ΑΝΑΛΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΟΥΡΩΝ ΑΘΛΗΤΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΚΑΙ ΤΗ ΜΕΤΡΗΣΗ ΤΗΣ ΧΟΡΙΑΚΗΣ ΓΟΝΑΔΟΤΡΟΠΙΝΗΣ (hcg).

Transcript

1 Τεχνολογικό Εκπαιδευτικό Ίδρυμα Αθήνας Σχολή Επαγγελμάτων Υγείας και Πρόνοιας Τμήμα Ιατρικών Εργαστηρίων Εργασία πρακτικής άσκησης ΑΝΑΛΥΣΗ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΟΥΡΩΝ ΑΘΛΗΤΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΚΑΙ ΤΗ ΜΕΤΡΗΣΗ ΤΗΣ ΧΟΡΙΑΚΗΣ ΓΟΝΑΔΟΤΡΟΠΙΝΗΣ (hcg). Εργαστήριο Αναλυτικού Ελέγχου Doping του Ολυμπιακού Αθλητικού Κέντρου Αθηνών «Σπύρος Λούης» Επιμέλεια εργασίας: Ψάλτα Αννα Αύγουστος 2014

2 Φαρμακοδιέγερση (doping) Ως φαρμακοδιέγερση (doping) ορίζεται η χρήση ενός μέσου (ουσίας ή μεθόδου), η οποία είναι ενδεχομένως βλαβερή για την υγεία τους και/ ή είναι ικανή να αυξήσει την απόδοση των αθλητών, ή η ανεύρεση στο σώμα ενός αθλητή μιας Απαγορευμένης Ουσίας ή απόδειξη της χρήσης από αυτόν ή απόδειξη της χρήσης Απαγορευμένης Μεθόδου. Το ντόπινγκ αντικρούει τις θεμελιώδεις αρχές του Ολυμπισμού, των αθλημάτων και της ιατρικής ηθικής. Απαγορεύεται η σύσταση, πρόταση, έγκριση, εμπορία, παράβλεψη ή διευκόλυνση της χρήσης οποιασδήποτε ουσίας ή μεθόδου που καλύπτεται από τον ορισμό του ντόπινγκ. Δράσεις ορμονών και ουσιών με παρόμοια δράση Οι πεπτιδικές και οι γλυκοπρωτεϊνικές ορμόνες μεταφέρουν μηνύματα σε όλο το σώμα προκειμένου να διεγείρουν ορισμένες λειτουργίες. Για παράδειγμα: 1. Προωθούν την ανάπτυξη του σώματος. 2. Επηρεάζουν τη σεξουαλική και τις άλλες συμπεριφορές 3. Ελέγχουν τον πόνο 4. Διεγείρουν την παραγωγή των ερυθρών αιμοσφαιρίων. 5. Τα ανάλογα μιμούνται την δράση των ορμονών που φυσιολογικά υπάρχουν στον σώμα. Λόγοι χρησιμοποίησής τους από τους αθλητές Οι αθλητές ενδέχεται να χρησιμοποιούν κακώς αυτές τις ουσίες. Μερικοί από τους λόγους χρήσης είναι οι εξής: 1. Για να διεγείρουν την παραγωγή των ορμονών που φυσιολογικά υπάρχουν στο σώμα. 2. Για να αυξήσουν το μέγεθος και την δύναμη της μυϊκής τους μάζας 3. Προκειμένου να βοηθήσουν την επιδιόρθωση των ιστών, γεγονός που θα αποφέρει ταχύτερη ανάνηψη από κάποιο τραυματισμό ή την προπόνηση 4. Για να βελτιώσουν την ικανότητα του αίματος να μεταφέρει οξυγόνο Χοριακή Γοναδοτροπίνη (hcg, Ανθρώπινη Χοριακή Γοναδοτροπίνη) Η χορήγηση hcg, ή άλλων ουσιών με παρόμοια δράση στους άνδρες, προκαλεί αυξημένη παραγωγή τεστοστερόνης και έτσι ή χρήση της θεωρείται

