Bezpečnosť potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Ing. Margita Florovičová Ing. Zuzana Fáberová ÚVZ SR
Úvod POR REZÍDUÁ PESTICÍDOV MRL Ako vyberieme pre hodnotenie správne rezíduá Ako sa tvorí MRL Kedy je MRL bezpečný a kedy nie Kto tvorí EÚ MRL
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Toxikologické štúdie Štúdie absorpcie, distribúcie, vylučovania a metabolizmu u cicavcov Krátkodobá toxicita Testovanie genotoxicity Dlhodobá toxicita a karcinogenita Reprodukčná a vývojová toxicita Štúdie oneskorenej neurotoxicity Toxikologické štúdie metabolitov Metabolizmus a štúdie hodnotenia rezíduí Metabolizmus a distribúcia rezíduí v rastlinách a hospodárskych zvieratách Stabilita rezíduí počas skladovania vzoriek Rezíduá v produktoch rastlinného a živočíšneho pôvodu Vplyv priemyselného a domáceho spracovania na rezíduá Rezíduá v následných plodinách
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Metabolizmus a distribúcia rezíduí v rastlinách a hospodárskych zvieratách kvantifikácia TRR identifikácia a charakterizácia majoritných rezíduí kvantitatívna distribúcia rezíduí metabolická cesta rezíduí spôsob a miera vylučovania definícia rezíduí
Definícia rezíduí Definícia rezíduí = výber rezíduí pre posudzovanie bezpečnosti potravín. Definícia rezíduí: hodnotenie rizika monitoring
Definícia rezíduí Definovanie rezíduí pre hodnotenie rizika pôvodná účinná látka toxikologický významné metabolity rezíduá > 10 % TRR existencia vhodného analytického postupu na rutinné monitorovanie Definovanie rezíduí pre monitoring existencia vhodných analytických metód pre bežné stanovenie existencia vhodných kontrolných metód v teréne existencia štandardov pre metabolity stabilita rezíduí
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Reziduálne štúdie najvyššia pravdepodobná hladina rezíduí podľa GAP návrh MRL (mg/kg) návrh MRL
Maximálna hladina rezíduí MRL znamená právom dovolenú hornú hladinu koncentrácie rezíduí pesticídov Výpočet MRL Na základe výsledkov reziduálnych štúdii: pomocou výpočtu (štatistická analýza) metóda 1 R max (maximálne rezíduum) metóda 2 R ber (návrh MRL)
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Štúdie kŕmenia hospodárskych zvierat kvantitatívna distribúcia rezíduí návrh MRL pre komodity živočíšneho pôvodu návrh MRL
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Vplyv priemyselného spracovania a/alebo domácej prípravy na rezíduá informácie o vzniku produktov počas spracovania, ktoré vyžadujú samostatné hodnotenie rizika kvantitatívna distribúcia rezíduí návrh MRL
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Rezíduá v následných plodinách kvantifikácia TRR identifikácia a charakterizácia majoritných rezíduí kvantitatívna distribúcia rezíduí metabolická cesta rezíduí ošetrená plodina následné plodiny
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Stabilita rezíduí počas skladovania vzoriek stabilita rezíduí vo vzorkách < -18 C podporenie správnosti výsledkov štúdií hodnotenia rezíduí
