2015/02/02 A93A01360BEL A11A01611 25 ml 23.5 ml Μέθοδος υψηλής ευαισθησίας 400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της C-αντιδρώσας πρωτεΐνης υψηλής ευαισθησίας (CRP HS) σε ορό ή πλάσμα με ενισχυμένη με σωματίδια λάτεξ ανοσοθολοσιμετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: CRPhs 3.xx Προοριζόμενη χρήση Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της C αντιδρώσας πρωτεΐνης σε ανθρώπινο ορό και πλάσμα με θολοσιμετρική ανοσοδοκιμασία. Η μέτρηση της C αντιδρώσας πρωτεΐνης συμβάλλει στην εκτίμηση του βαθμού τραυματισμού των ιστών του σώματος. Κλινικό ενδιαφέρον a Κανονική εφαρμογή (1,0-800 mg/l): Τα επίπεδα της C-αντιδρώσας πρωτεΐνης (CRP) στον ορό μπορεί να αυξηθούν δραματικά μετά από έμφραγμα του μυοκαρδίου, στρες, τραύμα, λοίμωξη, φλεγμονή, χειρουργική επέμβαση ή νεοπλασματική εξεργασία. Η αύξηση πραγματοποιείται εντός 24 έως 48 ωρών και το επίπεδο μπορεί να είναι 2000 φορές υψηλότερο του φυσιολογικού. Ωστόσο, επειδή η αύξηση είναι μη ειδική, δεν μπορεί να ερμηνευτεί χωρίς πλήρες ιστορικό και, σε κάθε περίπτωση, μόνο σε σχέση με τις προηγούμενες τιμές. Εφαρμογή υψηλής ευαισθησίας (εκτίμησης καρδιακού κινδύνου?) (0,12-100 mg/l): Μελέτες κατέδειξαν ότι και η ανίχνευση πολύ χαμηλότερων επιπέδων CRP μπορεί επίσης να παρέχει πολύτιμες a Τροποποίηση: Τροποποίηση κλινικού ενδιαφέροντος. πληροφορίες. Η τυπική συγκέντρωση CRP για τους υγιείς ενήλικες είναι (ανάλογα με το συγκεκριμένο επίπεδο κάθε μεμονωμένου ασθενή) < 1 mg/l (1). Ελαφρώς υψηλότερες τιμές μπορεί να αποτελούν ένδειξη αυξημένου κινδύνου για στεφανιαία καρδιοπάθεια σε ασυμπτωματικούς ασθενείς (2, 3). Συγκεντρώσεις CRP πάνω από 3 mg/l, κατά την εισαγωγή στο νοσοκομείο, προλέγουν επισφαλή έκβαση μετά από έμφραγμα του μυοκαρδίου (4). Οι συνιστώμενες κατηγορίες σχετικού κινδύνου σε σχέση με το μέσο επίπεδο CRP είναι οι εξής: χαμηλός κίνδυνος < 1 mg/l, μέσος κίνδυνος 1,0 έως 3,0 mg/l και υψηλός κίνδυνος > 3,0 mg/l (5). Η αύξηση στις τιμές της C αντιδρώσας πρωτεΐνης είναι μη ειδική και δεν πρέπει να ερμηνεύεται χωρίς πλήρες ιστορικό, εφόσον η CRP είναι μία πρωτεΐνη οξείας φάσης η οποία μπορεί να σημειώσει μη ειδική αύξηση εξαιτίας άλλης φλεγμονώδους κατάστασης. Για την ανάλυση του καρδιακού κινδύνου πρέπει να γίνουν άλλες ειδικές καρδιολογικές εξετάσεις όπως έλεγχος της ολικής χοληστερόλης, της HDL χοληστερόλης και της LDL χοληστερόλης. Για την αξιολόγηση του κινδύνου, επίπεδα CRP > 10 mg/l πρέπει να εκτιμώνται για άλλη μη καρδιαγγειακή αιτιολογία. Εξετάσεις για την αξιολόγηση κινδύνου δεν πρέπει να πραγματοποιούνται όταν υπάρχει ένδειξη λοίμωξης, συστηματικής φλεγμονής ή τραύματος. Η δοκιμασία αυτή δεν προορίζεται για την αντιμετώπιση του χρόνιου στεφανιαίου συνδρόμου και δεν μπορεί να υποκαταστήσει τους κλασικούς παράγοντες κινδύνου καρδιαγγειακών παθήσεων. Δεν συνιστάται προληπτικός έλεγχος της hscrp (υψηλής ευαισθησίας CRP) στο σύνολο του ενήλικου πληθυσμού. Για την αξιολόγηση του κινδύνου σε μεταβολικά σταθερούς ασθενείς πρέπει να χρησιμοποιείται η μέση τιμή των επιπέδων της hscrp που έχουν ληφθεί σε διάστημα δύο εβδομάδων μεταξύ τους. Η hscrp θεωρείται, μαζί με την τροπονίνη I, δείκτης τάξης IIα για οξύ στεφανιαίο σύνδρομο (6). 1 / 5
Μέθοδος b Το (Παραχώρηση αδείας για τα USP6, 248, 597/ USP6, 828, 158 και ισοδύναμες κατοχυρωμένες ονομασίες σε άλλες χώρες) είναι μία μέθοδος θολοσιμετρικής ανοσοδοκιμασίας ενισχυμένης με σωματίδια λάτεξ, σχεδιασμένη για την ακριβή μέτρηση των επιπέδων της CRP σε δείγματα ορού και πλάσματος. Όταν σημειωθεί αντίδραση αντιγόνου-αντισώματος μεταξύ CRP σε ένα δείγμα και αντισώματος αντι-crp που έχει ευαισθητοποιηθεί σε σωματίδια λάτεξ, προκαλείται συμπλοκοποίηση. Η συμπλοκοποίηση αυτή εντοπίζεται ως μεταβολή της απορρόφησης, το μέγεθος της οποίας είναι ανάλογο με την ποσότητα CRP στο δείγμα. Στη συνέχεια, η πραγματική συγκέντρωση προσδιορίζεται με παρεμβολή από την καμπύλη βαθμονόμησης διαμορφωμένη από βαθμονομητές γνωστής συγκέντρωσης. Αντιδραστήρια To είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο 1: Ρυθμιστικό διάλυμα: Ρυθμιστικό διάλυμα γλυκίνης Αντιδραστήριο 2: Αιώρημα λάτεξ: 0,20% w/v