MAX Enteric Parasite Panel

Transcript

1 MAX Enteric Parasite Panel In Vitro диагностикалық қолданысқа арналған P0219(01) BD MAX жүйесімен бірге қолдануға арналған Қазақ 4 I ҚОЛДАНУ МАҚСАТЫ BD MAX System жүйесінде орындалған BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) - ішек бактерияларының патогендерін тікелей сапалық тұрғыдан анықтауға арналған автоматтандырылған in vitro диагностикалық сынағы. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) келесілерден нуклеин қышқылын анықтады: Giardia lamblia Cryptosporidium (C. hominis және C. parvum ғана) Entamoeba histolytica Зерттелетін үлгілер асқынған гастроэнтериті, энтериті немесе колиті бар, симптоматикалық емделушілердің консервантсыз немесе 10% формалин бекітілген үлкен дәреттің сұйығынан құралған. Талдау клиникалық бағалау және басқа зертханалық нәтижелермен бірге пайдаланылған кезде асқазан ішек инфекциясына көмектесуге арналған. Сынақ белгілі бір нысандардың күшейтілуіне арналған нақты уақытты полимеразды тізбекті реакция (ПТР) пайдаланылатын үлгіде тікелей орындалады. Сынақта күшейтілген ДНҚ анықтауға арналған флуоргендік генге тән гибридтеу үлгілері қолданылады. Бұл сынақ клиникалық презентация, зертхана нәтижелері және Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis, C. parvum және Entamoeba histolytica инфекциялары сияқты эпидемиологиялық ақпаратпен бірге пайдаланылады. Осы сынақ нәтижелері емдеу немесе басқа басқарушылық шешімдер үшін жалғыз ақ негіз ретінде пайдаланылмауы тиіс. Оң нәтижелер осы сынақпен анықталмаған басқа ағзалармен ортақ инфекцияны шығармайды және емделуші ауруының жалғыз немесе нақты себебі болмауы мүмкін. Асқазан ішекпен және колитпен үйлесімді клиникалық аурудың параметріндегі теріс нәтижелер осы сынақпен анықталмаған патогендердің инфекциясынан немесе жара колиттері, тітіркенген тоқ ішек синдромы немесе Крон ауруы сияқты инфекциясыз себептерден болуы мүмкін. ПРОЦЕДУРАНЫҢ ҚЫСҚА СИПАТТАМАСЫ МЕН ТҮСІНІКТЕМЕСІ Ішек ауруларына әкеп соғатын ағзалар дүниедегі ауру-сырқаулық пен өлімнің негізгі себептері болып табылады. Ішек инфекциялары ағзаға ішек қарын жолы арқылы барады және әдетте ластанған тамақ пен су арқылы немесе құсықпен немесе үлкен дәретпен байланысу арқылы тарайды. CDC есебі бойынша, Құрама Штаттарда жыл сайын тамақ салдарынан болатын 48 миллион ауыру жағдайының нәтижесінде адам ауруханаға жатқызылып, адам қайтыс болады. 1 Дамушы елдерде бұл аурулар жыл сайын 2,5 миллион жас баланың өліміне әкеп соғады. 2 Қоздырғыштардың әрқайсысы әртүрлі симптоматикаларға әкелуі мүмкін, соның ішінде іштің түйілуі немесе ауруы, тәбеттің болмауы, жүректің айнуы немесе құсу, дегенмен барлығы диареяға әкеп соғады. 3 Диареяның қайталама ұстамалары және күшті диарея ауруы ішектер функциясын және сіңіруді бұзады, ол балалық жеткіліксіз тамақтануына және өсу бөгелісіне алып келуі мүмкін. 4 Диареяның этиологиясы вирустардан, бактериядан және паразиттерден тұрады. Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis, C. parvum және Entamoeba histolytica паразиттерді тудыратын маңызды диарея ретінде қарастырылады. Барлық осы ағзалар тұтынылған тамақ немесе сусын арқылы фекаль ауыз бағытында тасымалданады және жиі ауруға қатысты болады. Дүниежүзінде Giardia - сумен тарайтын ауруға қатысты ең жиі анықталатын паразиттердің бірі. 5 Лямблиоз диареямен, іштегі шаншулармен, құсумен, салмақтың азаюымен және абсорбцияның азаюымен сипатталады. Ішек ретсіздігі, аллергиялар және реактивті артрит лямблиозбен байланысты. Ауру өздігінен шектелетін және симптомсыз инфекциялар болып табылады. Cryptosporidium hominis және C. parvum іштегі шаншулармен, ыстықтаумен, құсумен және салмақтың азаюымен қоса сулы диареямен сипатталатын криптоспоридиозға себеп болады. Иммунитеті төмен емделушілерде холангиттер немесе панкреатиттер инфекция нәтижесінде артуы мүмкін. 5,6 Дегенмен, симптомсыз инфекциялар да орын алуы мүмкін. Entamoeba histolytica инфекциялары жиі симптомсыз болады. Симптомдар орын алған кезде орташа ауыр диарея және қарынның ісінуі жиі байқалады. Ауру болса, салмақтың азаюы мен әлсіздікке алып келеді. 6 Entamoeba histolytica инфекциясы талшықтың бұзылуына және бауырдың абсцесіне әкелетін инвазивті болады. 7 1

2 Осы паразиттердің микроскоптық анықтау сезімтал емес әрі қосымша уақытты, жабдықты және оқытуды талап етеді. Оған қоса, микроскопия Entamoeba histolytica үлгісін Entamoeba dispar патогендік емес үлгілерден анықтай алмайды. 8 ПТР дәстүрлі әдістерге қарағанда өте сезімтал және бірнеше экскремент сынамаларын сынау қажеттілігін азайтып, емделуші мен инфекция бақылауын жетілдіретін ерте анықтауға мүмкіндік беруі мүмкін. 9 BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) - бір уақытта және әр түрлі Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis, C. parvum және Entamoeba histolytica анықтайтын мультиплекс талдау. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) BD MAX System жүйесімен пайдаланылған кезде шамамен 4,5 сағатта 24 нәтижені қамтамасыз етуі мүмкін. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) үлгі BD MAX System жүйесіне орнатылған уақыттан бастап нәтижелер шыққанға дейін оператордың араласуын азайту арқылы сынау үрдісін реттейді және жеңілдетеді. Дәрет үлгілері жиналады және зертханаға жіберіліп, гомогенделіп, BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) үлгі буферінің түтігі салынады. Үлгі буферінің түтігі аралық қақпақпен жабылып, кейін BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) құралында паразиттік ағзаларды еріту үшін қыздырылады. Үлгі буферінің түтігі шайқалып, BD MAX System жүйесіне жіберіледі және келесі автоматтандырылған процедуралар пайда болады: жасушалар лизистеледі, нуклеин қышқылдары магниттік гранулаларға шығарылып, концентратталады және элюцияланған ДНК аликоты, бар болған жағдайда BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) ішіндегі генетикалық мақсатты күшейту үшін пайдаланылатын мақсатты бактерияларының арнаулы праймерлерін қамтитын ПТР реагенттеріне қосылады. Талдауға ішкі үлгі өңделуін басқару кіреді. Ингибиторлық заттарды, сондай-ақ құралдың немесе реагент сәтсіздігін бақылау үшін экстракция түтігінде үлгі өңделуін басқару бар және ол экстракция, концентрация және күшейту қадамдарын орындайды. Сынама, BD MAX Unitized Reagent Strip (құрамдас көрсеткіш сызығы) және ПТР картриджі BD MAX System жүйесіне жүктелген кезде оператор кедергісі қажет емес. BD MAX System жүйесі үлгі лизисін, нуклеин қышқылы экстракциясын және концентрациясын, реагентті қайта гидрадтауды, нуклеин қышқылын күшейтуді және нақты уақытты полимеразалық тізбекті реакцияны пайдаланып (ПТР), мақсатты нуклеин қышқылының реттілігін анықтауды автоматтандырады. Күшейтілген нысандар сөндірілген флюофорлармен белгіленген гидролиздік зондтармен анықталады. Сигналды күшейту, анықтау және талдау BD MAX System жүйесімен автоматты түрде орындалады. ПРОЦЕДУРАНЫҢ ПРИНЦИПТЕРІ Үлкен дәрет үлгілері науқастардан жиналады және зертханаға таза контейнерде консервантсыз немесе 10% бекітілген формалин түрінде жеткізіледі. Үлгі араластырылады және 10 мкл ілмек үлгіде ілмектің түбіне дейін енгізіледі және BD MAX Sample Buffer Tube (үлгі буферінің түтігі) түтігінде құйын тәрізді қозғалыс арқылы көрсетіледі. Үлгі буферінің түтігі аралық қақпақпен жабылып, кейін BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) құралында паразиттік ағзаларды еріту үшін қыздырылады. Үлгі буферінің түтігі кейін шайқалып, BD MAX System жүйесіне тасымалданады. Жұмыс тізімі жасалған соң және клиникалық үлгі BD MAX құралына жүктелген соң, BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) құрамдас көрсеткіш сызығы және ПТР картриджімен жұмыс басталады және кейін оператордың араласуы қажет болмайды. BD MAX System жүйесі үлгі дайындауды, соған қоса мақсатты ағза лизисін, ДНҚ экстракциясын және концентрациясын, реагентті қайта гидрадтауды, нақты уақыттағы ПТР пайдаланып мақсатты нуклеин қышқылының реттілігін күшейту және анықтауды автоматтандырады. Сигнал талдауын автоматты түрде BD MAX System жүйесі орындайды. Сонымен қатар, талдауға сынаманың өңделуін бақылау құралы кіреді, ол экстракция түтігінде қамтамасыз етіледі және экстракция, концентрация және күшейту қадамдарынан өтеді. Ықтимал ингибиторлық заттардың бар болуын, сондай-ақ жүйе мен реагент сәтсіздіктерін бақылау үшін сынаманы өңдеуді басқару сондай-ақ лизис, экстракция, концентрация және күшейту қадамдарына біріктірілген. Жоғары температурадағы ферментативті жасуша лизисінен кейін шығарылған нуклеин қышқылдары магниттік ұқсастық гранулаларына жинақталады. Гранулалар байланысқан нуклеин қышқылдарымен бірге жуылады және нуклеин қышқылдары элюциялау буферіндегі жоғары ph қызуымен элюцияланады. Элюцияланған ДНҚ залалсыздандырылады және ПТР реагенттерін қайта гидраттау үшін Мастер микс түтігіне тасымалданады. Қайта гидрадтаудан кейін BD MAX System жүйесі ПТР дайын ерітіндінің бекітілген көлемін BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) картриджіне тамызады. BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) картриджіндегі микроклапандар күшейту микстурасын қамту үшін ПТР басталғанға дейін жүйе тарапынан тығыздалып, булануға және ластануға мүмкіндік берілмейді. Күшейтілген ДНҚ нысаналары гидролиз (TaqMan) зондтарын пайдалану арқылы анықталады, олар бір жағы флуоресцентті репортер бояумен (флуофор) және екінші жағы сөндіргіш фрагментімен белгіленген. Түрлі флюорофорлармен белгіленген зондтар BD MAX System жүйесінің түрлі оптикалық арналарында талданатын ішек паразиті нысаналарының ампликонын және Сынаманы өңдеу құралын анықтау үшін пайдаланылады. Giardia lamblia мақсатты ампликондары FAM арнасынан анықталады, Cryptosporidium hominis/parvum мақсатты ампликондары ROX арнасынан анықталады, Entamoeba histolytica мақсатты ампликондары VIC арнасынан анықталады және Сынама өңделуін басқару ампликондары Cy5.5 арнасынан анықталады. Зондтар өздерінің түпкілікті күйлерінде болған кезде, флюорофор флюоресценциясы сөндіргішке жақын болғандықтан сөндіріледі. Дегенмен мақсатты ДНҚ бар болған кезде зондтар өздерінің комплементарлы бірізділіктеріне гибридтейді және ДНҚ үлгісі бойындағы тізбекті синтездегендей, ДНҚ полимеразасының 5 3 экзонуклеазалық әрекеті арқылы гидролизденеді. Нәтижесінде флюорофорлар сөндіргіш молекулаларынан бөлінеді және флюоресценция таратылады. BD MAX жүйесі осы сигналдарды әрбір циклде бақылайды және соңғы нәтижелерге есеп беру үшін бағдарламаның соңында деректерді талқылайды. 2

3 РЕАГЕНТТЕР ЖӘНЕ МАТЕРИАЛДАР СІЛТЕМЕ Жинақтың құрамы Саны BD MAX Enteric Parasite Master Mix (A7) Пеште кептірілген ПТР мастер-миксінің құрамында TaqMan зонды мен праймерлеріне тән 24 сынақ үлгінің өңделуін басқарумен бірге TaqMan арнайы молекулярлы зондтары және праймерлері бар. BD MAX Enteric Parasite Unitized Reagent Strips Құрамында барлық сұйық реагенттер мен ДНҚ шығарып алу үшін қажет бір рет пайдаланатын 24 сынақ тамшуыр ұштары бар өлшем бірліктері көрсетілген реагент жолақ. BD MAX Enteric Parasite Extraction Tube (B2) Құрамында ДНҚ магниттік тектестік гранулалары, протеаза реагенттері және үлгі өңделуін 24 сынақ басқару элементі бар пешпен құрғатылған тұғыр. BD MAX Enteric Parasite Sample Buffer Tube 24 сынақ Диафрагмалы қақпақтар 25 ҚАЖЕТТІ, БІРАҚ ЖИНАҚҚА КІРМЕЙТІН ЖАБДЫҚТАР МЕН МАТЕРИАЛДАР BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) (BD Diagnostic Systems каталог нөмірі ) BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) картридждері (BD Diagnostic Systems каталог нөмірі ) VWR бірнеше түтікті шайқау миксері немесе баламасы Vortex Genie 2 немесе баламасы Nalgene криогендік шиша ұстағышы немесе баламасы Ұнтақсыз, бір реттік қолғаптар 10 мкл циклдері (BD Diagnostic Systems каталог нөмірі: ) Сақталған экскремент үлгісінің түрлері үшін: Дәрет үлгілерін жинауға арналған ыдыстарды құрғату, тазалау 10% формалин бекітілген экскремент түрлері үшін: 10% формалин тасымалы (15 мл) ЕСКЕРТУЛЕР МЕН САҚТЫҚ ШАРАЛАРЫ Қауіп H319 Қатты көз тітіркенуін тудырады. H360 Фертилдікке немесе құрсақтағы балаға зақым келтіруі мүмкін. P280 Қорғаныс қолғаптарын/қорғаныс киімін, қолғаптарды және көз/бет қорғанысын киіңіз. P305+P351+P338 "КӨЗГЕ ТИГЕН ЖАҒДАЙДА: Көзіңізді бірнеше минут бойы сумен жуыңыз. Линза таққан болсаңыз және оларды шешу оңай болса, оларды шешіңіз. Көзіңізді жууды жалғастырыңыз." P405 Жабық күйде ұстаңыз. P501 Мазмұнын/контейнерді жергілікті/аймақтық/ұлттық/халықаралық заңнамаларға сәйкес қоқысқа тастаңыз. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) in vitro жағдайында диагностика жасауға арналған. Мемлекеттік және әлеуметтік денсаулық сақтау өкілдері аурудың пайда болуын анықтауға қажетті шараларды анықтау үшін Giardia, Cryptosporidium және Entamoeba қоса ауыр аурулардың өз юрисдикцияларында пайда болғанын мерзімінде хабарлау керектігін жариялады. Зертханалар клиникалық материалды немесе изоляттарды өздерінің мемлекеттік денсаулық сақтау зертханаларына жіберуге келесі заңнамалар бойынша жауапты. Әлеуметтік денсаулық есебіне қатысты алғышарт: Хабарланатын ауру хабарландыруына арналған жергілікті, мемлекеттік және федералдық реттеулер үздіксіз жаңартылады және бақылауға және зерттеулерге арналған ағзалар санын қамтиды. 