cobas HEV Εξέταση νουκλεϊκών οξέων για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800 Για διαγνωστική χρήση in vitro cobas HEV 96 P/N:

Εξέταση νουκλεϊκών οξέων για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800 Για διαγνωστική χρήση in vitro cobas HEV 96 P/N: 07001045190 cobas HEV Control Kit P/N: 07001100190 cobas NHP Negative Control Kit P/N: 07002220190

Πίνακας περιεχομένων Προβλεπόμενη χρήση... 4 Σύνοψη και επεξήγηση της εξέτασης... 4 Αντιδραστήρια και υλικά... 7 Αντιδραστήρια και οροί ελέγχου cobas HEV... 7 Αντιδραστήρια cobas omni για προετοιμασία δειγμάτων... 10 Απαιτήσεις φύλαξης και χειρισμού αντιδραστηρίων... 11 Πρόσθετα απαιτούμενα υλικά... 12 Όργανα και λογισμικό που απαιτούνται... 12 Προφυλάξεις και απαιτήσεις χειρισμού... 13 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις... 13 Χειρισμός αντιδραστηρίων... 14 Ορθή εργαστηριακή πρακτική... 14 Συλλογή, μεταφορά, φύλαξη και δεξαμενοποίηση δειγμάτων... 15 Δείγματα ζώντων δοτών... 15 Οδηγίες χρήσης... 15 Αυτόματη μεταφορά δειγμάτων με πιπέτα και δεξαμενοποίηση δειγμάτων (προαιρετικά)... 17 Σημειώσεις διαδικασίας... 17 Εκτέλεση της εξέτασης cobas HEV... 17 Αποτελέσματα... 18 Ποιοτικός έλεγχος και εγκυρότητα των αποτελεσμάτων... 18 Ερμηνεία των αποτελεσμάτων... 19 Επανάληψη εξέτασης μεμονωμένων δειγμάτων... 19 Περιορισμοί της διαδικασίας... 19 Αξιολόγηση απόδοσης μη κλινικών δειγμάτων... 20 Κύρια χαρακτηριστικά απόδοσης... 20 Δείγματα ζώντων δοτών... 20 Όριο ανίχνευσης (LoD)... 20 Αναπαραγωγιμότητα... 21 Επαλήθευση γονότυπου... 22 Αναλυτική ειδικότητα... 23 Doc Rev. 3.0 2

Αναλυτική ειδικότητα παρεμβαλλόμενες ουσίες... 24 Συσχέτιση... 25 Ολική αστοχία συστήματος... 25 Πρόσθετες πληροφορίες... 26 Βασικά χαρακτηριστικά εξέτασης... 26 Κατασκευαστής και διανομείς... 28 Εμπορικά σήματα και διπλώματα ευρεσιτεχνίας... 28 Copyright... 28 Βιβλιογραφία... 29 Αναθεώρηση εγγράφου... 32 cobas HEV Doc Rev. 3.0 3

Προβλεπόμενη χρήση cobas HEV Η εξέταση cobas HEV είναι μια in vitro εξέταση ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος για την άμεση ανίχνευση RNA (γονότυποι 1-4) του ιού της ηπατίτιδας E (HEV) σε ανθρώπινο πλάσμα. Η παρούσα εξέταση προορίζεται για τον έλεγχο δειγμάτων δοτών για RNA του HEV σε δείγματα ανθρώπινου πλάσματος από μεμονωμένους δότες, συμπεριλαμβανομένων δοτών ολικού αίματος, συστατικών αίματος (ερυθρά αιμοσφαίρια, αιμοπετάλια και πλάσμα) και άλλων ζώντων δοτών. Το πλάσμα όλων των δοτών μπορεί να ελεγχθεί με τη μορφή μεμονωμένων δειγμάτων. Για δείγματα δοτών ολικού αίματος και συστατικών αίματος, τα δείγματα πλάσματος μπορούν να εξεταστούν μεμονωμένα ή μπορεί να γίνει εξέταση του πλάσματος σε δεξαμενές αποτελούμενες από κλάσματα μεμονωμένων δειγμάτων. Η εξέταση αυτή δεν προορίζεται για χρήση σε δείγματα ομφαλοπλακουντιακού αίματος. Η εξέταση αυτή δεν προορίζεται για χρήση ως βοήθημα στη διάγνωση του HEV. Σύνοψη και επεξήγηση της εξέτασης Ιστορικό: Ανοσοαιματολογικός έλεγχος για ιικές λοιμώξεις μεταδιδόμενες με τη μετάγγιση Ο ιός της ηπατίτιδας E (HEV), ένας μικρός, μη ελυτροφόρος ιός RNA που ανήκει στο γένος Hepevirus (οικογένεια Hepeviridae), είναι ένα ανθρώπινο παθογόνο με παγκόσμια κατανομή. 