, liegen innerhalb der Bandbreite von und 38,7 pg/ml. 29 Proben enthielten Werte unterhalb der Nachweisgrenze des Tests (<1,2 pg/ml). XIII. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN Sicherheit Nur für diagnostische Zwecke. Die menschlichen Blutkomponenten in diesem Kit wurden mit europäischen und in den USA erprobten FDAMethoden getestet, sie waren negativ für HBsAG, antihcv und antihiv 1 und 2. Keine bekannte Methode kann jedoch vollkommene Sicherheit darüber liefern, dass menschliche Blutbestandteile nicht Hepatitis, AIDS oder andere Infektionen übertragen. Deshalb sollte der Umgang mit Reagenzien, Serum oder Plasmaproben in Übereinstimmung mit den Sicherheitsbestimmungen erfolgen. Alle tierischen Produkte und deren Derivate wurden von gesunden Tieren gesammelt. Komponenten von Rindern stammen aus Ländern in denen BSE nicht nachgewiesen wurde. Trotzdem sollten Komponenten, die tierische Substanzen enthalten, als potenziell infektiös betrachtet werden. Vermeiden Sie Hautkontakt mit allen Reagenzien; Stopplösung enthält H 2SO 4, Farblösung enthält TMB in Dimethylformamid, Substratpuffer enthält H 2O 2. Bei Kontakt gründlich mit Wasser spülen. Bitte rauchen, trinken, essen Sie nicht in Ihrem Arbeitsbereich, und verwenden Sie keine Kosmetika. Pipettieren Sie nicht mit dem Mund. Verwenden Sie Schutzkleidung und Wegwerfhandschuhe. XVII. LITERATUR 1. BANCHEREAU J., (199). Interleukin4 Médecine/Science, 6: MIOSSEC P. et al., (199). Low levels of interleukin4 and high levels of transforming growth factor ß in rheumatoid synovitis. Arth. Rheum., 33: YOKOTA T. et al., (1988). Molecular biology of IL4 and IL5 genes and biology of their products that stimulate Bcells, Tcells and hemopoietic cells. Immunol. Rev., 12: XVIII. ZUSAMMENFASSUNG DES PROTOKOLLS Inkubationspuffer Kalibratoren (5) Proben, Kontrollen AntiIL4MRP Konjugat KALIBRATOREN (µl) 5 PROBE(N) KONTROLLEN (µl) 5 2 Stunden bei Raumtemperatur unter ständigem Schütteln bei 7 rpm inkubieren. Inhalt jedes Wells absaugen. Dreimal mit 4 µl Waschlösung waschen und absaugen. Substratlösung 3 min. bei Raumtemperatur unter ständigem Schütteln bei 7 rpm inkubieren. Stopplösung 5 5 Auf einem MikrotiterplattenLesegerät auswerten und sorption jedes Wells bei 45 nm (gg. 63 oder 65 nm) und 49 nm (gg. 63 oder 65 nm) vermerken. DIAsource Katalognummer : KAP1281 Beipackzettelnummer: 17593/de Nummer der Originalausgabe: 955/1 Revisionsdatum : 955

15 it Prima di utilizzare il kit leggere attentamente le istruzioni per l uso IL4EASIA I. USO DEL KIT Kit immunoenzimetrico per la determinazione quantitativa in vitro dell interleuchina4 (IL4) umana in siero. II. INFORMAZIONI DI CARATTERE GENERALE A. Nome commerciale: DIAsource IL4EASIA Kit B. Numero di catalogo: KAP1281 : 96 tests C. Prodotto da: DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l Industrie, 8, B14 Nivelles, Belgio. Per informazioni tecniche o su come ordinare il prodotto contattare: Tel: +32 () Fax: +32 () III. INFORMAZIONI CLINICHE A. Attività biologiche L interleuchina4 (IL4) è una glicoproteina del peso di 1519 kdab prodotta dai linfociti T CD4+ del sottotipo TH2 e dai precursori dei mastociti. La IL4 inibisce la sintesi di IFNγ da parte dei linfociti T CD4+ TH1, induce la proliferazione dei timociti e dei linfocitit maturi, blocca la proliferazione IL2 indotta dei linfociti T periferici nonché la produzione di cellule LAK IL2dipendenti. Sui linfociti B, la IL 4 svolge la sua azione come fattore di crescita mediata attraverso la produzione di CD23 solubile, nonché un azione di differenziazione che porta alla produzione di IgE, IgM e IgG1. Per quanto riguarda l effetto sui monociti, la IL4 induce un aumento del numero di antigeni di istocompatibilità di classe II e dei recettori CD23 ma inibisce l espressione dei recettori per le IgG. La IL4 blocca la produzione di IL1, IL6, TNFα, PGE2, GCSF ma stimola quella dell MCSF e del GCSF da parte dei monociti. La IL4 svolge un azione anche sugli eosinofili aumentando l espressione di CD23 e inibendo quella dei recettori per IgG. Grazie alla sua attività pleiotropica, la IL4 è una citochina chiave all interno del network citochinico che mostra proprietà antinfiammatorie ed è probabilmente coinvolta nel meccanismo dell allergia.

16 IV. PRINCIPIO DEL METODO DIAsource IL4EASIA è un immunosaggio a sensibilità amplificata a fase solida eseguito su piastre di microtitolazione. Il dosaggio utilizza anticorpi monoclonali (Mabs) diretti contro epitopi distinti dell IL4. I calibratori e i campioni reagiscono con la cattura dell anticorpo monoclonale (M 1) che riveste il pozzetto di microtitolazione e con un anticorpo monoclonale (M 2) marcato con horseradish perossidasi (HRP). Dopo un periodo di incubazione che consenta la formazione di un sandwich: M 1 di rivestimento IL4 umana M 2 HRP, la piastra di microtitolazione viene lavata per rimuovere l anticorpo marcato con enzima non legato. L anticorpo marcato con enzima non legato viene misurato attraverso una reazione cromogenica. Si procede quindi con l aggiunta della soluzione cromogena (TMB) e successiva incubazione. La reazione viene interrotta con l aggiunta di Soluzione di arresto; quindi la piastra di microtitolazione viene letta alla lunghezza d onda adeguata. La quantità di turnover del substrato viene determinata colorimetricamente misurando l assorbanza che è proporzionale alla concentrazione di IL4. Viene tracciata una curva di calibrazione e la concentrazione IL4 nei campioni viene determinata per interpolazione dalla curva di calibrazione. L utilizzo del lettore EASIA (linearità fino a 3 unità OD) associato all impiego di un sofisticato metodo di riduzione dati (riduzione dati policromatica) garantisce un elevata sensibilità nel range basso dei valori e un esteso range di calibrazione. V. REATTIVI FORNITI Reattivi Coniugato: antiil4 (anticorpi monoclonali) marcato con HRP in tampone TRISmaleato con albumina di siero bovino e timolo Calibratore Zero: siero umano con benzamidina e timolo Calibratore N= 15 (le concentrazioni esatte degli calibratore sono riportate sulle etichette dei flaconi), in siero umano con benzamidina e timolo Diluente del Campione: siero umano con benzamidina e timolo Tampone di Incubazione: Tampone fosfato con albumina di siero bovino e timolo Tampone di lavaggio (TRIS HCl) Controlli: N = 1 o 2, in siero umano con timolo Soluzione Cromogena TMB (tetrametilbenzidina in Dimetilformammide Tampone del substrato: H 2O 2 in tampone acetato/citrato Soluzione di arresto: H 2SO 4 1.8N Note: CAL WASH CAL DIL INC CONTROL Piastra di microtitolazione con 96 pozzetti, rivestiti anti IL4 (anticorpi monoclonali) HRP N SOLN CHROM TMB SUB STOP SPE N SOLN CONC CONC Kit da 96 test 96 pozzetti 1 flacone 6 ml 1 vial lyophil. 5 flaconi liofiliz. 2 flaconi liofiliz. 1 flacone 11 ml 1 flacone 1 ml 2 flaconi liofiliz. 1 flacone 1 ml 3 flaconi 21 ml 1 flacone 6 ml Codice colore Blu Rosso Giallo Volume di ricostituzione Pronte per l uso Pronte per l uso Aggiungere 5 ml di acqua distillata Giallo Aggiungere 1 ml di nero nero Bruno Argento acqua distillata Aggiungere acqua distillata (vedi etichetta per volumi esatti) Pronte per l uso Diluire x con acqua distillata usando un agitatore magnetico). Aggiungere 1 ml di acqua distillata Verde Diluire,2 ml in 1 flacone di tampone del substrato Bianco nero 1. Usare Diluente del Campione per diluire i campioni. Pronte per l uso Pronto per l uso VI pg della preparazione standard è equivalente a 1 mu dell NIBSC 1 st IS 88/656. REATTIVI NON FORNITI Il seguente materiale è richiesto per il dosaggio ma non è fornito nel kit. 1. Acqua distillata di qualità elevata 2. Pipette per dispensare 5 µl, µl µl, 1 ml e 1 ml (Si raccomanda di utilizzare pipette accurate con puntale in plastica monouso). 3. Agitatore tipo vortex. 4. Agitatore magnetico. 5. Agitatore orizzontale per micropiastre da 7 ± rpm 6. lavatrice per piastra di microtitolazione 7. Lettore di micropiastre per letture a 45, 49 e 65 nm (in caso di lettura policromatica) o per letture a 45 e 65 nm (in caso di lettura bicromatica). 8. Strumentazione aggiuntiva: l ELISAAID necessario per la lettura policromatica delle piastre (vedi paragrafo XI.A) è acquistabile presso Robert Maciels Associates, Inc. Mass USA. VII. PREPARAZIONE DEI REATTIVI A. Calibratore: Ricostituire il calibratore zero con 5 ml di acqua distillata e gli altri calibratori con 1 ml di acqua distillata. B. Controlli: Ricostituire i controlli con 1 ml di acqua distillata. C. Diluente del Campione: Ricostituire il Diluente del Campione aggiungendo acqua distillata fino al volume riportato sull etichetta del flacone D. Soluzione di lavoro del tampone di lavaggio: Preparare la quantità necessaria di soluzione di lavoro del tampone di lavaggio aggiungendo 199 parti di acqua distillata ad una parte di tampone di lavaggio concentrato (x). Usare un agitatore magnetico per rendere la soluzione omogenea. La soluzione di lavoro va scartata al termine della giornata. E. Soluzione di Rivelazione: pipettare,2 ml di soluzione cromogena TMB in uno dei flaconi del tampone del substrato (H 2O 2 in tampone acetato/citrato). Si raccomanda la preparazione estemporanea. VIII. CONSERVAZIONE E SCADENZA DEI REATTIVI I reattivi non utilizzati sono stabili a 28 C fino alla data riportata su ciascuna etichetta. Le strisce reattive inutilizzate devono essere conservate a 28 C, in un contenitore sigillato che contenga un essiccante fino alla data di scadenza. Dopo la ricostituzione, i calibratori, i controlli e il Diluente del Campione sono stabili 4 giorni a 28 C. Per periodi di conservazione molto lunghi, preparare e mantenere le aliquote a C per un massimo di 2 mesi. Evitare ripetuti cicli di congelamentoscongelamento dei campioni. La soluzione di lavaggio concentrata è stabile a temperatura ambiente fino alla data di scadenza. La soluzione di lavoro del tampone di lavaggio deve essere preparata fresca ogni volta e usata nello stesso giorno della preparazione. Dopo apertura del flacone, il coniugato è stabile fino alla data di scadenza riportata sull etichetta, se conservato a 28 C nel flacone originale ben tappato. La soluzione di rivelazione preparata di fresco rimane stabile prima dell uso per un massimo di 15 minuti a temperatura ambiente. Superato tale limite dovrà essere eliminata. Alterazioni dell aspetto fisico dei reattivi possono indicare una loro instabilità o deterioramento. IX. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI A coagulazione e centrifugazione avvenute, il siero dovrà assere rimosso al più presto dal coagulo di eritrociti e conservato a 4 C. In caso di utilizzo non immediato, povranno essere conservati a C per 2 mesi al massimo e a 7 C per un tempo maggiore (massimo un anno). Evitare ripetuti cicli di congelamentoscongelamento dei campioni. Prima dell impiego, tutti i campioni devono essere a temperatura ambiente. Si raccomanda di vortexare i campioni prima di utilizzarli. Le condizioni di raccolta possono influenzare i valori. Adottare pertanto le massime precauzioni durante la raccolta per evitare che eventuali impurità contenute nei campioni possano stimolare la produzione di IL4 da parte delle cellule ematiche con conseguente aumento falsato dei livelli sierici di IL4. Le provette di raccolta devono essere apirogene. X. METODO DEL DOSAGGIO A. Avvertenze generali Non usare il kit o suoi componenti oltre la data di scadenza. Non mescolare reattivi di lotti diversi. Prima dell uso portare tutti i reattivi a temperatura ambiente. Mescolare delicatamente i campioni per inversione o rotazione. Eseguire calibratori, controlli e campioni in doppio. Si raccomanda l allineamento verticale. Utilizzare un contenitore di plastica pulito per preparare la soluzione di

