ΠΕΙΡΑΜΑ ΓΕΝΕΤΙΚΗΣ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΣΗΣ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ E.coli ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ pglo. v=p6xd1bi0heo#t=80

Transcript

1 Φύλλο Εργασίας

2 ΠΕΙΡΑΜΑ ΓΕΝΕΤΙΚΗΣ ΤΡΟΠΟΠΟΙΗΣΗΣ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ E.coli ΜΕ ΤΗ ΧΡΗΣΗ ΤΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ pglo v=p6xd1bi0heo#t=80 Καθοδηγούμενη δομημένη διερεύνηση Η μεγάλη ιδέα Τα έμβια αποθηκεύουν, ανακαλούν, ανταποκρίνονται και μεταβιβάζουν τις πληροφορίες απαραίτητες για τη διαδικασία της ζωής. Πως είναι δυνατόν με τις τεχνικές της γενετικής μηχανικής να διαχειριστούμε την γενετική πληροφορία; Ουσιώδης ερωτήσεις Τι οργανισμό πρέπει να διαλέξω και γιατί; 1. Για να τροποποιήθεί γενετικά ενας ολόκληρος οργανισμός πρέπει το νέο γονίδιο να βρίσκεται σε κάθε κύτταρο του, λαμβάνοντας υπόψη αυτό ποιος οργανισμός θα είναι ιδανικός και ο απλούστερος υποψήφιος για τα πειράματα μας, ένας πολυκύτταρος ή ένας μονοκύτταρος; 2. Οι επιστήμονες θέλουν να γνωρίζουν αν το γνώρισμα του τροποποιημένου οργανισμού μπορεί να κληρονομηθεί στους απογόνους, ποιος οργανισμός θα είναι καλύτερος για τα πειράματα ένας που αναπτύσεται γρήγορα και κάθε νέα γενεά απαιτεί ώρες ή κάποιος που αναπαράγεται πολύ αργά (μήνες ή χρόνια); 3. Πρέπει να ληφθούν υποψη και τα χαρακτηριστικά ή οι ιδιότητες του οργανισμού που θα επιλεγεί ώστε να μην υπάρχει πρόβλημα ασφάλειας για το περιβάλλον ή τους μαθητές. Πως μπορώ να επιβεβαιώσω οτι τα κύτταρα μου έχουν τροποποιηθεί γενετικά; Ο στόχος της γενετικής τροποποιήσης είναι να αλλάξουν ιδιότητες του οργανισμού δηλαδή να αλλάξει ο φαινότυπος 1. Πριν την γενετική τροποποίηση πρέπει να γίνουν παρατηρήσεις του φαινοτύπου του οργανισμού 2. Περιγράψτε πως θα μπορούσατε να χρησιμοποιήσετε τα υλικά που σας δίνονται ωστε να προσδιορίσετε τις φαινοτυπικές αλλαγές του τροποποιημένου οργανισμού 3. Ποια νομίζετε οτι θα είναι πειραματικά σας αποτελέσματα που θα δείχνουν την δραση της αμπικιλλίνης στα κύτταρα της E.coli; Καθοδηγητικές ερωτήσεις 1. Πως άλλαξαν τα χαρακτηριστικά της E.coli σε σχέση με αυτά που παρατηρήσατε στην αρχή; 2. Αν τα τροποποιημένα κύτταρα έχουν αποκτήση την δυνατότητα να αναπτύσονται στην παρουσία της αμπικιλλίνης, τότε τη συμπέρασμα βγάζετε για την ικανότητα τους να ακτινοβολούν λαμπρό πράσινο UV φως; 3. Απο τα αποτελέσματα που συλλέξατε, μπορείτε να δώσετε αποδείξεις που να υποστηρίζουν την υπόθεση σας οτι οι αλλαγές που συνέβησαν οφείλονται στις διαδικασίες που εσεις εφαρμόσατε; 4. Παρατηρώντας τα αποτελέσματα σας στα τρυβλία αναπτυξης της Ecoli που δεν περιέχουν αμπικιλλίνη ή αραβινόζη, μπορείτε να εκτιμήσετε αν τα βακτήρια στα τρυβλία LB ειναι ανθεκτικά στην αμπικιλλίνη ; 5. Τι θα συνέβαινε αν αυτά τα βακτήρια μετραφέρονταν σε τρυβλία με αμπικιλλίνη; 6. Συχνά τα χαρακτηριστικά ενας οργανισμός ειναι αποτέλεσμα συνδιασμού των γονιδίων του και του περιβάλλοντος που αναπτύσεται. Ποιοι δύο παράγοντες πρέπει να ειναι παρόντες στο βακτηριακό περιβάλλον για να παρατηρήσουμε το πράσινο φώς; 7. Ποιο πλεονέκτημα πιστεύετε οτι έχουν οι οργανισμοί που μπορούν να ρυθμίζουν την εκφραση κάποιων γονιδίων τους σε εξάρτηση συγκεκριμένων συνθηκών του περιβάλλοντος;

