ÄKTAoligopilot plus. Οδηγίες λειτουργίας. Μετάφραση από τα Αγγλικά

Transcript

1 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας Μετάφραση από τα Αγγλικά

2 Πίνακας περιεχομένων Πίνακας περιεχομένων 1 Εισαγωγή Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Οδηγίες ΕΕ Κανονισμοί για Η.Π.Α. και Καναδά Άλλοι κανονισμοί και πρότυπα Τεκμηρίωση χρήστη... 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια Προφυλάξεις ασφαλείας Ετικέτες Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης Διαδικασίες για την απόσυρση του οργάνου... 3 Περιγραφή συστήματος Επισκόπηση συστήματος Στοιχεία συστήματος Αντλίες P Βαλβίδες Συσκευές παρακολούθησης Περιοριστής ροής FR Παροχή αδρανούς αερίου Εξαρτήματα Στήλες και αντιδραστήρες Λογισμικό ελέγχου... 4 Εγκατάσταση Απαιτήσεις χώρου εγκατάστασης Μεταφορά Αποσυσκευασία Συναρμολόγηση Συνδέσεις Ανταλλακτικά και εξαρτήματα... 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση Δοκιμή εγκατάστασης Σύνθεση επαλήθευσης Επανεγκατάσταση του συστήματος... 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση Απαιτούμενα στοιχεία Προετοιμασία των διαλυμάτων Προετοιμασία για μια σύνθεση επαλήθευσης Προετοιμασία του αντιδραστήρα στήλης ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

3 Πίνακας περιεχομένων 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών... 7 Λειτουργία Επισκόπηση λειτουργίας Εκκίνηση του οργάνου και του συστήματος ελέγχου Ρύθμιση ανάλυσης Προετοιμασία πριν από την έναρξη Εκτέλεση ανάλυσης... 8 Διαδικασίες μετά τη σύνθεση... 9 Συντήρηση Προφυλάξεις ασφαλείας Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη Καθαρισμός Καθαρισμός της κυψελίδας ροής UV-900 της συσκευής παρακολούθησης Συντήρηση στοιχείων Αποσυναρμολόγηση και συναρμολόγηση στοιχείων και αναλωσίμων Αντικατάσταση ασφαλειών Bαθμονόμηση Προετοιμασία του ÄKTAoligopilot plus για αναμονή Αποθήκευση Αντιμετώπιση προβλημάτων Προβλήματα καμπυλών UV Προβλήματα με τη συσκευή παρακολούθησης Προβλήματα καμπυλών αγωγιμότητας Αντλία P Σωλήνες και σύνδεσμοι Υψηλή πίεση επαναφοράς συστήματος Βαλβίδες IV-908 και INV-907-H Χημικά προβλήματα Ψευδείς κορυφές τριτυλίου Δεν ανιχνεύτηκε κορυφή Πληροφορίες αναφοράς Προδιαγραφές Υλικά συστατικών μερών ÄKTAoligopilot plus Προδιαγραφές για αντλίες P Χημική αντοχή Πληροφορίες παραγγελίας Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας... Παράρτημα A Διάγραμμα συνδέσεων - Διαδρομή ροής υγρών ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 3

4 Πίνακας περιεχομένων Παράρτημα B Σωλήνες... Παράρτημα C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων... C.1 Η αντίδραση σύζευξης... C.2 Χημεία προστασίας... C.3 Χημεία ενεργοποίησης... C.4 Ο στερεός φορέας... C.5 Κύκλος σύνθεσης... C.6 Μετα-συνθετική επεξεργασία... C.7 Θειολιώμενα ολιγονουκλεοτίδια... Παράρτημα D Ανάλυση και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων... Παράρτημα E Διαγράμματα ροής σύνθεσης... E.1 Επισκόπηση του κύκλου σύνθεσης... E.2 Πλύση στήλης... E.3 Αποτριτυλίωση... E.4 Πλύση Detrit... E.5 Προσθήκη αντιδραστηρίων σύζευξης... E.6 Ανακυκλοφορία αντιδραστηρίων σύζευξης... E.7 Πλύση σύζευξης... E.8 Οξείδωση... E.9 Πλύση οξείδωσης... E.10 Κάλυψη... E.11 Πλύση κάλυψης... Παράρτημα F Περιγραφή μεθόδου για ÄKTAoligopilot plus... Παράρτημα G Μεταβλητές μεθόδου... Παράρτημα H Μπλοκ μεθόδου στο ÄKTAoligopilot plus... Παράρτημα I Υπολογισμοί στρατηγικής... I.1 Κλίμακα... I.2 Σύζευξη... I.3 Όγκος συνεχούς ροής... I.4 Ροή ανακύκλωσης... I.5 Αντιδραστήριο οξείδωσης... I.6 Αντιδραστήριο κάλυψης... I.7 Αντιδραστήριο θειολίωσης ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

5 1 Εισαγωγή 1 Εισαγωγή Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Αυτό το κεφάλαιο περιέχει σημαντικές πληροφορίες για το χρήστη, περιγραφές των σημειώσεων ασφαλείας, πληροφορίες για τους κανονισμούς, την προοριζόμενη χρήση των συστημάτων ÄKTAoligopilot plus και λίστες με τη σχετική τεκμηρίωση. Ενότητα 1.1 Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς 1.4 Τεκμηρίωση χρήστη Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 5

6 1 Εισαγωγή 1.1 Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο 1.1 Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο Σκοπός του παρόντος εγχειριδίου Οι Οδηγίες λειτουργίας παρέχουν τις απαραίτητες πληροφορίες για την εγκατάσταση, τη λειτουργία και τη συντήρηση του προϊόντος με ασφαλή τρόπο. Σκοπός του παρόντος εγχειριδίου Οι παρούσες Οδηγίες λειτουργίας καλύπτουν τα όργανα ÄKTAoligopilot plus 10 και ÄKTAoligopilot plus 100 και το λογισμικό ελέγχου UNICORN. Η παρακάτω εικόνα δείχνει ένα σύστημα ÄKTAoligopilot plus και το σύστημα ελέγχου λογισμικού. 6 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

7 1 Εισαγωγή 1.1 Σχετικά με αυτό το εγχειρίδιο Τυπογραφικές συμβάσεις Τα στοιχεία λογισμικού επισημαίνονται στο κείμενο με έντονους πλάγιους χαρακτήρες. Τα διάφορα επίπεδα μενού διαχωρίζονται από άνω και κάτω τελεία, δηλ. το στοιχείο File:Open αναφέρεται στην εντολήopen του μενού File. Τα στοιχεία υλικού εξοπλισμού επισημαίνονται στο κείμενο με έντονη γραφή (για παράδειγμα, Power). ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 7

8 1 Εισαγωγή 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη Διαβάστε αυτό πριν τη λειτουργία του προϊόντος Όλοι οι χρήστες πρέπει να διαβάσουν τις Οδηγίες λειτουργίας στο σύνολό τους πριν από την εγκατάσταση, τον χειρισμό ή τη συντήρηση του προϊόντος. Έχετε πάντα τις Οδηγίες λειτουργίας κοντά σας όταν χειρίζεστε το προϊόν. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν με διαφορετικό τρόπο από αυτόν που περιγράφεται στην τεκμηρίωση χρήστη. Σε αντίθετη περίπτωση, υπάρχει κίνδυνος τραυματισμού και πρόκλησης ζημιάς στον εξοπλισμό. Προοριζόμενη χρήση του προϊόντος Το ÄKTAoligopilot plus είναι ένα πλήρως αυτοματοποιημένο σύστημα που προορίζεται για τη σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίων DNA και RNA. Το ÄKTAoligopilot plus προορίζεται μόνο για ερευνητική χρήση και δεν πρέπει να χρησιμοποιείται σε κλινικές διαδικασίες ή για διαγνωστικούς σκοπούς. Προϋποθέσεις Για να διασφαλιστεί η ενδεδειγμένη λειτουργία του ÄKTAoligopilot plus, πρέπει να ισχύουν οι παρακάτω προϋποθέσεις: Ο χρήστης πρέπει να έχει γενικές γνώσεις σχετικά με τη λειτουργία των ηλεκτρονικών υπολογιστών και του λειτουργικού συστήματος Microsoft Windows. Ο χρήστης πρέπει να κατανοεί τις έννοιες της υγρής χρωματογραφίας. Ο χρήστης πρέπει να διαβάσει και να κατανοήσει τις "Οδηγίες ασφάλειας" που περιγράφονται στο παρόν εγχειρίδιο. Το ÄKTA oligopilot plus και το λογισμικό πρέπει να εγκατασταθούν, να διαμορφωθούν και να βαθμονομηθούν σύμφωνα με τις παρούσες οδηγίες λειτουργίας. 8 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

9 1 Εισαγωγή 1.2 Σημαντικές πληροφορίες για τον χρήστη Σημειώσεις που αφορούν την ασφάλεια Η παρούσα τεκμηρίωση χρήσης περιλαμβάνει σημειώσεις ασφαλείας (ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗ- ΣΕΙΣ, ΕΠΙΣΗΜΑΝΣΕΙΣ ΠΡΟΣΟΧΗΣ και ΣΗΜΕΙΩΣΕΙΣ) σχετικά με την ασφαλή χρήση του προϊόντος. Ανατρέξτε στους παρακάτω ορισμούς. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Ο όρος ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ υποδεικνύει μια επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, μπορεί να προκαλέσει θάνατο ή σοβαρό τραυματισμό. Πρέπει να διακόψετε την εργασία σας, εάν οι προϋποθέσεις που αναφέρονται δεν ικανοποιούνται και δεν έχουν γίνει πλήρως κατανοητές. ΠΡΟΣΟΧΗ Ο όρος ΠΡΟΣΟΧΗ υποδεικνύει μια επικίνδυνη κατάσταση, η οποία, εάν δεν αποφευχθεί, μπορεί να προκαλέσει μικρό ή μέτριο τραυματισμό. Πρέπει να διακόψετε την εργασία σας, εάν οι προϋποθέσεις που αναφέρονται δεν ικανοποιούνται και δεν έχουν γίνει πλήρως κατανοητές. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Ο όρος ΣΗΜΕΙΩΣΗ υποδεικνύει οδηγίες που πρέπει να τηρήσετε, ώστε να αποφευχθεί η πρόκληση ζημιάς στο προϊόν ή σε άλλο εξοπλισμό. Σημειώσεις και συμβουλές Σημείωση: Συμβουλή: Οι σημειώσεις χρησιμοποιούνται για την επισήμανση σημαντικών πληροφοριών που συμβάλλουν στη βέλτιστη και απρόσκοπτη χρήση του προϊόντος. Οι συμβουλές περιλαμβάνουν χρήσιμες πληροφορίες για τη βελτίωση ή τη βελτιστοποίηση των διαδικασιών. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 9

10 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Εισαγωγή Στην ενότητα αυτή αναφέρονται οι κανονισμοί και τα πρότυπα που ισχύουν για το όργανο ÄKTAoligopilot plus. Πληροφορίες σχετικά με την κατασκευή Στον παρακάτω πίνακα συνοψίζονται οι απαιτούμενες πληροφορίες σχετικά με την κατασκευή. Απαιτήσεις Όνομα και διεύθυνση κατασκευαστή Πληροφορίες GE Healthcare Bio-Sciences AB, Björkgatan 30, SE Uppsala, Sweden Στην παρούσα ενότητα Ενότητα Οδηγίες ΕΕ Κανονισμοί για Η.Π.Α. και Καναδά Άλλοι κανονισμοί και πρότυπα Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

11 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Οδηγίες ΕΕ Οδηγίες ΕΕ Συμμόρφωση με τις οδηγίες της ΕΕ Το προϊόν αυτό πληροί τις ευρωπαϊκές οδηγίες που αναφέρονται παρακάτω. Για τις οδηγίες και τους κανονισμούς που ισχύουν για τη σήμανση CE, ανατρέξτε στη Δήλωση συμμόρφωσης ΕΕ. Εάν δεν συμπεριλαμβάνεται στο προϊόν, αντίγραφο της Δήλωσης συμμόρφωσης ΕΕ παρέχεται κατόπιν αίτησης. Οδηγία 2006/42/ΕΚ 2014/30/EΕ 2014/35/EΕ 2011/65/EΕ Τίτλος Οδηγία για τα μηχανήματα (MD) Οδηγία για την ηλεκτρομαγνητική συμβατότητα (ΗΜΣ) Οδηγία για τη χαμηλή τάση (LVD) Οδηγία σχετικά με τον περιορισμό της χρήσης ορισμένων επικίνδυνων ουσιών σε είδη ηλεκτρικού και ηλεκτρονικού εξοπλισμού (Οδηγία RoHS) Σήμανση CE Η σήμανση CE και η σχετική Δήλωση συμμόρφωσης ΕE ισχύουν όταν το όργανο: χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις Οδηγίες λειτουργίας ή τα εγχειρίδια χρήστη και χρησιμοποιείται στην κατάσταση στην οποία παραδόθηκε από την GE Healthcare, εξαιρουμένων των τροποποιήσεων που περιγράφονται στις Οδηγίες λειτουργίας ή στα εγχειρίδια χρήστη. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 11

12 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Κανονισμοί για Η.Π.Α. και Καναδά Κανονισμοί για Η.Π.Α. και Καναδά Συμμόρφωση με τα πρότυπα CAN ICES/NMB Αυτό το προϊόν συμμορφώνεται με το καναδικό πρότυπο ICES-001/NMB-001 που αφορά την ηλεκτρομαγνητική συμβατότητα. Συμμόρφωση με τους Κανονισμούς FCC Η συσκευή αυτή συμμορφώνεται με την ενότητα 15 των Κανονισμών FCC. Η λειτουργία υπόκειται στις δύο παρακάτω προϋποθέσεις: (1) Η συσκευή αυτή δεν πρέπει να προκαλεί επιβλαβείς παρεμβολές και (2) η συσκευή αυτή πρέπει να αποδέχεται τυχόν παρεμβολές που λαμβάνει, συμπεριλαμβανομένων παρεμβολών που μπορεί να προκαλέσουν ανεπιθύμητη λειτουργία. Σημείωση: Ο χρήστης πρέπει να γνωρίζει ότι τυχόν αλλαγές ή τροποποιήσεις που δεν έχουν εγκριθεί ρητά από την GE Healthcare μπορεί να οδηγήσουν σε ακύρωση του δικαιώματος χειρισμού του εξοπλισμού. Ο εξοπλισμός αυτός έχει ελεγχθεί και έχει διαπιστωθεί ότι συμμορφώνεται με τα όρια για ψηφιακές συσκευές κατηγορίας Α, σύμφωνα με την ενότητα 15 των Κανονισμών FCC. Τα όρια αυτά έχουν σχεδιαστεί ώστε να παρέχουν εύλογη προστασία από επιβλαβείς παρεμβολές, όταν ο εξοπλισμός λειτουργεί σε εμπορικό περιβάλλον. Ο εξοπλισμός αυτός παράγει, χρησιμοποιεί και εκπέμπει ενέργεια ραδιοσυχνοτήτων. Εάν δεν εγκατασταθεί και δεν χρησιμοποιηθεί σύμφωνα με το εγχειρίδιο οδηγιών, μπορεί να προκαλέσει επιβλαβείς παρεμβολές στις ραδιοεπικοινωνίες. Η λειτουργία του εξοπλισμού αυτού σε κατοικημένη περιοχή ενδέχεται να προκαλέσει επιβλαβείς παρεμβολές. Στην περίπτωση αυτή, ο χρήστης πρέπει να αποκαταστήσει τις παρεμβολές με δικά του έξοδα. Πιστοποίηση NRTL Αυτό το σύμβολο υποδεικνύει ότι το ÄKTAoligopilot plus έχει πιστοποιηθεί από το Nationally Recognized Testing Laboratory (NRTL). 12 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

13 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Κανονισμοί για Η.Π.Α. και Καναδά Το NRTL είναι ένας οργανισμός που έχει αναγνωριστεί από το US Occupational Safety and Health Administration (OSHA), καθώς πληροί τις νομικές απαιτήσεις του Title 29 of the Code of Federal Regulations (29 CFR), Part Αυτό το προϊόν συμμορφώνεται με το πρότυπο UL και είναι πιστοποιημένο σύμφωνα με το CAN/CSA-C22.2 Αρ ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 13

14 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Άλλοι κανονισμοί και πρότυπα Άλλοι κανονισμοί και πρότυπα Εισαγωγή Στην ενότητα αυτή περιγράφονται τα πρότυπα που ισχύουν για το σύστημα ÄKTAoligopilot plus. Περιβαλλοντική συμμόρφωση Αυτό το προϊόν συμμορφώνεται με τις παρακάτω περιβαλλοντικές απαιτήσεις. Απαιτήσεις 2012/19/EΕ Κίνα RoHS Τίτλος Οδηγία σχετικά με τα απόβλητα ειδών ηλεκτρικού και ηλεκτρονικού εξοπλισμού (ΑΗΗΕ) Μέθοδοι διαχείρισης για τον περιορισμό της χρήσης επικίνδυνων ουσιών σε ηλεκτρικά και ηλεκτρονικά προϊόντα. Πρότυπα, μηχανήματα και ηλεκτρικός εξοπλισμός Οι απαιτήσεις των προτύπων που πληροί αυτό το προϊόν συνοψίζονται στον παρακάτω πίνακα. Πρότυπο EN ISO EN , IEC , UL , CAN/CSA- C22.2 No Περιγραφή Ασφάλεια μηχανικού εξοπλισμού. Γενικές αρχές σχεδιασμού. Αξιολόγηση κινδύνων και μείωση κινδύνων. Απαιτήσεις ασφαλείας για ηλεκτρικό εξοπλισμό μέτρησης, ελέγχου και εργαστηριακής χρήσης - Μέρος 1: Γενικές απαιτήσεις. 14 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

15 1 Εισαγωγή 1.3 Πληροφορίες σχετικά με τους κανονισμούς Άλλοι κανονισμοί και πρότυπα Πρότυπο EN Περιγραφή Ηλεκτρικός εξοπλισμός για μετρήσεις, έλεγχο και εργαστηριακή χρήση-απαιτήσεις EMC-Μέρος 1: Γενικές απαιτήσεις. (Εκπομπές κατά το πρότυπο CISPR 11, ομάδα 1, κατηγορία A) ΣΗΜΕΙΩΣΗ Ο εξοπλισμός αυτός δεν προορίζεται για χρήση σε κατοικίες και μπορεί να μην παρέχει επαρκή προστασία από τη λήψη ραδιοεπικοινωνιών σε περιβάλλον αυτού του είδους. ICES-001/NMB-001 Βιομηχανικές, επιστημονικές και ιατρικές (ISM) γεννήτριες ραδιοσυχνότητας (Καναδάς). ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 15

16 1 Εισαγωγή 1.4 Τεκμηρίωση χρήστη 1.4 Τεκμηρίωση χρήστη Έγγραφα τεκμηρίωσης ειδικά για το σύστημα Τεκμηρίωση χρήστη ÄKTAoligopilot plus Operating Instructions Δήλωση συμμόρφωσης για το ÄKTAoligopilot plus Περιεχόμενο Όλες οι οδηγίες που απαιτούνται για τη λειτουργία του οργάνου με ασφαλή τρόπο. Οι οδηγίες λειτουργίας περιλαμβάνουν επίσης πληροφορίες για τη δημιουργία μεθόδων, τη συντήρηση και την αντιμετώπιση προβλημάτων. Έγγραφο με το οποίο ο κατασκευαστής δηλώνει ότι το προϊόν ικανοποιεί και συμμορφώνεται με τις βασικές απαιτήσεις των ισχυουσών οδηγιών. Τεκμηρίωση λογισμικού Μαζί με κάθε σύστημα παρέχεται η εξής τεκμηρίωση λογισμικού στην οποία περιγράφονται πρόσθετες πληροφορίες που ισχύουν για το ÄKTAoligopilot plus, ανεξαρτήτως της συγκεκριμένης διαμόρφωσης: Έγγραφο UNICORN, πακέτο εγχειριδίου Σκοπός/Περιεχόμενο Τα εγχειρίδια περιέχουν οδηγίες σχετικά με τον χειρισμό του UNICORN, την εργασία με μεθόδους, την εκτέλεση αναλύσεων και την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων. Η ηλεκτρονική βοήθεια περιέχει περιγραφές διαλόγων για το UNICORN. Η πρόσβαση στην ηλεκτρονική βοήθεια γίνεται από το μενού Help. Τεκμηρίωση εξαρτημάτων Στο πακέτο της τεκμηρίωσης περιλαμβάνονται επίσης τυχόν έγγραφα τεκμηρίωσης για εξαρτήματα που κατασκευάζονται τόσο από την GE Healthcare όσο και από τρίτους προμηθευτές. Σημείωση: Τα εγχειρίδια των στοιχείων ÄKTA που παρέχονται με το σύστημα ÄKTA oligopilot plus έχουν συνταχθεί κυρίως για εφαρμογές χρωματογραφίας. 16 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

17 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Στο κεφάλαιο αυτό περιγράφονται οι προφυλάξεις ασφαλείας, οι ετικέτες και τα σύμβολα που είναι τοποθετημένα στον εξοπλισμό. Το κεφάλαιο περιγράφει επίσης διαδικασίες για περιπτώσεις έκτακτης ανάγκης και αποκατάστασης μετά από διακοπή ρεύματος, ενώ παρέχει πληροφορίες ανακύκλωσης για το ÄKTAoligopilot plus. Σημαντικό ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από την εγκατάσταση, τη λειτουργία ή τη συντήρηση του προϊόντος, όλοι οι χρήστες θα πρέπει να διαβάσουν και να κατανοήσουν ολόκληρο το περιεχόμενο αυτού του κεφαλαίου, για να γνωρίζουν τους σχετικούς κινδύνους. Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιλαμβάνει τις παρακάτω ενότητες: Ενότητα 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας 2.2 Ετικέτες 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης 2.4 Διαδικασίες για την απόσυρση του οργάνου Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 17

18 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας Εισαγωγή Το όργανο ÄKTAoligopilot plus τροφοδοτείται με την τάση του κεντρικού δικτύου και χρησιμοποιεί υγρά υπό πίεση που μπορεί να είναι επικίνδυνα. Πριν από την εγκατάσταση, τη λειτουργία ή τη συντήρηση του συστήματος, πρέπει να γνωρίζετε τους κινδύνους που περιγράφονται στο παρόν εγχειρίδιο. Τηρείτε τις παρεχόμενες οδηγίες, για να αποφευχθούν τραυματισμοί και πρόκληση ζημιάς στον εξοπλισμό. Οι προφυλάξεις ασφαλείας της παρούσας ενότητας χωρίζονται στις παρακάτω κατηγορίες: Γενικές προφυλάξεις Εύφλεκτα υγρά Ατομική προστασία Εγκατάσταση και μετακίνηση του οργάνου Λειτουργία συστήματος Συντήρηση Γενικές προφυλάξεις ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εάν μετακινηθεί το σύστημα, οι εξωτερικοί τριχοειδείς ή άλλοι σωλήνες ενδέχεται να παγιδευτούν σε κοντινά αντικείμενα και να αποσπαστούν από τις συνδέσεις τους, προκαλώντας διαρροή. Επιπλέον, πριν τη μετακίνηση του συστήματος, βεβαιωθείτε ότι όλες οι είσοδοι και έξοδοι είναι σφραγισμένες και ότι το σύστημα δεν περιέχει καμία ποσότητα διαλυτών. Σε αντίθετη περίπτωση, υπάρχει ο κίνδυνος διαρροής και πρόκλησης βλαβών στα άτομα ή/και τον παρακείμενο εξοπλισμό. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εάν η θύρα ανοίξει απότομα στην πλήρη έκτασή της, οι εσωτερικοί τριχοειδείς σωλήνες ενδέχεται να αποσπαστούν από τις συνδέσεις τους προκαλώντας διαρροή. 18 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

19 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν με διαφορετικό τρόπο από αυτόν που περιγράφεται στην τεκμηρίωση χρήστη. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μόνο κατάλληλα εκπαιδευμένο προσωπικό επιτρέπεται να ασχολείται με τον χειρισμό και τη συντήρηση του προϊόντος. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από τη σύνδεση μιας στήλης, διαβάστε τις οδηγίες χρήσης της στήλης. Για να αποφευχθεί η έκθεση της στήλης σε υπερβολική πίεση, βεβαιωθείτε ότι το όριο πίεσης έχει ρυθμιστεί στην καθορισμένη μέγιστη πίεση της στήλης. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη χρησιμοποιείτε εξαρτήματα που δεν παρέχονται ή δεν συνιστώνται από την GE Healthcare. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη χρησιμοποιείτε το ÄKTAoligopilot plus εάν δεν λειτουργεί σωστά ή εάν έχει υποστεί ζημιά, όπως για παράδειγμα: Ζημιά στο καλώδιο τροφοδοσίας ή στο βύσμα του Ζημιά λόγω πτώσης του εξοπλισμού Ζημιά λόγω διαρροής υγρών στον εξοπλισμό ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Οι φιάλες αντιδραστηρίων που συνδέονται στις εισόδους του συστήματος πρέπει να είναι υψηλής ποιότητας καθώς θα βρίσκονται υπό πίεση κατά τη διάρκεια της λειτουργίας. Να αντικαθιστάτε αμέσως τις φιάλες αντιδραστηρίων που εμφανίζουν σημάδια φθοράς ή ρωγμές. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 19

20 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΣΟΧΗ Οι σωλήνες αποβλήτων και τα δοχεία πρέπει να είναι ασφαλισμένα και σφραγισμένα, ώστε να αποφευχθεί η τυχαία διαρροή. ΠΡΟΣΟΧΗ Βεβαιωθείτε ότι οι διαστάσεις του δοχείου αποβλήτων είναι κατάλληλες για τον μέγιστο δυνατό όγκο όταν ο εξοπλισμός λειτουργεί χωρίς επιτήρηση. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Αποφεύγετε τη συμπύκνωση υδρατμών. Εάν το ÄKTAoligopilot plus φυλάσσεται σε ψυκτικό θάλαμο ή άλλο παρόμοιο χώρο, πρέπει να παραμένει ενεργοποιημένο ώστε να αποφευχθεί η συμπύκνωση υδρατμών. Εύφλεκτα υγρά ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Πριν από την εκκίνηση του συστήματος, βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει διαρροή. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Όταν χρησιμοποιούνται εύφλεκτες ή επιβλαβείς ουσίες, πρέπει να εγκατασταθεί χοάνη απαγωγής αερίων ή άλλο παρόμοιο σύστημα εξαερισμού. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: ΚΙΝΔΥΝΟΣ ΕΚΡΗΞΗΣ Στο προϊόν χρησιμοποιούνται εν δυνάμει εκρηκτικά υγρά. Επικοινωνήστε με τις τοπικές αρχές για πληροφορίες σχετικά με τους τοπικούς κανόνες και κανονισμούς πριν από την εγκατάσταση ή τη λειτουργία. 20 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

21 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας Ατομική προστασία ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Χρησιμοποιείτε πάντα εξοπλισμό ατομικής προστασίας (PPE) κατά τη λειτουργία και τη συντήρηση αυτού του προϊόντος. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Επικίνδυνες ουσίες. Κατά τη χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών, λαμβάνετε όλα τα κατάλληλα προστατευτικά μέτρα, όπως είναι η χρήση προστατευτικού ρουχισμού, γυαλιών και γαντιών ανθεκτικών στις ουσίες που χρησιμοποιούνται. Τηρείτε τους τοπικούς ή/και εθνικούς κανονισμούς σχετικά με την ασφαλή λειτουργία και συντήρηση του προϊόντος. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Υψηλή πίεση. Το προϊόν λειτουργεί υπό υψηλή πίεση. Φοράτε προστατευτικά γυαλιά και οποιοδήποτε άλλο απαραίτητο εξοπλισμό ατομικής προστασίας (PPE) ανά πάσα στιγμή. Εγκατάσταση και μετακίνηση του οργάνου ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Τάση παροχής. Προτού συνδέσετε το καλώδιο τροφοδοσίας, βεβαιωθείτε ότι η τάση παροχής στην επιτοίχια πρίζα είναι ίδια με την τάση που αναγράφεται στο όργανο. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Προστατευτική γείωση. Το προϊόν πρέπει να συνδέεται πάντα σε γειωμένη πρίζα. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 21

22 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Καλώδιο τροφοδοσίας. Χρησιμοποιείτε μόνο καλώδια τροφοδοσίας με εγκεκριμένα βύσματα που παρέχονται ή έχουν εγκριθεί από την GE Healthcare. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη φράζετε τις εισόδους και τις εξόδους εξαερισμού στο σύστημα. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εγκατάσταση του υπολογιστή. Ο υπολογιστής πρέπει να εγκαθίσταται και να χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες που παρέχονται από τον κατασκευαστή του υπολογιστή. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας και το καλώδιο τροφοδοσίας με βύσμα. Μην εμποδίζετε την πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας και το καλώδιο τροφοδοσίας. Η πρόσβαση στο διακόπτη λειτουργίας πρέπει να είναι πάντα απρόσκοπτη. Το καλώδιο τροφοδοσίας με βύσμα πρέπει να αποσυνδέεται πάντα εύκολα. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Η παροχή αδρανούς αερίου δεν πρέπει να υπερβαίνει ποτέ τα 0,5 bar. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αποσύνδεση από το ηλεκτρικό δίκτυο. Αποσυνδέετε πάντα το όργανο από το ηλεκτρικό δίκτυο πριν από την αντικατάσταση εξαρτημάτων του οργάνου, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. 22 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

23 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Το προϊόν θα πρέπει να εγκατασταθεί και να προετοιμαστεί από το προσωπικό της GE Healthcare ή από τρίτους που είναι εξουσιοδοτημένοι από την GE Healthcare. ΠΡΟΣΟΧΗ Βαρύ αντικείμενο. Χρησιμοποιείτε κατάλληλο ανυψωτικό εξοπλισμό κατά τη μετακίνηση των συστημάτων. Για την ανύψωση του συστήματος με ασφάλεια απαιτούνται τρία άτομα. ΠΡΟΣΟΧΗ Βαρύ αντικείμενο. Χρησιμοποιείτε κατάλληλο ανυψωτικό εξοπλισμό κατά τη μετακίνηση των συστημάτων. Για την ανύψωση του συστήματος με ασφάλεια απαιτούνται τρία άτομα. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Αποσυνδέστε το όργανο από το ρεύμα. Για να αποφευχθεί η πρόκληση ζημιάς στον εξοπλισμό, αποσυνδέετε πάντα το προϊόν από το ηλεκτρικό δίκτυο πριν από την αφαίρεση ή την εγκατάσταση μιας μονάδας του οργάνου ή πριν από τη σύνδεση ή την αποσύνδεση ενός καλωδίου. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Ο υπολογιστής που χρησιμοποιείται με τον εξοπλισμό θα πρέπει να πληροί τις απαιτήσεις του προτύπου IEC και να εγκαθίσταται και να χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 23

24 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας Λειτουργία συστήματος ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από την έναρξη της εργασίας σας, πρέπει να συνδέσετε στο σύστημα ένα δοχείο αποβλήτων ανθεκτικό στους διαλύτες. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ ΤοÄKTAoligopilot plus χρησιμοποιεί υπεριώδες φως υψηλής έντασης. Μην αποσυνδέετε τις οπτικές ίνες όταν η λυχνία είναι αναμμένη. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μην τοποθετείτε ποτέ δοχεία αποβλήτων επάνω στο σύστημα. Σε περίπτωση πλήρωσης και υπερχείλισης, μπορεί να εισχωρήσουν υγρά στο σύστημα, με αποτέλεσμα να προκληθεί βραχυκύκλωμα και κίνδυνος πυρκαγιάς. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη τοποθετείτε ποτέ δοχεία διαλυτών πάνω στην πόρτα βαλβίδας. Αν το κάνετε αυτό, τα δοχεία μπορεί να πέσουν όταν ανοίξει η πόρτα βαλβίδας. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Η εξάντληση του αδρανούς αερίου μπορεί να επηρεάσει σοβαρά την απόδοση ροής του οργάνου και να θέσει την ανάλυση σε κίνδυνο. Να ελέγχετε τακτικά τα μανόμετρα και τη δεξαμενή τροφοδοσίας. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Η υπερβολικά χαμηλή πίεση στις φιάλες μπορεί να προκαλέσει σπηλαίωση. 24 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

