Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ AS1155. Προσοχή - κασέτες λαβή με ϖροσοχή, σφραγίδα άκρα μϖορεί να είναι οξύς. 2800 Woods Hollow Rd. Madison, WI USA In Vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Germany ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ AS1155 ΕΚΤΥΠΩΘΗΚΕ ΣΤΙΣ Η.Π.Α. 4/13
Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System Η τεχνική βιβλιογραφία διατίθεται στο διαδίκτυο, στη διεύθυνση: www.promega.com/tbs/ Επισκεφτείτε την ιστοσελίδα για να βεβαιωθείτε ότι χρησιμοποιείτε την πιο πρόσφατη έκδοση του παρόντος τεχνικού φυλλαδίου. Αν έχετε απορίες σχετικά με τη χρήση του παρόντος συστήματος, επικοινωνήστε με την τεχνική υπηρεσία της Promega. E-mail: techserv@promega.com 1. Προοριζόμενη χρήση...1 2. Περιορισμοί χρήσης προϊόντος...2 3. Στοιχεία προϊόντος, συνθήκες αποθήκευσης και επεξηγήσεις συμβόλων...3 4. Ρύθμιση υλικού και λογισμικού firmware του Maxwell 16 Instrument...4 5. Συλλογή και αποθήκευση δειγμάτων πριν από τον καθαρισμό...5 6. Καθαρισμός ολικού ιικού νουκλεϊκού οξέος από πλάσμα ή ορό...5 A. Προετοιμασία διαλύματος λύσης...6 B. Προετοιμασία δειγμάτων για Maxwell 16 LEV Cartridges...6 Γ. Λειτουργία του Maxwell 16 IVD Instrument...8 7. Αποθήκευση νουκλεϊκού οξέος που έχει υποβληθεί σε έκλουση...9 8. Βιβλιογραφία...9 9. Αντιμετώπιση προβλημάτων...10 Το παρόν προϊόν πληροί τις βασικές απαιτήσεις της Οδηγίας της Ευρωπαϊκής Ένωσης 98/79/ΕΚ για τα ιατροτεχνολογικά βοηθήματα που χρησιμοποιούνται στη διάγνωση in vitro. Το Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System προορίζεται για χρήση μόνο στις παρακάτω χώρες: Αυστρία, Βέλγιο, Δανία, Φινλανδία, Γαλλία, Γερμανία, Ελλάδα, Ιρλανδία, Ιταλία, Λουξεμβούργο, Κάτω Χώρες, Νορβηγία, Πορτογαλία, Ισπανία, Σουηδία, Ελβετία και Ηνωμένο Βασίλειο. 1. Προοριζόμενη χρήση Το Maxwell 16 System, το οποίο αποτελείται από το Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System (α) και το Maxwell 16 Instrument, διαμορφωμένο με το υλικό χαμηλού όγκου έκλουσης (LEV), προορίζεται για τον αυτόματο καθαρισμό ολικού ιικού νουκλεϊκού οξέος σε 1 έως 16 δείγματα ανθρώπινου ορού ή πλάσματος. Το κεκαθαρμένο ολικό νουκλεϊκό οξύ υποβάλλεται σε έκλουση με 50µl ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης και είναι κατάλληλο για άμεση ανάλυση downstream με τυπικές μεθόδους ενίσχυσης. Οι μέθοδοι αυτές περιλαμβάνουν διάφορες εξετάσεις αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) ή αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης αντίστροφης τρανσκριπτάσης (RT-PCR) για in vitro διαγνωστικές διαδικασίες σε δείγματα ανθρώπινης προέλευσης. Το Maxwell 16 System δεν προορίζεται για χρήση ως μέρος συγκεκριμένης in vitro διαγνωστικής εξέτασης. 4/13 Σελίδα 1