3 ΦΥΛΛΟ ΕΡΓΑΣΙΑΣ Prezi παρουσίαση του πειράματος Τι οργανισμό πρέπει να διαλέξετε και γιατί; 1. Για να τροποποιήθεί γενετικά ενας ολόκληρος οργανισμός πρέπει το νέο γονίδιο να βρίσκεται σε κάθε κύτταρο του, λαμβάνοντας υπόψη αυτό ποιος οργανισμός θα είναι ιδανικός και ο απλούστερος υποψήφιος για τα πειράματα μας, ένας πολυκύτταρος ή ένας μονοκύτταρος;; 2. Οι επιστήμονες θέλουν να γνωρίζουν αν το γνώρισμα του τροποποιημένου οργανισμού μπορεί να κληρονομηθεί στους απογόνους, ποιος οργανισμός θα είναι καλύτερος για τα πειράματα ένας που αναπτύσεται γρήγορα και κάθε νέα γενεά απαιτεί ώρες ή κάποιος που αναπαράγεται πολύ αργά (μήνες ή χρόνια); ΒΗΜΑ 1 Τα τρυβλία με το άγαρ προετοιμάζονται 3 μέρες νωρίτερα Πρέπει να αφεθούν σε θερμοκρασία περιβάλλοντος τουλάχιστο για 2 μέρες πριν χρησιμοποιηθούν. Για το άγαρ προσθέτουμε 500ml απιονισμένο νερό σε μία φιάλη (Erlenmeyer) 1L και προσθέτουμε όλο το περιεχόμενο του LB θρεπτικού άγαρ πακέτου. Ανακινούμε καλά και θερμαίνουμε σε σημείο βρασμού στο φούρνο μικροκυμάτων ή σε ηλεκτρικό μάτι. Η διαδικασία γίνεται 3 φορές. Η αραβινόζη ειναι σε στερεή μορφή και με την βοήθεια πιπέτας προσθέτουμε στο φιαλίοδιο της 3ml διαλύματος μετασχηματισμού ή απιονισμένου αποστειρωμένου νερού Το ιδιο κάνουμε και στο φιαλίδιο της αμπικιλίνης Αποχύνουμε σε 16 τρυβλία LB θρεπτικού άγαρ περίπου 12 ml στο καθένα και τα ονομάζουμε LB. Το τοποθετούμε σε υδατόλουτρο ο κελσίου για να μην στεροποιηθεί Στο υπόλοιπο LB θρεπτικό άγαρ προσθέτουμε την αμπικιλίνη και αποχύνουμε σε 16 τριβλία περίπου 12 ml και τα ονομάζουμε LB/amp Στο υπόλοιπο LB θρεπτικό άγαρ+αμπικιλίνη προσθέτουμε την αραβινόζη και αποχύνουμε σε 8 τριβλία περίπου 12 ml στο καθένα και τα ονομάζουμε LB/amp/ara

4 Με μία αποστειρωμένη πιπέτα προσθέτουμε 250 μl διάλυμα ματασχηματισμού στην στεροποιημένη E.coli. Ανακινούμε το φιαλίδιο και το αφήνουμε σε θερμοκρασία δωματίου για 5min. Aποθηκεύουμε την E.coli στο ψυγείο για 24ώρες και μετά συνεχίζουμε το πείραμα. Φτιάχνουμε 8 καλλιέργιες Ε.coli επιμολύνοντας 8 τρυβλία LB με ενυδατομένη E.coli που παρασκευάσαμε την προηγουμένη. Η επιμόλυνση του θρεπτικού υλικού γίνεται όπως στην εικόνα δίπλα. Χρησιμοποιόντας αποστειρωμένη πιπέτα ρίχνουμε 250μl διαλύματος μετασχηματισμού στο φιαλίδιο που περιέχει σε στερεή μορφή το pglo plasmid DNA Για κάθε ομάδα προετοιμάζουμε μικρή ποσότητα διαλύματος μετασχηματισμού (1ml) και μικρή ποσότητα LB θρεπτικού άγαρ (1ml) σε μικροφιαλίδια που υπάρχουν στο kit και τα ονοματίζουμε. ΒΗΜΑ 2 Χαρακτηρίζουμε 2 κλειστά microtubes +pglo και pglo Τοποθετούμε τα microtubes σε στατό Ανοίγουμε τα 2 microtubes και με αποστειρωμένη πιπέτα βάζουμε 250μl διαλύματος μετασχηματισμού σε κάθε φιαλίδιο. Και τα τοποθετούμε στον πάγο Χρησιμοποιώντας αποστειρωμένη ράβδο με loop στη άκρη πέρνουμε απο μία αποικία βακτηρίων απο το τρυβλίο με την E.coli και την τοποθετούμε μέσα σε κάθε microtube και με περιστροφικές κινήσεις εναποθέσουμε στο διάλυμα μετασχηματισμού την αποικία σε κάθε microtube. Τοποθετείστε τους microtubes πίσω στο πάγο

