Maxwell CSC RNA Blood Kit

ΤΕΧΝΙΚΌ ΕΓΧΕΙΡΊΔΙΟ Maxwell CSC RNA Blood Kit Οδηγίες χρήσης του προϊόντος AS1410 Προσοχή: Χειριστείτε τα φυσίγγια με προσοχή, τα άκρα σφράγισης ενδέχεται να είναι αιχμηρά. ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟΥ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ AS1410 2800 Woods Hollow Rd. Madison, WI USA MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Germany Αναθεώρηση 5/18 TM434

Maxwell CSC RNA Blood Kit Όλη η τεχνική τεκμηρίωση είναι διαθέσιμη στη διεύθυνση: www.promega.com/protocols/ Επισκεφτείτε την ιστοσελίδα για να βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείτε την πιο πρόσφατη έκδοση του παρόντος τεχνικού εγχειριδίου. Αν έχετε απορίες σχετικά με τη χρήση του παρόντος συστήματος, επικοινωνήστε με την τεχνική υπηρεσία της Promega μέσω e-mail στη διεύθυνση: techserv@promega.com 1. Περιγραφή...1 2. Στοιχεία προϊόντος, συνθήκες αποθήκευσης και επεξηγήσεις συμβόλων...2 3. Προοριζόμενη χρήση προϊόντος...5 4. Περιορισμοί χρήσης προϊόντος...5 5. Πριν ξεκινήσετε: Προετοιμασία διαλυμάτων...6 6. Καθαρισμός RNA από φρέσκο ολικό αίμα σε σωλήνες συλλογής EDTA...6 6.A. Προεπεξεργασία δειγμάτων ολικού αίματος...7 6.B. Προετοιμασία φυσιγγίου Maxwell CSC Cartridge...8 7. Κύκλος λειτουργίας οργάνου... 10 8. Διαδικασία μετά τον καθαρισμό... 12 9. Αντιμετώπιση προβλημάτων... 12 10. Δημιουργία περιβάλλοντα χώρου ελεύθερου από ριβονουκλεάσες... 15 11. Βιβλιογραφία... 15 12. Σχετικά προϊόντα... 16 13. Περίληψη αλλαγών... 16 Το Maxwell CSC RNA Blood Kit είναι διαθέσιμο μόνο σε συγκεκριμένες χώρες. Το παρόν προϊόν πληροί τις βασικές απαιτήσεις της Οδηγίας της Ευρωπαϊκής Ένωσης 98/79/ΕΚ για τα ιατροτεχνολογικά βοηθήματα που χρησιμοποιούνται στη διάγνωση in vitro. 1. Περιγραφή Το Maxwell CSC RNA Blood Kit (a,b) χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με το όργανο Maxwell CSC και παρέχει μια εύκολη μέθοδο για αποτελεσματικό, αυτοματοποιημένο καθαρισμό RNA από φρέσκο (όχι κατεψυγμένο) ανθρώπινο ολικό αίμα που έχει συλλεχθεί σε σωλήνες EDTA. Το όργανο Maxwell CSC διαθέτει ήδη προγραμματισμένες μεθόδους καθαρισμού. Έχει σχεδιαστεί για χρήση με τα προδιανεμημένα φυσίγγια αντιδραστηρίων και πρόσθετα αντιδραστήρια που παρέχονται με το κιτ, εξασφαλίζοντας απλές και εύκολες διαδικασίες. Το όργανο μπορεί να επεξεργαστεί έως 16 δείγματα σε περίπου 60 λεπτά, και το κεκαθαρμένο RNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας σε μια σειρά εφαρμογών που βασίζονται στην ενίσχυση, όπως το RT-PCR. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 1 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

1. Περιγραφή (συνέχεια) Το Maxwell CSC RNA Blood Kit εκτελεί καθαρισμό του RNA χρησιμοποιώντας παραμαγνητικά σωματίδια, που παρέχουν μια κινητή σταθερή φάση για τη βελτιστοποίηση της δέσμευσης δείγματος, πλύσης και καθαρισμού του RNA. Το όργανο Maxwell CSC είναι ένα όργανο χειρισμού μαγνητικών σωματιδίων. Αυτό το σύστημα επιτρέπει την ικανοποιητική δέσμευση του RNA στα παραμαγνητικά σωματίδια στο πρώτο βύθισμα ενός προγεμισμένου φυσιγγίου και μετακινεί το δείγμα μεταξύ των βυθισμάτων του φυσιγγίου. Αυτή η προσέγγιση μαγνητικής δέσμευσης αποφεύγει τα συνήθη προβλήματα που προκύπτουν σε συστήματα που χειρίζονται υγρά όπως φραγμένα ακροφύσια ή μερική μεταφορά αντιδραστηρίου, που έχουν ως αποτέλεσμα τη μη βέλτιστη επεξεργασία καθαρισμού από άλλα συστήματα συχνής χρήσης. 2. Στοιχεία προϊόντος, συνθήκες αποθήκευσης και επεξηγήσεις συμβόλων ΠΡΟΪΌΝ ΜΈΓΕΘΟΣ ΑΡ. ΚΑΤ. Maxwell CSC RNA Blood Kit 48 preps AS1410 Για διαγνωστική χρήση in vitro. Μόνο για επαγγελματική χρήση. Επαρκεί για 48 αυτόματες απομονώσεις από δείγματα αίματος. Τα φυσίγγια Maxwell CSC Cartridges προορίζονται για μία μόνο χρήση. 15 C 30 C 6010TB 48 Περιλαμβάνει: 48 Maxwell CSC RNA Blood Cartridges 4 100ml Solution A 30ml Solution B 20ml Lysis Buffer 2 vials DNase I (lyophilized) 900µl 1-Thioglycerol 100µl Blue Dye 2 1ml Proteinase K (PK) Solution 25ml Nuclease-Free Water 50 CSC/RSC Plungers 50 Elution Tubes (0.5ml) Συνθήκες αποθήκευσης: Κατά την παραλαβή, αφαιρέστε την 1-θειογλυκερόλη και αποθηκεύστε σε 2 C 10 C. Αποθηκεύστε τα υπόλοιπα στοιχεία του κιτ σε θερμοκρασία δωματίου (15 C 30 C). Η 1-θειογλυκερόλη μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου (15 C 30 C), όπου παραμένει σταθερή έως 9 μήνες. Αποθηκεύστε την ανα-υδρογονωμένη DNase I σε 30 C έως 10 C. Μην εκτελέσετε ψύξη-απόψυξη περισσότερες από 10 φορές. 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