25 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΣΗΜΕΙΩΣΗ Οι ελεύθερες έξοδοι ισχύος στον πίσω πίνακα του οργάνου προορίζονται μόνο για χρήση με παρελκόμενα ÄKTA. Η χρήση των εξόδων ισχύος για οποιοδήποτε άλλο τύπο εξοπλισμού μπορεί να κάψει την ενσωματωμένη ασφάλεια του συστήματος. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Το νερό θα υποβαθμίσει τη σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίων. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Το τετραϋδροφουράνιο (THF) δεν είναι συμβατό με τις αντλίες των συστημάτων σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων της GE Healthcare και, συνεπώς, δεν πρέπει να χρησιμοποιείται στα συστήματα. Τα αντιδραστήρια που περιέχουν THF είναι συνήθως διαλύματα επικάλυψης και οξείδωσης. Συντήρηση ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μην ανοίξετε οποιαδήποτε από τα ηλεκτρικά στοιχεία του οργάνου. Περιέχουν κυκλώματα υψηλής τάσης που μπορούν να προκαλέσουν θανατηφόρα ηλεκτροπληξία. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από οποιαδήποτε εργασία συντήρησης στο σύστημα, να αποσυνδέετε πάντα το ηλεκτρικό καλώδιο ή να απενεργοποιείτε την ισχύ στην έξοδο. Υπάρχει ακόμη τάση ηλεκτρικού δικτύου στο όργανο ÄKTA oligopilot plus όταν αυτό απενεργοποιείται από το διακόπτη λειτουργίας. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 25

26 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος ηλεκτροπληξίας. Όλες οι επισκευές πρέπει να εκτελούνται από προσωπικό συντήρησης εξουσιοδοτημένο από την GE Healthcare. Μην ανοίγετε καλύμματα και μην αντικαθιστάτε εξαρτήματα, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αποσύνδεση από το ηλεκτρικό δίκτυο. Αποσυνδέετε πάντα το όργανο από το ηλεκτρικό δίκτυο πριν από την αντικατάσταση εξαρτημάτων του οργάνου, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μην εκτελείτε εργασίες συντήρησης οποιουδήποτε τύπου, όταν το σύστημα τροφοδοτείται με ρεύμα ή όταν το σύστημα σωλήνων βρίσκεται υπό πίεση. Λάβετε υπόψη ότι το σύστημα σωλήνων μπορεί να βρίσκεται υπό πίεση ακόμη και όταν έχει τερματιστεί η λειτουργία του συστήματος. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αποσυνδέετε το όργανο από το ηλεκτρικό δίκτυο. Αποσυνδέετε πάντα το όργανο από το ηλεκτρικό δίκτυο πριν από την αντικατάσταση ασφαλειών. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Για συνεχή προστασία από τον κίνδυνο πυρκαγιάς, αντικαθιστάτε τις ασφάλειες μόνο με ασφάλειες ίδιου τύπου και ονομαστικής τιμής. 26 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

27 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Απόσυρση. Εκτελείτε απολύμανση του εξοπλισμού πριν από την απόσυρση, ώστε να διασφαλίζεται η απομάκρυνση επικίνδυνων υπολειμμάτων. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εκτονώνετε την πίεση του αδρανούς αερίου στις φιάλες, πριν επιχειρήσετε να αντικαταστήσετε οποιοδήποτε στοιχείο στο σύστημα. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Επικίνδυνες χημικές ουσίες κατά τη συντήρηση. Κατά τη χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών για τον καθαρισμό του συστήματος ή της στήλης, απαιτείται πλύση του συστήματος με ακετονιτρίλιο και αποστράγγιση ή στέγνωμα των σωλήνων. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Χρησιμοποιείτε μόνο εγκεκριμένα ανταλλακτικά. Για τη συντήρηση ή την επισκευή του προϊόντος, πρέπει να χρησιμοποιούνται μόνο ανταλλακτικά και εξαρτήματα που έχουν εγκριθεί ή παρέχονται από την GE Healthcare. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος ανατροπής. Εάν από το πλαίσιο αφαιρεθούν εξαρτήματα μεγάλου βάρους του οργάνου, όπως είναι η αντλία, και η πόρτα είναι εντελώς ανοικτή, η μετατόπιση του κέντρου βάρους του συστήματος μπορεί να οδηγήσει σε ανατροπή του συστήματος. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μετά τη συναρμολόγηση, το σύστημα σωλήνων πρέπει να ελεγχθεί για διαρροές στη μέγιστη πίεση, ώστε να διασφαλίζεται η συνεχής προστασία από τραυματισμούς λόγω εκτόξευσης υγρών, θραύσης σωλήνων ή δυνητικά εκρηκτικής ατμόσφαιρας. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 27

28 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από τη λειτουργία, όλες οι συνδέσεις διεργασίας και το σύστημα σωλήνων πρέπει να ελεγχθούν για διαρροές στη μέγιστη πίεση, ώστε να διασφαλίζεται η συνεχής προστασία από κίνδυνο τραυματισμού λόγω εκτόξευσης υγρών, θραύσης σωλήνων ή δυνητικά εκρηκτικής ατμόσφαιρας. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από την αποσυναρμολόγηση, βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει πίεση στο σύστημα σωλήνων. ΠΡΟΣΟΧΗ Βεβαιωθείτε ότι το σύστημα σωλήνων δεν εμφανίζει απολύτως καμία διαρροή πριν από την εκτέλεση των διαδικασιών επιτόπιου καθαρισμού (CIP) ή επιτόπιας απολύμανσης (SIP) στη στήλη. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Ακολουθήστε τις οδηγίες λειτουργίας για τη συσκευή παρακολούθησης UV-900 (αριθμός προϊόντος ), για τη σωστή εγκατάσταση νέας λάμπας UV. Εάν η λάμπα δεν εγκατασταθεί σωστά, μπορεί να υπερθερμανθεί και να προκαλέσει κίνδυνο πυρκαγιάς. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Καθαρισμός. Διατηρείτε το εξωτερικό του οργάνου στεγνό και καθαρό. Σκουπίζετε τακτικά με ένα μαλακό, υγρό πανί και ήπιο καθαριστικό, εάν απαιτείται. Αφήστε το όργανο να στεγνώσει πλήρως πριν από τη χρήση. 28 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

29 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες 2.2 Ετικέτες Στην παρούσα ενότητα Η ενότητα αυτή περιγράφει τις ετικέτες του οργάνου και τις ετικέτες για επικίνδυνες ουσίες που είναι τοποθετημένες στο όργανο ÄKTAoligopilot plus. Για πληροφορίες σχετικά με τη σήμανση του εξοπλισμού του υπολογιστή, ανατρέξτε στις οδηγίες του κατασκευαστή. Ετικέτες στο όργανο Στην παρακάτω εικόνα παρουσιάζονται παραδείγματα της ετικέτας συστήματος που είναι τοποθετημένη στα όργανα ÄKTAoligopilot plus. Η ετικέτα συστήματος προσδιορίζει το προϊόν και αναφέρει τα ηλεκτρικά στοιχεία και τη συμμόρφωση με τους κανονισμούς. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 29

30 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες Περιγραφή συμβόλων στην ετικέτα συστήματος Σύμβολα και κείμενο Σημασία Προειδοποίηση! Διαβάστε την τεκμηρίωση χρήστη πριν χρησιμοποιήσετε το σύστημα. Μην ανοίγετε καλύμματα και μην αντικαθιστάτε εξαρτήματα, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. Το σύμβολο αυτό υποδεικνύει ότι τα απόβλητα ηλεκτρικού και ηλεκτρονικού εξοπλισμού δεν πρέπει να απορρίπτονται όπως τα αστικά απόβλητα χωρίς διαλογή. Αντιθέτως, πρέπει να συλλέγονται ξεχωριστά. Επικοινωνήστε με έναν εξουσιοδοτημένο αντιπρόσωπο του κατασκευαστή για πληροφορίες σχετικά με την απόσυρση του εξοπλισμού. Το σύμβολο αυτό υποδεικνύει ότι το προϊόν περιλαμβάνει επικίνδυνα υλικά άνω των ορίων που έχουν καθοριστεί από το κινεζικό πρότυπο GB/T Requirements of concentration limits for certain hazardous substances in electrical and electronic products. Το σύστημα συμμορφώνεται με τις ισχύουσες ευρωπαϊκές οδηγίες. Ο εξοπλισμός συμμορφώνεται με τις απαιτήσεις περί ηλεκτρομαγνητικής συμβατότητας (EMC) στην Αυστραλία και τη Νέα Ζηλανδία. Σήμα Ευρασιατικής συμμόρφωσης: το μεμονωμένο σήμα συμμόρφωσης υποδεικνύει ότι το προϊόν έχει εγκριθεί για κυκλοφορία στις αγορές των κρατών μελών της Ευρασιατικής Τελωνειακής Ένωσης. Αυτό το σύμβολο υποδεικνύει ότι το ÄKTAoligopilot plus έχει πιστοποιηθεί από το Nationally Recognized Testing Laboratory (NRTL). Το NRTL είναι ένας οργανισμός που έχει αναγνωριστεί από το US Occupational Safety and Health Administration (OSHA), καθώς πληροί τις νομικές απαιτήσεις του Title 29 of the Code of Federal Regulations (29 CFR), Part ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

31 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.2 Ετικέτες Σύμβολα και κείμενο CAN ICES- 1/NMB-1 Τάση Συχνότητα Μέγ. ισχύς Σημασία Το πρότυπο CAN ICES-1/NMB-1 υποδεικνύει ότι το προϊόν αυτό συμμορφώνεται με το καναδικό πρότυπο ICES-001 που αφορά τις τεχνικές απαιτήσεις για τις ακτινοβολούμενες εκπομπές θορύβου από βιομηχανικές, επιστημονικές και ιατρικές γεννήτριες ραδιοσυχνότητας. Ηλεκτρικές απαιτήσεις: Τάση κεντρικού δικτύου (VAC) Συχνότητα (Hz) Μέγ. ισχύς (VA) Έτος κατασκευής Έτος και μήνας κατασκευής ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 31

32 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης 2.3 Διαδικασίες έκτακτης ανάγκης Εισαγωγή Στην ενότητα αυτή περιγράφεται η διαδικασία τερματισμού λειτουργίας του συστήματος ÄKTAoligopilot plus σε περίπτωση έκτακτης ανάγκης. Επίσης, η ενότητα περιγράφει τις επιπτώσεις της διακοπής ρεύματος στο σύστημα. Τερματισμός λειτουργίας σε έκτακτη ανάγκη Σε περίπτωση έκτακτης ανάγκης, ακολουθήστε την παρακάτω διαδικασία για διακοπή της ανάλυσης: Βήμα 1 2 Ενέργεια Για παύση της ανάλυσης από το UNICORN, κάντε κλικ στο κουμπί Pause. Εάν απαιτείται, απενεργοποιήστε το όργανο μετακινώντας το διακόπτη Power στη θέση 0. Η ανάλυση διακόπτεται αμέσως. Διακοπή ρεύματος Οι επιπτώσεις μιας διακοπής ρεύματος εξαρτώνται από τη μονάδα που επηρεάζεται από τη διακοπή. Διακοπή ρεύματος... ÄKTAoligopilot plus Υπολογιστής Επιπτώσεις... Η ανάλυση διακόπτεται αμέσως σε μη καθορισμένη κατάσταση Τα δεδομένα που έχουν συγκεντρωθεί έως τη στιγμή της διακοπής ρεύματος διατίθενται στο UNICORN Η λειτουργία του υπολογιστή του UNICORN τερματίζεται σε μη καθορισμένη κατάσταση Η ανάλυση συνεχίζεται, αλλά δεν είναι δυνατή η αποθήκευση δεδομένων στο UNICORN. 32 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

33 2 Οδηγίες σχετικά με την ασφάλεια 2.4 Διαδικασίες για την απόσυρση του οργάνου 2.4 Διαδικασίες για την απόσυρση του οργάνου Εισαγωγή Η ενότητα αυτή περιέχει πληροφορίες σχετικά με την απόσυρση του ÄKTAoligopilot plus. Απολύμανση Το προϊόν πρέπει να απολυμαίνεται πριν από την απόσυρση. Πρέπει να τηρούνται όλοι οι τοπικοί κανονισμοί σχετικά με την απόρριψη του εξοπλισμού. Απόρριψη του προϊόντος Κατά την απόσυρση του προϊόντος, τα διάφορα υλικά πρέπει να διαχωρίζονται και να ανακυκλώνονται σύμφωνα με τους εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς. Ανακύκλωση επικίνδυνων ουσιών Το ÄKTAoligopilot plus περιέχει επικίνδυνες ουσίες. Λεπτομερείς πληροφορίες παρέχονται από τον αντιπρόσωπο της GE Healthcare. Απόρριψη ηλεκτρικών εξαρτημάτων Ο απορριπτόμενος ηλεκτρικός και ηλεκτρονικός εξοπλισμός δεν πρέπει να απορρίπτεται μαζί με τα κοινά αστικά απόβλητα και πρέπει να συλλέγεται ξεχωριστά. Επικοινωνήστε με έναν εξουσιοδοτημένο αντιπρόσωπο του κατασκευαστή για πληροφορίες σχετικά με την απόσυρση του εξοπλισμού. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 33

34 3 Περιγραφή συστήματος 3 Περιγραφή συστήματος Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό παρέχει μια επισκόπηση τουäktaoligopilot plus και μια σύντομη περιγραφή της λειτουργίας του. Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα 3.1 Επισκόπηση συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος 3.3 Λογισμικό ελέγχου Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

35 3 Περιγραφή συστήματος 3.1 Επισκόπηση συστήματος 3.1 Επισκόπηση συστήματος Βασικά εξαρτήματα του οργάνου Το ÄKTAoligopilot plus είναι ένα πλήρως αυτοματοποιημένο σύστημα που προορίζεται για τη σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίων DNA και RNA. Εξάρτημα Λειτουργία Box 900 Συσκευή παρακολούθησης ph/c-900 Συσκευή παρακολούθησης UV-900 Αντλία P-900 (P-901, εναλλακτικά P-903) Διακόπτης Power Μετρητές πίεσης Βαλβίδα εξαγωγής στήλης, V7 (INV-908) ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 35

36 3 Περιγραφή συστήματος 3.1 Επισκόπηση συστήματος Εξάρτημα Λειτουργία Στήλη (αντιδραστήρας) και συγκρατητήρας στήλης Ολισθητήρες φιαλών αμιδιτών Βαλβίδα εισαγωγής στήλης, V6 (INV-908) Ηλεκτρικές συνδέσεις και συνδέσεις επικοινωνίας Αρ. 1 Περιγραφή Σύνδεσμος UniNet-1 36 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

37 3 Περιγραφή συστήματος 3.1 Επισκόπηση συστήματος Αρ Περιγραφή Είσοδος τροφοδοσίας κεντρικού δικτύου Έξοδος τροφοδοσίας κεντρικού δικτύου Καλώδιο τροφοδοσίας Τροφοδοτικό για CU-950 Σύνδεση καλωδίου USB με υπολογιστή CU-950 Καλώδιο UniNet-1 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 37

38 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Σε αυτή την ενότητα περιγράφονται τα διαφορετικά στοιχεία του ÄKTAoligopilot plus. Στην παρούσα ενότητα Ενότητα Αντλίες P Βαλβίδες Συσκευές παρακολούθησης Περιοριστής ροής FR Παροχή αδρανούς αερίου Εξαρτήματα Στήλες και αντιδραστήρες Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

39 3.2.1 Αντλίες P Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Αντλίες P-900 Οι αντλίες P-900 είναι εργαστηριακές αντλίες υψηλής απόδοσης για χρήση όταν απαιτείται ο ακριβής έλεγχος της ροής υγρού. Οι αντλίες είναι εξοπλισμένες με 2 μονάδες αντλιών, κάθε μία από τις οποίες περιέχει δύο πιστόνια. Οι μονάδες αντλιών μπορούν να λειτουργήσουν ανεξάρτητα. Ένας αισθητήρας πίεσης είναι συνδεδεμένος με μία από τις κεφαλές αντλιών. Ένας σύνδεσμος σχήματος Y συνδέει τον αισθητήρα πίεσης με την άλλη κεφαλή αντλίας. Η μέγιστη ικανότητα ροής της αντλίας που είναι εγκατεστημένη στο ÄKTAoligopilot plus είναι είτε 10 ml (μοντέλο P-903) είτε 100 ml (μοντέλο P-901) ανά κεφαλή αντλίας. Σημείωση: Όταν χρησιμοποιείται στο ÄKTAoligopilot plus 10 ή στο ÄKTAoligopilot plus 100, το όριο πίεσης της αντλίας ρυθμίζεται σε 0 έως 20 bar. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 39

40 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Βαλβίδες Βαλβίδες Βαλβίδα IV-908 Η βαλβίδα IV-908 είναι μια μηχανοκίνητη 8-δρομη βαλβίδα που επιτρέπει υψηλούς ρυθμούς ροής σε πίεση επιστροφής μέχρι 20 bar. Η βαλβίδα IV-908 χρησιμοποιείται για τη διανομή αντιδραστηρίου, την επιλογή στήλης και την παράκαμψη στήλης, και τα απόβλητα. Όλοι οι σύνδεσμοι έχουν σπειρώματα 5/ ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

41 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Βαλβίδες Βαλβίδα 8 Η βαλβίδα 8 είναι μια βαλβίδα επιλογέα αποβλήτων για το διαχωρισμό χλωριωμένων υδρογονανθράκων από άλλα απόβλητα. Ο διαχωρισμός ελέγχεται αυτόματα από τις μεθόδους σύνθεσης. Ο επιλογέας αποβλήτων (βλ. παρακάτω εικόνα) μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί, για παράδειγμα, για το διαχωρισμό του πλεονάσματος αμιδιτών από μια σύζευξη. Βαλβίδα INV-907H Η βαλβίδα INV-907H είναι μια μηχανοκίνητη 7-δρομη βαλβίδα που επιτρέπει υψηλούς ρυθμούς ροής σε πίεση επιστροφής μέχρι 20 bar. Οι σύνδεσμοι έχουν σπειρώματα 5/16. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 41

42 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Βαλβίδες Το ÄKTAoligopilot plus περιέχει μία βαλβίδα INV-907 ως βαλβίδα ανακυκλοφορίας. Η θέση 1 είναι η θέση συνεχούς ροής και η θέση 2 είναι η θέση ανακυκλοφορίας. Η θέση 3 δεν χρησιμοποιείται. Θύρα Θύρα 1 Θύρα 2 Θύρα 3 Θύρα 4 Θύρα 5 Θύρα 6 Θύρα 7 Σύνδεση προς βαλβίδα 4 πώμα αναστολής (δεν χρησιμοποιείται) πώμα αναστολής (δεν χρησιμοποιείται) προς βαλβίδα αποβλήτων πώμα αναστολής (δεν χρησιμοποιείται) προς βαλβίδα στήλης 7 προς αντλία 8 Θέση βαλβίδας 1 (συνεχής ροή) Θύρα Βαλβίδα 4 Στήλη Σύνδεση Συνεχής ροή προς αντλία B Συνεχής ροή προς απόβλητα Θέση βαλβίδας 2 (ανακυκλοφορία) Θύρα Αντλία B Σύνδεση Ανακυκλοφορία προς στήλη 42 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

43 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Συσκευές παρακολούθησης Συσκευές παρακολούθησης Συσκευή παρακολούθησης ph/cond-900 Η συσκευή παρακολούθησης ph/c-900 είναι μια συνδυασμένη συσκευή παρακολούθησης για ακριβή, παρακολούθηση on-line της αγωγιμότητας και θερμοκρασίας. Η λειτουργικότητα ph δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για εφαρμογές σύνθεσης. Η ακριβής απόκριση της συσκευής παρακολούθησης, μαζί με την υψηλή ακρίβεια σε ένα μεγάλο εύρος μέτρησης, την καθιστά ιδανική για οποιαδήποτε εφαρμογή σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων. Η συσκευή παρακολούθησης ph/c-900 αποτελείται από μια μονάδα ελέγχου και μια κυψελίδα ροής για αγωγιμότητα και θερμοκρασία. Η κυψελίδα ροής για αγωγιμότητα (βλ. παρακάτω εικόνα) εγκαθίσταται στο βρόχο ανακυκλοφορίας στήλης και μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση και παρακολούθηση της προσθήκης αμιδιτών στα βήματα σύζευξης και ανακυκλοφορίας. UV-900 Η συσκευή παρακολούθησης UV-900 είναι ένας ανιχνευτής UV-Vis πολλαπλών μηκών κύματος. Ο ανιχνευτής χρησιμοποιεί προηγμένη τεχνολογία οπτικών ινών και έχει την ικανότητα να παρακολουθεί ταυτόχρονα τρία μήκη κύματος στο εύρος 190 έως 700 nm. Το μήκος κύματος μπορεί να μεταβληθεί από το λογισμικό UNICORN κατά τη διάρκεια μιας ανάλυσης, είτε μέσω μεθόδων είτε με χειροκίνητες εντολές. Η συσκευή παρακολούθησης αποτελείται από μια κύρια μονάδα, οπτικές ίνες και μια κυψελίδα ροής (βλ. παρακάτω εικόνα) με μήκος οπτικής διαδρομής 2 mm και εσωτερικό όγκο 2 µl. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 43

44 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Συσκευές παρακολούθησης Σε εφαρμογές ÄKTAoligopilot plus χρησιμοποιούνται μήκη κύματος 254 nm έως 700 nm, τα οποία επιτρέπουν τη χρήση χαμηλής έντασης της λάμπας. Η χαμηλή ένταση αυξάνει τη διάρκεια ζωής της λάμπας. Ο συνδυασμός των οπτικών ινών και του μοναδικού σχεδιασμού της κυψελίδας ροής εξασφαλίζει έναν υψηλό λόγο σήματος προς θόρυβο με ελάχιστες επιδράσεις στη μετατόπιση και το δείκτη διάθλασης. Σημείωση: Ο ανιχνευτής πρέπει να μηδενίζεται για κάθε μήκος κύματος που χρησιμοποιείται σε ανάλυση μεθόδου. Αυτό μπορεί να γίνει σε οποιοδήποτε σημείο πριν τη χρήση του μήκους κύματος (π.χ. στην αρχή της ανάλυσης σύνθεσης). 44 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

45 3.2.4 Περιοριστής ροής FR Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Περιοριστής ροής FR-902 Ο περιοριστής ροής FR-902 δημιουργεί μια σταθερή πίεση επιστροφής, ώστε να αποφευχθεί ο σχηματισμός φυσαλίδων αέρα μετά τη στήλη στις κυψελίδες ροής. Ο περιοριστής ροής FR-902 εξυπηρετεί επίσης για να διατηρεί μια ομοιόμορφη διανομή των αντιδραστηρίων εντός της στήλης. Ο περιοριστής ροής ρυθμίζεται στα 2 bar στο εργοστάσιο. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 45

46 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Παροχή αδρανούς αερίου Παροχή αδρανούς αερίου Το προστατευτικό αδρανές αέριο χρησιμοποιείται για να εξασφαλιστεί ένα περιβάλλον χωρίς νερό για τα αντιδραστήρια. Το αέριο διανέμεται από μια εξωτερική γραμμή παροχής αερίου με ρυθμιστή προς τον έλεγχο αερίου του οργάνου. Το αέριο διανέμεται στις φιάλες αντιδραστηρίων μέσω δύο εσωτερικών ρυθμιστών αερίου και δύο πολλαπλών αερίου. Το σύστημα ελέγχου αερίου επιτρέπει την ακριβή ρύθμιση της πίεσης αδρανούς αερίου στα 0,30 έως 0,35 bar, με πίεση εισόδου της γραμμής παροχής αερίου 0,45 έως 0,50 bar, με μέγιστη πίεση 0,5 bar. Σημείωση: Εάν χρησιμοποιείτε ξεχωριστό σύστημα ελέγχου για τις εξωτερικές δεξαμενές, π.χ. μεγάλες δεξαμενές ακετονιτριλίου ή αποτριτυλίωσης, φροντίστε να ρυθμίσετε την πίεση ώστε να αντιστοιχεί με αυτή στο ÄKTAoligopilot plus. Αυτό εξασφαλίζει ότι η πίεση αερίου είναι ίδια σε όλες τις φιάλες και τα δοχεία. Το αδρανές αέριο διανέμεται μέσω δύο πολλαπλών (βλ. παρακάτω), εξοπλισμένων με κομβία προσαρμογής του ρυθμιστή αερίου. Οι πολλαπλές είναι εξοπλισμένες με βαλβίδες εκτόνωσης στα 0,5 bar. 46 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

47 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Παροχή αδρανούς αερίου Ο ενεργοποιητής και οι φιάλες θειολίωσης είναι συνδεδεμένα με έναν σύνδεσμο σχήματος Y (σωλήνας επισημασμένος με πράσινο χρώμα) και οι φιάλες αμιδιτών τροφοδοτούνται από τη δεξιά πολλαπλή, μανόμετρο Manifold 2. Τα αντιδραστήρια ακετονιτριλίου, οξείδωσης, κάλυψης, θειολίωσης, αποτριτυλίωσης, κτλ. τροφοδοτούνται από την αριστερή πολλαπλή, μανόμετρο Manifold 1. Τα μανόμετρα απεικονίζονται στην παρακάτω εικόνα. Συστάσεις αδρανούς αερίου ΠΡΟΣΟΧΗ Επιτρέπεται η χρήση ηλίου ως αδρανούς αερίου, αλλά δεν συνιστάται. Το ήλιο εξέρχεται από κάθε ανοικτό δοχείο. Αυτό αυξάνει τον κίνδυνο να εισχωρήσει αέρας και υγρασία στη φιάλη, μειώνοντας την αποτελεσματικότητα του αδρανούς αερίου. Τα συνιστώμενα προστατευτικά αδρανή αέρια είναι εξαιρετικά ξηρό αργό και άζωτο υψηλής ποιότητας. Το αργό είναι βαρύτερο από τον αέρα και σχηματίζει ένα προστατευτικό στρώμα, εμποδίζοντας την εισχώρηση της υγρασίας από τον αέρα μέσα στα αντιδραστήρια. Το άζωτο είναι μια λιγότερο δαπανηρή εναλλακτική λύση και λίγο ελαφρύτερο από τον αέρα, αλλά έχει την ικανότητα να προστατεύει επαρκώς τα αντιδραστήρια. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 47

48 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Παροχή αδρανούς αερίου Ρυθμιστής αερίου αργού Στη γωνία του συστήματος υπάρχει ένας ρυθμιστής και ένα μανόμετρο αερίου αργού. Ο ρυθμιστής πρέπει να οριστεί στα 0,3 bar. Δημιουργεί χαμηλή υπερπίεση στις φιάλες αντιδραστηρίων, ώστε να αποφευχθεί η είσοδος αέρα/νερού. Επίσης, η πίεση του αερίου αργού δημιουργεί θετική πίεση στις εισόδους, ώστε να επιτευχθεί σταθερός ρυθμός ροής από τις αντλίες. Πρέπει να υπάρχει ίδια πίεση σε όλες τις φιάλες αντιδραστηρίων, ώστε οι αντλίες να παρέχουν το ρυθμό ροής που έχει καθοριστεί στη μέθοδο. Εάν η πίεση στις φιάλες είναι πολύ χαμηλή, μπορεί να προκληθεί σπηλαίωση. Εάν η πίεση είναι πολύ υψηλή, ο ρυθμός ροής μπορεί να είναι υψηλότερος από τον προγραμματισμένο στη μέθοδο σύνθεσης. 48 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

49 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Εξαρτήματα Εξαρτήματα Πώματα φιαλών και σύνδεσμοι Τα ειδικά πώματα φιαλών εξασφαλίζουν στεγανή σφράγιση και προστατεύουν τα αντιδραστήρια από την υγρασία. Τα πώματα φιαλών έχουν τρεις ξεχωριστούς συνδέσμους σωλήνα για τη διανομή των διαλυτών και έναν για το αδρανές αέριο. Τα πώματα φιαλών είναι σχεδιασμένα για να προσαρμόζονται στις τυπικές φιάλες Schott, Duran και Pyrex με σπείρωμα GL-45. ΠΡΟΣΟΧΗ Αφαιρέστε τυχόν δακτύλιο ροής από τη φιάλη πριν τοποθετήσετε το πώμα φιάλης, διαφορετικά θα καταστραφεί η σφράγιση, αυξάνοντας τον κίνδυνο για διαρροή αερίου. Σύνδεσμοι και σωλήνας Στο ÄKTAoligopilot plus χρησιμοποιείται φθοριωμένος πλαστικός σωλήνας, ανθεκτικός στο διαλύτη, για τη διανομή αδρανούς αερίου και τη διανομή αντιδραστηρίου/διαλύτη. Ο σωλήνας είναι βελτιστοποιημένος ως προς το μήκος και τη διάμετρο. Για να συνδέσετε νέα πώματα φιαλών, απαιτούνται τα ακόλουθα αντικείμενα: Σωλήνας διαλύτη - Σωλήνας PEEK ή FEP - 3 κατάλληλοι σύνδεσμοι σωλήνα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 49

50 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Εξαρτήματα - κρίκοι για τους συνδέσμους σωλήνα, για τη σύνδεση της βαλβίδας αμιδιτών ή του πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων με το φίλτρο εισόδου Σωλήνας αδρανούς αερίου - Σωλήνας ETFE ή FEP - 2 κατάλληλοι σύνδεσμοι σωλήνα - κρίκοι για τους συνδέσμους σωλήνα, για τη σύνδεση στην πολλαπλή αερίου αμιδιτών ή στον πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων Πίνακας 3.1: Προδιαγραφές σωλήνα Επισήμανση συνδέσμου σωλήνα 1A 1B 2 G Τύπος σωλήνα Σωλήνας διαλύτη Σωλήνας διαλύτη Σωλήνας διαλύτη ή αμιδιτών Σωλήνας αδρανούς αερίου Εξωτερική διάμετρος σωλήνα 3/16" 3/16" 1/16" ή 1/8" 1/16" ή 1/8" Σημείωση: Οι μη χρησιμοποιημένοι σύνδεσμοι πρέπει να εξοπλιστούν με πώμα αναστολής 3/16" και να σφιχτούν επαρκώς για να αποφευχθεί η διαρροή του αδρανούς αερίου από τη φιάλη. Για τις πλήρεις προδιαγραφές σωλήνα, βλ. Παράρτημα B Σωλήνες, στη σελίδα 171. Για πληροφορίες σχετικά με την παραγγελία ανταλλακτικού σωλήνα, βλ. Ενότητα 11.3 Πληροφορίες παραγγελίας, στη σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

51 Ελεγκτής CU Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Εξαρτήματα Ο ελεγκτής CU-950 είναι μια εξωτερική μονάδα ελεγκτή που είναι συνδεδεμένη με τον υπολογιστή και το σύστημα ÄKTAoligopilot plus. Στην ακόλουθη εικόνα απεικονίζονται ο μπροστινός και ο πίσω πίνακας της μονάδας CU-950. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 51

52 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Εξαρτήματα Ολισθητήρας φιάλης αμιδιτών Το τυπικό ÄKTAoligopilot plus παρέχεται με οκτώ ολισθητήρες φιαλών αμιδιτών. Κάθε ολισθητήρας μπορεί να συγκρατήσει μια τυπική φιάλη 100 ml. Μπορούν να συμπεριληφθούν τέσσερις επιπρόσθετοι ολισθητήρες. Βλ. Σύνδεση του ολισθητήρα φιάλης αμιδίτη, στη σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

53 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Στήλες και αντιδραστήρες Στήλες και αντιδραστήρες Αντιδραστήρας στήλης Ο αντιδραστήρας στήλης συγκρατεί τον στερεό φορέα στον οποίο εκτελείται η σύνθεση. Αφού ολοκληρωθεί η σύνθεση, η στήλη αφαιρείται από το ÄKTAoligopilot plus και ο φορέας υπόκειται σε επεξεργασία ξεχωριστά για να ανακτηθεί το προϊόν ολιγονουκλεοτιδίων. Οι αντιδραστήρες στήλης έχουν κατασκευαστεί από ανοξείδωτο χάλυβα, με μέγεθος πόρων υαλώδους φίλτρου 20 μm. 48 ml 24 ml 12 ml 6,3 ml 1,2 ml Δεδομένα αντιδραστήρα στήλης Αντιδραστήρας στήλης Ακριβής όγκος (ml) Εσωτερική διάμετρος (mm) Ύψος (mm) 1,2 ml 1, ,3 ml 6, ml 12, ml 24, ml 48, ,6 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 53