17 lavaggio. Per evitare crosscontaminazioni, cambiare il puntale della pipetta ogni volta che si usi un nuovo reattivo o campione. Per la distribuzione della Soluzione di Rivelazione e la Soluzione di arresto evitare pipette con parti metalliche. L uso di pipette ben tarate e ripetibili o di sistemi di pipettamento automatici migliora la precisione del dosaggio. Rispettare i tempi di incubazione. Per evitare derive, l intervallo tra il pipettaggio del primo calibratore e l ultimo campione deve essere limitato ai tempi riportati nella sezione XIII, paagrafo E (Tempo Trascorso). Allestire una curva di calibrazione per ogni seduta analitica, in quanto non è possibile utilizzare per un dosaggio curve di calibrazione di sedute analitiche precedenti. La Soluzione di Rivelazione deve essere incolore. L eventuale sviluppo di un colore blu entro pochi minuti dalla preparazione indica che il reagente è inutilizzabile e deve essere eliminato. Distribuzione della Soluzione di Rivelazione entro 15 minuti dopo il lavaggio della piastra di microtitolazione. Durante l incubazione con la Soluzione di Rivelazione evitare la luce diretta del sole sulla piastra di microtitolazione. B. Metodo del dosaggio 1. Selezionare il numero di strisce reagenti necessario per il test. Le strisce reagenti inutilizzate devono essere risigillate nel contenitore con un essiccante e conservate a 28 C. 2. Assicurare le strisce reagenti nel telaio di supporto. 3. Pipettare µl di Tampone di Incubazione in ogni pozzetto 4. Pipettare µl di ogni calibratore, controllo e campione nei pozzetti adeguati. 5. Pipettare 5 µl di coniugato antiil4 HRP in tutti i pozzetti. 6. Incubare per 2 ore a temperatura ambiente su agitatore orizzontale regolato a 7 ± rpm. 7. Aspirare il liquido da ogni pozzetto. 8. Lavare la piastra 3 volte : versando,4 ml di soluzione di lavaggio in ogni pozzetto aspirando il contenuto di ogni pozzetto 9. Pipettare µl della soluzione di rivelazione preparata di fresco in ogni pozzetto entro 15 minuti dal termine della fase di lavaggio. 1. Incubare la piastra di microtitolazione per 3 minuti a temperatura ambiente su un agitatore orizzontale a 7 ± rpm; evitare la luce diretta del sole. 11. Pipettare 5 µl di soluzione di arresto in ogni pozzetto. 12. Leggere le assorbanze a 45 nm a 49 nm (filtro di riferimento a 63 nm o 65 nm) entro 3 ore e calcolare i risultati come descritto nella sezione XI. XI. CALCOLO DEI RISULTATI A. Lettura policromatica: 1. In questo caso, l elaborazione dati verrà effettuata dal software ELISA AID. 2. La piastra viene letta a 45 nm rispetto a un filtro di riferimento regolato a 65 nm (o 63 nm). 3. Verrà quindi effettuata una seconda lettura a 49 nm rispetto allo stesso filtro di riferimento. 4. Il Software ELISAAID guiderà automaticamente il lettore e integrerà le due letture utilizzando un modello policromatico. Tale tecnica può generare valori fino a 1 OD. 5. Il principio dell elaborazione policromatica dei dati è la seguente: * Xi = OD a 45 nm * Yi = OD at 49 nm * Utilizzando una regressione lineare standard non pesata, i parametri A & B sono calcolati: Y = A*X + B * Se Xi <3 unità OD, X calcolato = Xi * Se Xi >3 unità OD, X calcolato = (YiB)/A * Per tracciare la curva di calibrazione viene utilizzato un modello di adattamento della curva logistica a 4 parametri. * La concentrazione di IL4 nel campione viene determinata per interpolazione sulla curva di calibrazione. B. Lettura bicromatica 1. Leggere la piastra a 45 nm rispetto a un filtro di riferimento regolato a 65 nm (o 63 nm). 2. Calcolare la media delle determinazioni in duplicato. 3. Costruire la curva di calibrazione su carta millimetrata semilogaritmica o lineare ponendo in ordinata le medie dei colpi per minuto (cpm) dei replicati degli standard e in ascissa le rispettive concentrazioni di IL4, collegando i punti tracciati con linee rette. 4. Determinare le concentrazioni e controlli per interpolazione sulla curva di taratura. 5. E possibile utilizzare un sistema di interpolazione dati automatizzato. Con un sistema automatico di interpolazione dati, utilizzare la curva a 4 parametri. XII. CARATTERISTICHE TIPICHE I dati qui di seguito riportati sono esclusivamente indicativi e non dovranno assolutamente essere utilizzati in sostituzione della curva di calibrazione tracciata in tempo reale. Calibratore IL4EASIA pg/ml 14,5 pg/ml 51 pg/ml 156 pg/ml 552 pg/ml 1696 pg/ml XIII. CARATTERISTICHE E LIMITI DEL METODO Unità OD Modello policromatico,36,89,7,571 1,79 3,631 A. Sensibilità Venti replicati dello standard zero sono stati dosati insieme agli altri standard. La sensibilità, calcolata come concentrazione apparente di un campione con OD pari alla media più 2 deviazioni standard di replicati dello standard zero, è risultata essere 1,2 pg/ml. B. Specificità Nessuna reazione crociata significativa è stata osservata in presenza di 5 ng di IL1α, IL1β, IL2, IL3, IL6, IL7, IL8, IL1, TNFβ, IFNα, TGFβ, GM CSF, MIP1α, MIP1β, MCP1, GCSF, RANTES, PF4, GRO, IP1 e SCF Tale test per il dosaggio dell IL4 è specifico per la IL4 naturale e ricombinante umana. C. Precisione INTRA SAGGIO Siero N <X> ± SD A B 141,1 ± 5,4 536,3 ± 19,8 CV 3,8 3,7 INTER SAGGIO Siero N <X> ± SD A B SD : Deviazione Standard; CV: Coefficiente di Variazione D. Accuratezza Campione TEST DI RECUPERO IL4 aggiunta Siero 8, ,8 8, ,8 IL4 recuperata ,3 877, ,4 876 TEST DI DILUIZIONE Campione Diluizione Concentrazione teorica Siero 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 633,2 316,6 158,3 79,1 I campioni sono stati diluiti con Diluente del Campione. 118,7 ± 5,4 381,5 ± 21,2 Recupero Concentrazione misurata 1266,4 531,5 253,1 122,2 65,3 CV E. Tempo trascorso tra l aggiunta dell ultimo calibratore e il campione Come mostrato nella seguente tabella, il dosaggio si mantiene accurato anche quando un campione viene aggiunto nelle provette sensibilizzate 3 minuti dopo l aggiunta del calibratore. 4,5 5,6