5 Με μία νέα αποστειρωμένη ράβδο με loop απο το φιαλίδιο του πλασμιδίου πέρνουμε διάλυμα του πλασμιδίου που εμφανίζεται σαν φουσκάλα στο δακτύλιο της ράβδου. Αναμειγνύετε το διάλυμα του πλασμιδίου στα κύτταρα του microtube +pglo. Αν χρειαστεί βάλτε 10μl διαλύματος πλασμιδίου με τη βοήθεια μικροπιπέτας Δεν βάζουμε διάλυμα πλασμιδίου στο microtube pglo Βάλτε βαθία μέσα στον πάγο τα microtubes Και επωάστε για 10 min Ενω επωάζονται τα δείγματα μας τιτλοδοτούμε τα τρυβλία με το άγαρ όπως φαίνεται δίπλα στη εικόνα Θερμικό σοκ. Με την βοήθεια του στατό μεταφέρετε και τα δύο microtubes (+pglo και pglo ) στο υδατόλουτρο σε θερμοκρασία 42 ο C για ακριβώς 50 sec στη συνέχεια τοποθετείστε πολύ γρήγορα ξανά το στατό στον πάγο και επωάστε για 2min. Με δύο νέες αποστειρωμένες πιπέτες αποχύστε 250 μl διάλυμα LB ανάπτυξης σε κάθε microtube αφού τα έχετε αφαιρέσει απο τον πάγο και το στατό Στη συνέχεια επωάστε για 10 min σε συνθήκες δωματίου τα δείγματα σας Χρησιμοποιώντας μία νέα αποστειρωμένη πιπέτα για κάθε τρυβλίο βάλτε 100μl απο κάθε microtube με βάση το περιεχόμενο κάθε τριβλίου, απλώστε το δείγμα σε όλη την επιφάνεια του θρεπτικού υλικού. Στοιβάξτε τα τρυβλία σας ανα ομάδα βαζοντας τα αναποδα και επωάστε σε θερμοκρασία δωματίου για 24 ώρες.