18,19 Оған қоса, Ауруларды бақылау орталықтары (CDC) хабарланатын аурулардың патогендері ортадан тәуелсіз диагностикалық сынақ (CIDT) бойынша анықталғанда зертхана анықтауға және эпидемиологиялық зерттеулерге көмектесу үшін тиісті әлеуметтік денсаулық зертханасына жіберілетін изолят немесе клиникалық материалдар жинауы керек. Зертханалар келесі мемлекеттік және/немесе жергілікті реттеулерге жауапты және изолят және/немесе клиникалық сынама жіберу нұсқаулықтарына арналған жергілікті және/немесе мемлекеттік әлеуметтік денсаулық зертханаларына баруы керек. Жарамдылық мерзімі біткен реагенттерді және/немесе материалдарды пайдаланбаңыз. Егер әкелу кезінде белгіні герметизациялайтын шеткі қорап сынық болса, жинақты пайдаланбаңыз. Егер қорғаныш дорбалар ашық болса немесе жеткізу кезінде сынған болса, реагенттерді пайдаланбаңыз. Егер құрғатқыш жоқ болса немесе реагент дорбаларының ішінде сынған болса, реагенттерді пайдаланбаңыз. Құрғатқышты реагент дорбаларынан алып тастамаңыз. Реагенттердің қорғаныш дорбаларын әрбір қолданыстан кейін сыдырма ілгекпен жылдам жабыңыз. Бекітуден бұрын дорбаларда қалған артық ауаны шығарыңыз. Реагенттерді қызудан және ылғалдан қорғаңыз. Ылғалдық созылған ықпалы өнімділікке әсер етеді. Егер фольга сынған немесе зақымдалған болса, реагенттерді пайдаланбаңыз. Әртүрлі дорбалардағы және/немесе жинақтардағы және/немесе партиялардағы реагенттерді араластырмаңыз. 3

4 Қақпақтарды ауыстырып алмаңыз немесе қайта пайдаланбаңыз, себебі ластанып сынақ нәтижелерін жоққа шығаруы мүмкін. Сұйықтықтарды дұрыс толтыру үшін құрамдас көрсеткіш сызықтарын тексеріңіз (сұйықтықтар түтіктердің түбінде екеніне көз жеткізіңіз) (1-суретті қараңыз). Барлық тамшуыр ұштары бар екеніне көз жеткізу үшін құрамдас көрсеткіш сызықтарын тексеріңіз (1-суретті қараңыз). Мастер-микс секілді химиялық ерітінділерді пайдалану кезінде сақ болыңыз, себебі экстракция түтігі штрих-кодының оқылымы өзгеріп кетуі мүмкін. Осы талдауды дұрыс орындау үшін жақсы зертханалық техника қажет. Осы сынақтың жоғары аналитикалық сезгіштігінен барлық материалдар мен реагенттердің тазалығын сақтау үшін өте сақ болу керек. Басқа ПТР сынақтары зертхананың ұқсас жалпы аймағында жүргізілген жағдайларда, BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) сынауы үшін қажетті басқа реагенттердің және BD MAX System жүйесінің ластанбағанын мұқият тексеру қажет. Реагенттердің микробтармен және дезоксирибонуклеазамен (ДНҚаза) ластануын ешқашан болдырмаңыз. Реагенттермен және картридждермен жұмыс істеуден бұрын қолғаптарды ауыстыру қажет. Ампликондар қоршаған ортаны ластамауы үшін BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) пайдаланғаннан кейін бөлшектерге бөлмеңіз. BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) картридждерінің тығыздағыштары ластануды болдырмауға арналған. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) ұсынылған уақыт ауқымынан тыс орындалуы жарамсыз нәтижелер беруі мүмкін. Белгіленген уақыт ауқымдарында орындалмаған талдауларды қайталау қажет. Қосымша басқару элементтерін жергілікті, мемлекеттік, аймақтық және/немесе федералдық ережелердің немесе аккредитациялық ұйымдардың нұсқауларына немесе талаптарына сәйкес сынауға болады. CLSI M29 10 құжаты мен микробиологиялық және биомедициналық зертханалардағы биологиялық қауіпсіздік құжаттарында көрсетілгендей, үлгілерді олар инфекциялық ретінде қарастырып, әрдайым қауіпсіз зертхана процедураларына сәйкес қолданыңыз. 11 Барлық реагенттермен жұмыс істеу кезінде қорғаныс киімі мен бір рет пайдаланылатын қолғаптарды киіңіз. Сынақты орындаған соң қолдарыңызды әбден жуыңыз. Ауызыңыздан тамызбаңыз. Үлгілер немесе жинақ реагенттері қолданылатын аумақтарда темекі шекпеңіз, ішпеңіз, шайнамаңыз немесе тамақтанбаңыз. Қолданылмайтын реагенттер мен қоқыстарды жергілікті, мемлекеттік, аймақтық және/немесе федералдық ережелерге сәйкес тастаңыз. Қосымша ескертулер, сақтық шаралары мен процедураларды BD MAX жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығынан 12 қараңыз. САҚТАУ ЖӘНЕ ТҰРАҚТЫЛЫҚ Жиналған үлгілер, консервантсыз үлкен дәрет немесе 10% формалин бекітілген экскремент тасымалдау кезінде 2 25 C аралығында сақталуы керек. Тоңазытудан немесе қатты қыздырудан қорғаңыз. Үлгілерді, консервантсыз немесе 10% формалин бекітілген экскремент, сынақ алдында 120 сағат (5 күн) дейін 2 8 C немесе 48 сағатқа дейін 2 25 C аралығындағы температурада сақтауға болады Алдын ала жылыту алдында немесе кейін инокуляцияланған Үлгі буферінің түтігін жалпы сынақ (немесе қайта сынау) үшін сақтауға болады: Time (Уақыт) Температура 120 сағат (5 күн) 2 8 C 48 сағат 2 25 C BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) құрамдас бөліктері берілген жарамдылық мерзімі аяқталғанға дейін 2 25 C температурада тұрақты болады. Жарамдылық мерзімі біткен құрамдас бөліктерді пайдаланбаңыз. BD MAX Enteric Parasite Master Mix (ішек паразитінің мастер миксі) және Extraction Tubes (экстракция түтіктері) жабылған дорбаларда жеткізіледі. Өнімді ылғалдықтан сақтау үшін ашылғаннан кейін жедел түрде қайта жабыңыз. Реагент түтіктері алғаш ашылып, дорба қайта жабылғаннан кейін немесе жарамдылық мерзіміне дейін 14 күнге дейін 2 25 C аралығындағы температурада тұрақты болады. ҚОЛДАНУҒА АРНАЛҒАН НҰСҚАУЛАР Үлгіні жинау/тасымалдау Тиісті үлгіні алу үшін үлгі жинау процедурасын мұқият орындау керек. Дәрет үлгілері келесі процедураға сәйкес жиналады: Консервантсыз үлгілер: Экскремент үлгісін құрғақ, таза сауытқа аударыңыз. Сумен немесе зәрмен ластануды болдырмаңыз. Зертхана сауытын және тасымалдау құралын институционалдық стандарттың жұмыс процедураларына сай белгілеңіз (Сақтау және тұрақтылық бөлімін қараңыз). Дәретхана қағазын, суды не сабынды үлгімен араластырмаңыз. 10% формалин бекітілген үлгілер: Экскремент үлгісін бекіту құрылғысына өндіруші нұсқауларына сәйкес аударыңыз. Сумен немесе зәрмен ластануды болдырмаңыз. Зертхана сауытын және тасымалдау құралын институционалдық стандарттың жұмыс процедураларына сай белгілеңіз (Сақтау және тұрақтылық бөлімін қараңыз). Дәретхана қағазын, суды не сабынды үлгімен араластырмаңыз. 4