18 campione min 1 min min 3 min 4 min D. Effetto hook 36,5 78,12 351,1 985, 37,1 73,3 346, 871,9 34, 67,6 345,1 899,6 33,7 68,3 328,3 894,6 35,2 69,2 338,7 98, Un campione ha cui è stata aggiunta IL4 fino a,5 μg/ml ha OD superiori a quello dello standard più concentrato. XIV. CONTROLLO DI QUALITA INTERNO XVII. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI 1. BANCHEREAU J., (199). Interleukin4 Médecine/Science, 6: MIOSSEC P. et al., (199). Low levels of interleukin4 and high levels of transforming growth factor ß in rheumatoid synovitis. Arth. Rheum., 33: YOKOTA T. et al., (1988). Molecular biology of IL4 and IL5 genes and biology of their products that stimulate Bcells, Tcells and hemopoietic cells. Immunol. Rev., 12: Se i risultati ottenuti dosando il Controllo 1 e il Controllo 2 non sono all interno dei limiti riportati sull etichetta dei flaconi, non è opportuno utilizzare i risultati ottenuti per i campioni, a meno che non si trovi una giustificazione soddisfacente. Ogni laboratorio può preparare un proprio pool di sieri da utilizzare come controllo, da conservare congelato in aliquote. I controlli che contengono azide interferiscono con la reazione enzimatica e quindi non possono essere utilizzati. I criteri di accettazione delle differenze tra i risultati in duplicato dei campioni devono basarsi sulla buona prassi di laboratorio. Si raccomanda di saggiare i controlli con regolarità come campioni sconosciuti per misurare la variabilità del saggio. La resa del saggio deve essere monitorata con tabelle di controllo qualità dei controlli. È buona pratica verificare visivamente il modello di curva selezionato dal computer. XVIII. SCHEMA DEL DOSAGGIO Tampone di Incubazione Calibratore ( 5) Campioni, controlli Coniugato antiil4hrp CALIBRATORE (µl) 5 CAMPIONI CONTROLLI (µl) 5 XV. INTERVALLI DI RIFERIMENTO Questi valori vengono dati solo come guida; ogni laboratorio deve stabilire i propri intervalli normali di valori. Come riferimento, i risultati di 4 campioni di siero appartenenti a soggetti apparentemente sani con bassi livelli di PCR, hanno mostrato valori interni al range 38,7 pg/ml. In 29 campioni, si sono ottenuti valori inferiori al limite di rilevazione del test (<1,2 pg/ml). XVI. PRECAUZIONI PER L USO Sicurezza Il kit è solo per uso diagnostico in vitro. I reattivi di origine umana presenti nel kit sono stati dosati con metodi approvati da organismi di controllo europei o da FDA e si sono rivelati negativi per HBs Ag, anti HCV, anti HIV1 e anti HIV2. Non sono disponibili metodi in grado di offrire la certezza assoluta che derivati da sangue umano non possano provocare epatiti, AIDS o trasmettere altre infezioni. Manipolare questi reattivi o i campioni di siero o plasma secondo le procedure di sicurezza vigenti. Tutti i prodotti di origine animale o loro derivati provengono da animali sani. I componenti di origine bovina provengono da paesi dove non sono stati segnalati casi di BSE. E comunque necessario considerare i prodotti di origine animale come potenziali fonti di infezioni. Evitare qualsiasi contatto della cute con tutti i reagenti, la Soluzione di Arresto contiene H 2SO 4, la soluzione cromogena contiene TMB in Dimetilformammide, il tampone del substrato contiene H 2O 2. In caso di contatto, lavare abbondamentemente con acqua. Non fumare, bere, mangiare o applicare cosmetici nell area di lavoro. Non pipettare i reattivi con pipette a bocca. Utilizzare indumenti protettivi e guanti monouso. Incubare per 2 ore a temperatura ambiente in agitazione continua a 7 rpm. Aspirare il contenuto di ogni pozzetto. Lavare 3 volte con 4 µl di soluzione di lavaggio e aspirare. Soluzione di Rivelazione Incubare per 3 minuti a temperatura ambiente in agitazione continua a 7 rpm. Soluzione di arresto 5 5 Leggere su un lettore per piastra da microtitolazione e registrare l assorbanza di ogni pozzetto a 45 nm (e 49 nm) rispetto a 63 (o 65 nm) Numero di catalogo di DIAsource: KAP1281 P.I. numero: 17593/it Revisione numero: 955/1 Data di revisione : 955

19 el Διαβάστε ολόκληρο το πρωτόκολλο πριν από τη χρήση. IL4EASIA Ι. ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Ανοσοενζυμομετρικός προσδιορισμός για την in vitro ποσοτική μέτρηση της ανθρώπινης ιντερλευκίνης4 (IL4) σε ορό. II. ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ A. Εμπορική ονομασία: Κιτ IL4EASIA της DIAsource B. Αριθμός καταλόγου: KAP1281: 96 προσδιορισμοί Γ. Κατασκευάζεται από την: DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8, B14 Nivelles, Belgium. Για τεχνική βοήθεια ή πληροφορίες σχετικά με παραγγελίες επικοινωνήστε στα: Τηλ.: +32 () Φαξ: +32 () III. ΚΛΙΝΙΚΟ ΥΠΟΒΑΘΡΟ A. Βιολογική δράση Η ιντερλευκίνη4 (IL4) είναι μία γλυκοπρωτεΐνη μεγέθους 1519 kda, η οποία παράγεται από CD4+ Tλεμφοκύτταρα του υπότυπου ΤΗ2 και πρόδρομα κύτταρα μαστοκυττάρων. Η IL4 καταστέλλει την παραγωγή IFNγ από τα CD4+ Tλεμφοκύτταρα του υπότυπου TH1, επάγει τον πολλαπλασιασμό θυμοκυττάρων και ώριμων Τλεμφοκυττάρων, διακόπτει όμως τον επαγόμενο από την IL2 πολλαπλασιασμό περιφερικών Tκυττάρων καθώς και την παραγωγή εξαρτώμενων από την IL2 LAK κυττάρων. Στα Βκύτταρα, η IL4 παρουσιάζει δράση αυξητικού παράγοντα, η οποία μεσολαβείται από την παραγωγή διαλυτού CD23, και δράση διαφοροποίησης η οποία οδηγεί σε παραγωγή IgE, IgM και IgG1. Στα μονοκύτταρα, η IL4 επάγει αύξηση του αριθμού των αντιγόνων ιστοσυμβατότητας τάξης II και των υποδοχέων CD23, αναστέλλει ωστόσο την έκφραση των IgG υποδοχέων. Η IL4 διακόπτει την παραγωγή των IL1, IL6, TNFα, PGE2, G CSF και διεγείρει την παραγωγή MCSF και GCSF από τα μονοκύτταρα. Η IL4 δρα επίσης στα ηωσινόφιλα, ενισχύοντας την έκφραση των CD23 υποδοχέων και αναστέλλοντας την έκφραση των IgG υποδοχέων. Μέσω της πλειοτροπικής της δράσης, η IL4 αποτελεί μία κυτταροκίνηκλειδί στο δίκτυο των κυτταροκινών έχοντας αντιφλεγμονώδεις ιδιότητες και πιθανή ανάμιξη σε μηχανισμούς αλλεργίας.

20 IV. ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ Ο προσδιορισμός IL4EASIA της DIAsource είναι ένας ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός ενισχυμένης ευαισθησίας, στερεής φάσης, ο οποίος εκτελείται σε πλάκες μικροτιτλοδότησης. Ο προσδιορισμός χρησιμοποιεί μονοκλωνικά αντισώματα (Ms) που κατευθύνονται εναντίον διακριτών επιτόπων της IL4. Οι βαθμονομητές και τα δείγματα αντιδρούν με το μονοκλωνικό αντίσωμα σύλληψης (M 1) που είναι επιστρωμένο στην υποδοχή της πλάκας μικροτιτλοδότησης και με ένα μονοκλωνικό αντίσωμα (M 2) σημασμένο με ραφανιδική υπεροξειδάση (HRP). Μετά από μια περίοδο επώασης που επιτρέπει το σχηματισμό ενός σάντουιτς: επιστρωμένο M 1 ανθρώπινη IL4 M 2 HRP, η πλάκα μικροτιτλοδότησης υποβάλλεται σε πλύση για να απομακρυνθεί το σημασμένο με ένζυμο αδέσμευτο αντίσωμα. Το σημασμένο με ένζυμο δεσμευμένο αντίσωμα μετράται μέσω μιας χρωμογόνου αντίδρασης. Προστίθεται και επωάζεται χρωμογόνο διάλυμα (ΤΜΒ έτοιμο για χρήση). Η αντίδραση σταματά με την προσθήκη ανασχετικού διαλύματος και στη συνέχεια γίνεται ανάγνωση της πλάκας μικροτιτλοδότησης στο κατάλληλο μήκος κύματος. Η ποσότητα μετατροπής του υποστρώματος καθορίζεται χρωματομετρικά μετρώντας την απορρόφηση, η οποία είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση της IL4. Παριστάνεται γραφικά μια καμπύλη βαθμονόμησης και προσδιορίζεται η συγκέντρωση της IL4 στα δείγματα με αναγωγή από την καμπύλη βαθμονόμησης. Η χρήση του συστήματος ανάγνωσης EASIA (γραμμικότητα έως 3 μονάδες OD) και μιας πολύπλοκης μεθόδου αναγωγής δεδομένων (αναγωγή πολυχρωματικών δεδομένων) έχουν ως αποτέλεσμα υψηλή ευαισθησία στο χαμηλό πεδίο τιμών και στο εκτεταμένο πεδίο τιμών βαθμονόμησης. V. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Σύζευγμα: Αντι IL4 (μονοκλωνικά αντισώματα) σημασμένα με HRP σε ρυθμιστικό διάλυμα TRIS Maleate με βόεια ορολευκωματίνη και θυμόλη Μηδενικός βαθμονομητής: ανθρώπινος ορός με βενζαμιδίνη και θυμόλη Βαθμονομητής N = 1 έως 5 (δείτε τις ακριβείς τιμές πάνω στις ετικέτες των φιαλιδίων) σε ανθρώπινο ορό με βενζαμιδίνη και θυμόλη Διάλυμα αραίωσης δειγμάτων: ανθρώπινος ορός με βενζαμιδίνη και θυμόλη Ρυθμιστικό διάλυμα επώασης: Ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών με βόεια ορολευκωματίνη και θυμόλη WASH Πλάκα μικροτιτλοδότησης με 96 υποδοχές επιστρωμένες με αντι IL4 (μονοκλωνικά αντισώματα) CAL CAL DIL SOLN Διάλυμα πλύσης (TrisHCl) CONTROL Οροί ελέγχου N = 1 ή 2 σε ανθρώπινο ορό με θυμόλη CHROM INC TMB HRP Χρωμογόνος TMB (τετραμεθυλβενζυδίνη) σε διμεθυλφορμαμίδη N SPE CONC N CONC 96 υποδοχές 1 φιαλίδιο 6 ml 1 φιαλίδιο λυοφιλοποιημένο 5 φιαλίδια λυοφιλοποιημένο 2φιαλίδια λυοφιλοποιημένο 1 φιαλίδιο 11ml 1 φιαλίδιο 1 ml 2 φιαλίδια λυοφιλοποιημένο 1 φιαλίδιο 1 ml Αντιδραστήρια Κιτ 96 προσδιορισμών Χρωματικός κωδικός μπλε κόκκινο κίτρινο κίτρινο μαύρο μαύρο καφέ ασημί Ανασύσταση Έτοιμο για χρήση Έτοιμο για χρήση Προσθέστε 5 ml απεσταγμένου νερού Προσθέστε 1 ml απεσταγμένου νερού Προσθέστε απεσταγμένου νερού (δείτε τις ακριβείς τιμές πάνω στις ετικέτες των φιαλιδίων) Έτοιμο για χρήση Αραιώστε x με απεσταγμένο νερό (χρησιμοποιήστε μαγνητικό αναδευτήρα). Προσθέστε 1 ml απεσταγμένου νερού πράσινο Αραιώστε,2 ml σε 1 φιαλίδιο ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος Ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος: H 2O 2 σε ρυθμιστικό διάλυμα οξικών/κιτρικών Ανασχετικό αντιδραστήριο: H 2SO 4 1,8N 3 φιαλίδια 21 ml 1 φιαλίδιο 6 ml λευκό μαύρο Έτοιμο για χρήση Έτοιμο για χρήση Σημείωση: 1. Χρησιμοποιήστε διάλυμα αραίωσης δειγμάτων για αραίωση των δειγμάτων pg του παρασκευάσματος βαθμονομητή είναι ισοδύναμο με 1 mu του NIBSC 1 ο IS 88/656. VI. ΑΝΑΛΩΣΙΜΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ Τα ακόλουθα υλικά απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται στο κιτ: 1. Απεσταγμένο νερό υψηλής ποιότητας 2. Πιπέτες για διανομή: 5 μl, μl, μl, 1 ml και 1 ml (συνιστάται η χρήση πιπετών ακριβείας με αναλώσιμα πλαστικά ρύγχη) 3. Αναμείκτης στροβιλισμού 4. Μαγνητικός αναδευτήρας 5. Οριζόντια συσκευή ανάδευσης πλακών μικροτιτλοδότησης με δυνατότητα 7 rpm ± rpm 6. Συσκευή πλύσης για πλάκες μικροτιτλοδότησης 7. Συσκευή ανάγνωσης πλακών μικροτιτλοδότησης με δυνατότητα ανάγνωσης στα 45 nm, 49 nm και 65 nm (σε περίπτωση πολυχρωματικής ανάγνωσης) ή με δυνατότητα ανάγνωσης στα 45 nm και 65 nm (διχρωματική ανάγνωση) 8. Προαιρετικός εξοπλισμός: Ο εξοπλισμός ELISAAID που είναι απαραίτητος για την πολυχρωματική ανάγνωση (δείτε την παράγραφο XI.A.) μπορεί να αγοραστεί από την Robert Maciels Associates, Inc. Mass USA. VII. ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟΥ A. αθμονομητές: Ανασυστήστε το μηδενικό βαθμονομητή με 5 ml απεσταγμένου νερού και άλλους βαθμονομητές με 1 ml απεσταγμένου νερού. B. Οροί ελέγχου: Ανασυστήστε τους ορούς ελέγχου με 1 ml απεσταγμένου νερού. Γ. SUB STOP SOLN Διάλυμα αραίωσης δειγμάτων: Ανασυστήστε το διάλυμα αραίωσης δειγμάτων στον όγκο που καθορίζεται στην ετικέτα του φιαλιδίου με απεσταγμένο νερό. Δ. Διάλυμα πλύσης εργασίας: Προετοιμάστε επαρκή όγκο διαλύματος πλύσης εργασίας με προσθήκη 199 όγκων απεσταγμένου νερού σε 1 όγκο διαλύματος πλύσης (x). Χρησιμοποιήστε μαγνητικό αναδευτήρα για την ομογενοποίηση. Απορρίψτε το μη χρησιμοποιημένο διάλυμα πλύσης εργασίας στο τέλος της ημέρας. E. Αποκαλυπτικό διάλυμα: Διανείμετε με πιπέτα,2 ml της χρωμογόνου TMB σε ένα από τα φιαλίδια του ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος (H 2O 2 σε ρυθμιστικό διάλυμα οξικών/κιτρικών). Συνιστάται αυτοσχέδια προετοιμασία. VIII. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ ΛΗΞΗΣ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Πριν από το άνοιγμα ή την ανασύσταση, όλα τα συστατικά του κιτ παραμένουν σταθερά έως την ημερομηνία λήξης, η οποία αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου, εφόσον διατηρούνται σε θερμοκρασία 2 έως 8 C. Οι μη χρησιμοποιημένες ταινίες πρέπει να φυλάσσονται στους 28 C, σε σφραγισμένη σακούλα που περιέχει αποξηραντικό παράγοντα, μέχρι την ημερομηνία λήξης. Μετά την ανασύσταση, οι βαθμονομητές, οι οροί ελέγχου και το διάλυμα αραίωσης δειγμάτων παραμένουν σταθερά επί 4 ημέρες στους 28 C. Για μεγαλύτερες περιόδους φύλαξης, θα πρέπει να δημιουργηθούν κλάσματα/δόσεις μίας χρήσης και να διατηρηθούν σε θερμοκρασία C επί 2 μήνες το μέγιστο. Αποφύγετε τους επανειλημμένους κύκλους απόψυξηςκατάψυξης. Το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης είναι σταθερό σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την ημερομηνία λήξης. Φρέσκο, παρασκευασμένο διάλυμα πλύσης εργασίας θα πρέπει να χρησιμοποιείται την ίδια ημέρα. Μετά την πρώτη χρήση του, το σύζευγμα παραμένει σταθερό έως την ημερομηνία λήξης, εφόσον διατηρείται στο αρχικό, ερμητικά κλειστό φιαλίδιο σε θερμοκρασία 2 έως 8 C. Το φρέσκο παρασκευασμένο αποκαλυπτικό διάλυμα είναι σταθερό, πριν τη χρήση, για 15 λεπτά το μέγιστο σε θερμοκρασία δωματίου και πρέπει να απορρίπτεται στη συνέχεια. Τυχόν μεταβολές της φυσικής εμφάνισης των αντιδραστηρίων του κιτ ενδέχεται να υποδηλώνουν αστάθεια ή αλλοίωση.