Πληροφορίες ασφαλείας: Τα φυσίγγια αντιδραστηρίων περιέχουν αιθανόλη, που είναι εύφλεκτη ουσία. Η 1-θειογλυκερόλη είναι τοξική ουσία. Η θειοκυανική γουανιδίνη και η υδροχλωρική γουανιδίνη (στοιχεία του διαλύματος B και του ρυθμιστικού διαλύματος λύσης) είναι επιβλαβείς και ερεθιστικές ουσίες. Το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης ενέχει επίσης πιθανούς κινδύνους σε περίπτωση εγκυμοσύνης. Φοράτε γάντια και ακολουθείτε τις τυπικές διαδικασίες ασφάλειας κατά την εργασία με αυτές τις ουσίες. Τα στοιχεία του κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit έχουν σχεδιαστεί για χρήση με δυνητικά μολυσματικές ουσίες. Οι χειριστές θα πρέπει να διαθέτουν κατάλληλο προσωπικό προστατευτικό εξοπλισμό (π.χ. γυαλιά, εργαστηριακή ρόμπα και γάντια) κατά το χειρισμό μολυσματικών ουσιών. Οι χειριστές θα πρέπει να συμμορφώνονται με τις κατευθυντήριες οδηγίες του ιδρύματός τους σχετικά με το χειρισμό και την απόρριψη όλων των μολυσματικών ουσιών που χρησιμοποιήθηκαν με αυτό το σύστημα. Σημείωση: Το λευκαντικό αντιδρά με το χλωριούχο αμμώνιο και την θειοκυανική γουανιδίνη και παράγει τοξικούς ατμούς. Η θειοκυανική γουανιδίνη και το χλωριούχο αμμώνιο περιέχονται στο διάλυμα B και στο διάλυμα A, αντίστοιχα. Μην απολυμαίνετε απορρίμματα από αυτό το κιτ χρησιμοποιώντας λευκαντικό. Προσοχή: Χειριστείτε προσεχτικά τα φυσίγγια και το ανοιχτό φιαλίδιο λυοφιλιωμένης DNase I. Τα άκρα ενδέχεται να είναι αιχμηρά. Περισσότερες πληροφορίες: Τα στοιχεία του κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit είναι κατάλληλα και πιστοποιημένα μέσω ποιοτικού ελέγχου για την αλληλεπίδρασή τους. Δεν συνιστάται η ανάμιξη στοιχείων κιτ διαφορετικών παρτίδων. Χρησιμοποιείτε μόνο τα στοιχεία που παρέχονται σε κάθε κιτ. Για περαιτέρω πληροφορίες σχετικά με την ασφάλεια, ανατρέξτε στο Δελτίο δεδομένων ασφάλειας προϊόντος, στη διεύθυνση: www.promega.com Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 3 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

2. Στοιχεία προϊόντος, συνθήκες αποθήκευσης και επεξηγήσεις συμβόλων (Συνέχεια) Επεξηγήσεις συμβόλων Σύμβολο Επεξήγηση Σύμβολο Επεξήγηση In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος 15 C 30 C Αποθήκευση στους 15-30 C. 2800 Woods Hollow Rd. Madison, WI USA Κατασκευαστής Προσοχή Ερεθιστικό Καρκινογόνο Δηλητήριο Διαβρωτικό Τα περιεχόμενα επαρκούν για «n» εξετάσεις Ευρωπαϊκή Συμμόρφωση Προειδοποίηση. Βιολογικός κίνδυνος. Προειδοποίηση. Κίνδυνος σύνθλιψης. Αριθμός καταλόγου Αριθμός παρτίδας Μην κάνετε επαναληπτική χρήση 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

3. Προοριζόμενη χρήση προϊόντος Το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit προορίζεται για χρήση, σε συνδυασμό με το όργανο Maxwell CSC και τη μέθοδο καθαρισμού Maxwell CSC RNA Blood, ως μια ιατρική συσκευή για διάγνωση in vitro (IVD) για την εκτέλεση αυτόματης απομόνωσης RNA από 2,5 ml ανθρώπινου ολικού αίματος που έχει συλλεχθεί σε σωλήνες συλλογής EDTA με μια μέτρηση λευκών αιμοσφαιρίων (WBC) στο εύρος των 4 10 6 to 10 10 6 WBC ανά χιλιοστόλιτρο. Το κεκαθαρμένο RNA είναι κατάλληλο για χρήση σε διαγνωστικές εξετάσεις in vitro που βασίζονται στην ενίσχυση. Το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit προορίζεται για χρήση με 2,5 ml ολικού ανθρώπινου αίματος. Το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit προορίζεται για χρήση σε θερμοκρασία μεταξύ 15 C και 30 C. Η χρήση εκτός αυτού του εύρους θερμοκρασίας ενδέχεται να μην εμφανίσει τα βέλτιστα αποτελέσματα. Το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit δεν προορίζεται για χρήση στο πλαίσιο μιας συγκεκριμένης διαγνωστικής εξέτασης in vitro. Το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit προορίζεται αποκλειστικά για επαγγελματική χρήση. Τα διαγνωστικά αποτελέσματα που προκύπτουν με τη χρήση κεκαθαρμένου RNA σε αυτό το σύστημα πρέπει να ερμηνεύονται σε συνδυασμό με άλλα κλινικά ή εργαστηριακά δεδομένα. 4. Περιορισμοί χρήσης προϊόντος Το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit προορίζεται μόνο για χρήση με δείγματα ανθρώπινου ολικού αίματος που έχουν συλλεχθεί σε σωλήνες EDTA. Δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα μη ολικού αίματος όπως μυελού των οστών ή αδρής στιβάδας, δείγματα που έχουν αποθηκευτεί σε άλλους σωλήνες συλλογής ή δείγματα που έχουν αποθηκευτεί εκτός των απαιτήσεων του προϊόντος. Το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα μη ανθρώπινου αίματος ή για τον καθαρισμό DNA. Η απόδοση του κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit έχει αξιολογηθεί για την απομόνωση του RNA από 2,5 ml ανθρώπινου ολικού αίματος σε σωλήνες συλλογής EDTA. Δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα μεγαλύτερα ή μικρότερα των 2,5 ml. Δεν προορίζεται για χρήση με ολικό αίμα από σωλήνες συλλογής εκτός από σωλήνες EDTA. Δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα που περιέχουν λιγότερα από 4 10 6 WBC ανά χιλιοστόλιτρο ή με δείγματα που περιέχουν περισσότερα από 10 10 6 WBC ανά χιλιοστόλιτρο. Ο χειριστής είναι υπεύθυνος για τον καθορισμό των χαρακτηριστικών απόδοσης που απαιτούνται για την εκτέλεση διαγνωστικών εφαρμογών downstream. Κατάλληλοι οροί ελέγχου θα πρέπει να περιλαμβάνονται σε όλες τις διαγνωστικές εφαρμογές downstream χρησιμοποιώντας κεκαθαρμένο RNA με το κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 5 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

