2013/07/30 A93A01308AEL A11A01965 30 ml 8 ml Ούρα Pentra C400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της λευκωματίνης σε χαμηλή συγκέντρωση (µ-alb) στα ούρα με ανοσοθολοσιμετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.8 Έκδοση εφαρμογής Ούρα: AlbT-U (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) 1.xx Προοριζόμενη χρήση Διαγνωστικό αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται για να μετρηθεί με ανοσοχημικές τεχνικές η λευκωματίνη (μια πρωτεΐνη πλάσματος) στα ούρα. Η μέτρηση της λευκωματίνης βοηθά στη διάγνωση νεφρικών και εντερικών παθήσεων. Κλινικό ενδιαφέρον (1) Η παρουσία λευκωματίνης στα ούρα (μ-alb) σε μικρές ποσότητες μπορεί να χρησιμοποιείται ως ένδειξη ή δείκτης για πρώιμο στάδιο διαβητικής νεφροπάθειας, μια επιπλοκή του διαβήτη. Η μέθοδος δοκιμής με λωρίδες χαρτιού που χρησιμοποιούνταν παλαιότερα γι αυτό τον σκοπό μπορεί να ανιχνεύσει μόνο λευκωματίνη στα ούρα (µ-alb) σε σχετικά υψηλά επίπεδα. Επειδή τα υψηλά επίπεδα είναι συχνά ενδεικτικά ενός σταδίου, όπου είναι πολύ αργά να αποκατασταθεί η πλήρης νεφρική λειτουργία, η πρώιμη ανίχνευση της μ-alb στα ούρα μπορεί να είναι χρήσιμη ως ένα βήμα για την αποφυγή αιφνίδιας εκδήλωσης προχωρημένης νεφρίτιδας ή αποκατάστασης με έλεγχο των επιπέδων του σακχάρου στο αίμα. Το είναι μια ανοσοθολωσιμετρική μέθοδος, σχεδιασμένη για την ακριβή μέτρηση της συγκέντρωσης µ-alb σε δείγματα ούρων. Μέθοδος Άμεση ανοσοθολωσιμετρική ανάλυση για τον ποσοτικό προσδιορισμό της λευκωματίνης στα ούρα σε χαμηλή συγκέντρωση (μικρολευκωματίνη). Οι Heidelberger και Kendall (2), περιέγραψαν αρχικά το 1929 τον ποσοτικό σχηματισμό ιζήματος με επώαση αντιγόνου με συγκεκριμένο αντίσωμα. Οι μέθοδοι ανοσοπροσδιορισμού, οι οποίες εμφανίστηκαν τη δεκαετία του 1960, συνέχισαν να εξελίσσονται τα τελευταία χρόνια μέχρι και σήμερα (3). Ο συγκεκριμένος προσδιορισμός της μικρολευκωματίνης, που περιγράφηκε για πρώτη φορά πριν από είκοσι χρόνια, μπορεί να πραγματοποιηθεί με μεθόδους ανοσοπροσδιορισμού (4) όπως με θολωμετρική ανοσοδοκιμασία, ανοσοφθορισμό, ανοσονεφελομετρία ή ραδιοανοσομετρία κ.λπ. Ακόμα κι αν δεν υπάρχει καμία μέθοδος αναφοράς (5, 6), η πλέον διαδεδομένη για τον προσδιορισμό της μικρολευκωματίνης παραμένει η ανοσοθολοσιμετρία (7, 8). Η τεχνική αυτή, απλή και σύντομη, είναι αξιόπιστη εξαιτίας της ευαισθησίας της και της ιδιαιτερότητάς της. Η αρχή είναι η εξής: αντισώματα αντι-λευκωματίνης του αντιδραστηρίου αντιδρούν με τη λευκωματίνη του δείγματος σχηματίζοντας σύμπλοκα αντιγόνουαντισώματος. Η συμπλοκοποίηση που προκύπτει μετράται με θολοσιμετρία. Η αλλαγή που παρατηρείται στην απορρόφηση είναι ανάλογη με την ποσότητα μικρολευκωματίνης στο δείγμα. Στη συνέχεια, η πραγματική συγκέντρωση προσδιορίζεται με παρεμβολή από την καμπύλη βαθμονόμησης διαμορφωμένη από βαθμονομητές γνωστής συγκέντρωσης. Αντιδραστήρια Το είναι έτοιμο για χρήση. 1 / 5
Αντιδραστήριο 1: Ρυθμιστικό διάλυμα Tris (ph 7,6) Χλωριούχο νάτριο PEG < 4% Αντιδραστήριο 2: Χλωριούχο νάτριο Αντισώματα αντι-ανθρώπινης λευκωματίνης Συντηρητικά 18,2 mmol/l 123,2 mmol/l 154 mmol/l Μετά τη λήψη των μετρήσεων, οι κασέτες των αντιδραστηρίων πρέπει να παραμένουν στο ψυγείο του Pentra C400. Πρέπει να δίνεται ιδιαίτερη προσοχή ώστε να μην μπερδεύονται τα καπάκια των κασετών αντιδραστηρίων με αυτά άλλων κασετών. Δεν πρέπει να γίνεται εναλλαγή ή ανάμιξη των αντιδραστηρίων με διαφορετικούς αριθμούς παρτίδας. Το πρέπει να χρησιµοποιείται σύµφωνα µε το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Θέση του προστατευτικού καλύμματος κωδ. GBM0969 στο Reagent 1 και στο Reagent 2. 4. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του Pentra C400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Micro ALB Cal, Κωδ. A11A01966 (δεν περιλαμβάνεται) 3 x 2 ml Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: Micro ALB Control L/H, κωδ. A11A01967 (δεν περιλαμβάνεται) 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: Pentra C400 Βαθμονομητής: Micro ALB Cal, Κωδ.A11A01966 Ορός ελέγχου: Micro ALB Control L/H, Κωδ.A11A01967 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα Ούρα. Τα δείγματα πρέπει να φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2-4ºC και να αναλύονται μέσα σε 2 ώρες από τη λήψη τους. Ωστόσο, συνιστάται να πραγματοποιείται η ανάλυση των δειγμάτων αμέσως μετά τη λήψη τους, Σταθερότητα (9): Στους 20-25 C: 7 ημέρες Στους 4-8 C: 1 μήνα Στους -20 C: 6 μήνες Εύρος τιμών αναφοράς (10) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. mg/24h mg/l Φυσιολογικές τιμές: < 30 < 20 Μικρολευκωματινουρία: 30-300 20-200 Μακρολευκωματινουρία: > 300 > 200 2 / 5
Φύλαξη και σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε κασέτες που δεν έχουν ανοιχτεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα στους 2-8 C. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στον Pentra C400". Μην καταψύχετε τα αντιδραστήρια. Αλλοίωση συσκευασίας Σε περίπτωση αλλοίωσης της προστατευτικής συσκευασίας, μη χρησιμοποιείτε το αντιδραστήριο εάν η αλλοίωση ενδέχεται να έχει επίπτωση στην απόδοση του προϊόντος. Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0,1% αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με μόλυβδο και χαλκό σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλων. Γενικές προφυλάξεις Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Προειδοποίηση: Το παρόν αντιδραστήριο λαμβάνεται από ουσίες ζωικής προέλευσης. Συνεπώς, πρέπει να αντιμετωπίζεται ως δυνητικά μολυσματικό και να χρησιμοποιείται με την ανάλογη προσοχή σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική (11). Η διάγνωση πρέπει να γίνεται μόνο αφού ληφθούν υπόψη τα κλινικά συμπτώματα και τα αποτελέσματα άλλων εξετάσεων. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Απόδοση στον Pentra C400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω είναι αντιπροσωπευτικά της απόδοσης στα συστήματα της HORIBA Medical. Αριθμός αναλύσεων: 150 αναλύσεις Σταθερότητα μετά την τοποθέτηση του αντιδραστηρίου στον αναλυτή: Αφού ανοιχτεί, η κασέτα αντιδραστηρίων παραμένει σταθερή για 35 ημέρες, εάν τοποθετηθεί στο διαμέρισμα ψύξης του Pentra C400. Όγκος δείγματος: 10 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (12) και ισούται με 7,53 mg/l. Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο Valtec (13) και ισούται με 2,0 mg/l. Ακρίβεια και Πιστότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 1 ορός ελέγχου (μάρτυρας) αναλύθηκαν 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (13). Μέση τιμή mg/l CV % Δείγμα υλικού ελέγχου 1 55,71 1,07 Δείγμα 1 28,44 1,17 Δείγμα 2 57,74 1,15 Δείγμα 3 108,58 0,57 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (14). Μέση τιμή mg/l CV % Δείγμα υλικού ελέγχου 1 17,42 3,75 Δείγμα υλικού ελέγχου 2 65,02 1,57 Δείγμα 1 23,34 2,89 Δείγμα 2 47,93 2,11 Δείγμα 3 102,24 1,27 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 7,53 έως το υψηλότερο σημείο βαθμονόμησης, με αυτόματη 3 / 5