TNF-α- EASIA KAP1751

TNF-α- EASIA KAP1751 TFα EASIA KAP1751 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B134 Louvainlaeuve Belgium : 11221/3 en Read entire protocol before use. TFαEASIA I. ITEDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro quantitative

Διαβάστε περισσότερα

IL-2-EASIA KAP1241. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium

IL-2-EASIA KAP1241. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium IL2EASIA KAP1241 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B1348 LouvainlaNeuve Belgium : 11221/1 en Read entire protocol before use. IL2EASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro

Διαβάστε περισσότερα

IL-2-EASIA KAP1241. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium

IL-2-EASIA KAP1241. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium IL2EASIA KAP1241 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8 B14 Nivelles Belgium : 955/1 en Read entire protocol before use. IL2EASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro quantitative

Διαβάστε περισσότερα

Mouse Apolipoprotein A1 (Apo-A1) ELISA Kit. MyBioSource.com

Mouse Apolipoprotein A1 (Apo-A1) ELISA Kit. MyBioSource.com Mouse Apolipoprotein A1 (Apo-A1) ELISA Kit Catalog Number. For the quantitative determination of mouse apolipoprotein A1 (Apo-A1) concentrations in serum, plasma, cell culture supernates, tissue homogenates,

Διαβάστε περισσότερα

Approximation of distance between locations on earth given by latitude and longitude

Approximation of distance between locations on earth given by latitude and longitude Approximation of distance between locations on earth given by latitude and longitude Jan Behrens 2012-12-31 In this paper we shall provide a method to approximate distances between two points on earth

Διαβάστε περισσότερα

IL-1ß-EASIA KAP1211. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium

IL-1ß-EASIA KAP1211. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium IL1ßEASIA KAP1211 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B138 LouvainlaNeuve Belgium : 110221/1 en Read entire protocol before use. IL1βEASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro

Διαβάστε περισσότερα

BD OptEIA ELISA Sets ELISA

BD OptEIA ELISA Sets ELISA BD OptEIA ELISA Sets ELISA BD OptEIA ELISA Sets ELISA CaptureDetection Detection 9620 170,000 ELISAEnzymed-Linked ImmunoSorbent Assay CaptureDetection BD OptEIA ELISA Set 2 BD OptEIA ELISA Set BD OptEIA

Διαβάστε περισσότερα

the total number of electrons passing through the lamp.

the total number of electrons passing through the lamp. 1. A 12 V 36 W lamp is lit to normal brightness using a 12 V car battery of negligible internal resistance. The lamp is switched on for one hour (3600 s). For the time of 1 hour, calculate (i) the energy

Διαβάστε περισσότερα

Math 6 SL Probability Distributions Practice Test Mark Scheme

Math 6 SL Probability Distributions Practice Test Mark Scheme Math 6 SL Probability Distributions Practice Test Mark Scheme. (a) Note: Award A for vertical line to right of mean, A for shading to right of their vertical line. AA N (b) evidence of recognizing symmetry

Διαβάστε περισσότερα

English PDFsharp is a.net library for creating and processing PDF documents 'on the fly'. The library is completely written in C# and based

English PDFsharp is a.net library for creating and processing PDF documents 'on the fly'. The library is completely written in C# and based English PDFsharp is a.net library for creating and processing PDF documents 'on the fly'. The library is completely written in C# and based exclusively on safe, managed code. PDFsharp offers two powerful

Διαβάστε περισσότερα

English PDFsharp is a.net library for creating and processing PDF documents 'on the fly'. The library is completely written in C# and based

English PDFsharp is a.net library for creating and processing PDF documents 'on the fly'. The library is completely written in C# and based English PDFsharp is a.net library for creating and processing PDF documents 'on the fly'. The library is completely written in C# and based exclusively on safe, managed code. PDFsharp offers two powerful

Διαβάστε περισσότερα

Section 8.3 Trigonometric Equations

Section 8.3 Trigonometric Equations 99 Section 8. Trigonometric Equations Objective 1: Solve Equations Involving One Trigonometric Function. In this section and the next, we will exple how to solving equations involving trigonometric functions.

Διαβάστε περισσότερα

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΣΤΗ ΣΤΑΤΙΣΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΕΛΕΝΑ ΦΛΟΚΑ Επίκουρος Καθηγήτρια Τµήµα Φυσικής, Τοµέας Φυσικής Περιβάλλοντος- Μετεωρολογίας ΓΕΝΙΚΟΙ ΟΡΙΣΜΟΙ Πληθυσµός Σύνολο ατόµων ή αντικειµένων στα οποία αναφέρονται

Διαβάστε περισσότερα

CHAPTER 25 SOLVING EQUATIONS BY ITERATIVE METHODS

CHAPTER 25 SOLVING EQUATIONS BY ITERATIVE METHODS CHAPTER 5 SOLVING EQUATIONS BY ITERATIVE METHODS EXERCISE 104 Page 8 1. Find the positive root of the equation x + 3x 5 = 0, correct to 3 significant figures, using the method of bisection. Let f(x) =

Διαβάστε περισσότερα

La Déduction naturelle

La Déduction naturelle La Déduction naturelle Pierre Lescanne 14 février 2007 13 : 54 Qu est-ce que la déduction naturelle? En déduction naturelle, on raisonne avec des hypothèses. Qu est-ce que la déduction naturelle? En déduction

Διαβάστε περισσότερα

25OH Vitamin D Total ELISA KAP1971

25OH Vitamin D Total ELISA KAP1971 25OH Vitamin D Total ELISA KAP1971 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium : 14512/2 en US: For in-vitro diagnostic use only. I. INTENDED USE Read entire protocol

Διαβάστε περισσότερα

IL-10-EASIA KAP1321. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium

IL-10-EASIA KAP1321. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium IL-10-EASIA KAP1321 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium : 110221/1 en Read entire protocol before use. IL-10-EASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay

Διαβάστε περισσότερα

EE512: Error Control Coding

EE512: Error Control Coding EE512: Error Control Coding Solution for Assignment on Finite Fields February 16, 2007 1. (a) Addition and Multiplication tables for GF (5) and GF (7) are shown in Tables 1 and 2. + 0 1 2 3 4 0 0 1 2 3

Διαβάστε περισσότερα

CHORUS SYPHILIS SCREEN RECOMBINANT. REF 81100 (36 tests)

CHORUS SYPHILIS SCREEN RECOMBINANT. REF 81100 (36 tests) /GK/ 1/15 CHORUS SYPHILIS SCRE RECOMBINANT REF 81100 (36 tests) Fabriqué par/κατασκευάζεται από/manufactured by: DISE Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) - Italy /GK/ 2/15

Διαβάστε περισσότερα

Solution Series 9. i=1 x i and i=1 x i.

