Surveillance of drug-resistant bacteria among the pediatric patients Bachelor student: Batzaya Supervisor: Ass.Prof. Chimeddorj Battogtokh /MNUMS, School of Pharmacy and Biomedicine/ Background Bacterial disease among the Mongolian population has been one of the leading causes of death. As far as the treatment of access antibacterial action of many antibiotics is increasing prevalence of bacterial resistance of these drugs. US 2 million hospital acquired infections were registered 80,000 cases per year in the United States leads to a poor prognosis and mortality, and it takes an average of US $ 4,5-5,7 billion a year. Our needs to detecting multi drug resistant bacterial infection detection limit resistance, resistance, laboratory testing, surveillance and research to identify genetic patterns. 1
Objectives of the study Surveillance of multi drug-resistantresistant bacteria in pediatric clinical setting Materials and methods: Sample collection: Шинжлэгдэхүүн: Судалгаанд Улаанбаатар The active surveillance хотын ЭХЭМҮТ-ийн study Хүүхдийн was conducted эмнэлгийн in Maternal БДШЭЭСТ Child, ЕМЗТ, ХЭЭТ, HealthЦЭХСТ-т Center хэвтэн эмчлүүлэгсэдээс "Children's идэвхтэй Hospital" тандалтын from 2 March аргаар 2016цуглуулсан to 2 шээсний April 2016. сорьц болон шулуун гэдэсний арчдас хамрагдлаа. The urine samples were collected from the patients department general surgery and Таниулсан department зөвшөөрлийн of nephrology хуудас and endocrinology; rectal swabs were collected from the patients department children's intensive care unit, department of hematology and oncology. Нярайн уян хөвөн бамбар, ариун бамбар 2
Materials and methods Sample Bacterial culture CHROMagar, ESBL, KPC, VRe Non cultured excluded Incubated at 37C for 18-24h Bacterial identification Detection of antibiotic resistance Detection of biofilm activity Detection of resistance gene 1. Bacterial identification 1. CHROMagar ESBL, KPC,VRE 2. Pure culture 3. Identification 6. Identification for VITEK 2 3
2. Detection of antibiotic resistance Disk diffusion method Agar dilution method Дэс дараалан шингэрүүлсэн антибиотикийг BHI агар (тархи зүрхний агар)-т нэвчүүлэх аргаар ванкомицины ӨСБТ (MIС>32 мкм/мл R; 4 мкм/мл I 8-16 мкм/мл S) болон НLAR (Аминогликозидод өндөр түвшний тэсвэржилт) ) тодорхойллоо (R= 2000мкг/мл, S= 500мкг/мл) According to CLSI guideline vancomycin resistance and high grade aminoglycozide resistance were tested by agar dilution method. Result of the study Зураг2 Сорьцны төрөл ХЭЭТ ЦЭХСТ БДШЭЭСТ ЕМЗТ Нийт Шулуун гэдэсний 21 34 55 арчдас Шээсний сорьц 42 28 70 Хүснэгт 4 4
Period of hospitalized patients Тасаг Эмнэлэгт хэвтэж буй хугацаа (хоног) Дундаж Хамгийн их ЦЭХСТ 9 хоног 68 хоног ХЭЭТ 7 хоног 11 хоног БДШЭЭСТ 8 хоног 30 хоног ЕМЗТ 8 хоног 35 хоног Нийт 8 хоног 68 хоног Detection of resistant bacteria Зураг 3. ЭТБ-ийн халдварыг илрүүлсэн дүн (тасгуудаар) Судалгаанд хамрагдагсадын 37.6% (47/125)-д нь ЭТБ илэрсэн 5