6 ΕΡΩΤΗΣΕΙΣ 1.Με ποιο τρόπο θα μπορούσατε να αποδείξετε την πιθανή δράση της αμπικιλίνης στην E.coli χρησιμοποιώντας τρυβλία με θρεπτικό υλικό; Περιγράψτε πώς θα μπορούσατε να χρησιμοποιήσετε δύο τρυβλία LB θρεπτικό- άγαρ, αποικίες E. coli, και αμπικιλλίνη για να καθορίσουν τον τρόπο τα κύτταρα E. coli επηρεάζονται από αμπικιλλίνη. 2. Τι πειραματικά δεδομένα αναμένεται να βρείτε για την επίδραση της αμπικιλίνης στην E.coli. 3. Σε ποια τρυβλία θα περιμένατε να βρείτε περισσότερα βακτήρια, όπως το αρχικό μη μετασχηματισμένο που παρατηρείται αρχικά; Εξηγήστε πρόβλεψή σας. 4. Σε ποια τρυβλία πιστεύετε οτι θα έχουν αναπτυχθεί γενετικά μετασχηματισμένα βακτήρια; Εξηγήστε πρόβλεψή σας.. 5. Ποια τρυβλία πρέπει να συγκριθούν για να προσδιορισθεί αν έχει συμβεί γενετική τροποποίηση, και γιατί; 6. Ποια η σημασία των τρυβλίων ελέγχου Ίσες ποσότητες κύτταρα θα μπορούσαν να απλώνονται σε δύο διαφορετικές πλάκες θρεπτικού άγαρ LB,μία η οποία περιέχει μόνο LB θρεπτικού άγαρ και μία η οποία περιέχει αμπικιλλίνη+ LB θρεπτικού άγαρ. Η ανάπτυξη του E. coli θα μπορούσε να συγκριθεί με τις δύο πλάκες. Αν αμπικιλλίνη επηρεάζει αρνητικά την ανάπτυξη του E. coli, τότε θα πρέπει να υπάρχουν λιγότερες αποικίες των βακτηρίων επί αυτής της πλάκας. Εάν αμπικιλλίνη δεν έχει καμμία επίδραση, θα πρέπει να υπάρχουν περίπου ίσοι αριθμοί αποικιών σε αμφότερες τις πλάκες. Τα αντιβιοτικά σκοτώνουν τα βακτήρια συνήθως (είναι bacteriocidic=βακτηριοστατική) ή αναστέλλουν την ανάπτυξή τους.έτσι, θα πρέπει να υπάρχουν λίγες, αν υπάρχουν, βακτηριακές αποικίες στο τρυβλίο με αμπικιλλίνη. Η παρουσία τυχόν αποικιών στο τρυβλίο με αμπικιλλίνης υποδήλωνει ότι τα εν λόγω βακτήρια είναι ανθεκτικά στο αντιβιοτικό αμπικιλλίνη. Βακτήρια που μοιάζουν με το μημετασχηματισμένο θα βρεθούν στο LB / (-) pglo τρυβλίο. Αυτά τα βακτήρια απομακρύνθηκαν από το αρχικό τρυβλίο, δεν έχουν υποστεί καμία προσθήκη πλασμίδιου, και απλώς επανατοποθετούνται εκ νέου σε ένα τρυβλίο με LΒ. Έτσι, είναι σχεδόν πανομοιότυπο με τα μημετασχηματισμένο του αρχικού τρυβλίου. Τα γενετικά τροποποιημένα βακτήρια θα βρίσκονται στα τρυβλία LB / amp και LB / amp / ara. Οσα βακτήρια μετασχηματίστηκαν έχουν προσλάβει το πλασμίδιο που εκφράζει pglo γονίδιο που προσδίδει την ιδιότητα ανθεκτικότητας στην αμπικιλλίνη.αυτά τα κύτταρα μπορούν να επιβιώσουν στα τρυβλία που περιέχουν αμπικιλλίνη Πρέπει να συγκριθούν τα τρυβλία LB / amp (-) pglo και η LB / amp (+)pglo. Κύτταρα που δεν έχουν υποστεί επεξεργασία με DNA pglo δεν πρέπει να εκφράσουν το γονίδιο ανθεκτικότητας στην αμπικιλλίνη και δεν θα αναπτυχθούν στα αντίστοιχα τρυβλία. Κύτταρα που έχουν υποστεί επεξεργασία με DNA pglo πρέπει να περιέχουν το πλασμίδιο και να εκφράσουν το γονίδιο ανθεκτικότητας στην αμπικιλλίνη. Ενα τρυβλίο ελέγχου είναι ένας οδηγός που χρησιμοποιείται για να σας βοηθήσει να ερμηνεύσουμε τα πειραματικά αποτελέσματα. Στο πείραμα αυτό, και τα δύο (-) τρυβλία pglo είναι ελέγχου. Το LB / amp τρυβλίο