Solution Series 9. i=1 x i and i=1 x i. Lecturer: Prof. Dr. Mete SONER Coordinator: Yilin WANG Solution Series 9 Q1. Let α, β >, the p.d.f. of a beta distribution with parameters α and β is { Γ(α+β) Γ(α)Γ(β) f(x α, β) xα 1 (1 x) β 1 for < x

Διαβάστε περισσότερα

5.4 The Poisson Distribution.

5.4 The Poisson Distribution. The worst thing you can do about a situation is nothing. Sr. O Shea Jackson 5.4 The Poisson Distribution. Description of the Poisson Distribution Discrete probability distribution. The random variable

Διαβάστε περισσότερα

Mean bond enthalpy Standard enthalpy of formation Bond N H N N N N H O O O

Mean bond enthalpy Standard enthalpy of formation Bond N H N N N N H O O O Q1. (a) Explain the meaning of the terms mean bond enthalpy and standard enthalpy of formation. Mean bond enthalpy... Standard enthalpy of formation... (5) (b) Some mean bond enthalpies are given below.

Διαβάστε περισσότερα

Section 9.2 Polar Equations and Graphs

Section 9.2 Polar Equations and Graphs 180 Section 9. Polar Equations and Graphs In this section, we will be graphing polar equations on a polar grid. In the first few examples, we will write the polar equation in rectangular form to help identify

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΓΕΩΠΟΝΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΕΠΙΣΤΗΜΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ. Πτυχιακή εργασία

ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΓΕΩΠΟΝΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΕΠΙΣΤΗΜΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ. Πτυχιακή εργασία ΤΕΧΝΟΛΟΓΙΚΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΥΠΡΟΥ ΣΧΟΛΗ ΓΕΩΠΟΝΙΚΩΝ ΕΠΙΣΤΗΜΩΝ ΒΙΟΤΕΧΝΟΛΟΓΙΑΣ ΚΑΙ ΕΠΙΣΤΗΜΗΣ ΤΡΟΦΙΜΩΝ Πτυχιακή εργασία ΜΕΛΕΤΗ ΠΟΛΥΦΑΙΝΟΛΩΝ ΚΑΙ ΑΝΤΙΟΞΕΙΔΩΤΙΚΗΣ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑΣ ΣΟΚΟΛΑΤΑΣ Αναστασία Σιάντωνα Λεμεσός

Διαβάστε περισσότερα

3 Lösungen zu Kapitel 3

3 Lösungen zu Kapitel 3 3 Lösungen zu Kapitel 3 31 Lösungen der Aufgaben zu Abschnitt 31 311 Lösung Die Abbildung D : { R 4 R 4 R 4 R 4 R, a 1, a 2, a 3, a 4 ) D( a 1, a 2, a 3, a 4 ) definiere eine Determinantenform (auf R 4

Διαβάστε περισσότερα

Jesse Maassen and Mark Lundstrom Purdue University November 25, 2013

Jesse Maassen and Mark Lundstrom Purdue University November 25, 2013 Notes on Average Scattering imes and Hall Factors Jesse Maassen and Mar Lundstrom Purdue University November 5, 13 I. Introduction 1 II. Solution of the BE 1 III. Exercises: Woring out average scattering

Διαβάστε περισσότερα

Απόκριση σε Μοναδιαία Ωστική Δύναμη (Unit Impulse) Απόκριση σε Δυνάμεις Αυθαίρετα Μεταβαλλόμενες με το Χρόνο. Απόστολος Σ.

Απόκριση σε Μοναδιαία Ωστική Δύναμη (Unit Impulse) Απόκριση σε Δυνάμεις Αυθαίρετα Μεταβαλλόμενες με το Χρόνο. Απόστολος Σ. Απόκριση σε Δυνάμεις Αυθαίρετα Μεταβαλλόμενες με το Χρόνο The time integral of a force is referred to as impulse, is determined by and is obtained from: Newton s 2 nd Law of motion states that the action

Διαβάστε περισσότερα

Daewoo Technopark A-403, Dodang-dong, Wonmi-gu, Bucheon-city, Gyeonggido, Korea LM-80 Test Report

Daewoo Technopark A-403, Dodang-dong, Wonmi-gu, Bucheon-city, Gyeonggido, Korea LM-80 Test Report LM-80 Test Report Approved Method: Measuring Lumen Maintenance of LED Light Sources Project Number: KILT1212-U00216 Date: September 17 th, 2013 Requested by: Dongbu LED Co., Ltd 90-1, Bongmyeong-Ri, Namsa-Myeon,

Διαβάστε περισσότερα

1) Formulation of the Problem as a Linear Programming Model

1) Formulation of the Problem as a Linear Programming Model 1) Formulation of the Problem as a Linear Programming Model Let xi = the amount of money invested in each of the potential investments in, where (i=1,2, ) x1 = the amount of money invested in Savings Account

Διαβάστε περισσότερα

Ε Κ Θ Ε Σ Η Δ Ο Κ Ι Μ Ω Ν

Ε Κ Θ Ε Σ Η Δ Ο Κ Ι Μ Ω Ν Αριθμός έκθεζης δοκιμών / Test report number Σειριακός αριθμός οργάνοσ / Instrument serial No T Πελάηης / Customer TOTAL Q Επγαζηήπια Διακπιβώζεων A.E. Κοπγιαλενίος 20, Τ.Κ. 11526 Αθήνα 20 Korgialeniou

Διαβάστε περισσότερα

ΚΥΠΡΙΑΚΗ ΕΤΑΙΡΕΙΑ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ CYPRUS COMPUTER SOCIETY ΠΑΓΚΥΠΡΙΟΣ ΜΑΘΗΤΙΚΟΣ ΔΙΑΓΩΝΙΣΜΟΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ 19/5/2007

ΚΥΠΡΙΑΚΗ ΕΤΑΙΡΕΙΑ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ CYPRUS COMPUTER SOCIETY ΠΑΓΚΥΠΡΙΟΣ ΜΑΘΗΤΙΚΟΣ ΔΙΑΓΩΝΙΣΜΟΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ 19/5/2007 Οδηγίες: Να απαντηθούν όλες οι ερωτήσεις. Αν κάπου κάνετε κάποιες υποθέσεις να αναφερθούν στη σχετική ερώτηση. Όλα τα αρχεία που αναφέρονται στα προβλήματα βρίσκονται στον ίδιο φάκελο με το εκτελέσιμο

Διαβάστε περισσότερα

PARTIAL NOTES for 6.1 Trigonometric Identities

PARTIAL NOTES for 6.1 Trigonometric Identities PARTIAL NOTES for 6.1 Trigonometric Identities tanθ = sinθ cosθ cotθ = cosθ sinθ BASIC IDENTITIES cscθ = 1 sinθ secθ = 1 cosθ cotθ = 1 tanθ PYTHAGOREAN IDENTITIES sin θ + cos θ =1 tan θ +1= sec θ 1 + cot

Διαβάστε περισσότερα

HOMEWORK 4 = G. In order to plot the stress versus the stretch we define a normalized stretch:

HOMEWORK 4 = G. In order to plot the stress versus the stretch we define a normalized stretch: HOMEWORK 4 Problem a For the fast loading case, we want to derive the relationship between P zz and λ z. We know that the nominal stress is expressed as: P zz = ψ λ z where λ z = λ λ z. Therefore, applying

Διαβάστε περισσότερα

Potential Dividers. 46 minutes. 46 marks. Page 1 of 11

Potential Dividers. 46 minutes. 46 marks. Page 1 of 11 Potential Dividers 46 minutes 46 marks Page 1 of 11 Q1. In the circuit shown in the figure below, the battery, of negligible internal resistance, has an emf of 30 V. The pd across the lamp is 6.0 V and

Διαβάστε περισσότερα

INS-EASIA KAP1251. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium

INS-EASIA KAP1251. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium INS-EASIA KAP1251 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium : 120308/1 en Read entire protocol before use. INS-EASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for

Διαβάστε περισσότερα

MSM Men who have Sex with Men HIV -

MSM Men who have Sex with Men HIV - ,**, The Japanese Society for AIDS Research The Journal of AIDS Research HIV,0 + + + + +,,, +, : HIV : +322,*** HIV,0,, :., n,0,,. + 2 2, CD. +3-ml n,, AIDS 3 ARC 3 +* 1. A, MSM Men who have Sex with Men

Διαβάστε περισσότερα

The challenges of non-stable predicates

The challenges of non-stable predicates The challenges of non-stable predicates Consider a non-stable predicate Φ encoding, say, a safety property. We want to determine whether Φ holds for our program. The challenges of non-stable predicates

Διαβάστε περισσότερα

[1] P Q. Fig. 3.1

[1] P Q. Fig. 3.1 1 (a) Define resistance....... [1] (b) The smallest conductor within a computer processing chip can be represented as a rectangular block that is one atom high, four atoms wide and twenty atoms long. One

Διαβάστε περισσότερα

«ΕΠΙΔΙΩΚΟΝΤΑΣ ΤΗΝ ΑΡΙΣΤΕΙΑ ΣΤΗΝ ΚΙΝΗΤΙΚΟΤΗΤΑ ERASMUS» 29 ΝΟΕΜΒΡΙΟΥ 2013

«ΕΠΙΔΙΩΚΟΝΤΑΣ ΤΗΝ ΑΡΙΣΤΕΙΑ ΣΤΗΝ ΚΙΝΗΤΙΚΟΤΗΤΑ ERASMUS» 29 ΝΟΕΜΒΡΙΟΥ 2013 ΗΜΕΡΙΔΑ ΤΗΣ ΕΘΝΙΚΗΣ ΜΟΝΑΔΑΣ / ΙΚΥ ΕΥΡΩΠΑΪΚΟ ΕΚΠΑΙΔΕΥΤΙΚΟ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΔΙΑ ΒΙΟΥ ΜΑΘΗΣΗ LLP ERASMUS «ΕΠΙΔΙΩΚΟΝΤΑΣ ΤΗΝ ΑΡΙΣΤΕΙΑ ΣΤΗΝ ΚΙΝΗΤΙΚΟΤΗΤΑ ERASMUS» 29 ΝΟΕΜΒΡΙΟΥ 2013 Erasmus + Θέματα ακαδημαϊκής αναγνώρισης

