In Vitro жағдайындағы диагностикада пайдалануға арналған BD MAX System жүйесімен бірге қолдануға арналған Қазақ 4 U I

B MAX MRSA XT 443461 In Vitro жағдайындағы диагностикада пайдалануға арналған P0205(02) BD MAX System жүйесімен бірге қолдануға арналған 2017-06 Қазақ 4 U I ҚОЛДАНУ МАҚСАТЫ BD MAX System жүйесінде орындалатын BD MAX MRSA XT талдауы назальды колонизация қаупі төнген емделушілердің назальды жағындыларынан метициллинге төзімді Staphylococcus aureus (MRSA) ДНҚ тікелей анықтау үшін автоматтандырылған сапалық in vitro диагностикалық сынағы. MRSA ДНҚ және флюорогенді нысандардың ерекше гибридизация зондтарын күшейту үшін күшейтілген ДНҚ анықтауға сынақ нақты уақытты полимеразды тізбекті реакцияны (ПТР) пайдаланады. BD MAX MRSA XT талдауы денсаулық сақтау мекемелерінде MRSA инфекцияларын алдын алу және бақылау шараларына көмектесуге арналған. Ол MRSA инфекцияларына диагноз қоюға немесе MRSA инфекцияларын емдеуді нұсқау немесе бақылауға арналмаған. Теріс нәтиже назальды колонизацияның алдын алмайды. Ілеспе культуралар эпидемиологиялық теру немесе кейінгі сезінушілік сынағы үшін ағзаларды қалпына келтіруге қажет. ПРОЦЕДУРАНЫҢ ҚЫСҚА СИПАТТАМАСЫ МЕН ТҮСІНІКТЕМЕСІ MRSA аурухана ішінде жұғатын инфекциялардың негізгі себебі болып табылады. Жұқтырулардың көпшілігі денсаулық сақтау мекемелерінде медициналық қызметкерлер қолдарының ластығынан болады немесе MRSA тасушы емделушілерден ластанған медициналық ортадан болады. MRSA пустуладан бастап, сепсис және өлім 1 клиникалық белгілері бар инфекцияға әкелуі мүмкін, ол сондай-ақ мұрын ішінде немесе адамдардың терісінен табылуы мүмкін (симптомсыз тасушылар). MRSA инфекцияларын емдеу кең ауқымды антимикробтық агенттеріне MRSA кедергі жасайтын ретінде мәселеге айналды. Метициллинге тұрақты Staphylococcus aureus жолақтары денсаулық сақтау мекемелерінде жиі кездеседі және кейбір Солтүстік Америка ауруханаларында аурухана ішінде алынған Staphylococcus aureus 50% құрайды. Денсаулық сақтау мекемелерінде MRSA жұқтыру қауіп факторларына ауруханада ұзақ уақыт жату, MRSA жұқтырған немесе колонизацияланған емделушілермен жақындасу, ванкомицинге төзімді Enterococci (VRE) және Clostridium difficile сияқты басқа төзімді ағзалармен колонизациялау, бірнеше және/немесе ұзартылған кең ауқымды антибиотикпен емдеуге әсер ету, денсаулық сақтау мекемелерінде MRSA кең тараған аймақтарына әсер ету және MRSA назальды тасымалдау жатады. MRSA назальды тасымалдайтын емделушілерді ерте бастан анықтау MRSA үшін инфекцияны алдын алудың тиімді бағдарламасының бөлігі болуы мүмкін. MRSA анықтауға негізделген культура оксациллин немесе цефокситин сезінушілік сынағынан кейін таза колониялардың оқшаулануын, meca генінің анықталуын немесе meca генімен кодталған пенициллинмен байланыстыратын протеиннің анықталуын (PBP 2a) талап етеді. Культураға негізделген процесс орташа уақытпен кем дегенде 24 сағат алады, MRSA анықтау үшін 48 сағатқа жақын. MRSA инфекциялардың тарау жылдамдығымен, әсіресе тасымалдауыштар ортақ болатын денсаулық сақтау мекемелерінде, үлгілер жиналған күні MRSA назальды тасымалдау нәтижелерін қамтып, инфекцияны алдын алу бағдарламасының артықшылығын білдіреді. MRSA жылдам анықтауға арналған молекулалық сынақтар арқылы белсенді бақылау денсаулық сақтау параметрлерінде өткізу қабілетін азайту және әлсіз емделушілерде жұқпалы аурудың алдын алу үшін дәлелденген стратегия. Дұрыс анықтамау MRSA бақылаусыз берілуіне және денсаулық сақтау ресурстарының дұрыс пайдаланылмауына себеп болуы мүмкін. 2 Басқа коммерциялық талдаулармен бірге оң MRSA сынақ нәтижелерінің 17,9%-ы дұрыс емес, себебі meca гені жоқ (жалпы «түсіп қалған мутанттар» деп аталады). 3 Бұл жалған оң нәтижелер 1 емделушілердің қажетсіз әрі құнды оқшаулануына және емделуіне себеп болуы мүмкін. 1 mecc генін анықтамайтын талдаулар бойынша анықталмайтын, 3 4% барлық жаңа MRSA жағдайларының 4 жаңа ашылған mecc гені тіркелгісімен MRSA жолақтары. 5 mecc генінің жеткіліксіз анықталуы жалған теріс нәтижелерге әкелуі мүмкін, бұл анықталмаған MRSA жолақтарының басқарылмайтын тасымалын тудыруы мүмкін. Талдау дизайны MRSA сынағын дәл анықтау үшін маңызды және жұқпалы ауруларға жол бермеудің тиісті бақылау жұмыстарының қолданылғанын тексеріңіз. BD MAX MRSA XT талдауына жаңа MRSA бұзылушылықтарын, оның ішінде meca немесе mecc гені бар бұзылушылықтарды және meca немесе mecc түсулеріне қатысты жалған оң нәтижелерді азайтуды анықтайтын праймерлер үлгілерінің қоспасы пайдаланылады. 1

Назальды үлгі ұсынылған жағындыларды пайдаланып жиналады және зертханаға тасымалданады («Қажетті, бірақ жинаққа кірмейтін жабдықтар мен материалдар» бөлімін қараңыз). Жағынды BD MAX MRSA XT Sample Buffer Tube (Үлгі буферінің түтігі) түтігінде орналастырылған. Жасушаларды жағындыдан буферге шығару үшін үлгі буферінің түтігі шайқалады. Үлгі буферінің түтігі BD MAX System жүйесіне орналастырылып, келесі автоматты процедуралар орын алады: бактериялық жасушалар лизистеледі; ДНҚ магниттік гранулаларға шығарылып, концентратталады және элюцияланған ДНҚ аликвотасы, бар болған жағдайда генетикалық мақсаттарды күшейту үшін пайдаланылатын SA және MRSA бактерияларының арнаулы праймерлерін қамтитын ПТР реагенттеріне қосылады. Талдауға ішкі үлгі өңделуін басқару кіреді. Ингибиторлық заттарды, сондай-ақ құралдың немесе реагент сәтсіздігінен болған үрдіс тиімсіздігін бақылау үшін экстракция түтігінде үлгі өңделуін басқару бар және ол экстракция, концентрация және күшейту қадамдарын орындайды. Сынама, BD MAX Unitized Reagent Strip (құрамдас көрсеткіш сызығы) және BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) BD MAX System жүйесіне жүктелген кезде оператор кедергісі қажет емес. BD MAX System жүйесі үлгі лизисін, ДНҚ экстракциясын және концентрациясын, реагентті қайта гидраттауды, нуклеин қышқылын күшейтуді және нақты уақытты полимеразалыық тізбекті реакцияны пайдаланып (ПТР), мақсатты нуклеин қышқылының реттілігін анықтауды автоматтандырады. Күшейтілген нысандар сөндірілген флюофорлармен белгіленген гидролиздік зондтармен анықталады. Сигналды күшейту, анықтау және талдау BD MAX System жүйесімен автоматты түрде орындалады. ПРОЦЕДУРАНЫҢ ПРИНЦИПТЕРІ Жасуша лизисін және ДНҚ шығаруын орындау үшін BD MAX System жүйесі литикалық және экстракция реагенттерінің тіркесімін пайдаланады. Жоғары температурадағы ферментативті жасуша лизисінен кейін шығарылған нуклеин қышқылдары магниттік ұқсастық гранулаларына жинақталады. Гранулалар байланысқан нуклеин қышқылдарымен бірге жуылады және нуклеин қышқылдары элюциялау буферінің қызуымен