2015/12/07 A93A01315BEL A11A01641 60 ml 15 ml Pentra C400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της ουρίας / αζώτου ουρίας αίματος σε ορό, πλάσμα και ούρα με χρωματομετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: Για όλες τις χώρες εκτός των ΗΠΑ: Urea 1.xx Μόνο για ΗΠΑ: BUN 1.xx Ούρα: Για όλες τις χώρες εκτός των ΗΠΑ: Urea-U 1.xx Μόνο για ΗΠΑ: BUN-U 1.xx Προοριζόμενη χρήση Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της ουρίας/αζώτου ουρίας (τελικό προϊόν του μεταβολισμού του αζώτου) σε ανθρώπινο ορό, πλάσμα και ούρα με ενζυματική δοκιμασία UV, χρησιμοποιώντας ουρεάση και γλουταμινική αφυδρογονάση. Οι μετρήσεις που λαμβάνονται με τη συσκευή αυτή χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση και τη θεραπεία ορισμένων νεφρικών και μεταβολικών διαταραχών. Κλινικό ενδιαφέρον (1, 2) Η ουρία είναι το αζωτούχο τελικό προϊόν του καταβολισμού των πρωτεϊνών. Καταστάσεις που σχετίζονται με αυξημένα επίπεδα ουρίας στο αίμα αναφέρονται ως υπερουραιμία ή αζωθαιμία. Ο παράλληλος προσδιορισμός της ουρίας και της κρεατινίνης πραγματοποιείται για τη διαφοροποίηση μεταξύ της προ-νεφρικής και της μετα-νεφρικής αζωθαιμίας. Η προ-νεφρική αζωθαιμία, η οποία προκαλείται από π.χ. αφυδάτωση, αυξημένο πρωτεϊνικό καταβολισμό, θεραπεία με κορτιζόλη ή μειωμένη νεφρική έγχυση, οδηγεί σε αυξημένα επίπεδα ουρίας, ενώ οι τιμές της κρεατινίνης παραμένουν εντός του εύρους των φυσιολογικών τιμών. Σε περιπτώσεις μετα-νεφρικής αζωθαιμίας, η οποία προκαλείται από την απόφραξη των ουρητήρων, αυξάνονται τα επίπεδα της ουρίας και της κρεατινίνης, αλλά της κρεατινίνης σε μικρότερο βαθμό. Στις νεφρικές παθήσεις, οι συγκεντρώσεις ουρίας είναι αυξημένες όταν ο ρυθμός σπειραματικής διήθησης είναι σημαντικά μειωμένος και όταν η πρωτεϊνική λήψη υπερβαίνει τα 200 g/ημερησίως. Μέθοδος (3) Ουρεάση - GLDH : ενζυματική μέθοδος UV. Ουρεάση Ουρία + 2H 2 O > 2NH + 4 + 2 HCO - 3 GLDH 2-οξογλουταρικό + NH + 4 + NADH > L-γλουταμικό + NAD + + H 2 O (GLDH = Γλουταμική αφυδρογονάση) Αντιδραστήρια Το είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο 1: TRIS ph 7,8 2-οξογλουταρικό οξύ ADP Ουρεάση GLDH (Γλουταμική αφυδρογονάση) Αζίδιο του νατρίου 150 9 0,75 7 ku/l 1 ku/l < 1 g/l 1 / 6
Αντιδραστήριο 2: NADH Αζίδιο του νατρίου 1,3 < 1 g/l To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του Pentra C400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Multical, Κωδ. A11A01652 (δεν 10 x 3 ml (λυοφιλιωμένο) Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: N Control, κωδ. A11A01653 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) P Control, κωδ. A11A01654 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 (δεν 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: Pentra C400 Βαθμονομητής: Multical, κωδ. A11A01652 Υλικά ελέγχου: N Control, κωδ. A11A01653 και P Control, κωδ. A11A01654 Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα Ορός. Πλάσμα σε ηπαρίνη λιθίου. Φρέσκα ούρα Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα σε ορό/πλάσμα (1): 2 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου 1 εβδομάδα στους 4-8 C Σταθερότητα στα ούρα (4): 4 εβδομάδες στους -20 C αν ph < 7,0 4 ημέρες στους 4-8 C εάν ph < 7,0 2 ημέρες στους 20-25 C εάν ph < 7,0 Εύρος τιμών αναφοράς Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Ορός, πλάσμα (1): Ουρία BUN Ενήλικες: [] [] [] Γενικά 17-43 2,8-7,2 7,9-20,2 Γυναίκες < 50 ετών 15-40 2,6-6,7 7,3-18,8 Γυναίκες > 50 ετών 21-43 3,5-7,2 9,8-20,2 Άντρες < 50 ετών 19-44 3,2-7,3 9,0-20,5 Άντρες > 50 ετών 18-55 3,0-9,2 8,4-25,8 2 / 6