1 Ο ιός αποτελείται από ένα εικοσαεδρικό σωματίδιο που περικλείει ένα γονιδίωμα μονόκλωνου RNA θετικής πολικότητας 7,2 kb. 2 Τέσσερις κύριοι γονότυποι HEV, που αντιστοιχούν σε έναν ορότυπο, έχουν εντοπιστεί σε ανθρώπους και ζώα, συμπεριλαμβανομένων των οικόσιτων χοίρων, των αγριόχοιρων, των ελαφιών και των τρωκτικών. 1,3,4 Ο μοριακός χαρακτηρισμός διάφορων στελεχών του HEV που κυκλοφορούν μεταξύ ανθρώπων και ζώων έχει οδηγήσει στην αναγνώριση τεσσάρων κύριων γονότυπων. 1 Ο γονότυπος 1, ο οποίος απαντάται κυρίως στην Ασία, και ο γονότυπος 2, ο οποίος απαντάται στην Αφρική και στο Μεξικό, εντοπίζονται αποκλειστικά σε ανθρώπους και μεταδίδονται μέσω του μολυσμένου νερού σε αναπτυσσόμενες χώρες. 1,5 Οι γονότυποι 3 και 4 προσβάλλουν ανθρώπους, χοίρους και άλλα είδη θηλαστικών και προκαλούν σποραδικές περιπτώσεις αυτόχθονος HEV σε αναπτυσσόμενες και αναπτυγμένες χώρες. 6 Ο γονότυπος 3 είναι ο μόνος γονότυπος που έχει εντοπιστεί επί του παρόντος ως αιτία αυτόχθονος λοίμωξης στις ΗΠΑ 7 και είναι η αιτία της συντριπτικής πλειονότητας των λοιμώξεων στην Ευρώπη, τη Νέα Ζηλανδία και τη Βόρεια Αμερική. 1,8-12 Οι γονότυποι 3 και 4 απαντώνται στην Ιαπωνία. 1 Οι γονότυποι 1, 3 και 4 του HEV είναι ενδημικοί στην Κίνα. 1 Η οξεία ηπατίτιδα E είναι συνηθέστερη από την ηπατίτιδα A στην Κίνα, τη Γαλλία, το Ηνωμένο Βασίλειο και την Ιαπωνία. 1 Ο κύριος τρόπος μετάδοσης του HEV είναι μέσω της κοπρανοστοματικής οδού από μολυσμένο πόσιμο νερό, 1 παρότι έχουν αναφερθεί περιπτώσεις μετάδοσης μέσω των τροφών από την κατανάλωση μη καλοψημένου ή ωμού χοιρινού κρέατος, κρέατος ζωικών οργάνων ή οστράκων, καθώς και μετάδοσης μέσω ζωονοσογόνων παραγόντων κατόπιν επαφής με προσβεβλημένους χοίρους, οικόσιτα ή άγρια ζώα. 7,13 Το πλήρες εύρος των υποδόχων του HEV είναι άγνωστο. 1 Η προσβολή από HEV συχνά προκαλεί μια ήπια ή υποκλινική λοίμωξη με αυτοπεριοριζόμενη νόσο που διαρκεί 4 έως 6 εβδομάδες. 1,8-11,17,18 Τα συμπτώματα είναι παρεμφερή με εκείνα άλλων μορφών λοίμωξης από ιογενή ηπατίτιδα, κυρίως της ηπατίτιδας A, με κόπωση, ίκτερο, πυρετό, αδιαθεσία, ναυτία, έμετο, ανορεξία και κοιλιακό άλγος. 1 Οι ασθενείς συχνά προσέρχονται με αυξημένα επίπεδα τρανσαμινάσης της αλανίνης (~1.500 IU/L) και πολλοί προσέρχονται με ίκτερο. 1 Οι λοιμώξεις από HEV ενδέχεται περιστασιακά να είναι πιο βαριάς μορφής και να επιφέρουν κεραυνοβόλο ηπατική ανεπάρκεια, ιδίως σε εγκύους, στις οποίες το ποσοστό θνησιμότητας μπορεί να φτάσει το 10% έως 25%, βρέφη και παιδιά ηλικίας κάτω των 2 ετών, άτομα με υποκείμενη ηπατική νόσο (π.χ. κίρρωση) και ανοσοκατεσταλμένα άτομα. 