7 7.Ο στόχος του γενετικού μετασχηματισμού είναι να αλλάξει τα χαρακτηριστικά ενός οργανισμού (φαινότυπος). Για να μπορέσουμε να παρατηρήσουμε πιθανή αλλαγή στο φαινότυπο ενός οργανισμού πρέπει να εξετάσουμε τον φαινότυπο του πριν την διαδικασία. Δείτε τις αποικίες της E. coli στα αρχικά τρυβλία ανάπτυξης του βακτηρίου. Καταγράψτε τα χαρακτηριστικά όπως χρώμα των αποικιών, ο αριθμός των αποικιών, διανομή των αποικιών στο τρυβλίο Πόση βακτηριακή ανάπτυξη παρατηρείται στα τρυβλία ; 9. Τι χρώμα έχουν οι αποικίες των βακτηρίων; 10. Μετρήστε τις αποικίες των βακτηρίων σε κάθε τρυβλίο ελέγχου μπορεί να συγκριθεί με την LB / amp (+) πλάκα pglo. Αυτή η σύγκριση δείχνει ότι η γενετική τροποποίηση παράγει βακτηριακές αποικίες που μπορούν να αναπτυχθούν σε αμπικιλλίνη (λόγω της πρόσληψης του πλασμιδίου pglo και η έκφραση του γονίδιου αντίστασης στην αμπικιλλίνη). Το (-) τρυβλίο pglo / έλεγχος LB μπορεί να συγκριθεί με οποιαδήποτε από τα τρυβλία LB / amp για να δείξει ότι χρειάζεται η πρόσληψη του πλασμιδίου για να μπορέσει να αναπτυχθεί υπό την παρουσία αμπικιλλίνης. Το (-) τρυβλίο pglo LB / amp δείχνει ότι η καλλιέργεια εκκίνησης δεν αναπτύσσεται στο τρυβλίο / amp LB. Χωρίς αυτόν τον έλεγχο δεν ειναι δυνατόν να ξέρουμε αν τα τρυβλία με αποικίες στο LB / amp πλάκα (+) pglo περιέχουν πραγματικά μετασχηματισμένα βακτήρια Παρατηρείται οτι υπάρχουν πολλαπλές αποικίες τόσο για τα LB / amp και στα LB τρυβλία / amp / ara που έλαβαν το πλασμίδιο pglo (περίπου ~ 75 αποικίες). Δεν πρέπει να υπάρχει αύξηση στην LB / amp (-) pglo τρυβλίο. Θα πρέπει να υπάρχει ένας στρώμα βακτηρίων στο LB (-) pglo τρυβλίο. Τα βακτήρια στο (+) pglo LB τρυβλίο / amp και τα (-) τρυβλία pglo LB θα πρέπει να είναι ελαφρώς λευκά. Τα βακτήρια στο (+) pglo LB πλάκα / amp / ara θα πρέπει να εμφανίζονται ελαφρώς λευκά όταν εκτίθεται σε κανονικό φως, δωματίου, αλλά να φθορίζουν φωτεινό πράσινο όταν εκτείθενται σε UV φως μεγάλου μήκους κύματος. +pglo, Αρκετές τροποποιημένες LB/amp αποικίες (περίπου 70-80) +pglo, LB/amp/ara Αρκετές τροποποιημές αποικίες βακτηρίων (περίπου 80-90) που εμφανίζονται να εκπέμπουν ζωηρό πράσινο φως όταν εκτείθενται σε UV ακτινοβολία

8 11.Παρατηρώντας στα τρυβλία μήπως βλέπεις μερικά βακτήρια E.coli να αναπτύσονται στα τρυβλία LB που δεν περιέχουν ampicillin/arabinose; 12. Μπορείτε να συμπεράνετε απο τα αποτελέσματα σας αν τα βακτήρια αυτά ειναι ανθεκτικά στην αμπικιλλίνη; 13. Τι θα μπορούσατε να τροποποιήσετε στο περιβάλλον των βακτηρίων ώστε να διαπιστώσετε αν ειναι ανθεκτικά στην αμπικιλλίνη; 14. Ποιοι παράγοντες πρέπει να ενεργήσουν στο περιβάλλον των βακτηρίων ώστε να δούμε το πράσινο χρώμα που εκπέμπουν τα τροποποιημένα βακτήρια; 15. Τι πιστεύετε οτι κάνει κάθε ένας απο τους παράγοντες που αναφέρατε παραπάνω; -pglo, Καμμία βακτηριακή LB/amp ανάπτυξη -pglo, LB Ενα ενιαίο στρώμα βακτηρίων εμφανίζεται στο τρυβλίο ελαφρώς λευκό Ναι, τα βακτήρια που δεν έλαβαν πλασμίδιο αναπτύσσονται στο τρυβλίο LB Όχι, γιατί τα βακτήρια ανθεκτικά ή μη στην αμπικιλλίνη δεν εμφανίζουν μορφολογικές διαφορές Ο καλύτερος τρόπος θα ήταν να πάρετε ένα δείγμα βακτηρίων και να επιμολύνετε ένα τρυβλίο με LB/amp Απαιτείται η αραβινόζη και η UV ακτινοβολία Η αραβινόζη είναι ο επαγωγέας του ρυθμιστικού πρωτεινικού καταστολέα arac που συνδέεται με τον χειρηστή του οπερονίου της αραβινόζης. Οταν εκτείθενται τα βακτήρια σε UV ακτινοβολία τα ηλεκτρόνια της GFP s χρωστικής μεταπηδούν σε υψηλότερης ενεργειας στιβάδα. Όταν μεταπίπτουν σε χαμηλότερη ενεργειακά στιβάδα εκπέμπουν ένα ορατό στο uv πράσινο φώς στα 509nm ΑΝΑΛΥΣΗ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ (καθοδηγούμενη διερεύνηση) 1.Προσδιορίστε το συνολικό αριθμό των κυττάρων που φθορίζουν 2. Προσδιορίστε την ποσότητα pglo plasmid DNA στα βακτήρια που βρίσκονται στο τρυβλίο LB/amp/ara 3. Προσδιορίστε την συνολική ποσότητα DNA Τοποθετείστε τα τρυβλία LB/amp/ara και μετρήστε τις αποικίες E.coli, υποθέτοντας οτι κάθε αποικία είναι κλώνοι ενός αρχικού κυττάρου Αριθμός αποικιών /κυττάρων=...(190) Χρειαζονται δύο πληροφορίες για τον προσδιορισμό του DNA pglo plasmid στα βακτηριακά κύτταρα που ειναι στο τρυβλίο LB/amp/ara: 1.ποια ήταν η ολική ποσότητα DNA οταν ξεκίνησε το πείραμα 2. ποιο μέρος της ποσότητας του DNA στην πραγματικότητα βρίσκεται στο τρυβλίο LB/amp/ara DNA (μg)=συγκέντρωση του DNA (μg/μl) x όγκος του DNA σε μl Στο πέιραμα μας χρησιμοποιήσαμε 10μl σε συγκέντρωση 0,08 μg/μl Αρα η συνολική ποσότητα DNA 0,8 μg

