Maxwell CSC Blood DNA Kit

ΤΕΧΝΙΚΌ ΕΓΧΕΙΡΊΔΙΟ Maxwell CSC Blood DNA Kit Οδηγίες χρήσης του προϊόντος AS1321 Προσοχή: Χειριστείτε τα φυσίγγια με προσοχή, τα άκρα σφράγισης ενδέχεται να είναι αιχμηρά. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ AS1321 2800 Woods Hollow Rd. Madison, WI USA MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Germany Αναθεώρηση 5/18 TM374

Maxwell CSC Blood DNA Kit Όλη η τεχνική τεκμηρίωση είναι διαθέσιμη στη διεύθυνση: www.promega.com/protocols/ Επισκεφτείτε την ιστοσελίδα για να βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείτε την πιο πρόσφατη έκδοση του παρόντος τεχνικού εγχειριδίου. Αν έχετε απορίες σχετικά με τη χρήση του παρόντος συστήματος, επικοινωνήστε με την τεχνική υπηρεσία της Promega μέσω e-mail στη διεύθυνση: techserv@promega.com 1. Περιγραφή...1 2. Στοιχεία προϊόντος, συνθήκες αποθήκευσης και επεξηγήσεις συμβόλων...2 3. Προοριζόμενη χρήση προϊόντος...4 4. Περιορισμοί χρήσης προϊόντος...5 5. Πριν ξεκινήσετε...5 5.A. Προετοιμασία δειγμάτων ολικού αίματος...6 5.B. Προετοιμασία φυσιγγίου Maxwell CSC Cartridge...7 6. Κύκλος λειτουργίας οργάνου...9 7. Διαδικασία μετά τον καθαρισμό... 11 8. Αντιμετώπιση προβλημάτων... 11 9. Βιβλιογραφία... 12 10. Περίληψη αλλαγών... 12 Το Maxwell CSC Blood DNA Kit είναι διαθέσιμο μόνο σε συγκεκριμένες χώρες. Το παρόν προϊόν πληροί τις βασικές απαιτήσεις της Οδηγίας της Ευρωπαϊκής Ένωσης 98/79/ΕΚ για τα ιατροτεχνολογικά βοηθήματα που χρησιμοποιούνται στη διάγνωση in vitro. 1. Περιγραφή Το Maxwell CSC Blood DNA Kit (a) χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με το όργανο Maxwell CSC και παρέχει μια εύκολη μέθοδο για αποτελεσματικό, αυτοματοποιημένο καθαρισμό γονιδιωματικού DNA (gdna) από ανθρώπινα δείγματα αίματος. Το όργανο Maxwell CSC παρέχεται με προπρογραμματισμένες μεθόδους καθαρισμού και έχει σχεδιαστεί για χρήση με τα προδιανεμημένα φυσίγγια αντιδραστηρίων και τα πρόσθετα αντιδραστήρια που παρέχονται με το κιτ, εξασφαλίζοντας απλές και εύκολες διαδικασίες. Το όργανο μπορεί να επεξεργαστεί έως 16 δείγματα σε 40 λεπτά, και το κεκαθαρμένο DNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας σε μια σειρά εφαρμογών downstream, όπως το PCR. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 1 www.promega.com TM374 Αναθεώρηση 5/18

1. Περιγραφή (συνέχεια) Το Maxwell CSC Blood DNA Kit εκτελεί καθαρισμό του νουκλεϊκού οξέος χρησιμοποιώντας ένα νέο παραμαγνητικό σωματίδιο, που παρέχει μια κινητή σταθερή φάση για τη βελτιστοποίηση της δέσμευσης δείγματος, πλύσης και καθαρισμού του gdna. Αυτό το σωματίδιο χρησιμοποιεί δέσμευση νουκλεϊκών οξέων με βάση την κυτταρίνη και παρέχει μια υψηλότερη δυνατότητα δέσμευσης και καθαρότερο προϊόν έκπλυσης από τον κλασσικό καθαρισμό DNA με βάση του διοξειδίου του πυριτίου. Το Maxwell CSC Instrument είναι ένα όργανο χειρισμού παραμαγνητικού σωματιδίου που επιτρέπει την ικανοποιητική δέσμευση του gdna στο παραμαγνητικό σωματίδιο στο πρώτο βύθισμα ενός προγεμισμένου φυσιγγίου και μετακινεί το δείγμα μεταξύ των βυθισμάτων του φυσιγγίου, με ανάμιξη κατά την επεξεργασία. Αυτή η προσέγγιση μαγνητικής δέσμευσης αποφεύγει τα συνήθη προβλήματα όπως φραγμένα ακροφύσια ή μερική μεταφορά αντιδραστηρίου, που έχουν ως αποτέλεσμα τη μη βέλτιστη επεξεργασία καθαρισμού από άλλα αυτόματα συστήματα συχνής χρήσης. 