Διαβάστε περισσότερα

RENIN-IRMA KIP1531. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium

RENIN-IRMA KIP1531. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium RENINIRMA KIP1531 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B1348 LouvainlaNeuve Belgium : 110218/1 en Read entire protocol before use. RENINIRMA I. INTENDED USE Immunoradiometric assay kit for the

Διαβάστε περισσότερα

Code Breaker. TEACHER s NOTES

Code Breaker. TEACHER s NOTES TEACHER s NOTES Time: 50 minutes Learning Outcomes: To relate the genetic code to the assembly of proteins To summarize factors that lead to different types of mutations To distinguish among positive,

Διαβάστε περισσότερα

Instruction Execution Times

Instruction Execution Times 1 C Execution Times InThisAppendix... Introduction DL330 Execution Times DL330P Execution Times DL340 Execution Times C-2 Execution Times Introduction Data Registers This appendix contains several tables

Διαβάστε περισσότερα

Other Test Constructions: Likelihood Ratio & Bayes Tests

Other Test Constructions: Likelihood Ratio & Bayes Tests Other Test Constructions: Likelihood Ratio & Bayes Tests Side-Note: So far we have seen a few approaches for creating tests such as Neyman-Pearson Lemma ( most powerful tests of H 0 : θ = θ 0 vs H 1 :

Διαβάστε περισσότερα

Homework 3 Solutions

Homework 3 Solutions Homework 3 Solutions Igor Yanovsky (Math 151A TA) Problem 1: Compute the absolute error and relative error in approximations of p by p. (Use calculator!) a) p π, p 22/7; b) p π, p 3.141. Solution: For

Διαβάστε περισσότερα

Nuclear Physics 5. Name: Date: 8 (1)

Nuclear Physics 5. Name: Date: 8 (1) Name: Date: Nuclear Physics 5. A sample of radioactive carbon-4 decays into a stable isotope of nitrogen. As the carbon-4 decays, the rate at which the amount of nitrogen is produced A. decreases linearly

Διαβάστε περισσότερα

Biodiesel quality and EN 14214:2012

Biodiesel quality and EN 14214:2012 3η Ενότητα: «Αγορά Βιοκαυσίμων στην Ελλάδα: Τάσεις και Προοπτικές» Biodiesel quality and EN 14214:2012 Dr. Hendrik Stein Pilot Plant Manager, ASG Analytik Content Introduction Development of the Biodiesel

Διαβάστε περισσότερα

Main source: "Discrete-time systems and computer control" by Α. ΣΚΟΔΡΑΣ ΨΗΦΙΑΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΔΙΑΛΕΞΗ 4 ΔΙΑΦΑΝΕΙΑ 1

Main source: Discrete-time systems and computer control by Α. ΣΚΟΔΡΑΣ ΨΗΦΙΑΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΔΙΑΛΕΞΗ 4 ΔΙΑΦΑΝΕΙΑ 1 Main source: "Discrete-time systems and computer control" by Α. ΣΚΟΔΡΑΣ ΨΗΦΙΑΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΔΙΑΛΕΞΗ 4 ΔΙΑΦΑΝΕΙΑ 1 A Brief History of Sampling Research 1915 - Edmund Taylor Whittaker (1873-1956) devised a

Διαβάστε περισσότερα

Strain gauge and rosettes

Strain gauge and rosettes Strain gauge and rosettes Introduction A strain gauge is a device which is used to measure strain (deformation) on an object subjected to forces. Strain can be measured using various types of devices classified

Διαβάστε περισσότερα

ANSWERSHEET (TOPIC = DIFFERENTIAL CALCULUS) COLLECTION #2. h 0 h h 0 h h 0 ( ) g k = g 0 + g 1 + g g 2009 =?

ANSWERSHEET (TOPIC = DIFFERENTIAL CALCULUS) COLLECTION #2. h 0 h h 0 h h 0 ( ) g k = g 0 + g 1 + g g 2009 =? Teko Classes IITJEE/AIEEE Maths by SUHAAG SIR, Bhopal, Ph (0755) 3 00 000 www.tekoclasses.com ANSWERSHEET (TOPIC DIFFERENTIAL CALCULUS) COLLECTION # Question Type A.Single Correct Type Q. (A) Sol least

Διαβάστε περισσότερα

υγεία των νοσηλευτών που συστηματικά εμπλέκονται στην παρασκευή και χορήγηση τους.

υγεία των νοσηλευτών που συστηματικά εμπλέκονται στην παρασκευή και χορήγηση τους. ΠΕΡΙΛΗΨΗ Εισαγωγή: Τα χημειοθεραπευτικά φάρμακα έχουν αποδειχθεί οτι θέτουν σε κίνδυνο την υγεία των νοσηλευτών που συστηματικά εμπλέκονται στην παρασκευή και χορήγηση τους. Σκοπός: Σκοπός της παρούσας

Διαβάστε περισσότερα

Votre système de traite vous parle, écoutez-le!

Votre système de traite vous parle, écoutez-le! Le jeudi 28 octobre 2010 Best Western Hôtel Universel, Drummondville Votre système de traite vous parle, écoutez-le! Bruno GARON Conférence préparée avec la collaboration de : Martine LABONTÉ Note : Cette

Διαβάστε περισσότερα

ΑΚΑ ΗΜΙΑ ΕΜΠΟΡΙΚΟΥ ΝΑΥΤΙΚΟΥ ΜΑΚΕ ΟΝΙΑΣ ΣΧΟΛΗ ΜΗΧΑΝΙΚΩΝ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ

ΑΚΑ ΗΜΙΑ ΕΜΠΟΡΙΚΟΥ ΝΑΥΤΙΚΟΥ ΜΑΚΕ ΟΝΙΑΣ ΣΧΟΛΗ ΜΗΧΑΝΙΚΩΝ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΑΚΑ ΗΜΙΑ ΕΜΠΟΡΙΚΟΥ ΝΑΥΤΙΚΟΥ ΜΑΚΕ ΟΝΙΑΣ ΣΧΟΛΗ ΜΗΧΑΝΙΚΩΝ ΠΤΥΧΙΑΚΗ ΕΡΓΑΣΙΑ ΘΕΜΑ :ΤΥΠΟΙ ΑΕΡΟΣΥΜΠΙΕΣΤΩΝ ΚΑΙ ΤΡΟΠΟΙ ΛΕΙΤΟΥΡΓΙΑΣ ΣΠΟΥ ΑΣΤΡΙΑ: ΕΥΘΥΜΙΑ ΟΥ ΣΩΣΑΝΝΑ ΕΠΙΒΛΕΠΩΝ ΚΑΘΗΓΗΤΗΣ : ΓΟΥΛΟΠΟΥΛΟΣ ΑΘΑΝΑΣΙΟΣ 1 ΑΚΑ

Διαβάστε περισσότερα

k A = [k, k]( )[a 1, a 2 ] = [ka 1,ka 2 ] 4For the division of two intervals of confidence in R +

k A = [k, k]( )[a 1, a 2 ] = [ka 1,ka 2 ] 4For the division of two intervals of confidence in R + Chapter 3. Fuzzy Arithmetic 3- Fuzzy arithmetic: ~Addition(+) and subtraction (-): Let A = [a and B = [b, b in R If x [a and y [b, b than x+y [a +b +b Symbolically,we write A(+)B = [a (+)[b, b = [a +b

Διαβάστε περισσότερα

COURBES EN POLAIRE. I - Définition

COURBES EN POLAIRE. I - Définition Y I - Définition COURBES EN POLAIRE On dit qu une courbe Γ admet l équation polaire ρ=f (θ), si et seulement si Γ est l ensemble des points M du plan tels que : OM= ρ u = f(θ) u(θ) Γ peut être considérée

Διαβάστε περισσότερα

CHORUS. EPSTEIN-BARR EARLY ANTIGEN IgG REF 81058 REF 81058/12

CHORUS. EPSTEIN-BARR EARLY ANTIGEN IgG REF 81058 REF 81058/12 /GK/ 1/17 CHORUS EPSTEIN-BARR EARLY ANTIG IgG REF 81058 REF 81058/12 Fabriqué par/κατασκευάζεται από/manufactured by: DISE Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) - Italy Modifications

Διαβάστε περισσότερα

Cellular Physiology and Biochemistry

Cellular Physiology and Biochemistry Original Paper 2016 The Author(s). 2016 Published The Author(s) by S. Karger AG, Basel Published online: November 25, 2016 www.karger.com/cpb Published by S. Karger AG, Basel 486 www.karger.com/cpb Accepted:

Διαβάστε περισσότερα

Areas and Lengths in Polar Coordinates

Areas and Lengths in Polar Coordinates Kiryl Tsishchanka Areas and Lengths in Polar Coordinates In this section we develop the formula for the area of a region whose boundary is given by a polar equation. We need to use the formula for the

Διαβάστε περισσότερα

Hauptseminar Mathematische Logik Pcf Theorie (S2A2) Das Galvin-Hajnal Theorem

Hauptseminar Mathematische Logik Pcf Theorie (S2A2) Das Galvin-Hajnal Theorem Hauptseminar Mathematische Logik Pcf Theorie (S2A2) Das Galvin-Hajnal Theorem Jonas Fiege 21 Juli 2009 1 Theorem 1 (Galvin-Hajnal [1975]) Sei ℵ α eine singuläre, starke Limes-Kardinalzahl mit überabzählbarer

Διαβάστε περισσότερα

ST5224: Advanced Statistical Theory II

ST5224: Advanced Statistical Theory II ST5224: Advanced Statistical Theory II 2014/2015: Semester II Tutorial 7 1. Let X be a sample from a population P and consider testing hypotheses H 0 : P = P 0 versus H 1 : P = P 1, where P j is a known

Διαβάστε περισσότερα

6.1. Dirac Equation. Hamiltonian. Dirac Eq.

6.1. Dirac Equation. Hamiltonian. Dirac Eq. 6.1. Dirac Equation Ref: M.Kaku, Quantum Field Theory, Oxford Univ Press (1993) η μν = η μν = diag(1, -1, -1, -1) p 0 = p 0 p = p i = -p i p μ p μ = p 0 p 0 + p i p i = E c 2 - p 2 = (m c) 2 H = c p 2

Διαβάστε περισσότερα

Numerical Analysis FMN011

Numerical Analysis FMN011 Numerical Analysis FMN011 Carmen Arévalo Lund University carmen@maths.lth.se Lecture 12 Periodic data A function g has period P if g(x + P ) = g(x) Model: Trigonometric polynomial of order M T M (x) =

Διαβάστε περισσότερα

25OH Vitamin D Total ELISA KAP1971

25OH Vitamin D Total ELISA KAP1971 25OH Vitamin D Total ELISA KAP1971 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium : 170111/1 en US: For in-vitro diagnostic use only. I. INTENDED USE Read entire protocol