5. Πριν ξεκινήσετε: Προετοιμασία διαλυμάτων 1-θειογλυκερόλη/Διάλυμα B Προετοιμάστε ένα μείγμα 1-θειογλυκερόλη/Διάλυμα B με μια από τις παρακάτω μεθόδους: Προσθέστε 600 µl 1-θειογλυκερόλη στη φιάλη του διαλύματος B και αναμίξτε καλά. Η 1-θειογλυκερόλη είναι παχύρρευστη και απαιτείται προσεχτική μεταφορά με πιπέτα για ακριβή μέτρηση. Πριν τη χρήση, ψύξτε το διάλυμα 1-θειογλυκερόλη/Διάλυμα B σε πάγο ή στους 2 C 10 C. Εναλλακτικά, προετοιμάστε μικρότερες ποσότητες προσθέτοντας 20µl 1-θειογλυκερόλη ανά χιλιοστόλιτρο του διαλύματος B. Προετοιμάστε 200 µl 1-θειογλυκερόλη /Διάλυμα B μετά από ψύξη ανά δείγμα. Σημείωση: Αποθηκεύστε το προετοιμασμένο 1-θειογλυκερόλη /Διάλυμα B στους 2 C 10 C, όπου παραμένει σταθερό έως 30 ημέρες. DNase I Προσθέστε 275 µl νερού χωρίς νουκλεάσες στο φιαλίδιο της λυοφιλιωμένης DNase I. Αναποδογυρίστε για έκπλυση της DNase I από το κάτω μέρος του πώματος και στροβιλίστε απαλά για να αναμίξετε. Μην αναδεύετε. Προσθέστε 25 µl μπλε χρώσης στην ανασυσταμένη DNase I ως οπτικό βοήθημα για μεταφορά με πιπέτα και προετοιμασία φυσιγγίου. Κάθε καθαρισμός απαιτεί 10 µl προετοιμασμένου διαλύματος DNase I. Αποθηκεύστε την ανασυσταμένη DNase I στους 30 C έως 10 C. Μην εκτελείτε κύκλους ψύξης-απόψυξης ανασυσταμένης DNase I παραπάνω από δέκα φορές. Προσοχή: Ανοίξτε το φιαλίδιο DNase I με προσοχή, τα άκρα του φιαλιδίου ενδέχεται να είναι αιχμηρά. 6. Καθαρισμός RNA από φρέσκο ολικό αίμα σε σωλήνες συλλογής EDTA Διατηρείτε τον περιβάλλοντα χώρο ελεύθερο από ριβονουκλεάσες κατά τη διάρκεια της επεξεργασίας. Χρησιμοποιείτε πάντα πιπέτες με ακροφύσια χωρίς ριβονουκλεάσες, με ακροφύσια ανθεκτικά στα αερολύματα. Αλλάζετε συχνά τα γάντια που χρησιμοποιείτε για αποφυγή της πιθανότητας μόλυνσης από ριβονουκλεάσες. Για λεπτομέρειες, ανατρέξτε στην Eνότητα 10, Δημιουργία περιβάλλοντα χώρου ελεύθερου από ριβονουκλεάσες. Υλικά που παρέχονται από το χειριστή ολικό αίμα σε σωλήνες συλλογής EDTA (όχι κατεψυγμένους). Το αίμα μπορεί να αποθηκευτεί έως 3 ημέρες σε θερμοκρασία 2 C 10 C πριν τον καθαρισμό μικροφυγοκέντρηση ορολογικές πιπέτες 10 ml (αποστειρωμένες) πιπέτες και ακροφύσια πιπέτας χωρίς ριβονουκλεάσες, ανθεκτικά στα αερολύματα σωλήνες 15 ml (αποστειρωμένοι) φυγοκέντρηση με σύστημα περιστροφής μεταφορέα αιώρησης 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