2. Στοιχεία προϊόντος, συνθήκες αποθήκευσης και επεξηγήσεις συμβόλων ΠΡΟΪΌΝ ΜΈΓΕΘΟΣ ΑΡ. ΚΑΤ. Maxwell CSC Blood DNA Kit 48 preps AS1321 Για διαγνωστική χρήση in vitro. Μόνο για επαγγελματική χρήση. Επαρκεί για 48 αυτόματες απομονώσεις από δείγματα ολικού αίματος 300 μl. Τα φυσίγγια Maxwell CSC Cartridges προορίζονται για μία μόνο χρήση. 15 C 30 C 6010TB 48 Περιλαμβάνει: 2 1 ml Proteinase K (PK) Solution 20 ml Lysis Buffer 48 Maxwell CSC Blood Cartridges 50 CSC/RSC Plungers 50 Elution Tubes (0.5ml) 20 ml Elution Buffer Συνθήκες αποθήκευσης: Αποθηκεύστε το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit στους 15 30 C. Πληροφορίες ασφαλείας: Τα φυσίγγια αντιδραστηρίων περιέχουν αιθανόλη και ισοπροπανόλη. Αυτές οι ουσίες είναι δυνητικά εύφλεκτες, επιβλαβείς και ερεθιστικές. Τα φυσίγγια Maxwell CSC Cartridges έχουν σχεδιαστεί για χρήση με δυνητικά μολυσματικές ουσίες. Χρησιμοποιήστε κατάλληλο προσωπικό προστατευτικό εξοπλισμό (π.χ. γυαλιά και γάντια) κατά το χειρισμό μολυσματικών ουσιών. Ακολουθήστε τις κατευθυντήριες οδηγίες του ιδρύματός σας σχετικά με το χειρισμό και την απόρριψη όλων των μολυσματικών ουσιών που χρησιμοποιήθηκαν με το σύστημα αυτό. 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM374 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

Προσοχή: Χειριστείτε τα φυσίγγια με προσοχή, τα άκρα σφράγισης ενδέχεται να είναι αιχμηρά. Περισσότερες πληροφορίες: Τα στοιχεία του κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit είναι κατάλληλα και πιστοποιημένα μέσω ποιοτικού ελέγχου για την αλληλεπίδρασή τους. Δεν συνιστάται η ανάμιξη στοιχείων κιτ διαφορετικών παρτίδων. Χρησιμοποιείτε μόνο τα στοιχεία που παρέχονται σε κάθε κιτ. Επεξηγήσεις συμβόλων Σύμβολο Επεξήγηση Σύμβολο Επεξήγηση In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος 15 C 30 C Αποθήκευση στους 15-30 C. 2800 Woods Hollow Rd. Madison, WI USA Κατασκευαστής Προσοχή Ερεθιστικό Καρκινογόνο Τα περιεχόμενα επαρκούν για «n» εξετάσεις Ευρωπαϊκή Συμμόρφωση Προειδοποίηση. Βιολογικός κίνδυνος. Προειδοποίηση. Κίνδυνος σύνθλιψης. Αριθμός καταλόγου Αριθμός παρτίδας Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 3 www.promega.com TM374 Αναθεώρηση 5/18

3. Προοριζόμενη χρήση προϊόντος Το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit προορίζεται για χρήση, σε συνδυασμό με το όργανο Maxwell CSC και τη μέθοδο καθαρισμού Maxwell CSC Blood DNA, ως μια ιατρική συσκευή για διάγνωση in vitro (IVD) για την εκτέλεση αυτόματης απομόνωσης γονιδιωματικού DNA από ανθρώπινα δείγματα ολικού αίματος. Το κεκαθαρμένο DNA είναι κατάλληλο για χρήση σε διαγνωστικές εξετάσεις in vitro που βασίζονται στην ενίσχυση. Το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit προορίζεται για χρήση σε θερμοκρασία μεταξύ 15 C και -30 C. Η χρήση εκτός αυτού του εύρους θερμοκρασίας ενδέχεται να μην εμφανίσει τα βέλτιστα αποτελέσματα. Δείγματα ολικού αίματος που συλλέγονται σε σωλήνες συλλογής αίματος που περιέχουν EDTA, ηπαρίνη ή αντιπηκτικά κιτρικού νατρίου μπορούν να χρησιμοποιηθούν με το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit. Ο Πίνακας 1 εμφανίζει τον αποδεκτό χρόνο αποθήκευσης των δειγμάτων σε διαφορετικές συνθήκες πριν τη χρήση με το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit. Το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα που έχουν συλλεχθεί