элюцияланады. Элюцияланған ДНҚ залалсыздандыру буферімен залалсыздандырылады және ПТР реагенттерін қайта гидраттау үшін Мастер-микс түтігіне тасымалданады. Қайта құрастырылған күшейту реагенті BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) картриджіне құйылады. BD MAX PCR Cartridge (ПРТ картриджі) картриджіндегі микроклапандар күшейту микстурасын қамту үшін ПТР басталғанға дейін жүйе тарапынан тығыздалып, булануға және ластануға жол берілмейді. Күшейтілген ДНҚ нысаналары гидролиз (TaqMan) зондтарын пайдалану арқылы анықталады, олар бір жағы флуоресцентті репортер бояумен (флуорофор) және екінші жағы сөндіргіш фрагментімен белгіленген. Әртүрлі флуорофорлармен белгіленген зондтар SCCmec оң жақ шеткі түйісіндегі (MREJ) арнайы ампликонды және meca метициллинге төзімді гендерін және mecc гендерін анықтау үшін BD MAX System жүйесінің төрт түрлі оптикалық арнасында пайдаланылады: SCCmec оң жақ шеткі функциялы (MREJ) ампликондары 475/520 арнасында, метицилинге төзімді meca гені мен mecc ампликондары 585/630 арнасында, ал Үлгі өңделуін басқару ампликондары 680/715 арнасында анықталады. Зондтар өздерінің түпкілікті күйлерінде болған кезде, флюорофор флюоресценциясы сөндіргішке жақын болғандықтан сөндіріледі. Дегенмен мақсатты ДНҚ бар болған кезде зондтар өздерінің комплементарлы бірізділіктеріне гибридтейді және ДНҚ үлгісі бойындағы тізбекті синтездегендей, ДНҚ полимеразасының 5 3 экзонуклеазалық әрекеті арқылы гидролизденеді. Нәтижесінде флюорофорлар сөндіргіш молекулаларынан бөлінеді және флюоресценция таратылады. BD MAX MRSA XT талдауы үшін пайдаланылатын үш оптикалық арнада анықталған флюоресценция мөлшері гидролизделген тиісті зонд санына тікелей пропорционалды. BD MAX System жүйесі осы сигналдарды әрбір күшейту циклінің соңында өлшейді және нәтиже шығару үшін деректерді талқылайды. РЕАГЕНТТЕР СІЛТЕМЕ Жинақтың құрамы Саны 443461 BD MAX MRSA XT Master Mix (C7) Құрғатылған ПТР Мастер-микс құрамында полимераза, нуклеотидтер және MRSA ерекше молекулалық зондтары және үлгі өңделуін басқарудың арнайы молекулалық зондымен бірге праймерлер бар. BD MAX MRSA XT Unitized Reagent Strip Құрамында барлық сұйық реагенттер бар бірегей реагент жолағы мен бір рет пайдаланатын тамшуыр ұштары үлгіні өңдеу және ДНҚ шығарып алу үшін қажет. BD MAX MRSA XT Extraction Tube (B8) Құрамында ДНҚ магниттік тектестік гранулалары, Achromopeptidase және үлгі өңделуін басқару элементі бар құрғақ экстракция реагенті BD MAX MRSA XT Sample Buffer Tube (25 диафрагмалы қақпақпен) 24 сынақ 24 сынақ 24 сынақ 24 сынақ ҚАЖЕТТІ, БІРАҚ ЖИНАҚҚА КІРМЕЙТІН ЖАБДЫҚТАР МЕН МАТЕРИАЛДАР BD BBL CultureSwab Liquid Stuart жалғыз немесе қосарлы жағынды (BD каталог бойынша нөмірі 220099 немесе 220109), Copan (Venturi) Transystem* Liquid Stuart жалғыз немесе қосарлы жағынды (Copan, каталог бойынша нөмірі 141C немесе 139C) VWR бірнеше түтікті шайқағыш (VWR, каталог 58816-115) NALGENE криогендік шиша ұстағышы (VWR, каталог 66008-783) Ұнтақсыз, бір реттік қолғаптар Стерильді қайшы (қосымша) Стерильді дәке Секундөлшер немесе таймер BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) (BD каталог нөмірі 437519) 2

ЕСКЕРТУЛЕР МЕН САҚТЫҚ ШАРАЛАРЫ BD MAX MRSA XT in vitro жағдайындағы диагностикада пайдалануға арналған. Бұл өнімді тек BD MAX System жүйесінде пайдалануға болады. Жарамдылық мерзімі біткен реагенттерді және/немесе материалдарды пайдаланбаңыз. Егер әкелу кезінде белгіні герметизациялайтын шеткі қорап сынық болса, жинақты пайдаланбаңыз. Егер қорғаныш дорбалар ашық болса немесе жеткізу кезінде сынған болса, реагенттерді пайдаланбаңыз. Егер құрғатқыш жоқ болса немесе реагент дорбаларының ішінде сынған болса, реагенттерді пайдаланбаңыз. Құрғатқышты реагент дорбаларынан алып тастамаңыз. Реагенттердің қорғаныш дорбаларын әрбір қолданыстан кейін сыдырма ілгекпен жылдам жабыңыз. Герметизациялаудан бұрын дорбаларда қалған артық ауаны шығарыңыз. Реагенттерді қызудан және ылғалдан қорғаңыз. Ылғалдықтың созылған ықпалы өнімділікке әсер етеді. Егер фольга сынған немесе зақымдалған болса, реагенттерді пайдаланбаңыз. Әртүрлі дорбалардағы және/немесе жинақтардағы және/немесе партиялардағы реагенттерді араластырмаңыз. Қақпақтарды ауыстырып алмаңыз немесе қайта пайдаланбаңыз, себебі ластанып сынақ нәтижелерін жоққа шығаруы мүмкін. Сұйықтықтарды дұрыс толтыру үшін құрамдас көрсеткіш сызықтарын тексеріңіз (сұйықтықтар түтіктердің түбінде екеніне көз жеткізіңіз) (1-суретті қараңыз). Барлық тамшуыр ұштары бар екеніне көз жеткізу үшін құрамдас көрсеткіш сызықтарын тексеріңіз (1-суретті қараңыз). Мастер-микс секілді химиялық ерітінділерді пайдалану кезінде сақ болыңыз, себебі экстракция түтігі штрих-кодының оқылымы өзгеріп кетуі мүмкін. Осы талдауды дұрыс орындау үшін жақсы зертханалық техника қажет. Осы сынақтың жоғары аналитикалық сезгіштігінен барлық материалдар мен реагенттердің тазалығын сақтау үшін өте сақ болу керек. Басқа ПТР сынақтары зертхананың ұқсас жалпы аймағында жүргізілген жағдайларда, BD MAX MRSA XT талдауы, сынауы үшін қажетті басқа реагенттердің және BD MAX System жүйесінің ластанбағанын мұқият тексеру қажет. Реагенттердің микробтармен және дезоксирибонуклеазамен (ДНҚаза) ластануын ешқашан болдырмаңыз. Реагенттермен және картридждермен жұмыс істеуден бұрын қолғаптарды ауыстыру қажет. Ампликондар қоршаған ортаны ластамауы үшін BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) пайдаланғаннан кейін бөлшектерге бөлмеңіз. BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) картридждерінің тығыздағыштары ластануды болдырмауға арналған. Ластау қаупін төмендету үшін зертханада қоршаған ортаны бақылап тұру қажет. BD MAX Microfluidic Cartridges (Микросұйықтық картридждері) екі сынақ топтамасына дейін пайдаланылуы мүмкін. BD MAX MRSA XT талдауының ұсынылған уақыт ауқымынан тыс орындалуы жарамсыз нәтижелер беруі мүмкін. Белгіленген уақыт ауқымдарында орындалмаған талдауларды қайталау қажет. Қосымша басқару элементтерін жергілікті, мемлекеттік, аймақтық және/немесе федералдық ережелердің немесе аккредитациялық ұйымдардың нұсқауларына немесе талаптарына сәйкес сынауға болады. CLSI M29 6 құжаты мен микробиологиялық және биомедициналық зертханалардағы биологиялық қауіпсіздік құжаттарында көрсетілгендей, үлгілерді олар инфекциялық ретінде қарастырып, әрдайым қауіпсіз зертхана процедураларына сәйкес қолданыңыз. 