5 Үлгіні дайындау 1. Штрих-кодталған BD MAX Sample Buffer Tube (үлгі буферінің түтігі) (таза қақпақ) тиісті үлгі идентификациясымен белгілеңіз. Штрих кодтың алдын бөгемеңіз. 2. Консервантсыз немесе бекітілген үлгілерді жоғары жылдамдықпен 15 секундтай шайқаңыз. Шайқалған үлгілерді ашу кезінде абай болыңыз, себебі материал контейнер қақпағына жабысуы мүмкін. 3. Үлгі буферінің түтігінен таза қақпақты алыңыз. 4. BD MAX Sample Buffer Tube (үлгі буферінің түтігі) егу: а. Сақталған экскремент үлгілеріне арналған: i. 10 мкл бір рет пайдаланатын егу жүргізу ілмегін сынамаға толық батқанға дейін енгізіңіз. Ілмектен асырып енгізбеңіз, себебі сабындағы қосымша дәрет ПТР реакциясының артық жүктелуіне әкелуі мүмкін. ii. Жүктелген ілмекті үлгі буферінің түтігі ішіне енгізіп, құйын тәрізді қозғалысты пайдаланып үлгіні көрсетіңіз. iii. Ілмекті алып тастаңыз. ЕСКЕРТПЕ: Циклден толық үлгіні жоюдың қажеті жоқ. Нәтижесінде алынған үлгі буферінің түтігі ерітіндісі "шай ізі" түсінен қара болмауы керек. ә. 10% формалин бекітілген экскремент үлгілеріне арналған: i. 10 мкл бір рет пайдаланатын егу жүргізу ілмегін сынамаға толық батқанға дейін енгізіңіз. Циклдегі тұрақты көпіршік құрылымы бекітілген үлгілермен қамту қиын болуы мүмкін. ii. Жүктелген ілмекті үлгі буферінің түтігі ішіне енгізіп, құйын тәрізді қозғалысты пайдаланып үлгіні көрсетіңіз. iii. Ілмекті алып тастаңыз. 5. Егілген үлгі буферінің түтігін көк диафрагмалы қақпақпен жабыңыз. 6. Сынау үшін 1-қадамнан 5-қадамға дейін қайталап, содан кейін BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) операциясына өтіп, қосымша сынамаларды дайындаңыз. BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) операциясы (Пайдалану нұсқаулары үшін BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) нұсқаулығын 13 қараңыз.) 1. Run > Worklist (Іске қосу > Жұмыс тізімі) тақтасынан <BD MAX Ent Para 53 > опциясын таңдаңыз 2. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразиті) жинағының топтама нөмірін таңдаңыз (топтаманы бақылауға арналған) (күту жұмыс тізімінен іздеу алдында жинақ ТОПТАМАСЫ туралы ақпарат бөлек сканерленуі керек). ЕСКЕРТПЕ: Configuration > System (Конфигурация > Жүйе) ішінде топтама нөмірін бақылау қосылғанын тексеріңіз. 3. Sample Tube (Сынама түтік) өрісіндегі әрбір BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) үлгі буферінің түтігінің штрих-кодын штрих-кодты сканерлеу құралы немесе емделушінің деректер алу ұқсатқыш идентификаторын қолмен енгізу арқылы енгізіңіз. 4. Worklist (Күтудегі жұмыстың тізімі) енді жаңартылады және жоспарланған Pre-warm (алдын ала жылыту) қадамының құсбелгісі көрсетіледі. 5. Жұмыс тізіміндегі құсбелгіні белгілеу арқылы сынаманы жобалаңыз. 6. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) үлгі буферінің түтігі (үлгіден тұратын) BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) құралына салыңыз. Станция 24 үлгі буферінің түтігіне дейін сәйкестендіріңіз. 7. BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) құралындағы қақпақты жауып, Run > Worklist (Іске қосу > Жұмыс тізімі) тақтасында Start Pre-warm (Алдын ала жылытуды бастау) таңдаңыз. Белгілі бір BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) жылыту және суыту профилі іске қосылады. ЕСКЕРТПЕ: Түтіктердің BD Pre-warm rack (алдын ала жылыту сөресі) ішіне салынғанын және осы сөре BD Prewarm Heater (алдын ала жылыту құралы) ішіне жүктелгенін растап, алдын ала жылыту хабарын бастау үшін OK түймесін таңдаңыз. 8. Алдын ала жылыту сеансының аяқталу уақыты Күй экранында көрсетіледі және жұмыс тізімі экраны алдын ала жылыту In Progress (Орындалуда) екендігін көрсетеді. 9. Жұмыс тізімі экранындағы таңдалған сынама/сынақ сәтті алдын ала жылытылған кезде Pre-warm Complete (Алдын ала жылыту аяқталды) ретінде көрсетіледі. 10. Алдын ала жылыту қадамын сәтті аяқтағаннан кейін BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) ішінен үлгі буферінің түтігін жойып, әрбір үлгі буферінің түтігін 5 секунд шайқаңыз немесе барлық үлгі буферінің түтіктерін мульти шайқау құралына 1 минутқа салыңыз. 11. BD MAX System Operation (жүйе операциясы) қадамына BD MAX System Rack (жүйе сөресі) орнату үшін өтіңіз. ЕСКЕРТПЕ: Сәтсіз алдын ала жылыту қадамы оқиғасында BD MAX System Timer Status (жүйе таймерінің күйі) құралы Failed / Cooling (сәтсіз/суыту) хабарын көрсетеді. BD MAX System жүйесінде сынау алдында алдын ала жылыту қадамын қайталау қажет болуы мүмкін. Алдын ала жылыту ақаулығын реттеу қадамы аяқталған кезде жұмыс тізімі экранын қараңыз. Егер алдын ала жылыту күйінде сұралған сынамалар үшін "Failed" (Сәтсіз) көрсетілсе, алдын ала жылыту қадамы қайталануы қажет. Егер алдын ала жылыту күйі "Complete" (Аяқталды) болса, осы түтіктерді BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сынау жалғасуы мүмкін. ЕСКЕРТПЕ: BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) жоғарыдағы алдын ала жылыту қадамы сәтті аяқталғаннан кейін орындалады. Алдын ала жылыту циклі сәтті аяқталған үлгілер қайта сынау талап етілмейтін жағдайда қайта жылыту талап етілмейді (Сақтау және тұрақтылық бөлімін қараңыз). ЕСКЕРТПЕ: Бірнеше BD MAX System және BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) құралдарынан тұратын зертханалар үшін сынамалар алдын ала жылыту қадамы орындалған бірдей BD MAX System жүйесінде сыналуы немесе қайта сыналуы қажет. 5

6 ЕСКЕРТПЕ: Алдын ала жылытудан кейін BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) сынағы Сақтау және тұрақтылық бөлімінде көрсетілген уақыт аралығында орындалуы қажет. Сынақтан қайта өткізу қажет болса, үлгіні(лерді) қайта шайқаңыз. BD MAX жүйесінің жұмысы ЕСКЕРТПЕ: Толық нұсқауларды BD MAX жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығынан 12 қараңыз (Жұмыс бөлімі). ЕСКЕРТПЕ: Бір (1) үлгі буферінің түтігі, бір (1) диафрагмалы қақпақ, бір (1) Мастер-микс (A7), бір (1) Экстракция түтігі (B2) және бір (1) құрамдас көрсеткіш сызығы сынақтан өткізілетін әрбір үлгі және әрбір External Control (сыртқы басқару) элементі үшін қажет. BD MAX материалдардың қажетті санын қорғаныс қалталардан немесе қораптардан бір шетке алып қойыңыз. Ашық мастер-микс немесе экстракция түтігінің қалталарын сақтау үшін артық ауаны шығарыңыз және сыдырма ілгекті пайдаланып жабыңыз, құрғатушы буманың пакетте екендігін қамтамасыз етеді. 1. BD MAX жүйесін қосыңыз (әлі қосылмаған болса) және <user name> (пайдаланушының аты) мен <password> (құпиясөз) енгізіп кіріңіз. 2. Реагенттермен және картридждермен жұмыс істеуден бұрын қолғаптарды ауыстыру қажет. 3. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) жинағынан құрамдас көрсеткіш сызықтарының қажет санын жойыңыз. Барлық сұйықтық түтіктердің түбінде болуын тексеру үшін әрбір құрамдас көрсеткіш сызығын баяу қатты бетке басыңыз. 4. Экстракция түтігінің (түтіктерінің) және мастер-микс түтігінің (түтіктерінің) қажетті санын қорғаныс қалталардан жойыңыз. Артық ауаны шығарыңыз және қалталарды сыдырма ілгекпен жабыңыз. 5. Әрбір сынаманы сынау үшін А сөресінің 1 позициясынан басталатын BD MAX System Rack (жүйе сөресі) сөресіне бір (1) құрамдас көрсеткіш сызығын орналастырыңыз. 