σε άλλους τύπους σωλήνων συλλογής αίματος ή που έχουν αποθηκευτεί σε συνθήκες διαφορετικές από αυτές που περιλαμβάνει ο Πίνακας 1. Θερμοκρασία αποθήκευσης δείγματος 15-30 C 2-10 C 80 C ή χαμηλότερη Χρόνος αποθήκευσης πριν τον καθαρισμό έως 72 ώρες έως 7 ημέρες Για πάντα Το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit δεν προορίζεται για χρήση στο πλαίσιο μιας συγκεκριμένης διαγνωστικής εξέτασης. Το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit προορίζεται αποκλειστικά για επαγγελματική χρήση. Τα διαγνωστικά αποτελέσματα που προκύπτουν με τη χρήση γονιδιωματικού DNA κεκαθαρμένου σε αυτό το σύστημα πρέπει να ερμηνεύονται σε συνδυασμό με άλλα κλινικά ή εργαστηριακά δεδομένα. 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM374 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

4. Περιορισμοί χρήσης προϊόντος Το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα ιστών ή με δείγματα από σωματικά υγρά εκτός από ανθρώπινο ολικό αίμα ή με δείγματα ανθρώπινου ολικού αίματος με θρόμβους. Το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit δεν προορίζεται για χρήση με μη ανθρώπινα δείγματα, συμπεριλαμβανομένων βακτηριακών και ιικών δειγμάτων, ή για τον καθαρισμό του RNA. Η απόδοση του κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit έχει αξιολογηθεί μέσω απομόνωσης του DNA από δείγματα ολικού αίματος 50 300 µl με μέτρηση λευκών αιμοσφαιρίων (wbc) με εύρος από 4 10 6 έως 10 10 6 wbc/ml και έκπλυση του DNA σε 50 100 µl. Δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα εκτός αυτού του εύρους. Η απόδοση του κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit έχει αξιολογηθεί για συμβατότητα με τους παρακάτω πιθανούς παράγοντες αναστολής ενίσχυσης γονιδιωματικού DNA: αίμη, αλκοόλη, IgG και γουανιδίνη. Δεν έχουν αξιολογηθεί άλλες ενώσεις. Ο χειριστής είναι υπεύθυνος για τον καθορισμό των χαρακτηριστικών απόδοσης που απαιτούνται για την εκτέλεση διαγνωστικών εφαρμογών downstream. Κατάλληλοι οροί ελέγχου θα πρέπει να περιλαμβάνονται σε όλες τις διαγνωστικές εφαρμογές downstream χρησιμοποιώντας κεκαθαρμένο γονιδιωματικό DNA με το κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit. 5. Πριν ξεκινήσετε Υλικά που παρέχονται από το χειριστή προαιρετικά, περιστροφή αναμίκτη σωλήνων για δείγματα υγρού αίματος επιτραπέζιος αναμίκτης περιδίνησης πιπέτες και ακροφύσια πιπετών για μεταφορά δειγμάτων στα προγεμισμένα φυσίγγια αντιδραστηρίων σωλήνες 1,5 2,0 ml για επώαση δειγμάτων (π.χ. Microtube, 1,5 ml [Κατ. αρ. V1231]) θερμαντική πλάκα ρυθμισμένη στους 56 C (Σημείωση: Η θερμαντική πλάκα θα πρέπει να ρυθμίζεται στους 56 C. Η πραγματική θερμοκρασία της θερμαντικής πλάκας θα πρέπει να μετράται στους 56 C εντός των προδιαγραφών βαθμονόμησης του θερμόμετρου που χρησιμοποιείται για τη μέτρηση.) Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 5 www.promega.com TM374 Αναθεώρηση 5/18