7 Барлық реагенттермен жұмыс істеу кезінде қорғаныс киімі мен бір рет пайдаланылатын қолғаптарды киіңіз. Сынақты орындаған соң қолдарыңызды әбден жуыңыз. Ауызыңыздан тамызбаңыз. Үлгілер немесе жинақ реагенттері қолданылатын аумақтарда темекі шекпеңіз, ішпеңіз, шайнамаңыз немесе тамақтанбаңыз. Қолданылмайтын реагенттер мен қоқыстарды жергілікті, мемлекеттік, аймақтық және/немесе федералдық ережелерге сәйкес тастаңыз. Қосымша ескертулер, сақтық шаралары мен процедураларды BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығынан 10 қараңыз. САҚТАУ ЖӘНЕ ТҰРАҚТЫЛЫҚ Жиналған үлгілерді тасымалдау кезінде 2 25 C аралығындағы температурада сақтаған жөн. Тоңазытудан немесе қатты қыздырудан қорғаңыз. Үлгілерді сынақ алдында 25 ± 2 C температурада 48 сағаттан немесе 2 8 C температурада 120 сағаттан (5 күннен) асырмай сақтауға болады. BD MAX MRSA XT талдауы реагенттері мен құрамдас бөліктері берілген жарамдылық мерзімі аяқталғанға дейін 2 25 C аралығындағы температурада тұрақты болады. Жарамдылық мерзімі біткен құрамдас бөліктерді пайдаланбаңыз. BD MAX MRSA XT Master Mix (Мастер-микс) және Extraction Tubes (Экстракция түтіктері) тығыздап жабылған қалталарда жеткізіледі. Өнімді ылғалдықтан сақтау үшін ашылғаннан кейін жедел түрде қайта жабыңыз. 3

Реагент түтіктері алғаш ашылып, дорба қайта жабылғаннан кейін 14 күнге дейін 2 25 C аралығындағы температурада тұрақты болады. Қайта құрастырылмаған Экстракция және Мастер-микс реагент түтіктері өздерінің қорғаныш дорбаларынан алынған соң 5 сағат бойы 2 25 C аралығындағы температурада тұрақты болады. ҚОЛДАНУҒА АРНАЛҒАН НҰСҚАУЛАР Үлгіні жинау/тасымалдау Ұсынылған жағынды тасымалдау құрылғысын пайдаланып, («Қажетті, бірақ жинаққа кірмейтін жабдықтар мен материалдар» бөлімін қараңыз) назальды үлгілерді мекеменің және зертхананың стандартты жұмыс процедураларына немесе келесіге сәйкес жинау керек: 1. Тампондарды екі тамшы стерильді физиологиялық ерітіндімен (шамамен 50 мкл) сулаңыз немесе құрғақ күйінде пайдаланыңыз. 2. Емделушінің танауына жағындыларды ептеп енгізіңіз [жағындының ұшы танаудың шетінен 2,5 см қашықтықта енгізілуі керек]. 3. Тампондарды шырышты қабатпен танау ішінде 5 рет айналдырыңыз. 4. Ұқсас жағындыларды екінші танауға енгізіңіз де, 2 3-қадамдарды қайталаңыз. 5. Тампондарды тасымалдау түтігіне салыңыз. 6. Тасымалдау түтігін белгілеңіз. 7. Тампондарды мекеменің және зертхананың стандартты жұмыс процедураларына сай тасымалдаңыз («Сақтау және тұрақтылық» бөлімін қараңыз). Үлгіні дайындау ЕСКЕРТПЕ: Бір (1) үлгі буферінің түтігі, бір (1) диафрагмалы қақпақ, бір (1) Мастер-микс (C7), бір (1) Экстракция түтігі (B8) және бір (1) құрамдас көрсеткіш сызығы сынақтан өткізілетін әрбір үлгі және әрбір сыртқы басқару элементі үшін қажет. ЕСКЕРТПЕ: Клиникалық үлгілерді BD MAX MRSA XT талдауына сәйкес өсіру үшін, «Клиникалық үлгілерді өсіру» бөлімін қараңыз. 1. Сынақты бастау үшін үлгілер мен сырттан басқару элементтерінің санына сәйкес үлгі буферінің түтіктер (таза қақпақ) санын алыңыз. 2. Штрих-кодтың алдын бөгемей, үстінен жазбай немесе үстінен белгілемей, әрбір Үлгі буферінің түтігін емделушінің идентификаторына сәйкес белгілеңіз. 3. Үлгі буферінің түтігінен қақпақты алыңыз. 4. Тампонды үлгі тасымалдау түтігінен алып, тиісті Үлгі буферінің түтігіне салыңыз. 5. Үлгі буферінің түтігі аяғына жақындатып жағындыны сабағынан ұстаңыз (ластану қаупін азайту үшін стерилді дәке пайдаланыңыз). Тампонды Үлгі буферінің түтігі түбінен шамамен бір (1) см көтеріңіз және оны жырту үшін сабағын түтік шетіне қарсы бүктеңіз. Балама әдіс: сабағын кесу үшін стерильді қайшы пайдаланыңыз. 6. Үлгі буферінің түтігін диафрагмалы қақпақпен жабыңыз. 7. Үлгі буферінің түтігін NALGENE Cryogenic Vial Holder криогендік шыны ұстағышына салып, ең үлкен жылдамдықпен бір (1) минуттай бірнеше түтікті шайқағышпен шайқаңыз. Бір уақытта бірнеше түтікті шайқағышпен 24 үлгіге дейін өңдеуге болады. BD MAX System жүйесінің жұмысы ЕСКЕРТПЕ: Толық нұсқауларды BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығынан қараңыз ("Операция" бөлімін қараңыз). ЕСКЕРТПЕ: BD MAX MRSA XT талдауын сынауды дереу жоғарыдағы шайқау қадамынан кейін орындау қажет ("Үлгіні дайындау", 7-қадам қараңыз). Сынақтан қайта өткізу қажет болса, үлгі(лер)ді қайта шайқаңыз. 1. BD MAX System жүйесін қосыңыз (әлі қосылмаған болса) және <user name> (пайдаланушының аты) мен <password> (құпиясөз) енгізіп кіріңіз. 2. Реагенттермен және картридждермен жұмыс істеуден бұрын қолғаптарды ауыстыру қажет. 3. Құрамдас көрсеткіш сызықтарының қажет санын BD MAX MRSA XT жинағынан шығарып алыңыз. Барлық сұйықтық түтіктердің түбінде болуын тексеру үшін әрбір құрамдас көрсеткіш сызығын баяу қатты бетке басыңыз. 4. Экстракция түтігінің (түтіктерінің) және мастер-микс түтігінің (түтіктерінің) қажетті санын қорғаныс қалталардан жойыңыз. Артық ауаны шығарыңыз және қалталарды сыдырма ілгекпен жабыңыз. 5. Әр сынаманы сынау үшін А сөресінің 1 позициясынан басталатын BD MAX System Rack (жүйе сөресі) сөресіне бір (1) құрамдас көрсеткіш сызығын орналастырыңыз. 6. Бір (1) экстракция түтігін (ақ түсті фольга) 1 позициядағы әрбір құрамдас көрсеткіш сызығына 1-суретте көрсетілгендей сырт еткізіп бекітіңіз. 7. Бір (1) мастер-микс түтігін (жасыл түсті фольга) 2 позициядағы әрбір құрамдас көрсеткіш сызығына 1-суретте көрсетілгендей сырт еткізіп бекітіңіз. 4

Енгізу түтіктері Қоқыс ыдысы Тамшуыр ұштары #1 #2 #3 Лизис түтігі Экстракция түтігі MRSA XT Мастер-микс Элюция буфері Жуу буфері Қалыптандыру буфері 1-сурет: BD MAX MRSA XT Extraction Tubes (экстракция түтіктері) және Master Mix Tubes (мастер-микс түтіктері) түтіктерін құрамдас көрсеткіш сызықтарына сарт еткізіп бекітіңіз. 8. Сынақ топтамасы белгішесіне басып, BD MAX MRSA XT талдауы үшін (топтаманы бақылау мүмкіндігі үшін) штрих-кодты сканермен сканерлеу арқылы немесе қолмен енгізу арқылы жинақ топтамасы нөмірін енгізіңіз. ЕСКЕРТПЕ: Жаңа жинақ топтамасы пайдаланылғанда әрдайым 8-қадамды қайталаңыз. 9. Жұмыс тізіміне өтіңіз. Ашылмалы мәзір арқылы <BD MAX MRSA XT 54> опциясын таңдаңыз. 10. Штрихкодты сканермен сканерлеу немесе қолмен енгізу арқылы үлгі буферінің түтік идентификаторын, емделуші идентификаторын және ұқсатқыш нөмірін (егер қолданылатын болса) параметрлерін жұмыс тізіміне енгізіңіз. 11. Ашылмалы мәзірден тиісті жинақтың топтама нөмірін (шеткі қорапта табылған) таңдаңыз. 12. Барлық қалған үлгі буферінің түтіктері үшін 9 11 қадамдарын қайталаңыз. 13. 5 7 қадамдарындағыдай құрамдас көрсеткіш сызықтарына сәйкес BD MAX System Rack (жүйе сөресі) сөрелеріне үлгі буферінің түтіктерін салыңыз. ЕСКЕРТПЕ: Үлгі буферінің түтіктерін үлгі сөре(лер)іне 1D штрих-код жапсырмаларын сыртқа қаратып орналастырыңыз (бұл үлгіге кіру барысында үлгі буферінің түтіктерін сканерлеуді жеңілдетеді). 14. BD MAX PCR Cartridge (ПТР картриджі) картридждерінің қажетті санын BD MAX System жүйесіне орналастырыңыз (2-суретті қараңыз). Әрбір картридж 24 сынамадан тұрады. BD MAX System жүйесі әрбір сынақ топтамасы үшін ПТР картриджінде позиция мен жолды автоматты түрде таңдайды. Барлық жолақтар зарарсыздандырылғанша BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) бірнеше рет пайдалануға болады. BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) қолданысын арттыру үшін 2000 сынама режимі арқылы жолақ тағайындаулары үшін Worklist (Жұмыс тізімі) қойындысы астынан Run Wizard (Шеберді қосу) опциясын таңдаңыз. Қосымша мәліметтер үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығын 10 көріңіз. 2-сурет: BD MAX PCR Cartridges (ПТР картридждері) жүктеңіз. 5

