Μελέτη της ενδορινικής χορήγησης του Resiquimod και της φαρμακολογικής του δράσης σε ένα προκλινικό μοντέλο αλλεργικής φλεγμονής των αεραγωγών

Μέγεθος: px

Εμφάνιση ξεκινά από τη σελίδα:

Download "Μελέτη της ενδορινικής χορήγησης του Resiquimod και της φαρμακολογικής του δράσης σε ένα προκλινικό μοντέλο αλλεργικής φλεγμονής των αεραγωγών"

Παναγιώτης Αρβανίτης
8 χρόνια πριν
Προβολές:

1 Μελέτη της ενδορινικής χορήγησης του Resiquimod και της φαρμακολογικής του δράσης σε ένα προκλινικό μοντέλο αλλεργικής φλεγμονής των αεραγωγών Μεταπτυχιακό Πρόγραμμα Σπουδών «Κλινικό Φαρμακολογύα & Θεραπευτικό» Πύριλλου Κατερύνα Επιβλϋποντεσ: Δρ. Γεώργιοσ Κολιόσ & Δρ. Κωνςταντύνοσ Ταμβακόπουλοσ

Μεταπτυχιακό Πρόγραμμα Σπουδών «Κλινικό Φαρμακολογύα & Θεραπευτικό»

2 Resiquimod (R-848) Παραςκευϊςτηκε από τη 3Μ Pharmaceuticals Ανόκει ςτην οικογϋνεια των ιμιδαζοκινολινών Αγωνιςτόσ υποδοχϋων TLR 7/8 Ιδιότητεσ: ανοςοτροποποιητικό αντι-ιώκό αντι-νεοπλαςματικό

3 Μηχανιςμόσ Δράςησ Resiquimod IL-12 IF-α IF-γ Ενεργοπούηςη οδηγεύ ςτην παραγωγό ενδογενών ιντερφερονών τύπου Ι : ϊμεςη αντιώκό δρϊςη διαφοροπούηςη Τ Η 0 προσ Τ Η 1 και καταςτολό Τ Η 2

4 Total BAL cells (x10 5 ) Φαρμακοδυναμική του R Χορήγηςη ευαιςθητοποίηςη πρόκληςη ςυλλογή υλικού Resiquimod Time (days) 10 ** 8 6 Χορόγηςη Resiquimod ςε ϋνα θεραπευτικό πρωτόκολλο 4 μεύωςη τησ φλεγμονόσ ~ 50% 2 0 OVA R848-OVA δρα προϊγοντασ τη λύςη

(days) 10 ** 8 6 Χορόγηςη Resiquimod ςε ϋνα θεραπευτικό πρωτόκολλο

5 Λφςη τησ Φλεγμονήσ Ενεργό διεργαςύα, ουςιώδησ για κϊθε οργανιςμό. Απαραύτητη για την επαναφορϊ ςτην ομοιόςταςη μετϊ από φλεγμονό. Απαιτεύ την ενεργοπούηςη βιοςυνθετικών μονοπατιών για παραγωγό λιπιδικών μεςολαβητών (SPMs) που ςυμμετϋχουν ενεργϊ ςτην επαναφορϊ τησ ομοιόςταςησ.

Απαιτεύ την ενεργοπούηςη βιοςυνθετικών μονοπατιών για παραγωγό

6 Λιπιδικοί Μεςολαβητζσ Λφςησ τησ Φλεγμονήσ

7 Λιπιδικοί Μεςολαβητζσ Λφςησ Τα λιπιδικϊ μόρια Resolvin D1, Resolvin E1, Protectin D1 εύναι παρϊγωγα του μεταβολιςμού ω-3 λιπαρών οξϋων (EPA, DHA). Εντοπύςτηκαν ςε φλεγμονώδεισ εκκρύςεισ (resolving exudates). Κύριοι πρωταγωνιςτϋσ τησ λύςησ τησ φλεγμονόσ ςε in vivo πειραματικϊ μοντϋλα φλεγμονόσ. Κλινικϋσ Δοκιμϋσ για τη χορόγηςό τουσ ωσ θεραπευτικούσ παρϊγοντεσ. Μπορούν να χρηςιμοποιηθούν ωσ βιοδείκτεσ ςε μελέτεσ φλεγμονωδών νοςημάτων.