5.A. Προετοιμασία δειγμάτων ολικού αίματος Ικανότητα επεξεργασίας δειγμάτων ολικού αίματος Η συνολική απόδοση του γονιδιωματικού DNA από δείγματα ολικού αίματος εξαρτάται από τον όγκο δείγματος και τον αριθμό των λευκών αιμοσφαιρίων/ml. Κάθε φυσίγγιο που παρέχεται στο κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit έχει σχεδιαστεί για τον καθαρισμό γονιδιωματικού DNA από 50 300 µl ολικού αίματος, με εύρος λευκών αιμοσφαιρίων από 4 10 6 έως 10 10 6 wbc/ml ολικού αίματος (τιμές για υγιή ενήλικα, 1). Συνιστάται η εκτέλεση μέτρησης λευκών αιμοσφαιρίων σε κάθε δείγμα πριν τον καθαρισμό DNA για να βεβαιωθείτε ότι το δείγμα βρίσκεται εντός αυτού του εύρους. Δείγματα εκτός αυτού του εύρους ενδέχεται να μην εμφανίσουν βέλτιστα αποτελέσματα. Σημείωση: Το παρόν κιτ έχει δοκιμαστεί με δείγματα ανθρώπινου ολικού αίματος που έχουν συλλεχθεί σε σωλήνες EDTA, κιτρικού νατρίου ή ηπαρίνης. Η απόδοση της χημείας δεν είναι εγγυημένη με άλλους τύπους σωλήνων συλλογής αίματος. Τα δείγματα αίματος μπορούν να είναι φρέσκα (αποθηκευμένα στους 15 30 C έως και 72 ώρες), σε ψυγείο (αποθηκευμένα στους 2 10 C έως και επτά ημέρες) ή κατεψυγμένα (αποθηκευμένα στους 80 C ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία) πριν τον καθαρισμό DNA. Τα παγωμένα δείγματα θα πρέπει να αποψυχθούν πριν την επεξεργασία. Όλα τα δείγματα αίματος θα πρέπει να αναμιχθούν επαρκώς πριν τη χρήση. 1. Αναμίξτε όλα τα δείγματα αίματος για τουλάχιστον 5 λεπτά στους 15 30 C. 2. Προετοιμάστε και τοποθετήστε ετικέτες στους σωλήνες επώασης που θα τοποθετηθούν στη θερμαντική πλάκα που έχει ρυθμιστεί στους 56 C. 3. Προσθέστε 30 μl διαλύματος πρωτεϊνάσης K (PK) σε κάθε σωλήνα επώασης. 4. Προσθέστε υγρό αίμα (μεταξύ 50 µl και 300 μl) σε κάθε σωλήνα επώασης. Φροντίστε για την αποφυγή θρόμβων του υλικού (αν υπάρχει) κατά τη μεταφορά αίματος στο σωλήνα επώασης. Το σύστημα δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα αίματος με θρόμβους. Αλλάξτε ακροφύσια σε κάθε μεταφορά δείγματος αίματος για την αποφυγή διασταυρούμενης επιμόλυνσης. 5. Προσθέστε 300 µl ρυθμιστικού διαλύματος λύσης σε κάθε σωλήνα επώασης. Αλλάξτε ακροφύσια σε κάθε μεταφορά ρυθμιστικού διαλύματος λύσης για την αποφυγή διασταυρούμενης επιμόλυνσης. 6. Αναδεύστε κάθε σωλήνα σε μέγιστη ταχύτητα για 10 δευτερόλεπτα. 7. Εκτελέστε επώαση κάθε σωλήνα στη θερμαντική πλάκα (ρυθμισμένη στους 56 C) για 20 λεπτά. Κατά την επώαση, προετοιμάστε τα φυσίγγια όπως περιγράφεται στην Ενότητα 5.B. 8. Ελέγξτε κάθε προϊόν λύσης μετά την επώαση. Μετά την επεξεργασία πρωτεϊνάσης K, το δείγμα αλλάζει χρώμα από κόκκινο σε πρασινωπό καφέ. Αν τα δείγματα δεν αλλάξουν χρώμα μετά την επεξεργασία πρωτεϊνάσης K, αυτό υποδεικνύει ότι η επεξεργασία ήταν ανεπαρκής και η απόδοση DNA μετά τον καθαρισμό και η καθαρότητα θα επηρεαστούν. Μην επεξεργάζεστε δείγματα περαιτέρω αν δεν παρατηρηθούν αλλαγές στο χρώμα μετά το τέλος της περιόδου επώασης της πρωτεϊνάσης K. 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM374 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

9. Μεταφέρετε κάθε δείγμα προϊόντος λύσης αίματος από το σωλήνα επώασης στο βύθισμα αρ.1 σε ένα ξεχωριστό φυσίγγιο. (Το βύθισμα αρ.1 είναι το βαθύτερο βύθισμα στο φυσίγγιο). Αλλάξτε ακροφύσια σε κάθε μεταφορά δείγματος για την αποφυγή διασταυρούμενης επιμόλυνσης. Σημείωση: Τα φυσίγγια Maxwell CSC Cartridges θα πρέπει να διαθέτουν ένα ορατό μαύρο καθίζημα μικροσωματιδίων ρητίνης στο δεύτερο βύθισμα του φυσιγγίου. Αν η ρητίνη δεν είναι ορατή, ανακινήστε τα σωματίδια στο φυσίγγιο για απόσπαση τυχόν ρητίνης που ενδέχεται να έχει κολλήσει στη σφράγιση του φυσιγγίου πριν την αφαίρεση της σφράγισης. 