6.A. Προεπεξεργασία δειγμάτων ολικού αίματος 1. Μεταφέρετε 2,5 ml καλά αναμεμιγμένου ολικού αίματος (όχι καταψυγμένο) από τους σωλήνες συλλογής EDTA σε ένα αποστειρωμένο σωλήνα 15 ml. 2. Προσθέστε 7,5 ml διαλύματος A και αναποδογυρίστε το σωλήνα 5 10 φορές για ανάμιξη. Αυτό είναι ένα διαφορικό βήμα λύσης. Τα ερυθρά αιμοσφαίρια λύονται, ενώ τα λευκά αιμοσφαίρια παραμένουν ανέπαφα. 3. Εκτελέστε επώαση των προϊόντων λύσης για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Κατά τη διάρκεια της επώασης, αναποδογυρίστε δύο φορές τα δείγματα όπως αναφέρεται στο Βήμα 2 για ανάμιξη. 4. Εκτελέστε φυγοκέντρηση των σωλήνων σε 3.000 g για 10 λεπτά σε ένα σύστημα περιστροφής μεταφορέα αιώρησης. 5. Αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό με παροχέτευση ή με χρήση πιπέτας. Στροβιλίστε στιγμιαία το σωλήνα για συλλογή του υπολειμματικού υγρού στο κάτω μέρος του σωλήνα. Με χρήση πιπέτας, αφαιρέστε και απορρίψτε το δυνατόν περισσότερο από το υπόλοιπο υπερκείμενο υγρό, χωρίς να αναταράξετε το ορατό καθίζημα WBC. 6. Προσθέστε 200 µl 1-θειογλυκερόλη /Διάλυμα B ψύξης στο καθίζημα και αναδεύστε για επαναιώρηση του καθιζήματος. 7. Προσθέστε 200 µl ρυθμιστικού διαλύματος λύσης και 25 µl πρωτεϊνάσης K στο επαναιωρημένο καθίζημα. Αναμίξτε αναδεύοντας για 15-20 δευτερόλεπτα. Σημείωση: Αν χρειαστεί να σταματήσετε τη διαδικασία προεπεξεργασίας, τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν μετά το Βήμα 7 στους 30 C έως 10 C έως και για 5 ημέρες. Σε αυτές τις θερμοκρασίες αποθήκευσης, τα δείγματα ενδέχεται να μην παγώσουν πλήρως. Όταν είστε έτοιμοι να συνεχίσετε τη διαδικασία καθαρισμού δείγματος, εκτελέστε απόψυξη των σωλήνων σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά πριν συνεχίσετε με το επόμενο βήμα. 8. Εκτελέστε επώαση σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά. Παράλληλα, προετοιμάστε τα φυσίγγια όπως περιγράφεται στην Ενότητα 6.B. 9. Προσθέστε προϊόν λύσης στο βύθισμα αρ.1 του φυσιγγίου Maxwell CSC RNA Blood Cartridge (το μεγαλύτερο βύθισμα στο φυσίγγιο). Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 7 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

6.B. Προετοιμασία φυσιγγίου Maxwell CSC Cartridge 1. Αλλάξτε γάντια πριν το χειρισμό των φυσιγγίων Maxwell CSC RNA Blood Cartridges, των εμβόλων CSC/ RSC και των σωλήνων έκπλυσης. Τα φυσίγγια είναι τοποθετημένα στο δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray έξω από το όργανο και το δίσκο πλατφόρμας που περιλαμβάνει τα φυσίγγια και τα δείγματα και στη συνέχεια μεταφέρεται στο όργανο για καθαρισμό. Τοποθετήστε τα φυσίγγια που θα χρησιμοποιηθούν στο δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray (Εικόνα 2). Τοποθετήστε κάθε φυσίγγιο στο δίσκο πλατφόρμας με βύθισμα αρ.1 (το βαθύτερο βύθισμα στο φυσίγγιο) όσο πιο μακρυά γίνεται από τους σωλήνες έκπλυσης. Πιέστε το φυσίγγιο προς τα κάτω για να ασφαλίσει στη θέση του. Βεβαιωθείτε ότι και τα δύο άκρα του φυσιγγίου έχουν τοποθετηθεί σωστά στο δίσκο πλατφόρμας. Αφαιρέστε προσεκτικά τη σφράγιση, μέχρι να αφαιρεθεί ολόκληρη η πλαστική σφράγιση από το πάνω μέρος του φυσιγγίου. Βεβαιωθείτε ότι έχει αφαιρεθεί όλη η ταινία σφράγισης και τυχόν υπολείμματα κολλώδους ουσίας από το φυσίγγιο. Προσοχή: Χειριστείτε τα φυσίγγια με προσοχή, τα άκρα σφράγισης ενδέχεται να είναι αιχμηρά. 2. Τοποθετήστε ένα έμβολο CSC/RSC στο βύθισμα αρ.8 σε κάθε φυσίγγιο. Σημείωση: Χρησιμοποιείτε μόνο τα έμβολα που παρέχονται στο κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit. Τα έμβολα για τα κιτ Maxwell 16 LEV και SEV Kits δεν είναι συμβατά με το όργανο Maxwell CSC. 3. Τοποθετήστε ένα κενό σωλήνα έκπλυσης στη θέση σωλήνα έκπλυσης για κάθε φυσίγγιο στο δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray. Σημείωση: Χρησιμοποιείτε μόνο τους σωλήνες έκπλυσης που παρέχονται στο κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit. Άλλοι σωλήνες έκπλυσης ενδέχεται να μην είναι συμβατοί με το όργανο Maxwell CSC και ενδέχεται να επηρεάσουν την απόδοση καθαρισμού RNA. 4. Προσθέστε 50 µl νερού χωρίς νουκλεάσες στον πυθμένα κάθε σωλήνα έκπλυσης. Οι σωλήνες έκπλυσης θα πρέπει να παραμένουν ανοιχτοί κατά τον καθαρισμό RNA. Σημείωση: Χρησιμοποιείτε μόνο νερό χωρίς νουκλεάσες που παρέχεται στο κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit. Η χρήση άλλων ρυθμιστικών διαλυμάτων έκπλυσης ενδέχεται να επηρεάσουν την απόδοση του καθαρισμού RNA ή τη χρήση εφαρμογών downstream. 5. Προσθέστε 10 µl ανασυσταμένης DNase I (μπλε) στο βύθισμα αρ.4 (κίτρινο) σε κάθε φυσίγγιο. Το πράσινο χρώμα που προκύπτει είναι ένας οπτικός δείκτης ότι το διάλυμα DNase I προστέθηκε στο βύθισμα αρ.4. 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