15. Сөре(лер)ді BD MAX System жүйесіне салу (3-суретті қараңыз). A жағы B жағы 3-сурет: Сөрелерді BD MAX System жүйесіне салу. 16. BD MAX System жүйесінің есігін жабыңыз және өңдеуді бастау үшін <Start> (Іске қосу) түймесін басыңыз. 17. Сынақ топтамасының соңында тезарада нәтижелерді тексеріңіз немесе үлгі буферінің түтіктерін 2 8 C аралығында 5 күнге дейін НЕМЕСЕ 25 ± 2 C максимум 48 сағат нәтижелер тексерілгенге дейін сақтаңыз. ЕСКЕРТПЕ: Егер септа қақпағы сынақ топтама барысында зақымдалса, үлгіні сақтаудан бұрын оны жаңасымен ауыстырыңыз. ЕСКЕРТПЕ: Үлгі буферінің түтіктеріне қосылған соң, дайындалған BD MAX MRSA XT Sample Buffer Tubes (үлгі буферінің түтіктері) үлгі буферінің түтігін 2 8 C ең ұзағы 120 сағат (5 күн) НЕМЕСЕ 25 ± 2 C ең ұзағы 36 сағат сақталуы мүмкін. Анықталмаған (IND), шешілмеген (UNR) немесе аяқталмаған (INC) нәтиже алған жағдайда немесе сыртқы басқару элементінде қате орын алса, дайын үлгі буферінің түтігін қайталау сынағын осы мерзімде орындау қажет (Қайталама сынақ процедурасы бөлімін қараңыз). САПА ТЕКСЕРУІ Сапа тексеру процедуралары талдаудың орындалуын бақылайды. Зертханалар жергілікті, аймақтық, штаттық, федералдық және мемлекеттік ережелердің немесе аккредитациялық ұйымдардың нұсқауларына немесе талаптарына сәйкес сынауды басқару материалдарының санын, түрін және жиілігін орнатуы қажет. Жалпы сапаны басқару нұсқауын пайдаланушы CLSI MM3 және EP12 құжаттарынан қарай алады. 8,9 1. Сырттан басқару материалдарын BD қамтамасыз етпейді. Сырттан оң және теріс басқарулар BD MAX System жүйесінің бағдарламалық құралы арқылы үлгінің сынақ нәтижесін талқылау мақсатында пайдаланылмайды. Сырттан басқарулар емделуші нұсқалары ретінде қарастырылады. (Сырттан басқарудың талдау нәтижесін талқылау үшін Нәтижелер түсіндірмесі бөліміндегі кестені қараңыз.) 2. BD MAX System жүйесі бойынша әрбір зертхана параметрінде тиісті тексеру процесіне қол жеткізгенге дейін, күн сайын кем дегенде бір (1) сырттан оң басқару және бір (1) сырттан теріс басқару орындалу қажет. Бақылау сынақтың азайтылған жиілігі қолданылатын ережелерге сай болу керек. 3. Сырттан оң басқару элементі маңызды реагент сәтсіздігін бақылауға қолданылады. Сырттан теріс басқару элементі реагентті не қоршаған ортаның бүлінуін (немесе ауысатын қалдығын) мақсатты нуклеин қышқылы арқылы анықтау үшін пайдаланылады. 4. Бүкіл аналитикалық процестің тиімділігін бақылау үшін бақылау жолақтарын жергілікті, мемлекеттік және/немесе федералдық ережелерге немесе аккредитациялы ұйымдардың нұсқауларына немесе талаптарына сай сынау керек. 5. Пайдаланушыға зертхана үшін ең тиімді сапаны бақылау бағдарламасын таңдауға мүмкіндік беру үшін, сырттан басқару элементтерінің әртүрлі түрлері ұсынылады. a. Сырттан теріс басқару: Коммерциялық тұрғыдан қол жетімді басқару материалы [мысалы, Staphylococcus epidermidis жолағы (ATCC 12228)] немесе бастапқы сипатталған сынама теріс болады. BD компаниясы бақылау дайындығы нәтижесінде ықтимал бүлінуді азайту үшін Сыртқы оң бақылау құралынан бұрын Сыртқы теріс бақылау құралының дайын болғанын ұсынады. ә. Сырттан оң басқару: Коммерциялық тұрғыдан қолжетімді материалдар [мысалы, сілтемелі MRSA жолағы (ATCC 43300)] немесе бастапқыда сипатталған белгілі сынама оң болуы керек. Сырттан басқару суспензияларын дайындау үшін изоляттарды тұзды ерітіндіде 0,5 McFarland (~1 X 10 8 ҚҚБ/мл) бұлдырлыққа дейін қайта суспензиялаңыз. Тұзды ерітіндімен бірнеше рет ~1,0 X 10 4 КҚБ/мл суспензиясын алғанға дейін сұйылтыңыз. Таяқшаны сыналған бактериялық суспензияға малып, артық сұйықтықты көрсетіңіз, таяқшаны сәйкес үлгі буферінің түтігіне қойыңыз. Сынама ретіндегі процесс және сынақ (үлгі дайындау және BD MAX System жүйесінің жұмыс бөлімдерін қараңыз). 6. Барлық сырттан басқару элементтері күтілген нәтижелер беруге тиіс (сырттан оң басқару құралы үшін оң, сырттан теріс басқару құралы үшін теріс) және сәтсіз сырттан басқару құралдары жоқ (шешілмеген немесе анықталмаған нәтижелер). 7. Оң сынақ нәтижесін беретін сырттан теріс басқару үлгінің өңделуін және/немесе ластану оқиғасын көрсетеді. Араласып кетуді және /немесе ластануды болдырмау үшін үлгінің өңдеу әдісін қарап шығыңыз. Теріс сынақ нәтижесін беретін сырттан оң басқару үлгінің өңделуін және ластану мәселелерін көрсетеді. Өңдеу/дайындау әдісінің үлгісін қарап шығыңыз. 6

8. Шешілмеген, анықталмаған немесе аяқталмаған сынақ нәтижелерін беретін сырттан басқару реагенттің немесе BD MAX System жүйесінің сәтсіздігін көрсетеді. Кез келген қате хабарламаларды BD MAX System жүйесінің мониторынан тексеріңіз. Ескертулер мен қателік кодтарын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығындағы 10 Жүйе қателігінің қорытындысы бөлімін қараңыз. Егер ақаулық шешілмесе, жабық дорбадағы реагенттерді немесе жаңа талдау жинағын пайдаланыңыз. 9. Әрбір экстракция түтігінде үлгі өңделуін басқару элементі бар, ол синтетикалық мақсатты ДНҚ реттілігі бар плазмида болып табылады. Сынаманы өңдеу құралы ДНҚ ұсталуының тиімділігін, жуылуын және үлгіні өңдеу қадамдарының барысында элюциялауын бақылайды, сондай ақ, ПТР талдауы кезінде ДНҚ күшейту және анықтау тиімділігін бақылайды. Егер үлгіні өңдеуді басқару құралы нәтижесі қабылдау шарттарына сәйкес келмесе, үлгі нәтижесі UNR (Шешілмеген) ретінде хабарланады; дегенмен, кез келген оң (POS) талдау нәтижесі хабарланады және ешбір нысаны теріс (NEG) ретінде аталмайды. Шешілмеген нәтиже үлгіге қатысты ингибиция немесе реагент ақаулығы анықтамасы болып табылады. Шешілмеген болып есептелетін кез келген үлгіні Қайталама сынақ процедурасы бөліміне сәйкес қайталаңыз. НӘТИЖЕЛЕРДІ ТАЛДАУ Нәтижелерді BD MAX System жүйесінің мониторының Results (Нәтижелер) терезесінің Results (Нәтижелер) қойындысынан көруге болады. BD MAX жүйесінің бағдарламалық құралы сынақ нәтижелерін автоматты түрде