5.B. Προετοιμασία φυσιγγίου Maxwell CSC Cartridge 1. Αλλάξτε γάντια πριν το χειρισμό των φυσιγγίων Maxwell CSC, των εμβόλων CSC/RSC και των σωλήνων έκπλυσης. Τα φυσίγγια είναι τοποθετημένα στο δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray έξω από το όργανο και το δίσκο πλατφόρμας που περιλαμβάνει τα φυσίγγια και τα δείγματα και στη συνέχεια μεταφέρεται στο όργανο για καθαρισμό. Τοποθετήστε τα φυσίγγια που θα χρησιμοποιηθούν στο δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray (Εικόνα 2). Τοποθετήστε κάθε φυσίγγιο στο δίσκο πλατφόρμας με βύθισμα αρ.1 (το βαθύτερο βύθισμα στο φυσίγγιο) όσο πιο μακρυά γίνεται από τους σωλήνες έκπλυσης. Πιέστε το φυσίγγιο προς τα κάτω για να ασφαλίσει στη θέση του. Βεβαιωθείτε ότι και τα δύο άκρα του φυσιγγίου έχουν τοποθετηθεί σωστά στο δίσκο πλατφόρμας. Αφαιρέστε προσεκτικά τη σφράγιση, μέχρι να αφαιρεθεί ολόκληρη η πλαστική σφράγιση από το πάνω μέρος του φυσιγγίου. Πριν από την τοποθέτηση των φυσιγγίων στο δίσκο πλατφόρμας, βεβαιωθείτε ότι έχει αφαιρεθεί όλη η ταινία σφράγισης και τυχόν υπολείμματα κολλώδους ουσίας. Προσοχή: Χειριστείτε τις κασέτες με προσοχή. Τα άκρα σφράγισης ενδέχεται να είναι αιχμηρά. 2. Τοποθετήστε ένα έμβολο στο βύθισμα αρ.8 σε κάθε φυσίγγιο. 3. Τοποθετήστε ένα κενό σωλήνα έκπλυσης στη θέση σωλήνα έκπλυσης για κάθε φυσίγγιο στο δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray. Σημείωση: Χρησιμοποιείτε μόνο τους σωλήνες έκπλυσης που παρέχονται στο κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit. Άλλοι σωλήνες έκπλυσης ενδέχεται να μην είναι συμβατοί με το όργανο Maxwell CSC και ενδέχεται να επηρεάσουν την απόδοση καθαρισμού DNA. 4. Προσθέστε 50 100 μl ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης στον πυθμένα κάθε σωλήνα έκπλυσης. Σημείωση: Χρησιμοποιείτε μόνο τους σωλήνες έκπλυσης που παρέχονται στο κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit. Η χρήση άλλων ρυθμιστικών διαλυμάτων έκπλυσης ενδέχεται να επηρεάσουν την απόδοση του καθαρισμού DNA. Σημειώσεις προετοιμασίας φυσιγγίου Maxwell CSC Cartridge 1. Εάν επεξεργάζεστε λιγότερα από 16 δείγματα, τοποθετήστε τα φυσίγγια στο κέντρο του δίσκου πλατφόρμας. 2. Καθαρίστε διαρροές δείγματος ή αντιδραστηρίου σε οποιοδήποτε σημείο του Maxwell CSC Deck Tray όπως υποδεικνύεται στο εγχειρίδιο λειτουργίας του οργάνου Maxwell CSC. Μη χρησιμοποιείτε λευκαντικό σε κανένα μέρος του οργάνου. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 7 www.promega.com TM374 Αναθεώρηση 5/18

10784TA 1 2 3 4 5 6 7 8 1. Ρυθμιστικό Binding Buffer διάλυμα δέσμευσης 2. Παραμαγνητικά Paramagnetic Cellulose σωματίδια Particles κυτταρίνης Σημείωση: Note: If particles Αν τα are σωματίδια not visible δεν in είναι εμφανή στο βύθισμα Well 2, shake 2, ανακινήστε down the cartridge προς τα κάτω το φυσίγγιο για απόσπαση to dislodge σωματιδίων particles that που may ενδέχεται have να έχουν κολλήσει στο adhered υλικό to σφράγισης the seal material πριν την before αφαίρεση της σφράγισης. removing the seal. 3. Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης 4. 3. Ρυθμιστικό Wash Bufferδιάλυμα πλύσης 5. 4. Πλύση Wash Buffer 6. 5. Πλύση Wash 7. 6. Κενό Wash 8. 7. Κενό Empty 8. Empty Προσθήκες Well Content χειριστή User Adds: περιεχομένου βυθίσματος: 1. 1. Δείγμα Lysed whole ολικού blood αίματος sample λύσης 8. 8. Έμβολο CSC/RSC CSC/RSC Plunger Εικόνα 1. Φυσίγγιο Maxwell CSC Cartridge. Αυτή η εικόνα εμφανίζει τα περιεχόμενα ενός φυσιγγίου. Το δείγμα ολικού αίματος που έχει υποστεί λύση προστίθεται στο βύθισμα αρ.1 και ένα έμβολο προστίθεται στο βύθισμα αρ.8. Εικόνα 2. Ρυθμίσεις και διαμόρφωση του δίσκου πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray. Ρυθμιστικό διάλυμα έκπλυσης προστίθεται στους σωλήνες έκπλυσης όπως υποδεικνύεται. 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM374 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