6.B. Προετοιμασία φυσιγγίου Maxwell CSC Cartridge (Συνέχεια) Σημειώσεις προετοιμασίας φυσιγγίου Maxwell CSC RNA Blood Cartridge 1. Εάν επεξεργάζεστε λιγότερα από 16 δείγματα, τοποθετήστε τα φυσίγγια στο κέντρο του δίσκου πλατφόρμας. 2. Καθαρίστε διαρροές δείγματος ή αντιδραστηρίου σε οποιοδήποτε σημείο του Maxwell CSC Deck Tray όπως υποδεικνύεται στο εγχειρίδιο λειτουργίας του οργάνου Maxwell CSC. Μη χρησιμοποιείτε λευκαντικό σε κανένα μέρος του οργάνου. 1 2 3 4 5 6 7 8 Περιεχόμενα βυθίσματος 1. Διάλυμα δέσμευσης 2. Μαγνητικά σωματίδια 3. Διάλυμα έκπλυσης 4. Ρυθμιστικό διάλυμα DNase I 5. Διάλυμα δέσμευσης 6. Διάλυμα έκπλυσης 7. Διάλυμα έκπλυσης 8. Κενό Προσθήκες χειριστή στα βυθίσματα 1. Προεπεξεργασμένο προϊόν λύσης δείγματος 4. 10µl προετοιμασμένης DNase I 8. Έμβολο CSC/RSC Εικόνα 1. Φυσίγγιο Maxwell CSC Cartridge. Αυτή η εικόνα περιγράφει τα περιεχόμενα ενός φυσιγγίου. Το προεπεξεργασμένο προϊόν λύσης δείγματος αίματος προστίθεται στο βύθισμα αρ.1, 10 µl DNase I προστίθενται στο βύθισμα αρ.4 και ένα έμβολο CSC/RSC προστίθεται στο βύθισμα αρ.8. 10828TB 11339TA Εικόνα 2. Ρυθμίσεις και διαμόρφωση του δίσκου πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray. Νερό χωρίς νουκλεάσες (50µl) προστίθεται στους σωλήνες έκπλυσης όπως εμφανίζεται. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 9 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

7. Κύκλος λειτουργίας οργάνου Η μέθοδος Maxwell CSC RNA Blood Method μπορεί να ληφθεί σε τοπικό δίσκο από τον ιστότοπο της Promega, μεταβαίνοντας στη διεύθυνση: www.promega.com/resources/tools/maxwellcscmethod. Για πιο λεπτομερείς πληροφορίες, ανατρέξτε στο τεχνικό εγχειρίδιο Maxwell CSC Methods Installation #TM401. Αν υποψιάζεστε ότι το όργανο ενδέχεται να μολυνθεί από ριβονουκλεάσες, καθαρίστε το όργανο πριν την λειτουργία του χρησιμοποιώντας ένα καθαριστικό διάλυμα όπως το Steris LpH. Ακολουθήστε τις οδηγίες στην ενότητα Καθαρισμός και συντήρηση του εγχειριδίου λειτουργίας οργάνου Maxwell CSC. 1. Ενεργοποιήστε το όργανο Maxwell CSC και το Tablet PC. Η διεπαφή χρήστη του οργάνου ξεκινάει αυτόματα και το όργανο εκτελεί αυτοδιαγνωστικό έλεγχο και μετακίνηση όλων των κινούμενων μερών στην αρχική τους θέση. 2. Επιλέξτε «Εναρξη» στην αρχική οθόνη. 3. Σαρώστε ή πληκτρολογήστε το γραμμοκώδικα μεθόδου στην ετικέτα του κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit για αυτόματη επιλογή της μεθόδου προς εκτέλεση (Εικόνα 3). Σημείωση: Ο γραμμοκώδικας μεθόδου του κιτ Maxwell CSC RNA Blood Kit απαιτείται για τον καθαρισμό RNA στο όργανο Maxwell CSC. Η ετικέτα κιτ περιλαμβάνει δύο γραμμοκώδικες. Ο γραμμοκώδικας μεθόδου υποδεικνύεται στην Εικόνα 3. Αν ο γραμμοκώδικας δεν μπορεί να σαρωθεί, επικοινωνήστε με την τεχνική υπηρεσία της Promega. 4. Επιλέξτε τις θέσεις φυσιγγίου για κύκλο λειτουργίας (βλέπε εγχειρίδιο λειτουργίας οργάνου Maxwell CSC) και σαρώστε ή εισάγετε χειροκίνητα τις απαιτούμενες πληροφορίες παρακολούθησης δείγματος. Αποεπιλέξτε τις θέσεις που δεν χρησιμοποιούνται. Επιλέξτε «Συνέχεια» όταν έχουν καταχωρηθεί όλες οι πληροφορίες δειγμάτων. 12571TA Εικόνα 3. Η ετικέτα κιτ που υποδεικνύει το γραμμοκώδικα μεθόδου για σάρωση. Το κόκκινο πλαίσιο και το βέλος στο πάνω μέρος της ετικέτας υποδεικνύουν το γραμμοκώδικα μεθόδου στην ετικέτα κιτ. Σαρώστε αυτό το γραμμοκώδικα για έναρξη του κύκλου καθαρισμού. 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