1. Προοριζόμενη χρήση (συνέχεια) Το Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System προορίζεται για χρήση μόνο από επαγγελματίες. Η ερμηνεία των διαγνωστικών αποτελεσμάτων που λαμβάνονται χρησιμοποιώντας το ολικό νουκλεϊκό οξύ, το οποίο προκύπτει με αυτό το σύστημα, πρέπει να πραγματοποιείται σε συνδυασμό με άλλα κλινικά ή εργαστηριακά δεδομένα. 2. Περιορισμοί χρήσης προϊόντος Το Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System δεν προορίζεται για χρήση με κλινικά δείγματα από ολικό αίμα, ιστό ή σωματικά υγρά εκτός από ανθρώπινο ορό και πλάσμα. Δεν προορίζεται για χρήση με δείγματα μη ανθρώπινης προέλευσης ή για την απομόνωση νουκλεϊκού οξέος από άλλους, μη ιικούς οργανισμούς. Η αξιολόγηση της απόδοσης του Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας 300 µl ανθρώπινου ορού ή πλάσματος, RNA πρότυπου φάγου και ιικό DNA καθώς και δείγματα αδρανοποιημένου ιού ηπατίτιδας C (HCV) και κυτταρομεγαλοϊού (CMV). Ο χρήστης είναι υπεύθυνος για την αξιολόγηση των χαρακτηριστικών απόδοσης που απαιτούνται για τις downstream διαγνωστικές εφαρμογές. Οι χρήστες μπορούν να επιλέξουν να προσθέσουν εξωγενείς εσωτερικούς ορούς ελέγχου (IC) στο δείγμα ή το προϊόν λύσης. Ο καθαρισμός ορισμένων εσωτερικών ορών ελέγχου νουκλεϊκού οξέος, με τιμή χαμηλότερη από 100bp, ενδέχεται να μην είναι επαρκής χρησιμοποιώντας το σύστημα. Ο χρήστης είναι υπεύθυνος για τον προσδιορισμό της απόδοσης οποιουδήποτε εσωτερικού ορού ελέγχου. Όλες οι downstream διαγνωστικές εφαρμογές με νουκλεϊκό οξύ που έχει υποβληθεί σε καθαρισμό χρησιμοποιώντας το Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System πρέπει να περιλαμβάνουν κατάλληλους ορούς ελέγχου. Η συμμόρφωση με την Ευρωπαϊκή Οδηγία 98/79/ΕΚ για τα ιατροτεχνολογικά βοηθήματα που χρησιμοποιούνται στη διάγνωση in vitro έχει αποδειχθεί και ισχύει μόνο για τη χρήση του Maxwell 16 IVD Instrument (Αρ. Κατ. AS3050) σε τρόπο κλινικής λειτουργίας, σε συνδυασμό με το Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System (Αρ. Κατ. AS1155). Σελίδα 2 4/13
3. Στοιχεία προϊόντος, συνθήκες αποθήκευσης και επεξηγήσεις συμβόλων Προϊόν Μέγεθος Αρ. Κατ. Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System 48 παρασκευάσματα AS1155 Κάθε σύστημα περιέχει αντιδραστήρια που επαρκούν για 48 καθαρισμούς. Περιλαμβάνει: 48 Maxwell 16 LEV Cartridges (MCC) 20 ml Ρυθμιστικό διάλυμα λύσης 2 x 1 ml Διάλυμα πρωτεϊνάσης K (PK) 20 ml Νερό χωρίς νουκλεάσες 50 Έμβολα LEV 50 Σωλήνες έκλουσης (0,5 ml) Συνθήκες αποθήκευσης: Αποθηκεύετε τα στοιχεία του προϊόντος σε θερμοκρασία δωματίου (15 30 C). Βλ. ημερομηνία λήξης στην ετικέτα του προϊόντος. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν μετά την παρέλευση της ημερομηνίας λήξης. Πληροφορίες ασφάλειας: Tα Maxwell 16 LEV Cartridges περιέχουν αιθανόλη και ισοπροπανόλη, οι οποίες είναι εύφλεκτες ουσίες, καθώς και υδροχλωρική γουανιδίνη και ουρία, οι οποίες είναι τοξικές και προκαλούν ερεθισμούς. Φοράτε γάντια και ακολουθείτε τις τυπικές διαδικασίες ασφάλειας κατά την εργασία με αυτές τις ουσίες. Για περαιτέρω πληροφορίες σχετικά με την ασφάλεια, βλ. Δελτίο δεδομένων ασφάλειας προϊόντος, στη διεύθυνση: www.promega.com Τα Maxwell 16 LEV Cartridges είναι σχεδιασμένα για χρήση με εν δυνάμει μολυσματικές ουσίες. Οι χρήστες πρέπει να διαθέτουν κατάλληλη προστασία (π.χ. γυαλιά και γάντια) κατά το χειρισμό μολυσματικών ουσιών. Οι χρήστες πρέπει να τηρούν τις οδηγίες του ιδρύματος σχετικά με το χειρισμό και την απόρριψη όλων των μολυσματικών ουσιών που χρησιμοποιούνται με το παρόν σύστημα.! Σημείωση: Λόγω της τοξικότητας των χημικών που χρησιμοποιούνται στη διαδικασία καθαρισμού καθώς και του επιπολασμού των ριβονουκλεασών, συνιστάται η χρήση γαντιών κατά την προετοιμασία δειγμάτων και φυσιγγίων. MDSS GmbH Schiffgraben 41 30175 Hannover, Germany 4/13 Σελίδα 3