Detection of resistant bacteria Detection of resistant bacteria Зураг 5. Шинжлэгдэхүүний төрлийн хувьд KTЭ 7 (100%), ВТЭ 7 (100%), ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактерийн 88% (29) нь шулуун гэдэсний арчдаснаас, ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактерийн 12% (4) нь шээсний сорьцноос тус тус илэрсэн. Өөрөөр хэлбэл нийт ЭТБ илэрсэн шинжлэгдэхүүний (43) 92% шулуун гэдэсний арчдаснаас, 8% нь шээсний сорьцноос илэрсэн байна. 6
Өргөтгөсөн үйлдэлтэй β лактамаза ялгаруулдаг Грам сөрөг савханцрыг илрүүлсэн шинжилгээний дүн Зураг 23 Зураг 7. Судалгаанд хамрагдагсадын шинжлэгдэхүүнээс нийт 33 ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактер илэрсэн бөгөөд түүнээс 12 (36,3%) Кlebsiella pneumoniae, 18 (54,5%) E.Coli, харин K.Oxytoca, А.Baumanii, C.Fruendii тус тус 1 илэрсэн Vancomycin resistant enterococcus Зураг 27а. ВТЭ-ийн 7 омгийн 86% (6/7) нь E.Faecium, 14% (1/7) нь E.Gallinarum илэрсэн. ХЭЭТ-т хэвтэн эмчлүүлэгсдийн 5, ЦЭХСТ-т эмчлүүлэгсдээс 2 нь ванкомицинд тэсвэртэй энтерококк өсгөвөрлөгдсөн. Харин БДШЭЭСТ, ЕМЗТ-т хэвтэн эмчлүүлэгсдэд ВТЭ илрээгүй. 7
Carbophenim resistant enterobacter Зураг 28. Зураг 12. Detection of antibiotic resistant ЭТБ й 47 й 4 ЭТБ илэрсэн нийт 47 шинжлэгдэхүүний 4 (8.51%) шээсний сорьц, 43 (91,49%) нь шулуун гэдэсний арчдас байв. 8
Detection of antibiotic resistant bacteria in urine sample Зураг 16. Шээсний сорьцонд антибиотикт мэдрэг чанарыг тодорхойлсон дүн: АМ-ампициллин, CZ-цефазолин, GM-гентамицин, TOB-тобрамицин, АК-амикацин, IMC-имипенем, TS-триметопримсульфаметаксазол, CAZ-цефтазидим, ТЕтетрациклин, СТХ-цефотаксим, NIT-нитрофурантойн, NOR-норфлоксацин Detection of antibiotic resistant bacteria in rectal swab 40 35 36 36 34 35 32 36 32 30 25 20 15 10 20 13 14 12 10 22 10 18 16 14 12 10 5 0 4 3 3 3 2 2 1 1 1 AM CZ GM TOB AK IMC TS CAZ TE CTX CIP AMC 9
Result of vancomycin resistant enterococcus Ампициллин,пенициллин, ванкомицинд 100% Тетрациклинд 33.3%, Стрептомицинд 44,4% Ципрофлоксацинд 33.3% тэсвэржиллттэй байна. Зураг 18. ВТЭ-ийн антибиотикт тэсвэржилтийг дискээс нэвчүүлэх аргаар тодорхойлсон байдал Agar dilution method ВТЭ-н ӨСБТ тодорхойлсон шинжилгээний дүн ВТЭ ийн HLAR тодорхойлсон шинжилгээний дүн Дэс дараалан шингэрүүлсэн антибиотикийг BHI агар (тархи зүрхний ханд)-т нэвчүүлэх аргаар ванкомицины ӨСБТ г тодорхойлоход 100% (7/7) тэсвэржсэн байна. ХЭЭТ-аас илэрсэн 3 омгийн фенотип хэв шинж ижил байна. ( 256мкг/мл ВТЭ-ийн 7 омгийн 3 (42.85%) нь аминогликозидод өндөр түвшний тэсвэржилт илэрсэн (R= 2000мкг/мл) 10
ӨСБТ тодорхойлох автомат анализаторын үр дүн Зураг 24. ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактерийн MIC шинжилгээний дүн Result of MIC vancomycin resistant enterococcus Зураг 27б. Ампициллин,, ампициллин/сулбактам, пиперациллин, пиперациллин/тазобактам, мезлоциллин, имипенем болон тигациклинд тус тус 100% (7/7) тэсвэржсэн байна Линезолид болон стрептомицинд 100% (7/7) мэдрэг байна. 11