Ουρία BUN Παιδιά: [] [] [] 1-3 ετών 11-36 1,8-6,0 5,1-16,8 4-13 ετών 15-36 2,5-6,0 7,0-16,8 14-19 ετών 18-45 2,9-7,5 8,1-21,1 Ούρα (5): Ουρία [mmol/24h] BUN [mg/24h] 430-710 1207-1993 Φύλαξη και σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε κασέτες που δεν έχουν ανοιχτεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα στους 2-8 C. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στον Pentra C400". Μην καταψύχετε τα αντιδραστήρια. Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0,1% αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με μόλυβδο και χαλκό σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλων. Γενικές προφυλάξεις a Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Το αντιδραστήριο αυτό ταξινομείται ως μη επικίνδυνο σύμφωνα με τον κανονισμό αρ.1272/2008 (EC). Αποφύγετε την κατάποση. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και τις βλεννογόνους. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον Pentra C400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω είναι αντιπροσωπευτικά της απόδοσης στα συστήματα της HORIBA Medical. Ορός, πλάσμα Αριθμός αναλύσεων: 220 αναλύσεις b Αν ο απαιτούμενος αριθμός εξετάσεων είναι μικρός και ο χρήστης του Pentra C400 επιθυμεί να εξαντλήσει τη μέγιστη διάρκεια σταθερότητας της κασέτας μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή, η HORIBA Medical συνιστά να χρησιμοποιείται το αναλώσιμο εξάρτημα XEC232 (μεμβράνη κιτ) για να επιτευχθεί ο αριθμός των εξετάσεων που αναφέρονται σε αυτό το φυλλάδιο. Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400 παραμένει σταθερή για 70 ημέρες. Όγκος δείγματος: 3,0 µl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο Valtec (6) και ισούται με: 0,31 (1,86 ) 0,9 Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (6). 6,68 40,1 2,27 25,93 155,6 1,66 Δείγμα 1 2,15 12,9 2,76 Δείγμα 2 7,43 44,6 1,58 Δείγμα 3 30,45 182,7 1,80 a Τροποποίηση: τροποποίηση γενικών προφυλάξεων. b Τροποποίηση: αλλαγή κωδικού αναφοράς μεμβράνης κιτ. 3 / 6
18,73 2,27 72,78 1,66 Δείγμα 1 6,02 2,76 Δείγμα 2 20,86 1,58 Δείγμα 3 85,46 1,80 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (χαμηλής και υψηλής συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (7). 6,57 39,4 2,14 25,54 153,2 1,93 Δείγμα 1 6,86 41,1 2,14 Δείγμα 2 24,98 149,9 1,97 18,45 2,14 71,69 1,93 Δείγμα 1 19,24 2,14 Δείγμα 2 70,12 1,97 Εύρος μέτρησης c : Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 0,31 έως 50,00 (2,20 έως 300,00 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση μέχρι 250,00 (1500,0 ). Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 0,9 έως 140,3, με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση μέχρι 701,5. Συσχέτιση: 136 δείγματα ασθενών (ορός και πλάσμα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (8). Οι τιμές για την ουρία κυμάνθηκαν από 0,37 έως 49,49 (2,20 έως 297,22 ). Οι τιμές για BUN κυμάνθηκαν από 1,03 έως 138,89. Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (9) είναι: Y = 0,99 X - 0,02 () Y = 0,99 X - 0,12 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,996 Y = 0,99 X - 0,06 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,996 Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 267 µmol/l (460 ). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 7 (612,5 ). Ολική χολερυθρίνη: Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 380 µmol/l (22,23 ). Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 400 µmol/l (23,40 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (10, 11). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 8 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση εφαρμογής: 1.xx 1.xx c Τροποποίηση: τροποποίηση στο εύρος μέτρησης. 4 / 6