Επεξηγήσεις συμβόλων Σύμβολο Επεξήγηση Σύμβολο Επεξήγηση In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος Αποθήκευση στους 15 30 C. 2800 Woods Hollow Rd. Madison, WI USA Κατασκευαστής! Σημαντικό Επιβλαβές. Προκαλεί ερεθισμούς. <n> Τα περιεχόμενα επαρκούν για «n» εξετάσεις Ευρωπαϊκή Συμμόρφωση Προειδοποίηση. Βιολογικός κίνδυνος. Προειδοποίηση. Κίνδυνος σύνθλιψης. Αριθμός καταλόγου Αριθμός παρτίδας Μην επαναχρησιμοποιείτε το προϊόν 4. Ρύθμιση υλικού και λογισμικού firmware του Maxwell 16 Instrument Για να είναι δυνατή η χρήση του Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System, το Maxwell 16 IVD Instrument πρέπει να είναι διαμορφωμένο με υλικό LEV. Αν το Maxwell 16 Instrument που διαθέτετε περιλαμβάνει υλικό SEV (τυπικός όγκος έκλουσης), απαιτείται εκ νέου διαμόρφωση του οργάνου χρησιμοποιώντας το Maxwell 16 LEV Hardware Kit (Αρ. Κατ. AS1250). Η εκ νέου διαμόρφωση του οργάνου είναι απλή και εύκολη. Ανατρέξτε στο Maxwell 16 IVD Instrument Technical Manual #TM315 για περαιτέρω οδηγίες. Σελίδα 4 4/13
5. Συλλογή και αποθήκευση δειγμάτων πριν από τον καθαρισμό! Κατά το χειρισμό δειγμάτων ανθρώπινης προέλευσης, συνιστάται η λήψη προφυλάξεων σχετικά με παθογόνα που μεταφέρονται στο αίμα. Συλλέγετε αίμα σε αντιπηκτικούς σωλήνες Vacutainer που έχουν υποβληθεί σε επεξεργασία με EDTA ή ACD. Αποφεύγετε τη χρήση ηπαρίνης, καθώς μπορεί να παρεμποδίζει την ενίσχυση κατά τις εφαρμογές downstream. Οι παρακάτω γενικές συστάσεις αφορούν την προετοιμασία και αποθήκευση δειγμάτων πλάσματος και ορού (1,2). Ο διαχωρισμός του πλάσματος από τα κύτταρα πρέπει να πραγματοποιείται εντός 1 ώρας από τη συλλογή του αίματος, με φυγοκέντρηση στα 1.500 x g για 20 λεπτά, στους 25 C και, στη συνέχεια, το υλικό πρέπει να διοχετεύεται σε καθαρό σωλήνα. Ο διαχωρισμός του ορού από το αίμα που έχει πήξει πρέπει να πραγματοποιείται με φυγοκέντρηση στα 1.000 x g για 10 λεπτά, στους 25 C και, στη συνέχεια, το υλικό πρέπει να διοχετεύεται σε καθαρό σωλήνα. Αποθηκεύετε τα δείγματα πλάσματος και ορού στους 2 8 C για έως και 24 ώρες ή καταψύχετε τα δείγματα που δεν υποβάλλονται σε επεξεργασία εντός 24 ωρών στους -20 C, για έως και 5 ημέρες. Αποφεύγετε τους επαναλαμβανόμενους κύκλους ψύξης-απόψυξης και μην αποθηκεύετε τα δείγματα σε ψυγείο αυτόματης απόψυξης. Οι εκάστοτε συνθήκες συλλογής και αποθήκευσης ενδέχεται να διαφέρουν ανάλογα με τον ιό που απομονώνεται. Οι πληροφορίες αυτές περιλαμβάνονται στις τεχνικές πληροφορίες του συστήματος ανάλυσης downstream. Οι RNA ιοί είναι ευάλωτοι στην αποδόμηση σε όλα τα βήματα της διαδικασίας συλλογής και επεξεργασίας δειγμάτων. Παρέχετε περιβάλλον χωρίς ριβονουκλεάσες σε όλα τα βήματα της διαδικασίας. 