1,19-23 Η λοίμωξη από HEV προκαλεί ετησίως περισσότερα από 3 εκατομμύρια συμπτωματικά περιστατικά οξείας ηπατίτιδας E σε παγκόσμιο επίπεδο, επιφέροντας περίπου 70.000 θανάτους σε ετήσια βάση. 24 Το συνολικό ποσοστό θνησιμότητας κυμαίνεται από 0,2% έως 4,0%. 1,25 Οι περισσότεροι θάνατοι από λοίμωξη του γονότυπου 3 του ιού (HEV3) προκύπτουν από οξεία ή υποξεία ηπατική ανεπάρκεια σε ασθενείς με προϋπάρχουσα ηπατική νόσο, όπως ηπατική νόσο σχετιζόμενη με την κατανάλωση αλκοόλ. 1,22,26,27 Doc Rev. 3.0 4

Ο HEV3 προκαλεί χρόνια λοίμωξη η οποία απαντάται έως και στο 60% των προσβεβλημένων ανοσοκατεσταλμένων ατόμων, εκ των οποίων περίπου το 10% αναπτύσσει κίρρωση. 1 Ως χρόνια λοίμωξη ορίζεται η εμμένουσα παρουσία RNA του HEV στον ορό ή στα κόπρανα για 6 μήνες ή περισσότερο. 1 Τα περισσότερα περιστατικά αφορούν λήπτες μοσχευμάτων στερεών οργάνων, παρότι έχουν επίσης αναφερθεί περιστατικά λοίμωξης σε άτομα με αιματολογικές διαταραχές που έχουν υποβληθεί σε μεταγγίσεις και χημειοθεραπεία, καθώς και σε λίγα άτομα που έχουν προσβληθεί από HIV. 28-34 Δεν έχουν αναφερθεί περιστατικά χρόνιας λοίμωξης από HEV1 ή HEV2. 1 Η λοίμωξη από HEV έχει, επίσης, συσχετιστεί με νευρολογικά σύνδρομα, συμπεριλαμβανομένων του συνδρόμου Guillain-Barré, της παράλυσης τύπου Bell (παράλυση προσωπικού νεύρου), της οξείας εγκάρσιας μυελίτιδας, της οξείας μηνιγγοεγκεφαλίτιδας, της αταξίας και της εγκεφαλίτιδας. Τα νευρολογικά συμπτώματα συνήθως υποχωρούν σε ασθενείς που αποβάλλουν τον ιό. 1 Για την οξεία λοίμωξη από HEV έχουν αναφερθεί περιπτώσεις μεμβρανοϋπερπλαστικής και μεμβρανώδους σπειραματονεφρίτιδας, οξείας παγκρεατίτιδας και θρομβοκυτταροπενίας βαριάς μορφής, παρότι οι παθοφυσιολογικοί μηχανισμοί και η αιτιώδης σχέση, εάν υπάρχουν, δεν έχουν τεκμηριωθεί. 1 Η θεραπεία με ριμπαβιρίνη έχει αποδειχτεί ότι είναι μια αποτελεσματική θεραπεία για την οξεία λοίμωξη βαριάς μορφής από HEV3. Λήπτες μοσχευμάτων με χρόνια λοίμωξη από HEV λαμβάνουν κατά κανόνα θεραπεία μείωσης της ανοσοκαταστολής (κυρίως φάρμακα που στοχεύουν στα T κύτταρα), ιντερφερόνη α και ριμπαβιρίνη. 1 Σκεπτικό για την εξέταση NAT Όπως και άλλες μορφές ηπατίτιδας, ο HEV μπορεί να μεταδοθεί μέσω της μετάγγισης αίματος ή προϊόντων αίματος. Σε πολλές χώρες έχουν αναφερθεί περιστατικά ηπατίτιδας E κατόπιν μετάγγισης. 1,34-39 Το ποσοστό οροθετικών ατόμων για τον HEV μεταξύ των αιμοδοτών σε παγκόσμιο επίπεδο κυμαίνεται, σύμφωνα με αναφορές, μεταξύ 0,4% 20,6%. 40-48 Ασυμπτωματικές λοιμώξεις από HEV παρουσιάζονται σε μεγάλο ποσοστό παγκοσμίως και, λόγω του επιπολασμού του ιού, πολλοί αιμοδότες ενδέχεται να έχουν προσβληθεί και να μεταδώσουν τον ιό σε λήπτες των προϊόντων του αίματός τους. Για παράδειγμα, μια πρόσφατη μελέτη σε Άγγλους αιμοδότες έδειξε ότι το 11% των δειγμάτων ορού των δοτών ήταν αντιδρώντα για IgG έναντι του HEV, υποδεικνύοντας παρελθούσα λοίμωξη, και το 0,7% των δειγμάτων ορού των δοτών ήταν αντιδρώντα για IgM, υποδεικνύοντας οξεία λοίμωξη. 