Ούρα Αριθμός αναλύσεων: 220 αναλύσεις b Αν ο απαιτούμενος αριθμός εξετάσεων είναι μικρός και ο χρήστης του Pentra C400 επιθυμεί να εξαντλήσει τη μέγιστη διάρκεια σταθερότητας της κασέτας μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή, η HORIBA Medical συνιστά να χρησιμοποιείται το αναλώσιμο εξάρτημα XEC232 (μεμβράνη κιτ) για να επιτευχθεί ο αριθμός των εξετάσεων που αναφέρονται σε αυτό το φυλλάδιο. Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400 παραμένει σταθερή για 70 ημέρες. Όγκος δείγματος: 3,0 µl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο Valtec (6) και ισούται με: 12,6 (75,6 ) 35 Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (6). 129,13 774,8 1,24 223,73 1342,4 0,74 Δείγμα 1 91,55 549,3 1,76 Δείγμα 2 173,65 1041,9 1,44 Δείγμα 3 521,62 3129,7 0,72 363 1,24 628 0,74 Δείγμα 1 257 1,76 Δείγμα 2 488 1,44 Δείγμα 3 1465 0,72 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (7). 128,58 771,5 3,80 216,27 1297,6 4,13 Δείγμα 1 198,13 1188,8 3,42 Δείγμα 2 547,82 3286,9 3,08 361 3,80 607 4,13 Δείγμα 1 556 3,42 Δείγμα 2 1538 3,08 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 12,6 έως 750,0 (75,6 έως 4500 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση μέχρι 3750 (22500 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου εκτιμήθηκε έως τα 750,0 (4500 ) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (12). Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 35 έως 2106, με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση μέχρι 10530. Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου εκτιμήθηκε έως τα 2106 σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (12). Συσχέτιση: 108 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως b Τροποποίηση: αλλαγή κωδικού αναφοράς μεμβράνης κιτ. 5 / 6
υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (8). Οι τιμές για την ουρία κυμάνθηκαν από 16,0 έως 722,5 (96 έως 4340 mg/l). Οι τιμές για BUN κυμάνθηκαν από 45 έως 2029. Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (9) είναι: Y = 1,14 X - 1,77 () Y = 1,14 X - 10,63 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9946 Y = 1,14 X - 4,90 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9946 Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 µmol/l (500 ). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 650 µmol/l (38 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (10, 11). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 8 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση εφαρμογής: 1.xx 1.xx 2. Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3 rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company (1999): 1838. 3. Talke H, Schubert GE. Enzymatische Harnstoffbestimmung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg (Enzymatic determination of urea in blood and serum with the optical test according to Warburg). Klin. Wochenschr (1965) 43: 174-175. 4. Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st Ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany) (2001): 52-53. 5. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA) (2006): 2301. 6. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 7. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 8. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 9. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 10. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 11. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 12. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). Συντελεστής μετατροπής (1) Ουρία () = Ουρία () x 0,1665 BUN () = Ουρία ()/2,14 BUN () = Ουρία ()/0,3561 Βιβλιογραφία 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellschaft (1998): 374-377. 6 / 6