7. Κύκλος λειτουργίας οργάνου (συνέχεια) 5. Στο Tablet PC, βεβαιωθείτε ότι τα δείγματα έχουν προστεθεί στο βύθισμα αρ.1 των φυσιγγίων (όπως υποδεικνύεται στην Ενότητα 6.B), ότι τα φυσίγγια είναι τοποθετημένα στο όργανο, ότι οι σωλήνες έκπλυσης που περιέχουν 50 µl νερού χωρίς νουκλεάσες υπάρχουν και είναι ανοιχτοί και ότι τα έμβολα βρίσκονται στο βύθισμα αρ.8. 6. Μεταφέρετε το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC που περιλαμβάνει τα προετοιμασμένα φυσίγγια στην πλατφόρμα του οργάνου Maxwell CSC. Βεβαιωθείτε ότι ο δίσκος πλατφόρμας είναι τοποθετημένος στο όργανο Maxwell CSC με τους σωλήνες έκπλυσης σε μικρή απόσταση από τη θύρα. Η τοποθέτηση του δίσκου πλατφόρμας στο όργανο είναι δυνατή μόνο σε αυτόν τον προσανατολισμό. Αν συναντάτε δυσκολία κατά την τοποθέτηση του δίσκου πλατφόρμας στην πλατφόρμα, επιβεβαιώστε το σωστό προσανατολισμό. Βεβαιωθείτε ότι ο δίσκος πλατφόρμας βρίσκεται σε απόλυτα οριζόντια θέση στην πλατφόρμα οργάνου. Σημείωση: Κρατήστε το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC Deck Tray από τις πλευρές του για αποφυγή απόσπασης των φυσιγγίων από τον υποδοχέα. Προειδοποίηση: Κίνδυνος σύνθλιψης. 7. Βεβαιωθείτε ότι όλες οι διαδικασίες προεπεξεργασίας έχουν εκτελεστεί όπως υποδεικνύονται, και πατήστε στο «Εναρξη» για κλείσιμο της θύρας οργάνου και έναρξη της επεξεργασίας. 8. Ο κύκλος λειτουργίας καθαρισμού στο όργανο Maxwell CSC ξεκινάει άμεσα. Η οθόνη εμφανίζει τα βήματα που εκτελούνται καθώς και τον χρόνο που υπολείπεται, κατά προσέγγιση, για την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας. Σημείωση: Αν ο κύκλος λειτουργίας ακυρωθεί πριν την ολοκλήρωσή του, το όργανο εκτελεί έκπλυση των σωματιδίων από τα έμβολα και τα έμβολα εξωθούνται στο βύθισμα αρ. 8 του φυσιγγίου. Τα δείγματα χάνονται. Μην επιχειρήσετε να εκτελέσετε εκ νέου καθαρισμό των δειγμάτων από κύκλο λειτουργίας οργάνου που έχει ακυρωθεί. 9. Όταν ολοκληρωθεί ο κύκλος λειτουργίας, θα εμφανιστεί στην οθόνη Tablet PC ένα μήνυμα που θα ενημερώνει ότι η μέθοδος ολοκληρώθηκε. Τέλος κύκλου λειτουργίας 10. Μετά την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας, ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη για άνοιγμα της θύρας. Βεβαιωθείτε ότι τα έμβολα βρίσκονται στο βύθισμα αρ.8 του φυσιγγίου κατά την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας. Αφαιρέστε το δίσκο πλατφόρμας από το όργανο και αφαιρέστε τα δείγματα έκπλυσης από το δίσκο πλατφόρμας. Αν όλα τα έμβολα δεν έχουν αφαιρεθεί από τη ράβδο εμβόλων: a. Μετά από κύκλο λειτουργίας που ακυρώθηκε, ακολουθήστε τις οδηγίες στην οθόνη για να εκτελέσετε τη μέθοδο καθαρισμού. b. Μετά από κύκλο λειτουργίας που ολοκληρώθηκε επιτυχώς, επιλέξτε τη μέθοδο καθαρισμού από την οθόνη ρυθμίσεων. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 11 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

11. Τοποθετήστε ένα πώμα και αφαιρέστε τους σωλήνες έκπλυσης που περιέχουν RNA αμέσως μετά τον κύκλο λειτουργίας για την αποφυγή εξάτμισης των προϊόντων έκπλυσης. Αφαιρέστε το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC από το όργανο. Σημείωση: Για να αφαιρέσετε τον υποδοχέα από την πλατφόρμα οργάνου, κρατήστε τον υποδοχέα από τις πλευρές του. Τα δείγματα RNA μπορούν να αποθηκευτούν κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 30 C έως 10 C, ή σε χαμηλότερη θερμοκρασία από 60 C για μακροπρόθεσμη αποθήκευση. Βεβαιωθείτε ότι έχετε αφαιρέσει τα δείγματα από το όργανο πριν εκτελέσετε το πρωτόκολλο αποστείρωσης του οργάνου με ακτινοβολία UV, ώστε να αποφευχθεί τυχόν αλλοίωση του κεκαθαρμένου νουκλεϊκού οξέος. 12. Αφαιρέστε τα φυσίγγια και τα έμβολα από το δίσκο πλατφόρμας Maxwell CSC και απορρίψτε τα ως επικίνδυνα απορρίμματα, σύμφωνα με τις διαδικασίες του ιδρύματός σας. Τα φυσίγγια, τα έμβολα και οι σωλήνες έκπλυσης προορίζονται για μία μόνο χρήση. Μην επαναχρησιμοποιείτε τα φυσίγγια Maxwell CSC, τα έμβολα CSC/RSC ή τους σωλήνες έκπλυσης. 8. Διαδικασία μετά τον καθαρισμό Βεβαιωθείτε ότι η απόδοση του δείγματος κεκαθαρμένου RNA και καθαρότητας πληρούν τις απαιτήσεις εισαγωγής για τη διαγνωστική ανάλυση downstream πριν τη χρήση σε αυτή την ανάλυση. 9. Αντιμετώπιση προβλημάτων Για τυχόν ερωτήσεις που δεν περιλαμβάνονται στο παρόν, επικοινωνήστε με το τοπικό υποκατάστημα ή αντιπρόσωπο της Promega. Πληροφορίες επικοινωνίας διατίθενται στη διεύθυνση: www.promega.com. E-mail: techserv@promega.com 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

Πρόβλημα Χαμηλότερη από την αναμενόμενη συγκέντρωση RNA σε προϊόν έκπλυσης (Ένα τυπικό δείγμα θα πρέπει να έχει απόδοση >50 ng/µl κεκαθαρμένου RNA.) Αίτια και σχόλια Η μέτρηση WBC του δείγματος αίματος ήταν κάτω ή πάνω από το προβλεπόμενο εύρος των 4 10 6 έως 10 10 6 WBC/ml. Το κιτ έχει βέλτιστη απόδοση καθαρισμού RNA από δείγματα αίματος με μέτρηση WBC 4 10 6 έως 10 10 6 WBC/ml. Χρησιμοποιήθηκε λανθασμένος όγκος ολικού αίματος. Η προσθήκη περισσότερης ή λιγότερης ποσότητας από 2,5 ml ολικού αίματος μπορεί να προκαλέσει χαμηλότερη απόδοση. Το δείγμα αίματος ήταν πολύ παλιό. Η καλύτερη απόδοση επιτυγχάνεται με φρέσκα δείγματα αίματος. Δείγματα που έχουν αποθηκευτεί σε 2 10 C για περισσότερες από 3 ημέρες ενδέχεται να προκαλέσουν μειωμένες αποδόσεις. Το δείγμα είχε αποθηκευτεί σε θερμοκρασία χαμηλότερη από 2 C ή μεγαλύτερη από 10 C πριν τον καθαρισμό. Ακατάλληλες θερμοκρασίες αποθήκευσης ενδέχεται να προκαλέσουν λύση WBC ή αποδόμηση RNA. Ενδέχεται να έχουν εισαχθεί ριβονουκλεάσες κατά την επεξεργασία ή την ποσοτικοποίηση του δείγματος. Ανατρέξτε στην Ενότητα 10 για πληροφορίες σχετικά με τη δημιουργία περιβάλλοντα χώρου ελεύθερου από ριβονουκλεάσες. Ανεπαρκής αφαίρεση υπερκείμενου υγρού μετά από διαφορική λύση. Βεβαιωθείτε ότι το υπερκείμενο υγρό έχει αφαιρεθεί εντελώς. Απόσπαση καθιζήματος WBC κατά την αφαίρεση υπερκείμενου υγρού. Αποφύγετε την επαφή με το καθίζημα WBC κατά την αφαίρεση του υπερκείμενου υγρού. Λανθασμένος τύπος δείγματος. Το κιτ προορίζεται για χρήση με ολικό ανθρώπινο αίμα. Άλλοι τύποι δείγματος (π.χ. μυελού των οστών, πλάσματος, αδρής στιβάδας, κλπ.) δεν έχουν δοκιμαστεί με το παρόν κιτ. Λανθασμένος τύπος σωλήνα συλλογής αίματος. Το κιτ προορίζεται για χρήση με ολικό ανθρώπινο αίμα σε σωλήνες συλλογής EDTA. Άλλοι τύποι σωλήνων δεν έχουν δοκιμαστεί με το παρόν κιτ και ενδέχεται να μην είναι συμβατοί με τη χημεία καθαρισμού. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 13 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