54 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Στήλες και αντιδραστήρες Συγκρατητήρες αντιδραστήρα στήλης Ο αντιδραστήρας στήλης είναι προσαρμοσμένος σε έναν συγκρατητήρα στήλης, κατάλληλο για αντιδραστήρες στήλης με όγκο 1,2 έως 48 ml. Ο συγκρατητήρας στήλης παρέχεται μόνο με το ÄKTAoligopilot plus 100 και αποτελεί απαραίτητο παρελκόμενο για τη χρήση των στηλών 1,2 ml με το ÄKTAoligopilot plus ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

55 FineLINE 35 oligo column 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Στήλες και αντιδραστήρες Το FineLINE 35 oligo είναι μια στήλη σύνθεσης που κατασκευάζεται από ανοξείδωτο χάλυβα, με μέγεθος πόρων υαλώδους φίλτρου 20 μmn. Η στήλη προορίζεται για την ανάπτυξη μεθόδων σε πιλοτική κλίμακα ή για την παραγωγή ολιγονουκλεοτιδίων σε μικρή κλίμακα. Η στήλη είναι κατάλληλη για όγκους στήλης 10 έως 100 ml. Το εύρος στήλης εξαρτάται από τη φόρτωση του φορέα. Η στήλη έχει υδραυλικά ρυθμιζόμενο προσαρμογέα. Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. FineLINE 35 oligo column Operating Instructions, αριθμός προϊόντος ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 55

56 3 Περιγραφή συστήματος 3.2 Στοιχεία συστήματος Στήλες και αντιδραστήρες Adjustable oligo column Η ρυθμιζόμενη στήλη ολιγονουκλεοτιδίων είναι κατάλληλη για όγκους στήλης 30 έως 200 ml. Η στήλη αυτή κατασκευάζεται από τιτάνιο, με μέγεθος πόρων υαλώδους φίλτρου 20 μm. Η στήλη προορίζεται για την ανάπτυξη μεθόδων σε πιλοτική κλίμακα ή για την παραγωγή ολιγονουκλεοτιδίων σε μικρή κλίμακα χρησιμοποιώντας Primer Support. Για περισσότερες πληροφορίες, δείτε Adjustable Oligo Column User Manual, αριθμός προϊόντος ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

57 3 Περιγραφή συστήματος 3.3 Λογισμικό ελέγχου 3.3 Λογισμικό ελέγχου Λογισμικό ελέγχου UNICORN Το ÄKTAoligopilot plus ελέγχεται από το λογισμικό UNICORN. Το UNICORN είναι ένα ολοκληρωμένο πακέτο για τον έλεγχο και την επίβλεψη των συστημάτων χρωματογραφίας/ολιγονουκλεοτιδίων. Αποτελείται από λογισμικό ελέγχου και κάρτα ελεγκτή ή μονάδα για τη διασύνδεση του υπολογιστή ελέγχου με τη μονάδα χειρισμού του υγρού χρωματογραφίας. Το λογισμικό λειτουργεί με τη χρήση του λειτουργικού συστήματος Microsoft Windows. Το UNICORN παρέχεται με διάφορα έτοιμα για χρήση πρότυπα μεθόδων που διευκολύνουν την εύκολη δημιουργία μεθόδων σύνθεσης. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με το σύστημα ελέγχου UNICORN, δείτε τα εγχειρίδια χρήστη που συνοδεύουν το UNICORN. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 57

58 4 Εγκατάσταση 4 Εγκατάσταση Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό παρέχει στους χρήστες και στο προσωπικό συντήρησης τις απαιτούμενες πληροφορίες για την αποσυσκευασία, την εγκατάσταση, τη μετακίνηση και τη μεταφορά του συστήματος ÄKTAoligopilot plus. Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα 4.1 Απαιτήσεις χώρου εγκατάστασης 4.2 Μεταφορά 4.3 Αποσυσκευασία 4.4 Συναρμολόγηση 4.5 Συνδέσεις 4.6 Ανταλλακτικά και εξαρτήματα Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

59 4 Εγκατάσταση 4.1 Απαιτήσεις χώρου εγκατάστασης 4.1 Απαιτήσεις χώρου εγκατάστασης Παράμετρος Επιτρεπόμενος χώρος Υψόμετρο, λειτουργία Τοποθέτηση Ηλεκτρική τροφοδοσία Μεταβατική υπέρταση Θερμοκρασία περιβάλλοντος Υγρασία Ατμοσφαιρική πίεση Βαθμός ρύπανσης προοριζόμενου περιβάλλοντος Απαιτήσεις Χρήση σε εσωτερικούς χώρους Μέγιστο 2000 m Σταθερός πάγκος εργαστηρίου, τουλάχιστον 200 x 80 cm / V AC ±10%, 50 έως 60 Hz Κατηγορία υπέρτασης II 4 C έως 40 C 20% έως 95%, χωρίς συμπύκνωση υδρατμών 840 έως 1060 mbar (84 έως 106 kpa) 2 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 59

60 4 Εγκατάσταση 4.2 Μεταφορά 4.2 Μεταφορά Ο εξοπλισμός ζυγίζει 63 kg και απαιτούνται τουλάχιστον τρία άτομα για την ανύψωση και τη μετακίνησή του, εκτός εάν χρησιμοποιείται κατάλληλο ανυψωτικό. Ο εξοπλισμός μπορεί να μεταφερθεί χρησιμοποιώντας κατάλληλο καρότσι για βάρος τουλάχιστον 80 kg. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Η ανύψωση του οργάνου πρέπει να γίνεται σε όρθια θέση. Μη χρησιμοποιείτε τη ράβδο του μπροστινού πίνακα ως λαβή ανύψωσης. Πριν από τη μετακίνηση του συστήματος Βήμα Ενέργεια Εκκινήστε το πρότυπο μεθόδου τερματισμού λειτουργίας Εκπλύνετε το σύστημα με ακετονιτρίλιο Αδειάστε το σύστημα χρησιμοποιώντας αδρανές αέριο Αποσυνδέστε όλα τα καλώδια και τους σωλήνες που είναι συνδεδεμένοι σε περιφερειακά εξαρτήματα και δοχεία υγρών Κλείστε εντελώς την πόρτα Μετακίνηση του συστήματος ΠΡΟΣΟΧΗ Βαρύ αντικείμενο. Χρησιμοποιείτε κατάλληλο ανυψωτικό εξοπλισμό κατά τη μετακίνηση των συστημάτων. Για την ανύψωση του συστήματος με ασφάλεια απαιτούνται τρία άτομα. Κρατήστε σταθερά το σύστημα τοποθετώντας τα δάχτυλά σας στο κενό ανάμεσα στην περιστρεφόμενη πλατφόρμα και τη βάση της κύριας μονάδας και ανασηκώστε το. 60 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

61 4 Εγκατάσταση 4.2 Μεταφορά ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 61

62 4 Εγκατάσταση 4.3 Αποσυσκευασία 4.3 Αποσυσκευασία Έλεγχος για φθορές Ελέγξτε τον εξοπλισμό για ζημιές προτού αρχίσετε τη συναρμολόγηση και την εγκατάσταση. Δεν υπάρχουν ελεύθερα εξαρτήματα στο κιβώτιο μεταφοράς. Όλα τα εξαρτήματα είναι είτε προσαρτημένα στο σύστημα είτε μέσα στο κουτί του κιτ βοηθητικών εξαρτημάτων. Εάν εντοπίσετε φθορές, καταγράψτε τις και επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της GE Healthcare. Αφαίρεση συστήματος από τη συσκευασία Αφαιρέστε τους ιμάντες και τα υλικά συσκευασίας. Στη συνέχεια, τοποθετήστε τον εξοπλισμό σε όρθια θέση πάνω στην περιστρεφόμενη βάση πριν ξεκινήσετε την εγκατάσταση. 62 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

63 4 Εγκατάσταση 4.4 Συναρμολόγηση 4.4 Συναρμολόγηση Τα παρακάτω εξαρτήματα πρέπει να συνδεθούν στο όργανο ÄKTAoligopilot plus πριν από τη χρήση του: Δοχείο αποβλήτων Η μονάδα ελέγχου CU-950 που είναι συνδεδεμένη μεταξύ του υπολογιστή και του συστήματος ÄKTAoligopilot plus. Ολισθητήρες φιαλών αμιδιτών Πώματα για φιάλες αντιδραστηρίων ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 63

64 4 Εγκατάσταση 4.5 Συνδέσεις 4.5 Συνδέσεις Επικοινωνία Συνδέστε το δίκτυο, τα καλώδια σήματος και τον υπολογιστή σύμφωνα με τα ηλεκτρολογικά διαγράμματα στην ενότητα Ηλεκτρικές συνδέσεις και συνδέσεις επικοινωνίας, στη σελίδα 36. Βεβαιωθείτε ότι το λογισμικό ελέγχου UNICORN έχει εγκατασταθεί στον υπολογιστή. Εγκατάσταση μονάδας ελεγκτή CU-950 Αναρτήστε τη μονάδα CU-950 στην αριστερή πλευρά του συστήματος τοποθετώντας τα άγκιστρα στην μπροστινή πλευρά της μονάδας CU-950 στην εγκοπή στο πλαϊνό τμήμα της μονάδας UV-900 και περιστρέψτε τα για να τοποθετηθούν στη θέση τους. Συνδέστε τη μονάδα σύμφωνα με το διάγραμμα στην ενότητα Ηλεκτρικές συνδέσεις και συνδέσεις επικοινωνίας, στη σελίδα 36 Ηλεκτρική τροφοδοσία Συνδέστε το καλώδιο τροφοδοσίας σε γειωμένη πρίζα, όπως καθορίζεται στην Ενότητα 4.1 Απαιτήσεις χώρου εγκατάστασης, στη σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

65 4 Εγκατάσταση 4.6 Ανταλλακτικά και εξαρτήματα 4.6 Ανταλλακτικά και εξαρτήματα Η συντήρηση και η προληπτική αντικατάσταση ανταλλακτικών των άλλων κύριων στοιχείων περιγράφεται στα αντίστοιχα εγχειρίδια που περιλαμβάνονται στην τεκμηρίωση του συστήματος. Το πληροφοριακό υλικό του συστήματος περιλαμβάνει επίσης κατάλογο ανταλλακτικών για τον εντοπισμό συνήθων ανταλλακτικών και των κωδικών τους αριθμών για παραγγελία. H λίστα αυτή διατίθεται επίσης online, στη διεύθυνση ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 65

66 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Αυτό το κεφάλαιο περιέχει πληροφορίες σχετικά με την επαλήθευση της εγκατάστασης. Για οδηγίες σχετικά με την εγκατάσταση, δείτε τις οδηγίες λειτουργίας για το ÄKTAoligopilot plus. Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης 5.2 Σύνθεση επαλήθευσης 5.3 Επανεγκατάσταση του συστήματος Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

67 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης Σκοπός της δοκιμής εγκατάστασης Η δοκιμή εγκατάστασης έχει σχεδιαστεί ως προκαταρκτική δοκιμή της λειτουργίας ÄKTAoligopilot plus, αλλά αυτή η δοκιμή μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την περιοδική δοκιμή του συστήματος διανομής διαλύτη και της συσκευής παρακολούθησης UV στο ÄKTAoligopilot plus. Σημείωση: Η συσκευή παρακολούθησης UV ελέγχεται με τη μέτρηση της απόκρισης UV στα 254 nm, χρησιμοποιώντας ένα διάλυμα 0,2 % τολουολίου ή 1 % ακετόνης διαλυμένο σε ακετονιτρίλιο. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Να φοράτε πάντα προστατευτικά γυαλιά και να χρησιμοποιείτε προστατευτικά γάντια ανθεκτικά στο ακετονιτρίλιο. Σύνοψη δοκιμής εγκατάστασης Η δοκιμή εγκατάστασης εκτελείται σε 7 βήματα. Κάθε βήμα περιγράφεται με λεπτομέρεια στο ακόλουθο κείμενο. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Πριν από την εκκίνηση του συστήματος, βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει διαρροή. Βαθμίδα Περιγραφή Προετοιμάστε το ÄKTAoligopilot plus Προετοιμάστε το σύστημα για δοκιμή εγκατάστασης Καθαρίστε την αντλία P-900 Εκτελέστε πλήρωση στο σύστημα έκπλυσης σφράγισης πιστονιού της αντλίας P-900 Ελέγξτε τη σταθερότητα πίεσης Εκτελέστε τη μέθοδο δοκιμής εγκατάστασης Αξιολογήστε τα αποτελέσματα της δοκιμής εγκατάστασης ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 67

68 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης Διαμόρφωση συστήματος Βήμα Ενέργεια Ενεργοποιήστε τη μονάδα συστήματος χρησιμοποιώντας το διακόπτη Power που βρίσκεται αριστερά της πλατφόρμας βάσης. Ενεργοποιήστε τον υπολογιστή, την οθόνη και τον εκτυπωτή σύμφωνα με τις οδηγίες στα εγχειρίδια κατασκευαστή. Συνδεθείτε στα Windows. Όταν εμφανιστεί η επιφάνεια εργασίας Windows, εκκινήστε το UNICORN κάνοντας διπλό κλικ στο εικονίδιο UNICORN. Επιλέξτε το χρήστη default και εισαγάγετε το default ως κωδικό πρόσβασης. Κάντε κλικ στο OK. Κάντε κλικ στο εικονίδιο ελέγχου συστήματος στη γραμμή εργασιών. Προετοιμάστε το σύστημα για δοκιμή εγκατάστασης Βήμα Ενέργεια Ανοίξτε την κεντρική βαλβίδα στη φιάλη αδρανούς αερίου και ρυθμίστε την πίεση εξόδου στα 0,5 bar (7 psi) στο ρυθμιστή αδρανούς αερίου. Σημείωση: Εκτελέστε γρήγορα τα ακόλουθα βήματα προκειμένου να ελαχιστοποιήσετε την απώλεια αερίου. Χωρίς να υπάρχουν φιάλες συνδεδεμένες στο όργανο, προσαρμόστε το ρυθμιστή αερίου ÄKTAoligopilot plus στα 0,30-0,35 bar. Θα πρέπει να εξέρχεται αέριο από τις γραμμές αέριων αμιδιτών και από τις γραμμές αέριων αντιδραστηρίων. Συνδέστε τις φιάλες αντιδραστηρίων ή ακετονιτριλίου με τον πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων όπως περιγράφεται στην παράγραφο Ενότητα 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων, στη σελίδα 93. Συνδέστε τις φιάλες ακετονιτριλίου με τους ολισθητήρες αμιδιτών. 68 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

69 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης Βήμα 5 Ενέργεια Συνδέστε μια φιάλη με 500 ml είτε 1% ακετόνης σε ακετονιτρίλιο, είτε 0,2% τολουολίου σε ακετονιτρίλιο στη θέση 13 (είσοδος αερίου) στον πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων. 6 7 Συνδέστε τη φιάλη με 1% ακετόνη ή 0,2% τολουόλιο, σε ακετονιτρίλιο στη θέση 14 (είσοδος αντιδραστηρίου) του πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων. Ελέγξτε ότι η πίεση του αδρανούς αερίου παραμένει στα 0,30-0,35 bar. Ρυθμίστε όπως απαιτείται. Καθαρίστε την αντλία P-900 Για οδηγίες δείτε την παράγραφο 9.4 Καθαρισμός της αντλίας P-900. Πλήρωση του συστήματος έκπλυσης σφράγισης πιστονιού της αντλίας P-900 Βήμα 1 Ενέργεια Συνδέστε το σωλήνα και τη βαλβίδα ελέγχου σύμφωνα με την παρακάτω εικόνα. Σημειώστε την κατεύθυνση ροής στη βαλβίδα αντεπιστροφής. 2 Βυθίστε το σωλήνα έκπλυσης (1) διαμέσου της μεμβράνης στο περικλειόμενο πώμα φιάλης μέσα σε ένα δοχείο (2) που περιέχει 100% ακετονιτρίλιο. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 69

70 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης Βήμα 3 Ενέργεια Συνδέστε μια σύριγγα με τους περικλειόμενους συνδέσμους στο σωλήνα έκπλυσης (3) που είναι συνδεδεμένος στην κάτω πλευρά της κεφαλής αριστερής αντλίας στην αντλία A (4). Αποστραγγίστε αργά 5-10 ml διαλύματος έκπλυσης μέσα στη σύριγγα. Σημείωση: Το υλικό στο εσωτερικό του luer προς τον θηλυκό προσαρμογέα 1/16" δεν είναι συμβατό με το ακετονιτρίλιο. Βεβαιωθείτε ότι η εμβύθιση συμβαίνει μόνο για πολύ σύντομες χρονικές περιόδους. 4 5 Αφαιρέστε τη σύριγγα και εισαγάγετε το σωλήνα (3) διαμέσου της μεμβράνης του πώματος φιάλης μέσα στη φιάλη. Βεβαιωθείτε ότι ο σωλήνας είναι περίπου 1 cm πάνω από την επιφάνεια του υγρού επειδή έτσι θα είναι πιο εύκολο να παρατηρηθεί εάν το σύστημα έκπλυσης λειτουργεί όπως αναμένεται κατά τη διάρκεια της σύνθεσης. Όταν η στάθμη υγρού/ακετονιτριλίου στη φιάλη είναι χαμηλή, προσθέστε διαλύτη μέχρι να είναι 1 cm κάτω από το σωλήνα 3. Πρέπει να αλλάζετε το διαλύτη όταν αποχρωματιστεί (καφέ, κίτρινο χρώμα). Εάν ο διαλύτης αποχρωματιστεί σε λιγότερο από μια εβδομάδα, μπορεί να χρειαστεί έλεγχος σέρβις και αντικατάσταση των σφραγίσεων της αντλίας. Ελέγξτε τη σταθερότητα πίεσης Εκτελέστε αυτή τη δοκιμή για να βεβαιωθείτε ότι όλος ο αέρας έχει εκκενωθεί από τις κεφαλές αντλίας. Βήμα 1 2 Ενέργεια Λειτουργήστε την αντλία A στα 10 ml/min. Ελέγξτε την οθόνη αντλίας για να δείτε εάν η ένδειξη πίεσης είναι σταθερή (διακύμανση < 1,0 bar). Εκτελέστε λειτουργία της αντλίας B στα 10 ml/min. Ελέγξτε την οθόνη αντλίας για να δείτε εάν η ένδειξη πίεσης είναι σταθερή (διακύμανση < 1,0 bar). Σημείωση: Ελέγξτε ότι δεν υπάρχουν διαρροές στην αντλία ή στους συνδέσμους. Εάν η πίεση είναι σταθερή, κάντε κλικ στο END και συνεχίστε με το επόμενο βήμα. Εάν η πίεση αυξομειώνεται υπερβολικά, προβείτε σε αντιμετώπιση προβλημάτων για την αντλία σύμφωνα με τις οδηγίες στο Pump P-900 User Manual. 70 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

71 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης Βήμα 3 Ενέργεια Βεβαιωθείτε ότι 500 ml οποιουδήποτε από τα ακόλουθα διαλύματα είναι συνδεδεμένο στη θέση 14 στον πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων: 1% ακετόνη σε ακετονιτρίλιο 0,2% τολουολίου σε ακετονιτρίλιο Εκτελέστε τη μέθοδο δοκιμής εγκατάστασης Βήμα Ενέργεια Στο UNICORN, επιλέξτε File:Printer setup... από τη γραμμή του βασικού μενού. Επιλέξτε τον επιθυμητό εκτυπωτή στη λίστα και επιλέξτε Landscape. Επιβεβαιώστε την επιλογή κάνοντας κλικ στο OK. Κάντε κλικ στο εικονίδιο Instant Run στο βασικό μενού. Επιλέξτε Installation test ÄKTAoligopilot plus 100 / ÄKTAoligopilot plus 10 στη λίστα προτύπων. Κάντε κλικ στο Run. Κάντε κλικ δύο φορές στο Next στο παράθυρο Method. Κάντε κλικ στο Start για να εκτελέσετε τη μέθοδο δοκιμής εγκατάστασης. Η μέθοδος εκτελείται για περίπου 20 λεπτά. Απόκρυψη πληροφοριών στο παράθυρο Curves Βήμα Ενέργεια Κάντε δεξί κλικ στο παράθυρο Curves και επιλέξτε Properties στο μενού περιβάλλοντος. Κάντε κλικ στην καρτέλα Curves. Επιλέξτε τις παρακάτω καμπύλες που θα εμφανίζονται: UV1_254nm Flow B Pressure ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 71

72 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης Βήμα 4 Ενέργεια Καταργήστε την επιλογή όλων των άλλων επισημασμένων καμπυλών. Οι καμπύλες μπορούν τώρα να παρακολουθούνται στην οθόνη καθώς εξελίσσεται η δοκιμή. Αξιολογήστε τα αποτελέσματα της δοκιμής εγκατάστασης Ακολουθήστε τις οδηγίες στον παρακάτω πίνακα για να εμφανίσετε τις καμπύλες από τη δοκιμή εγκατάστασης. Βήμα Ενέργεια Κάντε κλικ στο εικονίδιο βασικού μενού στη γραμμή εργασιών Windows. Κάντε κλικ στον πίνακα αποτελεσμάτων. Κάντε διπλό κλικ στο εικονίδιο Installation test ÄKTA oligopilot plus 100 / ÄKTA oligopilot plus 10 για να ανοίξετε το αρχείο αποτελεσμάτων. Κάντε κλικ στην άνω δεξιά γωνία για να μεγιστοποιήσετε το παράθυρο αποτελεσμάτων. Κάντε δεξί κλικ στο παράθυρο Curves και επιλέξτε Properties. Επιλέξτε τις καμπύλες για εμφάνιση όπως στην ακόλουθη εικόνα. 7 Κάντε κλικ στο OK. 72 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

73 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.1 Δοκιμή εγκατάστασης Έλεγχος της καμπύλης πίεσης Βήμα Ενέργεια Επιλέξτε την καμπύλη πίεσης και καταργήστε την επιλογή για όλες τις άλλες καμπύλες. Κάντε διπλό κλικ στο εικονίδιο XY στην άνω αριστερή γωνία. Εμφανίζεται η ένδειξη bar. Μετακινήστε το δρομέα και διαβάστε τις τιμές μετά από 4 λεπτά. Η αυξομείωση της πίεσης δεν πρέπει να είναι υψηλότερη από 1,0 bar. Λήψη και εκτύπωση του ποσοστού απόκρισης Βήμα 6 Ενέργεια Υπολογίστε το ποσοστό απόκρισης χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο πίνακα, ο οποίος περιέχει τις συνήθεις τιμές UV. Ποσοστιαία ροή αντλίας B UV 254 nm Υπολογισμός Ποσοστό / % / % / % / % / % 0 0 0/1117 0% 7 Σχεδιάστε τις τιμές UV βηματικά σε συνάρτηση με τη ροή B 100% έως 20%. 8 Κάντε κλικ στο Print για να λάβετε μια εκτυπωμένη αναφορά των αποτελεσμάτων. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 73

74 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.2 Σύνθεση επαλήθευσης 5.2 Σύνθεση επαλήθευσης Στην παρούσα ενότητα Σε αυτή την ενότητα παρέχονται πληροφορίες υπόβαθρου για τη σύνθεση επαλήθευσης. Τα αντιδραστήρια και ο χρόνος που απαιτείται για τη δημιουργία μιας αλληλουχίας Test13 περιγράφονται στην Ενότητα 6.3 Προετοιμασία για μια σύνθεση επαλήθευσης, στη σελίδα 87. Σκοπός της σύνθεσης επαλήθευσης Εκτελέστε τη σύνθεση επαλήθευσης ως μέρος της εγκατάστασης ή επανεγκατάστασης συστήματος καθώς και για να επαληθεύσετε ότι το σύστημα ÄKTAoligopilot plus λειτουργεί μετά από εργασίες αντιμετώπισης προβλημάτων. Η σύνθεση επαλήθευσης χρησιμοποιείται για να επαληθευτεί ότι: το σύστημα ÄKTAoligopilot plus είναι πλήρως λειτουργικό η μέθοδος σύνθεσης λειτουργεί τα απαιτούμενα αντιδραστήρια μπορούν να χρησιμοποιηθούν. Οδηγίες Για να εκτελέσετε μια σύνθεση επαλήθευσης, ακολουθήστε τις οδηγίες στις παραγράφους Κεφάλαιο 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση, στη σελίδα 78 και Κεφάλαιο 7 Λειτουργία, στη σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

75 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.3 Επανεγκατάσταση του συστήματος 5.3 Επανεγκατάσταση του συστήματος ΠΡΟΣΟΧΗ Βαρύ αντικείμενο. Η μονάδα οργάνου ζυγίζει 63 kg. Απαιτούνται δύο άτομα για να σηκώσουν το σύστημα με ασφάλεια. Προετοιμασίες χώρου εγκατάστασης Δημιουργήστε μια καθαρή και στεγνή περιοχή εργασίας 150 x 80 cm που επιτρέπει την εύκολη πρόσβαση και μετά ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες βήμα προς βήμα. Ελέγξτε ότι υπάρχει κοντινή επιτοίχια πρίζα με / V AC, Hz. Βεβαιωθείτε ότι η περιοχή εργασίας αερίζεται καλά, κατά προτίμηση με χοάνη απαγωγής αερίων, επειδή με το όργανο χρησιμοποιούνται οργανικοί διαλύτες. Σύνοψη επανεγκατάστασης Η επανεγκατάσταση πραγματοποιείται με τα ακόλουθα βήματα. Βήμα Ενέργεια Συνδέστε την παροχή αδρανούς αερίου. Συνδέστε τη στήλη και το σωλήνα αποβλήτων. Συνδέστε τις φιάλες αντιδραστηρίων. Συνδέστε φίλτρα στο σωλήνα. Σύνδεση της παροχής αδρανούς αερίου Βήμα 1 Ενέργεια Συνδέστε ένα ρυθμιστή αδρανούς αερίου, με σύνδεσμο εύκαμπτου σωλήνα 1/4, σε φιάλη αδρανούς αερίου. Σημείωση: Η παροχή αδρανούς αερίου δεν πρέπει να ξεπερνάει τα 0,5 bar (7 Psi). ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 75

76 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.3 Επανεγκατάσταση του συστήματος Βήμα 2 Ενέργεια Συνδέστε τη γραμμή εισόδου αερίου στο σύνδεσμο εύκαμπτου σωλήνα 1/4 και συνδέστε το άλλο άκρο (ταχείας σύνδεσης) στο ÄKTAoligopilot plus. Σύνδεση της στήλης και του σωλήνα αποβλήτων Βήμα Ενέργεια Εγκαταστήστε το συγκρατητήρα στήλης και τις απολήψεις αντιδραστηρίου στήλης. Συνδέστε δύο ενώσεις (θηλυκή 5/16 /αρσενική M6, ), μία στην πάνω απόληξη και μία στην κάτω απόληψη του αντιδραστήρα στήλης. Κόψτε δύο κομμάτια σωλήνα ETFE/PEEK με μήκος cm (εσωτερική διάμετρος 1,0 mm, εξωτερική διάμετρος 1/16, ). Συνδέστε ένα κομμάτι σωλήνα στη βαλβίδα 6 θέση 2 και στην πάνω απόληψη του αντιδραστήρα στήλης. Χρησιμοποιήστε συνδέσμους σωλήνα 1/16 ( ) και κρίκους 1/16 ( ). Συνδέστε το άλλο κομμάτι σωλήνα στη βαλβίδα 7 θέση 2 και στην κάτω απόληψη του αντιδραστήρα στήλης. Χρησιμοποιήστε συνδέσμους σωλήνα 1/16 ( ) και κρίκους 1/16 ( ). Συνδέστε το σωλήνα αποβλήτων (FEP, 2,9 mm I.D., 3/16 O.D., ) από τη βαλβίδα 8 θέση 1 και τη βαλβίδα 8 θέση 2. Το μήκος του σωλήνα δεν είναι κρίσιμης σημασίας. 76 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

77 5 Επαλήθευση εγκατάστασης και επανεγκατάσταση 5.3 Επανεγκατάσταση του συστήματος Σύνδεση των φιαλών αντιδραστηρίων Για ÄKTAoligopilot plus 10, ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες: Βήμα 1 2 Ενέργεια Συνδέστε το σωλήνα για τις φιάλες αντιδραστηρίων (σωλήνας FEP, 1,6 mm I.D., 1/8 O.D ( ) και το σωλήνα για το αέριο (σωλήνας ETFE, 1,0 mm I.D., 1/16 O.D., ). Για σωλήνα εξωτερικής διαμέτρου 1/8, χρησιμοποιήστε συνδέσμους σωλήνα 1/8 ( ) και κρίκους 3/16 ( ). Για σωλήνα 1/16, χρησιμοποιήστε συνδέσμους σωλήνα 1/16 ( ) και κρίκους 1/16 ( ). Συνδέστε το σωλήνα με τον πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων (βλ. Ενότητα 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων, στη σελίδα93) και σε πώμα φιάλης (πλήρες 4 x 5/16, ). Το μήκος του σωλήνα δεν είναι κρίσιμης σημασίας. Για ÄKTAoligopilot plus 100, ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες: Βήμα 1 2 Ενέργεια Συνδέστε το σωλήνα για τις φιάλες αντιδραστηρίων (σωλήνας FEP, 2,9 mm I.D., 3/16 O.D ( ) και το σωλήνα για το αέριο (σωλήνας ETFE, 1,0 mm I.D., 1/16 O.D., ). Για σωλήνα εξωτερικής διαμέτρου 3/16, χρησιμοποιήστε συνδέσμους σωλήνα 3/16 ( ) και κρίκους 3/16 ( ). Για σωλήνα 1/16, χρησιμοποιήστε συνδέσμους σωλήνα 1/16 ( ) και κρίκους 1/16 ( ). Συνδέστε το σωλήνα με τον πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων όπως περιγράφεται στην ενότητα Ενότητα 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων, στη σελίδα 93 και σε πώμα φιάλης (πλήρες 4 x 5/16, ). Το μήκος του σωλήνα δεν είναι κρίσιμης σημασίας. Σύνδεση φίλτρων στο σωλήνα Προσαρτήστε ένα φίλτρο (ή «υαλώδες φίλτρο») στο σωλήνα παροχής διαλύτη κάθε φιάλης. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 77

78 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Σε αυτό το κεφάλαιο περιγράφεται η τυπική προετοιμασία που απαιτείται πριν την εκτέλεση της σύνθεσης με το ÄKTAoligopilot plus. Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα 6.1 Απαιτούμενα στοιχεία 6.2 Προετοιμασία των διαλυμάτων 6.3 Προετοιμασία για μια σύνθεση επαλήθευσης 6.4 Προετοιμασία του αντιδραστήρα στήλης 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων 6.6 Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

79 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.1 Απαιτούμενα στοιχεία 6.1 Απαιτούμενα στοιχεία Αμιδίτες DNA (τυπικοί) Τα αντιδραστήρια και οι διαλύτες που απαιτούνται για μια φυσιολογική σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίων DNA παρατίθενται στον παρακάτω πίνακα. Επικοινωνήστε με το τοπικό γραφείο της GE Healthcare για πληροφορίες σχετικά με τις παραγγελίες ή επισκεφτείτε τη διεύθυνση ΠΡΟΣΟΧΗ Το τετραϋδροφουράνιο (THF) δεν είναι συμβατό με τις αντλίες των συστημάτων σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων της GE Healthcare και, συνεπώς, δεν πρέπει να χρησιμοποιείται στα συστήματα. Τα αντιδραστήρια που περιέχουν THF είναι συνήθως διαλύματα επικάλυψης και οξείδωσης. Σημείωση: Για καλύτερα αποτελέσματα, να χρησιμοποιείτε μόνο αντιδραστήρια που συνιστά η GE Healthcare. Αμιδίτες DNA (τυπικοί) 1 da-αμιδίτης Σημειώσεις Διαλυμένος σε ακετονιτρίλιο dc-αμιδίτης dg-αμιδίτης T-αμιδίτης Primer Support 5G Ένας φορέας για κάθε 3' νουκλεοτίδιο (A, G, C, T) 2 1 Στην πραγματικότητα μπορεί να χρησιμοποιηθεί και οποιοσδήποτε άλλος αμιδίτης. 2 Διατίθενται φορείς με άλλες βάσεις εκκίνησης. Αντιδραστήρια και διαλύτες Αντιδραστήρια Διάλυμα αποτριτυλίωσης Ακετονιτρίλιο (ACN) Ενεργοποιητής Σημειώσεις 3% διχλωροξικό οξύ σε τολουόλιο ξηρό, < 30 ppm νερού 0,3 M BTT σε ακετονιτρίλιο Για σύνθεση DNA, επαρκεί 0,25 M ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 79