талдайды. Нысанның және SPC күшейту күйіне негіздеп, сынақ нәтижесі MRSA NEG (теріс), MRSA POS (оң) немесе MRSA UNR (шешілмеген) ретінде атауға болады. IND (анықталмаған) немесе INC (аяқталмаған) нәтижелер BD MAX System жүйесінің сәтсіздігінен болады. Нәтижелер келесі шешім қабылдау алгоритмдеріне негізделеді. Берілген талдау нәтижесі MRSA POS MRSA NEG MRSA UNR АНЫҚ ЕМЕС АЯҚТАЛМАҒАН 1-кесте: BD MAX MRSA XT талдауы нәтижесі түсіндірмесі Нәтижені талдау MRSA ДНҚ анықталды MRSA ДНҚ анықталмады Шешілмеген ингибиторлық үлгі немесе реагент сәтсіздігі; мақсатты немесе үлгіні өңдеуді басқару құралын күшейтусіз Анықталмаған нәтиже BD MAX System жүйесінің сәтсіздігінен болады (ескерту немесе қате кодтары бар а ) Аяқталмаған сынақ топтамасы (ескерту немесе қате кодтары бар а ) а Ескертулер мен қателік кодтарын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығындағы 10 Ақаулықтарды жою бөлімін қараңыз. MRSA POS (MRSA ДНҚ анықталды) Флюоресценция сигналы MREJ (Staphylococcus aureus қатысты) және meca немесе mecc екі мақсат үшін де анықталған MRSA мақсатты күшейтуі бұл басқаруды басатындықтан, үлгі өңделуін басқару құралы еленбейді. MRSA NEG (MRSA ДНҚ анықталмады) Флуоресценция сигналы BD MAX MRSA XT талауында кез келген мақсат (meca, mecc және MREJ мақсаттары) үшін анықталмады және флуоресценция сигналы мына мақсатқа анықталды: Үлгінің өңделуін басқару немесе Флюоресценция сигналы тек meca немесе mecc гені үшін анықталады [meca және mecc гендері Staphylococcus aureus түрлеріне сәйкес емес және басқа бактериялық гендерде табылуы мүмкін (мысалы, S.epidermidis)] немесе Флюоресценция сигналы MREJ үшін ғана анықталады (meca немесе mecc генін тастау). MRSA UNR (Шешілмеген нәтиже) Флюоресценция сигналы meca, mecc және MREJ мақсаттары үшін анықталған; және Флюоресценция сигналы Үлгінің өңделуін басқару (ингибиторлық үлгі немесе реагент сәтсіздігі) үшін анықталмаған. IND (Анықталмаған нәтиже) Ескерту немесе қателік кодтарымен BD MAX System жүйесінің сәтсіздігі. Ескертулер мен қателік кодтарын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығындағы 10 "Ақаулықтарды жою" бөлімін қараңыз. INC (Аяқталмаған нәтиже) Ескерту немесе қателік кодтарымен BD MAX System жүйесінің сәтсіздігі. Ескертулер мен қателік кодтарын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығындағы 10 "Ақаулықтарды жою" бөлімін қараңыз. СЫНАҚ ПРОЦЕДУРАСЫН ҚАЙТАЛАҢЫЗ ЕСКЕРТПЕ: Үлгі көлемі бір қайталама сынақ үшін BD MAX System жүйесіндегі үлгі буферінің түтігінен қолжетімді. Үлгі буферінің түтіктері үшін 25 ± 2 C сақталған, қайта сынау 36 сағат аралығында «Үлгіні дайындау» бөлімінде көрсетілген қадамдармен орындалуы қажет. Баламалы, 2 8 C сақталған Үлгі буферінің түтіктері үшін қайта сынау 120 сағат (5 күн) аралығында «Үлгіні дайындау» бөлімінде көрсетілген қадамдармен орындалуы мүмкін. ЕСКЕРТПЕ: Жаңа үлгілер ұқсас сынақ топтамасында қайталама үлгілермен сыналуы мүмкін. 7

Шешілмеген нәтиже Шешілмеген нәтижелер, ингибициялық зат немесе реагент сәтсіздігін болдырмайтын тиісті нысан немесе Сынаманың өңделуін басқару құралын күшейту оқиғасында алынуы мүмкін. Үлгі(лер) өздеріне қатысты үлгі буферінің түтіктерінен жоғарыда анықталған мерзім ішінде қайталануы мүмкін. Үлгілерді бір (1) минуттай шайқап, BD MAX System жүйесінің жұмыс бөлімінен қайта қосыңыз. Анықталмаған нәтиже Анықталмаған нәтижелерді жүйе сәтсіздігі орын алған жағдайда алуға болады. Үлгі(лер) өздеріне қатысты үлгі буферінің түтіктерінен жоғарыда анықталған мерзім ішінде қайталануы мүмкін. Үлгілерді бір (1) минуттай шайқап, BD MAX System жүйесінің жұмыс бөлімінен қайта қосыңыз. Ескерту мен қателік код хабарламаларын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығын 10 қараңыз («Ақаулықтарды жою» бөлімі). Аяқталмаған нәтиже Аяқталмаған нәтижелер ескертуді не қате кодының орын алуын тоқтату немесе үлгі дайындау немесе ПТР күтілген уақытта орындалмаған оқиғасында алынуы мүмкін. Аяқталмаған нәтижелер сынақ топтамасына немесе жолаққа қолданылуы мүмкін. Үлгі(лер) өздеріне қатысты үлгі буферінің түтіктерінен жоғарыда анықталған мерзім ішінде қайталануы мүмкін. Үлгілерді бір (1) минуттай шайқап, BD MAX System жүйесінің жұмыс бөлімінен қайта қосыңыз. Ескерту мен қателік код хабарламаларын талқылау үшін BD MAX System жүйесінің пайдаланушы нұсқаулығын 10 қараңыз (Ақаулықтарды жою бөлімі). Сырттан басқару ақауы Сыналған кезде сырттан басқару күтілген нәтижелерді беру керек. Егер үлгілерді сырттан басқарудың қате нәтижесі себебінен қайталау қажет болса, олар жоғарыда анықталған мерзім ішінде жаңадан дайындалған сыртқы басқарулармен өздерінің үлгі буферінің түтіктерінен қайталануы керек. Үлгілерді бір (1) минуттай шайқап, BD MAX System жүйесінің жұмысы бөлімін орындап қайта қосыңыз. КЛИНИКАЛЫҚ ҮЛГІЛЕРДІ ӨСІРУ Антимикробтық сезгіштік сынағын немесе эпидемиологиялық теруді орындау үшін, клиникалық үлгілер жинау құрылғысынан (жағынды) Үлгіні дайындау процедурасын орындағанға дейін (жолақ-тақта әдісін пайдаланып) немесе Үлгіні дайындау процедурасын кейін (байытылған сұйық орта әдісін пайдаланып) өсірілуі мүмкін. Бастапқы ПТР сынақ топтамасы аяқталғаннан кейін дереу жағындылар үлгі буферінің түтіктерінде өсіруден бұрын аурухана процедураларына сәйкес 2 8 C 36 сағатқа дейін сақталуы мүмкін. ПРОЦЕДУРА ШЕКТЕУЛЕРІ Бұл өнім Қажетті, бірақ жинаққа кірмейтін жабдықтар мен материалдар бөлімінде тізімделген үлгі жинауды және тасымалдау құрылғыларын пайдаланып жиналған назальды жағынды үлгілерімен бірге пайдалану үшін қолданылады. Liquid Amies жалғыз немесе қос жағынды тасымалы құрылғысы пайдаланылатын BD MAX MRSA XT талдауының өнімділігі анықталмады. Бұл өнімді тек BD MAX System жүйесімен бірге пайдалануға болады. Қате сынақ нәтижелер үлгіні тиісті емес түрде жинау, өңдеу немесе сақтау, техникалық қате, үлгіні араластырып алу салдарынан немесе үлгідегі ағзалардың саны сынақтың аналитикалық сезгіштігінен төмен болу себебінен пайда болуы мүмкін. Қаптамаға салынған нұсқауды және BD MAX System пайдаланушы нұсқаулығын 10 мұқият орындау қате нәтижелерді болдырмау үшін қажет. Скрининг колонизация күйін берілген уақытта анықтайды. Колонизация тұрақты емделуіне (мысалы, деколонизация режимі), емделушінің күйіне (мысалы, ауыспалы MRSA колонизациясы) немесе қоршаған ортаның жоғары қауіпіне әсер етуіне (мысалы, MRSA тасушымен және/немесе ұзартылған госпитализация) байланысты өзгеруі мүмкін. Колонизация күйі институционалдық саясаттарға сәйкес бақылану керек. BD MAX MRSA XT оң нәтижесі ДНҚ сақталып қалуы мүмкін болғандықтан тиімсіз емдеудің жойылуын міндетті түрде білдірмейді. Бұрынғы