2019/04/25 A93A01429AEL 1300063534 24 ml 5,5 ml Pentra C400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in-vitro ποσοτικό προσδιορισμό της γλυκοζυλιωμένης πρωτεΐνης (φρουκτοζαμίνης) σε ορό ή πλάσμα με χρωματομετρία. QUAL-QA-WORI-5542 Rev.1 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: Fructo2 (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) 1.xx Προοριζόμενη χρήση (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της γλυκοζυλιωμένης πρωτεΐνης (φρουκτοζαμίνης) σε ορό και πλάσμα με χρωματομετρία. Κλινικό ενδιαφέρον Η φρουκτοζαμίνη χρησιμεύει ως μέσος χρονικός δείκτης των επιπέδων της γλυκόζης στο αίμα και επιτρέπει την παρακολούθηση της γλυκαιμικής κατάστασης των διαβητικών (1). Ο προσδιορισμός της φρουκτοζαμίνης αποτελεί μια καλή εναλλακτική λύση για τον προσδιορισμό της αιμοσφαιρίνης Α1c σε ασθενείς που εμφανίζουν παραλλαγμένες μορφές αιμοσφαιρίνης. Η ανίχνευση της συγκέντρωσης γλυκοζυλιωμένων πρωτεϊνών (γλυκοαιμοσφαιρίνη, γλυκολευκωματίνη ή γλυκοζυλιωμένες ολικές πρωτεΐνες) είναι γενικά αποδεκτή για την παρακολούθηση του επιπέδου γλυκόζης στους διαβητικούς. Άλλες μέθοδοι προσδιορισμού της φρουκτοζαμίνης, όπως η χρωματογραφία συγγένειας και η μέθοδος του θειοβαρβιτουρικού οξέος, είναι πιο πολύπλοκες, περισσότερο χρονοβόρες και είναι δύσκολο να συγκριθούν μεταξύ διαφορετικών εργαστηρίων (1, 2). Αυτή η δοκιμασία προσδιορισμού βασίζεται στη μέθοδο του κυανού του νιτροτετραζολίου (3) και επιτρέπει τον απλό, ακριβή και εύκολα αυτοματοποιήσιμο προσδιορισμό της μη ενζυματικής γλυκοζυλίωσης των πρωτεϊνών του ορού. Καθώς οι πρωτεΐνες του ορού έχουν μικρότερη διάρκεια ζωής από την αιμοσφαιρίνη (ημίσεια ζωή λευκωματίνης: 19 ημέρες, διάρκεια ζωής ερυθροκυττάρων: περ. 120 ημέρες), ο προσδιορισμός της φρουκτοζαμίνης επιτρέπει τον έλεγχο της κατάστασης της γλυκόζης του αίματος στη διάρκεια μικρότερης περιόδου (1 ως 3 εβδομάδες) από τον προσδιορισμό της γλυκοζυλιωμένης αιμοσφαιρίνης (6 ως 8 εβδομάδες) (4). Η μεταβολή του επιπέδου φρουκτοζαμίνης στον ορό αποτελεί ένδειξη αυξημένης μεταβολικής ανισορροπίας, προτού καν αυτή αντικατοπτριστεί στα επίπεδα της HbA1c. Μετά τη θεραπεία, τα επίπεδα φρουκτοζαμίνης μειώνονται πιο γρήγορα από τα επίπεδα της HbA1c (5). Μέθοδος (6, 7, 8) Χρωματομετρική δοκιμασία από αντίδραση με νιτροκυανούν του τετραζολίου. Η χρωματομετρική δοκιμασία της φρουκτοζαμίνης (γλυκοζυλιωμένη πρωτεΐνη) βασίζεται στην ικανότητα των κετοαμινών να ανάγουν το νιτροκυανούν του τετραζολίου (ΒΝΤ) σε αλκαλικό μέσο. Ο ρυθμός σχηματισμού της φορμαζάνης είναι ευθέως ανάλογος με τη συγκέντρωση της φρουκτοζαμίνης και μετράται φωτομετρικά. Αντιδραστήρια To είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο 1 (R1): Νιτροκυανούν του τετραζολίου (ΝΒΤ) Ουρικάση (μικροβιακή) 1,2 mmol/l 12 μkat/l 1 / 5