αιώρημα σωματιδίων λάτεξ ευαισθητοποιημένο με αντι-crp αντισώματα (κουνέλι) Μετά τη λήψη των μετρήσεων, οι κασέτες των αντιδραστηρίων πρέπει να παραμένουν στο ψυγείο του 400. Πρέπει να δίνεται ιδιαίτερη προσοχή ώστε να μην μπερδεύονται τα καπάκια των κασετών αντιδραστηρίων με αυτά άλλων κασετών. Δεν πρέπει να γίνεται εναλλαγή ή ανάμιξη των αντιδραστηρίων με διαφορετικούς αριθμούς παρτίδας. To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του 400. Βαθμονομητής c Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: CRP HS Cal, Κωδ. A11A01983 (δεν περιλαμβάνεται) 2 x 2 ml Ο συγκεκριμένος βαθμονομητής ανιχνεύεται με τη μέθοδο αναφοράς IRMM/ERM-DA472/IFCC. Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: Low CRP Control, Κωδ. A11A01731 (δεν περιλαμβάνεται) 4 x 1 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: 400 Βαθμονομητής: CRP HS Cal, κωδ. A11A01983 Ορός ελέγχου: Low CRP Control, κωδ. A11A01731 Καθαριστικό διάλυμα: Clean-Chem CP, κωδ A11A01755, 30 ml ή Clean-Chem 99 CP, κωδ. A11A01789, 4 x 99 ml Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. b Τροποποίηση: "Μέθοδος": τροποποίηση. c Τροποποίηση: προσθήκη πληροφοριών. 2 / 5
Δείγμα Ορός. Πλάσμα σε ηπαρίνη λιθίου. Πλάσμα σε EDTA. Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα (7): Στους 20-25 C: 15 ημέρες Στους 2-8 C: 2 μήνες Στους -20 C: 3 χρόνια Εύρος τιμών αναφοράς (8) d Επειδή οι τιμές μπορεί να ποικίλουν ανάλογα με την ηλικία, τη διατροφή, το φύλο και τη γεωγραφική κατανομή, κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος τιμών αναφοράς. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. CRP: Ενήλικες (20-60 ετών) < 5 mg/l Συνιστώμενες κατηγορίες αξιολόγησης του καρδιακού κινδύνου (5) Χαμηλός κίνδυνος < 1 mg/l Μέσος κίνδυνος 1,0 έως 3,0 mg/l Υψηλός κίνδυνος > 3,0 mg/l Οι ενδοεργαστηριακές μεμονωμένες αποκλίσεις της CRP είναι σημαντικές και πρέπει να λαμβάνονται υπόψη κατά την εκτίμηση των τιμών. Φύλαξη και σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε κασέτες που δεν έχουν ανοιχτεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα στους 2-10 C. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στον 400". Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0,1% αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με μόλυβδο και χαλκό σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλων. Γενικές προφυλάξεις Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Η διάγνωση πρέπει να γίνεται μόνο αφού ληφθούν υπόψη τα κλινικά συμπτώματα και τα αποτελέσματα άλλων εξετάσεων. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Η μέθοδος είναι για συμβατική χρήση της CRP μόνο. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον 400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω ελήφθησαν από τον αναλυτή 400. Αριθμός αναλύσεων: 200 αναλύσεις Αν ο απαιτούμενος αριθμός εξετάσεων είναι μικρός και ο χρήστης του 400 επιθυμεί να εξαντλήσει τη μέγιστη διάρκεια σταθερότητας της κασέτας μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή, η HORIBA Medical συνιστά να χρησιμοποιείται το αναλώσιμο εξάρτημα XEC084 (μεμβράνη κιτ) για να επιτευχθεί ο αριθμός των εξετάσεων που αναφέρονται σε αυτό το φυλλάδιο. Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του 400 παραμένει σταθερή για 64 ημέρες. Όγκος δείγματος: 12 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης προσδιορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A2 του CLSI (NCCLS) (9) και ισούται με 0,12 mg/l. d Τροποποίηση: τροποποίηση στη μέθοδο αναφοράς. 3 / 5