46 Επιπλέον, το 0,7% των μικροδεξαμενών πλάσματος Άγγλων δοτών περιείχε RNA του HEV. 47 Μια μελέτη σε Κινέζους αιμοδότες έδωσε παρόμοια αποτελέσματα: το 32,6% των δειγμάτων ορού των δοτών ήταν αντιδρώντα για IgG, το 0,94% των δειγμάτων ορού των δοτών ήταν αντιδρώντα για IgM και το 0,07% των δειγμάτων δοτών εμφάνιζε ιαιμία από HEV. 48 Μια παγκόσμια έρευνα σε δεξαμενές κλασματοποίησης πλάσματος ανέφερε ότι το 10% των δεξαμενών που ελέγχθηκαν ήταν θετικές για RNA του HEV. 48,49 Επεξήγηση της εξέτασης Η εξέταση cobas HEV είναι μια εξέταση PCR ποιοτικού προσδιορισμού για την ανίχνευση RNA του HEV, η οποία χρησιμοποιείται στο σύστημα cobas 6800 και στο σύστημα cobas 8800. Η εξέταση cobas HEV επιτρέπει ταυτόχρονα την ανίχνευση RNA του HEV και τον εσωτερικό έλεγχο με μία εξέταση, που διενεργείται σε μολυσμένα, μεμονωμένα δείγματα δοτών ή πλάσμα δεξαμενής προερχόμενο από μεμονωμένα δείγματα δοτών. Doc Rev. 3.0 5

Βασικές αρχές της διαδικασίας cobas HEV Η εξέταση cobas HEV βασίζεται στην πλήρως αυτοματοποιημένη παρασκευή δείγματος (εκχύλιση και καθαρισμός νουκλεϊκών οξέων), ακολουθούμενη από ενίσχυση και ανίχνευση PCR. Τα συστήματα cobas 6800/8800 αποτελούνται από τη μονάδα παροχής δειγμάτων, τη μονάδα μεταφοράς, τη μονάδα επεξεργασίας και τη μονάδα ανάλυσης. Το λογισμικό cobas 6800/8800 πραγματοποιεί αυτοματοποιημένη διαχείριση δεδομένων, αποδίδοντας σε όλες τις εξετάσεις τα αποτελέσματα: μη αντιδρών, αντιδρών ή μη έγκυρο. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται απευθείας στην οθόνη του συστήματος και εκτυπώνονται με τη μορφή αναφοράς. Τα δείγµατα μπορούν να εξεταστούν είτε μεμονωμένα είτε σε δεξαμενές αποτελούμενες από πολλαπλά δείγματα. Το όργανο cobas p 680 μπορεί προαιρετικά να χρησιμοποιηθεί στο προαναλυτικό στάδιο, εάν πρόκειται να πραγματοποιηθεί δεξαμενοποίηση. Το νουκλεϊκό οξύ από το δείγμα και τα μόρια πρόσθετου εσωτερικού ορού ελέγχου (IC) Armored RNA (που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της διαδικασίας παρασκευής και ενίσχυσης/ανίχνευσης δειγμάτων) εκχυλίζεται ταυτόχρονα. Επιπλέον, η εξέταση χρησιμοποιεί δύο εξωτερικούς ορούς ελέγχου: έναν θετικό και έναν αρνητικό ορό ελέγχου. Με την προσθήκη πρωτεϊνάσης και αντιδραστηρίου λύσης στο δείγμα αποδεσμεύεται ιικό νουκλεϊκό οξύ. Το αποδεσμευμένο νουκλεϊκό οξύ δεσμεύεται στην επιφάνεια από πυρίτιο των πρόσθετων μαγνητικών σωματιδίων γυαλιού. Οι μη δεσμευμένες ουσίες και οι ακαθαρσίες, όπως η μετουσιωμένη πρωτεΐνη, τα κυτταρικά υπολείμματα και πιθανοί αναστολείς της PCR (όπως η αιµοσφαιρίνη), απομακρύνονται με επόμενα βήματα χρήσης αντιδραστηρίου πλύσης και το καθαρό νουκλεϊκό οξύ εκλούεται από τα σωµατίδια γυαλιού με ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης σε αυξημένη θερμοκρασία. Η εκλεκτική ενίσχυση του νουκλεϊκού οξέος στόχου από το δείγμα δότη επιτυγχάνεται με τη χρήση ειδικών για τον ιό εκκινητών πρόσθιας και αντίστροφης φοράς που επιλέγονται από περιοχές υψηλού βαθμού συντήρησης του ιικού νουκλεϊκού οξέος. Τόσο για την αντίστροφη μεταγραφή όσο και για την ενίσχυση χρησιμοποιείται ένα θερμοσταθερό ένζυμο, η DNA πολυμεράση. Το κύριο μίγμα περιλαμβάνει τριφωσφορική δεοξυουριδίνη (dutp), αντί για τριφωσφορική δεοξυθυμιδίνη (dttp), η οποία είναι ενσωματωμένη στο νεοσυντιθέμενο DNA (αμπλικόνιο). 