80 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.1 Απαιτούμενα στοιχεία Αντιδραστήρια Κάλυψη A Κάλυψη B1 Καπάκι B2 Αντιδραστήρια οξείδωσης Αντιδραστήρια θειολίωσης Σημειώσεις N-μεθυλιμιδαζόλη 20% (κ.ό.) σε ACN Οξικός ανυδρίτης 40% (κ.ό.) σε ACN Sym-κολλιδίνη 60% (κ.ό.) σε ACN Ιώδιο 50 mm, σε 10% νερό/πυριδίνη Παραδείγματα: Beaucage (1,1-διοξείδιο 3H-1,2-βενζοδιθειολ-3- όνης) διαλυμένο σε ACN Δισουλφίδιο φαινυλακετυλίου (PADS) 3-αιθοξυ-1,2,3-διθειαζολιν-5-όνη (Edith) Σημείωση: Η χρήση Edith στις ΗΠΑ προστατεύεται από το δίπλωμα ευρεσιτεχνίας ΗΠΑ αρ. 5,852,168 και άδεια για τέτοια χρήση μπορεί να αναζητηθεί από το Πανεπιστήμιο της Μινεάπολις. Μοριακά κόσκινα Η GE Healthcare συνιστά τη χρήση μοριακών κόσκινων 3 Å στις φιάλες αμιδίτη, ενεργοποιητή και ακετονιτριλίου. Με τον τρόπο αυτό ελαχιστοποιείται ο κίνδυνος της ρύπανσης νερού και παρατείνεται ο χρόνος σταθερότητας κατά τον οποίο τα αντιδραστήρια και οι αμιδίτες είναι συνδεδεμένοι με το σύστημα. Συνιστώνται τα ακόλουθα μοριακά κόσκινα 3 Å: Μοριακά κόσκινα 3 Å, ράβδοι Μοριακά κόσκινα 3 Å, χάντρες 2 mm Μοριακά κόσκινα 3 Å, χάντρες 2 mm Σημείωση: Σημείωση: Μην επαναχρησιμοποιείτε τα μοριακά κόσκινα. Μη χρησιμοποιείτε μοριακά κόσκινα με το αντιδραστήριο Beaucage. Τα μοριακά κόσκινα πρέπει να ενεργοποιηθούν πριν από τη χρήση (εάν δεν έχουν προενεργοποιηθεί κατά τη διανομή) με θέρμανση στους 150 έως 200 C κατά τη διάρκεια της νύχτας υπό υψηλό κενό. Χρησιμοποιήστε κλίβανο κενού ή φιάλη κενού και θερμαντικό μανδύα. Αφήστε τα μοριακά κόσκινα να ψυχθούν μέχρι τη θερμοκρασία δωματίου υπό κενό και μετά μεταφέρετέ τα σε ένα στεγνό βάζο με καπάκι σφικτής εφαρμογής. Διατηρήστε το βάζο σε κλειστό ξηραντήριο που περιέχει ξηραντικό μέσο. 80 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

81 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.1 Απαιτούμενα στοιχεία Φίλτρα Η GE Healthcare συνιστά τη χρήση φίλτρων φιάλης/φιαλιδίων στις φιάλες αντιδραστηρίων και διαλυτών. Να αλλάζετε τα φίλτρα κάθε φορά που αλλάζετε τη φιάλη. Για πληροφορίες σχετικά με την παραγγελία, επισκεφτείτε τη διεύθυνση Σημείωση: Σημείωση: Μη χρησιμοποιείτε το τμήμα φίλτρου στις φιάλες Detrit με χλωριωμένους διαλύτες, διαφορετικά το φίλτρο θα διογκωθεί και θα πέσει. Να φροντίζετε να διατηρείτε το σωλήνα στο κάτω μέρος της φιάλης. Μεσοδιαστήματα για την αλλαγή φίλτρων Θα πρέπει να αλλάζετε αυτά τα φίλτρα φιαλών/φιαλιδίων κάθε φορά που αλλάζετε μια φιάλη. Τα φίλτρα φιαλών/φιαλιδίων παρέχονται σε συσκευασίες των 500 (Αρ. παραγγελίας ) και ταιριάζουν με σωλήνα με εσωτερική διάμετρο 1/16. Όταν χρησιμοποιείτε φιάλες αντιδραστηρίων, θα πρέπει να χρησιμοποιούνται φίλτρα φιαλών αντιδραστηρίων (Αρ. παραγγελίας ), τα οποία ταιριάζουν με σωλήνα με εσωτερική διάμετρο 3/16. Το τμήμα φίλτρου δεν πρέπει να χρησιμοποιείται στις φιάλες Detrit με χλωριωμένους διαλύτες, επειδή το φίλτρο θα διογκωθεί και θα πέσει. Ωστόσο, το βάρος θα πρέπει να χρησιμοποιείται για τη διατήρηση του σωλήνα στο κάτω μέρος της φιάλης. Primer Support Ο στερεός φορέας για σύνθεση αποτελείται από χάντρες πολυστυρενίου που έχουν πληρωθεί με έναν από τους τέσσερις νουκλεοζίτες da, dg dc και T για σύνθεση DNA. Η βάση στο φορέα γίνεται βάση 3'-τελικού άκρου του συντεθειμένου ολιγονουκλεοτιδίου. Οι μέθοδοι ÄKTA oligopilot plus έχουν βελτιστοποιηθεί χρησιμοποιώντας στερεούς φορείς, τους οποίους παρέχει η GE Healthcare. Φορτώστε τη στήλη σύμφωνα με τις οδηγίες λειτουργίας για ÄKTAoligopilot plus. Αντιδραστήρια διάσπασης και αποπροστασίας Ο φορέας διασπάται από το ολιγονουκλεοτίδιο μετά τη σύνθεση χρησιμοποιώντας πυκνό (25-30%) υδροξείδιο του αμμωνίου. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 81

82 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.2 Προετοιμασία των διαλυμάτων 6.2 Προετοιμασία των διαλυμάτων Προειδοποιήσεις και επισημάνσεις προσοχής ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Όλοι οι διαλύτες είναι πτητικοί και πρέπει να θεωρούνται επικίνδυνοι. Να εργάζεστε σε καλά αεριζόμενη χοάνη απαγωγής αερίων. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Να φοράτε πάντα προστατευτικά γυαλιά και να χρησιμοποιείτε προστατευτικά γάντια ανθεκτικά στο ακετονιτρίλιο. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εάν τα αντιδραστήρια και οι διαλύτες έρθουν σε επαφή με το δέρμα, πλύνετε αμέσως με άφθονο νερό. Εάν τα αντιδραστήρια και οι διαλύτες έρθουν σε επαφή με τα μάτια, πλύνετε πολύ καλά με νερό και συμβουλευτείτε έναν ιατρό το συντομότερο δυνατό. Εάν καταποθεί οποιοδήποτε αντιδραστήριο ή διαλύτης, συμβουλευτείτε αμέσως ιατρό. ΠΡΟΣΟΧΗ Να ακολουθείτε πάντα τις συστάσεις του κατασκευαστή για την προετοιμασία και τη χρήση του αντιδραστηρίου. 82 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

83 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.2 Προετοιμασία των διαλυμάτων Προφυλακτικά μέτρα: άνυδρες συνθήκες Η υγρασία μπορεί να μειώσει σημαντικά το αποτέλεσμα της σύνθεσης. Για βέλτιστα αποτελέσματα, λάβετε τις ακόλουθες προφυλάξεις: Να εργάζεστε γρήγορα με τις ανοικτές φιάλες προκειμένου να αποφευχθεί η είσοδος υγρασίας στα αντιδραστήρια και τους διαλύτες. Ίχνη νερού στα αντιδραστήρια και τους διαλύτες μειώνουν σημαντικά την απόδοση της σύνθεσης. Να χρησιμοποιείτε πάντα μοριακά κόσκινα 3 Å στις φιάλες αμιδίτη, ενεργοποιητή και ακετονιτριλίου. Βεβαιωθείτε ότι η παροχή αδρανούς αερίου είναι ξηρή και χωρίς διοξείδιο του άνθρακα. Απαιτούμενα αντικείμενα, διάλυμα και αντιδραστήρια Τα απαιτούμενα αντιδραστήρια περιγράφονται στον ακόλουθο πίνακα. Η ποσότητα των αντιδραστηρίων που χρησιμοποιείται ανά κύκλο στις διαφορετικές κλίμακες σύνθεσης εξαρτάται από το βαθμό υποκατάστασης και το βάρος του φορέα στη στήλη. Συμβουλή: Μη προετοιμάζετε περισσότερο αντιδραστήριο από αυτό που απαιτείται. Πολλά αντιδραστήρια έχουν περιορισμένη διάρκεια ζωής. Ανατρέξτε στον προμηθευτή κάθε αντιδραστηρίου. Αντιδραστήριο Ακετονιτρίλιο Αμιδίτες Περιγραφή Βεβαιωθείτε ότι το ακετονιτρίλιο είναι άνυδρο (λιγότερα από 30 ppm νερού). Οι αμιδίτες είναι λευκά έως υπόλευκα στερεά που πωλούνται σε τυπικά φιαλίδια και πρέπει να διαλυθούν σε άνυδρο ακετονιτρίλιο πριν τη σύνθεση. Δείτε Σύνδεση των φιαλών αμιδίτη, στη σελίδα 86 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 83

84 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.2 Προετοιμασία των διαλυμάτων Αντιδραστήριο Ενεργοποιητής Περιγραφή Η GE Healthcare συνιστά τη χρήση βενζυλ θειο τετραζόλης (BTT) ως ενεργοποιητή, με συγκέντρωση 0,3 M. Για σύνθεση DNA, επαρκεί μια συγκέντρωση 0,25 M. Βεβαιωθείτε ότι ο ενεργοποιητής είναι πλήρως διαλυμένος, μετά προσθέστε μοριακά κόσκινα 3 Å (αρκετά να καλύψετε τα φίλτρα) πριν συνδέσετε τη φιάλη στη γραμμή με την επισήμανση 16 στον πίνακα εισόδου αντιδραστηρίων ÄKTAoligopilot plus, δείτε Ενότητα 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων, στη σελίδα 93. Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι ο ενεργοποιητής είναι πλήρως διαλυμένος. Η διάλυση του ενεργοποιητή διαρκεί περισσότερο καθώς εγκρίνεται ο κορεσμός. Μη προσθέσετε μοριακά κόσκινα εάν ο ενεργοποιητής δεν έχει διαλυθεί πλήρως. Ο ενεργοποιητής μπορεί να κρυσταλλωθεί στο διάλυμα σε θερμοκρασίες χαμηλότερες από 18 C. Εάν συμβεί αυτό, ανακινήστε έντονα το διάλυμα ενεργοποιητή σε θερμοκρασία περιβάλλοντος μέχρι να γίνει διαυγές. Αντιδραστήριο οξείδωσης Αντιδραστήριο κάλυψης A Αντιδραστήριο κάλυψης B Το αντιδραστήριο οξείδωσης είναι 50 mm ιώδιο (12,7 g I 2 σε 1 L διάλυμα) σε νερό/πυριδίνη 1:9 (κ.ό.). Το αντιδραστήριο κάλυψης A είναι 20% N-μεθυλιμιδαζόλη (κ.ό.) σε ακετονιτρίλιο. Αυτό το αντιδραστήριο διατίθεται ως έτοιμο διάλυμα. Το αντιδραστήριο κάλυψης B είναι 20% οξικός ανυδρίτης σε 30% sym-κολλιδίνη, ή λουτιδίνη, και 50% ακετονιτρίλιο. Αυτό το αντιδραστήριο είναι διαθέσιμο ως δύο έτοιμα διαλύματα για ανάμειξη αμέσως πριν τη χρήση. 84 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

85 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.2 Προετοιμασία των διαλυμάτων Αντιδραστήριο Αντιδραστήριο θειολίωσης Περιγραφή Συνήθως χρησιμοποιούνται αρκετές συνθέσεις αντιδραστηρίων θειολίωσης, μερικές από αυτές είναι ιδιόκτητες και προστατεύονται με διπλώματα ευρεσιτεχνίας. Βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιούνται οι σωστές παράμετροι μεθόδου για το επιλεγμένο αντιδραστήριο. Το αντιδραστήριο θειολίωσης (Beaucage) χρησιμοποιείται στα 0,5 M ή 10% (κ.ό.) σε ξηρό ακετονιτρίλιο που δεν έχει ξηρανθεί πάνω από μοριακά κόσκινα 3Å. Παρέχεται ως στερεό για την προετοιμασία του διαλύματος. Αντιδραστήρια θειολίωσης όπως το δισουλφίδιο του φαινυλακετυλίου (PADS) διαλυμένο σε πικολίνη/ακετονιτρίλιο 1:1 (προστατεύεται από δίπλωμα ευρεσιτεχνίας) μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν. Ένα άλλο εναλλακτικό αντιδραστήριο θειολίωσης είναι το Edith. Οι συνιστώμενες παράμετροι είναι οι εξής: συγκέντρωση 0,15 M όγκος ίσος με 0,5 όγκο στήλης χρόνος επαφής 1 λεπτού. Για τη σύνδεση των αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων, δείτε Ενότητα 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων, στη σελίδα 93. Διάλυμα αποτριτυλίωσης Το διάλυμα αποτριτυλίωσης είναι 3% κ.ό. διχλωροξικό οξύ (DCA) σε τολουόλιο ή διχλωρομεθάνιο. Το διάλυμα είναι σταθερό επ' αόριστον. Μπορεί να χρησιμοποιηθεί τολουόλιο με DCA με το ÄKTAoligopilot plus 10 ή το ÄKTAoligopilot plus 100. Το DCA/DCM θα πρέπει να χρησιμοποιείται μόνο με ÄKTAoligopilot plus 100 επειδή το DCA/DCM προκαλεί απαέρωση, η οποία μπορεί να εμποδίσει τη σωστή λειτουργία της αντλίας ÄKTAoligopilot plus 10. Σημείωση: Κατά την αφαίρεση της ομάδας DMTr, τα διαλύματα με βάση το τολουόλιο παράγουν παραπροϊόντα με μόνο αμελητέα αγωγιμότητα. Συνεπώς, δεν είναι δυνατό να χρησιμοποιηθεί η αγωγιμότητα για τη μέτρηση της απόδοσης αποτριτυλίωσης των διαλυμάτων με βάση το τολουόλιο. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 85

86 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.2 Προετοιμασία των διαλυμάτων Παροχή αδρανούς αερίου ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Η παροχή αδρανούς αερίου δεν πρέπει να υπερβαίνει ποτέ τα 0,5 bar. Σημείωση: Σημείωση: Βεβαιωθείτε ότι η παροχή αδρανούς αερίου δεν περιέχει νερό και διοξείδιο του άνθρακα, και τα δύο από τα οποία μπορούν να μειώσουν σημαντικά την απόδοση της σύνθεσης. Όταν αλλάζετε τη φιάλη αδρανούς αερίου, βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει συμπύκνωση στο ρυθμιστή ή στο σωλήνα αερίου. Εκπλύντε το ρυθμιστή με αδρανές αέριο από την καινούρια φιάλη πριν συνδέσετε το ÄKTAoligopilot plus. Σύνδεση των φιαλών αμιδίτη Οι φιάλες αμιδίτη είναι συνδεδεμένες στο όργανο είτε χρησιμοποιώντας ένα απλό συρόμενο προσάρτημα σφράγισης είτε απευθείας από τις φιάλες χρησιμοποιώντας την τυπική διάταξη πώματος και σωλήνα φιάλης GL-45. Όταν χρησιμοποιείτε το συρόμενο προσάρτημα σφράγισης, βεβαιωθείτε ότι το φιαλίδιο έχει εδράσει σωστά στο σφραγιστικό παρέμβυσμα και ότι το παρέμβυσμα δεν είναι ραγισμένο ή φθαρμένο. Οι θέσεις φιαλιδίων στο όργανο πρέπει να επισημανθούν ως εξής: A, C, G, T, A*, C*, G*, T*, X, Y, Z, Q Αυτά τα γράμματα χρησιμοποιούνται για τον ορισμό της αλληλουχίας ολιγονουκλεοτιδίων στον επεξεργαστή αλληλουχιών, και εξυπηρετούν ως διευθύνσεις για τα φιαλίδια αμιδίτη κατά τη σύνθεση. Συνεπώς, είναι σημαντικό οι αμιδίτες να τοποθετούνται στη σωστή θέση τους στο όργανο. Οι τελευταίες βάσεις στην αλληλουχία (X, Y, Z και Q) φυλάσσονται για ειδικές εκχωρήσεις ή εκχωρήσεις καθορισμένες από τον πελάτη. Σημείωση: Να αποφεύγεται η είσοδος της υγρασίας στις φιάλες αμιδίτη. Να εργάζεστε γρήγορα όταν η φιάλη είναι ανοικτή. Σημείωση: Πριν συνδέσετε το φιαλίδιο στο όργανο, προσθέστε μοριακά κόσκινα 3 Å σε βάθος περίπου 5 mm. Για να προσθέσετε περισσότερες φιάλες αμιδίτη, απαιτούνται επιπρόσθετοι ολισθητήρες αμιδίτη. Για οδηγίες εγκατάστασης, δείτε Ενότητα 6.6 Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών, στη σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

87 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.3 Προετοιμασία για μια σύνθεση επαλήθευσης 6.3 Προετοιμασία για μια σύνθεση επαλήθευσης Σημειώσεις και συμβουλές για την προετοιμασία αντιδραστηρίων Όταν προετοιμάζετε αντιδραστήρια για αναλύσεις σύνθεσης, να λαμβάνετε υπόψη τις ακόλουθες συμβουλές. Τα απόβλητα πρέπει να συλλέγονται σε ένα κλειστό αλλά αεριζόμενο δοχείο. Όταν επιλέγετε το μέγεθος ενός δοχείου αποβλήτων, επιλέξτε ένα κατάλληλο μεγάλο δοχείο για να αποφευχθεί η υπερπλήρωση με απόβλητα. Για ανάλυση επαλήθευσης, επαρκεί ένα δοχείο αποβλήτων 5 L. Προετοιμάστε περισσότερα αντιδραστήρια από αυτά που ορίζουν οι ελάχιστες απαιτήσεις. Προετοιμασία αντιδραστηρίων για επαλήθευση του ÄKTAoligopilot plus 10 Η φυσιολογική κατανάλωση αντιδραστηρίων κατά μια αλληλουχία Test13 με το ÄKTAoligopilot plus 10 υποδεικνύεται στον παρακάτω πίνακα. Ο καθορισμένος όγκος στον πίνακα επαρκεί για το πλύσιμο στήλης, τον καθαρισμό και την τελική αποτριτυλίωση. Ο συνιστώμενος όγκος επαρκεί για τουλάχιστον 2 συνθέσεις όσον αφορά τους αμιδίτες. Αντιδραστήριο Αμιδίτης A, 0,1 M Αμιδίτης C, 0,1 M Αμιδίτης G, 0,1 M Αμιδίτης T, 0,1 M Ακετονιτρίλιο Αντιδραστήριο αποτριτυλίωσης (πρέπει να έχει βάση το τολουόλιο) Αντιδραστήριο κάλυψης A Αντιδραστήριο κάλυψης B Αντιδραστήριο οξείδωσης Απαιτείται 1,85 ml 1,85 ml 1,85 ml 1,85 ml 900 ml <250 ml 23 ml 23 ml 23 ml Συνιστώμενος όγκος 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml 1200 ml 500 ml 100 ml 100 ml 100 ml ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 87

88 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.3 Προετοιμασία για μια σύνθεση επαλήθευσης Αντιδραστήριο Ενεργοποιητής (0,3 M BTT) DEA (20% στο ACN) Απαιτείται 17 ml 40 ml Συνιστώμενος όγκος 100 ml 100 ml Προδιαγραφή σύνθεσης Οι ειδικοί όγκοι είναι προσεγγιστικοί για στήλη 1,2 ml. Η διάρκεια της σύνθεσης είναι περίπου 2,5 ώρες Παραγόμενα απόβλητα: 1200 ml Απαιτούμενο δοχείο αποβλήτων: 2000 ml Σημείωση: Το ακετονιτρίλιο πρέπει να είναι εξαιρετικά ξηρό. Η μέγιστη περιεκτικότητα νερού στο διάλυμα δεν πρέπει να ξεπερνάει τα 30ppm. Η κατανάλωση αντιδραστηρίων κατά τη διάρκεια μιας σύνθεσης 260 µmol μιας αλληλουχίας Test13, Trityl-OFF, σε μια στήλη 6,3 ml με ÄKTAoligopilot plus 100 υποδεικνύεται στον παρακάτω πίνακα. Οι ακόλουθοι όγκοι βασίζονται στη χρήση 1,3 g φορέα, 200 µmol/g και λαμβάνοντας υπόψη την πλύση στήλης, τους καθαρισμούς και την τελική αποτριτυλίωση. Οι υποδείξεις Prepare minimum επιτρέπουν τουλάχιστον 2 συνθέσεις όσον αφορά τους αμιδίτες. Πίνακας 6.1: Αντιδραστήριο Primer Support 5G Αμιδίτης A, 0,15 M Αμιδίτης C, 0,15 M Αμιδίτης G, 0,15 M Αμιδίτης T, 0,15 M Ακετονιτρίλιο Αποτριτυλίωση Αντιδραστήριο κάλυψης A Αντιδραστήριο κάλυψης B Απαιτήσεις 700 mg, 200 µmol/g 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 3500 ml < 1000 ml 19 ml 19 ml Προετοιμάστε τουλάχιστον 1 mmol διαθέσιμο 34 ml / 5 g 35 ml/ 5 g 35 ml / 5 g 40 ml / 5 g 5000 ml ml 100 ml 100 ml 88 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

89 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.3 Προετοιμασία για μια σύνθεση επαλήθευσης Αντιδραστήριο DEA Αντιδραστήριο οξείδωσης Ενεργοποιητής (0,3M BTT) Απαιτήσεις 40 ml 120 ml 50 ml Προετοιμάστε τουλάχιστον 100 ml ml 250 ml Προδιαγραφή σύνθεσης Οι ειδικοί όγκοι είναι προσεγγιστικοί για στήλη 6,3 ml. Η διάρκεια της σύνθεσης είναι περίπου 6 ώρες Παραγόμενα απόβλητα: 3500 ml Απαιτούμενο δοχείο αποβλήτων: 20 L Σημείωση: Το ακετονιτρίλιο πρέπει να είναι εξαιρετικά ξηρό. Η μέγιστη περιεκτικότητα νερού στο διάλυμα δεν πρέπει να ξεπερνάει τα 30ppm. Συνιστώμενες συγκεντρώσεις αμιδιτών Συνιστώμενες συγκεντρώσεις αμιδιτών για διαφορετικές στήλες χρησιμοποιώντας Primer Support 5G: στήλη 6,3 ml, στήλη 1,2 ml, στήλες τύπου κασέτας: 0,1-0,15 mm FineLINE 35 oligo: 0,2 M. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 89

90 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.4 Προετοιμασία του αντιδραστήρα στήλης 6.4 Προετοιμασία του αντιδραστήρα στήλης Πληροφορίες για τους αντιδραστήρες σταθερής στήλης Οι αντιδραστήρες σταθερής στήλης (1,2, 6,3, 12, 24 και 48 ml) κατασκευάζονται από ανοξείδωτο χάλυβα με φίλτρο ανοξείδωτου χάλυβα (mesh 20 µm) σε κάθε άκρο. Φόρτωση της στήλης Φορτώστε τη στήλη σύμφωνα με τις οδηγίες λειτουργίας για κάθε ειδικό φορέα. Στη συνέχεια θα βρείτε τις οδηγίες φόρτωσης για τη φόρτωση του Primer Support 5G. Φόρτωση Primer Support 5G σε στήλες σταθερού όγκου Βήμα Ενέργεια Επιλέξτε το φορέα που είναι κατάλληλος για τη σύνθεση (η βάση που είναι συνδεδεμένη στο φορέα θα γίνει το υπόλειμμα 3'-τελικού άκρου του συντεθειμένου ολιγονουκλεοτιδίου). Αποσυναρμολογήστε τη στήλη και γεμίστε το σωλήνα στήλης με ξηρό Primer Support 5G (δείτε Στήλες σταθερού όγκου, στη σελίδα 91). Αφαιρέστε τυχόν περίσσευμα φορέα από το πάνω άκρο και το σπείρωμα του σωλήνα στήλης. Μια μικρή μαλακή βούρτσα (π.χ. βούρτσα για φακό κάμερας) είναι κατάλληλη για το σκοπό αυτό. 90 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

91 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.4 Προετοιμασία του αντιδραστήρα στήλης Βήμα Ενέργεια Τοποθετήστε το ατσαλένιο φίλτρο στο πάνω μέρος της στήλης και τον στρογγυλό δακτύλιο στο φίλτρο. Μετά, βιδώστε τον προσαρμογέα στήλης στη θέση του. Μη σφίξετε υπερβολικά. Συνδέστε τη στήλη στο όργανο ÄKTAoligopilot plus. Σφίξτε τις βίδες συγκράτησης με τα δάχτυλα και μετά άλλη μισή στροφή χρησιμοποιώντας το παρεχόμενο κλειδί. ΜΗ σφίξετε υπερβολικά. Βεβαιωθείτε ότι η στήλη είναι κατακόρυφη και οι βίδες είναι σφιγμένες ομοιόμορφα. Συνδέστε τους σωλήνες από τη βαλβίδα στήλης του συστήματος. Εκκίνηση ανάλυσης. Σημείωση: ο φορέας θα διογκωθεί εντός δευτερολέπτων και θα γεμίσει τη στήλη κατά την αρχική πλύση στήλης. Σημείωση: Σημείωση: Αλλάξτε τις κατεστραμμένες ή φθαρμένες σφραγίσεις PTFE και τα φίλτρα. Τα μερικώς φραγμένα φίλτρα μπορούν να προκαλέσουν αυξημένη πίεση επιστροφής και συναγερμούς υψηλής πίεσης κατά τη διάρκεια ανάλυσης σύνθεσης. Οι κατεστραμμένες σφραγίσεις PTFE μπορούν να προκαλέσουν τη διαρροή υλικού και το επακόλουθο μπλοκάρισμα των κυψελίδων UV και του περιοριστή ροής, γεγονός που μπορεί επίσης να προκαλέσει συναγερμούς υψηλής πίεσης. Πριν εκκινήσετε μια ανάλυση σύνθεσης, να ελέγχετε πάντα για διαρροές. Στήλες σταθερού όγκου Βάρος φορέα και όγκοι στήλης που απαιτούνται για όγκους σταθερής στήλης. Primer Support 5G (g) 700 mg 133 mg Όγκος στήλης (ml) 6,3 1,2 Φόρτωση του Primer Support 5G ως πολτού Αυτή η μέθοδος φόρτωσης είναι κατάλληλη όταν χρησιμοποιούνται στήλες τύπου μεταβλητού προσαρμογέα. Προετοιμάστε πολτό προσθέτοντας 3 μέρη ακετονιτρίλιο και 1 μέρος Primer Support 5G. Ο όγκος που προκύπτει είναι 3,33 μέρη. Σημείωση: Υπολογίστε τον όγκο στήλης χρησιμοποιώντας αυτόν τον τύπο: ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 91

92 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.4 Προετοιμασία του αντιδραστήρα στήλης Όγκος στήλης (ml) = 3 3 3,15 ύψος κλίνης (cm) 92 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

93 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων 6.5 Σύνδεση αντιδραστηρίων και διαλυμάτων με τον πίνακα εισόδων Σύνδεσμοι πίνακα εισόδου Συνδέστε τα αντιδραστήρια και διαλύματα με τους συνδέσμους πίνακα εισόδου σύμφωνα με τον ακόλουθο πίνακα. Αντιδραστήριο Αδρανές αέριο θειολίωσης Θειολίωση Αδρανές αέριο κάλυψης A Κάλυψη A Αδρανές αέριο Ox Οξείδωση Αδρανές αέριο κάλυψης B Κάλυψη B Αδρανές αέριο Detrit Detrit Αδρανές αέριο ACN Ακετονιτρίλιο Αδρανές αέριο Extra Αντιδραστήριο Extra Αδρανές αέριο ενεργοποιητή Ενεργοποιητής Αριθμός πίνακα εισόδου ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 93

94 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.6 Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών 6.6 Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών Στην παρούσα ενότητα Σε αυτή την ενότητα περιγράφεται ο τρόπος εγκατάστασης των επιπρόσθετων ολισθητήρων για τη συγκράτηση επιπρόσθετων φιαλών αμιδιτών. 94 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

95 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.6 Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών Τυπική διανομή Το τυπικό ÄKTAoligopilot plus παρέχεται με οκτώ ολισθητήρες φιαλών αμιδιτών. Κάθε ολισθητήρας μπορεί να συγκρατήσει μια τυπική φιάλη 100 ml. Μπορούν να συμπεριληφθούν τέσσερις επιπρόσθετοι ολισθητήρες, δίνοντας συνολικά 12 φιάλες αμιδίτη. Στην παρακάτω εικόνα απεικονίζονται οι είσοδοι για τους 4 επιπρόσθετους αμιδίτες (X, Y, Z και Q). X Y Z ACN Q Βάση X Y Z Q Σύνδεση σε Βαλβίδα 1, θέση 8 Βαλβίδα 2, θέση 8 Βαλβίδα 3, θέση 4 Βαλβίδα 3, θέση 6 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 95

96 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.6 Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών Σημείωση: Εάν ο σωλήνας εισόδου αμιδίτη είναι συνδεδεμένος στη βαλβίδα 3, πρέπει να συνδεθεί μια επιπρόσθετη γραμμή ακετονιτριλίου μεταξύ του μπλοκ εισόδου ακετονιτριλίου και της βαλβίδας 3 θύρα 5. Χρησιμοποιήστε σωλήνα με εξωτερική διάμετρο 3/16". Απαιτούμενα εξαρτήματα Σημείωση: Το μήκος του σωλήνα δεν πρέπει να είναι μεγαλύτερο από 150 cm. Όσο πιο μικρό, τόσο το καλύτερο. Ολισθητήρας φιάλης αμιδίτη (περιλαμβάνονται σύνδεσμοι), αρ. εξαρτήματος Σωλήνας PEEK - ÄKTAoligopilot plus 10: πορτοκαλί PEEK, OD 1/16", ID 0,50 mm - ÄKTAoligopilot plus 100: μπεζ PEEK, OD 1/16", ID 1,0 mm Σωλήνας ETFE, OD 1,16" (για αδρανές αέριο) Κρίκος, ID 1/16" Σύνδεσμος, 5/16" Πώμα φιάλης (για τη σύνδεση σωλήνα υγρού και αδρανούς αερίου σε φιάλες με σπείρωμα GL-45) για φιάλες > 100 ml: Πώμα φιάλης, αρ. εξαρτήματος Σύνδεση του ολισθητήρα φιάλης αμιδίτη Βήμα Ενέργεια Συνδέστε το σωλήνα αδρανούς αερίου (O.D. 1/16") στη δεξιά πολλαπλή αερίου (B3) στο εσωτερικό μέρος της πόρτας του ÄKTAoligopilot plus. Ξεβιδώστε έναν από τους συνδέσμους πώματος αναστολής και τοποθετήστε έναν σύνδεσμο με σωλήνα, σφιγμένο με τα δάχτυλα, στη θέση του. Συνδέστε το σωλήνα από το σύνδεσμο, σφιγμένο με τα δάχτυλα, με την καινούρια φιάλη αμιδίτη. Συνδέστε το σωλήνα ETFE με το σύνδεσμο, σφιγμένο με τα δάχτυλα, στο συγκρατητήρα φιαλιδίου. Σημείωση: Εάν χρησιμοποιείται φιάλη αμιδίτη GL-45, συνδέστε το σωλήνα στον σύνδεσμο με την επισήμανση G χρησιμοποιώντας σύνδεσμο 5/16". 96 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