Διαβάστε περισσότερα

Copper-catalyzed formal O-H insertion reaction of α-diazo-1,3-dicarb- onyl compounds to carboxylic acids with the assistance of isocyanide

Copper-catalyzed formal O-H insertion reaction of α-diazo-1,3-dicarb- onyl compounds to carboxylic acids with the assistance of isocyanide Electronic Supplementary Material (ESI) for ChemComm. This journal is The Royal Society of Chemistry 2014 Copper-catalyzed formal O-H insertion reaction of α-diazo-1,3-dicarb- onyl compounds to carboxylic

Διαβάστε περισσότερα

Tipologie installative - Installation types Type d installation - Installationstypen Tipos de instalación - Τυπολογίες εγκατάστασης

Tipologie installative - Installation types Type d installation - Installationstypen Tipos de instalación - Τυπολογίες εγκατάστασης AMPADE MOOCROMATICHE VIMAR DIMMERABII A 0 V~ - VIMAR 0 V~ DIMMABE MOOCHROME AMP AMPE MOOCHROME VIMAR VARIATEUR 0 V~ - DIMMERFÄHIGE MOOCHROMATICHE AMPE VO VIMAR MIT 0 V~ ÁMPARA MOOCROMÁTICA VIMAR REGUABE

Διαβάστε περισσότερα

2 Composition. Invertible Mappings

2 Composition. Invertible Mappings Arkansas Tech University MATH 4033: Elementary Modern Algebra Dr. Marcel B. Finan Composition. Invertible Mappings In this section we discuss two procedures for creating new mappings from old ones, namely,

Διαβάστε περισσότερα

Second Order RLC Filters

Second Order RLC Filters ECEN 60 Circuits/Electronics Spring 007-0-07 P. Mathys Second Order RLC Filters RLC Lowpass Filter A passive RLC lowpass filter (LPF) circuit is shown in the following schematic. R L C v O (t) Using phasor

Διαβάστε περισσότερα

Areas and Lengths in Polar Coordinates

Areas and Lengths in Polar Coordinates Kiryl Tsishchanka Areas and Lengths in Polar Coordinates In this section we develop the formula for the area of a region whose boundary is given by a polar equation. We need to use the formula for the

Διαβάστε περισσότερα

DESIGN OF MACHINERY SOLUTION MANUAL h in h 4 0.

DESIGN OF MACHINERY SOLUTION MANUAL h in h 4 0. DESIGN OF MACHINERY SOLUTION MANUAL -7-1! PROBLEM -7 Statement: Design a double-dwell cam to move a follower from to 25 6, dwell for 12, fall 25 and dwell for the remader The total cycle must take 4 sec

Διαβάστε περισσότερα

Matrices and Determinants

Matrices and Determinants Matrices and Determinants SUBJECTIVE PROBLEMS: Q 1. For what value of k do the following system of equations possess a non-trivial (i.e., not all zero) solution over the set of rationals Q? x + ky + 3z

Διαβάστε περισσότερα

IL-6-EASIA-CE KAP1261

IL-6-EASIA-CE KAP1261 IL6EASIACE KAP1261 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B1348 LouvainlaNeuve Belgium : 110221/4 en Read entire protocol before use. IL6EASIA I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro

Διαβάστε περισσότερα

Example Sheet 3 Solutions

Example Sheet 3 Solutions Example Sheet 3 Solutions. i Regular Sturm-Liouville. ii Singular Sturm-Liouville mixed boundary conditions. iii Not Sturm-Liouville ODE is not in Sturm-Liouville form. iv Regular Sturm-Liouville note

Διαβάστε περισσότερα

ΚΥΠΡΙΑΚΗ ΕΤΑΙΡΕΙΑ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ CYPRUS COMPUTER SOCIETY ΠΑΓΚΥΠΡΙΟΣ ΜΑΘΗΤΙΚΟΣ ΔΙΑΓΩΝΙΣΜΟΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ 6/5/2006

ΚΥΠΡΙΑΚΗ ΕΤΑΙΡΕΙΑ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ CYPRUS COMPUTER SOCIETY ΠΑΓΚΥΠΡΙΟΣ ΜΑΘΗΤΙΚΟΣ ΔΙΑΓΩΝΙΣΜΟΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΚΗΣ 6/5/2006 Οδηγίες: Να απαντηθούν όλες οι ερωτήσεις. Ολοι οι αριθμοί που αναφέρονται σε όλα τα ερωτήματα είναι μικρότεροι το 1000 εκτός αν ορίζεται διαφορετικά στη διατύπωση του προβλήματος. Διάρκεια: 3,5 ώρες Καλή

Διαβάστε περισσότερα

FR/GK 1/13 ENZY-WELL. Epstein-Barr EBNA IgG. DIESSE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose, 10 53035 Monteriggioni (Siena) Italy REF 91057

FR/GK 1/13 ENZY-WELL. Epstein-Barr EBNA IgG. DIESSE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose, 10 53035 Monteriggioni (Siena) Italy REF 91057 /GK 1/13 ZYWELL EpsteinBarr EBNA IgG REF 91057 DISE Diagnostica Senese S.p.A. Via delle Rose, 10 53035 Monteriggioni (Siena) Italy IO09/022 IFU 91057 Ed. 10.07.2014 2/13 INSTRUCTIONS POUR L UTILISATION

Διαβάστε περισσότερα

ΙΕΥΘΥΝΤΗΣ: Καθηγητής Γ. ΧΡΥΣΟΛΟΥΡΗΣ Ι ΑΚΤΟΡΙΚΗ ΙΑΤΡΙΒΗ

ΙΕΥΘΥΝΤΗΣ: Καθηγητής Γ. ΧΡΥΣΟΛΟΥΡΗΣ Ι ΑΚΤΟΡΙΚΗ ΙΑΤΡΙΒΗ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΠΑΤΡΩΝ ΠΟΛΥΤΕΧΝΙΚΗ ΣΧΟΛΗ ΤΜΗΜΑ ΜΗΧΑΝΟΛΟΓΩΝ ΚΑΙ ΑΕΡΟΝΑΥΠΗΓΩΝ ΜΗΧΑΝΙΚΩΝ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΣΥΣΤΗΜΑΤΩΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗΣ & ΑΥΤΟΜΑΤΙΣΜΟΥ / ΥΝΑΜΙΚΗΣ & ΘΕΩΡΙΑΣ ΜΗΧΑΝΩΝ ΙΕΥΘΥΝΤΗΣ: Καθηγητής Γ. ΧΡΥΣΟΛΟΥΡΗΣ Ι ΑΚΤΟΡΙΚΗ

Διαβάστε περισσότερα

ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗΣ ΣΥΝΤΑΓΟΓΡΑΦΗΣΗΣ ΚΑΙ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑΔΑ: Ο.Α.Ε.Ε. ΠΕΡΙΦΕΡΕΙΑ ΠΕΛΟΠΟΝΝΗΣΟΥ ΚΑΣΚΑΦΕΤΟΥ ΣΩΤΗΡΙΑ

ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗΣ ΣΥΝΤΑΓΟΓΡΑΦΗΣΗΣ ΚΑΙ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑΔΑ: Ο.Α.Ε.Ε. ΠΕΡΙΦΕΡΕΙΑ ΠΕΛΟΠΟΝΝΗΣΟΥ ΚΑΣΚΑΦΕΤΟΥ ΣΩΤΗΡΙΑ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΠΕΙΡΑΙΩΣ ΠΡΟΓΡΑΜΜΑ ΜΕΤΑΠΤΥΧΙΑΚΩΝ ΣΠΟΥΔΩΝ ΔΙΟΙΚΗΣΗ ΤΗΣ ΥΓΕΙΑΣ ΤΕΙ ΠΕΙΡΑΙΑ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗΣ ΣΥΝΤΑΓΟΓΡΑΦΗΣΗΣ ΚΑΙ Η ΔΙΕΡΕΥΝΗΣΗ ΤΗΣ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ ΤΗΣ ΣΤΗΝ ΕΛΛΑΔΑ: Ο.Α.Ε.Ε. ΠΕΡΙΦΕΡΕΙΑ ΠΕΛΟΠΟΝΝΗΣΟΥ

Διαβάστε περισσότερα

Figure 3 Three observations (Vp, Vs and density isosurfaces) intersecting in the PLF space. Solutions exist at the two indicated points.

Figure 3 Three observations (Vp, Vs and density isosurfaces) intersecting in the PLF space. Solutions exist at the two indicated points. φ φ φ φ Figure 1 Resampling of a rock-physics model from velocity-porosity to lithology-porosity space. C i are model results for various clay contents. φ ρ ρ δ Figure 2 Bulk modulus constraint cube in

Διαβάστε περισσότερα

Εργαστήριο Ανάπτυξης Εφαρμογών Βάσεων Δεδομένων. Εξάμηνο 7 ο

Εργαστήριο Ανάπτυξης Εφαρμογών Βάσεων Δεδομένων. Εξάμηνο 7 ο Εργαστήριο Ανάπτυξης Εφαρμογών Βάσεων Δεδομένων Εξάμηνο 7 ο Procedures and Functions Stored procedures and functions are named blocks of code that enable you to group and organize a series of SQL and PL/SQL

Διαβάστε περισσότερα

6.3 Forecasting ARMA processes

6.3 Forecasting ARMA processes 122 CHAPTER 6. ARMA MODELS 6.3 Forecasting ARMA processes The purpose of forecasting is to predict future values of a TS based on the data collected to the present. In this section we will discuss a linear

Διαβάστε περισσότερα

ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΤΜΗΜΑ ΟΔΟΝΤΙΑΤΡΙΚΗΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΟΔΟΝΤΙΚΗΣ ΚΑΙ ΑΝΩΤΕΡΑΣ ΠΡΟΣΘΕΤΙΚΗΣ

ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΤΜΗΜΑ ΟΔΟΝΤΙΑΤΡΙΚΗΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΟΔΟΝΤΙΚΗΣ ΚΑΙ ΑΝΩΤΕΡΑΣ ΠΡΟΣΘΕΤΙΚΗΣ ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ ΤΜΗΜΑ ΟΔΟΝΤΙΑΤΡΙΚΗΣ ΕΡΓΑΣΤΗΡΙΟ ΟΔΟΝΤΙΚΗΣ ΚΑΙ ΑΝΩΤΕΡΑΣ ΠΡΟΣΘΕΤΙΚΗΣ ΣΥΓΚΡΙΤΙΚΗ ΜΕΛΕΤΗ ΤΗΣ ΣΥΓΚΡΑΤΗΤΙΚΗΣ ΙΚΑΝΟΤΗΤΑΣ ΟΡΙΣΜΕΝΩΝ ΠΡΟΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΜΕΝΩΝ ΣΥΝΔΕΣΜΩΝ ΑΚΡΙΒΕΙΑΣ

Διαβάστε περισσότερα

Srednicki Chapter 55

Srednicki Chapter 55 Srednicki Chapter 55 QFT Problems & Solutions A. George August 3, 03 Srednicki 55.. Use equations 55.3-55.0 and A i, A j ] = Π i, Π j ] = 0 (at equal times) to verify equations 55.-55.3. This is our third

Διαβάστε περισσότερα

RSDW08 & RDDW08 series

RSDW08 & RDDW08 series /,, MODEL SELECTION TABLE INPUT ORDER NO. INPUT VOLTAGE (RANGE) NO LOAD INPUT CURRENT FULL LOAD VOLTAGE CURRENT EFFICIENCY (Typ.) CAPACITOR LOAD (MAX.) RSDW08F-03 344mA 3.3V 2000mA 80% 2000μF RSDW08F-05

Διαβάστε περισσότερα

hgh-easia KAP1081 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium

hgh-easia KAP1081 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium hgheasia KAP1081 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue de l'industrie, 8 B1400 Nivelles Belgium : 0904/1 en Read entire protocol before use. hgheasia I. INTENDED USE Immunoenzymetric assay for the in vitro quantitative

Διαβάστε περισσότερα

b. Use the parametrization from (a) to compute the area of S a as S a ds. Be sure to substitute for ds!

b. Use the parametrization from (a) to compute the area of S a as S a ds. Be sure to substitute for ds! MTH U341 urface Integrals, tokes theorem, the divergence theorem To be turned in Wed., Dec. 1. 1. Let be the sphere of radius a, x 2 + y 2 + z 2 a 2. a. Use spherical coordinates (with ρ a) to parametrize.