6. Бір (1) экстракция түтігін (ақ түсті фольга) 1 позициядағы әрбір құрамдас көрсеткіш сызығына 1-суретте көрсетілгендей сырт еткізіп бекітіңіз. 7. Бір (1) мастер-микс түтігін (жасыл түсті фольга) 2 позициядағы әрбір құрамдас көрсеткіш сызығына 1-суретте көрсетілгендей сырт еткізіп бекітіңіз. 1-сурет: BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) экстракция түтіктері мен мастер-микс түтіктерін құрамдас көрсеткіш сызықтарына сарт еткізіп бекітіңіз қадамдарындағыдай құрамдас көрсеткіш сызықтарына сәйкес BD MAX System Rack (жүйе сөресі) сөрелеріне үлгі буферінің түтіктерін салыңыз. ЕСКЕРТПЕ: Үлгі буферінің түтіктерін үлгі сөре(лер)іне 1D штрих-код жапсырмаларын сыртқа қаратып орналастырыңыз (бұл үлгіге кіру барысында үлгі буферінің түтіктерін сканерлеуді жеңілдетеді). 9. BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) картридждерінің қажетті санын BD MAX System жүйесіне орналастырыңыз (2-суретті қараңыз). Әрбір картридж 12 үлгіден жалпы 24 үлгіге дейін 2 сынақ топтамасын орналастырады. BD MAX жүйесі әрбір сынақ топтамасы үшін ПТР картриджінде позиция мен жолды автоматты түрде таңдайды. ПТР картридждері сынақ топтамасында және сөре негізінде пайдаланылады (1 картриджге 2 сынақ топтамасы және 1 сөреге 1 картридж). 6

7 2-сурет: BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) картридждерін салу. 10. Сөре(лер)ді BD MAX System жүйесіне салу (3-суретті қараңыз). A жағы B жағы 3-сурет: Сөре(лер)ді BD MAX жүйесіне жүктеңіз. 11. BD MAX жүйесінің есігін жабыңыз және өңдеуді бастау үшін <Start> (Іске қосу) түймесін басыңыз. 12. Сынақ топтамасының соңында тезарада нәтижелерді тексеріңіз немесе үлгі буферінің түтіктерін 2 8 C аралығында 120 сағат (5 күн) дейін НЕМЕСЕ 2 25 C максимум 48 сағат нәтижелер тексерілгенге дейін сақтаңыз. ЕСКЕРТПЕ: Егер септа қақпағы сынақ топтама барысында зақымдалса, үлгіні сақтаудан бұрын оны жаңасымен ауыстырыңыз. ЕСКЕРТПЕ: Үлгі буферінің түтіктеріне қосылған соң, дайындалған BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) үлгі буферінің түтігін 2 8 C ең ұзағы 120 сағат (5 күн) НЕМЕСЕ 2 25 C ең ұзағы 48 сағат сақталуы мүмкін. Анықталмаған (IND), шешілмеген (UNR) немесе аяқталмаған (INC) нәтиже алған жағдайда немесе сыртқы басқару элементінде қате орын алса, дайын үлгі буферінің түтігін қайталау сынағын осы мерзімде орындау қажет (Қайталама сынақ процедурасы бөлімін қараңыз). САПА БАҚЫЛАУ Сапа тексеру процедуралары талдаудың орындалуын бақылайды. Зертханалар толық және аналитикалық процес тиімділігін бақылау мақсатында жергілікті, провинциялық, мемлекеттік және федералдық не ел реттеулеріне немесе аккредитация ұйымдарына сәйкес басқару материалдарын сынау нөмірін, түрін және жиілігін анықтауы мүмкін. Жалпы сапаны басқару нұсқауын пайдаланушы CLSI MM3 14 және EP12 15 құжаттарынан қарай алады. 1. External Control (Сырттан басқару) материалдарын BD қамтамасыз етпейді. Сырттан оң және теріс басқарулар BD MAX жүйесінің бағдарламалық құралы арқылы үлгінің сынақ нәтижесін талқылау мақсатында пайдаланылмайды. Сырттан басқарулар емделуші нұсқалары ретінде қарастырылады. Сырттан басқарудың талдау нәтижесін талқылау үшін Нәтижелер түсіндірмесі бөліміндегі кестені қараңыз. 2. BD MAX жүйесі бойынша әрбір зертхана параметрінде тиісті тексеру процесіне қол жеткізгенге дейін, күн сайын кем дегенде бір (1) сырттан оң басқару және бір (1) сырттан теріс басқару орындалу қажет. Бақылау сынақтың азайтылған жиілігі қолданылатын ережелерге сай болу керек. 3. Сырттан оң басқару элементі маңызды реагент сәтсіздігін бақылауға қолданылады. Сырттан теріс басқару элементі реагентті не қоршаған ортаның бүлінуін (немесе ауысатын қалдығын) мақсатты нуклеин қышқылы арқылы анықтау үшін пайдаланылады. 7

8 4. Пайдаланушыға зертхана үшін ең тиімді сапаны бақылау бағдарламасын таңдауға мүмкіндік беру үшін, сырттан басқару элементтерінің әртүрлі түрлері ұсынылады. а. Сырттан теріс басқару: Егілмеген BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) үлгі буферінің түтігі. BD компаниясы бақылау дайындығы нәтижесінде ықтимал бүлінуді азайту үшін Сыртқы оң бақылау құралынан бұрын Сыртқы теріс бақылау құралының дайын болғанын ұсынады. ә. Сырттан оң басқару: BD компаниясы мақсатты ағзалардың тропозоит формасының ауыр дәстүрлі әдістері мен барлық нысандардың ағзаның ооцисталар/цисталар бөліктерінің коммерциялық қолжетімділігінің жетіспеушілігіне байланысты сыртқы оң бақылау құралдары үшін төмендегі 1-кестеде геномдық ДНҚ пайдалануды ұсынады. 1-кесте: Сыртқы оң басқару құралына арналған коммерциялық түрде қолжетімді сызықтар Сырттан оң басқару сызығы Giardia intestinalis (Lambl) (ATCC 30888D) Cryptosporidium parvum (ATCC PRA-67D) Entamoeba histolytica (ATCC 30459D) Геномдық ДНҚ концентрациясы пг/мл пг/мл 150 пг/мл ЕСКЕРТПЕ: Өндіруші ұсынған бойынша сақтаған кезде геномдық ДНҚ есептелген қойма ерітінділері төменде сипатталғандай бірнеше үштік қоспаларды дайындауға пайдаланылады. (1) Егер элемент құрғатылған формада алынса, онда жеткізушінің өнім парағында көрсетілгендей түтік мазмұнын қайта гидраттаңыз, 1X TE буферінің (10 мм Tris HCl, 1 мм EDTA, ph=8,0, Молекулярлық биология дәрежесі) 50 мкл мөлшері. (2) 260 нм деңгейіндегі абсорбция арқылы спектрофотометрия көмегімен әрбір ДНҚ дайындығын санаңыз. (3) 1X TE буферінде сериялық еріту жұмыстары арқылы үш ДНҚ дайындығының қоспасын дайындаңыз, ерітіндідегі геномдық ДНҚ жоғарғы кестеде тізімделеді. (4) Жақсылап араластыру үшін ерітіндіні шайқап, ерітіндінің 10 мкл мөлшерін BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) үлгі буферінің түтігіне калибрленген тамшуыр арқылы жеткізіңіз. Әрбір мақсатты ағзаның геномдық үлгі буферінің түтігіндегі 5X белгілі бір АШ деңгейінде пайда болады. (5) Үлгі буферінің түтігін көк аралық қақпақпен жауып, түтікті 5 секунд шайқаңыз. 5. Барлық сырттан басқару элементтері күтілген нәтижелер беруге тиіс (сырттан оң басқару үшін оң, сырттан теріс басқару үшін теріс және сәтсіз сырттан басқару элементтері жоқ (шешілмеген, анықталмаған немесе аяқталмаған нәтижелер)). 6. Оң сынақ нәтижесін беретін сырттан теріс басқару үлгінің өңделуін және/немесе ластану оқиғасын көрсетеді. Араласып кетуді және /немесе ластануды болдырмау үшін үлгінің өңдеу әдісін қарап шығыңыз. Теріс сынақ нәтижесін беретін сырттан оң басқару үлгінің өңделуін және ластану мәселесін немесе реагент ақаулығын көрсетеді. Өңдеу/дайындау әдісінің үлгісін қарап шығыңыз. 7. Шешілмеген, анықталмаған немесе аяқталмаған сынақ нәтижелерін беретін сырттан басқару реагенттің немесе BD MAX жүйесінің сәтсіздігін көрсетеді. Кез келген қате хабарламаларды BD MAX жүйесінің мониторынан тексеріңіз. Ескертулер мен қателік кодтарын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығындағы 12 Жүйе қателігінің қорытындысы бөлімін қараңыз. Егер ақаулық шешілмесе, жабық дорбадағы реагенттерді немесе жаңа талдау жинағын пайдаланыңыз. 