97 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση 6.6 Σύνδεση επιπρόσθετων αμιδιτών Επιθεώρηση της διαρροής αδρανούς αερίου Να ελέγχετε πάντα για διαρροή αδρανούς αερίου πριν εκκινήσετε την ανάλυση σύνθεσης. Για να επαληθεύσετε ότι δεν υπάρχει διαρροή αδρανούς αερίου, ακολουθήστε τις παρακάτω οδηγίες: Βήμα Ενέργεια Κλείστε την παροχή αερίου στο ÄKTAoligopilot plus Περιμένετε 2-5 λεπτά Ελέγξτε τα μανόμετρα στον μπροστινό πίνακα του οργάνου. Σημείωση: Η πίεση πρέπει να είναι σταθερή. Μια διαρροή συχνά υποδεικνύεται όταν η πίεση μειώνεται στα 0 bar εντός 1 λεπτού. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 97

98 7 Λειτουργία 7 Λειτουργία Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό παρέχει οδηγίες για τη λειτουργία του ÄKTAoligopilot plus. Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα 7.1 Επισκόπηση λειτουργίας 7.2 Εκκίνηση του οργάνου και του συστήματος ελέγχου 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης 7.4 Προετοιμασία πριν από την έναρξη 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Βλ. σελίδα ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν με διαφορετικό τρόπο από αυτόν που περιγράφεται στην τεκμηρίωση χρήστη. 98 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

99 7 Λειτουργία 7.1 Επισκόπηση λειτουργίας 7.1 Επισκόπηση λειτουργίας Ροή εργασιών Η τυπική ροή εργασιών του ÄKTAoligopilot plus, μετά την ενεργοποίηση και τη σύνδεση του συστήματος στο UNICORN, μπορεί να χωριστεί σε διάφορα στάδια. Βήμα Ενέργεια Δημιουργία μεθόδου Προετοιμασία του συστήματος για ανάλυση Έναρξη ανάλυσης χρησιμοποιώντας μια μέθοδο Κατά τη διάρκεια της ανάλυσης - προβολή και τροποποίηση παραμέτρων Διαδικασίες μετά από μια ανάλυση Αξιολόγηση αποτελεσμάτων Ενότητα Ενότητα 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης, στη σελίδα 103 Κεφάλαιο 6 Διαδικασία πριν τη σύνθεση, στη σελίδα 78 Ενότητα 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης, στη σελίδα 103 Ενότητα 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης, στη σελίδα 110 Προβολή ανάλυσης, στη σελίδα 118 Κεφάλαιο 8 Διαδικασίες μετά τη σύνθεση, στη σελίδα 120 Ανατρέξτε στην τεκμηρίωση χρήστη του UNICORN. Διαδρομή ροής υγρών Ανατρέξτε στο Παράρτημα A Διάγραμμα συνδέσεων - Διαδρομή ροής υγρών, στη σελίδα 169 για μια περιγραφή της διαδρομής ροής υγρών του ÄKTAoligopilot plus. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 99

100 7 Λειτουργία 7.2 Εκκίνηση του οργάνου και του συστήματος ελέγχου 7.2 Εκκίνηση του οργάνου και του συστήματος ελέγχου Έναρξη του οργάνου Βεβαιωθείτε όλοι οι εξωτερικοί σωλήνες στο σύστημα, συμπεριλαμβανομένων των σωλήνων εισαγωγής αντιδραστηρίων, εισαγωγής αμιδιτών και εξαγωγής αποβλήτων, είναι σωστά συνδεδεμένοι. Ελέγξτε εάν όλες οι συνδέσεις σωλήνων είναι σωστά σφιγμένες και εάν όλες οι βαλβίδες είναι συνδεδεμένες σε έναν σωλήνα ή σε μια απόληξη. Βήμα 1 2 Ενέργεια Ενεργοποιήστε το διακόπτη Power στο όργανο ÄKTAoligopilot plus. Ρυθμίστε τους δύο ρυθμιστές αερίου αργού που βρίσκονται στη γωνία του οργάνου στην τιμή 0,3 bar. Σημείωση: Πρέπει να υπάρχει ίδια πίεση σε όλες τις φιάλες αντιδραστηρίων, ώστε οι αντλίες να παρέχουν το ρυθμό ροής που έχει καθοριστεί στη μέθοδο. Εκκίνηση του UNICORN Βήμα Ενέργεια Ενεργοποιήστε τη συσκευή παρακολούθησης, τον υπολογιστή και τον προαιρετικό εκτυπωτή σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Περιμένετε μέχρι να ενεργοποιηθεί ο υπολογιστής. Βεβαιωθείτε ότι η ένδειξη λειτουργίας στη μονάδα CU-950 είναι αναμμένη όταν έχει ενεργοποιηθεί ο υπολογιστής. Συνδεθείτε στο λειτουργικό σύστημα Windows. Ενεργοποιήστε το UNICORN κάνοντας διπλό κλικ στο εικονίδιο συντόμευσης του UNICORN στην επιφάνεια εργασίας. 100 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

101 7 Λειτουργία 7.2 Εκκίνηση του οργάνου και του συστήματος ελέγχου Βήμα 5 Ενέργεια Στο παράθυρο διαλόγου Logon, επιλέξτε έναν χρήστη από τη λίστα User name και πληκτρολογήστε τον κωδικό πρόσβασης. Εάν συνδέεστε για πρώτη φορά, επιλέξτε το χρήστη default και πληκτρολογήστε τον κωδικό πρόσβασης default. Κάντε κλικ στο OK. Αποτέλεσμα: Εκκινείται το UNICORN και ανοίγει το παράθυρο UNICORN Manager. Σημείωση: Ανατρέξτε στην τεκμηρίωση χρήστη του UNICORN για οδηγίες σχετικά με τον τρόπο δημιουργίας νέων χρηστών. Το παράθυρο UNICORN Manager ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 101

102 7 Λειτουργία 7.2 Εκκίνηση του οργάνου και του συστήματος ελέγχου Αρ Περιγραφή Με το εικονίδιο Instant Run, ενεργοποιείται άμεσα ο οδηγός ελέγχου συστήματος που χρησιμοποιείται για την έναρξη μιας ανάλυσης. Με το εικονίδιο New Method, ανοίγει η μονάδα Method Editor και εμφανίζεται το πλαίσιο διαλόγου New Method. Με το εικονίδιο System Control, ενεργοποιείται η μονάδα System Control και εμφανίζεται το παράθυρο διαλόγου Manual instruction. Σύστημα ελέγχου στο UNICORN Για να ανοίξετε την υπομονάδα System Control στο UNICORN, κάντε κλικ στο εικονίδιο System Control στο παράθυρο UNICORN Manager. 102 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

103 7 Λειτουργία 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης Εισαγωγή μεθόδων UNICORN Το UNICORN παρέχεται με έναν αριθμό προκαθορισμένων μεθόδων (καλούνται μέθοδοι προτύπων). Ανάλογα με τη στήλη που χρησιμοποιείται, οι μέθοδοι σύνθεσης παρέχονται σε μία ή δύο εκδόσεις - μία για τεχνική σύζευξης αμιδίτη ανακυκλοφορίας και μία για τεχνική σύζευξης αμιδίτη συνεχούς ροής. Η ανακυκλοφορία είναι η συνιστώμενη τεχνική. Η τεχνική συνεχούς ροής περιλαμβάνεται επειδή χρησιμοποιείται στα συστήματα OligoProcess και θα παρέχει εύκολη ανάπτυξη μεθόδων από το ÄKTAoligopilot plus στο OligoProcess σε αυτές τις περιπτώσεις. Δημιουργία μεθόδου Βήμα 1 Ενέργεια Κάντε κλικ στο εικονίδιο New Method στο παράθυρο UNICORN Manager, δείτε Το παράθυρο UNICORN Manager, στη σελίδα 101. Ανοίγει το παράθυρο διαλόγου New Method. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 103

104 7 Λειτουργία 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης Βήμα 2 Ενέργεια Για το σύστημα ÄKTAoligopilot plus 10, επιλέξτε τη μέθοδο προτύπου Recycle 1 ml Column 10. Για το σύστημα ÄKTAoligopilot plus 100, επιλέξτε τη μέθοδο προτύπου Recycle 6 ml Column AKTA oligopilot 100. Όλες οι μέθοδοι περιλαμβάνουν πληροφορίες σχετικά με τη μέθοδο, οι οποίες εμφανίζονται στο παράθυρο Method notes. Σημείωση: Η λίστα στηλών δεν χρησιμοποιείται στις εφαρμογές ολιγονουκλεοτιδίων. Σημείωση: Για τις τεχνικές που δεν χρησιμοποιούνται πρέπει να επιλεγεί η ρύθμιση Any. 3 4 Κάντε κλικ στο OK, για να ανοίξετε το επιλεγμένο πρότυπο μεθόδου. Στο Method Editor, επιλέξτε View:Run setup ή κάντε κλικ στο εικονίδιο Run Setup. Ανοίγουν οι καρτέλες του παραθύρου διαλόγου Run Setup και εμφανίζεται η προεπιλεγμένη καρτέλα (Variables). 104 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

105 7 Λειτουργία 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης Βήμα 5 Ενέργεια Κάντε κλικ στην καρτέλα Sequence. Εμφανίζεται το Sequence name και η ακολουθία. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 105

106 7 Λειτουργία 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης Βήμα 6 Ενέργεια Για να αλλάξετε το όνομα μιας ακολουθίας, κάντε κλικ στην επιλογή Save Seq. Ανοίγει το παράθυρο διαλόγου Save Sequence όπου μπορείτε να καταχωρίσετε ένα νέο όνομα. Για την καταχώριση μιας νέας ακολουθίας, χρησιμοποιείται η ίδια διαδικασία. Καταχωρίστε την ακολουθία 5' έως 3' και κάντε κλικ στην επιλογή Save Seq. Σημείωση: Με τον τρόπο αυτό, η ακολουθία αποθηκεύεται σε μια λίστα ακολουθιών και όχι ως μέθοδος σύνθεσης. Η ακολουθία μπορεί να τροποποιηθεί χρησιμοποιώντας τα ραδιοπλήκτρα με την εξής σημασία: Στην περιοχή Optional method steps: Final detritylation, πρέπει να υπάρχει ένα σημάδι ελέγχου για σύνθεση Trityl-Off (Χωρίς τριτύλιο), ενώ δεν πρέπει να υπάρχει σημάδι ελέγχου για σύνθεση Trityl-On (Με τριτύλιο). Ενεργά σημάδια ελέγχου συνιστώνται πάντα για τα εξής: - Purge amidite (αμιδίτες + τετραζόλιο/ενεργοποιητής). - Purge solvents (αντιδραστήριο επικάλυψης + οξείδωσης ή/και θειολίωσης). - Column wash. Σημείωση: Κατά την πρώτη ανάλυση, σε όλα τα στοιχεία Optional method steps το σημάδι ελέγχου πρέπει να είναι ενεργοποιημένο. 106 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

107 7 Λειτουργία 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης Βήμα 7 Ενέργεια Όταν η ακολουθία και τα στοιχεία Optional method steps έχουν οριστεί, κάντε κλικ στην επιλογή Create Method. Ανοίγει το παράθυρο διαλόγου Save As. 8 9 Καταχωρίστε ένα όνομα μεθόδου σύνθεσης, για παράδειγμα, Test13. Η προεπιλεγμένη ρύθμιση για την τεχνική είναι η επιλογή Any. Μην επιλέγετε άλλες τεχνικές. Κάντε κλικ στο OK, για να αποθηκεύσετε τη μέθοδο σύνθεσης. Κάντε κλικ στην καρτέλα Variables. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 107

108 7 Λειτουργία 7.3 Ρύθμιση ανάλυσης Βήμα Ενέργεια Καταχωρίστε την τιμή Weight_of_Support που υπολογίστηκε κατά την πλήρωση της στήλης. Καταχωρίστε την κατάλληλη τιμ Loading_of_Support. Βεβαιωθείτε ότι η τιμή Conc_Amidite_DNA έχει οριστεί στη συγκέντρωση αμιδιτών στις φιάλες αμιδιτών. Επιλέξτε File:Save ή κάντε κλικ στο εικονίδιο Save, για να αποθηκεύσετε τη μέθοδο, η οποία είναι πλέον έτοιμη για χρήση σε μια ανάλυση σύνθεσης. 108 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

109 7 Λειτουργία 7.4 Προετοιμασία πριν από την έναρξη 7.4 Προετοιμασία πριν από την έναρξη Πριν την πρώτη ανάλυση Πριν από την έναρξη της πρώτης ανάλυσης, εκτελέστε τις παρακάτω διαδικασίες προετοιμασίας: Συνδέστε όλους τους εξωτερικούς σωλήνες στο σύστημα, συμπεριλαμβανομένων των σωλήνων εισαγωγής αντιδραστηρίων, εισαγωγής αμιδιτών και εξαγωγής αποβλήτων. Γεμίστε μια στήλη με Primer Support. Συνδέστε τη στήλη σε έναν συγκρατητήρα στήλης στο όργανο Συνδέστε τα αντιδραστήρια και τους αμιδίτες. Καθαρίστε όλους τους σωλήνες αντιδραστηρίων και αμιδιτών. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 109

110 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Επιλογή μεθόδου Βήμα 1 Ενέργεια Στο παράθυρο UNICORN Manager, κάντε κλικ στη μέθοδο που θέλετε να χρησιμοποιήσετε με το δεξιό κουμπί του ποντικού και, στη συνέχεια, κάντε κλικ στην επιλογή Run. Μετά από μερικά δευτερόλεπτα, θα εμφανιστεί η πρώτη σελίδα του πρωτοκόλλου έναρξης. Κατά τη διαδικασία έναρξης της σύνθεσης, θα μεταβείτε στο πρωτόκολλο έναρξης, με επιλεγμένες σελίδες της μεθόδου σύνθεσης για εμφάνιση κατά την έναρξη μιας ανάλυσης σύνθεσης. Θα αναγνωρίσετε τις σελίδες από το Method Editor. 110 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

111 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Βήμα 2 Ενέργεια Στη σελίδα Variables, επαληθεύστε τις τιμές που έχουν εισαχθεί για τις μεταβλητές Weight_of_support και Loading_of_support. Σημείωση: Για τα συστήματα ÄKTAoligopilot plus 10, εισάγεται μόνο η κλίμακα. 3 Κάντε κλικ στο Next, για να προχωρήσετε στην επόμενη σελίδα. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 111

112 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Βήμα 4 Ενέργεια Ανοίγει η σελίδα Text Method, η οποία δεν μπορεί να τροποποιηθεί στο στάδιο αυτό. Ωστόσο, συνιστάται ο έλεγχος και η διόρθωση της ακολουθίας, καθώς η διαδικασία που εκτελείται κατά τη σύνθεση είναι η διαδικασία που έχει προγραμματιστεί στη μέθοδο κειμένου. Η σελίδα Sequence χρησιμοποιείται για τη δημιουργία της μεθόδου κειμένου. 5 Κάντε κλικ στην επιλογή Next. 112 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

113 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Βήμα 6 Ενέργεια Στο πεδίο Start Notes της σελίδας Notes, ο χρήστης μπορεί να προσθέσει πληροφορίες σχετικά με τη σύνθεση. Οι σημειώσεις αποθηκεύονται μαζί με το αρχείο αποτελεσμάτων σύνθεσης και μπορούν να προβληθούν μετά την ολοκλήρωση της σύνθεσης. 7 Κάντε κλικ στην επιλογή Next. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 113

114 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Βήμα 8 Ενέργεια Στη σελίδα Evaluation Procedures, επιλέξτε μια διαδικασία αξιολόγησης και θα εκτυπωθεί αυτόματα μια αναφορά σύνθεσης στο τέλος της σύνθεσης. Επίσης, η αναφορά σύνθεσης μπορεί να εκτυπωθεί χειροκίνητα κατά τη διάρκεια της αξιολόγησης Κάντε κλικ στην επιλογή Next. Στη σελίδα Sequence, εμφανίζεται η ακολουθία και το πεδίο Optional method steps, τα οποία ωστόσο δεν μπορούν να τροποποιηθούν. 114 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

115 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Βήμα Ενέργεια Κάντε κλικ στην επιλογή Next. Ανοίγει η σελίδα Questions. Οι απαντήσεις και οι ερωτήσεις από τη σελίδα αυτή θα συμπεριληφθούν στην αναφορά σύνθεσης. Οι ερωτήσεις δεν επηρεάζουν την εκτέλεση της μεθόδου σύνθεσης. Πρέπει να απαντήσετε στις υποχρεωτικές ερωτήσεις πριν συνεχίσετε. 13 Κάντε κλικ στην επιλογή Next. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 115

116 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Βήμα 14 Ενέργεια Ανοίγει η σελίδα Result Name. Το προεπιλεγμένο όνομα του αρχείου αποτελεσμάτων σύνθεσης περιλαμβάνει την ημερομηνία (με αριθμούς) + 01, όπου ο αριθμός 01 προστίθεται εάν εκτελεστούν πολλές συνθέσεις κατά τη διάρκεια της ίδιας ημέρας (στην περίπτωση αυτή, η κατάληξη για την επόμενη ανάλυση θα είναι 02 και ούτω καθεξής). Μπορείτε να προσθέσετε κείμενο στο προεπιλεγμένο όνομα ή να καταχωρίσετε ένα διαφορετικό όνομα για το αρχείο αποτελεσμάτων. Εάν θέλετε να αποθηκεύσετε το αρχείο αποτελεσμάτων σε έναν συγκεκριμένο φάκελο, κάντε κλικ στην επιλογή Browse για να εντοπίσετε το φάκελο και, στη συνέχεια, κάντε διπλό κλικ στο φάκελο. Κάντε κλικ στο OK. 15 Επαληθεύστε τη διαδρομή στο στοιχείο Directory. 116 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

117 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Έναρξη ανάλυσης Βήμα 1 Ενέργεια Μετά την καταχώριση ενός ονόματος και της διαδρομής καταλόγου, κάντε κλικ στην επιλογή Start. Η ανάλυση σύνθεσης θα ξεκινήσει. Έχει ρυθμιστεί η κατάσταση Pause για την ανάλυση και εμφανίζεται το παρακάτω μήνυμα. 2 Διαβάστε το μήνυμα και επιβεβαιώστε κάνοντας κλικ στην επιλογή Continue. Θα εμφανιστεί ένα άλλο μήνυμα. 3 Διαβάστε το μήνυμα και επιβεβαιώστε κάνοντας κλικ στην επιλογή Continue. Η λειτουργία του συστήματος θα συνεχιστεί. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 117

118 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Προβολή ανάλυσης Μπορείτε να δείτε την εξέλιξη της ανάλυσης λεπτομερώς στην υπομονάδα System Control. Κατά τη διάρκεια της σύνθεσης, μπορούν να εμφανιστούν τα ακόλουθα τμήματα προβολής: Run Data, Curves, Flow scheme και Logbook Αρ. Όνομα Αρ. Όνομα 1 Run Data 4 Logbook 2 Curves 5 Synthesis Data 3 Flow scheme Οι online ενσωματωμένες τιμές τριτυλίου που υποδεικνύουν την απόδοση σύζευξης μπορούν να εμφανιστούν επιλέγοντας View:Synthesis Data. Οι τιμές Duration και Retention εμφανίζονται σε ml ή min, ανάλογα με την επιλογή για τον άξονα Χ στο παράθυρο προβολής Curves. Για εναλλαγή μεταξύ ml ή min, κάντε κλικ στον άξονα Χ. Η σειρά που επισημαίνεται στο Synthesis Data υποδεικνύει τον κύκλο που εκτελείται τη δεδομένη στιγμή. Προσαρμογή παραθύρων προβολής Για να προσαρμόσετε τα παράθυρα προβολής, κάντε δεξιό κλικ στο σχετικό παράθυρο προβολής και επιλέξτε Properties. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με την προσαρμογή των παραθύρων προβολής, ανατρέξτε στην τεκμηρίωση χρήστη του UNICORN. 118 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

119 7 Λειτουργία 7.5 Εκτέλεση ανάλυσης Τερματισμός ανάλυσης Για να διακόψετε την ανάλυση σε ένα σύστημα πριν ολοκληρωθεί: Κάντε κλικ στην επιλογή End επάνω από το παράθυρο προβολής Run data. Χρώματα ένδειξης κατάστασης Η ένδειξη κατάστασης βρίσκεται στο κάτω μέρος του System Control. Ο παρακάτω πίνακας παρουσιάζει την αντιστοιχία των χρωμάτων της ένδειξης με τις διάφορες καταστάσεις της ανάλυσης. Χρώμα ένδειξης Λευκό Πράσινο Κίτρινο Κόκκινο Κατάσταση ανάλυσης Τέλος Ανάλυση ή χειροκίνητη λειτουργία Αναμονή Παύση Ένδειξη σφαλμάτων Όταν ενεργοποιηθεί μια προειδοποίηση ή ένας συναγερμός από ένα σύστημα, εμφανίζεται ένας κωδικός σφάλματος. Αξιολόγηση αποτελεσμάτων Ανατρέξτε στην τεκμηρίωση χρήση του UNICORN για τον τρόπο αξιολόγησης των αποτελεσμάτων. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 119

120 8 Διαδικασίες μετά τη σύνθεση 8 Διαδικασίες μετά τη σύνθεση Η ενότητα αυτή περιγράφει τη διαδικασία που πρέπει να εφαρμοστεί για ανάκτηση του προϊόντος ολιγονουκλεοτιδίων DNA από το φορέα και αφαίρεση των προστατευτικών ομάδων από το προϊόν. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Επικίνδυνες ουσίες. Κατά τη χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών, λαμβάνετε όλα τα κατάλληλα προστατευτικά μέτρα, όπως είναι η χρήση προστατευτικού ρουχισμού, γυαλιών και γαντιών ανθεκτικών στις ουσίες που χρησιμοποιούνται. Τηρείτε τους τοπικούς ή/και εθνικούς κανονισμούς σχετικά με την ασφαλή λειτουργία και συντήρηση του προϊόντος. Σημείωση: Αυτό το κεφάλαιο αναφέρεται στο Primer Support 5G και μπορεί να μην ισχύει για άλλους φορείς. Να συμβουλεύεστε πάντα τις οδηγίες που παρέχονται με τους στερεούς φορείς που χρησιμοποιούνται. Μετά από μια ολοκληρωμένη σύνθεση, αποσυνδέστε τη στήλη (αντιδραστήρα) από τον συγκρατητήρα στήλης και ακολουθήστε τα βήματα στον παρακάτω πίνακα. Βήμα 1 2 Ενέργεια Μετά από μια ολοκληρωμένη σύνθεση, αποσυνδέστε τη στήλη (αντιδραστήρα) από το συγκρατητήρα στήλης. Τοποθετήστε τον αντιδραστήρα σε μια φιάλη κενού με προσαρμογέα (χωρίς να αφαιρέσετε το πάνω μέρος του αντιδραστήρα). Εφαρμόστε κενό για >30 λεπτά για να στεγνώσει ο φορέας. Η αύξηση του βάρους στήλης θα πρέπει να είναι τουλάχιστον 1 γραμμάριο για τη στήλη 6,3 ml και 0,2 γραμμάρια για τη στήλη 1,2 ml. Αυτή η αύξηση βάρους προϋποθέτει ότι χρησιμοποιείται Primer Support 5G για τη δημιουργία του ολιγονουκλεοτιδίου Test ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

121 8 Διαδικασίες μετά τη σύνθεση Βήμα 3 Ενέργεια Ξεβιδώστε το επάνω μέρος του αντιδραστήρα κατά την εφαρμογή κενού. Εκτονώστε το κενό και αφαιρέστε τον αντιδραστήρα από το φίλτρο κενού. 4 Χρησιμοποιώντας μια σπάτουλα, μεταφέρετε τον φορέα σε μια φιάλη ή σε ένα σωληνάριο. Για αντοχή κατά την έκθεση στις συνθήκες αποπροστασίας, η φιάλη ή το σωληνάριο πρέπει να διαθέτει στεγανοποιητικό από PTFE. Μετά τη χρήση, καθαρίστε τον αντιδραστήρα της στήλης με υπερήχους για 30 λεπτά σε μεθανόλη. Στεγνώστε καλά τον αντιδραστήρα πριν από την εκ νέου χρήση. 5 Με μια σπάτουλα, μεταφέρετε το φορέα σε μια φιάλη ή σωληνάριο. Για προστασία από την έκθεση στις συνθήκες αποπροστασίας, η φιάλη ή ο σωλήνας θα πρέπει να έχουν σφράγιση PTFE. Σημείωση: Μετά τη χρήση, καθαρίστε τον αντιδραστήρα στήλης με υπερήχους για 30 λεπτά σε μεθανόλη. Πριν την επαναχρησιμοποίηση, στεγνώστε τον αντιδραστήρα πολύ καλά. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 121

122 8 Διαδικασίες μετά τη σύνθεση Βήμα 6 Ενέργεια Προσθέστε τουλάχιστον 10 ml υδροξειδίου του αμμωνίου ανά γραμμάριο φορέα. Ανακινήστε έντονα και επωάστε κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 55 C. 7 Αφήστε το μείγμα αντίδρασης να κρυώσει πριν ανοίξετε τη φιάλη ή το σωληνάριο και, στη συνέχεια, φιλτράρετε το περιεχόμενο χρησιμοποιώντας ένα φίλτρο υάλου (μέγεθος πόρων 3-4). Χρησιμοποιήστε ένα δοχείο περιστροφικού εξατμιστήρα για τη συλλογή του διηθήματος Πλύνετε το φορέα με μίγμα αιθανόλης-νερού 1:1 όγκου ίσου με τουλάχιστον 5 φορές τον όγκο της στήλης. Προσθέστε 0,5-1 όγκο αιθανόλης για μείωση της εκτίναξης του υγρού και, στη συνέχεια, εξατμίστε το διήθημα σε έναν περιστροφικό εξατμιστήρα. Διαλύστε ξανά το προϊόν ολιγονουκλεοτιδίων όπως απαιτείται. 122 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

123 9 Συντήρηση 9 Συντήρηση Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό παρέχει πληροφορίες στους χρήστες και στο προσωπικό συντήρησης για τον καθαρισμό, τη συντήρηση, τη βαθμονόμηση και την αποθήκευση του προϊόντος. Συντήρηση που εκτελείται από το χρήστη Η τακτική συντήρηση συμβάλλει σημαντικά στην ασφαλή και απρόσκοπτη λειτουργία του οργάνου σας. Ο χρήστης πρέπει να εκτελεί καθημερινή και μηνιαία συντήρηση. Η προληπτική συντήρηση πρέπει να εκτελείται σε ετήσια βάση από εξειδικευμένο προσωπικό συντήρησης. Για τη συντήρηση ενός συγκεκριμένου εξαρτήματος, διαβάστε προσεκτικά το εγχειρίδιο του εξαρτήματος και ακολουθήστε τις οδηγίες. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 123

124 9 Συντήρηση Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιλαμβάνει τις παρακάτω ενότητες: Ενότητα 9.1 Προφυλάξεις ασφαλείας 9.2 Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη 9.3 Καθαρισμός 9.4 Συντήρηση στοιχείων 9.5 Αποσυναρμολόγηση και συναρμολόγηση στοιχείων και αναλωσίμων 9.6 Αντικατάσταση ασφαλειών 9.7 Bαθμονόμηση 9.8 Προετοιμασία του ÄKTAoligopilot plus για αναμονή 9.9 Αποθήκευση Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

125 9 Συντήρηση 9.1 Προφυλάξεις ασφαλείας 9.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Εκτονώνετε την πίεση του αδρανούς αερίου στις φιάλες, πριν επιχειρήσετε να αντικαταστήσετε οποιοδήποτε στοιχείο στο σύστημα. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Επικίνδυνες χημικές ουσίες κατά τη συντήρηση. Κατά τη χρήση επικίνδυνων χημικών ουσιών για τον καθαρισμό του συστήματος ή της στήλης, απαιτείται πλύση του συστήματος με ακετονιτρίλιο και αποστράγγιση ή στέγνωμα των σωλήνων. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Χρησιμοποιείτε μόνο εγκεκριμένα ανταλλακτικά. Για τη συντήρηση ή την επισκευή του προϊόντος, πρέπει να χρησιμοποιούνται μόνο ανταλλακτικά και εξαρτήματα που έχουν εγκριθεί ή παρέχονται από την GE Healthcare. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος ανατροπής. Εάν από το πλαίσιο αφαιρεθούν εξαρτήματα μεγάλου βάρους του οργάνου, όπως είναι η αντλία, και η πόρτα είναι εντελώς ανοικτή, η μετατόπιση του κέντρου βάρους του συστήματος μπορεί να οδηγήσει σε ανατροπή του συστήματος. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Μετά τη συναρμολόγηση, το σύστημα σωλήνων πρέπει να ελεγχθεί για διαρροές στη μέγιστη πίεση, ώστε να διασφαλίζεται η συνεχής προστασία από τραυματισμούς λόγω εκτόξευσης υγρών, θραύσης σωλήνων ή δυνητικά εκρηκτικής ατμόσφαιρας. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 125

126 9 Συντήρηση 9.1 Προφυλάξεις ασφαλείας ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από τη λειτουργία, όλες οι συνδέσεις διεργασίας και το σύστημα σωλήνων πρέπει να ελεγχθούν για διαρροές στη μέγιστη πίεση, ώστε να διασφαλίζεται η συνεχής προστασία από κίνδυνο τραυματισμού λόγω εκτόξευσης υγρών, θραύσης σωλήνων ή δυνητικά εκρηκτικής ατμόσφαιρας. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από την αποσυναρμολόγηση, βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει πίεση στο σύστημα σωλήνων. ΠΡΟΣΟΧΗ Βεβαιωθείτε ότι το σύστημα σωλήνων δεν εμφανίζει απολύτως καμία διαρροή πριν από την εκτέλεση των διαδικασιών επιτόπιου καθαρισμού (CIP) ή επιτόπιας απολύμανσης (SIP) στη στήλη. ΠΡΟΣΟΧΗ Κίνδυνος πυρκαγιάς. Ακολουθήστε τις οδηγίες στο ÄKTAoligopilot plus Operating Instructions για τη σωστή εγκατάσταση μιας καινούριας λυχνίας UV. Εάν η λάμπα δεν εγκατασταθεί σωστά, μπορεί να υπερθερμανθεί και να προκαλέσει κίνδυνο πυρκαγιάς. ΣΗΜΕΙΩΣΗ Καθαρισμός. Διατηρείτε το εξωτερικό του οργάνου στεγνό και καθαρό. Σκουπίζετε τακτικά με ένα μαλακό, υγρό πανί και ήπιο καθαριστικό, εάν απαιτείται. Αφήστε το όργανο να στεγνώσει πλήρως πριν από τη χρήση. 126 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

127 9 Συντήρηση 9.2 Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη 9.2 Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη Πίνακας 9.1 είναι ένας οδηγός για τις εργασίες και τα διαστήματα συντήρησης στα οποία πρέπει να εκτελούνται αυτές οι εργασίες από το χρήστη. Ωστόσο, ο χρήστης είναι υπεύθυνος για την επιλογή των εργασιών και τη διάρκεια των διαστημάτων που απαιτούνται για τη διατήρηση της σωστής λειτουργίας και της ασφάλειας του συστήματος. Πίνακας 9.1: Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη Διάστημα Ημερησίως Ενέργεια Έλεγχος διαρροών Πλύση διαδρομής ροής συστήματος Βαθμονόμηση ηλεκτροδίου ph (προαιρετικά) Οδηγίες/παραπομπές Επιθεωρήστε οπτικά το σύστημα για διαρροές. Επιθεωρήστε την αντλία P-900 για διαρροές. Σημείωση: Εάν το υγρό έκπλυσης αποχρωματιστεί μετά από 20 αναλύσεις ή λιγότερες, αντικαταστήστε τις σφραγίσεις πιστονιού. 1 Για τον καθαρισμό της διαδρομής ροής, ανατρέξτε στην ενότητα Καθαρισμός διαδρομής ροής συστήματος, στη σελίδα Για την περίπτωση μη χρήσης του συστήματος για λίγες ημέρες, ανατρέξτε στην ενότητα Ενότητα 9.9 Αποθήκευση, στη σελίδα 141. Βαθμονομήστε το ηλεκτρόδιο ph (εάν απαιτείται) σύμφωνα με το Monitor ph/c-900 User Manual. Επιθεωρήστε το όργανο Monitor UV-900 σύμφωνα με τις οδηγίες λειτουργίας UV-900, αριθμός προϊόντος ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 127