оң сынақ нәтижесінен кейінгі теріс нәтиже сәтті емдеудің жойылуын көрсетуі мүмкін немесе үзілмелі колонизация себебінен пайда болуы мүмкін. Сынақтың оң нәтижесі өмірге қабілеттілігі бар ағзалардың бар болу мүмкіншілігін міндетті түрде білдірмейді. Оң нәтиже MRSA ДНҚ бар екенін білдіреді. BD MAX MRSA XT талдауы бір уақытта SCCmec кассетасында тасымалданатын meca немесе mecc генін және SCCmec кассетасының түйісінде орналасқан Staphylococcus aureus және orfx генін (MREJ) анықтайды. BD MAX MRSA XT талдауы meca және BD мерзімі бойынша тексерілген әлемдік жолақтардың 98% артығын есептейтін mecc жасырын MRSA жолақтарын (басқа SCCmec/MREJ түрлеріне жататын) ұсынатын i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv және xxi MREJ генотиптерін анықтауға арналған. Басқа MREJ генотиптерін анықтайтын BD MAX MRSA XT талдауының біліктілігі белгісіз. BD MAX MRSA XT талдауы шекаралық оксациллинге төзімді Staphylococcus aureus (BORSA) MRSA ретінде анықтамайды (ТЕРІС ретінде хабарланады). BORSA жолақтарындағы оксациллинге төзімділік механизмі meca немесе mecc геннің емес, β-лактамазалар өндірісінің өсуіне байланысты. BORSA жолақтары сирек кездеседі. Өзгертілген Staphylococcus aureus (MOD-SA) ішіндегі BD MAX MRSA XT талдауының орындалуы осы жолақтар бағаланбағандықтан белгісіз. MOD-SA жолақтарындағы оксациллинге төзімділік механизмі пенициллинді байланыстыратын оксациллинге арналған протеиндердің ұқсастығындағы өзгерістерге байланысты. MOD-SA жолақтары сирек кездеседі. BD MAX MRSA XT талдауы мецитиллинге төзімді коагулаза теріс Staphylococcus (MRCoNS) және "бос кассета" метициллинді сезгіш SA нұсқасынан тұратын бірге колонизацияланған танау үлгісімен сынау кезінде жалған оң MRSA нәтижесін құрады. MRCoNS және "бос кассета" метициллинді сезгіш SA нұсқасымен бірге колонизациялау сирек болады. 8

ПТР негізделген барлық in vitro диагностикалық сынақтары, LoD талдауынан төмен мақсаттың өте төмен деңгейлері анықталуы мүмкін, бірақ нәтижелердің өрбу қабілеті жоғары болмауы мүмкін. Жоғары концентрациялы тобрамицин BD MAX MRSA XT талдауында аздап ингибиция тудыруы мүмкін (толығырақ мәліметті «Кедергі жасайтын заттар» бөлімінен қараңыз). Жалған теріс нәтижелер нуклеин қышқылын дұрыс емес жинаудан, үлгілерді тасымалдау немесе сақтау себебінен жоғалту немесе дұрыс емес бактериялық жасушалар лизисі себебінен пайда болуы мүмкін. ПТР күшейтетін ингибиторлары бар және реагент бірігуін басқару және бүкіл талдау жүйесі ретінде үлгілерді анықтауға көмек көрсету үшін үлгі өңделуін басқару сынаққа қосылды. Егер нуклеин қышқылы үлгілерді дұрыс жинамау, тасымалдамау немесе сақтамау себебінен жоғалғанын немесе дұрыс бактериялық жасушалар лизисі дұрыс жасалғанын білдірмейді. Аралас өсіруде MRSE жоғары концентраттары болғанда, MRSA анықталуы өзгермелі болады. MRSE бәсекелестігі MRSA:MRSE келесі арақатынасынан байқалды: 1: 1x10 2. Аралас өсіруде MSSA жоғары концентраттары болғанда, MRSA анықталуы өзгермелі болады. MSSA бәсекелестігі MRSA:MSSA келесі арақатынасынан байқалды: 1: 1x10 3. BD MAX MRSA XT талдауының нәтижелері кейде үлгі өңделуін қате басқару себебінен шешілмеген болуы мүмкін, немесе құрал ақаулығынан анықталмаған немесе аяқталмаған болуы мүмкін және соңғы нәтижелерді алуда кідіріс тудыратын қайта сынауды қажет етеді. Праймдердегі немесе зондты байланыстыратын аймақтардағы мутациялар немесе полиморфизмдер жаңа немесе белгісіз MRSA нұсқаларын анықтауға әсер етеді, нәтижесінде ол BD MAX MRSA XT талдаумен бірге жалған теріс нәтижеге әкеледі. Барлық in vitro диагностикалық сынақтар секілді, оң және теріс болжалды мәндер таратылуына тығыз байланысты болады. BD MAX MRSA XT талдауының орындалуы таралудың және толтырудың сыналғанына байланысты болуы мүмкін. BD MAX MRSA XT талдауына BD MAX System жүйесінен үш (3) оптикалық арнаны пайдалану үшін қажет; 475/520 арнасы, 585/630 арнасы және 680/715 арнасы. Қалған оптикалық арнасының орындалуы осы талдаумен анықталмаған. КҮТІЛГЕН МӘНДЕР BD MAX MRSA XT талдауы емханалық зерттеуінде есеп берілген 2 391 нәтиже үлгілер мен ПТР деңгейлеріне сәйкес келетін үлгілерден географиялық тұрғыдан 3 түрлі жерден алынып, тікелей және толық өсірумен салыстырылды. Зерттеу популяциялары стационарлы және амбулаторлы санаттарға топтастырылды. Оң жағдайлардың саны мен пайыздық көрсеткіші BD MAX MRSA XT талдауында анықталғандай 2-кестеде бар: 2-кесте: Емделушілер тобы бойынша сәйкес клиникалық сынақты тіркеу қорытындысы Топ Жалпы үлгілер саны a MRSA оң мәндер саны Оң MRSA пайыздық көрсеткіші Стационарлық емделуші 1 681 172 Амбулаторлық 710 28 Жалпы a 2 391 200 a Тиісті ПТР нәтижелеріне негізделген барлық үлгілер. ӨНІМДІЛІК СИПАТТАМАЛАРЫ 10,2% (172/1 681) 3,9% (28/710) 8,4% (200/2 391) Клиникалық өнімділік BD MAX MRSA XT талдауы клиникалық өнімділік сипаттары бірнеше жерде келешекте зерттелетін зерттемеде анықталған. Зерттемеге үш (3) зерттеу орталығы қатысты. Зерттеуге тіркелу үшін емделушілер институционалдық саясаттарға сәйкес MRSA сынағына қолайлы болу қажет. Скрининг үшін қолайлылық талаптарына клиниканың саясаты кіреді, бірақ бұлармен ғана шектелмейді: жекеменшік денсаулық сақтау жүйесіне түскен емделушілер; интенсивті терапия бөліміне түскен емделушілер; интенсивті терапия бөліміне аударылған емделушілер; алдын ала таңдалған хирургиялық емделушілер және ұзақ медициналық күтімнен кейін түскен емделушілер. Бұрын зерттеуге тіркелген емделушілердің үлгілері қосылмады. Анықтама әдіс байытылған культурамен толықтырылған тікелей культурадан тұрады. MRSA үшін тікелей культура арқылы теріс болған барлық үлгілер үшін құнартылған культура талдауы орындалды. Селективті (Staphylococcus aureus) хромогенді ортасында бақыланған презумптивтік Staphylococcus aureus колониялары қан агарына (BA) қайта егілді. Метициллинге төзімділік Cefoxitin дискінің (30 мкг) диффузия сезгіштігін сынау арқылы расталғанда идентификация агглютинация сынағымен расталған. Trypticase Soy (соя сұйық ортасында) 6,5% NaCl (TSB 6,5% NaCl) бірге байыту MRSA бастапқы тікелей культура әдісімен расталмаған оқиғада орындалды. Бұлдырлы TSB 6,5% NaCl сұйық ортасы қосымша хромогендік құралды және ВА тақталарын егу үшін пайдаланылған, MRSA растау жоғарыда сипатталғандай орындалған. 9