50-52 Τυχόν επιμολυντικό αμπλικόνιο από προηγούμενη εκτέλεση PCR καταστρέφεται από το ένζυμο AmpErase [ουρακιλ-n-γλυκοζυλάση], το οποίο περιέχεται στο κύριο μίγμα PCR, όταν θερμαίνεται στο πρώτο στάδιο θερμοκυκλοποίησης. Ωστόσο, το νεοσυντιθέμενο αμπλικόνιο δεν καταστρέφεται, καθώς το ένζυμο AmpErase αδρανοποιείται μόλις εκτεθεί σε θερμοκρασίες πάνω από 55 C. Το κύριο μίγμα cobas HEV περιέχει ιχνηθέτες ανίχνευσης ειδικούς για το νουκλεϊκό οξύ HEV και IC. Οι ειδικοί για HEV και IC ιχνηθέτες ανίχνευσης έχουν σημανθεί με μία από τις δύο μοναδικές φθορίζουσες χρωστικές, οι οποίες δρουν ως χρωστικές αναφοράς. Κάθε ιχνηθέτης περιέχει επίσης μια δεύτερη χρωστική που δρα ως παρεμποδιστής. Οι δύο χρωστικές αναφοράς μετρώνται σε καθορισμένα μήκη κύματος, επιτρέποντας έτσι την ταυτόχρονη ανίχνευση και διάκριση του ενισχυμένου στόχου HΕV και του IC. 53,54 Το σήμα φθορισμού του ανέπαφου ιχνηθέτη αναστέλλεται από τη χρωστική παρεμπόδισης. Κατά το στάδιο ενίσχυσης μέσω PCR, ο υβριδισμός των ιχνηθετών σε ειδικό μονόκλωνο DNA-μήτρα οδηγεί στην αποδόμηση από την 5' προς 3' δράση της νουκλεάσης της DNA πολυμεράσης, με αποτέλεσμα τον διαχωρισμό των χρωστικών αναφοράς και παρεμπόδισης και τη δημιουργία σήματος φθορισμού. Με κάθε κύκλο PCR, δημιουργούνται αυξανόμενες ποσότητες διασπώμενων ιχνηθετών και παράλληλα αυξάνεται το συνολικό σήμα της χρωστικής αναφοράς (reporter). Καθώς οι δύο ειδικές χρωστικές αναφοράς μετρώνται σε καθορισμένα μήκη κύματος, είναι εφικτή η ταυτόχρονη ανίχνευση και διάκριση του ενισχυμένου στόχου ΗEV και του IC. Doc Rev. 3.0 6

Αντιδραστήρια και υλικά Αντιδραστήρια και οροί ελέγχου cobas HEV Όλα τα μη ανοιγμένα αντιδραστήρια και οροί ελέγχου θα φυλάσσονται όπως περιγράφει ο Πίνακας 1 έως και ο Πίνακας 4. Πίνακας 1 Εξέταση cobas HEV Εξέταση cobas HEV Φυλάσσετε στους 2 8 C κασέτα 96 εξετάσεων (P/N 07001045190) Περιεχόμενα κιτ Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ 96 εξετάσεις Διάλυμα πρωτεϊνάσης (PASE) Εσωτερικός ορός ελέγχου (IC) Ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης (EB) Αντιδραστήριο κύριου μίγματος 1 (MMX-R1) Αντιδραστήριο κύριου μίγματος HEV 2 (HEV MMX-R2) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, < 0,05% EDTA, χλωριούχο ασβέστιο, οξικό ασβέστιο, πρωτεϊνάση 8% (κ.