Ελάχιστο όριο ερμηνείας: Το ελάχιστο όριο ερμηνείας (MIL) εκτιμάται βάσει πολλαπλού προσδιορισμού δείγματος χαμηλής συγκέντρωσης και ισούται με 0,048 mg/l. Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 4 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 1 ορός ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (10). Δείγμα ορού ελέγχου 1 Μέση τιμή mg/l CV % 1,78 0,86 Δείγμα 1 0,30 2,48 Δείγμα 2 1,06 1,38 Δείγμα 3 5,76 0,43 Δείγμα 4 8,74 0,55 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 4 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 1 υλικ'π ελέγχου αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (11). Δείγμα ορού ελέγχου 1 Μέση τιμή mg/l CV % 1,59 3,27 Δείγμα 1 0,23 6,05 Δείγμα 2 0,91 3,61 Δείγμα 3 4,78 2,35 Δείγμα 4 8,23 2,18 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 0,12 έως 10 (mg/l), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 100 mg/l. Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 10 mg/l, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (12). Συσχέτιση e Τα δείγματα συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A3 του CLSI (NCCLS) (13). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 0,19 έως 9,57 mg/l. Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (14) είναι: Y = 1,05 X - 0,03 (mg/l) με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,996. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 µmol/l (500 mg/dl). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα τριγλυκεριδίων έως και 6,18 mmol/l (541 mg/l). Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 440 µmol/l (25,7 mg/dl). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 560 µmol/l (32,8 mg/dl). Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 340 µmol/l (5,98 mg/dl). Ιβουπροφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 2,43 mmol/l (50,1 mg/dl). Ακεταμινοφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 1324 µmol/l (20 mg/dl). Ακετυλοσαλικυλικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 3,62 mmol/l (65,2 mg/dl). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (15, 16). Φαινόμενο προζώνης f : Δεν ανιχνεύθηκε περίσσεια αντιγόνου σε συγκέντρωση 200 mg/l. Όταν η συγκέντρωση του δείγματος είναι πάνω από το εύρος μέτρησης γι αυτή τη μέθοδο υψηλής ευαισθησίας (> 100 mg/l), το δείγμα πρέπει να μετράται στην άλλη εφαρμογή (εύρος μέτρησης από 1 έως 800 mg/l). Δείγματα ασθενών: Ορού Αριθμός δειγμάτων ασθενών: 103 e Τροποποίηση: τροποποίηση συσχέτισης. f Τροποποίηση: προσθήκη δεδομένων. 4 / 5
Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 1 δείγματος ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 18 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 3.xx Βιβλιογραφία 1. Raifai N, Ridker PM. Population Distributions of C- reactive Protein in Aparently Healthy Men and Women in the United States: Implication for Clinical Interpretation. Clin Chem (2003) 49: 666-669. 2. Morrow AD, Ridker PM. C-reactive protein, inflammation, and coronary risk. Med. Clin. of North Am. (2000) 84: 149161. 3. Ridker PM. Novel risk factors and markers for coronary disease. Adv. Int. Med. (2000) 45: 391-419. 4. Ridker PM, Cannon CP, Morrow D, Rifai N, Rose LM, McCabe CH, Pfeffer MA, Braunwald E. C-Reactive Protein Levels and Outcomes after Statin Therapy. N. Eng. J. Med. (2005) 352: 20-28. 5. Pearson TA et al. Markers of inflammation and cardiovascular disease. Application to clinical and public health practice. A statement for healthcare professionals from the Centers for Disease Control and Prevention and the American Heart Association. http://www.circulationaha.org. 6. R.H. Christianson et al. NACB Biomarkers of Acute Coronary Syndrome & Heart Failure (draft guidelines) AACC Press, (2004). 7. Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany), (2001): 24. 8. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics; 4 th Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA), (2006): 2263. 9. Evaluation of detection capability for clinical laboratory measurement procedures. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP17-A2 (2012) 32 (8). 10. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 11. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Method. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2 (2004) 24 (25). 12. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 13. Measurement Procedure Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 3 rd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A3 (2013) 33 (11). 14. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 15. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 16. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 5 / 5