6. Κύκλος λειτουργίας οργάνου Για πιο λεπτομερείς πληροφορίες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο λειτουργίας του οργάνου Maxwell CSC. 1. Ενεργοποιήστε το όργανο Maxwell CSC και το Tablet PC. Η διεπαφή χρήστη του οργάνου ξεκινάει αυτόματα και το όργανο εκτελεί αυτοδιαγνωστικό έλεγχο και μετακίνηση όλων των κινούμενων μερών στην αρχική τους θέση. 2. Επιλέξτε «Εναρξη» στην αρχική οθόνη. 3. Σαρώστε ή εισάγετε το γραμμοκώδικα μεθόδου στην ετικέτα του κιτ Maxwell CSC Blood DNA Kit για αυτόματη επιλογή της μεθόδου προς εκτέλεση (Εικόνα 3). Σημείωση: Ο γραμμοκώδικας μεθόδου Maxwell CSC Blood DNA Kit απαιτείται για τον καθαρισμό DNA στο όργανο Maxwell CSC. Η ετικέτα κιτ περιλαμβάνει δύο γραμμοκώδικες. Ο γραμμοκώδικας μεθόδου υποδεικνύεται στην Εικόνα 3. 10852TA Εικόνα 3. Η ετικέτα κιτ που υποδεικνύει το γραμμοκώδικα μεθόδου για σάρωση. Το κόκκινο πλαίσιο υποδεικνύει το γραμμοκώδικα μεθόδου για σάρωση στην ετικέτα κιτ για έναρξη του κύκλου λειτουργίας καθαρισμού. 4. Επιλέξτε τις θέσεις φυσιγγίου για κύκλο λειτουργίας (βλέπε εγχειρίδιο λειτουργίας οργάνου Maxwell CSC) και σαρώστε ή εισάγετε χειροκίνητα τις απαιτούμενες πληροφορίες παρακολούθησης δείγματος. 5. Βεβαιωθείτε ότι τα δείγματα έχουν προστεθεί στο βύθισμα αρ.1 των φυσιγγίων, ότι τα φυσίγγια είναι τοποθετημένα στο όργανο, ότι οι σωλήνες έκπλυσης που περιέχουν 50 100 μl ρυθμιστικού διαλύματος έκπλυσης υπάρχουν και ότι τα έμβολα είναι τοποθετημένα στο βύθισμα αρ.8. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 9 www.promega.com TM374 Αναθεώρηση 5/18

6. Κύκλος λειτουργίας οργάνου (συνέχεια) 6. Μεταφέρετε το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC που περιλαμβάνει τα προετοιμασμένα φυσίγγια στην πλατφόρμα του οργάνου Maxwell CSC. Βεβαιωθείτε ότι ο δίσκος πλατφόρμας είναι τοποθετημένος στο όργανο Maxwell CSC με τους σωλήνες έκπλυσης σε μικρή απόσταση από τη θύρα. Η τοποθέτηση του δίσκου πλατφόρμας στο όργανο είναι δυνατή μόνο σε αυτόν τον προσανατολισμό. Αν συναντάτε δυσκολία κατά την τοποθέτηση του δίσκου πλατφόρμας στην πλατφόρμα, επιβεβαιώστε το σωστό προσανατολισμό. Βεβαιωθείτε ότι ο δίσκος πλατφόρμας βρίσκεται σε απόλυτα οριζόντια θέση στη πλατφόρμα οργάνου. Σημείωση: Κρατήστε το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray από τις πλευρές του για αποφυγή απόσπασης των φυσιγγίων από τον υποδοχέα. 7. Βεβαιωθείτε ότι όλες οι διαδικασίες προεπεξεργασίας που υποδεικνύονται έχουν εκτελεστεί, και πατήστε στο «Εναρξη» για κλείσιμο της θύρας οργάνου και την έναρξη της επεξεργασίας. Προειδοποίηση: Κίνδυνος σύνθλιψης. 8. Ο κύκλος λειτουργίας καθαρισμού στο όργανο Maxwell CSC ξεκινάει άμεσα. Η οθόνη εμφανίζει τα βήματα που εκτελούνται καθώς και τον χρόνο που υπολείπεται, κατά προσέγγιση, για την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας. Σημείωση: Αν ο κύκλος λειτουργίας ακυρωθεί πριν την ολοκλήρωσή του, το όργανο εκτελεί έκπλυση των σωματιδίων από τα έμβολα και τα έμβολα εξωθούνται στο βύθισμα αρ. 8 του φυσιγγίου. Τα δείγματα χάνονται. Μην επιχειρήσετε να εκτελέσετε εκ νέου καθαρισμό των δειγμάτων από κύκλο λειτουργίας οργάνου που έχει ακυρωθεί. 