ό.) EUH210: Τα δελτία δεδομένων ασφαλείας παρέχονται εφόσον ζητηθούν. EUH208: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική αντίδραση. Περιέχει: σουμπτιλισίνη, 9014-01-1 Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, < 0,05% EDTA, < 0,001% σύνθεση εσωτερικού ορού ελέγχου Armored RNA (μη μολυσματικό RNA που περιβάλλεται από βακτηριοφάγο MS2), < 0,002% Poly ra RNA (συνθετικό), < 0,1% αζίδιο του νατρίου Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, 0,2% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ Οξικό μαγγάνιο, υδροξείδιο του καλίου, < 0,1% αζίδιο του νατρίου Ρυθμιστικό διάλυμα Tricine, οξικό κάλιο, γλυκερόλη, 18% διμεθυλοσουλφοξείδιο, Tween 20, EDTA, < 0,06% datp, dgtp, dctp, < 0,14% dutp, < 0,01% ανοδικοί και καθοδικοί εκκινητές HEV και εσωτερικού ορού ελέγχου, < 0,01% ιχνηθέτες HEV με φθορίζουσα σήμανση, < 0,01% ιχνηθέτες εσωτερικού ορού ελέγχου με φθορίζουσα σήμανση, < 0,01% ολιγονουκλεοτίδιο (απταμερές), < 0,01% DNA πολυμεράση Z05D, < 0,01% ένζυμο (μικροβιακό) AmpErase (ουρακιλ-nγλυκοζυλάση), < 0,1% αζίδιο του νατρίου 13 ml 13 ml 13 ml 5,5 ml 6 ml Doc Rev. 3.0 7

Πίνακας 2 cobas HEV Control Kit cobas HEV Control Kit Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 07001100190) Περιεχόμενα κιτ Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ Θετικός ορός ελέγχου HEV (HEV (+) C) < 0,001% συνθετικό (armored) RNA HEV που περιβάλλεται από καψιδιακή πρωτεΐνη βακτηριοφάγου MS2, φυσιολογικό ανθρώπινο πλάσμα μη αντιδρών σύμφωνα με εγκεκριμένες εξετάσεις για αντισώματα έναντι του HCV, αντισώματα έναντι του HIV-1/2, HBsAg, αντισώματα έναντι του HBc. Μη ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1, RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του HEV, RNA του WNV και DNA του CMV με μεθόδους PCR. 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 16 ml (16 x 1 ml) Σύμβολο και προειδοποίηση ασφάλειας* Προσοχή H317: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική δερματική αντίδραση. P261: Aποφεύγετε να αναπνέετε σκόνη/ αναθυμιάσεις/ αέρια/ σταγονίδια/ ατμούς/ εκνεφώματα. P272: Τα μολυσμένα ενδύματα εργασίας δεν πρέπει να βγαίνουν από το χώρο εργασίας. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια. P302 + P352: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο νερό και σαπούνι. P333 + P313: Εάν παρατηρηθεί ερεθισμός του δέρματος ή εμφανιστεί εξάνθημα: Συμβουλευθείτε / Επισκεφθείτε γιατρό. P363: Πλύνετε τα μολυσμένα ενδύματα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. * Οι σημάνσεις ασφαλείας του προϊόντος ακολουθούν κατά κύριο λόγο τις κατευθυντήριες οδηγίες ΠΕΣ για την ΕΕ. Doc Rev. 3.0 8

Πίνακας 3 cobas NHP Negative Control Kit cobas NHP Negative Control Kit Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 07002220190) Περιεχόμενα κιτ Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ Αρνητικός ορός ελέγχου φυσιολογικού ανθρώπινου πλάσματος (NHP-NC) Φυσιολογικό ανθρώπινο πλάσμα, μη αντιδρών σύμφωνα με εγκεκριμένες εξετάσεις για αντισώματα έναντι του HCV, αντισώματα έναντι του HIV-1/2, HBsAg, αντισώματα έναντι του HBc. Μη ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1, RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του