ABX Pentra Fructosamine

Transcript

1 2015/09/18 A93A01334BEL A11A x 14 ml 6 x 6 ml Pentra C400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in-vitro ποσοτικό προσδιορισμό της γλυκοζυλιωμένης πρωτεΐνης (φρουκτοζαμίνης) σε ορό ή πλάσμα με χρωματομετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: Fructo (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) 1.xx Προοριζόμενη χρήση (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της γλυκοζυλιωμένης πρωτεΐνης (φρουκτοζαμίνης) σε ορό και πλάσμα με χρωματομετρία. Κλινικό ενδιαφέρον Η φρουκτοζαμίνη χρησιμεύει ως μέσος χρονικός δείκτης των επιπέδων της γλυκόζης στο αίμα και επιτρέπει την παρακολούθηση της γλυκαιμικής κατάστασης των διαβητικών (1). Ο προσδιορισμός της φρουκτοζαμίνης αποτελεί μια καλή εναλλακτική λύση για τον προσδιορισμό της αιμοσφαιρίνης Α1c σε ασθενείς που εμφανίζουν παραλλαγμένες μορφές αιμοσφαιρίνης. Η ανίχνευση της συγκέντρωσης γλυκοζυλιωμένων πρωτεϊνών (γλυκοαιμοσφαιρίνη, γλυκολευκωματίνη ή γλυκοζυλιωμένες ολικές πρωτεΐνες) είναι γενικά αποδεκτή για την παρακολούθηση του επιπέδου γλυκόζης στους διαβητικούς. Άλλες μέθοδοι προσδιορισμού της φρουκτοζαμίνης, όπως η χρωματογραφία συγγένειας και η μέθοδος του θειοβαρβιτουρικού οξέος, είναι πιο πολύπλοκες, περισσότερο χρονοβόρες και είναι δύσκολο να συγκριθούν μεταξύ διαφορετικών εργαστηρίων (1, 2). Αυτή η δοκιμασία προσδιορισμού βασίζεται στη μέθοδο του κυανού του νιτροτετραζολίου (3) και επιτρέπει τον απλό, ακριβή και εύκολα αυτοματοποιήσιμο προσδιορισμό της μη ενζυματικής γλυκοζυλίωσης των πρωτεϊνών του ορού. Καθώς οι πρωτεΐνες του ορού έχουν μικρότερη διάρκεια ζωής από την αιμοσφαιρίνη (ημίσεια ζωή λευκωματίνης: 19 ημέρες, διάρκεια ζωής ερυθροκυττάρων: περ. 120 ημέρες), ο προσδιορισμός της φρουκτοζαμίνης επιτρέπει τον έλεγχο της κατάστασης της γλυκόζης του αίματος στη διάρκεια μικρότερης περιόδου (1 ως 3 εβδομάδες) από τον προσδιορισμό της γλυκοζυλιωμένης αιμοσφαιρίνης (6 ως 8 εβδομάδες) (4). Η μεταβολή του επιπέδου φρουκτοζαμίνης στον ορό αποτελεί ένδειξη αυξημένης μεταβολικής ανισορροπίας, προτού καν αυτή αντικατοπτριστεί στα επίπεδα της HbA1c. Μετά τη θεραπεία, τα επίπεδα φρουκτοζαμίνης μειώνονται πιο γρήγορα από τα επίπεδα της HbA1c (5). Μέθοδος Στο δείγμα προστέθηκε αντιδραστήριο R1 + R2 (αντιδραστήριο/ρυθμιστικό διάλυμα ΝΒΤ). Αυτή η χρωματομετρική μέθοδος βασίζεται στην ικανότητα των κετοαμινών να ανάγουν το κυανούν του νιτροτετραζολίου (NBT) σε αλκαλικό περιβάλλον. Η ταχύτητα σχηματισμού της χρωστικής ουσίας φορμαζάνης είναι ευθέως ανάλογη προς τη συγκέντρωση της φρουκτοζαμίνης. Η παρουσία ουρικάσης στο αντιδραστήριο εξαλείφει τυχόν παρεμβολές από ουρικό οξύ και η προσθήκη απορρυπαντικού αποτρέπει τυχόν επιδράσεις του υποστρώματος (matrix effect). Η ταχύτητα της αντίδρασης μετράται με φωτομετρία στα 546 nm. Αντιδραστήρια To είναι έτοιμο για χρήση. 1 / 5

