2011/05/03 A93A01230BEL A11A01907 22 ml 8 ml 400 Προοριζόμενη χρήση: Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της κρεατινίνης σε ορό, πλάσμα και ούρα με χρωματομετρία. Κλινικό ενδιαφέρον (1, 2) Η κρεατινίνη, που σχηματίζεται στους μύες, είναι ένα προϊόν μεταβολισμού της φωσφορικής κρεατίνης, η οποία αποτελεί σημαντική αποθηκευτική μορφή φωσφορικών δεσμών υψηλής ενέργειας. Τα επίπεδα της κρεατινίνης στο αίμα είναι αρκετά σταθερά (αντίθετα από την ουραιμία) και εξαρτώνται κυρίως από τη μυϊκή μάζα. Δεν επηρεάζονται ιδιαίτερα από τη διατροφή, την ηλικία, το φύλο ή την άσκηση. Η κρεατινίνη καθαίρεται από το πλάσμα με σπειραματική διήθηση και στη συνέχεια απεκκρίνεται στα ούρα. Ο προσδιορισμός της κρεατινίνης στα ούρα επιτρέπει τον υπολογισμό της κάθαρσης που είναι ανεξάρτητη παράμετρος διούρησης και πρωτεϊνικής συμμετοχής. Η συγκέντρωση της κρεατινίνης στο αίμα αποτελεί εξαιρετικό δείκτη της νεφρικής λειτουργίας, ωστόσο, τα επίπεδα της κρεατινίνης ορού δεν αυξάνονται εάν δεν έχει μειωθεί η νεφρική λειτουργία κατά 50% τουλάχιστον. Μέθοδος Υπεροξειδάση 2 H 2 O 2 + 4-Αμινοαντιπυρίνη + ESPMT Κινονιμίνη + 4 H 2 O ESPMT: N-αιθυλ-N-σουλφοπροπυλ-m-τολουιδίνη Αντιδραστήρια Το είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο 1: Ρυθμιστικό διάλυμα (ph 7,5 στους 25 C) Αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης (μικροβιακή) Οξειδάση της σαρκοσίνης (μικροβιακή) > 12,000 U/L > 4,000 U/L N-αιθυλ-N-σουλφοπροπυλ-m-τολουιδίνη > 0,24 mmol/l Ασκορβική οξειδάση (βοτανική) Σταθεροποιητές Επιφανειοδραστικά Συντηρητικό Αυτή η ενζυματική μέθοδος για τη μέτρηση της κρεατινίνης υιοθετεί μια προσέγγιση πολλαπλών βημάτων με φωτομετρική αντίδραση τελικού σημείου. Το ένζυμο αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης χρησιμοποιείται για τη μετατροπή της κρεατινίνης σε κρεατίνη. Η κρεατίνη καταλύεται σε σαρκοσίνη και ουρία από το ένζυμο αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης. Τα περαιτέρω βήματα της ενζυματικής μεθόδου, με την οξειδάση και υπεροξειδάση της σαρκοσίνης, παράγουν χρωμογόνο ορατό στα 545 nm. Αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης Κρεατινίνη + H 2 O Κρεατίνη Αντιδραστήριο 2: Ρυθμιστικό διάλυμα (ph 7,5 στους 25 C) Αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης (μικροβιακή) 4-αμινοαντιπυρίνη Υπεροξειδάση (βοτανική) Σταθεροποιητές Επιφανειοδραστικά Αζίδιο του νατρίου > 135,000 U/L > 1,5 mmol/l > 2,000 U/L 7,7 mmol/l Form-0846 Rev.4 Αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης Κρεατίνη + H 2 O Σαρκοσίνη + Ουρία Οξειδάση σαρκοσίνης Σαρκοσίνη + H 2 O + O 2 Γλυκίνη + HCHO + H 2 O 2
Το πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες του παρόντος αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί με διαφορετικό τρόπο, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Θέση του αντίστοιχου προστατευτικού καλύμματος κωδ. GBM0969 στο Reagent 1 και κωδ. GBM0970 στο Reagent 2. 4. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του 400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Multical, Κωδ. A11A01652 (δεν 10 x 3 ml (λυοφιλίωμα) Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: N Control, Κωδ. A11A01653 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλίωμα) P Control, Κωδ. A11A01654 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλίωμα) Urine Control L/H, Κωδ. A11A01674 (δεν 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να αναλύεται καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα των ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στις οδηγίες του εργαστηρίου και τις οδηγίες της συγκεκριμένης χώρας. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει μία διαδικασία η οποία πρέπει να ακολουθείται σε περίπτωση που τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούνται υλικά αλλά δεν παρέχονται Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: 400 Βαθμονομητής: Multical, Κωδ. A11A01652 Οροί ελέγχου: N Control, Κωδ. A11A01653, και P Control, Κωδ. A11A01654 Urine Control L/H, Κωδ. A11A01674 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα a b Ορός. Πλάσμα σε EDTA ή ηπαρίνη λιθίου. Φρέσκα ούρα που έχουν υποστεί φυγοκέντριση. Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα (3): Ορός, πλάσμα: Στους 20-25 C: 7 ημέρες Στους 4-8 C: 7 ημέρες Στους -20 C: 3 μήνες Ούρα: Στους 20-25 C: 2 ημέρες Στους 4-8 C: 6 ημέρες Στους -20 C: 6 μήνες Εύρος τιμών αναφοράς (4) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Ορός/Πλάσμα: Άνδρες Γυναίκες 6,2-11,0 mg/l 4,5-7,5 mg/l 0,62-1,10 0,45-0,75 55-96 40-66 a Τροποποίηση από την έκδοση με δείκτη Α στην έκδοση Β: τροποποίηση σταθερότητας δείγματος. b Τροποποίηση από την έκδοση με δείκτη Α στην έκδοση Β: τροποποίηση «Δείγματος».
Ούρα (24ώρου): Άνδρες Γυναίκες 14-26 mg/kg/ημέρα 11-20 mg/kg/ημέρα 124-230 µmol/kg/ημέρα 97-177 µmol/kg/ημέρα Φύλαξη και Σταθερότητα c Τα αντιδραστήρια, σε κλειστές κασέτες, είναι σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα εάν αποθηκευτούν στους 2-8 C, μακριά από το φως. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο «Απόδοση στον 400». Αλλοίωση συσκευασίας Σε περίπτωση αλλοίωσης της προστατευτικής συσκευασίας, μη χρησιμοποιείτε το αντιδραστήριο εάν η αλλοίωση ενδέχεται να έχει επίπτωση στην απόδοση του προϊόντος. Διαχείριση Αποβλήτων d Ανατρέξτε τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0,1% αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με μόλυβδο και χαλκό σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλων. Γενικές Προφυλάξεις Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Αποφύγετε την κατάποση. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και τις βλεννογόνους. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Απόδοση στον 400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω προέκυψαν από τον αναλυτή 400. Ορός, πλάσμα Αριθμός αναλύσεων: 120 αναλύσεις Σταθερότητα μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Μετά από το άνοιγμα, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο ψυγείο του 400 είναι σταθερή για 30 ημέρες. Όγκος δείγματος: 8 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το 10,0 (0,11 ). Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το 2,26 (0,026 ). Ακρίβεια και Πιστότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (6). 79,50 0,90 2,18 358,38 4,05 0,54 Δείγμα 1 49,66 0,56 2,86 Δείγμα 2 134,57 1,52 1,08 Δείγμα 3 571,61 6,46 0,29 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (7). c Τροποποίηση από την έκδοση με δείκτη Α στην έκδοση Β: τροποποίηση αποθήκευσης και σταθερότητας. d Τροποποίηση από την έκδοση με δείκτη Α στην έκδοση Β: τροποποίηση διαχείρισης αποβλήτων.
