2015/09/09 A93A01318BEL A11A01907 22 ml 8 ml Pentra C400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in-vitro ποσοτικό προσδιορισμό της κρεατινίνης σε ορό, πλάσμα και ούρα με χρωματομετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: Crenz Ούρα: Crenz-U Προοριζόμενη χρήση Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της κρεατινίνης σε ανθρώπινο ορό, πλάσμα και ούρα με ενζυματική μέθοδο πολλαπλών βημάτων που καταλήγει σε φωτομέτρηση του τελικού σημείου της αντίδρασης. Η μέτρηση της κρεατινίνης χρησιμοποιείται για τη διάγνωση και τη θεραπεία νεφρικών παθήσεων, για την παρακολούθηση της αιμοκάθαρσης και ως βάση υπολογισμού για τη μέτρηση άλλων αναλυόμενων ουσιών στα ούρα. Κλινικό ενδιαφέρον (1, 2) Η κρεατινίνη, που σχηματίζεται στους μύες, είναι ένα προϊόν μεταβολισμού της φωσφορικής κρεατίνης, η οποία αποτελεί σημαντική αποθηκευτική μορφή φωσφορικών δεσμών υψηλής ενέργειας. Τα επίπεδα της κρεατινίνης στο αίμα είναι αρκετά σταθερά (αντίθετα από την ουραιμία) και εξαρτώνται κυρίως από τη μυϊκή μάζα. Δεν επηρεάζονται ιδιαίτερα από τη διατροφή, την ηλικία, το φύλο ή την άσκηση. Η κρεατινίνη καθαίρεται από το πλάσμα με σπειραματική διήθηση και στη συνέχεια απεκκρίνεται στα ούρα. Ο προσδιορισμός της κρεατινίνης στα ούρα επιτρέπει τον υπολογισμό της κάθαρσης που είναι ανεξάρτητη παράμετρος διούρησης και πρωτεϊνικής συμμετοχής. Η συγκέντρωση της κρεατινίνης στο αίμα αποτελεί εξαιρετικό δείκτη της νεφρικής λειτουργίας, ωστόσο, τα επίπεδα της κρεατινίνης ορού δεν αυξάνονται εάν δεν έχει μειωθεί η νεφρική λειτουργία κατά 50% τουλάχιστον. Μέθοδος Αυτή η ενζυματική μέθοδος για τη μέτρηση της κρεατινίνης υιοθετεί μια προσέγγιση πολλαπλών βημάτων με φωτομετρική αντίδραση τελικού σημείου. Το ένζυμο αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης χρησιμοποιείται για τη μετατροπή της κρεατινίνης σε κρεατίνη. Η κρεατίνη καταλύεται σε σαρκοσίνη και ουρία από το ένζυμο αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης. Τα περαιτέρω βήματα της ενζυματικής μεθόδου, με την οξειδάση και υπεροξειδάση της σαρκοσίνης, παράγουν χρωμογόνο ορατό στα 545 nm. Αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης Κρεατινίνη + H 2 O Κρεατίνη Αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης Κρεατίνη + H 2 O Σαρκοσίνη + Ουρία Οξειδάση σαρκοσίνης Σαρκοσίνη + H 2 O + O 2 Γλυκίνη + HCHO + H 2 O 2 Υπεροξειδάση 2 H 2 O 2 + 4-Αμινοαντιπυρίνη + ESPMT Κινονιμίνη + 4 H 2 O ESPMT: N-αιθυλ-N-σουλφοπροπυλ-m-τολουιδίνη Αντιδραστήρια Το είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο 1: Ρυθμιστικό διάλυμα (ph 7,5 στους 25 C) Αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης (μικροβιακή) > 12000 U/L 1 / 6
Αντιδραστήριο 1: Οξειδάση της σαρκοσίνης (μικροβιακή) > 4000 U/L N-αιθυλ-N-σουλφοπροπυλ-m-τολουιδίνη > 0,24 mmol/l Ασκορβική οξειδάση (βοτανική) Σταθεροποιητές Επιφανειοδραστικά Συντηρητικό Αντιδραστήριο 2: Ρυθμιστικό διάλυμα (ph 7,5 στους 25 C) Αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης (μικροβιακή) 4-αμινοαντιπυρίνη Υπεροξειδάση (βοτανική) Σταθεροποιητές Επιφανειοδραστικά Αζίδιο του νατρίου > 135000 U/L > 1,5 mmol/l > 2000 U/L 7,7 mmol/l To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Θέση του αντίστοιχου προστατευτικού καλύμματος κωδ. GBM0969 στο Reagent 1 και κωδ. GBM0970 στο Reagent 2. 4. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του Pentra C400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Multical, Κωδ. A11A01652 (δεν 10 x 3 ml (λυοφιλιωμένο) Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: N Control, κωδ. A11A01653 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) P Control, κωδ. A11A01654 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 (δεν 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: Pentra C400 Βαθμονομητής: Multical, κωδ. A11A01652 Υλικά ελέγχου: N Control, κωδ. A11A01653 και P Control, κωδ. A11A01654 Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα Ορός. Πλάσμα σε EDTA ή ηπαρίνη λιθίου. Φρέσκα ούρα που έχουν υποστεί φυγοκέντριση. Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα (3): Ορός, πλάσμα: Στους 20-25 C: 7 ημέρες Στους 4-8 C: 7 ημέρες Στους -20 C: 3 μήνες Ούρα: 2 / 6
Στους 20-25 C: 2 ημέρες Στους 4-8 C: 6 ημέρες Στους -20 C: 6 μήνες Εύρος τιμών αναφοράς (4) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Ορός/Πλάσμα: Άνδρες Γυναίκες 6,2-11,0 mg/l 4,5-7,5 mg/l 0,62-1,10 0,45-0,75 55-96 40-66 Ούρα (24 ώρου): Άνδρες Γυναίκες 14-26 mg/kg/ημέρα 11-20 mg/kg/ημέρα 124-230 µmol/kg/ημέρα 97-177 µmol/kg/ημέρα Φύλαξη και σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε κλειστές κασέτες, είναι σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα εάν αποθηκευτούν στους 2-8 C, μακριά από το φως. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στον Pentra C400". Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0,1% αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με μόλυβδο και χαλκό σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλων. Γενικές προφυλάξεις a Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Το αντιδραστήριο αυτό ταξινομείται ως επικίνδυνο σύμφωνα με τον κανονισμό αρ.1272/2008 (EC). Κίνδυνος H334: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργία ή συμπτώματα άσθματος ή δύσπνοια σε περίπτωση εισπνοής. P261: Aποφεύγετε να αναπνέετε σκόνη/αναθυμιάσεις/ αέρια/σταγονίδια/ατμούς/εκνεφώματα. P284: Φοράτε μέσα ατομικής προστασίας της αναπνοής. P304 + P340: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΙΣΠΝΟΗΣ: Μεταφέρατε τον παθόντα στον καθαρό αέρα και αφήστε τον να ξεκουραστεί σε στάση που διευκολύνει την αναπνοή. P342 + P311: Εάν παρουσιάζονται αναπνευστικά συμπτώματα: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό. P501: Διάθεση του περιεχομένου και περιέκτη σύμφωνα με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς, εθνικούς και διεθνείς κανονισμούς. Αποφύγετε την κατάποση. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και τις βλεννογόνους. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον Pentra C400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω είναι αντιπροσωπευτικά της απόδοσης στα συστήματα της HORIBA Medical. Ορός, πλάσμα Αριθμός αναλύσεων: 120 αναλύσεις Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400 παραμένει σταθερή για 30 ημέρες. Όγκος δείγματος: 8,0 µl/ανάλυση a Τροποποίηση: τροποποίηση γενικών προφυλάξεων. 3 / 6
Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (5) και ισούται με 10,0 (0,11 ). Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (5) και ισούται με 2,26 (0,026 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (6). 79,50 0,90 2,18 358,38 4,05 0,54 Δείγμα 1 49,66 0,56 2,86 Δείγμα 2 134,57 1,52 1,08 Δείγμα 3 571,61 6,46 0,29 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (7). 114,4 1,29 2,23 460,3 5,20 2,24 Δείγμα 1 50,1 0,57 4,12 Δείγμα 2 133,7 1,51 2,07 Δείγμα 3 559,5 6,32 1,82 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 10,0 έως 1500,0 (0,11 έως 16,95 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 4500 (50,85 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 1500,0 (16,95 ), σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (8). Συσχέτιση: 153 δείγματα ασθενών (ορός) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (9). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 30,6 έως 1429,1 (0,3 έως 16,1 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (10) είναι: Y = 1,00 X + 0,26 () Y = 1,00 X + 0,00 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,999. Αλληλεπιδράσεις b : Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 (500 ). Λιπαιμία: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 200. Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 468 (27,4 ). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 170 (9,9 ). N-ακετυλοκυστεΐνη Οι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία (NAC): με N-ακετυλοκυστεΐνη (NAC) λόγω υπερδοσολογίας παρακεταμόλης μπορεί να εμφανίσουν ψευδώς χαμηλό αποτέλεσμα. Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (11, 12). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα b Τροποποίηση: τροποποίηση αλληλεπιδράσεων. 4 / 6
αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: Ούρα Αριθμός αναλύσεων: 120 αναλύσεις Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400 παραμένει σταθερή για 30 ημέρες. Όγκος δείγματος: 8,0 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (5) και ισούται με 151 (1,71 ). Όριο ανίχνευσης: Με βάση το όριο ποσοτικοποίησης και τις μελέτες γραμμικότητας της εταιρείας μας, το όριο ανίχνευσης ισούται με 315 (3,56 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 2 δείγματα (χαμηλής και μέσης συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύθηκαν 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (6). 5887 66,52 0,83 13166 148,78 0,87 Δείγμα 1 965 10,91 2,21 Δείγμα 2 7899 89,26 0,83 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (χαμηλής και μέτριας συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (7). 6242 70,5 3,06 13891 157,0 3,08 Δείγμα 1 994 11,2 4,84 Δείγμα 2 8163 92,2 2,55 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 315 έως 15487 (3,56 έως 175,00 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 46400 (525 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 15487 (175,00 ), σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (8). Συσχέτιση: 105 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (9). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 588 έως 15324 (6,64 έως 173,16 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (10) είναι: Y = 0,97 X - 25,16 () Y = 0,97 X - 0,33 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9982. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 226 (390 ). Λιπαιμία: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 200. Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 228 (13,4 ). Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 340 (5,98 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (11, 12). 5 / 6
Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. 10. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 11. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 12. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: Συντελεστής μετατροπής: x 0,113 = mg/l x 0,0113 = Βιβλιογραφία 1. Allston CA. Non protein nitrogenous compounds and renal function. Clinical Chemistry: Concepts and Application, Anderson SC, Cockayne S. (W.B. Saunders eds. Philadelphia USA), (1993): 369. 2. Newman DJ, Price CP. Non protein nitrogen metabolite. Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5 th Ed., Burtis CA and Ashwood ER. (W.B. Saunders eds. Philadelphia USA), (2001): 414. 3. Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations. WHO publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2 (2002). 4. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed; Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds. St Louis, USA), (2006): 2264. 5. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 6. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 7. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 8. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 9. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 6 / 6