μεταγενέστερη αραίωση έως και το υψηλότερο σημείο βαθμονόμησης x 10. Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 350,0 mg/l, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (15). Συσχέτιση: 131 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (16). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 10,10 έως 317,91 mg/l. Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (17) είναι: Y = 1,04 X + 1,27 (mg/l) με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9936. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 µmol/l (500 mg/dl). Τριγλυκερίδια Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 4,19 mmol/l (366 mg/dl). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 277 µmol/l (16,2 mg/dl). Ουροχολίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 7 mg/dl. Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 3,40 mmol/l (59,9 mg/dl). Κρεατινίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 23,95 mmol/l (271 mg/dl). ph: Τα ούρα δεν πρέπει να αλκαλοποιούνται. ph: Τα ούρα δεν πρέπει να οξειδώνονται. Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (18, 19). Φαινόμενο προζώνης: Δεν ανιχνεύθηκε περίσσεια αντιγόνου σε συγκέντρωση 1150 mg/l. Ωστόσο, είναι σημαντικό να γίνει προανάλυση των ούρων με κατάλληλο δείκτη στάθμης και να γίνει επεξεργασία χωρίς αραίωση μόνο των αρνητικών δειγμάτων ούρων. Σταθερότητα Βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 10 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση εφαρμογής: 1.xx Προειδοποίηση Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Βιβλιογραφία 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellschaft. (1998): 382-400. 2. Heidelberger M and Kendall FE. J. Exp. Med. (1929) 50: 809-823. 3. Gosling JP. A decade of development in immunoassay methodology. Clin. Chem. (1990) 36: 1408-27. 4. Hill PG. The measurement of albumin in serum and plasma. Ann. Clin. Biochem. (1985) 22: 565-78. 5. Rowe DJF, Dawnay A, Watts GF. Microalbuminuria in diabetes mellitus: review and recommandations for the measurement of albumin in urine. Ann. Clin. Biochem. (1990) 27: 297-312. 6. Puri A, Casburn-Budd R, Eisen V, Slater IHD. Simple measurement of albumin in urine or plasma. Clin. Chem. (1985) 31: 1241-2. 7. Lloyd DR, Hindle EJ, Marples J, Gatt JA, Urinary albumin measurement by immunoturbidimetry. Ann. Clin. Biochem. (1987) 24: 209-210. 8. Harmoienen A, Vuorinen P, Jokela H, Turbidimetric measurement of microalbuminuria. Clin. Chim. Acta. (1987) 166: 85-89. 9. Use of Anticoagulants in diagnostics laboratory investigations. WHO publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2 (2002): 46. 10. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellschaft (1998): 393. 11. Council Directive (2000/54/EC). Official Journal of the European Communities. No. L262 from October 17, 2000: 21-45. 12. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 13. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 14. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Method. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2 (2004) 24 (25). 4 / 5
15. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 16. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 17. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 18. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 19. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 5 / 5