HEV, RNA του WNV και DNA του CMV με μεθόδους PCR. < 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 16 ml (16 x 1 ml) Σύμβολο και προειδοποίηση ασφάλειας* Προσοχή H317: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική δερματική αντίδραση. P261: Aποφεύγετε να αναπνέετε σκόνη/ αναθυμιάσεις/ αέρια/ σταγονίδια/ ατμούς/ εκνεφώματα. P272: Τα μολυσμένα ενδύματα εργασίας δεν πρέπει να βγαίνουν από το χώρο εργασίας. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια. P302 + P352: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο νερό και σαπούνι. P333 + P313: Εάν παρατηρηθεί ερεθισμός του δέρματος ή εμφανιστεί εξάνθημα: Συμβουλευθείτε / Επισκεφθείτε γιατρό. P363: Πλύνετε τα μολυσμένα ενδύματα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. * Οι σημάνσεις ασφαλείας του προϊόντος ακολουθούν κατά κύριο λόγο τις κατευθυντήριες οδηγίες ΠΕΣ για την ΕΕ. Doc Rev. 3.0 9

Αντιδραστήρια cobas omni για προετοιμασία δειγμάτων Πίνακας 4 Αντιδραστήρια cobas omni για προετοιμασία δειγμάτων* Αντιδραστήρια Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ Σύμβολο και προειδοποίηση ασφάλειας** cobas omni MGP Reagent (MGP) Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997546190) cobas omni Specimen Diluent (SPEC DIL) Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997511190) cobas omni Lysis Reagent (LYS) Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997538190) cobas omni Wash Reagent (WASH) Φυλάσσετε στους 15 30 C (P/N 06997503190) Μαγνητικά σωματίδια γυαλιού, ρυθμιστικό διάλυμα Tris, 0,1% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ, < 0,1% αζίδιο του νατρίου Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, 0,1% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ, < 0,1% αζίδιο του νατρίου 42,56% (κ.β.) θειοκυανική γουανιδίνη, 5% (κ.ό.) πολυδοκανόλη, 2% (κ.ό.) διθειοθρεϊτόλη, δισόξινο νάτριο κιτρικό Κιτρικό νάτριο διυδρικό, 0,1% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ 480 εξετάσεις Δεν εφαρµόζεται 4 x 875 ml Δεν εφαρµόζεται 4 x 875 ml Κίνδυνος H302: Επιβλαβές σε περίπτωση καταπόσεως. H318: Προκαλεί σοβαρή οφθαλμική βλάβη. H412: Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. EUH032: Σε επαφή με οξέα ελευθερώνονται πολύ τοξικά αέρια. P301 + P312: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. P264: Πλύνετε το δέρμα σχολαστικά μετά το χειρισμό. P270: Μην τρώτε, πίνετε ή καπνίζετε, όταν χρησιμοποιείτε αυτό το προϊόν. P273: Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια/ μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια / πρόσωπο. P305 + P351 + P338: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΑ ΜΑΤΙΑ: Ξεπλύνετε προσεκτικά με νερό για αρκετά λεπτά. Εάν υπάρχουν φακοί επαφής, αφαιρέστε τους, εφόσον είναι εύκολο. Συνεχίστε να ξεπλένετε. P310: Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. P330: Ξεπλύνετε το στόμα. 4,2 L Δεν εφαρµόζεται ** Αυτά τα αντιδραστήρια δεν περιλαμβάνονται στο κιτ εξέτασης cobas HEV. Δείτε τον κατάλογο με τα πρόσθετα απαιτούμενα υλικά (Πίνακας 7). ** Οι σημάνσεις ασφαλείας του προϊόντος ακολουθούν κατά κύριο λόγο τις κατευθυντήριες οδηγίες ΠΕΣ για την ΕΕ. Doc Rev. 3.0 10