114,4 1,29 2,23 460,3 5,20 2,24 Δείγμα 1 50,1 0,57 4,12 Δείγμα 2 133,7 1,51 2,07 Δείγμα 3 559,5 6,32 1,82 Εύρος μέτρησης: Η ανάλυση επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 10,0 έως 1500,0 (0,11 έως 16,95 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση μέχρι 4500 (50,85 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου εκτιμήθηκε έως 1500,0 (16,95 ) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (8). Συσχέτιση: 153 δείγματα ασθενών (ορός) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που ελήφθη ως σημείο αναφοράς σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (9). Οι τιμές κυμαίνονται από 30,3 έως 1427,1 (0,34 έως 16,13 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (10) είναι: Y = 1,00 X - 0,27 () Y = 1,00 X - 0,01 () με συντελεστή συσχετισμού r 2 = 0,9991. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 (500 ). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 7,0 mmol/l (612,5 ) (με χρήση Intralipid, για προσομοίωση λιπαιμίας). Ολική χολερυθρίνη: Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 468 (27,4 ). Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 170 (9,9 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (11, 12). Σταθερότητα Βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Πρωτόκολλο εφαρμογής: 2.xx Ούρα Αριθμός αναλύσεων: 120 αναλύσεις Σταθερότητα μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Μετά από το άνοιγμα, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο ψυγείο του 400 είναι σταθερή για 30 ημέρες. Όγκος δείγματος: 8 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το 151 (1,71 ). Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το 58,2 (0,66 ). Ακρίβεια και Πιστότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (6). 5887 66,52 0,83 13166 148,78 0,87 Δείγμα 1 965 10,91 2,21 Δείγμα 2 7899 89,26 0,83 Δείγμα 3 19202 216,98 1,11 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια)
3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (7). 6242 70,5 3,06 13891 157,0 3,08 Δείγμα 1 994 11,2 4,84 Δείγμα 2 8163 92,2 2,55 Δείγμα 3 20143 227,6 2,58 Εύρος μέτρησης: Η ανάλυση επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 315 έως 25000 (3,56 έως 282,5 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση μέχρι 75000 (846,9 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου εκτιμήθηκε έως 25000 (282,5 ) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (8). Συσχέτιση: e 143 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που ελήφθη ως σημείο αναφοράς σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (9). Οι τιμές κυμαίνονται από 584,7 έως 22239,4 (6,61 έως 251,31 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (10) είναι: Y = 0,96 X + 1,37 () Y = 0,96 X - 0,03 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9976. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 226 (390 ). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 7,0 mmol/l (612,5 ) (με χρήση Intralipid, για προσομοίωση λιπαιμίας). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 228 (13,4 ). Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 340 (5,98 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (11, 12). Σταθερότητα Βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Πρωτόκολλο εφαρμογής: 2.xx Συντελεστής μετατροπής: x 0,113 = mg/l x 0,0113 = Προειδοποίηση Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Βιβλιογραφία 1. Allston CA. Non protein nitrogenous compounds and renal function. Clinical Chemistry: Concepts and Application, Anderson SC, Cockayne S. (W.B. Saunders eds. Philadelphia USA), (1993): 369. 2. Newman DJ, Price CP. Non protein nitrogen metabolite. Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5 th Ed., Burtis CA and Ashwood ER. (W.B. Saunders eds. Philadelphia USA), (2001): 414. 3. Use of anticoagulants in diagnostic laboratory investigations. WHO publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2 (2002). 4. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed; Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds. St Louis, USA), (2006): 2264. e Τροποποίηση από την έκδοση με δείκτη Α στην έκδοση Β: τροποποίηση συσχετισμού.
5. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 6. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 7. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Method. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2 (2004) 24 (25). 8. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 9. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 10. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 11. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 12. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132.