128 9 Συντήρηση 9.2 Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη Διάστημα Έλεγχος φίλτρων εισαγωγής Εβδομαδιαίως Ενέργεια Φίλτρα φιάλης και φιαλιδίων (υαλώδη φίλτρα) Αντικατάσταση φίλτρου σε σειρά (εάν υπάρχει) Αλλαγή διαλύματος έκπλυσης αντλίας Οδηγίες/παραπομπές Ελέγξτε οπτικά τα φίλτρα εισαγωγής και αντικαταστήστε τα, εάν απαιτείται. Ελέγξτε ότι οι σύνδεσμοι στο πώμα φιάλης και στον πίνακα εισόδων είναι σφιχτοί. Αντικαταστήστε τα υαλώδη φίλτρα Σημείωση: Μη χρησιμοποιείτε υαλώδη φίλτρα σε φιάλες με χλωριωμένους διαλύτες. Το τμήμα του φίλτρου θα διογκωθεί και θα χαλαρώσει. Αντικαταστήστε το φίλτρο σε σειρά. Αλλάξτε το διάλυμα έκπλυσης. Χρησιμοποιείτε πάντα διάλυμα ακετονιτριλίου ως διάλυμα έκπλυσης. Εάν ο όγκος του διαλύματος έκπλυσης στη φιάλη αποθήκευσης έχει αυξηθεί, μπορεί να υπάρχει εσωτερική διαρροή στην αντλία. Αντικαταστήστε τα στεγανοποιητικά του εμβόλου σύμφωνα με το Εγχειρίδιο χρήστη. Εάν ο όγκος του διαλύματος έκπλυσης στη φιάλη αποθήκευσης έχει μειωθεί σημαντικά, ελέγξτε εάν οι σύνδεσμοι του συστήματος έκπλυσης είναι σωστά τοποθετημένοι. Εάν η διαρροή δεν προέρχεται από τους συνδέσμους του συστήματος έκπλυσης, μπορεί να υπάρχει διαρροή στις μεμβράνες έκπλυσης ή στα στεγανοποιητικά του εμβόλου. Αντικαταστήστε τις μεμβράνες και τα στεγανοποιητικά του εμβόλου σύμφωνα με το Εγχειρίδιο χρήστη. Σημείωση: Αλλάξτε τυχόν παλιά διαλύματα αμιδιτών. Έτσι εξασφαλίζεται η ποιότητα των διαλυμάτων που χρησιμοποιούνται. 128 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

129 9 Συντήρηση 9.2 Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη Διάστημα Μηνιαίως Ετησίως Ενέργεια Περιοριστής ροής Πολλαπλή αδρανούς αερίου Επιθεώρηση βαλβίδων Πώματα φιαλών για φιάλες κάλυψης A και DEA Οδηγίες/παραπομπές Ελέγξτε εάν στον περιοριστή ροής αναπτύσσονται οι παρακάτω τιμές πίεσης επαναφοράς: FR-902: 0,2 ±0,05 MPa Ελέγξτε την πίεση επαναφοράς ως εξής: 1 Αποσυνδέστε τον περιοριστή ροής. 2 Συνδέστε έναν σωλήνα (περίπου 1 m, εσωτ. διάμ. 1 mm) σε μια ελεύθερη θύρα της βαλβίδας έγχυσης. Ρυθμίστε τη βαλβίδα χειροκίνητα στη θύρα αυτή. Τοποθετήστε το ανοικτό άκρο σε ένα δοχείο αποβλήτων. 3 Θέστε σε λειτουργία την αντλία με ακετονιτρίλιο και ρυθμό ροής 10 ml/min. Ελέγξτε την πίεση επαναφοράς (Bp1) στην οθόνη της αντλίας ή στο παράθυρο Run Data. 4 Συνδέστε τον περιοριστή ροής στο ανοικτό άκρο του σωλήνα (προσέξτε τη σήμανση IN). Τοποθετήστε τον περιοριστή ροής στο δοχείο αποβλήτων. 5 Θέστε σε λειτουργία την αντλία με ακετονιτρίλιο και ρυθμό ροής 10 ml/min. Ελέγξτε την πίεση επαναφοράς (Bp2) στην οθόνη της αντλίας ή στο παράθυρο Run Data. 6 Υπολογίστε την πίεση επαναφοράς που δημιουργείται από τον περιοριστή ροής. Αντικαταστήστε τον, εάν η πίεση επαναφοράς δεν βρίσκεται εντός των ορίων. Επιθεωρήστε τη βαλβίδα εκτόνωσης πίεσης για διαρροές Σημείωση: Ως ένα πρώτο μέτρο, τραβήξτε τη βαλβίδα εκτόνωσης προς τα έξω και ελευθερώστε την. Εάν απαιτείται, καθαρίστε τον στρογγυλό δακτύλιο χρησιμοποιώντας αιθανόλη και ένα μαλακό πανί. Ελέγξτε εάν υπάρχει εξωτερική ή εσωτερική διαρροή. Αντικαθιστάτε την πλάκα καναλιού και την πλάκα διανομής ετησίως ή όταν απαιτείται. Ανατρέξτε στο σχετικό φύλλο οδηγιών της βαλβίδας. Αντικατάσταση σφραγίσεων ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 129

130 9 Συντήρηση 9.2 Πρόγραμμα συντήρησης χρήστη Διάστημα Όταν απαιτείται Ενέργεια Αντικατάσταση μεμβρανών ή ζυγού Οδηγίες/παραπομπές Ανατρέξτε στο [[ManualNameInstrumentComplete]]. 130 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

131 9 Συντήρηση 9.3 Καθαρισμός 9.3 Καθαρισμός Καθαρισμός πριν από προγραμματισμένη συντήρηση/επισκευή Για να διασφαλιστεί η προστασία και η ασφάλεια του προσωπικού συντήρησης, το σύνολο του εξοπλισμού και οι χώροι εργασίας πρέπει να είναι καθαροί και απαλλαγμένοι από επικίνδυνους ρύπους πριν ξεκινήσουν οι εργασίες συντήρησης από τον μηχανικό συντήρησης. Συμπληρώστε τον κατάλογο ελέγχου στο Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας για επιτόπιες εργασίες επισκευής ή το Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας για επιστροφές προϊόντων ή εργασίες επισκευής, ανάλογα με το εάν το όργανο πρόκειται να υποβληθεί σε εργασίες επισκευής επιτόπου ή να επιστραφεί. Αντιγράψτε το απαραίτητο έντυπο από την ενότητα Ενότητα 11.4 Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας, στη σελίδα 167 ή εκτυπώστε το από το αρχείο PDF που είναι διαθέσιμο στο CD τεκμηρίωσης χρήστη. Καθαρισμός διαδρομής ροής συστήματος Εκτελέστε έκπλυση του συστήματος με ακετονιτρίλιο χρησιμοποιώντας το παρεχόμενο πρότυπο μεθόδου τερματισμού λειτουργίας. Καθαρισμός των συνδέσμων οπτικών ινών Ανατρέξτε στην αντίστοιχη ενότητα στο Monitor UV-900 Monitor ph/c-900 User Manual. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 131

132 9 Συντήρηση 9.3 Καθαρισμός Καθαρισμός της κυψελίδας ροής UV-900 της συσκευής παρακολούθησης Καθαρισμός της κυψελίδας ροής UV-900 της συσκευής παρακολούθησης Εάν το επίπεδο αυτόματου μηδενισμού είναι υψηλότερο από 1000 mau στα nm, η κυψελίδα πρέπει να καθαριστεί για να περάσει τη δοκιμή εγκατάστασης (βηματική διαβάθμιση) για να λάβει τις κατάλληλες τιμές detrit κατά τη σύνθεση Η διαδικασία διαρκεί 30 λεπτά από την αρχή μέχρι το τέλος. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Όταν εκτελείτε αυτή τη διαδικασία, να φοράτε προστατευτικά γυαλιά, εργαστηριακή ρόμπα και γάντια. Απαιτούμενα στοιχεία Στοιχείο MilliQ ή απιονισμένο νερό Νιτρικό οξύ, 69-70% Σωλήνας ETFE, O.D. 1/16", I.D. 1 mm ( ) Συνδετήρας χειροκίνητης σύσφιξης, 1/16" ( ) Αρσενικός/Θηλυκός σύνδεσμος luer, 1/16" ( ) Σύριγγα 10 ml Ποτήρι ζέσεως Ποσότητα 100 ml 20 ml 20 cm Οδηγίες για τον καθαρισμό της κυψελίδας ροής UV-900 Βήμα 1 Ενέργεια Συνδέστε το αρσενικό luer με την είσοδο κυψελίδας UV. 132 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

133 9 Συντήρηση 9.3 Καθαρισμός Καθαρισμός της κυψελίδας ροής UV-900 της συσκευής παρακολούθησης Βήμα Ενέργεια Συνδέστε τον σφιγμένο με τα δάχτυλα σύνδεσμο 1/16" μέσω του σωλήνα ETFE στην έξοδο κυψελίδας UV. Συνδέστε μια άδεια σύριγγα 10 ml στο luer για να αναρροφήσετε νερό, αέρα και διαλύματα καθαρισμού. Τοποθετήστε το σωλήνα ETFE σε ένα ποτήρι ζέσεως με νερό. Αναρροφήστε 8-10 ml νερό μέσα στη σύριγγα. Αναρροφήστε 8-10 ml αέρα μέσα στη σύριγγα για να αφαιρέσετε το νερό. Ρίξτε το νιτρικό οξύ μέσα στο ποτήρι ζέσεως και τοποθετήστε το σωλήνα ETFE επάνω σε αυτό. Αναρροφήστε 8-10 ml διάλυμα καθαρισμού μέσα στη σύριγγα. Αφήστε τη σύριγγα και το διάλυμα καθαρισμού ακίνητα για 30 λεπτά. Αναρροφήστε 2-3 ml αέρα μέσα στη σύριγγα. Βγάλτε τη σύριγγα που περιέχει το διάλυμα καθαρισμού. Συνδέστε την άδεια σύριγγα 10 ml στο luer. Τοποθετήστε το σωλήνα ETFE σε ένα ποτήρι ζέσεως με νερό. Αναρροφήστε 10 ml νερό μέσα στη σύριγγα. Κάντε το αυτό δύο φορές Αναρροφήστε 8-10 ml αέρα μέσα στη σύριγγα για να αφαιρέσετε το νερό. Συνδέστε ξανά την κυψελίδα UV στο σύστημα. Εκπλύντε την κυψελίδα UV αντλώντας ακετονιτρίλιο στα απόβλητα. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 133

134 9 Συντήρηση 9.4 Συντήρηση στοιχείων 9.4 Συντήρηση στοιχείων Σε αυτή την ενότητα περιγράφεται η συντήρηση της αντλίας P-900. Η συντήρηση και η προληπτική αντικατάσταση ανταλλακτικών των άλλων κύριων στοιχείων περιγράφεται στα αντίστοιχα εγχειρίδια που περιλαμβάνονται στην τεκμηρίωση του συστήματος. Η τεκμηρίωση του συστήματος περιλαμβάνει επίσης κατάλογο ανταλλακτικών για τον εντοπισμό κοινών ανταλλακτικών και των κωδικών τους αριθμών για παραγγελία. H λίστα αυτή διατίθεται επίσης online, στη διεύθυνση Καθαρισμός της αντλίας P-900 Καθαρίστε την αντλία ακολουθώντας τις οδηγίες στον παρακάτω πίνακα: Βήμα 1 Ενέργεια Η αντλία P-900 έχει τέσσερις βαλβίδες. Κατά τον καθαρισμό, ανοίξτε μία από τις βαλβίδες κατά ½ έως 1 στροφή αριστερόστροφα. Αποτέλεσμα: Θα ρέει υγρό από τον εξαερισμό της βαλβίδας, με την προϋπόθεση ότι οι φιάλες αντιδραστηρίων βρίσκονται υπό πίεση. 2 3 Περιμένετε μέχρι να βγαίνει μια σταθερή ροή διαλύτη από τη βαλβίδα καθαρισμού. Αυτό μπορεί να διαρκέσει μερικά λεπτά. Εάν οι γραμμές εισόδου είναι πολύ μεγάλες, μπορεί να χρειαστεί να συνδέσετε μια, ανθεκτική στο διαλύτη, σύριγγα ml στη βαλβίδα καθαρισμού P-900 και να βοηθήσετε το διαλύτη να εισέλθει στην αντλία με τη χρήση της σύριγγας. 134 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

135 9 Συντήρηση 9.4 Συντήρηση στοιχείων Βήμα 4 Ενέργεια Όταν δημιουργηθεί μια σταθερή ροή, κλείστε τη βαλβίδα καθαρισμού και συνεχίστε με τις υπόλοιπες 3 κεφαλές αντλίας. Πλήρωση του συστήματος έκπλυσης σφράγισης πιστονιού της αντλίας P-900 Βήμα 1 Ενέργεια Συνδέστε το σωλήνα και τη βαλβίδα ελέγχου σύμφωνα με την παρακάτω εικόνα. Σημειώστε την κατεύθυνση ροής στη βαλβίδα αντεπιστροφής. 2 3 Βυθίστε το σωλήνα έκπλυσης (1) διαμέσου της μεμβράνης στο περικλειόμενο πώμα φιάλης μέσα σε ένα δοχείο (2) που περιέχει 100% ακετονιτρίλιο. Συνδέστε μια σύριγγα με τους περικλειόμενους συνδέσμους στο σωλήνα έκπλυσης (3) που είναι συνδεδεμένος στην κάτω πλευρά της κεφαλής αριστερής αντλίας στην αντλία A (4). Αποστραγγίστε αργά 5-10 ml διαλύματος έκπλυσης μέσα στη σύριγγα. Σημείωση: Το υλικό στο εσωτερικό του luer προς τον θηλυκό προσαρμογέα 1/16" δεν είναι συμβατό με το ακετονιτρίλιο. Βεβαιωθείτε ότι η εμβύθιση συμβαίνει μόνο για πολύ σύντομες χρονικές περιόδους. 4 Αφαιρέστε τη σύριγγα και εισαγάγετε το σωλήνα (3) διαμέσου της μεμβράνης του πώματος φιάλης μέσα στη φιάλη. Βεβαιωθείτε ότι ο σωλήνας είναι περίπου 1 cm πάνω από την επιφάνεια του υγρού επειδή έτσι θα είναι πιο εύκολο να παρατηρηθεί εάν το σύστημα έκπλυσης λειτουργεί όπως αναμένεται κατά τη διάρκεια της σύνθεσης. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 135

136 9 Συντήρηση 9.4 Συντήρηση στοιχείων Βήμα 5 Ενέργεια Όταν η στάθμη υγρού/ακετονιτριλίου στη φιάλη είναι χαμηλή, προσθέστε διαλύτη μέχρι να είναι 1 cm κάτω από το σωλήνα 3. Πρέπει να αλλάζετε το διαλύτη όταν αποχρωματιστεί (καφέ, κίτρινο χρώμα). Εάν ο διαλύτης αποχρωματιστεί σε λιγότερο από μια εβδομάδα, μπορεί να χρειαστεί έλεγχος σέρβις και αντικατάσταση των σφραγίσεων της αντλίας. Αντικατάσταση των συστατικών μερών της αντλίας P-900 Για την αντικατάσταση του εμβόλου, της σφράγισης εμβόλου, της εισόδου βαλβίδας και των βαλβίδων εξόδου, ανατρέξτε στις σχετικές ενότητες στο Pump P-900 User Manual. Αντικατάσταση των βαλβίδων IV-908 και INV-907H Αποσυναρμολογήστε τις βαλβίδες και αντικαταστήστε την πλάκα διανομής. Σημείωση: Τα ανταλλακτικά δεν είναι εναλλάξιμα μεταξύ των τύπων βαλβίδων. Για περισσότερες πληροφορίες, δείτε τα εγχειρίδια των εξαρτημάτων βαλβίδων που συνοδεύουν το ÄKTAoligopilot plus. 136 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

137 9 Συντήρηση 9.5 Αποσυναρμολόγηση και συναρμολόγηση στοιχείων και αναλωσίμων 9.5 Αποσυναρμολόγηση και συναρμολόγηση στοιχείων και αναλωσίμων Προφυλάξεις Ο χειριστής πρέπει να διαβάσει προσεκτικά και να κατανοήσει τις οδηγίες που παρέχονται για κάθε εξάρτημα πριν την αποσυναρμολόγηση και συναρμολόγηση του εξαρτήματος. Όταν αντικαθιστάτε αναλώσιμα, όπως σωλήνες ή συνδέσμους σωλήνων, πρέπει να ληφθούν όλες οι απαραίτητες προφυλάξεις ασφάλειας. Επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της GE Healthcare, εάν χρειάζεστε περαιτέρω πληροφορίες ή βοήθεια. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Αποσύνδεση από το ηλεκτρικό δίκτυο. Αποσυνδέετε πάντα το όργανο από το ηλεκτρικό δίκτυο πριν από την αντικατάσταση εξαρτημάτων του οργάνου, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από την αποσυναρμολόγηση, βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει πίεση στο σύστημα σωλήνων. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Πριν από τη λειτουργία, όλες οι συνδέσεις διεργασίας και το σύστημα σωλήνων πρέπει να ελεγχθούν για διαρροές στη μέγιστη πίεση, ώστε να διασφαλίζεται η συνεχής προστασία από κίνδυνο τραυματισμού λόγω εκτόξευσης υγρών, θραύσης σωλήνων ή δυνητικά εκρηκτικής ατμόσφαιρας. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 137

138 9 Συντήρηση 9.6 Αντικατάσταση ασφαλειών 9.6 Αντικατάσταση ασφαλειών ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ Κίνδυνος ηλεκτροπληξίας. Όλες οι επισκευές πρέπει να εκτελούνται από προσωπικό συντήρησης εξουσιοδοτημένο από την GE Healthcare. Μην ανοίγετε καλύμματα και μην αντικαθιστάτε εξαρτήματα, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά στην τεκμηρίωση χρήστη. Σημείωση: Στην περίπτωση ηλεκτρικής αστοχίας, επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο σέρβις της GE. 138 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

139 9 Συντήρηση 9.7 Bαθμονόμηση 9.7 Bαθμονόμηση Ο παρακάτω πίνακας περιλαμβάνει τους τύπους και τη συχνότητα των βαθμονομήσεων που μπορούν να εκτελούνται στο όργανο. Ανατρέξτε στην τεκμηρίωση χρήστη του UNICORN, καθώς και στα Εγχειρίδια χρήστη και στις Οδηγίες των εξαρτημάτων για μια περιγραφή του τρόπου διεξαγωγής αυτών των βαθμονομήσεων. Οι βαθμονομήσεις εκτελούνται από το UNICORN επιλέγοντας το System:Calibrate στο System Control. Στοιχείο Μέτρηση πίεσης Σταθεράκυψελίδας Αγωγιμομετρική κυψελίδα ροής Θερμοκρασία Καταχώριση νέας σταθεράς κυψελίδας Συχνότητα Όταν απαιτείται. Απαιτείται μόνο εάν εκτελούνται μετρήσεις ειδικής αγωγιμότητας με υψηλή ακρίβεια (Cond_Calib). Πρέπει να πραγματοποιείται κατά την αλλαγή της αγωγιμομετρικής κυψελίδας ροής (Temp). Πρέπει να πραγματοποιείται κατά την αλλαγή της αγωγιμομετρικής κυψελίδας ροής (Cond_Cell). ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 139

140 9 Συντήρηση 9.8 Προετοιμασία του ÄKTAoligopilot plus για αναμονή 9.8 Προετοιμασία του ÄKTAoligopilot plus για αναμονή Πραγματοποιήστε τα ακόλουθα εάν το ÄKTAoligopilot plus δεν πρόκειται να χρησιμοποιηθεί για αρκετές εβδομάδες. Βήμα 1 Ενέργεια Αποσυνδέστε τις ακόλουθες φιάλες: αμιδίτες ενεργοποιητής αντιδραστήριο οξείδωσης αντιδραστήριο κάλυψης A αντιδραστήριο κάλυψης B αντιδραστήριο θειολίωσης Κλείστε σφικτά τις φιάλες με το πώμα τους Αποθηκεύστε τα διαλύματα αμιδίτη στους 4 C και το διάλυμα ενεργοποιητή σε θερμοκρασία δωματίου. Συνδέστε τις φιάλες ακετονιτριλίου στις γραμμές αμιδίτη, ενεργοποιητή και διαλύτη. Εκτελέστε τη μέθοδο προτύπου τερματισμού λειτουργίας από το UNICORN για να εκπλύνετε το σύστημα με ακετονιτρίλιο. 140 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

141 9 Συντήρηση 9.9 Αποθήκευση 9.9 Αποθήκευση Γενικές συστάσεις Για αποθήκευση, το σύστημα πρέπει πρώτα να καθαριστεί όπως περιγράφεται στην παράγραφο Καθαρισμός διαδρομής ροής συστήματος, στη σελίδα 131. Συνθήκες αποθήκευσης Πρέπει να διασφαλίζονται οι παρακάτω συνθήκες κατά τη διάρκεια αποθήκευσης του συστήματος: Θερμοκρασία: 2 C έως 30 (κατά προτίμηση θερμοκρασία δωματίου) Σχετική υγρασία: 0% έως 95%, χωρίς συμπύκνωση υδρατμών (κατά προτίμηση χαμηλή υγρασία). Πριν χρησιμοποιήσετε το σύστημα μετά την αποθήκευση, καθαρίστε και απολυμάνετε το σύστημα, βαθμονομήστε όλες τις συσκευές παρακολούθησης και εκτελέστε μια δοκιμή διαρροής. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 141

142 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Αυτό το κεφάλαιο παρέχει πληροφορίες στους χρήστες και στο προσωπικό συντήρησης για τον εντοπισμό και τη διόρθωση προβλημάτων που ενδέχεται να προκύψουν κατά τη λειτουργία του προϊόντος. Εάν το πρόβλημα δεν επιλυθεί με τις ενέργειες που προτείνονται σε αυτό τον οδηγό ή εάν το πρόβλημα δεν καλύπτεται από αυτό τον οδηγό, επικοινωνήστε με τον αντιπρόσωπο της GE για βοήθεια. Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα 10.1 Προβλήματα καμπυλών UV 10.2 Προβλήματα με τη συσκευή παρακολούθησης 10.3 Προβλήματα καμπυλών αγωγιμότητας 10.4 Αντλία P Σωλήνες και σύνδεσμοι 10.6 Υψηλή πίεση επαναφοράς συστήματος 10.7 Βαλβίδες IV-908 και INV-907-H 10.8 Χημικά προβλήματα 10.9 Ψευδείς κορυφές τριτυλίου Δεν ανιχνεύτηκε κορυφή Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

143 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.1 Προβλήματα καμπυλών UV 10.1 Προβλήματα καμπυλών UV Σύμπτωμα σφάλματος Σήμα UV με θόρυβο, μετατόπιση ή αστάθεια σήματος Το επίπεδο αυτόματου μηδενισμού είναι υψηλότερο από 1000 mau σε μήκος κύματος 280 έως 290 nm. Πιθανή αιτία Ακατάλληλες συνδέσεις οπτικών ινών UV Ακαθαρσίες στην κυψελίδα UV Αέρας στην αντλία ή στην κυψελίδα UV Τα φίλτρα τελικής γραμμής είναι φραγμένα Η κυψελίδα UV είναι φραγμένη ή βρόμικη. Διορθωτική ενέργεια Ελέγξτε τις συνδέσεις οπτικών ινών της κυψελίδας UV. Αντικαταστήστε τις, εάν απαιτείται. Καθαρίστε την κυψελίδα UV ακολουθώντας τις οδηγίες στο Ενότητα Καθαρισμός της κυψελίδας ροής UV-900 της συσκευής παρακολούθησης, στη σελίδα 132. Βεβαιωθείτε ότι ο περιοριστής ροής FR-902 παράγει πίεση επαναφοράς της τάξης των 2,0±1,0 bar σε 10 ml/min. Καθαρίστε τα φίλτρα τελικής γραμμής. Καθαρίστε την κυψελίδα UV ακολουθώντας τις οδηγίες στο Ενότητα Καθαρισμός της κυψελίδας ροής UV-900 της συσκευής παρακολούθησης, στη σελίδα 132. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 143

144 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.2 Προβλήματα με τη συσκευή παρακολούθησης 10.2 Προβλήματα με τη συσκευή παρακολούθησης Πίνακας 10.1: Συσκευή παρακολούθησης ph/c-900 και συσκευή παρακολούθησης UV-900 Σύμπτωμα σφάλματος Δεν εμφανίζεται κείμενο στην μπροστινή οθόνη. Πιθανή αιτία Το ηλεκτρικό καλώδιο δεν είναι συνδεδεμένο. Δεν υπάρχει ηλεκτρική παροχή στην ηλεκτρική πρίζα Διορθωτική ενέργεια Βεβαιωθείτε ότι ο διακόπτης λειτουργίας βρίσκεται στη θέση ON. Συνδέστε άλλον εξοπλισμό στην ηλεκτρική πρίζα για να επαληθεύσετε ότι λειτουργεί. Εάν η πρίζα είναι ελαττωματική, συνδέστε το ηλεκτρικό καλώδιο σε διαφορετική πρίζα. 144 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

145 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.3 Προβλήματα καμπυλών αγωγιμότητας 10.3 Προβλήματα καμπυλών αγωγιμότητας Σύμπτωμα σφάλματος Μετατόπιση γραμμής βάσης ή σήμα με θόρυβο Η μέτρηση αγωγιμότητας με το ίδιο ρυθμιστικό διάλυμα ελαττώνεται με την πάροδο του χρόνου Πιθανή αιτία Αέρας στην αντλία ή στην κυψελίδα ροής Διαρροή στις συνδέσεις σωλήνων Η αντλία δεν λειτουργεί σωστά Ακαθαρσίες στην κυψελίδα ροής Ακαθαρσίες στην κυψελίδα ροής Διορθωτική ενέργεια Ελέγξτε τον περιοριστή ροής μετά την κυψελίδα ροής. Σφίξτε τους συνδέσμους. Εάν απαιτείται, αντικαταστήστε τους συνδέσμους. Αντιμετωπίστε το πρόβλημα της αντλίας ακολουθώντας τις οδηγίες του εγχειριδίου της αντλίας Καθαρίστε την κυψελίδα ροής σύμφωνα με τη διαδικασία που αναφέρεται στο εγχειρίδιο χρήστη της συσκευής παρακολούθησης. Καθαρίστε την κυψελίδα ροής σύμφωνα με τη διαδικασία που αναφέρεται στο Εγχειρίδιο χρήστη της συσκευής παρακολούθησης. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 145

146 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.3 Προβλήματα καμπυλών αγωγιμότητας Σύμπτωμα σφάλματος Εσφαλμένη ή ασταθής μέτρηση Πιθανή αιτία Χαλαρή σύνδεση καλωδίουαγωγιμομετρικής ροής Εσφαλμένη λειτουργία αντλίας και βαλβίδων Πιθανό σφάλμα στην αγωγιμομετρική (COND) κυψελίδα Διορθωτική ενέργεια Ελέγξτε ότι το καλώδιο της αγωγιμομετρικής κυψελίδας ροής είναι σωστά συνδεδεμένο. Ελέγξτε εάν η αντλία και οι βαλβίδες λειτουργούν σωστά. Δοκιμάστε τη συσκευή παρακολούθησης COND χρησιμοποιώντας οποιαδήποτε από τις παρακάτω διαδικασίες. Με KCl: 1 Εγχύστε 10 έως 20 ml KCl 1 mm στην αγωγιμομετρική (COND) κυψελίδα. Η τιμή στην οθόνη θα πρέπει να είναι 150 ± 20 μs/cm. 2 Εγχύστε 10 έως 20 ml KCl 2 mm στην αγωγιμομετρική (COND) κυψελίδα. Η τιμή στην οθόνη θα πρέπει να είναι 280 ± 20 μs/cm. Με NaCl: Εγχύστε 10 έως 20 ml NaCl 2 mm στην αγωγιμομετρική (COND) κυψελίδα. Η τιμή στην οθόνη θα πρέπει να είναι 240 ± 20 μs/cm. Επαναβαθμονομήστε εάν οι προαναφερόμενες δοκιμές αποτύχουν. Εάν το πρόβλημα παραμένει μετά την επαναβαθμονόμηση, επικοινωνήστε με έναν αντιπρόσωπο συντήρησης ή αντικαταστήστε την αγωγιμομετρική (COND) κυψελίδα. 146 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

147 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.4 Αντλία P Αντλία P-900 Σημείωση: Οι αντλίες ολιγονουκλεοτιδίων P-900 διαθέτουν ειδικό στεγανοποιητικό εμβόλου από υλικό ανθεκτικό στις χημικές ουσίες και ειδικές βαλβίδες ελέγχου. Επικοινωνήστε με την GE Healthcare εάν χρειάζεστε νέα ανταλλακτικά. Σύμπτωμα σφάλματος Δεν εμφανίζεταικείμενο στην μπροστινή οθόνη Διαρροή υγρού ανάμεσα στην κεφαλή της αντλίας και τον πλαϊνό πίνακα Διαρροή στη σύνδεση ή/και κρυσταλλικό υλικό γύρω από ένα σύνδεσμο Διορθωτική ενέργεια Βεβαιωθείτε ότι το καλώδιο τροφοδοσίας είναι συνδεδεμένο και ότι ο διακόπτης Power βρίσκεται στη θέση ON I. Το στεγανοποιητικό του εμβόλου ή η μεμβράνη έκπλυσης έχει τοποθετηθεί εσφαλμένα ή έχει φθαρεί. 1 Αντικαταστήστε ή τοποθετήστε ξανά το στεγανοποιητικό ή τη μεμβράνη. 2 Προετοιμάστε προσεκτικά το νέο εξάρτημα για λειτουργία (βλ. Pump P-900 User Manual για οδηγίες). 1 Ξεβιδώστε το σύνδεσμο και ελέγξτε εάν είναι φθαρμένος ή εάν έχει τοποθετηθεί εσφαλμένα. Εάν ναι, αντικαταστήστε το σύνδεσμο. 2 Σφίξτε προσεκτικά το σύνδεσμο με το χέρι. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 147

148 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.4 Αντλία P-900 Σύμπτωμα σφάλματος Ασταθής πίεση αντλίας Διορθωτική ενέργεια Για να ελέγξετε τη λειτουργία της αντλίας, σημειώστε την πίεση ή ελέγξτε την πίεση στο UNICORN. Παρατηρώντας την ένδειξη διαδρομής εμβόλου στο μενού Check σε συνδυασμό με το διάγραμμα πίεσης, μπορείτε να εντοπίσετε την κεφαλή εμβόλου που εμφανίζει δυσλειτουργία (βλ. Pump P-900 User Manual). Οι μη φυσιολογικές τιμές πίεσης μπορεί να οφείλονται σε διάφορες αιτίες, όπως: παγίδευση αέρα στις κεφαλές αντλίας μερική έμφραξη φίλτρων διαλύτη διαρροή στις συνδέσεις διαρροή στεγανοποιητικού εμβόλου δυσλειτουργία βαλβίδας ελέγχου φθορά εμβόλου. Ορισμένα παραδείγματα διαγραμμάτων φυσιολογικών και μη φυσιολογικών τιμών πίεσης σε συνδυασμό με σχόλια παρουσιάζονται στο Pump P-900 User Manual. Σημείωση: Όταν αλλάζετε τη βαλβίδα ελέγχου, θα πρέπει να τη σφίγγετε στα 10 Nm. Αυτό αντιστοιχεί περίπου σε σφίξιμο με το χέρι συν 1/8 της στροφής. 148 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