Hodnotenie bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov Získame údaje Toxikologické štúdie Metabolizmus a štúdie hodnotenia rezíduí ADI ARfD definícia rezíduí návrh MRL Hodnotenie rizika
Hodnotenie rizika POR Identifikácia nebezpečenstva (rezíduá) Metabolizmus a štúdie hodnotenia rezíduí (definícia rezíduí, návrh MRL) Charakterizácia nebezpečenstva (ADI, ARfD) Hodnotenie expozície (TMDI, IEDI, IESTI) Charakterizácia rizika TMDI, IEDI, IESTI < ADI alebo ARfD (bezpečná hladina rezíduí) MRL
Legislatíva so zreteľom na rezíduá pesticídov Nariadenie EP a rady (ES) č. 1107/2009 z 21. októbra 2009 o uvádzaní prípravkov na ochranu rastlín na trh a o zrušení smerníc Rady 79/117/EHS a 91/414/EHS Nariadenie EP a rady (ES) č. 396/2005 z 23. februára 2005 o maximálnych hladinách rezíduí pesticídov v alebo na potravinách a krmovinách rastlinného a živočíšneho pôvodu a o zmene a doplnení smernice Rady 91/414/EHS Od 1.9. 2008 harmonizované MRL (pre všetky účinné látky) http://ec.europa.eu/food/plant/protection/index_en.htm
Jednotnosť hodnotenia COM - schvaľovanie zosúladených metód a nariadení WG a SCoFCAH Section: Pesticides Residues - pomáha COM, zložený zo zástupcov členských štátov EFSA - nezávislé vedecké hodnotenie
Vyšetrenia rezíduí pesticídov v potravinách pre dojčatá a malé deti Smernica EÚ: 2006/125/EC a 2006/141/EC MRL SANCO dokumenty: SANCO/10684/2009 Method validation and quality control procedures for pesticide analysis in food and feed (nahradil SANCO/2007/3131) STN EN ISO/IEC 17025:2005
Vyšetrenia rezíduí pesticídov v potravinách pre dojčatá a malé deti Druhy vzoriek všetky druhy potravín určených pre dojčatá a malé deti na báze mlieka, ovocia, zeleniny a cereálií odoberané z distribučnej siete alebo lekární v rámci Slovenska (Hami, Beba, Sunar, Ovko, Nestlé a pod.) Dojčenská a následná dojčenská výživa nemajú obsahovať rezíduá jednotlivých pesticídov v hodnotách presahujúcich 0,01 mg/kg.
Vyšetrenia rezíduí pesticídov v potravinách pre dojčatá a malé deti Pesticídy, ktoré sa nesmú používať v poľnohospodárskej výrobe určenej na výrobu počiatočnej a následnej dojčenskej výživy: disulfoton fensulfothion omethoate terbufos fentin haloxyfop hexachlórbenzén hexachlórbenzén nitrofen aldrin dieldrin endrin, heptachlór trans-heptachlór epoxide - 0,003 mg/kg
Stanovenie pesticídov v detskej strave Špecifické MRL pesticídov alebo metabolitov pesticídov v dojčenskej výžive: cadusafos - 0,006 mg/kg demeton-s-methyl - 0,006 mg/kg demeton-s-methyl sulfone - 0,006 mg/kg oxydemeton methyl - 0,006 mg/kg ethoprophos - 0,008 mg/kg fipronil - 0,004 mg/kg Propineb - 0,005 mg/kg propylenthiourea - 0,006 mg/kg
Metódy stanovenia pesticídov Rôznorodosť chemických a fyzikálnych vlastností analyzovaných látok (polarita, prchavosť, rozpustnosť) Rôznorodosť matríc (obsah vody, tuku, farbív - chlorofylu, karotenoidov apod.) Postupy: Extrakcia (acetonitril, metanol, etylacetát, petroléter...) Čistenie extraktu (GPC, SPE kolónky, adsorbcia, extrakcia kvapalina/kvapalina) Stanovenie/detekcia: GC (ECD, NPD, PFPD, MS) LC (MS, MS/MS) Konfirmácia výsledku (GC, LC techniky)