9. Αντιμετώπιση προβλημάτων (Συνέχεια) Πρόβλημα RNA χαμηλής ποιότητας (Προϊόντα έκπλυσης θα πρέπει να έχουν λόγο A 260 /A 280 μεγαλύτερο από 1,8 και λόγο A 260 /A 230 μεταξύ 1,8 και 2,4.) Υψηλά επίπεδα DNA στα προϊόντα έκπλυσης (Τα προϊόντα έκπλυσης έχουν μολυνθεί με DNA, και ενδέχεται να επηρεάσουν τις αναλύσεις downstream.) Το προεπεξεργασμένο προϊόν λύσης είναι πολύ παχύρρευστο για μεταφορά με πιπέτα Αίτια και σχόλια Η μέτρηση WBC του δείγματος αίματος ήταν πάνω από το εύρος της προοριζόμενης χρήσης του προϊόντος 4 10 6 έως 10 10 6 WBC/ml. Το κιτ έχει βέλτιστη απόδοση καθαρισμού RNA από δείγματα αίματος με μέτρηση WBC 4 10 6 έως 10 10 6 WBC/ml. Χρησιμοποιήθηκε λανθασμένος όγκος ολικού αίματος. Η προσθήκη περισσότερης ποσότητας από 2,5 ml ολικού αίματος μπορεί να προκαλέσει χαμηλή καθαρότητα του προϊόντος έπλυσης. Το δείγμα αίματος ήταν πολύ παλιό. Η καλύτερη απόδοση επιτυγχάνεται με φρέσκα δείγματα αίματος. Δείγματα που έχουν αποθηκευτεί σε 2 C 10 C για περισσότερες από 3 ημέρες ενδέχεται να εμφανίσουν μειωμένη ποιότητα RNA. Το δείγμα είχε αποθηκευτεί σε θερμοκρασία χαμηλότερη από 2 C ή μεγαλύτερη από 10 C πριν τον καθαρισμό. Ακατάλληλες θερμοκρασίες αποθήκευσης ενδέχεται να προκαλέσουν λύση WBC ή αποδόμηση RNA. Ανεπαρκής αφαίρεση υπερκείμενου υγρού μετά από διαφορική λύση. Βεβαιωθείτε ότι το υπερκείμενο υγρό έχει αφαιρεθεί εντελώς. Λανθασμένος τύπος δείγματος. Το προϊόν προορίζεται για χρήση με ολικό ανθρώπινο αίμα. Άλλοι τύποι δείγματος (π.χ. μυελού των οστών, πλάσματος, αδρής στιβάδας, κλπ.) δεν έχουν δοκιμαστεί με αυτό το προϊόν. Η μέτρηση WBC του δείγματος αίματος είναι πάνω από το εύρος της προοριζόμενης χρήσης 4 10 6 έως 10 10 6 WBC/ml. Χρησιμοποιήθηκε λανθασμένος όγκος ολικού αίματος. Η προσθήκη περισσότερης ποσότητας από 2,5 ml ολικού αίματος μπορεί να προκαλέσει μόλυνση DNA στα προϊόντα έπλυσης. Δεν προστέθηκε DNase I στο φυσίγγιο. Αν είναι εφικτό, εξετάσετε το βύθισμα αρ.4 στα φυσίγγια. Το βύθισμα αρ.4 θα πρέπει να εμφανίζεται με πράσινο χρώμα (όχι κίτρινο) αν έχει προστεθεί DNase I στα φυσίγγια σύμφωνα με την Ενότητα 6.B, Βήμα 5. Η μέτρηση WBC του δείγματος αίματος ήταν πάνω από το εύρος της προοριζόμενης χρήσης του προϊόντος 4 10 6 έως 10 10 6 WBC/ml. Χρησιμοποιήθηκε λανθασμένος όγκος ολικού αίματος. Η προσθήκη ποσότητας μεγαλύτερης από 2,5 ml ολικού αίματος μπορεί να οδηγήσει σε παχύρρευστα προϊόντα λύσης που δεν μεταφέρονται εύκολα με πιπέτα. 14 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com