149 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.5 Σωλήνες και σύνδεσμοι 10.5 Σωλήνες και σύνδεσμοι Σύμπτωμα σφάλματος Εξωτερική διαρροή Εσωτερική διαρροή Υψηλή πίεση επιστροφής (σε σχέση με τις βαλβίδες σωλήνων) Διορθωτική ενέργεια Ελέγξτε τις συνδέσεις των σωλήνων. Σφίξτε ή αντικαταστήστε τις, εάν απαιτείται. Εσωτερική διαρροή μπορεί να εντοπιστεί στη μικρή οπή στην κάτω πλευρά του σώματος της βαλβίδας. Τα εσωτερικά μέρη της βαλβίδας μπορεί να είναι φθαρμένα. Αλλάξτε την πλάκα καναλιού και την πλάκα διανομής σύμφωνα με τις σχετικές οδηγίες της βαλβίδας. 1 Εκτελέστε τη διαδικασία επιτόπιου καθαρισμού σύμφωνα με τις σχετικές οδηγίες της βαλβίδας. 2 Αλλάξτε την πλάκα καναλιού και την πλάκα διανομής σύμφωνα με τις σχετικές οδηγίες της βαλβίδας. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 149

150 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.6 Υψηλή πίεση επαναφοράς συστήματος 10.6 Υψηλή πίεση επαναφοράς συστήματος Υψηλή πίεση επαναφοράς συστήματος μπορεί να προκληθεί από ακαθαρσίες στα πορώδη φίλτρα της στήλης, έμφραξη/κάμψη των σωλήνων, έμφραξη της κυψελίδας ροής UV, έμφραξη της αγωγιμομετρικής κυψελίδας ροής ή έμφραξη του περιοριστή ροής. Επίσης, η υψηλή πίεση επαναφοράς μπορεί να οφείλεται σε υπερφόρτωση των στηλών λόγω, για παράδειγμα, υπερβολικά μεγάλου φορτίου σε συνδυασμό με σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίων μεγάλου μήκους ή/και υποστρωμάτων μεγάλου ύψους. Εάν συμβεί κάτι τέτοιο κατά τη διάρκεια μιας σύνθεσης και δεν μπορεί να καθοριστεί η αιτία της πίεσης επαναφοράς, ακυρώστε τη σύνθεση και ακολουθήστε τις παρακάτω συστάσεις. Σημείωση: Η πίεση επαναφοράς του συστήματος είναι υψηλή εάν ηχήσει ο συναγερμός πίεσης, ο οποίος ενεργοποιείται σε τιμές πίεσης μεγαλύτερες από 20 bar η πίεση επαναφοράς είναι πάνω από 15 bar και αυξάνεται. Βήμα 1 2 Ενέργεια Στο System Control:Manual:Flowpath, επιλέξτε Bypass και κάντε κλικ στην επιλογή Execute. Επιλέξτε Pump και, στη συνέχεια, ορίστε το Flow_A σε 5 ml/min για το ÄKTAoligopilot plus 10 σε 50 ml/min για το ÄKTAoligopilot plus Κάντε κλικ στην επιλογή Execute. 150 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

151 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.7 Βαλβίδες IV-908 και INV-907-H 10.7 Βαλβίδες IV-908 και INV-907-H Σύμπτωμα σφάλματος Η βαλβίδα δεν αλλάζει θέση. Η βαλβίδα μεταβαίνει σε λάθος θέση. Υπάρχει ορατή εξωτερική διαρροή. Υπάρχει εσωτερική διαρροή στη βαλβίδα (ορατή στη μικρή οπή στην κάτω πλευρά του σώματος της βαλβίδας). Η πίεση επιστροφής είναι πολύ υψηλή, είτε υψηλότερη από 20 bar 15 bar ή υψηλότερη, και αυξάνεται Πιθανή αιτία Η σύνδεση με την αντλία δεν είναι ασφαλής. Η σύνδεση με την αντλία είναι λανθασμένη. Ο αριθμός του διακόπτη ID δεν ταιριάζει στο UNI- CORN. Το καλώδιο UniNet είναι ελαττωματικό. Η βαλβίδα έχει συναρμολογηθεί λανθασμένα μετά την αντικατάσταση. Οι συνδέσεις σωλήνα δεν είναι σφιχτές. Τα εσωτερικά μέρη της βαλβίδας είναι φθαρμένα. Η βαλβίδα είναι φραγμένη. Η πλάκα καναλιού και η πλάκα διανομής είναι φθαρμένες. Διορθωτική ενέργεια Ελέγξτε εάν η σύνδεση μεταξύ της βαλβίδας και της αντλίας είναι σφιχτή. Ελέγξτε ότι η βαλβίδα είναι συνδεδεμένη με την υποδοχή UniNet 1. Ελέγξτε ότι η ρύθμιση του διακόπτη ID στο UNICORN ταιριάζει με το διακόπτη ID της βαλβίδας. Αντικαταστήστε το καλώδιο UniNet. Ελέγξτε ότι η επισήμανση πλάκας διανομής i/o ή 3 είναι οριζόντια. Αφαιρέστε και γυρίστε την πλάκα διανομής εάν απαιτείται. Σφίξτε ή αντικαταστήστε τις συνδέσεις σωλήνα όπως απαιτείται. Αλλάξτε την πλάκα καναλιού και την πλάκα διανομής. Καθαρίστε τη βαλβίδα. Αλλάξτε την πλάκα καναλιού και την πλάκα διανομής. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 151

152 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.8 Χημικά προβλήματα 10.8 Χημικά προβλήματα Τα ακόλουθα είναι συνηθισμένες αιτίες για χημικά προβλήματα: Υπάρχει πάρα πολύ (>30 ppm) νερό στα αντιδραστήρια. Χρησιμοποιήστε ποιοτικά αντιδραστήρια και μοριακά κόσκινα όταν απαιτείται. Τα αντιδραστήρια είναι πολύ παλιά. Οι αμιδίτες έχουν διάρκεια ζωής 2-4 εβδομάδες, με τον G-αμιδίτη να είναι ο πιο ευαίσθητος από τους άλλους. Ο T-αμιδίτης είναι ο λιγότερος ευαίσθητος. Η συγκέντρωση αμιδίτη είναι λανθασμένη. Ο αμιδίτης 5 γραμμαρίων και 10 γραμμαρίων συσκευάζεται στον ίδιο τύπο φιάλης. Ανεπαρκείς αμιδίτες ή διαλύτες ή καθόλου καθαρισμός αμιδιτών ή διαλυτών πριν από τη σύνθεση. Μείωση της πίεσης αδρανούς αερίου που προκαλείται από πώματα φιαλών ή σωλήνα με διαρροή ή από φιάλη που ανοίχτηκε κατά τη διάρκεια της σύνθεσης. Αυξομειώσεις ροής που προκύπτουν από προσωρινές μειώσεις της πίεσης αερίου, προκαλώντας τον εγκλωβισμό των φυσαλίδων αερίων σπηλαίωσης σε μία από τις κεφαλές αντλίας. 152 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

153 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων 10.9 Ψευδείς κορυφές τριτυλίου 10.9 Ψευδείς κορυφές τριτυλίου Σύμπτωμα σφάλματος Στην προβολή δεδομένων σύνθεσης, οι τιμές συγκράτησης και διάρκειας είναι ασταθείς ή δεν ακολουθούν τάσεις για διαφορετικές βάσεις. Πιθανή αιτία Ανιχνεύτηκε ψευδής κορυφή τριτυλίου. Διορθωτική ενέργεια Συγκρίνετε την τιμή συγκράτησης και διάρκειας για την τελευταία υπολογισμένη απόδοση. Εάν αυτές οι τιμές διαφέρουν σημαντικά από τις άλλες τιμές στον πίνακα, αγνοήστε τις τιμές για αυτή την κορυφή. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 153

154 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων Δεν ανιχνεύτηκε κορυφή Δεν ανιχνεύτηκε κορυφή Πρώτα μέτρα Εάν εμφανιστεί το μήνυμα No Peak detected στο UNICORN όταν το ÄKTAoligopilot plus βρίσκεται σε τρόπο λειτουργίας παύσης, ακολουθήστε πρώτα τα βήματα στον παρακάτω πίνακα. Πιθανή αιτία Μία ή περισσότερες φιάλες αντιδραστηρίων είναι άδειες. Μια φιάλη αμιδίτη είναι κατεστραμμένη. Οι σφραγίσεις φιαλών αμιδιτών είναι βρόμικες. Υπάρχουν διαρροές στο κύκλωμα ροής. Διορθωτική ενέργεια Ελέγξτε και γεμίστε ξανά τις άδειες φιάλες. Ελέγξτε τους λαιμούς και τις σφραγίσεις των φιαλών αμιδίτη. Αντικαταστήστε όλες τις κατεστραμμένες φιάλες. Καθαρίστε τις σφραγίσεις φιαλών αμιδιτών με ακετόνη. Ελέγξτε τις αντλίες, τις βαλβίδες και τη στήλη για διαρροές. Ελέγξτε εάν η πορτοκαλί κορυφή αποτριτυλίωσης εκλούεται σωστά Βήμα 1 2 Ενέργεια Κάντε κλικ στο Continue στο System control. Ελέγξτε εάν η πορτοκαλί κορυφή αποτριτυλίωσης εκλούεται κατά τη διάρκεια της ακόλουθης αποτριτυλίωσης. Εάν το χρώμα εκλούεται: Να ελέγχετε τη συσκευή παρακολούθησης περιστασιακά για να δείτε εάν εμφανίζεται ξανά το μήνυμα σφάλματος. Εάν δεν εκλούεται χρώμα: Η σύνθεση έχει αποτύχει. Επανεκκινήστε τη σύνθεση. 154 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

155 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων Δεν ανιχνεύτηκε κορυφή Ελέγξτε εάν η φιάλη αποτριτυλίωσης είναι κενή Βήμα Ενέργεια Στο System:Control:Manual:Flowpath ορίστε το Solvent_A στο Detrit_3.7. Κάντε κλικ στο Execute. Συνδέστε μια ανθεκτική στο διαλύτη σύριγγα στη βαλβίδα καθαρισμού στην αντλία A. Ανοίξτε τη βαλβίδα καθαρισμού και αναρροφήστε διάλυμα στη σύριγγα. Όταν το διάλυμα μπει στη σύριγγα, κλείστε τη βαλβίδα. Μετακινήστε τη σύριγγα στη δεύτερη βαλβίδα καθαρισμού στην αντλία A. Ανοίξτε τη βαλβίδα και αναρροφήστε διάλυμα στη σύριγγα. Όταν το διάλυμα μπει στη σύριγγα, κλείστε τη βαλβίδα. Πατήστε Continue και περιμένετε 10 δευτερόλεπτα. Η αντλία A πρέπει να εκκινηθεί. Όταν εκκινηθεί, κάντε κλικ στο Hold. Η αντλία A συνεχίζει την άντληση, αλλά η μέθοδος δεν εξελίσσεται στο επόμενο σημείο διακοπής. Όταν αρχίζει να εξέρχεται χρώμα αποτριτυλίωσης από τη στήλη, κάντε κλικ στο Continue. Η σύνθεση συνεχίζει με την προσθήκη του επόμενου αμιδίτη. Ωστόσο, οποιαδήποτε αρνητική επίδραση μιας άδειας φιάλης αποτριτυλίωσης δεν θα αποκαλυφθεί μέχρι να αναλυθούν οι μη επεξεργασμένες συνθέσεις (μετά τη σύνθεση) για % προϊόντος πλήρους μήκους και απόδοση A260. Ελέγξτε εάν ο σωλήνας αμιδίτη είναι φραγμένος Εκτελέστε τη μέθοδο αντιμετώπισης προβλημάτων Delivery test ή εκτελέστε τα παρακάτω βήματα χειροκίνητα. Βήμα Ενέργεια Αντικαταστήστε την ύποπτη φιάλη αμιδίτη με μια φιάλη 100 ml γεμισμένη με ακετονιτρίλιο. Εάν απαιτείται, αντικαταστήστε όλες τις φιάλες αμιδιτών. Ανοίξτε το System Control:Manual:Flowpath και επιλέξτε το Amidite Acn_A/X. Κάντε κλικ στο Execute. Επιλέξτε το Pump και ορίστε το Flow_A στο 10 ml/min. Περιμένετε 2 λεπτά. Επιλέξτε την ύποπτη θέση αμιδίτη ή μεταβείτε στις θέσεις στη σειρά. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 155

156 10 Αντιμετώπιση προβλημάτων Δεν ανιχνεύτηκε κορυφή Βήμα 5 Ενέργεια Παρατηρήστε εάν η στάθμη στις φιάλες μειώνεται. Εάν η στάθμη παραμένει ίδια, εγκαταστήστε καινούριο σωλήνα PEEK και καθαρίστε τον ολισθητήρα. 156 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

157 11 Πληροφορίες αναφοράς 11 Πληροφορίες αναφοράς Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Στο κεφάλαιο αυτό αναφέρονται οι τεχνικές προδιαγραφές του ÄKTAoligopilot plus. Το κεφάλαιο περιλαμβάνει επίσης έναν οδηγό χημικής αντίστασης, πληροφορίες παραγγελίας και το έντυπο δήλωσης σχετικά με την υγεία και την ασφάλεια για εργασίες συντήρησης. Στο παρόν κεφάλαιο Το κεφάλαιο αυτό περιλαμβάνει τις παρακάτω ενότητες: Ενότητα 11.1 Προδιαγραφές 11.2 Χημική αντοχή 11.3 Πληροφορίες παραγγελίας 11.4 Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 157

158 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.1 Προδιαγραφές 11.1 Προδιαγραφές Γενικές τεχνικές προδιαγραφές Παράμετρος Προστασία από εισχώρηση Τάση παροχής Κατανάλωση ισχύος Μεταβατική υπέρταση Προδιαγραφές ασφαλειών Διαστάσεις (Υ Π Β) Βάρος Θερμοκρασία περιβάλλοντος Αντοχή στη σχετική υγρασία (χωρίς συμπύκνωση υδρατμών) Ατμοσφαιρική πίεση Βαθμός ρύπανσης Εκπομπές θορύβου Τιμή IP / V AC ±10%, 50 έως 60 Hz 600 VA Κατηγορία υπέρτασης II T 6,3 AL 250 V mm 63 kg 4 έως 40 10% έως 95% 840 έως 1060 mbar (84 έως 106 kpa) 2 70 db A 158 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

159 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.1 Προδιαγραφές Υλικά συστατικών μερών ÄKTAoligopilot plus Υλικά συστατικών μερών ÄKTAoligopilot plus Σε αυτή την ενότητα παρατίθενται τα νωπά υλικά των συστατικών μερών ÄKTAoligopilot plus. Συντμήσεις για τα σύνθετα υλικά Συντομογραφία CTFE ETFE FEP FFKM PE PEEK PP PTFE PVDF Rulon Πλήρης ονομασία Χλωροτριφθοροαιθυλένιο Αιθυλενοτετραφθοροαιθυλένιο Συμπολυμερές υπερφθοροαιθυλενοπροπυλένιο Υπερφθορικό καουτσούκ Πολυαιθυλένιο Πολυαιθεροαιθεροκετόνη Πολυπροπυλένιο Πολυτετραφθοροαιθυλένιο Πολυβινυλιδενοφθορίδιο Τετραφθοροαιθυλένιο φθοράνθρακας Υλικά αντλίας P-900 Σύνθετα υλικά PE PEEK PTFE PVDF Rulon Άλλα υλικά Οξείδιο του αργιλίου Ρυμπίνι/ζαφείρι Ανοξείδωτος χάλυβας (Elgiloy) ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 159

160 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.1 Προδιαγραφές Υλικά συστατικών μερών ÄKTAoligopilot plus Κράμα τιτανίου Υλικά συσκευής παρακολούθησης UV-900 Σύνθετα υλικά PEEK PTFE Άλλα υλικά Χαλαζία Κράμα τιτανίου Υλικά συσκευής παρακολούθησης ph/c-900 Σύνθετα υλικά CTFE FFKM PEEK PTFE Άλλα υλικά Γυαλί Κράμα τιτανίου Υλικά βαλβίδας UV/PV-908 Σύνθετα υλικά PEEK 160 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

161 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.1 Προδιαγραφές Υλικά συστατικών μερών ÄKTAoligopilot plus Υλικά βαλβίδας INV-907 Σύνθετα υλικά PEEK Υλικά περιοριστή ροής Σύνθετα υλικά ETFE PEEK PTFE Άλλα υλικά Χρυσό Υλικά σωλήνα Σύνθετα υλικά ETFE PEEK PTFE Άλλα υλικά FEP Υλικά φίλτρου εισαγωγής Σύνθετα υλικά PP Άλλα υλικά Κράμα τιτανίου ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 161

162 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.1 Προδιαγραφές Υλικά συστατικών μερών ÄKTAoligopilot plus Υλικά ενώσεων και συνδέσμων Σύνθετα υλικά ETFE PEEK 162 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

163 Προδιαγραφές για αντλίες P Πληροφορίες αναφοράς 11.1 Προδιαγραφές Προδιαγραφές για αντλίες P-900 Παράμετρος Αρ. υπομονάδων αντλιών Όγκος κεφαλής αντλίας Εύρος πίεσης P ml 0 έως 100 bar P ml 0 έως 250 bar Όγκος διαδρομής Όγκος καθυστέρησης 36 μl (ÄKTAoligopilot plus 10) 286 μl (ÄKTAoligopilot plus 100) < 600 μl (ÄKTAoligopilot plus 10) < 1200 μl (ÄKTAoligopilot plus 100) ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 163

164 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.2 Χημική αντοχή 11.2 Χημική αντοχή Χημική ουσία Έκθεση Έκθεση Αρ. CAS Αρ. EEC Σχόλια < 1 ημέρα έως 2 μήνες Ακετονιτρίλιο ΟΚ ΟΚ Τα PP και PE διογκώνονται. Ακετόνη, 10% ΟΚ Νααποφεύγεται Το PVDF επηρεάζεται από τη μακροχρόνια χρήση. Αμμωνία, 30% ΟΚ ΟΚ Η σιλικόνη επηρεάζεται από τη μακροχρόνια χρήση. Βουτανόλη-1 ΟΚ ΟΚ Βουτανόλη-2 ΟΚ ΟΚ Χλωροφόρμιο ΟΚ Νααποφεύγεται Τα Kalrez, CTFE, PP και PE επηρεάζονται από τη μακροχρόνια χρήση. Κυκλοεξάνιο ΟΚ ΟΚ Νααποφεύγεται Διμεθυλοσουλφοξείδιο Νααποφεύγεται Το PVDF επηρεάζεται από τη μακροχρόνια χρήση. Διοξάνιο-1,4 Νααποφεύγεται Νααποφεύγεται Τα ETFE, PP, PE και PVDF επηρεάζονται από τη μακροχρόνια χρήση. Αιθανόλη, 100% ΟΚ ΟΚ Εξάνιο ΟΚ Νααποφεύγεται Η σιλικόνη δεν έχει αντοχή. Το όριο πίεσης για το PEEK μειώνεται. Υδροχλωρικό οξύ, 0,1 M ΟΚ ΟΚ Η σιλικόνη δεν έχει αντοχή. 164 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

165 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.2 Χημική αντοχή Χημική ουσία Έκθεση Έκθεση Αρ. CAS Αρ. EEC Σχόλια < 1 ημέρα έως 2 μήνες Υδροχλωρικό οξύ, > 0,1 M ΟΚ Νααποφεύγεται Η σιλικόνη δεν έχει αντοχή. Το τιτάνιο επηρεάζεται από τη μακροχρόνια χρήση. Ισοπροπανόλη, 100% ΟΚ ΟΚ Μεθανόλη, 100% ΟΚ ΟΚ Νιτρικό οξύ, αραιωμένο ΟΚ Νααποφεύγεται Η σιλικόνη δεν έχει αντοχή. Νιτρικό οξύ, 30% Νααποφεύγεται Νααποφεύγεται Το Elgiloy επηρεάζεται από τη μακροχρόνια χρήση. Πυριδίνη Νααποφεύγεται Νααποφεύγεται Τα ETFE, PP και PE δεν έχουν αντοχή. Νααποφεύγεται Τετραϋδροφουράνιο Νααποφεύγεται Τα ETFE, CTFE, PP και PE δεν έχουν αντοχή. Τολουόλιο ΟΚ Νααποφεύγεται Το όριο πίεσης για το PEEK μειώνεται. Τριχλωροξικό οξύ, 1% ΟΚ ΟΚ Τριφθοροξικό οξύ, 1% ΟΚ ΟΚ ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 165

166 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.3 Πληροφορίες παραγγελίας 11.3 Πληροφορίες παραγγελίας Στοιχεία επικοινωνίας Για πληροφορίες σχετικά με την παραγγελία, επισκεφτείτε τη διεύθυνση ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

167 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.4 Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας 11.4 Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας Επιτόπια επισκευή On Site Service Health & Safety Declaration Form Service Ticket #: To make the mutual protection and safety of GE service personnel and our customers, all equipment and work areas must be clean and free of any hazardous contaminants before a Service Engineer starts a repair. To avoid delays in the servicing of your equipment, please complete this checklist and present it to the Service Engineer upon arrival. Equipment and/or work areas not sufficiently cleaned, accessible and safe for an engineer may lead to delays in servicing the equipment and could be subject to additional charges. Yes No Please review the actions below and answer Yes or No. Provide explanation for any No answers in box below. Instrument has been cleaned of hazardous substances. Please rinse tubing or piping, wipe down scanner surfaces, or otherwise ensure removal of any dangerous residue. Ensure the area around the instrument is clean. If radioactivity has been used, please perform a wipe test or other suitable survey. Adequate space and clearance is provided to allow safe access for instrument service, repair or installation. In some cases this may require customer to move equipment from normal operating location prior to GE arrival. Consumables, such as columns or gels, have been removed or isolated from the instrument and from any area that may impede access to the instrument. All buffer / waste vessels are labeled. Excess containers have been removed from the area to provide access. Provide explanation for any No answers here: Equipment type / Product No: Serial No: I hereby confirm that the equipment specified above has been cleaned to remove any hazardous substances and that the area has been made safe and accessible. Name: Position or job title: Company or institution: Date (YYYY/MM/DD): Signed: GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company. GE Healthcare Bio-Sciences Corp, 800 Centennial Avenue, P.O. Box 1327, Piscataway, NJ General Electric Company All rights reserved. First published April DOC / AC 05/2014 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 167

168 11 Πληροφορίες αναφοράς 11.4 Έντυπο δήλωσης υγείας και ασφάλειας Επιστροφή ή επισκευή του προϊόντος Health & Safety Declaration Form for Product Return or Servicing Return authorization number: and/or Service Ticket/Request: To make sure the mutual protection and safety of GE personnel, our customers, transportation personnel and our environment, all equipment must be clean and free of any hazardous contaminants before shipping to GE. To avoid delays in the processing of your equipment, please complete this checklist and include it with your return. 1. Please note that items will NOT be accepted for servicing or return without this form 2. Equipment which is not sufficiently cleaned prior to return to GE may lead to delays in servicing the equipment and could be subject to additional charges 3. Visible contamination will be assumed hazardous and additional cleaning and decontamination charges will be applied Yes No Please specify if the equipment has been in contact with any of the following: Radioactivity (please specify) Infectious or hazardous biological substances (please specify) Other Hazardous Chemicals (please specify) Equipment must be decontaminated prior to service / return. Please provide a telephone number where GE can contact you for additional information concerning the system / equipment. Telephone No: Liquid and/or gas in equipment is: Water Ethanol None, empty Argon, Helium, Nitrogen Liquid Nitrogen Other, please specify Equipment type / Product No: Serial No: I hereby confirm that the equipment specified above has been cleaned to remove any hazardous substances and that the area has been made safe and accessible. Name: Position or job title: Company or institution: Date (YYYY/MM/DD) Signed: To receive a return authorization number or service number, please call local technical support or customer service. GE and GE monogram are trademarks of General Electric Company. GE Healthcare Bio-Sciences Corp, 800 Centennial Avenue, P.O. Box 1327, Piscataway, NJ , US General Electric Company All rights reserved. First published April DOC / AC 05/ ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

169 A Διάγραμμα συνδέσεων - Διαδρομή ροής υγρών Παράρτημα A Διάγραμμα συνδέσεων - Διαδρομή ροής υγρών Διαδρομή ροής και επιμέρους στοιχεία του συστήματος K6 K5 ACN A/X (1) K2 A (2) K1 C (3) 1 T (6) ACN C/G (4) K37 X (8) ACN T/X (7) K14 K36 K11 ACN A*/Y (1) A* (2) C* (3) Y (8) ACN T*/Y* (7) K3 K13 ACN C*/G* (4) T* (6) K38 2 G (5) G* (5) K7 K9 K4 K8 K39 ACN (1) (2) (8) Cap A (3) K22 3 Z (4) ACN Z/Q (5) Detrit_3.7 (7) K16 Q (6) K ACN (1) Thiolation (2) Cap B (3) 4 ACN_4.4 (4) OX (5) Pos 1 Pos 7 5 Pos 6 Pos 4 K17 Activator (8) Waste_1 (1) DEA(7) Waste_2 (2) Waste_8 (8) K18 Waste_3 (3) Extra_4.6 (6) 8 Waste_7 (7) Waste_4 (4) Waste_6 (6) Waste_5 (5) UV-900 ph/c-900 K40 K41 K42 K43 K K27 K K29 K K12 K10 K23 K20 K15 K21 K24 K33 K32 K31 K35 11 K34 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 169

170 A Διάγραμμα συνδέσεων - Διαδρομή ροής υγρών Αρ Περιγραφή Βαλβίδα αμιδιτών 1, V1 Βαλβίδα αμιδιτών 2, V2 Βαλβίδα 3, V3 Βαλβίδα αντιδραστηρίων, V4 Βαλβίδα ανακύκλωσης, V5 Βαλβίδα εισαγωγής στήλης, V6 Βαλβίδα εξαγωγής στήλης, V7 Βαλβίδα αποβλήτων, V8 Αντλία A Αντλία B Περιοριστής ροής Σύνδεσμος Y Βαλβίδα 6, θέση 1 Βαλβίδα 7, θέση 1 Παράκαμψη στήλης Στήλες 170 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

171 B Σωλήνες Παράρτημα B Σωλήνες Πληροφορίες για την παρούσα ενότητα Οι αριθμοί στη στήλη «Αρ. αναφοράς εικόνας» στις Προδιαγραφές σωλήνων για το ÄKTAoligopilot plus 10, στη σελίδα171 και Προδιαγραφές σωλήνων για το ÄKTAoligopilot plus 100, στη σελίδα 173 αναφέρονται στους αριθμούς των σωλήνων στο διάγραμμα συνδέσεων για τη διαδρομή ροής υγρών, δείτε Παράρτημα A Διάγραμμα συνδέσεων - Διαδρομή ροής υγρών, στη σελίδα 169. Προδιαγραφές σωλήνων για το ÄKTAoligopilot plus 10 Αρ. αναφοράς εικόνας Υλικό, Εσωτ. διάμ. [mm], Εξωτ. διάμ. Μήκος [mm] Δείκτης σωλήνα K1 PEEK, 0,5, 1/16" 900 C (κίτρινος) K2 PEEK, 0,5, 1/16" 900 A (κίτρινος) K3 PEEK, 0,5, 1/16" 900 T (κίτρινος) K4 PEEK, 0,5, 1/16" 900 G (κίτρινος) K5 FEP, 2,9, 3/16" 290 K6 FEP, 2,9, 3/16" 210 K7 PEEK, 0,5, 1/16" 260 K7 (πράσινος) K8 PEEK, 0,5, 1/16" 230 K8 (πράσινος) K9 FEP, 2,9, 3/16" 290 K10 FEP, 2,9, 3/16" 350 K11 FEP, 2,9, 3/16" 350 K12 FEP, 2,9, 3/16" 370 K13 FEP, 2,9, 3/16" 225 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 171

172 B Σωλήνες Αρ. αναφοράς εικόνας Υλικό, Εσωτ. διάμ. [mm], Εξωτ. διάμ. Μήκος [mm] Δείκτης σωλήνα K14 FEP, 2,9, 3/16" 350 K15 FEP, 2,9, 3/16" 250 K17 FEP, 1,6, 1/8" 390 K18 FEP, 1,6, 1/8" 455 K20 FEP, 1,6, 1/8" 245 K21 FEP, 1,6, 1/8" 160 K23 FEP, 1,6, 1/8" 255 K24 PEEK, 0,5, 1/16" 410 K24 (μπλε) K25 1 PEEK, 0,5, 1/16" 820 K25 (πράσινος) K26 PEEK, 0,5, 1/16" 320 K26 (μπλε) K27 PEEK, 0,5, 1/16" 80 K27 (κόκκινος) K28 PEEK, 0,5, 1/16" 80 K28 (κόκκινος) K29 PEEK, 0,5, 1/16" 920 K29 (κόκκινος) K30 PEEK, 0,5, 1/16" 280 K30 (κόκκινος) K31 PEEK, 0,5, 1/16" 220 K31 (κόκκινος) K32 PEEK, 0,5, 1/16" 580 K32 (κόκκινος) K33 ETFE, 1,0, 1/16" 540 K33 (κόκκινος) K34 ETFE, 1,0, 1/16" 70 K34 (κόκκινος) K35 ETFE, 1,0, 1/16" 520 K35 (κόκκινος) K36 PEEK, 0,5, 1/16" 900 C* (κίτρινος) K37 PEEK, 0,5, 1/16" 900 A* (κίτρινος) K38 PEEK, 0,5, 1/16" 900 T* (κίτρινος) K39 PEEK, 0,5, 1/16" 900 G* (κίτρινος) K40 PEEK, 0,5, 1/16" 70 K40 (πράσινος) K41 PEEK, 0,5, 1/16" 70 K41 (πράσινος) K42 PEEK, 0,5, 1/16" 70 K42 (μπλε) 172 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

173 B Σωλήνες Αρ. αναφοράς εικόνας Υλικό, Εσωτ. διάμ. [mm], Εξωτ. διάμ. Μήκος [mm] Δείκτης σωλήνα K43 PEEK, 0,5, 1/16" 70 K43 (μπλε) 1 Τόσο ο σωλήνας όσο και ο δακτύλιος πρέπει να είναι σε επίπεδη θέση, ώστε να λειτουργούν ως σύνδεσμος σχήματος Τ. Προδιαγραφές σωλήνων για το ÄKTAoligopilot plus 100 Αρ. αναφοράς εικόνας Υλικό, Εσωτ. διάμ. [mm], Εξωτ. διάμ. Μήκος [mm] Δείκτης σωλήνα K1 PEEK, 1,0, 1/ C (κίτρινος) K2 PEEK, 1,0, 1/ A (κίτρινος) K3 PEEK, 1,0, 1/ T (κίτρινος) K4 PEEK, 1,0, 1/ G (κίτρινος) K5 FEP, 2,9, 3/16" 290 K6 FEP, 2,9, 3/16" 210 K7 FEP, 1,6, 1/8" 240 K7 (πράσινος) K8 FEP, 1,6, 1/8" 210 K8 (πράσινος) K10 FEP, 2,9, 3/16" 350 K11 FEP, 2,9, 3/16" 350 K12 FEP, 2,9, 3/16" 370 K13 FEP, 2,9, 3/16" 225 K14 FEP, 2,9, 3/16" 350 K15 FEP, 2,9, 3/16" 250 K17 FEP, 2,9, 3/16" 390 K18 FEP, 2,9, 3/16" 455 K19 FEP, 2,9, 3/16" 200 K20 FEP, 2,9, 3/16" 245 K21 FEP, 2,9, 3/16" 160 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 173

174 B Σωλήνες Αρ. αναφοράς εικόνας Υλικό, Εσωτ. διάμ. [mm], Εξωτ. διάμ. Μήκος [mm] Δείκτης σωλήνα K23 FEP, 2,9, 3/16" 255 K24 FEP, 1,6, 1/8" 360 K24 (μπλε) K25 FEP, 1,6, 1/8" 900 K25 (πράσινος) K26 FEP, 1,6, 1/8" 510 K26 (μπλε) K27 ETFE, 1,0, 1/16" 80 K27 (κόκκινος) K28 ETFE, 1,0, 1/16" 80 K28 (κόκκινος) K29 FEP, 1,0, 1/16" 900 K29 (κόκκινος) K30 FEP, 1,0, 1/16" 270 K30 (κόκκινος) K31 FEP, 1,6, 1/8" 200 K31 (κόκκινος) K32 FEP, 1,6, 1/8" 500 K32 (κόκκινος) K33 ETFE, 1,0, 1/16" 540 K33 (κόκκινος) K34 ETFE, 1,0, 1/16" 70 K34 (κόκκινος) K35 ETFE, 1,0, 1/16" 520 K35 (κόκκινος) K36 PEEK, 1,0, 1/ C* (κίτρινος) K37 PEEK, 1,0, 1/ A* (κίτρινος) K38 PEEK, 1,0, 1/ T* (κίτρινος) K39 PEEK, 1,0, 1/ G* (κίτρινος) K40 FEP, 1,6, 1/8" 70 K40 (πράσινος) K41 FEP, 1,6, 1/8" 70 K41 (πράσινος) K42 FEP, 1,6, 1/8" 70 K42 (μπλε) K43 FEP, 1,6, 1/8" 70 K43 (μπλε) 174 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