QuEChERS Multi-metóda na stanovenie rezíduí pesticídov vo vzorkách rastlinného pôvodu Quick - Easy - Cheap - Effective - Rugged Safe (rýchla - jednoduchá - lacná - efektívna - robustná - bezpečná) Navážiť 10 g zhomogenizovanej vzorky (v mrazenom stave) do 50 ml uzatvárateľnej PP-skúmavky (ak je obsah vody nižší ako 80 %, je potrebné doplniť vodou) Navážiť 10 g zhomogenizovanej vzorky (v mrazenom stave) do 50 ml uzatvárateľnej PP-skúmavky (ak je obsah vody nižší ako 80 %, je potrebné doplniť vodou) Intenzívne premiešať 1 minútu Pridať MgSO 4, NaCl, citrát sodný dihydrát, hydrogéncitrát disodný (pomer 8:2:2:1) Pre cereálne vzorky a vzorky s obsahom tukov a voskov extrakt nechať vymraziť min. 2 hod. (optimálne cez noc) Odobrať alikvotnú časť z extraktu 1 a pridať MgSO 4 a PSA (do 12 ml PP-skúmavky) v pomere 1ml extraktu : 150 mg MgSO 4 : 25mg PSA Intenzívne premiešať 1 minútu, odstrediť Odobrať alikvotnú časť z extraktu 1 a pridať 5 % kyselinu mravčiu (10 µl 5 % kyseliny mravčej v acetonitrile na 1 ml extraktu) - EXTRAKT 2 (GC-MS, LC-MS)
Analýza rezíduí pesticídov na ÚVZ SR Single a skupinové reziduálne metódy: Organochlórované pesticídy: GC-ECD (extrakcia do petroléteru, čistenie cez florisil) Organofosforové pesticídy: GC-PFPD (extrakcia do ACN a čistenie cez SPE kolónky) Nitrofen: GC-ECD (extrakcia do etylacetát : cyklohexánu, čistenie na GPC) Fipronil: GC-ECD, GC-MS/MS (QuEChERS) Fentin: LC-MS/MS (kyslá hydrolýza a extrakcia do hexánu) Haloxyfop: LC-MS/MS (kyslá hydrolýza a extrakcia do toluénu) Propylentiomočovina: LC-MS/MS (extrakcia do dichlórmetánu) Mepikvat a Chlormekvat: LC-MS/MS (extrakcia do dichlórmetánu) Multirezíduálne metódy: Pesticídy s rôznymi funkčnými skupinami GC-MS/MS resp. LC-MS/MS (metóda QuEChERS)
Pesticídy spracované metódou QuEChERS a stanovené GC-MS/MS (iónová pasca) bifenthrin isofenphos-methyl propyzamide bromopropylate kresoxim-methyl pyrazophos chlorfenapyr malathion pyridaben chlorfenvinphos metacrifos pyriproxyfen chlorobenzilate metalaxyl quinoxyfen chlorpropham oxadixyl resmethrin cyprodinil parathion-methyl spiroxamine diphenylamine penconazole tebuconazole ethion pendimethalin tefluthrin fenvalerate phenthoate tetraconazole fipronil pirimicarb tetradifon fipronil-desulfinyl desmethyl-pirimicarb tolclofos-methyl fludioxonil propiconazole vinclozoline flusilazole prothiophos 41 pesticídov
Pesticídy spracované metódou QuEChERS a stanovené GC-MS/MS (triplequad) acrinathrin ethoprophos pirimiphos-methyl boscalid fenarimol procymidone bupirimate fenhexamid profenofos buprofezine fenitrothion propargite chlorothalonil fenpropathrin pyrimethanil chlorpyrifos flutriafol tau-fluvalinate chlorpyrifos-methyl hexaconazole tolylfluanid demeton-s-methyl mepanipirim triadimefon dichlofluanid methidathion triadimenol dichlorvos myclobutanil triazophos dicloran phosalone trifluralin EPN phosmet 38 pesticídov