Διαβάστε περισσότερα

ΤΕΧΝΟΛΟ ΓΙ ΚΟ ΕΚΠΑ ΙΔ ΕΥ Τ ΙΚΟ Ι ΔΡΥ Μ Α 'ΠΕ Ι ΡΑ ΙΑ ΤΜΗΜΑ ΚΛΩΣΤΟΥΦΑΝΤΟΥΡΓΙΑΣ ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ ΒΑΦΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΉ ΕΡΓ ΑΣΙΑ ΤΙΤΛΟΣ ΕΥΧΡΗΣΤΙΑ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΜΕΝΟΥ

ΤΕΧΝΟΛΟ ΓΙ ΚΟ ΕΚΠΑ ΙΔ ΕΥ Τ ΙΚΟ Ι ΔΡΥ Μ Α 'ΠΕ Ι ΡΑ ΙΑ ΤΜΗΜΑ ΚΛΩΣΤΟΥΦΑΝΤΟΥΡΓΙΑΣ ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ ΒΑΦΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΉ ΕΡΓ ΑΣΙΑ ΤΙΤΛΟΣ ΕΥΧΡΗΣΤΙΑ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΜΕΝΟΥ 515 ΤΕΧΝΟΛΟ ΓΙ ΚΟ ΕΚΠΑ ΙΔ ΕΥ Τ ΙΚΟ Ι ΔΡΥ Μ Α 'ΠΕ Ι ΡΑ ΙΑ ~ " ΤΜΗΜΑ ΚΛΩΣΤΟΥΦΑΝΤΟΥΡΓΙΑΣ ΕΙΔΙΚΟΤΗΤΑ ΒΑΦΙΚΗΣ ΠΤΥΧΙΑΚΉ ΕΡΓ ΑΣΙΑ ΤΙΤΛΟΣ ΕΥΧΡΗΣΤΙΑ ΕΞΕΙΔΙΚΕΥΜΕΝΟΥ ΠΡΟΣΤΑΤΕΥΤΙΚΟΥ ΙΜΑΤΙΣΜΟΥ ΑΡΓΥΡΟΠΟΥ ΛΟΣ ΘΕΜΙΣΤΟΚΛΗΣ

Διαβάστε περισσότερα

Surface Mount Multilayer Chip Capacitors for Commodity Solutions

Surface Mount Multilayer Chip Capacitors for Commodity Solutions Surface Mount Multilayer Chip Capacitors for Commodity Solutions Below tables are test procedures and requirements unless specified in detail datasheet. 1) Visual and mechanical 2) Capacitance 3) Q/DF

Διαβάστε περισσότερα

CE 530 Molecular Simulation

CE 530 Molecular Simulation C 53 olecular Siulation Lecture Histogra Reweighting ethods David. Kofke Departent of Cheical ngineering SUNY uffalo kofke@eng.buffalo.edu Histogra Reweighting ethod to cobine results taken at different

Διαβάστε περισσότερα

25OH-Vitamin D total- RIA-CT KIP1971

25OH-Vitamin D total- RIA-CT KIP1971 25OHVitamin D total RIACT KIP1971 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B1348 Louvainlaeuve Belgium : 1181/1 en Read entire protocol before use. 25OH Vitamin D total RIACT I. ITEDED USE Radioimmunoassay

Διαβάστε περισσότερα

25OH-Vitamin D total- RIA-CT KIP1971 / KIP1974

25OH-Vitamin D total- RIA-CT KIP1971 / KIP1974 25OHVitamin D total RIACT KIP1971 / KIP1974 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B1348 Louvainlaeuve Belgium : 141208/1 en Read entire protocol before use. 25OH Vitamin D total RIACT I. ITEDED

Διαβάστε περισσότερα

Συστήματα Διαχείρισης Βάσεων Δεδομένων

Συστήματα Διαχείρισης Βάσεων Δεδομένων ΕΛΛΗΝΙΚΗ ΔΗΜΟΚΡΑΤΙΑ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΚΡΗΤΗΣ Συστήματα Διαχείρισης Βάσεων Δεδομένων Φροντιστήριο 9: Transactions - part 1 Δημήτρης Πλεξουσάκης Τμήμα Επιστήμης Υπολογιστών Tutorial on Undo, Redo and Undo/Redo

Διαβάστε περισσότερα

MESACUP Desmoglein TEST Dsg1

MESACUP Desmoglein TEST Dsg1 MESACUP Desmoglein TEST Dsg1 Cat. No. 7680E: 48 wells Cat. No. 7680E: 48 puits Art.-Nr. 7680E: 48 Auftragsstellen Cat No 7680E: 48 wells Cat. No. 7680E: 48 pocillos Cat. n. 7680E: 48 pozzetti Cat. Nº 7680E:

Διαβάστε περισσότερα

Exercises to Statistics of Material Fatigue No. 5

Exercises to Statistics of Material Fatigue No. 5 Prof. Dr. Christine Müller Dipl.-Math. Christoph Kustosz Eercises to Statistics of Material Fatigue No. 5 E. 9 (5 a Show, that a Fisher information matri for a two dimensional parameter θ (θ,θ 2 R 2, can

Διαβάστε περισσότερα

Second Order Partial Differential Equations

Second Order Partial Differential Equations Chapter 7 Second Order Partial Differential Equations 7.1 Introduction A second order linear PDE in two independent variables (x, y Ω can be written as A(x, y u x + B(x, y u xy + C(x, y u u u + D(x, y

Διαβάστε περισσότερα

Session novembre 2009

Session novembre 2009 ΥΠΟΥΡΓΕΙΟ ΕΘΝΙΚΗΣ ΠΑΙΔΕΙΑΣ ΚΑΙ ΘΡΗΣΚΕΥΜΑΤΩΝ ΚΡΑΤΙΚΟ ΠΙΣΤΟΠΟΙΗΤΙΚΟ ΓΛΩΣΣΟΜΑΘΕΙΑΣ MINISTÈRE GREC DE L ÉDUCATION NATIONALE ET DES CULTES CERTIFICATION EN LANGUE FRANÇAISE NIVEAU ÉPREUVE B1 sur l échelle proposée

Διαβάστε περισσότερα

Practice Exam 2. Conceptual Questions. 1. State a Basic identity and then verify it. (a) Identity: Solution: One identity is csc(θ) = 1

Practice Exam 2. Conceptual Questions. 1. State a Basic identity and then verify it. (a) Identity: Solution: One identity is csc(θ) = 1 Conceptual Questions. State a Basic identity and then verify it. a) Identity: Solution: One identity is cscθ) = sinθ) Practice Exam b) Verification: Solution: Given the point of intersection x, y) of the

Διαβάστε περισσότερα

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας

Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας Έλεγχος και Διασφάλιση Ποιότητας Ενότητα 6: Κουππάρης Μιχαήλ Τμήμα Χημείας Εργαστήριο Αναλυτικής Χημείας General Successfully carry out the Preventive Maintenance Procedure and complete the Maintenance

Διαβάστε περισσότερα

3.4 SUM AND DIFFERENCE FORMULAS. NOTE: cos(α+β) cos α + cos β cos(α-β) cos α -cos β

3.4 SUM AND DIFFERENCE FORMULAS. NOTE: cos(α+β) cos α + cos β cos(α-β) cos α -cos β 3.4 SUM AND DIFFERENCE FORMULAS Page Theorem cos(αβ cos α cos β -sin α cos(α-β cos α cos β sin α NOTE: cos(αβ cos α cos β cos(α-β cos α -cos β Proof of cos(α-β cos α cos β sin α Let s use a unit circle

Διαβάστε περισσότερα

C.S. 430 Assignment 6, Sample Solutions

C.S. 430 Assignment 6, Sample Solutions C.S. 430 Assignment 6, Sample Solutions Paul Liu November 15, 2007 Note that these are sample solutions only; in many cases there were many acceptable answers. 1 Reynolds Problem 10.1 1.1 Normal-order

Διαβάστε περισσότερα

derivation of the Laplacian from rectangular to spherical coordinates

derivation of the Laplacian from rectangular to spherical coordinates derivation of the Laplacian from rectangular to spherical coordinates swapnizzle 03-03- :5:43 We begin by recognizing the familiar conversion from rectangular to spherical coordinates (note that φ is used

Διαβάστε περισσότερα

Assalamu `alaikum wr. wb.

Assalamu `alaikum wr. wb. LUMP SUM Assalamu `alaikum wr. wb. LUMP SUM Wassalamu alaikum wr. wb. Assalamu `alaikum wr. wb. LUMP SUM Wassalamu alaikum wr. wb. LUMP SUM Lump sum lump sum lump sum. lump sum fixed price lump sum lump

Διαβάστε περισσότερα

ImmuLisa Enhanced B2GP1 ELISA Beta 2 Glycoprotein 1 Antibody ELISA

ImmuLisa Enhanced B2GP1 ELISA Beta 2 Glycoprotein 1 Antibody ELISA EN ImmuLisa Enhanced B2GP1 ELISA Beta 2 Glycoprotein 1 Antibody ELISA [IVD] For in vitro diagnostic use PRODUCT INSERT [REF] 5152A B2GP1 IgA Antibody ELISA 96 Determinations [REF] 5152G B2GP1 IgG Antibody

Διαβάστε περισσότερα