10. Δημιουργία περιβάλλοντα χώρου ελεύθερου από ριβονουκλεάσες Οι ριβονουκλεάσες είναι εξαιρετικά δύσκολες να απενεργοποιηθούν. Φροντίστε για την αποφυγή εισαγωγής δραστηριότητας ριβονουκλεάσεων στα δείγματα RNA κατά τη διάρκεια και μετά την απομόνωση. Αυτό είναι εξαιρετικά σημαντικό αν το αρχικό υλικό ήταν δύσκολο να αποκτηθεί ή αν είναι αναντικατάστατο. Οι παρακάτω οδηγίες μπορούν να βοηθήσουν στην αποφυγή τυχαίας μόλυνσης των δειγμάτων από ριβονουκλεάσες. 1. Οι δύο πιο κοινές πηγές μόλυνσης από ριβονουκλεάσες είναι τα χέρια του χειριστή και τα βακτήρια ή μύκητες που ενδέχεται να υπάρχουν σε αιωρούμενα σωματίδια σκόνης. Για την αποφυγή μόλυνσης από αυτές τις πηγές, χρησιμοποιείτε τεχνική ασηψίας κατά το χειρισμό των αντιδραστηρίων που παρέχονται με αυτό το σύστημα. Φοράτε πάντα γάντια. Αλλάξτε γάντια μετά από κάθε τυχόν επαφή με ριβονουκλεάσες. 2. Όποτε είναι εφικτό, χρησιμοποιείτε αποστειρωμένα πλαστικά υλικά μιας χρήσης κατά το χειρισμό του RNA. Αυτά τα υλικά είναι γενικά ελεύθερα από ριβονουκλεάσες και δεν απαιτούν προεπεξεργασία για την απενεργοποίηση των ριβονουκλεάσεων. 3. Φροντίστε ώστε τα μη αποστειρωμένα γυάλινα, τα πλαστικά υλικά καθώς και οι θάλαμοι ηλεκτροφόρησης να είναι κατάλληλα πριν τη χρήση, διασφαλίζοντας ότι είναι ελεύθερα από ριβονουκλεάσες. Τοποθετήστε τα γυάλινα υλικά σε φούρνο στους 200 C κατά τη διάρκεια της νύχτας, και πλύνετε σχολαστικά τα πλαστικά υλικά με 0,1N NaOH, 1mM EDTA, και στη συνέχεια με νερό χωρίς ριβονουκλεάσες. Τα εμπορικά διαθέσιμα προϊόντα αφαίρεσης ριβονουκλεάσεων μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Σημείωση: Οι θάλαμοι ηλεκτροφόρησης ενδέχεται να μολυνθούν με ριβονουκλεάσες, ειδικά με RNase A, από την ανάλυση των δειγμάτων DNA. Όποτε είναι εφικτό, κρατήστε μια νέα ή απολυμασμένη συσκευή μόνο για ανάλυση RNA. 4. Επεξεργαστείτε διαλύματα που δεν παρέχονται με το σύστημα προσθέτοντας DEPC σε 0,1%v/v σε συλλέκτη αναθυμιάσεων. Εκτελέστε επώαση κατά τη διάρκεια της νύχτας με ανάδευση στο συλλέκτη, σε θερμοκρασία δωματίου. Τοποθετήστε στο αυτόκαυστο για 30 λεπτά για απομάκρυνση αποτυπωμάτων ανίχνευσης DEPC. Προσοχή: Το DEPC είναι δυνητικά καρκινογόνο και θα πρέπει να χρησιμοποιείται μόνο σε συλλέκτη χημικών αναθυμιάσεων. Το DEPC αντιδρά γρήγορα με αμίνες και δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για ρυθμιστικά διαλύματα Tris. Σημείωση: Για όλες τις εφαρμογές downstream, είναι σημαντικό να συνεχίσετε να προστατεύετε τα δείγματα RNA από ριβονουκλεάσες. Φοράτε καθαρά γάντια και χρησιμοποιείτε διαλύματα και σωλήνες φυγοκέντρησης χωρίς ριβονουκλεάσες. 11. Βιβλιογραφία 1. Clinical Laboratory Standards Institute (2007) Handling, transport, and storage of specimens for molecular methods. Για προβολή, μεταβείτε στην ηλεκτρονική διεύθυνση: www.clsi.org 2. Murray, P.R. et al. (2007) Manual of Clinical Microbiology, 9th Edition, ASM Press. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 15 www.promega.com TM434 Αναθεώρηση 5/18

12. Σχετικά προϊόντα Όργανο και εξαρτήματα Προϊόν Μέγεθος Αρ. Κατ. Όργανο Maxwell CSC* 1 το καθένα AS4000 Δίσκος πλατφόρμας Maxwell RSC/CSC 1 το καθένα SP6019 *Για διαγνωστική χρήση in vitro. Αυτό το προϊόν είναι διαθέσιμο μόνο σε ορισμένες χώρες. Κιτ αντιδραστηρίων Maxwell CSC Μεταβείτε στον ιστότοπο www.promega.com για λίστα με τα διαθέσιμα κιτ καθαρισμού Maxwell CSC. 13. Περίληψη αλλαγών Η παρακάτω αλλαγή έχει γίνει στην αναθεώρηση 5/18 του παρόντος εγγράφου: 1. Ενημερώθηκε για συμπερίληψη των απαιτήσεων της Οδηγίας της Ευρωπαϊκής Ένωσης IVD (98/79/ΕΚ). a) Αρ. διπλώματος ευρεσιτεχνίας Η.Π.Α. 6027945 και 6368800. (b) Αρ. διπλώματος ευρεσιτεχνίας Η.Π.Α. 7329488 και άλλα διπλώματα ευρεσιτεχνίας. 2014, 2015, 2018 Promega Corporation. Με την επιφύλαξη παντός δικαιώματος. Η ονομασία Maxwell είναι κατοχυρωμένο εμπορικό σήμα της Promega Corporation. Η ονομασία LpH είναι κατοχυρωμένο εμπορικό σήμα της Steris Corporation. Τα προϊόντα ενδέχεται να καλύπτονται από διπλώματα ευρεσιτεχνίας που εκκρεμούν ή έχουν εκδοθεί ή ενδέχεται να έχουν συγκεκριμένους περιορισμούς. Για περισσότερες πληροφορίες, επισκεφτείτε την ιστοσελίδα μας. Όλες οι τιμές και οι προδιαγραφές υπόκεινται σε αλλαγές χωρίς προηγούμενη ειδοποίηση. Αξιώσεις που αφορούν το προϊόν υπόκεινται σε αλλαγές. Για τις πιο πρόσφατες πληροφορίες σχετικά με τα προϊόντα της Promega, επικοινωνήστε με την τεχνική υπηρεσία της Promega ή επισκεφτείτε τον ηλεκτρονικό κατάλογο της Promega. 16 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI 53711-5399 USA Αριθμός χωρίς χρέωση στις Η.Π.Α. 800-356-9526 Τηλέφωνο 608-274-4330 Φαξ 608-277-2516 TM434 Αναθεώρηση 5/18 www.promega.com