Κύριοι πρωταγωνιςτϋσ τησ λύςησ τησ φλεγμονόσ ςε in vivo πειραματικϊ μοντϋλα φλεγμονόσ.

8 Πειραματικόσ Σχεδιαςμόσ Ανάπτυξη Αναλυτικήσ Μεθοδολογίασ In Vivo Πειραματιςμόσ Ανϊπτυξη μεθόδου για Resiquimod, RvD1, RvE1, PD1, 10S,17S-DiHDoHE Ανϊπτυξη & Βελτιςτοπούηςη πρωτοκόλλων εκχύλιςησ από ορό αύματοσ και πνεύμονα Εφαρμογό πρωτοκόλλου για ανϊπτυξη ηωςινοφιλικόσ φλεγμονόσ ςτουσ αεραγωγούσ μυών Ενδορινικό χορόγηςη Resiquimod Επικύρωςη Μεθόδων (LC-ESI-MS/MS) Συλλογό ορού αύματοσ και πνεύμονα Μελϋτη μεταβολιςμού Resiquimod in vitro Εκχύλιςη Resiquimod, RvD1, RvE1 και PD1 Ποςοτικόσ προςδιοριςμόσ του Resiquimod, των μεταβολιτών του, RvD1, RvE1 και PD1 ςε ορό αίματοσ και πνεύμονα

αεραγωγούσ μυών Ενδορινικό χορόγηςη Resiquimod Επικύρωςη Μεθόδων (LC-ESI-MS/MS) Συλλογό ορού αύματοσ και πνεύμονα Μελϋτη μεταβολιςμού Resiquimod

9 Αποτελζςματα Αναλυτικήσ Μεθοδολογίασ Ανϊπτυξη Μεθόδου με Φαςματομετρύα Μϊζασ για R-848 RvD1 RvE1 PD1 PD1-isomer (10S,17S-DiHDoHE)

10 RvD1 RvΕ1 H 2 PD-1 O OH R S, 17S-DiHDoHE

11 Αποτελζςματα Αναλυτικήσ Μεθοδολογίασ Συζευγμϋνη Φαςματομετρύα Μϊζασ και ανύχνευςη διαγνωςτικών ιόντων (δομικό αποτύπωμα) για R-848 RvD1 RvE1 PD1 PD1-isomer (10S,17S-DiHDoHE)

12 RvD1 RvΕ1 H 2 PD-1 O OH R S, 17S-DiHDoHE

13 Αποτελζςματα Αναλυτικήσ Μεθοδολογίασ Ανϊπτυξη Μεθόδου με Υγρό Χρωματογραφύα και Φαςματομετρύα Μϊζασ για R-848 RvD1 RvE1 PD1 PD1-isomer (10S,17S-DiHDoHE)

14 RvD1 RvΕ1 H 2 O PD-1 10S, 17S-DiHDoHE OH R-848

15 Αποτελζςματα Επαλύθευςη Μεθόδου (Validation) Μελϋτη Κατώτατου ορύου Ποςοτικοπούηςησ (LLoQ) και γραμμικότητασ για R-848, RvD1, RvE1, PD1 και PD-1 isomer ςε διαλύτη, ςε ορό αύματοσ και ςε ομογενοποιημϋνο πνεύμονα Εύρεςη απόδοςησ του πρωτοκόλλου εκχύλιςησ (recovery) Σταθερότητα LLoQ [column] LLoQ [serum] LLoQ [lung] Recovery (%) Stability (%CV) R-848 0,2 ng 2 ng/ml 0,2ng/g 74 (lung) - 10S,17S-DiHDoHE 2-5pg 0,2 ng/ml 0,5 ng/g RvD1 2-5pg 0,5 ng/ml 5 ng/g 71 (serum) 98 (lung) 103 (serum) 93 (lung) 0,06 0,4 0,1 0,2 RvE1 2-5pg 0,5 ng/ml 2,5 ng/g - 0,04 0,4 PD1 2-5pg 1 ng/ml 2,5 ng/g - 0,06 0,4