Αντιδραστήριο 1 (R1): Μη αντιδραστικό ρυθμιστικό διάλυμα ph 7,5 Σταθεροποιητής Επιφανειοδραστικά Αντιδραστήριο 2 (R2): Ανθρακικό ρυθμιστικό διάλυμα 1,5 mol/l, ph 10,4 To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοση. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Τοποθετήστε το προστατευτικό καπάκι (GBM0969) στην κασέτα. 4. Τοποθετήστε την κασέτα στον ψυχόμενο θάλαμο αντιδραστηρίων. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: ABX Pentra Fructo Cal (A11A01680) (δεν περιλαμβάνεται) 3 x 1 ml (λυοφιλίωμα) Μάρτυρας Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: ABX Pentra Fructo Control N (A11A01681) (δεν περιλαμβάνεται) 3 x 1 ml (λυοφιλίωμα) ABX Pentra Fructo Control P (A11A01682) (δεν περιλαμβάνεται) 3 x 1 ml (λυοφιλίωμα) Κάθε μάρτυρας πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης μαρτύρων και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτοματοποιημένος αναλυτής κλινικής χημείας: Pentra C400 Βαθμονομητής: ABX Pentra Fructo Cal (A11A01680) Μάρτυρες: ABX Pentra Fructo Control N (A11A01681) ABX Pentra Fructo Control P (A11A01682) Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα Ορός. Πλάσμα σε EDTA η Ηπαρίνη. Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα (9): Στους 20-25 C: 3 ημέρες Στους 4-8 C: 2 εβδομάδες Στους -20 C: 2 μήνες Πρέπει να αποφεύγεται επανειλημμένη ψύξη και απόψυξη. Αναμείξτε καλά μετά την απόψυξη. Δείγματα που περιέχουν ίζημα πρέπει να φυγοκεντρούνται πριν από την ανάλυση. Εύρος αναφοράς (8, 10) Προσδιορίστηκε η συγκέντρωση φρουκτοζαμίνης σε 555 άτομα ηλικίας 20-60 ετών τα οποία ήταν φαινομενικά υγιή. Μετά από αυτή τη μελέτη, το εύρος τιμών αναφοράς ορίστηκε στα 205-285 µmol/l για τους μη διαβητικούς ενήλικες. Για ομάδα ασθενών με ελλιπώς ελεγχόμενο διαβήτη, η μέση τιμή της φρουκτοζαμίνης ήταν 396 µmol/l (εύρος τιμών αναφοράς: 228-563 µmol/l). Συγκέντρωση φρουκτοζαμίνης που υπερβαίνει τα όρια αναφοράς αποτελεί ένδειξη υπεργλυκαιμίας που έχει ξεκινήσει 1 έως 3 εβδομάδες πριν ή περισσότερο. Επειδή οι τιμές μπορεί να ποικίλουν ανάλογα με την ηλικία, τη διατροφή, το φύλο και τη γεωγραφική κατανομή, 2 / 5
κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος τιμών αναφοράς. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Για τη διάγνωση, τα αποτελέσματα προσδιορισμού της φρουκτοζαμίνης θα πρέπει να συγκρίνονται πάντα με τα δεδομένα του ιστορικού και τα αποτελέσματα κλινικών και συμπληρωματικών εξετάσεων. Σημείωση (11): Σε περιπτώσεις υδραιμίας (στην εγκυμοσύνη, για παράδειγμα), μπορεί να είναι χρήσιμο να προσδιοριστεί η σχέση μεταξύ φρουκτοζαμίνης και ολικών πρωτεϊνών: Φρουκτοζαμίνη σχετική (µmol/l) = Φρουκτοζαμίνη μετρηθείσα (µmol/l) x 72 (g/l) / Μετρημένες ολικές πρωτεΐνες (g/l) Δεν συνιστάται διόρθωση ανάλογα με το επίπεδο της λευκωματίνης. Η δυσπρωτεϊναιμία μπορεί να οδηγήσει σε λανθασμένα αποτελέσματα. Φύλαξη και σταθερότητα Σταθερότητα πριν το άνοιγμα: Σταθερό μέχρι την ημερομηνία λήξης στην ετικέτα, εφόσον φυλάσσεται στους 2-8 C. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: Ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στο Pentra C400". Διαχείριση αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Γενικές προφυλάξεις Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Μόνο για συνταγογραφημένη χρήση. Το αντιδραστήριο αυτό ταξινομείται ως επικίνδυνο σύμφωνα με τον κανονισμό αρ.1272/2008 (EC). Αντιδραστήριο 1 (R1): Κίνδυνος H318: Προκαλεί σοβαρή οφθαλμική βλάβη. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/ πρόσωπο. P305 + P351 + P338: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΑ ΜΑΤΙΑ: Ξεπλύνετεπροσεκτικά με νερό για αρκετά λεπτά. Εάν υπάρχουν φακοί επαφής, αφαιρέστετους, εφόσον είναι εύκολο. Συνεχίστε να ξεπλένετε. P310: Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. Περιέχει: ισοτριδεκανόλη, αιθοξυλιωμένη Αντιδραστήριο 2 (R2): Προειδοποιηση H315: Προκαλεί ερεθισμό του δέρματος. H319: Προκαλεί σοβαρό οφθαλμικό ερεθισμό. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/ πρόσωπο. P264: Πλύνετε τα χέρια σχολαστικά μετά το χειρισμό. P302 + P352: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο νερό και σαπούνι. P332 + P313: Εάν παρατηρηθεί ερεθισμός του δέρματος: Συμβουλευθείτε γιατρό. P337 + P313: Εάν δεν υποχωρεί ο οφθαλμικός ερεθισμός: Συμβουλευθείτε/Επισκεφθείτε γιατρό. P362 + P364: Βγάλτε τα μολυσμένα ρούχα και πλύντε τα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. Μη χρησιμοποιείτε πιπέτα από το στόμα. Μη συμπληρώνετε τα αντιδραστήρια. Αποφύγετε την κατάποση. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και τις βλεννογόνους. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στο Pentra C400 Ορός, πλάσμα (δεν προορίζεται για χρήση στις ΗΠΑ) Τα δεδομένα απόδοσης που αναφέρονται παρακάτω είναι αντιπροσωπευτικά της απόδοσης στα συστήματα της HORIBA Medical. Αριθμός αναλύσεων: 200 αναλύσεις Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400 παραμένει σταθερή για 60 ημέρες. Όγκος δείγματος: 10 µl/εξέταση 3 / 5
Όριο ανίχνευσης Το όριο ανίχνευσης προσδιορίστηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A2 του CLSI (NCCLS) (12) και ισούται με 3,68 µmol/l. Όριο ποσοτικοποίησης Το όριο ποσοτικοποίησης προσδιορίστηκε σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A2 του CLSI (NCCLS) (12) και ισούται με 6,17 µmol/l. Ακρίβεια και πιστότητα Επαναληψιμότητα (πιστότητα εντός ανάλυσης) Επαναληψιμότητα σύμφωνα με τις συστάσεις του πρωτοκόλλου Valtec (13), με ανάλυση των δειγμάτων 20 φορές: 2 μάρτυρες 5 δείγματα (χαμηλής / μεσαίας / υψηλής συγκέντρωσης) Μέση τιμή µmol/l CV % Δείγμα μάρτυρα 1 289,0 1,02 Δείγμα μάρτυρα 2 504,8 2,82 Δείγμα 1 112,3 4,02 Δείγμα 2 211,2 1,94 Δείγμα 3 418,3 1,54 Δείγμα 4 586,9 1,83 Δείγμα 5 837,1 1,33 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική πιστότητα) Αναπαραγωγιμότητα σύμφωνα με τις συστάσεις του πρωτοκόλλου EP05-A3 του CLSI (NCCLS) (14), με ανάλυση των δειγμάτων εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως): 2 μάρτυρες 5 δείγματα (χαμηλής / μεσαίας / υψηλής συγκέντρωσης) Μέση τιμή µmol/l CV % Δείγμα μάρτυρα 1 265 2,0 Δείγμα μάρτυρα 2 508 2,4 Δείγμα 1 115 2,1 Δείγμα 2 217 2,2 Δείγμα 3 449 2,2 Δείγμα 4 659 2,1 Δείγμα 5 886 1,9 Εύρος μέτρησης Η δοκιμασία προσδιορισμού επαλήθευσε εύρος μέτρησης από 72,7 µmol/l έως 900 µmol/l. Το εύρος μέτρησης επεκτείνεται έως τα 1800 µmol/l με την αυτόματη μετα-αραίωση. Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου εκτιμήθηκε έως τα 900 µmol/l σύμφωνα με τις συστάσεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (15). Συσχέτιση Δείγματα ασθενών: Ορός Αριθμός δειγμάτων ασθενών: 134 Τα δείγματα συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις συστάσεις του πρωτοκόλλου EP09-A3 του CLSI (NCCLS) (16). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 76,8 µmol/l έως 858,2 µmol/l. Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (17) είναι: Y = 1,02 X + 2,10 (µmol/l) με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,998. Αλληλεπιδράσεις Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 54 µmol/l (94 mg/dl). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα τριγλυκεριδίων έως και 4,97 mmol/l (435 mg/dl). Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 48,9 µmol/l (2,86 mg/dl). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 20 µmol/l (1,18 mg/dl). Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 175 µmol/l (3,08 mg/dl). Ιβουπροφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 2,43 mmol/l (50,1 mg/dl). Ακεταμινοφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 1324 µmol/l (20 mg/dl). Ακετυλοσαλικυλικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 3,62 mmol/l (65,16 mg/dl). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (18, 19). Σταθερότητα βαθμονόμησης Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων μάρτυρα. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 21 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα 4 / 5
αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Βιβλιογραφία 1. Armbruster DA. Clin. Chem. (1987) 33: 2153-2163. 2. Furth AJ. Anal. Biochem. (1988) 175: 347-360. 3. Johnson RN, Metcalf PA, Baker JR. Clin. Chim. Acta. (1983) 127: 87-95. 4. Tahara Y, Shima K. Diabetes Care (1995) 18: 440-447. 5. Martina WV, Martijn EG, van der Molen M, Schermer JG, Muskiet FA. J. Clin. Chem. (1993) 39: 2259-2265. 6. Schleicher ED, Vogt BW. Clin. Chem. (1990) 36: 136-139. 7. Siedel J, Vogt B, Kerscher L, et al. Serum fructosamine assay: two different color reagents compared with reference to a HPLC-procedure. Clin. Chem. (1988) 34: 1316. 8. Kruse-Jarres JD, Jarausch J, Lehmann P, et al. A new colorimetric method for the determination of fructosamine. Lab. Med. (1989) 13: 245-253. 9. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2: 32 (2002). 10. Melzi d'eril GV, Bosini T, Solerte SB, et al. Performance and clinical significance of the new fructosamine assay in diabetic patients. Wien Klin Wochenschr Suppl (1990) 180: 60-63. 11. Henrichs HR, ed. European Fructosamine Workshop. Wien Klin Wochenschr Suppl (1990): 180. 12. Evaluation of detection capability for clinical laboratory measurement procedures. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP17-A2 (2012) 32 (8). 13. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 14. Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Procedures. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP05-A3 (2014) 24 (25). 15. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 16. Measurement Procedure Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 3 rd ed., CLSI (NCCLS) document EP09-A3 (2013) 33 (11). 17. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 18. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 19. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 5 / 5