175 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων Παράρτημα C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Σε αυτό το κεφάλαιο παρέχεται μια γενική εισαγωγή στη χημεία που χρησιμοποιείται στη σύνθεση στερεής φάσης των ολιγονουκλεοτιδίων με τη χρήση του ÄKTAoligopilot plus. Για πιο λεπτομερείς πληροφορίες, ανατρέξτε στη βιβλιογραφία στο τμήμα αναφορών στη διεύθυνση Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα C.1 Η αντίδραση σύζευξης C.2 Χημεία προστασίας C.3 Χημεία ενεργοποίησης C.4 Ο στερεός φορέας C.5 Κύκλος σύνθεσης C.6 Μετα-συνθετική επεξεργασία C.7 Θειολιώμενα ολιγονουκλεοτίδια Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 175

176 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.1 Η αντίδραση σύζευξης C.1 Η αντίδραση σύζευξης Επισκόπηση Η σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίων περιλαμβάνει την ακολουθιακή προσθήκη μονομερών αμιδιτών, δείτε την παρακάτω εικόνα. Αυτό συμβαίνει μέσω αυτόματων αντιδράσεων σύζευξης μεταξύ της ομάδας 3'-φωσφίτη του μονομερούς στο διάλυμα (αριστερά) και της ομάδας 5'-υδροξυλίου του μονομερούς που είναι δεσμευμένο στο στερεό φορέα. Σημείωση: Η χημεία σύνθεσης είναι ουσιαστικά η ίδια για ολιγονουκλεοτίδια DNA και RNA με εξαίρεση τη μοριακή δομή και το σχήμα προστατευτικής ομάδας των αντιδραστηρίων αμιδίτη. 176 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

177 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.1 Η αντίδραση σύζευξης Η αντίδραση σύζευξης στο ÄKTAoligopilot plus Η σύζευξη εκτελείται στο ÄKTAoligopilot plus χρησιμοποιώντας ξηρό ακετονιτρίλιο ως διαλύτη. Οι ομάδες υδροξυλίου νερού συναγωνίζονται ισχυρά τις ομάδες υδροξυλίου σακχάρου. Συνεπώς, οι άνυδρες συνθήκες είναι ουσιαστικός παράγοντας για την αποδοτική σύζευξη. Πολλά πρωτόκολλα σύνθεσης παρτίδων χρησιμοποιούν μεγάλη περίσσεια μονομερών για να ξεπεραστεί η ανταγωνιστική δράση των ιχνών νερού στους διαλύτες. Οι μέθοδοι ÄKTAoligopilot plus έχουν σχεδιαστεί για να χρησιμοποιούν την ελάχιστη ποσότητα μονομερών, γεγονός που καθιστά τις πλήρως άνυδρες συνθήκες ουσιαστικό παράγοντα για την επιτυχή σύνθεση. Συμβουλή: Στην αντίδραση σύζευξης θα πρέπει να χρησιμοποιούνται προστατευμένα νουκλεοτίδια, όπως οι φωσφοραμιδίτες, επειδή είναι εξαιρετικά διαλυτά σε άνυδρους οργανικούς διαλύτες, όπως το ακετονιτρίλιο. Η χρήση απροστάτευτων φωσφοραμιδιτών νουκλεοτιδίων μπορεί να οδηγήσει σε ασαφείς παρενέργειες. Υπολογισμός της απόδοσης σύζευξης Η απόδοση σύζευξης υπολογίζεται από το ολοκλήρωμα κάτω από την κορυφή αποτριτυλίωσης. Για τον υπολογισμό, μπορεί να χρησιμοποιηθεί είτε UV είτε αγωγιμότητα. Σημείωση: Τύπος απόδοσης Οι αποδόσεις σύζευξης υπολογίζονται χρησιμοποιώντας τις ίδιες βάσεις (δηλ., da με προηγούμενο da). Συνεπώς, η υπολογισμένη απόδοση είναι πάντα 100% μετά τον πρώτο υπολογισμό. Αυτό επηρεάζει την υπολογισμένη μέση απόδοση σύζευξης για τη σύνθεση. b = ο αριθμός των βάσεων από την τελευταία πανομοιότυπη βάση που δίνεται από το Base_id [Equation] () Εάν η απόδοση σύζευξης μειωθεί κάτω από μια προκαθορισμένη τιμή, η σύνθεση μπορεί να οριστεί ώστε να τεθεί σε παύση, για να επιτραπεί στο χρήστη να συνεχίσει ή όχι. Αυτή η ρύθμιση γίνεται στον έλεγχο συστήματος UNICORN. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 177

178 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.2 Χημεία προστασίας C.2 Χημεία προστασίας Αρχές της χημείας προστασίας Για την αποφυγή παρενεργειών κατά τη διάρκεια της σύνθεσης, χρησιμοποιούνται κάποιες μοριακές ομάδες. Οι ομάδες προστασίας είναι μόνιμες ή προσωρινές. Οι διαφορές συνοψίζονται στον παρακάτω πίνακα. Τύποι χημικής προστασίας Αφαίρεση των ομάδων προστασίας Απαιτείται σε Μόνιμη προστασία Μετά από μια πλήρη σύνθεση Πρωτεύουσες ομάδες αμινών όλων των ετεροκυκλικών βάσεων Εμποδίζουν τις νουκλεόφιλες αντιδράσεις με την ομάδα αμίνης Μία ομάδα υδροξυλίου στο φωσφορικό υπόλειμμα Εμποδίζει το σχηματισμό πολλαπλών δεσμών στη φωσφορική ομάδα Προσωρινή προστασία Μετά από ένα βήμα στη σύνθεση Ομάδα 5'-υδροξυλίου του εισερχόμενου νουκλεοτιδίου Αποφεύγει τη σύζευξη αρκετών νουκλεοτιδίων σε ένα βήμα Άλλες λειτουργικές ομάδες στα νουκλεοτίδια δεν αντιδρούν υπό συνθήκες σύνθεσης και συνεπώς δεν απαιτούν προστασία. 178 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

179 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.2 Χημεία προστασίας Προστασία αμίνης (μόνιμη) Οι πρωτεύουσες ομάδες αμίνης στις ετεροκυκλικές βάσεις γενικά προστατεύονται ως αμίδια, όπως στην ακόλουθη εικόνα. Στρατηγικές στην προστασία αμιδίτη DNA Για την προστασία αμιδίτη DNA, διατίθενται δύο στρατηγικές: τυπική προστασία και προστασία PAC. Οι λεπτομέρειες συνοψίζονται στον παρακάτω πίνακα. Βάση A C G T Τυπική προστασία Βενζοΰλιο Βενζοΰλιο Ισοβουτυρύλιο Κανένας Προστασία PAC Φαινοξυακετύλιο (PAC) Ισοβουτυρύλιο Ισοπροπυλφαινοξυακετύλιο (ipr-pac) Κανένας Για προστασία αμιδίτη RNA Προστασία αμιδίτη RNA Στην προστασία αμιδίτη RNA, συνήθως χρησιμοποιούνται οι γρήγορες προστατευτικές ομάδες στον ακόλουθο πίνακα. Βάση A C G U Προστασία Φαινοξυακετύλιο (PAC) Ακετύλιο (Ac) Ισοπροπυλφαινοξυακετύλιο (ipr-pac) Κανένας ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 179

180 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.2 Χημεία προστασίας Επιπλέον, οι αμιδίτες RNA έχουν ένα προστατευτικό t-βουτυλδιμεθυλσιλυλίο (TBDMS) στο 2' υδροξύλιο σακχάρου. Αποπροστασία των φωσφοραμιδιτών Η αποπροστασία των ομάδων που προστατεύουν αμίνες απαιτούν επεξεργασία με πυκνό υδροξείδιο του αμμωνίου κατά τη διάρκεια της νύχτας στους 55 έως 60ºC. Προστασία φωσφορικού (μόνιμη) Διατίθενται αρκετές μέθοδοι για την προστασία της ομάδας υδροξυλίου φωσφίτη, ανάλογα με τη μέθοδο σύζευξης που χρησιμοποιείται για την παραγωγή ολιγονουκλεοτιδίων. Η μέθοδος που χρησιμοποιείται στο ÄKTAoligopilot plus είναι η προστασία της ομάδας υδροξυλίου με μια ομάδα β-κυανοαιθυλενίου. Αυτό εμποδίζει την αλκυλίωση της θυμίνης κατά τη διάρκεια της σύνθεσης, γεγονός που μπορεί να συμβεί εάν χρησιμοποιηθεί ομάδα που προστατεύει το μεθύλιο. Αποπροστασία φωσφορικού Η συνιστώμενη μέθοδος για την αφαίρεση της ομάδας β-κυανοαιθυλίου από το φωσφορικό σκελετό στήριξης είναι με επεξεργασία με 20% διαιθυλαμίνη (DEA) σε ACN. Η αποπροστασία φωσφορικού μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί με πυκνό υδροξείδιο του αμμωνίου. Ωστόσο, αυτό μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τροποποιήσεις των ετεροκυκλικών βάσεων. 180 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

181 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.2 Χημεία προστασίας Προστασία υδροξυλίου σακχάρου (προσωρινή) Η ομάδα 5'-υδροξυλίου στο εισερχόμενο νουκλεοτίδιο προστατεύεται με ομάδα 4,4'- διμεθοξυτριτυλίου (DMTr) όπως απεικονίζεται στην ακόλουθη εικόνα. Η ασταθής παρουσία οξέος ομάδα DMTr είναι σταθερή υπό τις ελεγχόμενες συνθήκες της σύζευξης. Η απορροφητικότητα ή αγωγιμότητα μετριέται όταν το DMTr διασπάται για να δώσει μια μέτρηση της απόδοσης σύζευξης. Αποπροστασία υδροξυλίου σακχάρου Η ομάδα υδροξυλίου σακχάρου αφαιρείται στην αρχή κάθε κύκλου στη σύνθεση με κατεργασία με 3% διχλωροξικό οξύ (DCA) σε τολουόλιο. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 181

182 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.3 Χημεία ενεργοποίησης C.3 Χημεία ενεργοποίησης Επισκόπηση Οι αμιδίτες, όπως παρέχονται, έχουν μια δευτερεύουσα αμίνη δεσμευμένη στο τμήμα φωσφόρου, η οποία ενεργοποιείται υπό ασθενώς όξινες συνθήκες, μετατρέποντας τον αμιδίτη σε παράγωγο τετραζολίδης (βλ. παρακάτω εικόνα). Η μετατροπή αμιδίτη συμβαίνει καθώς ο αμιδίτης προστίθεται μαζί με έναν ενεργοποιητή στο στερεό φορέα. 182 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

183 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.4 Ο στερεός φορέας C.4 Ο στερεός φορέας Επισκόπηση Η σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίων στο ÄKTAoligopilot plus λαμβάνει μέρος σε έναν στερεό φορέα που αποτελείται από χάντρες πολυστυρενίου με σταυροειδείς δεσμούς. Τα αντιδραστήρια στο διάλυμα περνούν μέσα από μια στήλη που έχει φορτωθεί με το φορέα, και το αναπτυσσόμενο ολιγονουκλεοτίδιο παραμένει συνδεδεμένο στο φορέα καθ' όλη τη σύνθεση. Ο φορέας έχει προετοιμαστεί με ένα νουκλεοζίτη που είναι προσδεμένος στο άκρο ενός συνδέτη, όπως απεικονίζεται στην ακόλουθη εικόνα. Ο συνδέτης μετά διασπάται αφού ολοκληρωθεί η σύνθεση. Αυτός ο νουκλεοζίτης γίνεται το υπόλειμμα 3'-τελικού άκρου στο τελικό προϊόν. Διατίθενται τυπικά και προσαρμοσμένα Primer Supports 5G l φορτωμένα με διάφορους νουκλεοζίτες σε διαφορετικές φορτώσεις για χρήση σε σύνθεση DNA και RNA. Διατίθενται περισσότερες πληροφορίες στη διεύθυνση ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 183

184 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.5 Κύκλος σύνθεσης C.5 Κύκλος σύνθεσης Επισκόπηση Ο κύκλος σύνθεσης προσθέτει ένα υπόλειμμα στο αναπτυσσόμενο ολιγονουκλεοτίδιο στο στερεό φορέα και αποτελείται από τέσσερα κύρια βήματα: Αποτριτυλίωση Σύζευξη Οξείδωση Κάλυψη Επιπλέον, υπάρχουν αρκετά βήματα πλύσης για να εξασφαλιστεί ότι δεν παρεμβαίνει καθόλου υπόλειμμα αντιδραστηρίου από προηγούμενα βήματα με το επόμενο βήμα της αντίδρασης. 184 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

185 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.5 Κύκλος σύνθεσης A DMTr A T G C Monomer bases Base protecting group Detritylation A + DMTr DMTr O DMTr protecting group Phosphite protecting group (=ß-cyanoethyl) Diisopropylamine group Wash Activator Capping group A DMTr Activation O P G + A + P DMTr G Coupling A P DMTr + A Wash oxidation A DMTr P + A Wash capping O A P DMTr + A O Wash Βαθμίδα Αποτριτυλίωση Περιγραφή Η ομάδα 5'-DMTr αφαιρείται από το υπόλειμμα τελικού άκρου στο στερεό φορέα. Η ομάδα υδροξυλίου διατίθεται για σύζευξη ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 185

186 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.5 Κύκλος σύνθεσης Βαθμίδα Περιγραφή Σύζευξη Ο εισερχόμενος αμιδίτης ενεργοποιείται με έναν ενεργοποιητή. Αυτό σχηματίζει έναν σύνδεσμο 3'-5' φωσφίτη στο αναπτυσσόμενο ολιγονουκλεοτίδιο. Σημείωση: Οι πλήρως άνυδρες συνθήκες αποτελούν ουσιαστικό παράγοντα για την απόδοση αυτού του βήματος. Οξείδωση Ο τριεστέρας φωσφίτη οξειδώνεται σε φωσφοροτριεστέρα χρησιμοποιώντας ιώδιο/νερό σε πυριδίνη. Σημείωση: Εάν οι φωσφοροθειοϊκές συνδέσεις είναι επιθυμητές σε αυτό το στάδιο, χρησιμοποιήστε ένα αντιδραστήριο θειολίωσης αντί για ιώδιο/νερό ως αντιδραστήριο οξείδωσης. Κάλυψη Οι ομάδες 5'-υδροξυλίου που δεν έχουν αντιδράσει μετατρέπονται σε ακυλικά, τα οποία εμποδίζουν το σχηματισμό ετερογενών προϊόντων ολιγονουκλεοτιδίων. Αποτριτυλίωση Πριν την αποτριτυλίωση, ο φορέας πλένεται με ακετονιτρίλιο για την αφαίρεση των αντιδραστηρίων από το προηγούμενο βήμα. Μετά την αποτριτυλίωση, ο φορέας πλένετε ξανά με ακετονιτρίλιο. Η αποτριτυλίωση εκτελείται χρησιμοποιώντας 3% διχλωροξικό οξύ (DCA) σε τολουόλιο. Ανάλογα με την κλίμακα, η επεξεργασία για 2 έως 5 λεπτά επαρκεί για να συμβεί αυτή η αντίδραση, παρότι η ποσότητα του αντιδραστηρίου αποτριτυλίωσης είναι πιο σημαντική από ότι ο χρόνος. Όταν η ομάδα DMTr απελευθερώνεται, παρακολουθείται από φως UV για να μετρηθεί η απόδοση της σύζευξης. Η ποσότητα του DMTr που απελευθερώνεται συσχετίζεται άμεσα με την ποσότητα ολιγονουκλεοτιδίων πλήρους μήκους στον στερεό φορέα (δηλ. την ποσότητα του τελευταίου νουκλεοτιδίου που προστέθηκε). Σημείωση: Η επεξεργασία με σκληρό οξύ μπορεί να οδηγήσει σε αποπουρίνωση της αδενοσίνης με επακόλουθο σπάσιμο της αλυσίδας ολιγονουκλεοτιδίων όταν το τελικό προϊόν είναι αποπροστατευμένο. Επειδή η διάσπαση δεν συμβαίνει μέχρι την ολοκλήρωση της σύνθεσης, δεν ανιχνεύεται με την παρακολούθηση DMTr. Επιλέξτε συνθήκες αποτριτυλίωσης που ελαχιστοποιούν την αποπουρίνωση του τυπικού A-αμιδίτη. 186 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

187 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.5 Κύκλος σύνθεσης Σύζευξη Η σύζευξη λαμβάνει χώρα όταν ένα μείγμα αμιδίτη και ενεργοποιητή σε ξηρό ακετονιτρίλιο περνάει μέσα από τον στερεό φορέα. Ο ενεργοποιητής που χρησιμοποιείται είναι ένας ενεργοποιημένος αμιδίτης, αναφερόμενος ως παράγωγο τετραζολίδης. Ο αμιδίτης μετατρέπεται με αντίδραση με τον ενεργοποιητή σε παράγωγο τετραζολίδης που περιέχει μια υψηλά αντιδραστική ομάδα φωσφίτη, δείτε παρακάτω εικόνα. Το ενδιάμεσο αυτό αντιδράει εύκολα με οποιοδήποτε δότη ηλεκτρονίων: υπό συνθήκες σύνθεσης, ο μόνος δότης που διατίθεται είναι η ομάδα 5'-υδροξυλίου στο αναπτυσσόμενο ολιγονουκλεοτίδιο. Εντός λίγων λεπτών, η απόδοση της αντίδρασης σύζευξης είναι συνήθως 99% για DNA και 98,5% για RNA. Διατηρώντας αυστηρά άνυδρες συνθήκες και ποιότητα αντιδραστηρίου, αποφεύγεται η ανάγκη για μεγάλη περίσσεια αμιδιτών. Η σύνθεση στο ÄKTA oligopilot plus συνήθως επιτυγχάνει απόδοση σύζευξης μεγαλύτερη από 98,5% για DNA με περίσσεια αμιδίτη 1,5 molar, με την προϋπόθεση όταν τα αντιδραστήρια είναι της υψηλότερης ποιότητας και οι διαλύτες είναι εντελώς άνυδροι. Μακράν η πιο συνηθισμένη αιτία αποτυχίας στη σύνθεση ολιγονουκλεοτιδίου είναι η χρήση αντιδραστηρίων κακής ποιότητας ή λανθασμένα συντεθειμένα αντιδραστήρια. Οξείδωση Πριν την οξείδωση, ο φορέας πλένεται με ακετονιτρίλιο για την αφαίρεση του ενεργοποιητή και του αμιδίτη που δεν έχει αντιδράσει. Η ομάδα φωσφίτη οξειδώνεται σε ένα πιο σταθερό φωσφορικό, χρησιμοποιώντας διάλυμα 0,05 M ιωδίου σε 9:1 πυριδίνη/νερό, δείτε την ακόλουθη εικόνα. Ο χρόνος επαφής οξείδωσης είναι ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 187

188 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.5 Κύκλος σύνθεσης 1 λεπτό για συνθέσεις DNA 2 λεπτά για συνθέσεις RNA. Κάλυψη Σε αυτό το βήμα, καλύπτονται τυχόν μη αντιδρούσες ομάδες 5'-υδροξυλίου στο ολιγονουκλεοτίδιο. Αυτό εξασφαλίζει ότι μόνο σε ολόκληρες αλυσίδες θα προστεθεί νουκλεοτίδιο σε επακόλουθα βήματα σύζευξης, και βοηθάει στην εξασφάλιση ενός ομοιογενούς προϊόντος. Η κάλυψη περιλαμβάνει ακυλίωση χρησιμοποιώντας οξικό ανυδρίτη σε ένα μείγμα N- μεθυλιμιδαζόλης, κολιδίνης και ακετονιτριλίου. Μπορούν να χρησιμοποιηθούν και άλλα αντιδραστήρια ακυλίωσης. Το αντιδραστήριο κάλυψης προετοιμάζεται στο ÄKTA oligopilot plus με ανάμειξη διαλύματος κάλυψης A (20% N-μεθυλιμιδαζόλη σε ακετονιτρίλιο) και διαλύματος κάλυψης B (20% οξικός ανυδρίτης και 30% sym-κολιδίνη σε ακετονιτρίλιο). Το σχήμα αντίδρασης εμφανίζεται στην ακόλουθη εικόνα. Μετά την πλύση με ακετονιτρίλιο για την αφαίρεση της περίσσειας αντιδραστηρίου κάλυψης, το ολιγονουκλεοτίδιο είναι έτοιμο για τον επόμενο κύκλο ή για μετα-συνθετική επεξεργασία. 188 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

189 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.6 Μετα-συνθετική επεξεργασία C.6 Μετα-συνθετική επεξεργασία Επισκόπηση Αφού ολοκληρωθεί η σύνθεση, η στήλη με το ολιγονουκλεοτίδιο δεσμευμένο στο φορέα αφαιρείται από το σύστημα και δέχεται περαιτέρω επεξεργασία για διάσπαση και αποπροστασία. Οι διαδικασίες αυτές περιγράφονται στις οδηγίες λειτουργίας για το ÄKTAoligopilot plus. Παρενέργειες κατά την αφαίρεση προστατευτικών ομάδων Η αφαίρεση των ομάδων που προστατεύουν το φωσφορικό β-κυανοαιθύλιο από τα ολιγονουκλεοτίδια σε πυκνά διαλύματα υδροξειδίου αμμωνίου σε θερμοκρασίες που κυμαίνονται από 26 έως 650 C μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τροποποιήσεις των ετεροκυκλικών βάσεων, ιδιαίτερα της θυμίνης και επίσης της κυτοσίνης. Η ομάδα β-κυανοαιθυλενίου από το φωσφορικό σκελετό στήριξης εξαλείφεται σε υδροξείδιο αμμωνίου με έναν μηχανισμό β-εξάλειψης και σχηματίζει ακρυλονιτρίλιο, το οποίο είναι το αντιδρών είδος στην αλκυλίωση και τροποποίηση των βάσεων. Τι κάνει η επεξεργασία με DEA Η β-εξάλειψη καταστέλλεται εάν τα ολιγονουκλεοτίδια (ενώ είναι ακόμη δεσμευμένα στον στερεό φορέα) υποστούν επεξεργασία με 20% διάλυμα διαιθυλαμίνης (DEA) σε άνυδρο ακετονιτρίλιο μέσω της στήλης για 10 λεπτά, ακολουθούμενη από κανονική διάσπαση και αποπροστασία σε διάλυμα υδροξειδίου αμμωνίου. Αυτό το τροποποιημένο πρωτόκολλο αποπροστασίας αυξάνει την απόδοση του προϊόντος ολιγονουκλεοτιδίων πλήρους μήκους κατά 3 έως 7%, ανάλογα με τη σύνθεση του ολιγονουκλεοτιδίου. ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 189

190 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.6 Μετα-συνθετική επεξεργασία Επιδράσεις της επεξεργασίας με DEA Τα ακόλουθα διαγράμματα εμφανίζουν τις διαφορές που προκύπτουν από την επεξεργασία με DEA. Σημειώστε τις διαφορές στα ύψη κορυφών στα βέλη. Χωρίς επεξεργασία με DEA Ολιγονουκλεοτίδια επεξεργασμένα με DEA DAD1 A, Sig=260,4 Ref=360,100 (2006\ D) PMP1, Solvent D DAD1 A, Sig=260,4 Ref=360,100 (2006\ D) PMP1, Solvent D Norm Norm min min 190 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

191 C Χημεία σύνθεσης ολιγονουκλεοτιδίων C.7 Θειολιώμενα ολιγονουκλεοτίδια C.7 Θειολιώμενα ολιγονουκλεοτίδια Επισκόπηση Τα αντιδραστήρια θειολίωσης είναι ενώσεις που εκτελούν θειολίωση τριεστέρων φωσφιτών, δημιουργώντας φωσφοροθειοϊκούς δεσμούς στην αλληλουχία ολιγονουκλεοτιδίων. Τα ολιγονουκλεοτίδια που τροποποιούνται με τον τρόπο αυτό είναι λιγότερο ευαίσθητα στην πέψη νουκλεάσης από ό,τι τα τυπικά ολιγονουκλεοτίδια, και έχουν χρησιμοποιηθεί με επιτυχία ως αντινοηματικές αλληλουχίες για την αναστολή της έκφρασης γονιδίων δημιουργώντας σταθερούς δεσμούς με τον νοηματικό κλώνο των αλληλουχιών-στόχων. Για να γίνει μια τέτοια αλλαγή στη σύνθεση στο ÄKTAoligopilot plus, η αλληλουχία πρέπει να τροποποιηθεί στο UNICORN. Κατόπιν, θα εισαχθεί αυτόματα το αντιδραστήριο θειολίωσης κατά το βήμα οξείδωσης της σύνθεσης. Παραδείγματα αντιδραστηρίων Τα συνηθισμένα αντιδραστήρια θειολίωσης είναι το Beaucage (αριστερά) και το PADS (δεξιά). ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 191

192 D Ανάλυση και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων Παράρτημα D Ανάλυση και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Σε αυτό το κεφάλαιο περιγράφονται οι μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση και τον καθαρισμό των ολιγονουκλεοτιδίων. Ανάλυση ανταλλαγής ιόντων Η ανταλλαγή ιόντων χρησιμοποιείται για την ανάλυση φωσφοδιεστερικών και φωσφοροθειοϊκών ολιγονουκλεοτιδίων. Η τεχνική αυτή είναι πολύ αποδοτική στην ανίχνευση αλληλουχιών αποτυχίας τόσο μικρού μεγέθους όσο είναι οι μοναδικοί νουκλεοζίτες και δινουκλεοτίδια. Ο μοναδικός νουκλεοζίτης συνήθως εκλούεται ως πρώτη κορυφή στο χρωματογράφημα, δίπλα από την κορυφή συνεχούς ροής, και συνήθως είναι πολύ μικρή. Μεγέθη κορυφών άνω του 5 % είναι ενδεικτικά προβλημάτων κατά τον πρώτο κύκλο σύνθεσης. Τα συνήθη προβλήματα είναι έλλειψη καθαρισμού, καθόλου πλύση στήλης ή νωπά αντιδραστήρια. Συνιστώμενες συνθήκες ανάλυσης Φωσφοροδιεστερικά ολιγονουκλεοτίδια Φωσφοροθειοϊκά ολιγονουκλεοτίδια Στήλη Θερμοκρασία στήλης Όγκος έγχυσης Ρυθμός ροής NucleoPac PA 100 4x250 mm, DIONEX, p/n ºC 2 µl 1,0 ml/min Εκλουστής A 10 mm τρι(υδροξυμεθυλ) αμινομεθάνιο, 10 mm NaClO 4 1 mm EDTA, 25 mm TRIS, 10% ακετονιτρίλιο, ph 8,0 192 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

193 D Ανάλυση και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων Εκλουστής B Βαθμίδωση Άλλα Φωσφοροδιεστερικά ολιγονουκλεοτίδια 10 mm τρι(υδροξυμεθυλ) αμινομεθάνιο, 300 mm NaClO 4 1 μέχρι 55% σε 30 λεπτά Συγκέντρωση δείγματος: 10 OD/ml Φωσφοροθειοϊκά ολιγονουκλεοτίδια 1 mm EDTA, 25 mm TRIS, 10% ακετονιτρίλιο, 3 M NH 4 Cl, ph 8,0 1 μέχρι 70% B σε 40 λεπτά 1 Ρυθμός ροής: 1,0 ml/min 2 UV: A260 3 Δείγμα: 20 AU/(260nm)/ml, Trityl-ON Παράδειγμα χρωματογραφημάτων Φωσφοδιεστερικά νουκλεοτίδια Φωσφοροθειοϊκά νουκλεοτίδια ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 193

194 D Ανάλυση και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων Υπολογισμός της τιμής PO του 20-μερούς Ανάλυση RPC Η ανάλυση χρωματογραφίας ανάστροφης φάσης (RPC) είναι μια εξαιρετική τεχνική για το διαχωρισμό των προϊόντων Trityl ON και Trityl OFF. Η μέθοδος αυτή μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για να διαπιστωθεί εάν το ολιγονουκλεοτίδιο είναι πλήρως απροστάτευτο. Εάν η αποπροστασία είναι ελλιπής, η κύρια κορυφή θα διαιρεθεί σε έναν αριθμό κορυφών, ανάλογα με πόσες προστατευτικές ομάδες έχει ακόμη το ολιγονουκλεοτίδιο στις βάσεις. Η στήλη RPC από την GE Healthcare, SOURCETM 5RPC ST 4.6/150, δίνει πολύ καλή ανάλυση ακόμη και χωρίς ομάδα τριτυλίου, επειδή η φόρτωση στήλης βασίζεται σε πολυμερές και μπορεί να εκτελεστεί σε υψηλά ph. Συνιστώμενες συνθήκες ανάλυσης Παράμετρος Στήλη Εκλουστής A, ph = 12 Τιμή SOURCE 5RPC ST 4.6/ mm NaOH 0,1% χλωριούχου τετρααιθυλαμμωνίου 1% ακετονιτρίλιο 194 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

195 D Ανάλυση και καθαρισμός ολιγονουκλεοτιδίων Παράμετρος Εκλουστής B, ph = 12 Βαθμίδωση Ρυθμός ροής Τιμή 50% ακετονιτρίλιο 0 έως 40% 1 ml/λεπτό Παράδειγμα χρωματογραφήματος Το παρακάτω χρωματογράφημα περιέχει ένα μείγμα ολιγονουκλεοτιδίων με 15, 18, 19 και 20 βάσεις. Σχήμα για καθαρισμό ολιγονουκλεοτιδίων Cleavage & Deprotection of oligonucleotide from solid phase support DMT off DMT On IEX HPLC Separation of full length product from shorter failure sequences based upon size and differing charge to mass ration. When trityl on there will be an oncolumn cleavage of the trityl group Reversed phase chromatography Separation of more hydrophobic DMT containing species from detritylated failure sequences Removal of DMT group with acetic acid Desalting by gel-filtration or ultra-filtration Oligo ready to use Gel-filtration to remove small molecules like salts and Trityl alcohol Oligo ready to use ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 195

196 E Διαγράμματα ροής σύνθεσης Παράρτημα E Διαγράμματα ροής σύνθεσης Πληροφορίες για το κεφάλαιο αυτό Το κεφάλαιο αυτό περιέχει γραφήματα των σταδίων του κύκλου σύνθεσης. Στο παρόν κεφάλαιο Ενότητα E.1 Επισκόπηση του κύκλου σύνθεσης E.2 Πλύση στήλης E.3 Αποτριτυλίωση E.4 Πλύση Detrit E.5 Προσθήκη αντιδραστηρίων σύζευξης E.6 Ανακυκλοφορία αντιδραστηρίων σύζευξης E.7 Πλύση σύζευξης E.8 Οξείδωση E.9 Πλύση οξείδωσης E.10 Κάλυψη E.11 Πλύση κάλυψης Βλ. σελίδα ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

197 E Διαγράμματα ροής σύνθεσης E.1 Επισκόπηση του κύκλου σύνθεσης E.1 Επισκόπηση του κύκλου σύνθεσης ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 197

198 E Διαγράμματα ροής σύνθεσης E.2 Πλύση στήλης E.2 Πλύση στήλης 198 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

199 E Διαγράμματα ροής σύνθεσης E.3 Αποτριτυλίωση E.3 Αποτριτυλίωση ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 199

200 E Διαγράμματα ροής σύνθεσης E.4 Πλύση Detrit E.4 Πλύση Detrit 200 ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD

201 E Διαγράμματα ροής σύνθεσης E.5 Προσθήκη αντιδραστηρίων σύζευξης E.5 Προσθήκη αντιδραστηρίων σύζευξης ÄKTAoligopilot plus Οδηγίες λειτουργίας AD 201