2 Αντιδραστήριο 1 + Αντιδραστήριο 2: Κυανούν του νιτροτετραζολίου Χολικό νάτριο KCl Ρυθμιστικό φωσφορικού καλίου Ρυθμιστικό ανθρακικού καλίου, ph 10,3 Ουρικάση (είδος Arthrobacter) 0,57 mmol/l 4,9 mmol/l 49 mmol/l 49 mmol/l 250 mmol/l 2,8 KU/I Απορρυπαντικό 2,1% To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Χρησιμοποιώντας το χωνί που περιλαμβάνεται στο κουτί, μεταφέρετε το περιεχόμενο ενός φιαλιδίου R2 σε ένα φιαλίδιο R1. 2. Επανατοποθετήστε το πώμα του φιαλιδίου και ομοιογενοποιήστε το μίγμα με ελαφρά αναστροφή. Το διάλυμα θα είναι έτοιμο για χρήση ύστερα 30 λεπτά. 3. Μεταφέρετε την απαραίτητη για τις αναλύσεις μιας ημέρας ποσότητα του διαλύματος σε φιαλίδιο αντιδραστηρίου 15, 10 ή 4 ml. 4. Τοποθετήστε το φιαλίδιο στη θέση 1, σε μία από τις διαθέσιμες περιοχές. Χρησιμοποιήστε ένα από τα ακόλουθα: φιαλίδιο αντιδραστηρίου των 15 ml φιαλίδιο αντιδραστηρίου των 10 ml + ειδικό προσαρμογέα φιαλίδιο αντιδραστηρίου των 4 ml + ειδικό προσαρμογέα Σημαντική σημείωση: Απορρίψτε το εναπομείναν αντιδραστήριο στο τέλος της ημέρας. Χειρισμός σε κασέτα 1. Κολλήστε στην κασέτα το αντίστοιχο ειδικό αυτοκόλλητο για το αντιδραστήριο με barcode (603). 2. Χρησιμοποιώντας το χωνί που περιλαμβάνεται στο κουτί, μεταφέρετε το περιεχόμενο ενός φιαλιδίου R2 σε ένα φιαλίδιο R1. 3. Επανατοποθετήστε το πώμα του φιαλιδίου και ομοιογενοποιήστε το μίγμα με ελαφρά αναστροφή. Το διάλυμα θα είναι έτοιμο για χρήση ύστερα 30 λεπτά. 4. Μεταφέρετε το αντιδραστήριο στο διαμέρισμα 1 (χωρητικότητα 30 ml) της παρεχόμενης κασέτας 30/10 (βλ. διάγραμμα παρακάτω). Το διαμέρισμα 2 της κασέτας δεν θα χρησιμοποιηθεί. 5. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 6. Τοποθετήστε το προστατευτικό καπάκι κωδ. GBM0969 στην κασέτα. 7. Τοποθετήστε την κασέτα αντιδραστηρίων σε μια διαθέσιμη θέση του δίσκου αντιδραστηρίων και μέσα στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400. Ο ελαφρύς χρωματισμός του διαλύματος δεν επηρεάζει το αποτέλεσμα της δοκιμασίας προσδιορισμού. Σημαντική σημείωση: Απορρίψτε το εναπομείναν αντιδραστήριο στο τέλος της ημέρας. Βαθμονομητής R1 + R2 5. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 6. Τοποθετήστε το φορέα αντιδραστηρίων στο θάλαμο ψύξης αντιδραστηρίων του Pentra C400. Ο ελαφρύς χρωματισμός του διαλύματος δεν επηρεάζει το αποτέλεσμα της δοκιμασίας προσδιορισμού. Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Fructo Cal, Κωδ. A11A01680 (δεν περιλαμβάνεται) 3 x 1 ml (λυοφιλιωμένο) 2 / 5

3 Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: Fructo Control N, κωδ. A11A01681 (δεν περιλαμβάνεται) 3 x 1 ml (λυοφιλιωμένο) Fructo Control P, κωδ. A11A01682 (δεν περιλαμβάνεται) 3 x 1 ml (λυοφιλιωμένο) Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: Pentra C400 Βαθμονομητής: Fructo Cal, Κωδ.A11A01680 Υλικά ελέγχου: Fructo Control N, Κωδ.A11A01681, και Fructo Control P, Κωδ.A11A01682 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα Ορός. Πλάσμα σε EDTA η Ηπαρίνη. Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα (6): Στους C: 3 ημέρες Στους 2-8 C: 2 εβδομάδες Στους -20 C: 2 μήνες Πρέπει να αποφεύγεται επανειλημμένη ψύξη και απόψυξη. Αναμείξτε καλά μετά την απόψυξη. Δείγματα που περιέχουν ίζημα πρέπει να φυγοκεντρούνται πριν από την ανάλυση. Εύρος τιμών αναφοράς (7, 8) Προσδιορίστηκε η συγκέντρωση φρουκτοζαμίνης σε 555 άτομα ηλικίας ετών τα οποία ήταν φαινομενικά υγιή. Μετά από αυτή τη μελέτη, το εύρος τιμών αναφοράς ορίστηκε στα µmol/l για τους μη διαβητικούς ενήλικες. Για ομάδα ασθενών με ελλιπώς ελεγχόμενο διαβήτη, η μέση τιμή της φρουκτοζαμίνης ήταν 396 µmol/l (εύρος τιμών αναφοράς: µmol/l). Συγκέντρωση φρουκτοζαμίνης που υπερβαίνει τα όρια αναφοράς αποτελεί ένδειξη υπεργλυκαιμίας που έχει ξεκινήσει 1 έως 3 εβδομάδες πριν ή περισσότερο. Επειδή οι τιμές μπορεί να ποικίλουν ανάλογα με την ηλικία, τη διατροφή, το φύλο και τη γεωγραφική κατανομή, κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος τιμών αναφοράς. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Για τη διάγνωση, τα αποτελέσματα προσδιορισμού της φρουκτοζαμίνης θα πρέπει να συγκρίνονται πάντα με τα δεδομένα του ιστορικού και τα αποτελέσματα κλινικών και συμπληρωματικών εξετάσεων. Σημείωση (9, 10): Σε περιπτώσεις υδραιμίας (στην εγκυμοσύνη, για παράδειγμα), μπορεί να είναι χρήσιμο να προσδιοριστεί η σχέση μεταξύ φρουκτοζαμίνης και ολικών πρωτεϊνών: Φρουκτοζαμίνη σχετική (µmol/l) = Φρουκτοζαμίνη μετρηθείσα (µmol/l) x 72 (g/l) / Μετρημένες ολικές πρωτεΐνες (g/l) Δεν συνιστάται διόρθωση ανάλογα με το επίπεδο της λευκωματίνης. Η δυσπρωτεϊναιμία μπορεί να οδηγήσει σε λανθασμένα αποτελέσματα. Φύλαξη και σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε φιαλίδια που δεν έχουν ανοιχθεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης στην ετικέτα, εφόσον φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2-8 C και προστατεύονται από το φως. Αφού ανασυσταθεί, το παραμένει σταθερό για 28 ημέρες σε θερμοκρασία 2-8 C. Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. 3 / 5