6. Καθαρισμός ολικού ιικού νουκλεϊκού οξέος από πλάσμα ή ορό Διατηρείτε περιβάλλον χωρίς ριβονουκλεάσες κατά τη διάρκεια της επεξεργασίας. Χρησιμοποιείτε πάντα πιπέτες με ακροφύσια χωρίς ριβονουκλεάσες, ανθεκτικά στα αερολύματα. Αλλάζετε συχνά γάντια για να ελαχιστοποιήσετε την πιθανότητα μόλυνσης με ριβονουκλεάσες. Η διαδικασία απομόνωσης περιλαμβάνει τη λύση του δείγματος παρουσία ρυθμιστικού διαλύματος λύσης και πρωτεϊνάσης Κ στους 56 C, σε θερμαντική πλάκα ή υδατόλουτρο. Με αυτήν την επεξεργασία καταστρέφεται το πρωτεϊνικό καψίδιο των ιών και αδρανοποιούνται οι ριβονουκλεάσες στο δείγμα. Στη συνέχεια, τα δείγματα μεταφέρονται στο βύθισμα δειγμάτων του Maxwell 16 LEV Cartridge. Το υπόλοιπο σκέλος της επεξεργασίας είναι πλήρως αυτοματοποιημένο. Το δείγμα αναμιγνύεται με παραμαγνητικά σωματίδια, για βέλτιστη δέσμευση του νουκλεϊκού οξέος και, στη συνέχεια, πραγματοποιείται έκπλυση με διάφορα ρυθμιστικά διαλύματα. Η έκλουση πραγματοποιείται σε νερό χωρίς νουκλεάσες. Υλικά που παρέχονται από το χρήστη σωλήνες μικροφυγοκέντρησης 1,5 ml ή 2 ml, χωρίς νουκλεάσες σωλήνας για διάλυμα λύσης θερμαντική πλάκα ή υδατόλουτρο στους 56 C Σωλήνες 0,5ml, χωρίς νουκλεάσες πιπέτες με ακροφύσια χωρίς ριβονουκλεάσες, ανθεκτικά στα αερολύματα 4/13 Σελίδα 5
6.A.! Προετοιμασία διαλύματος λύσης Αν το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης είναι θολό ή περιέχει κατακρήμνισμα, θερμάνετε στους 37 56 C μέχρι να καθαρίσει το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης. Προετοιμάστε καινούργιο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης για κάθε παρτίδα δειγμάτων, όπως περιγράφεται στον Πίνακα 1. Συνιστάται η προετοιμασία περίπου 20% περισσότερου ρυθμιστικού διαλύματος λύσης, για αντιστάθμιση τυχόν απώλειας κατά τη διοχέτευση με πιπέτες. Πίνακας 1. Προετοιμασία διαλύματος λύσης για δείγματα πλάσματος ή ορού 300 µl. Αντιδραστήριο Όγκος για ένα δείγμα Όγκος για 16 δείγματα 1 Ρυθμιστικό διάλυμα λύσης 2 300 µl 5.700 µl Διάλυμα πρωτεϊνάσης K 30 µl 570 µl 1 Οι όγκοι που παρατίθενται για το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης και το διάλυμα πρωτεϊνάσης για 16 δείγματα είναι μεγαλύτεροι κατά περίπου 20%. 2 Εάν χρησιμοποιείται εσωτερικός ορός ελέγχου, μπορεί να προστεθεί στο διάλυμα λύσης. Στο παρόν κιτ δεν περιλαμβάνονται εσωτερικοί οροί ελέγχου. 6.B. Προετοιμασία δειγμάτων για Maxwell 16 LEV Cartridges Μπορούν να χρησιμοποιηθούν φρέσκα ή κατεψυγμένα δείγματα πλάσματος ή ορού. Πριν από τη χρήση, αποψύξτε τα καταψυγμένα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου ή σε πάγο και αναμίξτε με στροβιλισμό για 10 δευτερόλεπτα. Τοποθετήστε ετικέτες στους σωλήνες μικροφυγοκέντρησης που χρησιμοποιήθηκαν για τη λύση του δείγματος. Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ετικέτες με γραμμοκώδικα. 1. Διοχετεύστε με πιπέτα κάθε δείγμα πλάσματος ή ορού σε σωλήνα μικροφυγοκέντρησης 1,5 ml ή 2 ml με πώμα. 2. Προσθέστε το διάλυμα λύσης που προετοιμάστηκε στην ενότητα 6.A. Στα δείγματα 300 µl προσθέστε 330 µl διαλύματος λύσης. 3. Κλείστε τους σωλήνες και στροβιλίστε για 10 δευτερόλεπτα. 4. Για δείγματα πλάσματος, προχωρήστε στο βήμα 5. Για δείγματα ορού, εκτελέστε επώαση σε θερμοκρασία δωματίου (15-30 C) για 10 λεπτά και, στη συνέχεια, προχωρήστε στο βήμα 5. 