3 ανάλογη με τη λήψη τεστοστερόνης. Έχει συναγωνιστική δράση με την ωχρινοποιητική ορμόνη (LH). Ανεπιθύμητες ενέργειες Στις ανεπιθύμητες ενέργειες περιλαμβάνονται η διόγκωση των ωοθηκών, και η υποογκαιμία. Οι πολύδυμες κυήσεις δεν είναι κάτι το ασυνήθιστο. Οι άνδρες μπορεί να αναπτύξουν γυναικομαστία. Διαδικασία για το Immulite hcg kit. Ο προσδιορισμός της χοριακής γοναδοτροπίνης βασίζεται στην ανάλυση ούρων και εκτελείται από τον αυτόματο ανοσολογικό αναλυτή τυχαίας επιλογής IMMULITE, ο οποίος λειτουργεί με τη μέθοδο της ενισχυμένης χημειοφωταύγειας. Ο αναλυτής λειτουργεί με το εμπορικά διαθέσιμο Immulite hcg kit. Ο χειριστής φορτώνει τα δείγματα σε ειδικούς υποδοχείς στην αλυσίδα φόρτωσης και μετά τον κάθε υποδοχέα τοποθετεί το διαφανές φιαλίδιο (test unit) στο οποίο γίνεται η αντίδραση, το οποίο περιέχει μια πλαστική μπίλια (στερεά φάση) επιστρωμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικιού ειδικό για την hcg. Επίσης, τοποθετεί στην καρουσέλα των αντιδραστηρίων, τον περιέκτη αντιδραστηρίου το οποίο περιέχει αλκαλική φωσφατάση, σε σύμπλοκο με πολυκλωνικό αντίσωμα αμνοεριφίου ειδικό για την hcg, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Ο αναλυτής αναρροφεί 5μL δείγματος και 7μL αντιδραστηρίου και περίπου 3mL δις απεσταγμένου νερού. Εκχύει το μείγμα μέσα στο test unit και το τοποθετεί στη θερμοστατούμενη (37 o C) καρουσέλα επώασης για 30 λεπτά περίπου, όπου γίνεται η δέσμευση της αντιδρώσας ουσίας με τη μέθοδο sandwitch. Στο πέρας της επώασης το test unit φυγοκεντρείται κάθετα στον άξονά του με 5000 στροφές το λεπτό 4 φορέςκαι ενδιάμεσα ξεπλένεται με δις απεσταγμένο νερό με αποτέλεσμα την απόλυτη απομάκρυνση όλων των μη αντιδρωσών ουσιών. Κατόπιν ο αναλυτής εκχύει 200μL φωτοβολικού υποστρώματος και το test unit επωάζεται για 10 λεπτά ακόμη, προωθούμενο στην αλυσίδα του φωτοπολλαπλασιαστή. Αυτό έχει σαν αποτέλεσμα αποφωσφορυλίωση του υποστρώματος και τη δημιουργία ενός ασταθούς ανιόντος που κατά τη αποδομή του εκπέμπει ένα φωτόνιο.

4 Στάδια διαδικασίας ανάλυσης δειγμάτων ούρων ανδρών αθλητών 1. Αρχικά ανοίγεται το όργανο Immulite, έτσι ώστε να πάρει θερμοκρασία, ο υπολογιστής και ο εκτυπωτής τουλάχιστον μια ώρα πριν την έναρξη της διαδικασίας. Εικόνα 1. Όργανο Immulite. 2. Επιλέγουμε από την οθόνη του υπολογιστή RUN IMMULITE. 3. Ακολουθούμε τις οδηγίες στην οθόνη του IMMULITE. 4. Αφαιρούμε τα test units που έχουν τυχόν μείνει στην αλυσίδα φόρτωσης.

5 Εικόνα 2. Test units στην αλυσίδα φόρτωσης. 5. Γεμίζουμε το δοχείο με νερό και το δοχείο με substrate.. Εικόνα 3. Δοχείο με νερό(μπλέ) και δοχείο με substrate (κίτρινο).

6 6. Κάνουμε prime στην σύριγγα απομακρύνοντας τις τυχόν φυσαλίδες. Εικόνα 4. Σύριγγα. 7. Κάνουμε prime στην διαδρομή του substrate και του νερού απομακρύνοντας τις τυχόν φυσαλίδες. Εικόνα 5. Διαδρομή του substrate και του νερού. (δεξιά)

7 8. Βάζουμε τα αντιδραστήρια στη θέση τους, ανοίγουμε το καπάκι και ελέγχουμε για φυσαλίδες. 9. Το IMMULITE διαβάζει τους γραμμοκώδικες των αντιδραστηρίων. 10. Κάνουμε εισαγωγή των δειγμάτων και των controls. 11. Τοποθετούμε τα δείγματα ακολουθούμενα από test units. Εικόνα 6. Δείγματα ακολουθούμενα από test units στην κσρουσέλα. Τα δείγματα έρχονται σε σωλήνες falcon. Εικόνα 7. Δείγματα σε σωλήνες falcon.

8 Κάνουμε vortex σε όλα τα δείγματα. Εικόνα 8. Vortex των δειγμάτων. Μεταγγίζουμε τα δείγματα σε μικρούς περιέκτες και τα τοποθετούμε στην καρουσέλα, ακολουθούμενα από test units. Εικόνα 9. Εικόνα 10.