MRSA үшін BD MAX MRSA XT талдауымен алынған нәтижелерді анықтама әдісімен салыстыру Зерттеу барысында жалпы 2 451 үлгі тіркелді. Олардың 94 үлгісі протокол шартына сәйкес емес етіп қарастырылған, ал алты (6) толық үйлесімді үлгі толық есеп берілмеген ПТР нәтижелерін берді. Анықтамалық әдіспен салыстырғанда жалпы 2 351 үлгі нәтижелері BD MAX MRSA XT талдауының клиникалық өнімділігін анықтау үшін пайдаланылды (3-кесте). Анықтама әдісімен (тікелей/байытылған культура) салыстырғанда, BD MAX MRSA XT талдауы MRSA оң үлгілерінің 93,1% және MRSA теріс үлгілерінің 97,8% анықтады (4-кесте). Сыналған қатысушылар үшін бұл нәтижесінде теріс прогностикалық мәнге (NPV) 99,5% және оң прогностикалық мәнге (PPV) 75,4% әкеп соқты. 3-кесте: Анықтама әдісіне салыстырғандағы BD MAX MRSA XT талдауы арқылы MRSA үшін алынған нәтижелер Барлық орындар BD MAX MRSA XT талдауы Анықтама әдісі MRSA Оң Теріс Жалпы Оң 149 48 a 197 Теріс 11 a 2 143 2 154 Жалпы 160 2 191 2 351 Сезгіштік: 93,1% (149/160) (95% сенімді аралық: 88,1%, 96,1%) Ерекшелік: 97,8% (2 143/2 191) (95% сенімді аралық: 97,1%, 98,3%) PPV: 75,4% (95% сенімді аралық: 70,0%, 80,5%) NPV: 99,5% (95% сенімді аралық: 99,1%, 99,7%) a Кейінгі зерттеу анықтамалық әдіс пен BD MAX MRSA XT талдауы арасындағы қарама-қайшы нәтижелері бар үлгілерде жасалды. 48 жалған оң BD MAX MRSA XT үлгісінің 11-сі де анықтамалық әдісті қайталағаннан кейін MRSA ОҢ болып анықталды. 11 жалған теріс BD MAX MRSA XT үлгісінің 5-і де анықтамалық әдісті қайталағаннан кейін MRSA ТЕРІС болып анықталды. 4-кесте: Анықтама әдісіне салыстырғандағы BD MAX MRSA XT талдауы арқылы MRSA үшін алынған орыннан орынға өнімділік Клиникалық орындар Таралу a Сезімталдық (95% сенімді аралық) ә 1-орын 4,3% (41/960) 2-орын 5,8% (38/650) 3-орын 10,6% (81/765) Жалпы 6,7% (160/2 375 б ) a Таралу тек анықтама әдісіне негізделеді ә Сенімді аралық б 2 375 үлгі анықтама әдісімен үйлесімді болған 92,7% (38/41) (80,6%, 97,5%) 86,8% (33/38) (72,7%, 94,2%) 96,3% (78/81) (89,7%, 98,7%) 93,1% (149/160) (88,1%, 96,1%) Ерекшелік (95% сенімді аралық) ә 99,0% (908/917) (98,1%, 99,5%) 98,6% (583/591) (97,4%, 99,3%) 95,5% (652/683) (93,6%, 96,8%) 97,8% (2 143/2 193) (97,1%, 98,3%) BD MAX MRSA XT талдауымен алынған нәтижелерді тікелей культурамен салыстыру Зерттеу барысында жалпы 2 451 үлгі тіркелді. Олардың 54 назальды жағынды үлгісі протокол шартына сәйкес емес етіп қарастырылған, ал сегіз (8) толық үйлесімді үлгі толық есеп берілмеген ПТР нәтижелерін берді. Тікелей ортамен салыстырғанда жалпы 2 389 үлгі нәтижелері BD MAX MRSA XT талдауының оң және теріс пайыз келісімін анықтау үшін пайдаланылды (5-кесте). Тікелей өсумен салыстырғанда BD MAX MRSA XT талдауы MRSA 96,5% оң үлгілерін және MRSA 97,2% теріс үлгілерін анықтады (6-кесте). 5-кесте: Тікелей өсумен салыстырғанда BD MAX MRSA XT талдауымен бірге MRSA үшін алынған нәтижелер Барлық орындар BD MAX MRSA XT талдауы Тікелей культура Оң Теріс Жалпы Оң 137 63 200 Теріс 5 2 184 2 189 Жалпы 142 2 247 2 389 Оң пайыздық келісу: 96,5% (137/142) (95% сенімді аралық: 92,0%, 98,5%) Теріс пайыздық келісу: 97,2% (2 184/2 247) (95% сенімді аралық: 96,4%, 97,8%) 10

6-кесте: Тікелей ортаға салыстырғандағы BD MAX MRSA XT талдауы арқылы MRSA үшін алынған орыннан орынға өнімділік Клиникалық орындар Оң пайыздық келісу 95% сенімді аралықпен a Теріс пайыздық келісу 95% сенімді аралықпен a 1-орын 2-орын 3-орын Жалпы a Сенімді аралық 100% (35/35) (90,1%, 100%) 93,5% (29/31) (79,3%, 98,2%) 96,1% (73/76) (89,0%, 98,6%) 96,5% (137/142) (92,0%, 98,5%) 98,7% (911/923) (97,7%, 99,3%) 98,0% (586/598) (96,5%, 98,8%) 94,6% (687/726) (92,7%, 96,0%) 97,2% (2 184/2 247) (96,4%, 97,8%) BD MAX MRSA XT талдауымен сыналған үлгі және ПТР деңгейлерінде үйлесімді 2 399 назальды жағынды үлгісінің 18 (0,8%) бастапқы сынақтан соң шешілмеген болып хабарланды. Қайта тексеруден кейін шешілмеген мөлшер 0,1% (2/2 396) (7-кестені қараңыз; [бір үлгі қайта сыналмады]). Бастапқы шешілмеген мөлшерлер 0,8% (18/2 399) a (95% сенімді аралық: 0,5%, 1,2%) 7-кесте: Шешілмеген мөлшерлер a Тиісті үлгілер мен BD MAX MRSA XT талдауы нәтижелеріне негізделген жалпы сан Қайталаудан кейін шешілмеген мөлшерлер 0,1% (2/2 396) (95% сенімді аралық: 0%, 0,3%) BD MAX MRSA XT талдауымен сыналған жалпы 2 399 назальды үлгілерінің 14 (0,6%) бастапқыда анықталмаған болып хабарланған. Қайталаудан кейін нәтиже анықталмаған болып қалмады (екі үлгі қайта тексерілмеді). Сегіз (8) (0,3%) бастапқыда аяқталмаған болып хабарланған. Қайталаудан кейін нәтиже аяқталмаған болып қалмады (бір үлгі қайта тексерілмеді). Бос кассета нұсқалары BD MAX MRSA XT талдауымен MRSA оң ретінде анықталатын үлгіге оң нәтиже MREJ және meca немесе mecc үшін алынуы қажет. MREJ орындайтын үлгі бірақ meca немесе mecc гені метициллинді сезгіш сияқты MRSA теріс емес. meca немесе mecc гені SCCmec кассетасынан шығарылған кезде осы жағдай орын алады, бірақ оң жақ аяқтар фрагменті (MREJ) оң MREJ нәтижесін алып қалады. Бұл үлгі түрі әдетте "бос кассета нұсқасы" ретінде аталады". meca және mecc гендерін анықтау мүмкіндігі BD MAX MRSA XT талдауын осы нұсқаны SA ОҢ; MRSA ТЕРІС ретінде шектеуге және анықтауға мүмкіндік береді. Клиникалық өнімділік анықтамасындағы 2 351 заңды үлгі (1-кесте), жалпы 10 үлгі meca немесе mecc гені оң MREJ нәтижеге әкелетін бос кассета профиліне сәйкес келеді. Барлық 10 үлгі анықтамалық әдіске қатысты шын теріс (TN) MRSA үлгі табылды. Аналитикалық сезгіштік BD MAX MRSA XT талдауы үшін аналитикалық сезгіштік (Айқындау шегі немесе LoD) келесі жолмен анықталды: симуляцияланған оң үлгілер культураларынан дайындалған және есептелген кең ауқымды MRSA бактериялық суспензияларда, жағындыларды сулау арқылы дайындалған. Сыналған жолақтар 5 SCCmec түрлеріне (I, II, III, IV және XI) сәйкес келетін 11 MREJ генотиптерін көрсететін 11 MRSA жолақтарын қамтиды. Содан кейін жағындылар үлгіленген назальды матрицада элюцияланған. BD MAX MRSA XT талдауының 3 түрлі өндірістік топтамаларын пайдаланып әрбір MRSA жағынды концентрация үшін 24 қайталамамен 2 түрлі оператор тарапынан сыналды. Барлық оң тексерілген қайталамалардың кемінде 95% деңгейіндегі ең төмен концентрация ретінде анықталған аналитикалық сезгіштік (LoD) MRSA жолақтарын анықтауға арналған 71 454 КҚБ/жағынды (8-кесте) ауқымында. 11