LLoQ [serum] LLoQ [lung] Recovery (%) Stability (%CV) R-848 0,2 ng 2 ng/ml 0,2ng/g 74 (lung) - 10S,17S-DiHDoHE 2-5pg 0,2 ng/ml 0,5 ng/g RvD1 2-5pg

16 Αποτελζςματα Μελϋτη μεταβολιςμού in vitro με χρόςη μικροςωμϊτων μυών και ανύχνευςη μεταβολιτών του R-848 με κατϊλληλη μϋθοδο (LC-Q3-IDA-EPI) H 2 H 3 C O OH CH 3 CH 3 Υδρόλυςη Αιθέρα H 2 H 3 C OH OH CH 3 S27381 Exact Mass: Molecular Weight:

(LC-Q3-IDA-EPI) H 2 H 3 C O OH CH 3 CH 3 Υδρόλυςη Αιθέρα H 2 H

17 In vivo Πειραματιςμόσ Εφαρμογό πρωτοκόλλου επαγωγόσ ηωςινοφιλικόσ φλεγμονόσ ςτουσ αεραγωγούσ μυών τησ φυλόσ C57Black ευαιςθητοποίηςη πρόκληςη Χορήγηςη Resiquimod / ςυλλογή υλικού Placebo (DMSO) 0 πρώτη ευαιςθητοπούηςη μυών με οβαλβουμύνη + ϊλατα αλουμινύου (alum salts) 7 δεύτερη ευαιςθητοπούηςη μυών 14 πρώτη πρόκληςη μυών με οβαλβουμύνη υπό μορφό νεφελώματοσ 15 δεύτερη πρόκληςη μυών 16 τρύτη πρόκληςη μυών 17 ενδορινικό χορόγηςη Resiquimod και placebo (DMSO) 20 ςυλλογό υλικού (ορόσ αύματοσ και πνεύμονεσ) Time (days)

αλουμινύου (alum salts) 7 δεύτερη ευαιςθητοπούηςη μυών 14 πρώτη πρόκληςη μυών με οβαλβουμύνη υπό μορφό νεφελώματοσ 15 δεύτερη πρόκληςη

18 Αποτελζςματα in vivo Ποςοτικόσ προςδιοριςμόσ R-848, RvD1, RvE1 και PD1 ςε πνεύμονα μυών με αλλεργικό φλεγμονό των αεραγωγών Συγκέντρωση R-848 σε πνεύμονα (ng/g) aive DMSO - treated R treated C R-848 BLQ BLQ 1.1 ± 0.18 C R-848 = nm LLoQ = 0.2 ng/g Καμπύλη αναφοράς ng/g Συγκέντρωση SPMs σε πνεύμονα (ng/g) aïve OVA/OVA C RvD1 BLQ BLQ C RvE1 BLQ BLQ C PD1 BLQ 6.61 ± 4.2 LLoQ για RvD1 = 5 ng/g LLoQ για RvE1 και PD1 = 2.5 ng/g C DMSO = 3.6 nm και C R-848 = 5.14 nm Καμπύλη αναφοράς ng/g

2 ng/g Καμπύλη αναφοράς 0.2 10 ng/g Συγκέντρωση SPMs σε πνεύμονα (ng/g) aïve OVA/OVA C RvD1 BLQ BLQ C RvE1 BLQ BLQ C PD1 BLQ 6.