5. Εκτελέστε επώαση στους 56 C για 10 λεπτά, σε θερμαντική πλάκα ή υδατόλουτρο. Κατά τη διάρκεια της επώασης, προχωρήστε στο βήμα 6 για να προετοιμάσετε τα φυσίγγια. Σημείωση: Για βέλτιστη ανάκτηση νουκλεϊκού οξέος, η επώαση των δειγμάτων που περιέχουν ιούς, όπως ο ιός της ηπατίτιδας Β, πρέπει να πραγματοποιείται στους 80 C, λόγω της δευτεροταγούς δομής του ιικού γονιδιώματος. 6. Αλλάζετε γάντια πριν από το χειρισμό φυσιγγίων, εμβόλων LEV και σωλήνων έκλουσης. Τοποθετήστε τα φυσίγγια που πρόκειται να χρησιμοποιηθούν στο Maxwell 16 LEV Cartridge Rack (Αρ. Κατ. AS1251). Τοποθετήστε κάθε φυσίγγιο στον υποδοχέα με την ετικέτα στραμμένη αντίθετα από το σωλήνα έκλουσης. Πιέστε το φυσίγγιο προς τα κάτω για να ασφαλίσει στη θέση του. Αφαιρέστε προσεκτικά τη σφράγιση, μέχρι να αφαιρεθεί ολόκληρο το πλαστικό από το πάνω Σελίδα 6 4/13
μέρος του φυσιγγίου. Πριν από την τοποθέτηση των φυσιγγίων στο όργανο, βεβαιωθείτε ότι έχει αφαιρεθεί όλη η ταινία σφράγισης και τυχόν υπολείμματα κολλώδους ουσίας. Σημειώσεις: 1. Εάν υποβάλλετε σε επεξεργασία λιγότερα από 16 δείγματα, τοποθετήστε τα φυσίγγια στο κέντρο της πλατφόρμας. 2. Καθαρίστε τυχόν διαρροές δειγμάτων ή αντιδραστηρίων σε οποιοδήποτε μέρος του Maxwell 16 LEV Cartridge Rack χρησιμοποιώντας διάλυμα νερού-απορρυπαντικού, στη συνέχεια βακτηριοκτόνο σπρέι ή αντίστοιχο πανάκι και, τέλος, νερό. Μη χρησιμοποιείτε λευκαντικό μέσο σε οποιοδήποτε μέρος του οργάνου. 7. Τοποθετήστε ένα έμβολο LEV στο βύθισμα αρ. 8 σε κάθε φυσίγγιο. Το βύθισμα αρ. 8 βρίσκεται σε μικρότερη απόσταση από το σωλήνα έκλουσης. 8. Τοποθετήστε τους σωλήνες έκλουσης 0,5 ml στο μπροστινό τμήμα του Maxwell 16 LEV Cartridge Rack. Προσθέστε 50 µl νερού χωρίς νουκλεάσες στον πυθμένα κάθε σωλήνα έκλουσης. Σημειώσεις: 1. Αν το νερό χωρίς νουκλεάσες βρίσκεται στο πλάι του σωλήνα, δεν θα είναι δυνατή η βέλτιστη έκλουση. 2. Χρησιμοποιείτε μόνο τους σωλήνες έκλουσης 0,5 ml που παρέχονται στο κιτ. Άλλου είδος σωλήνες ενδέχεται να μην μπορούν να χρησιμοποιηθούν στο Maxwell 16 Instrument. 9. Μεταφέρετε το προϊόν λύσης του δείγματος στο βύθισμα αρ.1 του φυσιγγίου. Το βύθισμα αρ. 1 βρίσκεται σε μικρότερη απόσταση από την ετικέτα του φυσιγγίου και σε μεγαλύτερη απόσταση από το σωλήνα έκλουσης. 4/13 Σελίδα 7
6.Γ. Λειτουργία του Maxwell 16 IVD Instrument Ανατρέξτε στο Maxwell 16 IVD Instrument Technical Manual #TM315 για λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με τη ρύθμιση και λειτουργία του Maxwell 16 IVD Instrument. 1. Ενεργοποιήστε το Maxwell 16 IVD Instrument. Πραγματοποιείται εκκίνηση του οργάνου, εμφανίζεται ο αριθμός έκδοσης του λογισμικού firmware, εκτελείται αυτοδιαγνωστικός έλεγχος και τα κινούμενα μέρη του οργάνου μετακινούνται στις αρχικές θέσεις. 2. Βεβαιωθείτε ότι εμφανίζεται η ένδειξη «LEV» στην αρχική οθόνη και ότι είναι διαθέσιμο το υλικό LEV. Πατήστε «Run/Stop» για να συνεχίσετε. 3. Εισάγετε το όνομα χρήστη και το PIN, εφόσον είναι ενεργοποιημένη αυτή η επιλογή. 4. Στην οθόνη πρωτοκόλλων, επιλέξτε «Ιικό». 5. Στην επόμενη οθόνη, βεβαιωθείτε ότι έχουν επιλεγεί σωστά η μέθοδος και ο χρήστης. Επιλέξτε «Run/Stop» για να συνεχίσετε. 