8-кесте: BD MAX MRSA XT талдауы бойынша MRSA генотиптерін анықтау шегі MRSA жағындысы MREJ генотипі SCCmec түрі a LoD концентрациясы [КҚБ/жағынды (95% Cl ә )] 1 i түр I 91 (55, 150) 2 ii түр II 110 (68, 176) 3 iii түр III 181 (102, 322) 4 iv түр III 81 (48, 136) 5 v түр IV 128 (74, 224) 6 vi түр ND б 454 (246, 839) 7 vii түр II 269 (134, 538) 8 ix түр ND б 199 (111, 356) 9 xiii түр ND б 71 (41, 121) 10 xiv түр ND б 96 (57, 163) 11 xxi түр в XI 108 (64, 183) a SCCmec түрі MREJ түріне салыстырылмайды, себебі бұлар екі әртүрлі әдіс болып табылады. ә Cl: Сенімді аралықтар б ND = анықталмаған в Құрамында mecc бар MRSA жолақтары (сондай-ақ, meca LGA251 жолағы ретінде) Аналитикалық қамтушылық Аналитикалық қамтушылықты зерттеу, шыққан жерін, MREJ генотипті (жабайы түр және мутант), SCCmec түрін, импульсты өрістің гельді электрофорез (PFGE) түрін, уақытша түрлілігін және сезгіштік үлгісін ескере отырып, түрлі MRSA жолақтарын пайдалану арқылы орындалды. Осы зерттеуде қоғамдық топтамалардағы және жақсы сипатталған клиникалық изоляттардағы жолақтарды қосқанда, ванкомицинге төзімді Staphylococcus aureus (VRSA) және ванкомицині орташа Staphylococcus aureus (VISA) жолақтарын қосқанда, 27 елден жетпіс жеті (77) MRSA жағынды сыналды. Төмен бактериялық жүктеме сыналған кезде (2 3 x LoD), BD MAX MRSA XT талдауы барлық MREJ i, ii, iii, iv, v, vi, vii, ix, xiii, xiv және xxi түрлерін анықтады. BD MAX MRSA XT талдауы MRSA SCCmec I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII және XI түрлерін, сонымен қатар MRSA PFGE түрлерін АҚШ 100 ден 800, 1 000 және 1 100 2 3 x LoD барысында анықтады. Сондай-ақ ванкомицинге (VRSA және VISA) қосымша төзімділік көрсететін барлық MRSA жолақтары анықталды. Жақсы сипатталған шақыру жағынды панелін бағалау Жақсы сипатталған шақыру жағынды панелін пайдаланып, BD MAX MRSA XT талдауының аналитикалық өнімділігін бағалау үшін қосымша аналитикалық зерттеу келесі арқылы жасалды: PFGE түрлерінің АҚШ 100 800, 1000, PFGE түрі IV/IBERIAN және 2 3 x LoD концентрациясында, көрсетілген SA POS, MRSA POS нәтижелерінде тексерілген mecc нұсқасын (meca-staphylococcus aureus жағындысын LGA251 қамтиды) қамтитын жоғары және төмен оксациллин ең аз ингибиторлық концентрациялары бар (MICs) 17 MRSA жағындыдан он жетісі (17). 4 BORSA жағындысының төртеуі (4) (шектік оксациллинге төзімді Staphylococcus aureus) 10 6 КҚБ/жағынды деңгейінде тексерілді, MRSA NEG нәтижелерін көрсетті. 10 6 КҚБ/жағынды деңгейінде тексерілген 5 MSSA жағындыдан бесеуі (5) MRSA NEG нәтижелерін көрсетті 1 мецитиллинге төзімді Staphylococcus epidermidis (MRSE) жағындысының біреуі (1) 10 6 КҚБ/жағынды деңгейінде тексерілді, MRSA NEG нәтижесін көрсетті. Аналитикалық ерекшелік MRSA анықтауға арналған талдаудың ерекшелігін көрсету үшін BD MAX System жүйесін пайдаланып, BD MAX XT талдауы жоғары деңгейлі мақсаттық емес ағзалары бар үлгілерде орындалды. Кемінде 10 6 КҚБ/мЛ концентрациясы деңгейінде тексерілген әр түрлі стафилокок емес үлгілердің 57 жағындысының елу жетісі (57) (Cryptococcus neoformans, яғни 3x10 5 КҚБ/жағынды деңгейінде тексерілгеннен басқасы) MRSA NEG нәтижелерін берді. 28 түрін көрсететін қырық бес (45) коагулаза-теріс стафилококты жағынды (CoNS) және коагулаза-оң стафилококты жағынды (CoPS) 0,5 McFarland концентрациясында BD MAX XT талдауымен сыналған. 45 жолақтың қырық бесі (45) көрсетілген MRSA NEG нәтижелерін сынақтан өткізді. Алпыс бес (65) MSSA жағынды (оның ішінде 15 бос кассеталы MSSA жолағы) жоғары концентрацияда тексерілді ( 10 6 КҚБ/жағынды), MRSA NEG нәтижелерін берді. Әртүрлі 12 вирустық түрлерді көрсететін он жеті (17) вирус 10 5 PFU/мл жағдайында сыналды. Барлық 17 вирус MRSA NEG нәтижелерін жасады. Кедергі жасайтын заттар Кейде танауларда пайдаланылатын немесе назальды жағынды үлгілерінде табылатын жиырма тоғыз (29) микроорганизмде және химиялық затта BD MAX MRSA XT талдауымен ықтимал кедергі бар-жоғы бағаланды (9-кесте). MRSA теріс сынамалары және MRSA оң үлгілері 2 3 x LoD жағдайында үлгілерді таңдау орнында немесе назальды жағынды үлгісінде табылу үшін әрбір қоспаның немесе микроағзаның ең жоғары санымен сыналған. 4,5 х 10-3 г/жағынды концентрациясында тексергенде нәтижелер хабар бермейтін кедергіні BD MAX MRSA XT талдауында шамалы ингибиция көрсеткен тобрамициннен басқа кез келген микроорганизм немесе химиялық затпен бірге көрсетті. 12

9-кесте: BD MAX MRSA XT талдауымен бірге сыналған эндогендік және коммерциялық экзогендік заттар Заттар Нәтиже a Заттар Нәтиже Муцин, өгіздің таңдай бездерінен NI Rhinocort aqua* NI Дексаметазон натрий фосфатының офтальмологиялық ерітіндісі USP, 0,1% Дексаметазон натрий фосфатының офтальмологиялық ерітіндісі NI Zicam* No-Drip Liquid Nasal Gel* іш қатуда жылдам көмек Chloraseptic* NI Флутиказона пропионата NI Taro-Mupirocin, Mupirocin сүртпе майы USP, 2% NI Luffeel* NI Ұзақ сақталатын Dristan* назальды аэрозолі NI Staphylococcus epidermidis NI Neo-Synephrine* NI Micrococcus luteus NI Equate* ағуға қарсы назальды спрейлері NI Enterococcus faecium NI Beconase AQ* NI Enterococcus faecalis NI Назальды шешім флунизолид USP, 0,025% NI Escherichia coli NI Nasacort* AQ NI Corynebacterium flavescens NI Nasonex* NI Moraxella catarrhalis NI Relenza* NI Staphylococcus hominis subsp hominis NI Тобрамицин I Haemophilus influenzae NI Қан NI Streptococcus pneumoniae NI Flumist* a NI: BD MAX MRSA XT талдауы бар хабар бермейтін кедергі. I: BD MAX MRSA XT талдауы бар хабар беретін кедергі. NI Микробтық салыстырмалы ингибиторлық әсер Ықтимал микробтық ингибиторлық әсер келесімен бағаланды: MSSA немесе MRSE төмен концентрациясымен тұтанған кезде MRSA артқан концентрациясы (1 2 x LoD). Көрсетілген бәсекелестік нәтижелері: 1 MRSA:MRSE қатынасындағы MRSE: 1x10 2 1 MRSA:MSSA қатынасындағы MSSA: 1x10 3 Дәлдік Зертханалық дәлдікпен бір (1) орында BD MAX MRSA XT талдауы үшін бағаланды. Дәлдік панелі LoD жанындағы 4 үлгілік санаттардан тұрады: Әр үлгі симуляциялық танау матриксінде бар. MRSA жолақтары төмендегіше тексерілді: Орташа оң (MP) (MRSA MREJ түрі ii): 2 және 5 x LoD Төменгі оң (LP) (MRSA MREJ түрі ii): 1 және < 2 x LoD Төменгі оң (LP) (MRSA MREJ түрі vii): 1 және < 2 x LoD Жоғарғы теріс (HN) (MRSA MREJ түрі ii): < 1 x LoD Нақты теріс (TN) Теріс үлгі (мақсатсыз) Сынақ көшірмесі 12 күн ішінде күніне 2 сынақ топтамасымен 2 түрлі технолог арқылы орындалды. TN, MP, LP және HN MRSA үлгілер үшін дәлдікті зерттеу нәтижелері 100%, 97,9%, 95,8% және 64,6% сәйкес келісуді көрсетті. Өрбу қабілеттілігі Жоғарыда дәлдікті зерттеу үшін анықталғандай, өрбу қабілеттілігін зерттеу ұқсас үлгі санаттарын пайдаланып орындалды. Әрбір санаттағы үлгілер үштік көшірмеде нақты 5 күнде сыналды, әр күні 2 панель 2 технолог тарапынан 3 клиникалық орында, 1 реагенттер топтамасын пайдаланып орындалды (орыннан орынға). Осы клиникалық орындардың бірі (1), 2 қосымша реагент топтамалары сыналған, кеңейтілген зерттеуге қатысты (топтамадан топтамаға). Әрбір үлгі санаты үшін нәтижелер екі MRSA жағындысындағы деректермен бірге көрсетілген. Жалпы сайттан сайтқа өрбу қабілеттілігінің пайыздық келісуі MRSA TN үшін 100%; MRSA MP үшін 97,8%; MRSA LP үшін 96,7% және MRSA HN 63,3% келісу сәйкес (10-кесте). NI 13