19 Αποτελζςματα in vivo Ποςοτικόσ προςδιοριςμόσ R-848, RvD1, RvE1 και PD1 ςε ορό μυών με αλλεργικό φλεγμονό των αεραγωγών Συγκέντρωση R-848 σε ορό (ng/ml) aive DMSO - treated R-848 treated C R-848 BLQ BLQ 0.6 ± 0.05 C R-848 = 1.8 nm LLoQ = 0.2 ng/ml Καμπύλη αναφοράς ng/ml Συγκέντρωση SPMs σε ορό (ng/ml) aïve OVA/OVA C RvD1 BLQ BLQ C RvE1 BLQ BLQ C PD1 BLQ BLQ LLoQ του RvD1 = 0.5 ng/ml LLoQ του RvE1 = 0.5 ng/ml LLoQ του PD1 = 1 ng/ml

05 C R-848 = 1.8 nm LLoQ = 0.2 ng/ml Καμπύλη αναφοράς 0.

20 Συμπεράςματα Ανϊπτυξη μεθόδων LC-MS υψηλόσ ακρύβειασ, ευαιςθηςύασ και ειδικότητασ για το Resiquimod και επιλεγμϋνουσ λιπιδικoύσ μεςολαβητϋσ (RvD1, RvE1 και PD1). Επιτεύχθηκε ταυτόχρονη ανϊλυςη των βιοδεικτών με 10 φορϋσ καλύτερη ευαιςθηςύα ςε ςχϋςη με υπϊρχουςεσ μελϋτεσ. Εύρεςη ενόσ μεταβολύτη του Resiquimod in vitro υδρόλυςη αιθέρα. Δεν ανιχνεύθηκε in vivo. Ποςοτικοπούηςη του Resiquimod ςε ορό αύματοσ και πνεύμονα ςε μύεσ με ηωςινοφιλικό φλεγμονό των αεραγωγών: Συγκϋντρωςη Resiquimod 1.1 ± 0.18 ng/g ςε πνεύμονα και 0.6 ± 0.05 ςε ορό Ποςοτικοπούηςη λιπιδικών μεςολαβητών τησ λύςησ τησ φλεγμονόσ ςε μύεσ με ηωςινοφιλικό φλεγμονό των αεραγωγών: PD1 βρϋθηκε ςτον πνεύμονα (C = 3.6 nm) ενώ ςτον ορό δεν όταν ανιχνεύςιμο.

Δεν ανιχνεύθηκε in vivo. Ποςοτικοπούηςη του Resiquimod ςε ορό αύματοσ και πνεύμονα ςε μύεσ με ηωςινοφιλικό φλεγμονό των αεραγωγών: Συγκϋντρωςη Resiquimod 1.1 ± 0.

21 Ευχαριςτίεσ ΙΙΒΕΑΑ ΜΠΣ «Κλινικό Φαρμακολογύα & Θεραπευτικό» Εργαςτόριο Φαρμακολογύασ - Φαρμακοτεχνολογύασ: ομϊδα Δρ Κωνςταντύνου Ταμβακόπουλου Ιδιαύτερεσ ευχαριςτύεσ ςτον Δρ. Αλεξανδρο Σύςκο Καθηγητό Δρ Δημοςθϋνη Μπούρο Εργαςτόριο Ανοςογενετικόσ: ομϊδα Δρ Ευϊγγελου Ανδρεϊκου Αναπληρωτό Καθηγητό Δρ Γεώργιο Κολιό

Σχετικά έγγραφα

Αναλύοντασ την ολοκληρωμϋνη φροντύδα του ρευματοπαθούσ. Κατερύνα Κουτςογιϊννη ύλλογοσ Ρευματοπαθών Κρότησ

Αναλύοντασ την ολοκληρωμϋνη φροντύδα του ρευματοπαθούσ Κατερύνα Κουτςογιϊννη ύλλογοσ Ρευματοπαθών Κρότησ Οι ανϊγκεσ Προκειμϋνου να αναλύςουμε την ολοκληρωμϋνη φροντύδα του ρευματοπαθούσ θα πρϋπει πρώτα