6. Ανοίξτε τη θύρα όταν εμφανιστεί το αντίστοιχο μήνυμα στην οθόνη και, στη συνέχεια, επιλέξτε «Run/Stop». Προειδοποίηση: Κίνδυνος σύνθλιψης. 7. Ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη σχετικά με την εισαγωγή δεδομένων με συσκευή ανάγνωσης γραμμοκωδίκων, εφόσον είναι ενεργοποιημένη αυτή η επιλογή. 8. Μεταφέρετε το Maxwell 16 LEV Cartridge Rack που περιέχει τα προετοιμασμένα φυσίγγια στην πλατφόρμα του Maxwell 16 IVD Instrument. Βεβαιωθείτε ότι ο υποδοχέας είναι τοποθετημένος στο Maxwell 16 IVD Instrument με τους σωλήνες έκλουσης σε μικρότερη απόσταση από τη θύρα. Η τοποθέτηση του υποδοχέα στο όργανο είναι δυνατή μόνο σε αυτόν τον προσανατολισμό. Αν συναντάτε δυσκολία κατά την προσαρμογή του υποδοχέα στην πλατφόρμα, βεβαιωθείτε ότι υποδοχέας βρίσκεται στο σωστό προσανατολισμό. Βεβαιωθείτε ότι ο υποδοχέας βρίσκεται σε απόλυτα οριζόντια θέση στην πλατφόρμα. Σημείωση: Συγκρατείτε το Maxwell 16 LEV Cartridge Rack από τις πλευρές του, ώστε να αποφευχθεί η απόσπαση των φυσιγγίων από τον υποδοχέα. 9. Βεβαιωθείτε ότι τα δείγματα έχουν προστεθεί στο βύθισμα αρ.1 των φυσιγγίων, ότι τα φυσίγγια του υποδοχέα έχουν φορτωθεί στο όργανο, ότι έχουν τοποθετηθεί οι σωλήνες έκλουσης με 50µl νερό χωρίς νουκλεάσες και ότι τα έμβολα LEV βρίσκονται στο βύθισμα αρ.8. 10. Επιλέξτε «Run/Stop» στην οθόνη ρύθμισης LEV. Η πλατφόρμα συμπτύσσεται. Κλείστε τη θύρα. Προειδοποίηση: Κίνδυνος σύνθλιψης. 11. Ξεκινά αμέσως ο κύκλος λειτουργίας καθαρισμού στο Maxwell 16 IVD Instrument. Στην οθόνη εμφανίζεται ο χρόνος που υπολείπεται, κατά προσέγγιση, για την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας. Σημειώσεις: 1. Αν πατήσετε το κουμπί Run/Stop ή ανοίξετε τη θύρα, η λειτουργία διακόπτεται. 2. Αν ακυρώσετε τη λειτουργία πριν ολοκληρωθεί, πραγματοποιείται έκπλυση των σωματιδίων από τα έμβολα και τα έμβολα τοποθετούνται στο βύθισμα αρ. 8 του φυσιγγίου. Τα δείγματα χάνονται. Σελίδα 8 4/13
12. Μετά την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας καθαρισμού, ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη για τη μεταφορά δεδομένων. Για λεπτομερείς οδηγίες, ανατρέξτε στο Maxwell 16 IVD Instrument Technical Manual #TM315 και το Maxwell Sample Track Software Technical Manual #TM314. 13. Μετά την εφαρμογή της μεθόδου, ακολουθήστε τις οδηγίες που εμφανίζονται στην οθόνη για να ανοίξετε τη θύρα. Βεβαιωθείτε ότι τα έμβολα βρίσκονται στο βύθισμα αρ.8 του φυσιγγίου κατά την ολοκλήρωση του κύκλου λειτουργίας. Αν τα έμβολα δεν έχουν αφαιρεθεί από τη μαγνητική ράβδο εμβόλων, ωθήστε τα προσεκτικά προς τα κάτω με το χέρι, για να τα αφαιρέσετε. 14. Πατήστε «Run/Stop» για έκταση της πλατφόρμας έξω από το όργανο. Προειδοποίηση: Κίνδυνος σύνθλιψης. 15. Αφαιρέστε το Maxwell 16 LEV Cartridge Rack από το όργανο. Αφαιρέστε τους σωλήνες έκλουσης που περιέχουν ιικό νουκλεϊκό οξύ και πωματίστε τους σωλήνες. 16. Υποβάλλετε σε φυγοκέντρηση τους σωλήνες έκπλυσης στα 10.000 x g για 2 λεπτά. Μεταφέρετε το υπερκείμενο υγρό σε καθαρό σωλήνα (δεν παρέχεται). Απαιτείται προσοχή για την αποφυγή μεταφοράς παραμαγνητικών σωματιδίων και τυχόν υπολειμμάτων που επιπλέουν. 