4 Γενικές προφυλάξεις a Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Το αντιδραστήριο αυτό ταξινομείται ως επικίνδυνο σύμφωνα με τον κανονισμό αρ.1272/2008 (EC). Αντιδραστήριο 1 (R1): Κίνδυνος H318: Προκαλεί σοβαρή οφθαλμική βλάβη. H412: Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς με μακροχρόνιες δυσμενείς επιπτώσεις. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/ πρόσωπο. P305 + P351 + P338: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΑ ΜΑΤΙΑ: Ξεπλύνετεπροσεκτικά με νερό για αρκετά λεπτά. Εάν υπάρχουν φακοί επαφής, αφαιρέστετους, εφόσον είναι εύκολο. Συνεχίστε να ξεπλένετε. P310: Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. P273: Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. P501: Διάθεση του περιεχομένου και περιέκτη σύμφωνα με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς, εθνικούς και διεθνείς κανονισμούς. Αποφύγετε την κατάποση. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και τις βλεννογόνους. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Τα φιαλίδια αντιδραστηρίων είναι μίας χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές διατάξεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον Pentra C400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω είναι αντιπροσωπευτικά της απόδοσης στα συστήματα της HORIBA Medical. Αριθμός αναλύσεων: περίπου 600 αναλύσεις Όγκος δείγματος: 10 µl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο Valtec (11) και ισούται με 13 µmol/l. Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (11). ελέγχου 1 ελέγχου 2 Μέση τιμή µmol/l CV % 267,75 1,97 525,55 1,24 Δείγμα 1 264,00 2,13 Δείγμα 2 404,50 1,61 Δείγμα 3 539,60 1,46 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (χαμηλής και υψηλής συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (12). ελέγχου 1 ελέγχου 2 Μέση τιμή µmol/l CV % 257,96 3,08 488,96 2,60 Δείγμα 1 343,09 3,90 Δείγμα 2 450,48 3,67 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 13 έως 900 µmol/l, με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 1800 µmol/l. Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 900 µmol/l, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-Ρ του CLSI (NCCLS) (13). Συσχέτιση: 100 δείγματα ασθενών (ορός και πλάσμα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (14). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (9) είναι: Y = 0,98 X + 3,34 (µmol/l) με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,99. a Τροποποίηση: τροποποίηση κατηγοριοποίησης. 4 / 5

5 Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 278 µmol/l (480 mg/dl). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για έως και 7 mmol/l (612,5 mg/dl). Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 150 µmol/l (8,8 mg/dl). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 105 µmol/l (6,0 mg/dl). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (15, 16). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 21 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. 11. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 13. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Proposed Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-P (1986) 6 (18). 14. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 15. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 1.xx Βιβλιογραφία 1. Armbruster DA. Clin. Chem. (1987) 33: Furth AJ. Anal. Biochem. (1988) 175: Johnson RN, Metcalf PA, Baker JR. Clin. Chim. Acta. (1983) 127: Tahara Y, Shima K. Diabetes Care (1995) 18: Martina WV, Martijn EG, van der Molen M, Schermer JG, Muskiet FA. J. Clin. Chem. (1993) 39: Schleicher ED, Vogt BW. Clin. Chem. (1990) 36: Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of analytes preanalytical variables. Broschure im samples: From the patient to the laboratory. Darmstadt: GIT Verlag (1996). 8. Schleicher ED, Olgemöller B, Wiedenmann E, Gerbitz KD. Clin. Chem. (1993) 39: Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: Bablock W et al. A general regression procedure for method transformation. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1988) 26: / 5

6