9. Όταν ολοκληρωθεί ο αυτοματοποιημένος κύκλος λειτουργίας καθαρισμού, η οθόνη Tablet PC εμφανίζει ένα μήνυμα που ενημερώνει ότι η μέθοδος ολοκληρώθηκε. Τέλος κύκλου λειτουργίας 10. Μετά την εφαρμογή της μεθόδου, ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη για να ανοίξετε τη θύρα. Βεβαιωθείτε ότι τα έμβολα βρίσκονται στο βύθισμα αρ.8 του φυσιγγίου κατά την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας. Αφαιρέστε το δίσκο πλατφόρμας από το όργανο και αφαιρέστε τα δείγματα έκπλυσης από το δίσκο πλατφόρμας. Αν δεν έχουν απομακρυνθεί όλα τα έμβολα από τη ράβδο εμβόλων: ακολουθήστε τις ερωτήσεις στην οθόνη για εκτέλεση της μεθόδου καθαρισμού για ένα κύκλο λειτουργίας που ακυρώθηκε. Εναλλακτικά, επιλέξτε τη μέθοδο καθαρισμού από την οθόνη ρυθμίσεων για ένα κύκλο λειτουργίας που ολοκληρώθηκε με επιτυχία για απομάκρυνση των υπόλοιπων εμβόλων. 11. Αφαιρέστε το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC από το όργανο αμέσως μετά τον κύκλο λειτουργίας για την αποφυγή εξάτμισης των προϊόντων έκπλυσης. Αφαιρέστε τους σωλήνες έκπλυσης που περιέχουν DNA και πωματίστε τους σωλήνες. Σημείωση: Μετά την αυτοματοποιημένη διαδικασία καθαρισμού, ο δίσκος πλατφόρμας Maxwell CSC ενδέχεται να είναι ζεστός. Για να αφαιρέσετε τον υποδοχέα από την πλατφόρμα οργάνου, κρατήστε τον υποδοχέα από τις πλευρές του. Βεβαιωθείτε ότι έχετε αφαιρέσει τα δείγματα από το όργανο πριν εκτελέσετε αποστείρωση με ακτινοβολία UV, ώστε να αποφευχθεί τυχόν αλλοίωση του κεκαθαρμένου νουκλεϊκού οξέος. 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM374 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

12. Αφαιρέστε τα φυσίγγια και τα έμβολα από το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC. Απορρίψτε ως επικίνδυνα απορρίμματα σύμφωνα με τις διαδικασίες του ιδρύματος. Μην επαναχρησιμοποιείτε τα φυσίγγια Maxwell CSC, τα έμβολα CSC/RSC ή τους σωλήνες έκπλυσης. 7. Διαδικασία μετά τον καθαρισμό Βεβαιωθείτε ότι η απόδοση του δείγματος κεκαθαρμένου DNA και η καθαρότητα πληρούν τις απαιτήσεις εισαγωγής για την κατάλληλη διαγνωστική ανάλυση downstream πριν τη χρήση σε αυτή την ανάλυση. 8. Αντιμετώπιση προβλημάτων Για τυχόν ερωτήσεις που δεν περιλαμβάνονται στο παρόν, επικοινωνήστε με το τοπικό υποκατάστημα ή αντιπρόσωπο της Promega. Πληροφορίες επικοινωνίας διατίθενται στη διεύθυνση: www.promega.com. E-mail: techserv@promega.com Πρόβλημα Συγκέντρωση χαμηλότερη από την αναμενόμενη Ένα δείγμα ολικού αίματος 300 µl που περιέχει 4 10 6 έως 10 10 6 λευκά αιμοσφαίρια/ml θα πρέπει να έχει απόδοση >80 ng/µl γονιδιωματικού DNA σε ένα όγκο έκπλυσης 50 µl (όπως μετράται με απορρόφηση στα 260 nm). Αίτια και σχόλια Αίμα που έχει υποστεί πολλαπλούς κύκλους απόψυξης ενδέχεται να εμφανίζει υποβαθμισμένο DNA. Χρησιμοποιήστε δείγματα που έχουν συλλεχθεί και αποθηκευτεί σύμφωνα με τις συνθήκες που περιλαμβάνονται στην Ενότητα 3. Το δείγμα ολικού αίματος περιέχει χαμηλό αριθμό λευκών αιμοσφαιρίων. Η απόδοση του γονιδιωματικού DNA από δείγματα ολικού αίματος εξαρτάται από τον αριθμό των λευκών αιμοσφαιρίων στο δείγμα. Δεν προστέθηκε