8. Әрбір экстракция түтігінде үлгі өңделуін басқару элементі бар, ол синтетикалық мақсатты ДНҚ реттілігі бар плазмида болып табылады. Талдаудың болжамдылығын қамытып, сынаманы өңдеуді басқару құралы шығарылады, элюцияланады және өңделген үлгіде бар кез келген ДНҚ бірге күшейтіледі. Сынаманы өңдеу құралы ДНҚ ұсталуының тиімділігін, жуылуын және үлгіні өңдеу қадамдарының барысында элюциялауын бақылайды, сондай ақ, ПТР талдаулар кезінде ДНҚ күшейту және анықтау тиімділігін бақылайды. Егер үлгіні өңдеуді басқару құралы нәтижесі қабылдау шарттарына сәйкес келмесе, үлгі нәтижесі UNR (Шешілмеген) ретінде хабарланады; дегенмен, кез келген оң (POS) талдау нәтижесі хабарланады және ешбір нысаны теріс (NEG) ретінде аталмайды. Шешілмеген нәтиже үлгімен байланыстырылатын ингибицияны немесе реагент сәтсіздігін көрсетеді. Шешілмеген болып есептелетін кез келген үлгіні төмендегі Қайталама сынақ процедурасы бөліміне сәйкес қайталаңыз. НӘТИЖЕЛЕРДІ ТАЛДАУ Нәтижелерді BD MAX жүйесінің мониторының <Results> (Нәтижелер) терезесінің <Results> (Нәтижелер) қойындысынан көруге болады. BD MAX жүйесінің бағдарламалық құралы сынақ нәтижелерін автоматты түрде талдайды. Әрбір талданатын зат үшін және үлгі өңделуін басқару элементіне нәтижелер беріледі. Нысанның және SPC күшейту күйіне негіздеп, сынақ нәтижесін NEG (теріс), POS (оң) не UNR (шешілмеген) ретінде атауға болады. IND (анықталмаған) немесе INC (аяқталмаған) нәтижелер BD MAX жүйесінің сәтсіздігінен болады. Жартылай UNR (шешілмеген) жағдайда бір немесе бірнеше нысанда POS (оң) нәтиже және басқа нысандарда UNR (шешілмеген) нәтиже болған кезде ешбір нысана NEG (теріс) ретінде аталмайды. 8

9 2-кесте: BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) нәтижесінің талдауы Берілген талдау нәтижесі Нәтиже түсіндірмесі a Glamb POS Giardia lamblia анықталған ДНҚ Glamb NEG Glamb UNR Crypto POS Giardia lamblia анықталмаған ДНҚ Шешілмеген - ингибиторлық үлгі немесе реагент сәтсіздігі; мақсатты немесе үлгіні өңдеуді басқару құралын күшейтусіз Cryptosporidium parvum немесе hominis анықталған ДНҚ Crypto NEG Crypto UNR Ehist POS Cryptosporidium parvum немесе hominis анықталмаған ДНҚ Шешілмеген - ингибиторлық үлгі немесе реагент сәтсіздігі; мақсатты немесе үлгіні өңдеуді басқару құралын күшейтусіз Entamoeba histolytica анықталған ДНҚ Ehist NEG Ehist UNR IND INC Entamoeba histolytica анықталмаған ДНҚ Шешілмеген - ингибиторлық үлгі немесе реагент сәтсіздігі; мақсатты немесе үлгіні өңдеуді басқару құралын күшейтусіз Анықталмаған нәтиже BD MAX жүйесінің сәтсіздігінен болады (ескерту немесе қате кодтары бар ә ) Аяқталмаған сынақ топтамасы (ескерту немесе қате кодтары бар ә ) a BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) нәтижелері институционалдық бағдарламаларға және тәжірибелерге сәйкес сақтық шараларының деңгейін басқару үшін пайдаланылуы мүмкін. ә Ескертулер мен қателік кодтарын талқылау үшін BD MAX жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығындағы 12 "Ақаулықтарды жою" бөлімін қараңыз. СЫНАҚ ПРОЦЕДУРАСЫН ҚАЙТАЛАҢЫЗ ЕСКЕРТПЕ: Үлгі көлемі бір қайталама сынақ үшін BD MAX System жүйесіндегі үлгі буферінің түтігінен қолжетімді C температурасында сақталған үлгі буферінің түтігі үшін қайта сынау 48 сағ аралығында үлгісі бар алғашқы үлгі буферінің түтігі егілгеннен кейін орындалуы қажет. Баламалы, 2 8 C температурада сақталған үлгі буферінің түтіктері үшін қайта сынау 120 сағат (5 күн) аралығында орындалуы қажет. Сонымен қатар, қалған дәрет үлгісін қайталама сынақ үшін 2 8 C сақталса, 5 күн аралығында немесе 2 25 C сақталса 48 сағат аралығында пайдалануға болады. ЕСКЕРТПЕ: Жаңа үлгілер ұқсас сынақ топтамасында қайталама үлгілермен сыналуы мүмкін. UNR (Шешілмеген) нәтиже Шешілмеген нәтижелер, үлгімен байланыстырылатын ингибицияны немесе реагент сәтсіздігін болдырмайтын тиісті нысан немесе сынаманы өңдеуді басқару құралы күшейту оқиғасында алынуы мүмкін. Егер сынаманы өңдеуді басқару құралы күшейтілмесе, сынама UNR (шешілмеген) ретінде хабарланады; дегенмен, кез келген POS (оң) талдау нәтижелері хабарланады және ешбір нысана NEG (теріс) ретінде аталмайды. BD MAX System жүйесі әрбір нысан нәтижелерін жекелей хабарлайды және UNR (шешілмеген) нәтиже бір немесе бірнеше BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) нысандары үшін қамтылуы мүмкін. Толық UNR (шешілмеген) жағдайда барлық нысандарда UNR (шешілмеген) нәтиже болған орында сынақты қайталау қажет. Жартылай UNR (шешілмеген) жағдайда бір немесе бірнеше нысанда POS (оң) нәтиже және басқа нысандарда UNR (шешілмеген) нәтиже болған кезде сынақтың жоғарыдағыдай қайталануы талап етіледі. Кейбір жағдайларда ерекше нәтижелер бастапқыда POS (оң) ретінде хабарланған осы нысандарға сынақ қайталанған кезде қаралуы мүмкін. Ағымдағы зертханалық процедураларға сәйкес тиісті процедураларды орындаңыз. Үлгі(лер) өздеріне қатысты үлгі буферінің түтіктерінен жоғарыда анықталған мерзім ішінде қайталануы мүмкін. Үлгілерді бір (1) минуттай шайқап, BD MAX жүйесінің жұмыс бөлімінен қайта қосыңыз. Қалған дәрет сынамасы, сондай-ақ, жаңа Үлгі буферінің түтігімен қайталама сынақ үшін жоғарыда анықталған мерзім ішінде пайдалануы мүмкін. Үлгі дайындау бөлімінен өшіріп, қайта қосыңыз. 9

10 IND (Анықталмаған) нәтиже Анықталмаған нәтижелерді жүйе сәтсіздігі орын алған жағдайда алуға болады. Үлгілер өздеріне қатысты үлгі буферінің түтіктерінен жоғарыда анықталған мерзім ішінде қайталануы мүмкін. Үлгілерді бір (1) минуттай шайқап, BD MAX System жүйесінің жұмысы бөлімінен қайта қосыңыз. Сонымен қатар, қалған дәрет сынамасы жаңа үлгі буферінің түтігімен қайталама сынақ үшін жоғарыда анықталған мерзім ішінде пайдалануы мүмкін. Үлгі дайындау бөлімінен өшіріп, қайта қосыңыз. Ескерту мен қателік код хабарламаларын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығын 12 қараңыз (Ақаулықтарды жою бөлімі). INC (Аяқталмаған) нәтиже Аяқталмаған нәтижелер үлгі дайындау немесе ПТР сәтсіз орындалған оқиғасында алынуы мүмкін. Үлгі(лер) өздеріне қатысты үлгі буферінің түтіктерінен жоғарыда анықталған рұқсат етілген мерзім ішінде қайталануы мүмкін. Үлгілерді бір (1) минуттай шайқап, BD MAX System жүйесінің жұмыс бөлімінен қайта қосыңыз. Қалған дәрет сынамасы, сондай-ақ, жаңа Үлгі буферінің түтігімен қайталама сынақ үшін жоғарыда анықталған мерзім ішінде пайдалануы мүмкін. Үлгі дайындау бөлімінен өшіріп, қайта қосыңыз. Ескерту мен қателік код хабарламаларын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығын 12 қараңыз (Ақаулықтарды жою бөлімі). External Control (Сырттан басқару) ақауы Сыналған кезде сырттан басқару күтілген нәтижелерді беру керек. Егер сынамаларды сырттан басқарудың қате нәтижесі себебінен қайталау қажет болса, олар жоғарыда анықталған мерзім ішінде жаңадан дайындалған сыртқы басқарулармен өздерінің үлгі буферінің түтігінен қайталануы керек. Үлгілерді 1 минуттай шайқаңыз және BD MAX жүйесінің жұмыс бөлімінен қайта қосыңыз. Pre-Warm (Алдын ала жылыту) ақаулығы Алдын ала жылыту ақаулығы әсер етілген үлгі буферінің түтіктеріі толық 30 минуттық суыту циклі үшін алдын ала жылыту станциясында қалуы керек. Суыту циклі аяқталған уақытта бірдей үлгі буферінің түтіктері көмегімен алдын ала жылыту процедурасын BD Pre-warm Heater (алдын ала жылыту құралы) құралының операциясы бөлімінде сипатталғандай қайта іске қосыңыз, қамтамасыз етілген үлгі буферінің түтіктері "Сақтау және тұрақтылық" бөліміндегі уақыт шектеріне сәйкес келеді. Егер үлгі буферінің түтіктерінің Сақтау және тұрақтылық уақытының шегінің сыртында болса, "Үлгіні дайындау" бөлімін қайта іске қосу арқылы бастапқы үлгіден жаңа үлгі буферінің түтіктерін дайындаңыз. ПРОЦЕДУРА ШЕКТЕУЛЕРІ Бұл өнім тек консервантсыз не 10% формалин бекітілген адам дәреті үлгілерімен бірге пайдалану үшін қолданылады. Тік ішектің дәрет үлгілері және бариймен ластанған дәреттер BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) тақтасымен тексерілмеді. Қате нәтижелер үлгіні тиісті емес түрде жинау, өңдеу, сақтау, техникалық қате, үлгіні араластырып алу салдарынан немесе үлгідегі ағзалардың саны сынақтың аналитикалық сезгіштігінен төмен болу себебінен пайда болуы мүмкін. Егер BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) нәтижесі АНЫҚ ЕМЕС, АЯҚТАЛМАҒАН немесе ШЕШІЛМЕГЕН болса, сынақты қайталау керек. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) оң нәтижесі өмірге қабілеттілігі бар ағзалардың бар болу мүмкіншілігін міндетті түрде білдірмейді. Дегенмен, BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) ағзаларын анықтауға мүмкіндік беретін Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis немесе Entamoeba histolytica ішінен ДНҚ болуын анықтайды. Праймердегі немесе зондты байланыстыратын аймақтардағы мутациялар немесе полиморфизмдер нысаналы ағзаларды анықтауға әсер етеді, нәтижесінде ол BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) талдауымен бірге жалған теріс нәтижеге әкеледі. ПТР-негізделген барлық in vitro диагностикалық сынақтар, талдаудың аналитикалық сезгіштік төмен мақсаттың өте төмен деңгейлері анықталуы мүмкін, бірақ нәтижелердің өрбу қабілеті жоғары болмауы мүмкін. Жалған теріс нәтижелер нуклеин қышқылын дұрыс емес жинаудан, үлгілерді тасымалдау немесе сақтау себебінен жоғалту немесе дұрыс емес ағза лизисі себебінен пайда болуы мүмкін. ПТР күшейтетін ингибиторлары бар үлгілерді анықтауға көмек көрсету үшін үлгі өңделуін басқару сынаққа қосылды. Егер нуклеин қышқылы дұрыс емес жинаудан, үлгілерді тасымалдау немесе сақтау себебінен жоғалғанын немесе дұрыс жасушалар лизисін үлгі өңделуін басқару білдірмейді. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) нәтижелері клиникалық зерттеулер мен дәрігерге қолжетімді басқа да ақпаратқа қосымша ретінде пайдаланылуы керек. Барлық in vitro диагностикалық сынақтар секілді, оң және теріс болжалды мәндер таратылуына тығыз байланысты болады. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) орындалуы таралудың және толтырудың сыналғанына байланысты болуы мүмкін. BD MAX Sample Buffer Tubes (үлгі буферінің түтіктері) ағза морфологиясының тексерісін қолдау үшін құрастырылмаған. Морфологиялық тексеріс немесе бояу түпнұсқалық үлгіден жасау қажет. Бұл сынақ өнімділігі Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis немесе Entamoeba histolytica емінің бақылауы үшін анықталмады. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) екі үлгі арасында бөлмей C. hominis және C. parvum ДНҚ анықтауға арналған. Бұл сынақ Cryptosporidium басқа үлгілерінен ДНҚ анықтауға арналмаған. Бұл сынақ сапалы әрі сандық мәндерді қамтамасыз етпейді және бар ағзалардың санын анықтамайды. Осы сынақтың орындалуы тыныс жолдары инфекциясының иммунитеті әлсіз және симптомдары жоқ емделушілерге қолдану үшін бағаланбаған. 10

11 Бұл сынақ үшін кедергі заттардың әсері төмендегі Кедергі жасайтын заттар бөлімінде тізімделген заттар үшін бағаланады. Төмендегі Кедергі жасайтын заттар бөлімінде сипатталған осылардан басқа заттар үшін ықтимал кедергі бағаланбады. Аналитикалық специфика бөлімінде тізімделгендерден басқа ағзалардан тұратын кросс реактивтілік бағаланбады. ӨНІМДІЛІК СИПАТТАМАЛАРЫ BD MAX Enteric Bacterial Panel (ішек паразитінің тақтасы) өнімділік сипаттары бірнеше тораптық зерттеуде анықталды. Зерттеу үлгілер жүйелі емделуші күтімінің бөлігі жиналып, сынаққа жіберіліп, BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) тақтасымен сыналатын жалпы бес (5) клиникалық орталықты қамтиды. Қосымша жеті (7) жинау орталығы орталық орында бағаланатын үлгілерді тіркейді. Балалар немесе ересек емделушілерден жиналған үлгілер мақсатты паразиттік диагностикалық сынақтар денсаулық сақтау провайдерімен реттелетін ауыр гастроэнтерит, энтерит немесе колит ретінде қарастырылады. Проспективті үлгілері үшін стандартты сілтеме әдісі (DFA микроскопиясы және үш түрлі бояу) жиынтық сілтеме әдісінен тұратын балама ПТР және қос бағытты реттен кейінгі ішек паразиттік патогендерін анықтау үшін орындалды. DFA әдісі Cryptosporidium түр деңгейі ретінде анықтайды, C. hominis немесе C. parvum басқа қос бағытты ретпен анықталатын DFA оң үлгілері теріс сілтеме әдіс ретінде қарастырылды. Қосымша әдісі сынағы әрбір өнімге сәйкес бума енгізіліміне сәйкес орындалды. Ретроспективті үлгілер үшін тарихи орта нәтижелері жинау торабында жазылды және үлгілер қайта өсірілмеді. Тарихи орта нәтижелері мақсатты ДНҚ бар екендігін растау мақсатында құрама қосымша әдісі бөлігі ретінде балама ПТР және қос бағытты рет арқылы расталды. Жалпы проспективті үлгі ( % формалин бекітілген, сақталмаған және 18 үйлесімсіз) және 411 ретроспективті үлгі (148 10% формалин бекітілген, 251 сақталмаған және 12 үйлесімсіз) клиникалық бағалауға алынды. 3-кесте емделуші жасы мен үлгі түрі бойынша тіркелген үйлесімді үлгілердің санын сипаттайды. Жалпы 128 ретроспективті үлгі төмендегі өнімділік есептеулеріне қосылмады, себебі тарихи нәтижелер балама ПТР және қос бағытты ретпен расталмады. 4 7 кестелері клиникалық сынақ барысында қарастырылған BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) өнімділік сипаттамаларын сипаттайды. 3-кесте: Жастар тобы және үлгі түрі бойынша сәйкес клиникалық сынақты тіркеу қорытындысы Жастар тобы Үлгі түрі Формалин 10% Консервантсыз Біріктірілген 0 1 ай ай және 2 жыл жыл жыл жыл жылдан аса Белгісіз Жалпы % формалин бекітілген үлгі түрі үшін BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) 95,5% және 99,7% Giardia lamblia проспективті оң және теріс үлгілерін, сәйкесінше 100% және 100% ретроспективті оң және теріс үлгілерін анықтады. Консервантсыз үлгі түрі үшін BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) 94,4% және 100% Giardia lamblia проспективті оң және теріс үлгілерін, сәйкесінше 98,6% және 94,9% ретроспективті оң және теріс үлгілерін анықтады (4-кесте). 11