17. Αφαιρέστε τα φυσίγγια και τα έμβολα από το Maxwell 16 LEV Cartridge Rack και απορρίψτε τα ως επικίνδυνα απορρίματα. Μην επαναχρησιμοποιείτε τα φυσίγγια αντιδραστηρίων, τα έμβολα LEV και τους σωλήνες έκλουσης. Τα δείγματα πρέπει να αφαιρούνται από το Maxwell 16 IVD Instrument πριν από την επεξεργασία με ακτινοβολία UV, ώστε να μην επηρεαστεί το νουκλεϊκό οξύ. 7. Αποθήκευση νουκλεϊκού οξέος που έχει υποβληθεί σε έκλουση Αν τα δείγματα δεν υποβληθούν αμέσως σε επεξεργασία, μπορείτε να αποθηκεύσετε το ιικό DNA έκλουσης σε πάγο ή στους 4 C για έως και 24 ώρες. Για μακροχρόνια αποθήκευση, καταψύξτε στους -20 C ή -70 C. Το ιικό RNA είναι περισσότερο ασταθές και συνιστάται να υποβάλλεται σε εξέταση με αναλύσεις downstream αμέσως μετά την απομόνωση. Εναλλακτικά, αποθηκεύστε το ιικό RNA έκλουσης στους -70 C. Για συστάσεις σχετικά με το χειρισμό και την αποθήκευση συγκεκριμένων δειγμάτων, ανατρέξτε στις οδηγίες για εφαρμογές downstream. 8. Βιβλιογραφία 1. Clinical Laboratory Standards Institute (2007). Handling, transport, and storage of specimens for molecular methods. Για τις πληροφορίες αυτές, πλοηγηθείτε στην ηλεκτρονική διεύθυνση: www.clsi.org 2. Murray, P.R. et al. (2007) Manual of Clinical Microbiology, 9th Edition, ASM Press. 4/13 Σελίδα 9
9. Αντιμετώπιση προβλημάτων Για τυχόν απορίες για τις οποίες δεν παρέχονται απαντήσεις στο παρόν, επικοινωνήστε με ένα υποκατάστημα ή έναν αντιπρόσωπο της Promega στην περιοχή σας. Πληροφορίες επικοινωνίας διατίθενται στη διεύθυνση: www.promega.com. E-mail: techserv@promega.com Πρόβλημα Αίτια και σχόλια Μειωμένη ανάκτηση ιικού νουκλεϊκού Είχε επηρεαστεί η ακεραιότητα των αρχικών δειγμάτων. οξέος σε σχέση με την αναμενόμενη Βεβαιωθείτε ότι η συλλογή, αποστολή και αποθήκευση (π.χ., για εσωτερικούς ορούς ελέγχου των δειγμάτων έχουν πραγματοποιηθεί σύμφωνα με που παρέχονται από τον πελάτη) τις συνιστώμενες κατευθυντήριες γραμμές. Για τα δείγματα ιικού RNA, βεβαιωθείτε ότι διασφαλίζονται συνθήκες απουσίας ριβονουκλεασών κατά την προετοιμασία των δειγμάτων και τη ρύθμιση της ανάλυσης, συμπεριλαμβανομένων των σωλήνων και των ακροφυσίων για τις πιπέτες χωρίς ριβονουκλεάσες. Το Maxwell 16 Instrument έχει ρυθμιστεί για λάθος μέθοδο. Βεβαιωθείτε ότι έχει επιλεγεί η σωστή ιική μέθοδος. Το βήμα επεξεργασίας δεν πραγματοποιήθηκε με το βέλτιστο τρόπο. Προετοιμάζετε το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης και την πρωτεϊνάση K ακριβώς πριν από τη χρήση και απορρίπτετε τα διαλύματα που δεν χρησιμοποιείτε. Χρησιμοποιείτε μόνο το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης που παρέχεται στο παρόν κιτ. Η μη επαρκής ανάμιξη ενδέχεται να μειώσει την αποτελεσματικότητα της λύσης. Στροβιλίζετε το δείγμα με διάλυμα λύσης, όπως συνιστάται. Μη ολοκληρωμένη επεξεργασία πρωτεάσης για την καταστροφή των καψιδίων των ιών. Ελέγξτε τη θερμοκρασία της θερμαντικής πλάκας ή του υδατόλουτρου και εκτελέστε επώαση για όλο το χρονικό διάστημα που συνιστάται. Για ορισμένους ιούς, ενδέχεται να απαιτείται υψηλότερη θερμοκρασία επώασης. Με την προσθήκη ποσότητας δείγματος μεγαλύτερης από τη συνιστώμενη ενδέχεται να μειωθεί