2015/02/20 A93A01290CEL A11A01954 90 ml 400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in-vitro ποσοτικό προσδιορισμό του ασβεστίου σε ορό, πλάσμα και ούρα με χρωματομετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: CaAS a Ούρα: CaU_AS a Προοριζόμενη χρήση b Το αντιδραστήριο, με τον ανάλογο βαθμονομητή και τους ορούς ελέγχου, είναι ένα διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό του ασβεστίου σε ανθρώπινο ορό, πλάσμα και ούρα με χρωματομετρική μέθοδο, χρησιμοποιώντας τον αναλυτή κλινικής χημείας 400. Η μέτρηση του ασβεστίου χρησιμοποιείται για τη διάγνωση και τη θεραπεία παθήσεων των παραθυρεοειδών αδένων, διαφόρων οστικών παθήσεων, της χρόνιας νεφρικής νόσου και της τετανίας (επαναλαμβανόμενες μυϊκές συσπάσεις ή σπασμοί). Κλινικό ενδιαφέρον (1, 2, 3) Το ασβέστιο έχει πρωταρχικό ρόλο σε πολλές κυτταρικές λειτουργίες: ενδοκυτταρικά στη σύσπαση των μυών και στο μεταβολισμό των γλυκογόνων, εξωκυτταρικά στην επιμετάλλωση των οστών, στην αιμόσταση και στη μετάδοση των νευρικών ερεθισμάτων. Το ασβέστιο υπάρχει στο πλάσμα σε τρεις μορφές: ελεύθερο, συνδεδεμένο με πρωτεΐνες ή σε σύμπλεγμα με ανιόντα ως φωσφορικό άλας, κιτρικό άλας και διττανθρακικό. Σε a Τροποποίηση: τροποποίηση πρωτοκόλλου εφαρμογής. b Τροποποίηση: τροποποίηση όγκου αντιδραστηρίου. ορισμένες φυσιολογικές καταστάσεις, η ισορροπία του ασβεστίου καθορίζεται από τη σχέση ανάμεσα στην πρόσληψη, την απορρόφηση και την απέκριση ασβεστίου. Η απέκκριση στα ούρα είναι καθοριστικός παράγοντας στην κατακράτηση ασβεστίου στον οργανισμό. Τα χαμηλά συνολικά επίπεδα ασβεστίου μπορούν να συνδεθούν με παθήσεις του οστικού συστήματος (ιδιαίτερα με την οστεοπόρωση), νεφρικές παθήσεις (ιδιαίτερα σε περίπτωση αιμοκάθαρσης), ελαττωματική εντερική απορρόφηση και υποπαραθυρεοεϊδισμό. Υψηλά συνολικά επίπεδα ασβεστίου μπορούν να μετρηθούν σε περίπτωση υπερπαραθυρεοεϊδισμού, κακοηθών νόσων με μεταστάσεις και σαρκοείδωση. Οι μετρήσεις ασβεστίου βοηθούν επίσης τον έλεγχο λήψης συμπληρωμάτων ασβεστίου, κυρίως για την πρόληψη της οστεοπόρωσης. Μέθοδος (4, 5, 6, 7) Στο παρελθόν έχουν χρησιμοποιηθεί πολλές χρωματομετρικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό του ασβεστίου. Οι Connerty και Briggs περιέγραψαν μεθόδους με χρήση 3-σουλφονικής αλιζαρίνης (4) συμπλόκου κρεσολοφθαλεΐνης (5) ενώ οι Gindler και King περιέγραψαν μία μέθοδο με χρήση μπλε της θυμόλης (6). Οι μέθοδοι αυτές έχουν υποστεί πολλές επακόλουθες τροποποιήσεις. Η μέθοδος που χρησιμοποιήθηκε εδώ βασίζεται στο μεταλλικό χρωμογόνο Arsenazo III. Τα ιόντα ασβεστίου (Ca 2+ ) αντιδρούν με το Αρσενάζο III (2,2 -[1,8- διυδρόξυ-3,6-δισουλφονικό ναφθαλένιο -2,7-δις(azo)]- δισβενζονικοαρσενικό οξύ) σε ph 6,75 και σχηματίζουν ένα βαθύ μωβ χρωμοφόρο. Η απορρόφηση του σύμπλοκου Ca-Arsenazo III μετράται διχρωματικά στα 660/700 nm. Η απορρέουσα αύξηση απορρόφησης του μείγματος της αντίδρασης είναι ευθέως ανάλογη με τη συγκέντρωση ασβεστίου στο δείγμα. Το Arsenazo III έχει υψηλή 1 / 6
συγγένεια (K = 1 x 10-7 ) με τα ιόντα ασβεστίου (7) και δεν εμφανίζει αλληλεπίδραση από άλλα κατιόντα που συνήθως υπάρχουν σε ορό, πλάσμα ή ούρα. ph 6,50 Ca ++ + Arsenazo III Σύμπλοκο Ca-Arsenazo III (μωβ) Αντιδραστήρια To είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο: MES ph6,50 Arsenazo III 100 200 µmol/l To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε το καπάκι της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Τοποθετήστε το προστατευτικό κάλυμμα κωδ.gbm0969 στην κασέτα. 4. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του 400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Multical, Κωδ. A11A01652 (δεν 10 x 3 ml (λυοφιλίωμα) Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: N Control, κωδ. A11A01653 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλίωμα) P Control, κωδ. A11A01654 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλίωμα) Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 (δεν 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: 400 Βαθμονομητής: Multical, κωδ. A11A01652 Υλικά ελέγχου: N Control, κωδ. A11A01653 και P Control, κωδ. A11A01654 Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα (8) Ορός. Πλάσμα σε ηπαρίνη λιθίου. Ούρα. Μη χρησιμοποιείτε πλάσμα EDTA: Το αντιπηκτικό EDTA δεν είναι κατάλληλο για ανάλυση γιατί δημιουργεί χηλική ένωση με το ασβέστιο, με συνέπεια να μην αντιδρά με το αντιδραστήριο. Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Τα δείγματα ούρων 24 ώρου πρέπει να συλλέγονται με HCl 6N (9). Τα μη οξινισμένα ούρα που έχουν καταψυχθεί πρέπει να υφίστανται οξίνιση και/ή να θερμαίνονται στους 56 C για 15 λεπτά για να διαλύονται τυχόν ιζήματα. Σταθερότητα δείγματος (8): Ορός/πλάσμα: έως 7 ημέρες στους 20-25 C. έως 3 εβδομάδες στους 4-8 C. έως 8 μήνες στους -20 C. 2 / 6
Ούρα: έως 2 ημέρες στους 20-25 C. έως 4 ημέρες στους 4-8 C. έως 3 εβδομάδες στους -20 C. Εύρος αναφοράς (2) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Ορός / Πλάσμα: 2,15-2,57 (8,6-10,3 ) Ούρα: Γυναίκες: < 6,24 mmol/24h (< 250 mg/24h) Άντρες: < 7,49 mmol/24h (< 300 mg/24h) Φύλαξη και Σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε κλειστές κασέτες, είναι σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα εάν αποθηκευτούν στους 2-8 C, μακριά από το φως. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στον 400". Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Γενικές προφυλάξεις c Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Το αντιδραστήριο αυτό ταξινομείται ως μη επικίνδυνο σύμφωνα με τον κανονισμό αρ.1272/2008 (EC). Καθώς το ασβέστιο είναι ένα ευρέως διαδεδομένο ιόν, πρέπει να λαμβάνονται μέτρα προφύλαξης από τυχαία μόλυνση. Χρησιμοποιείτε μόνο αναλώσιμα υλικά. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον 400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω ελήφθησαν από τον αναλυτή 400. Ορός, πλάσμα Αριθμός αναλύσεων: 285 αναλύσεις d Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή e : Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του 400 παραμένει σταθερή για 70 ημέρες. Όγκος δείγματος: 5 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το με 0,37 (1,54 ). Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το με 0,07 (0,28 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (11). 2,09 8,39 0,49 3,12 12,53 0,37 c Τροποποίηση: τροποποίηση γενικών προφυλάξεων. d Τροποποίηση: νέος αριθμός δοκιμασιών. e Τροποποίηση: σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή. 3 / 6
Δείγμα 1 1,72 6,91 0,71 Δείγμα 2 2,29 9,18 0,40 Δείγμα 3 3,28 13,15 0,43 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (12). 2,17 8,72 1,44 3,25 13,02 1,49 Δείγμα 1 1,75 7,03 1,56 Δείγμα 2 2,36 9,47 1,54 Δείγμα 3 3,23 12,93 154 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 1 to 4,50 (4,0 to 18,05 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 13,50 (54,15 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 4,50 (18,05 ), σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (13). Συσχέτιση: 145 δείγματα ασθενών (ορός και πλάσμα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (14). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 1,04 έως 3,93 (4,17 έως 15,76 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (15) είναι: Y = 1,00 X + 0,01 () Y = 1,00 X + 0,04 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9903. Συγκριτική μελέτη νεφελογραμμάτων: Πραγματοποιήθηκε συγκριτική μελέτη νεφελογραμμάτων μεταξύ δειγμάτων ορού και πλάσματος με λίθιο σε 32 δείγματα ορού και πλάσματος με λίθιο κατά ζεύγη, στα οποία η συγκέντρωση ασβεστίου κυμαινόταν από 1,0 έως 4,36 (4,0 έως 17,5 ) (αλλαγή 3 δειγμάτων). Κάθε δείγμα αναλύθηκε ξεχωριστά με το αντιδραστήριο. Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης του διαγράμματος των δειγμάτων ορού (άξονας x) και πλάσματος με λίθιο (άξονας y) εμφάνισε τις εξής σχέσεις μεταξύ των τύπων νεφελογραμμάτων: Y = 1,006 X - 0,0022, r 2 = 0,996. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 µmol/l (500 ). Λιπαιμία: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 500. Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 788 µmol/l (46,1 ). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 445 µmol/l (26,0 ). Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 3,40 (60 ). Μαγνήσιο: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 4,42 (10,7 ). Ακεταμινοφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 1324 µmol/l (20 ). Ιβουπροφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 2,42 (50,1 ). Ακετυλοσαλικυλικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 3,62 (65,2 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (16, 17). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 10 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. 4 / 6
Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής a : Ούρα Αριθμός αναλύσεων: 285 αναλύσεις d Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή e : Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του 400 παραμένει σταθερή για 70 ημέρες. Όγκος δείγματος: 5 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το με 0,16 (0,64 ). Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το με 0,07 (0,23 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύθηκαν 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (11). 1,81 7,27 0,62 2,71 10,86 0,76 Δείγμα 1 1,93 7,73 0,46 Δείγμα 2 2,62 10,50 0,56 Δείγμα 3 3,62 14,50 0,37 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (12). 1,82 7,28 1,45 2,67 10,71 1,50 Δείγμα 1 1,92 7,70 1,57 Δείγμα 2 2,56 10,27 1,57 Δείγμα 3 3,54 14,21 1,56 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 0,16 έως 4,50 (0,64 έως 18,05 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 13,50 (54,15 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 4,50 (18,05 ), σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (13). Συσχέτιση: 143 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (14). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 0,16 έως 4,44 (0,64 έως 17,80 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (15) είναι: Y = 0,98 X - 0,01 () Y = 0,98 X - 0,03 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,993. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Λιπαιμία: Άμεση χολερυθρίνη: Ασκορβικό οξύ: έως τα 290 µmol/l (500 ). για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 200. έως τα 432 µmol/l (25,3 ). έως τα 3,40 (60 ). a Τροποποίηση: τροποποίηση πρωτοκόλλου εφαρμογής. d Τροποποίηση: νέος αριθμός δοκιμασιών. e Τροποποίηση: σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή. 5 / 6
Μαγνήσιο: έως τα 5,34 (13,0 ). ph: Τα ούρα δεν πρέπει να αλκαλοποιούνται. Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (16, 17). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 10 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής a : Συντελεστής μετατροπής: x 4,01 = Βιβλιογραφία 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft (1998): 192-202. 2. Endres DB, Rude RK. Mineral and bone metabolism. In: Burtis C.A., Ashwood E.R., editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: WB. Saunders Company (1999): 1395-1457. 3. Matkovic V, Llich JZ, Andon MB, Hsieh LC, Tzagournis MA, Lagger BJ, Goel PK, Am. J. Clin. Nutr. (1995) 62 (2): 417-25. 4. Connerty HV, Briggs AR. Clin. Chem. (1965) 11: 716-28. 5. Connerty HV, Briggs AR. Am. J. Clin. Path. (1966) 45: 290-6. 6. Gindler EM, Kin JD, Am. J. Clin. Path. (1972) 58: 376-82. 7. Bauer PJ. Anal. Biochem. (1981) 110: 61-72. 8. Ehret W, Heil W, Schmitt Y, Töpfer G, Wisser H, Zawta B et al. Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations and stability of blood, plasma and serum samples. WHO publication WHO/DIL/LAB/ 99.1 Rev.2: 25 (2002). 9. NCCLS. Urinalysis and collection, transportation and preservation of urine specimen; Approved guideline - 2 nd Edition, NCCLS document GP16-A2, 21 (19). 10. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 11. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 12. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Method. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2 (2004) 24 (25). 13. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 14. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 15. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 16. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 17. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. a Τροποποίηση: τροποποίηση πρωτοκόλλου εφαρμογής. 6 / 6