9 4. Προσδιορίστε το μέρος του pglo plasmid DNA που στην πραγματικότητα βρίσκεται στο τρυβλίο LB/amp/ara Η ικανότητα μετασχηματισμού ειναι ποσοτική τιμή που περιγράφει πόσο αποτελεσματική ήταν η δυνατότητα είσοδου του πλασμιδίου στα βακτήρια ξενιστές. Το αποτέλεσμα αντιπροσωπεύει τον αριθμό των μετασχηματισμέων αποικιών που παράγονται ανα μικρογραμμάριο DNA που προστέθηκε. 5. Υπολογίστε την ικανότητα μετασχηματισμού με βάση τα δεδομένα δίπλα Επειδή δεν πρόκειται να μεταφερθεί όλη η ποσότητα του DNA pglo plasmid στα βακτηριακά κύτταρα που αναπτύσονται στο τρυβλίο LB/amp/ara πρέπει να βρούμε το τμήμα του DNA που στην πραγματικότητα διασκορπίστηκε στο τρυβλίο LB/amp/ara Για να βρεθεί αυτό διαιρούμε τον όγκο του DNA που διασκορπίστηκε στο τρυβλίο LB/amp/ara με τον συνολικό όγκο του υγρού στο σωλήνα που περιέχει το DNA Στο πείραμα μας διασκορπίσαμε 100μl κύτταρα που περιείχαν pglo DNA απο ένα σωλήνα που περιείχε συνολικό όγκο 510μl διαλύματος Μέρος του DNA =0,2 Η τιμή αυτή θα πολλαπλασιαστεί με την τιμή που βρέθηκε για το μέρος του DNA που διασκορπιστηκε στο τρυβλίο LB/amp/ara pglo DNA μg=ολική ποσότητα DNA που χρησιμοποιήθηκε(μg) χ μέρος του DNA pglo DNA μg = 0,16 Αριθμός αποικιών στο 190 τρυβλίο LB/amp/ara Ποσότητα pglo DNA 0,16 Ικανότητα μετασχηματισμού 1187 μετασχηματισμοί /μg DNA plasmid concentration 0.08 µg/µl 250 µl CaCl2 transformation solution 10 µl plasmid solution 250 µl LB nutrient broth 100 µl cells spread on agar 227 colonies of transformants counted Συμπληρώστε τον πίνακα Αριθμός αποικιών στο τρυβλίο LB/amp/ara 227 Ποσότητα pglo DNA 0,16 Ικανότητα μετασχηματισμού 1.4x10 3 Ικανότητα μετασχηματισμού Ομάδα 1 Ομαδα 2 Ομάδα 3 Ομάδα 4

10

11 The mascil project has received funding from the European Union s Seventh Framework Programme for research, technological development and demonstration under grant agreement no mascil project (G.A. no ), lead partner: University of Education Freiburg; CC BY_NC_SA 4.0 license granted Original idea of this task: Mascil Team The Netherlands