διάλυμα πρωτεϊνάσης K, προστέθηκε ανεπαρκής όγκος διαλύματος πρωτεϊνάσης K, ή η πρωτεϊνάση K δεν αναμίχθηκε επαρκώς με το δείγμα αίματος πριν την προσθήκη του ρυθμιστικού διαλύματος λύσης. Η λύση και η απόδοση εξαρτώνται από την ολοκληρωμένη εξαγωγή με πρωτεϊνάση K. Αν η πρωτεϊνάση K δεν έχει προστεθεί στην ενότητα 3.A, Βήμα 3, το δείγμα αίματος που προκύπτει θα είναι κόκκινο. Τα δείγματα που έχουν επεξεργαστεί με πρωτεϊνάση K εμφανίζονται με πρασινωπό καφέ χρώμα, που μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως οπτικός δείκτης για την επιβεβαίωση προσθήκης της πρωτεϊνάσης K. Το δείγμα ολικού αίματος δεν αναμείχθηκε πριν από την επεξεργασία. Βεβαιωθείτε ότι έχετε αναμείξει τα δείγματα ολικού αίματος πριν από την επεξεργασία, για να διασφαλίσετε ότι τα λευκά αιμοσφαίρια βρίσκονται στο εναιώρημα. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 11 www.promega.com TM374 Αναθεώρηση 5/18

Πρόβλημα Καθαρότητα χαμηλότερη από την αναμενόμενη Ένα δείγμα ολικού αίματος 300 µl που περιέχει 4 10 6 to 10 10 6 λευκά αιμοσφαίρια/ml με έκπλυση σε όγκο 50 µl θα πρέπει να παράγει gdna με λόγο A 260 /A 280 (η καθαρότητα μετράται με απορρόφηση στα 260 nm διαιρούμενη από απορρόφηση στα 280 nm) των 1,7 ή μεγαλύτερο, και λόγο A 260 /A 230 (η καθαρότητα μετράται με απορρόφηση στα 260 nm διαιρούμενη από απορρόφηση στα 230 nm) των 1,5 ή μεγαλύτερο. Αίτια και σχόλια Δεν προστέθηκε διάλυμα πρωτεϊνάσης K, προστέθηκε ανεπαρκής όγκος διαλύματος πρωτεϊνάσης K, ή η πρωτεϊνάση K δεν αναμίχθηκε επαρκώς με το δείγμα αίματος πριν την προσθήκη του ρυθμιστικού διαλύματος λύσης. Η λύση και η καθαρότητα εξαρτώνται από την ολοκληρωμένη εξαγωγή με πρωτεϊνάση K. Αν η πρωτεϊνάση K δεν έχει προστεθεί στην ενότητα 3.A, Βήμα 3, το δείγμα αίματος που προκύπτει θα είναι κόκκινο. Τα δείγματα που έχουν επεξεργαστεί με πρωτεϊνάση K εμφανίζονται με πρασινωπό καφέ χρώμα, που μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως οπτικός δείκτης ελέγχου για την επιβεβαίωση προσθήκης της πρωτεϊνάσης K. 9. Βιβλιογραφία 1. Henry, J.B. (2001) Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 20th ed.,w.b. Saunders Company, 509. 10. Περίληψη αλλαγών Η παρακάτω αλλαγή έχει γίνει στην αναθεώρηση 5/18 του παρόντος εγγράφου: 1. Ενημερώθηκε για συμπερίληψη των απαιτήσεων της Οδηγίας της Ευρωπαϊκής Ένωσης IVD (98/79/ΕΚ). (a) Αρ. διπλώματος ευρεσιτεχνίας Η.Π.Α. 6855499, Αρ. διπλώματος ευρεσιτεχνίας στην Ευρώπη 1368629, Αρ. διπλώματος ευρεσιτεχνίας στην Ιαπωνία 4399164 και άλλα διπλώματα ευρεσιτεχνίας. 2012, 2014, 2015, 2018 Promega Corporation. Με την επιφύλαξη παντός δικαιώματος. Η ονομασία Maxwell είναι κατοχυρωμένο εμπορικό σήμα της Promega Corporation. Τα προϊόντα ενδέχεται να καλύπτονται από διπλώματα ευρεσιτεχνίας που εκκρεμούν ή έχουν εκδοθεί ή ενδέχεται να έχουν συγκεκριμένους περιορισμούς. Για περισσότερες πληροφορίες, επισκεφτείτε την ιστοσελίδα μας. Όλες οι τιμές και οι προδιαγραφές υπόκεινται σε αλλαγές χωρίς προηγούμενη ειδοποίηση. Αξιώσεις που αφορούν το προϊόν υπόκεινται σε αλλαγές. Για τις πιο πρόσφατες πληροφορίες σχετικά με τα προϊόντα της Promega, επικοινωνήστε με την τεχνική υπηρεσία της Promega ή επισκεφτείτε τον κατάλογο της Promega στο διαδίκτυο. 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM374 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com