Карбапенемд тэсвэртэй энтеробактерийн MIC шинжилгээний дүн Хүснэгт 4 Антибиотикийн нэр MIC Антибиотикийн нэр MIC R I S R I S Ампициллин 7 Имипенем 3 4 Ампициллин/ сулбактам 7 Меропенем 7 Пиперациллин 7 Гентамицин 5 2 Пиперациллин / 2 3 2 Ципрофлоксацин 5 2 Тазобактам Цефуроксим 7 Моксифлоксацин 5 2 Цефотаксим 7 Тигациклин 3 4 Цефтазидим 6 1 Триметоприм сульфаметаксазол Эртапенем 1 6 6 1 Ванкомицинд тэсвэртэй Энтерококкын тэсвэржилтийн ген хэв шинжийг илрүүлсэн шинжилгээний дүн SM- хэмжээ тогтоогуур, 1, 3, 5, 6, 9 дугаарт ВТЭ ийн VanA ген хэв шинжийн 360 хос суурийн урттай ПГУ-ын бүтээгдэхүүн илэрсэн байдал. Шинжлэгдэхүүн бүрт 520 хос суурийн урттай дотоод хяналт илэрсэн байдал. PC-Van A- ген хэв шинжийн эерэг хяналт 1010 хос суурийн урттай бүтээгдэхүүн. VanB-ген хэв шинжийн эерэг хяналт 750 хос суурийн урттай бүтээгдэхүүн. NC- сөрөг хяналт 12
Өргөтгөсөн үйлдэлтэй β лактамаза ялгаруулдаг бактерийн тэсвэржилтийн ген хэв шинж ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактер гэдэг нь батлагдсан 33 омгуудад CTX-M хэлбэрийн тэсвэржилт 30,3% (10/33) эерэг АmpC хэлбэрийн тэсвэржилт 3% (1/33) эерэг гарсан. Зураг 26. ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактерийн генотип хэв шинж Цефамицины сорилын үр дүн Зураг 25. ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактерийн цефамицины сорилын үр дүн Бидний судалгаагаар нийт 33 ӨҮБЛ ялгаруулдаг Грам сөрөг бактер илэрсэн ба үүнээс 24% (8/33) нь ӨҮБЛ энзим ялгаруулахаас гадна эмийн бодисыг нэвчүүлэх чанар нь алдагдан эмэнд тэсвэржсэн байна 13
Detection of bacterial biofilm Эмэнд тэсвэртэй омгуудад биофильм үүсгэх идэвхийг үзэхэд ӨҮБЛ ялгаруулдаг 1 омогт биофильм үүссэн. Conclusion of the study 1. During the study 39.2% (49/125) drug-resistant bacteria were detected among clinical and active surveillance samples from the pediatric patients. Among the drug dug resistance s bacteria a ESBL producing gram negatives were 70% (33/41), vancomycin resistance enterococci and karbapenem resistance enterobacteriacae were 15% (7/41), respectively. 2. The all strains of screening test positives were resistant to ampicillin, cefazolin. Multidrug resistance bacteria were detected 12.76% of the all drug resistance bacteria. 3. Bacterial identification analysis showed 34,5% were K.pneumoniae, 29.7% were E.Coli, 12.77% were E.faecium of the drug-resistant bacteria. 14
Conclusion of the study 4. One strain of the drug-resistant bacteria showed biofilm activity which cultured from the patient of the intensive care unit. 5. 71.4% (5/7) were VanA gen type of the VREs. ESBL producing gram negatives carrying 30,3% (10/33) CTX-M, 3% (1/33) AmpC resistance and according to cephamycin test 24%(8/33) had impermeability mechanism of the resistance. 15