η ανάκτηση νουκλεϊκού οξέος. Βεβαιωθείτε ότι έχει τοποθετηθεί έμβολο LEV στο φυσίγγιο. Πριν από την επεξεργασία, βεβαιωθείτε ότι όλα τα φυσίγγια έχουν ασφαλίσει καλά στον υποδοχέα. Θέματα που προκύπτουν μετά τον καθαρισμό. Μετά τον κύκλο λειτουργίας στο Maxwell 16 IVD Instrument, αφαιρέστε τα προϊόντα της έκλουσης και αποθηκεύστε τα αμέσως στη συνιστώμενη θερμοκρασία. Μην υποβάλετε τα προϊόντα έκλουσης σε πολλαπλούς κύκλους ψύξης-απόψυξης πριν από τις αναλύσεις downstream. Ο καθαρισμός εσωτερικών ορών ελέγχου νουκλεϊκού οξέος με τιμή χαμηλότερη από 100 bp ενδέχεται να μην είναι επαρκής χρησιμοποιώντας το σύστημα. Ο χρήστης είναι υπεύθυνος για τον προσδιορισμό της απόδοσης οποιουδήποτε εσωτερικού ορού ελέγχου. Σελίδα 10 4/13
Πρόβλημα Μη επαρκής ενίσχυση Αίτια και σχόλια Η μεταφορά παραμαγνητικών σωματιδίων ενδέχεται να επηρεάσει την αντίδραση ενίσχυσης. Αφαιρείτε τα σωματίδια στο σωλήνα έκλουσης εκτελώντας φυγοκέντρηση. Προσθήκη εσφαλμένου ρυθμιστικού διαλύματος έκλουσης. Χρησιμοποιείτε μόνο το νερό χωρίς νουκλεάσες που παρέχεται με το Maxwell 16 Viral Total Nucleic Acid Purification System. Διασταυρούμενη επιμόλυνση Χρησιμοποιείτε καινούργια ακροφύσια πιπέτας για κάθε δείγμα, ώστε να αποφευχθεί η διασταυρούμενη επιμόλυνση των δειγμάτων. Εκτελείτε προσεκτικά την προσθήκη προϊόντων λύσης στα φυσίγγια, ώστε να μη στάξει υλικό. Για την προσθήκη δείγματος, μπορείτε να αφαιρέσετε τα φυσίγγια από τον υποδοχέα, ώστε να ελαχιστοποιηθεί η μόλυνση των παρακείμενων φυσιγγίων. Η μέθοδος για ιούς δεν αποτελεί επιλογή στο όργανο Διακοπή ρεύματος κατά τη λειτουργία του οργάνου Για το Maxwell 16 MDx Instrument (Αρ. Κατ. AS3050), βεβαιωθείτε ότι το όργανο βρίσκεται σε τρόπο λειτουργίας LEV. Για να ανακτήσετε δείγματα μετά από διακοπή ρεύματος, αρχικά βεβαιωθείτε ότι τα σωματίδια βρίσκονται σε ένα από τα βυθίσματα του φυσιγγίου και όχι στο έμβολο. Αν η διακοπή ρεύματος έλαβε χώρα σε σημείο στο οποίο τα μαγνητικά σωματίδια βρίσκονταν στο εξωτερικό των εμβόλων, μετακινήστε χειροκίνητα τα έμβολα προς τα πάνω και προς τα κάτω, μέσα στα βυθίσματα, για να απομακρύνετε με έκπλυση τα σωματίδια. Στη συνέχεια, αφαιρέστε χειροκίνητα τα έμβολα από το όργανο και ξεκινήστε ξανά τον καθαρισμό από την αρχή, χρησιμοποιώντας νέα έμβολα. (α) U.S. Pat. Nos. 7,329,488, 7,721,947 and 7,891,549 and other patents pending. 2009, 2012, 2013 Promega Corporation. Με την επιφύλαξη παντός δικαιώματος. Η ονομασία Maxwell είναι κατοχυρωμένο εμπορικό σήμα της Promega Corporation. Η ονομασία Vacutainer είναι κατοχυρωμένο εμπορικό σήμα της Becton, Dickinson and Company. Τα προϊόντα ενδέχεται να καλύπτονται από διπλώματα ευρεσιτεχνίας που εκκρεμούν ή έχουν εκδοθεί ή ενδέχεται να έχουν συγκεκριμένους περιορισμούς. Για περισσότερες πληροφορίες, επισκεφτείτε την ιστοσελίδα μας. Όλες οι τιμές και οι προδιαγραφές υπόκεινται σε αλλαγές χωρίς προηγούμενη ειδοποίηση. Αξιώσεις που αφορούν το προϊόν υπόκεινται σε αλλαγές. Για τις πιο πρόσφατες πληροφορίες σχετικά με τα προϊόντα της Promega, επικοινωνήστε με την τεχνική υπηρεσία της Promega ή επισκεφτείτε τον κατάλογο της Promega στο διαδίκτυο. 4/13 Σελίδα 11