Pesticídy spracované metódou QuEChERS a stanovené GC-ECD a GC-PFPD GC-ECD GC-ECD GC - PFPD Captan 4,4'-Methoxychlor Cadusafos Cyfluthrin cis-chlordane (alpha) Diazinon Cypermethrin trans-chlordane (gamma) Omethoate Deltamethrin oxy-chlordane Disulfoton Epoxiconazole p,p -DDT (4,4 -DDT) Disulfoton-sulfoxide Fluquinconazole o,p -DDT (2,4 -DDT) Disulfoton-sulfone Folpet p-p -DDE (4,4 -DDE) Fensulfothion Lambda-cyhalothrin p,p -DDD (4,4 -DDD) oxydemeton-methyl Metribuzin 4,4 -Dicofol (p,p ) Demeton-S-methyl-sulfone Nitrofen Dieldrin Parathion (Parathion-ethyl) Permethrin aldrin Terbufos alpha-endosulfan beta-endosulfan Terbufos-sulfoxide Endrin Endosulfan-sulfate Terbufos-sulfone Heptachlor Hexachlorcyclohexan (HCH), alpha-isomer Hexachlorcyclohexan (HCH), beta-isomer HCB (Hexachlorobenzene) Heptachlor-endo-epoxide Hexachlorocyclohexane (HCH) (gamma-isomer) 45 pesticídov
Pesticídy spracované metódou QuEChERS a stanovené LC-MS/MS (triplequad) Acephate Fenthion-sulfoxide Clofentezine Iprovalicarb Pencycuron Acetamiprid Carbofuran-3-hydroxy Fenthion-oxon Isoproturon phoxim Aldicarb-sulfone methiocarb-sulfoxide Fentin Linuron Prochloraz Aldicarb-sulfoxide Cyproconazole Flufenoxuron malaoxon Propamocarb Azinphos-ethyl Difenoconazole Formetanate Metconazole Propylene thiourea Azinphos-methyl Dimethomorph Fosthiazate Carbofuran Pyraclostrobin (F) Azoxystrobin Methamidophos Haloxyfop methiocarb Tebufenozide Bromuconazole Fenamiphos-sulfone Hexythiazox fenthion Tebufenpyrad Carbaryl Fenamiphos-sulfoxide Imazalil Clothianidin Teflubenzuron Carbendazim Fenbuconazole Imidacloprid methomyl Thiabendazole Fenoxycarb Methiocarb-sulfone Indoxacarb Thiodicarb Thiacloprid Fenpropimorph Fenthion-sulfone Iprodione Fenamiphos Thiamethoxam Monocrotophos Methoxyfenozide Trichlorfon Triflumuron Zoxamide Oxamyl Thiophanate-methyl trifloxystrobin Triticonazole Mepikvat Chlormekvat Diflubenzuron Benfuracarb Dicrotophos Phosmet oxon Aldicarb 76 pesticídov
Pesticídy analyzované v detskej a dojčenskej výžive (2005-2011 ) Rok Typ vzorky Počet Prekročený Počet Prekročený Rok Typ vzorky vzoriek MRL (mg/kg) vzoriek MRL (mg/kg) 2006 sušená 31-2009 sušená 22 - ovocná/zeleninová 46 - ovocná/zeleninová 36 - tekutá 1 - tekutá 1 - spolu 78 - spolu 59-2007 sušená 50-2010 sušená 42 - ovocná/zeleninová 32 - ovocná/zeleninová 16 1 tekutá 2 - tekutá 2 - spolu 84 - spolu 60-2008 sušená 54-2011 sušená 22 - ovocná/zeleninová 32 - ovocná/zeleninová 15 - tekutá 1 - tekutá 3 - spolu 87 - spolu 40 -
LC-MS/MS parametre (triplequad) LC systém: LC 1200L Teplota sušiaceho plynu (N2): 300 C Čas analýzy: 15 min. Nástrek: 10 μ l Mobilná fáza: A acetonitril : metanol (75:25) B H2O (2 mm mravčan amónny, 1 % kyselina mravčia) Gradient mobilnej fázy:
Zhrnutie Ukazovateľom bezpečnosti potravín z hľadiska rezíduí pesticídov je MRL Na získanie MRL potrebujeme toxikologické štúdie a štúdie hodnotenia rezíduí Od roku 2006 bolo vyšetrených 408 vzoriek rôznych detských a dojčenských výživ na obsah rôznych druhov pesticídov. Z tohto množstva bolo 177 ovocných a zeleninových vzoriek, 221 sušených (mliečnych/nemliečnych) a 10 nápojov 1 zo vzoriek prekročila MRL (1462/2010) Všetky analytické metódy sú akreditované podľa ISO/IEC 17025:2005
Ďakujem za pozornosť margita.florovicova@uvzsr.sk zuzana.faberova@uvzsr.sk