12 Үлгі түрі 10% формалин бекітілген Консервантсыз Үлгі тегі Проспективті Ретроспективті Проспективті Ретроспективті 4-кесте: Giardia lamblia Клиникалық өнімділігі BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) Оң Анықтама әдісі Теріс Жалпы Оң Теріс Жалпы СЕЗГІШТІК (95% Сенімді аралық): 95,5% (78,2%, 99,2%) ЕРЕКШЕЛІК (95% Сенімді аралық): 99,7% (99,1%, 99,9%) Оң Теріс Жалпы Оң пайыздық келісу (PPA) (95% Сенімді аралық): 100,0% (93,5%, 100,0%) Теріс пайыздық келісу (NPA) (95% Сенімді аралық): 100,0% (94,9%, 100,0%) Оң Теріс Жалпы СЕЗГІШТІК (95% Сенімді аралық): 94,4% (74,2%, 99,0%) ЕРЕКШЕЛІК (95% Сенімді аралық): 100,0% (99,4%, 100,0%) Оң ,6 79 Теріс Жалпы Оң пайыздық келісу (PPA) (95% Сенімді аралық): 98,6% (92,6%, 99,8%) Теріс пайыздық келісу (NPA) (95% Сенімді аралық): 94,9% (89,8%, 97,5%) 1 Балама ПТР және қос бағытты рет сілтеме әдісінің құрамдасы осы үлгі үшін теріс болды. Сілтеме әдістің DFA құрамдасы оң болды. Балама ПТР және қос бағытты ретпен сәйкес емес сынақты қайталау орындалды және теріс нәтиже берді. DFA арқылы сәйкес емес сынақты қайталау орындалды және теріс нәтиже берді. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау он екі (12) қайталамада орындалды және теріс нәтижелер (0/12) берді. Сонымен қатар, үлгі сәйкес емес сынақ ретінде Giardia EIA антигенімен сыналды және теріс нәтиже берді. 2 Бір (1) үлгі EIA сәйкес емес сынақ ретінде анықтайтын Giardia антигенімен сыналды және теріс нәтиже берді. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау осы үлгінің алты (6) қайталамасында орындалды және 1/6 оң нәтиже берді. Басқа екі (2) үлгі үшін сәйкес емес сынақ орындалмады. 3 Балама ПТР және қос бағытты рет сілтеме әдісінің құрамдасы осы үлгі үшін теріс болды. Сілтеме әдістің DFA сегменті оң болды. Балама ПТР және қос бағытты ретпен сәйкес емес сынақты қайталау орындалды және теріс нәтиже берді. DFA арқылы сәйкес емес сынақты қайталау орындалды және оң нәтиже берді. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау алты (6) қайталамада орындалды және теріс нәтижелер (0/6) берді. Сонымен қатар, осы үлгі сәйкес емес сынақ ретінде EIA антигенімен сыналды және теріс нәтиже берді. 4 Осы үлгі үшін сәйкес емес сынақ орындалмады. 5 Бір (1) үлгі EIA анықтаушы антигенмен және сәйкес емес сынақ ретінде коммерциялық түрде қолжетімді молекулярлық талдаумен сыналды және екеуіне оң нәтиже берді. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау осы үлгінің алты (6) қайталамасында орындалды және оң нәтижелер (6/6) берді. 6 Бір (1) үлгі EIA анықтаушы антигенмен және сәйкес емес сынақ ретінде коммерциялық түрде қолжетімді молекулярлық талдаумен сыналды. EIA оң нәтиже берді және молекулярлық талдау теріс нәтиже берді. BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау осы үлгінің он бір (11) қайталамасында орындалды және бес оң нәтиже (5/11) берді. Басқа бес (5) үлгі үшін сәйкес емес сынақ орындалмады. 12

13 10% формалин бекітілген үлгі түрі үшін BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) 90,3% және 99,8% Cryptosporidium hominis/parvum проспективті оң және теріс үлгілерін, сәйкесінше 93% және 100% ретроспективті оң және теріс үлгілерін анықтады. Cary-Blair консервантсыз үлгі түрі үшін BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) тақтасы 100% және 99,5% Cryptosporidium hominis/parvum проспективті оң және теріс үлгілерін, сәйкесінше 97,7% және 98,4% ретроспективті оң және теріс үлгілерін анықтады (5-кесте). Үлгі түрі 10% формалин бекітілген Консервантсыз 5-кесте: Cryptosporidium hominis/parvum Клиникалық өнімділік Үлгі тегі Проспективті Ретроспективті Проспективті Ретроспективті BD MAX Анықтама әдісі Enteric Parasite Panel (ішек Жалпы паразитінің Оң Теріс тақтасы) Оң Теріс 6 1, Жалпы СЕЗГІШТІК: 90,3% (80,5%, 95,5%) ЕРЕКШЕЛІК: 99,8% (99,2%, 99,9%) Оң Теріс Жалпы Оң пайыздық келісу (PPA): 93% (81,4%, 97,6%) Теріс пайыздық келісу (NPA): 100% (95,3%, 100%) Оң Теріс Жалпы СЕЗГІШТІК: 100% (90,1%, 100%) ЕРЕКШЕЛІК: 99,5% (98,6%, 99,8%) Оң Теріс Жалпы Оң пайыздық келісу (PPA): 97,7% (88,2%, 99,6%) Теріс пайыздық келісу (NPA): 98,4% (95,3%, 99,4%) 1 Барлық алты (6) үлгі жиынтық сілтеме әдісінің DFA құрамдасымен оң болды. C. parvum, үш (3) үлгісі ретінде реттік бір (1) үлгі теріс болды және екеуі (2) жиынтық сілтеме әдісінің балама ПТР және қос бағытты ретімен хабарланбайтын болды. 2 Балама ПТР және қос бағытты ретпен сәйкес емес сынақты қайталау барлық алты (6) үлгіде орындалды. Cryptosporidium parvum ретіндегі реттік бір (1) үлгі, Cryptosporidium felis ретіндегі реттік бір (1) үлгі және қалған төрт (4) сәйкес емес сынақты қайталаумен ПТР теріс болды. Сонымен қатар, Cryptosporidium және Giardia арасында бөлмей, EIA анықтаушы антигенмен сәйкес емес сынақ орындалды. Екі үлгі EIA теріс болды және төрт үлгі EIA оң болды, басқа сынақ әдістері бойынша Giardia үшін екеуі оң болды. 3 Бір DFA оң үлгі Cryptosporidium meleagridis анықтайтын балама ПТР және қос бағытты реттік нәтижелер негізінде сілтеме әдіспен теріс ретінде жіктелді. 4 Алты DFA оң үлгі (4) Cryptosporidium canis, (1) C. meleagridis және (1) Cryptosporidium spp. анықтайтын балама ПТР және қос бағытты реттік нәтижелер негізінде сілтеме әдіспен теріс ретінде жіктелді. (анықталмаған). 5 BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау он екі (12) қайталамада орындалды. Бір үлгі он екі (12) қайталаманың бесеуі (5) үшін оң болды және бір үлгі он екі (12) қайталаманың екеуі (2) үшін оң болды. 6 BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау алты (6) қайталамада орындалды. Бір үлгі алты (6) қайталаманың бесеуі (5) үшін оң болды және бір үлгі алты (6) қайталаманың үшеуі (3) үшін оң болды. Үшінші үлгі алты (6) қайталаманың алтауында (6) теріс болды. 7 BD MAX Enteric Parasite Panel (ішек паразитінің тақтасы) арқылы сәйкес емес сынақты қайталау алты (6) қайталамада орындалды. Екі үлгі алты (6) қайталаманың алтауында (6) теріс болды. 13