Απαιτήσεις φύλαξης και χειρισμού αντιδραστηρίων Η φύλαξη και ο χειρισμός των αντιδραστηρίων θα πρέπει να γίνονται σύμφωνα με όσα αναφέρει ο Πίνακας 5 και ο Πίνακας 6. Όταν τα αντιδραστήρια δεν είναι φορτωμένα στα συστήματα cobas 6800/8800, φυλάξτε τα στην αντίστοιχη θερμοκρασία, όπως αναφέρει ο Πίνακας 5. Πίνακας 5 Φύλαξη αντιδραστηρίων (όταν το αντιδραστήριο δεν είναι τοποθετημένο στο σύστημα) Αντιδραστήριο cobas HEV 96 cobas HEV Control Kit cobas NHP Negative Control Kit cobas omni Lysis Reagent cobas omni MGP Reagent cobas omni Specimen Diluent cobas omni Wash Reagent Θερμοκρασία φύλαξης 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 15 30 C Τα αντιδραστήρια που τοποθετούνται στα συστήματα cobas 6800/8800 φυλάσσονται στις κατάλληλες θερμοκρασίες και η λήξη τους παρακολουθείται από το σύστημα. Το σύστημα επιτρέπει τη χρήση αντιδραστηρίων μόνο αν πληρούνται όλες οι προϋποθέσεις που αναφέρει ο Πίνακας 6. Το σύστημα αποτρέπει αυτόματα τη χρήση αντιδραστηρίων που έχουν λήξει. Ο Πίνακας 6 βοηθά τον χρήστη να κατανοήσει τις προϋποθέσεις χειρισμού των αντιδραστηρίων που επιβάλλουν τα συστήματα cobas 6800/8800. Πίνακας 6 Προϋποθέσεις λήξης αντιδραστηρίων που επιβάλλονται από τα συστήματα cobas 6800/8800 Αντιδραστήριο Ημερομηνία λήξης κιτ Σταθερότητα ανοιγμένου κιτ Αριθμός αναλύσεων για τις οποίες μπορεί να χρησιμοποιηθεί το κιτ Σταθερότητα επί του οργάνου (αθροιστικός χρόνος επί του οργάνου εκτός ψυγείου) cobas HEV 96 Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την πρώτη χρήση Έως 10 αναλύσεις Έως 8 ώρες cobas HEV Control Kit cobas NHP Negative Control Kit Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται Έως 10 ώρες Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται Έως 10 ώρες cobas omni Lysis Reagent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται cobas omni MGP Reagent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται cobas omni Specimen Diluent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται cobas omni Wash Reagent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται * Ο χρόνος υπολογίζεται από την πρώτη φορά κατά την οποία το αντιδραστήριο τοποθετείται στα συστήματα cobas 6800/8800. Doc Rev. 3.0 11

Πρόσθετα απαιτούμενα υλικά Πίνακας 7 Υλικά και αναλώσιμα για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800 Υλικό P/N cobas omni Processing Plate 05534917001 cobas omni Amplification Plate 05534941001 cobas omni Pipette Tips 05534925001 cobas omni Liquid Waste Container 07094388001 cobas omni Lysis Reagent 06997538190 cobas omni MGP Reagent 06997546190 cobas omni Specimen Diluent 06997511190 cobas omni Wash Reagent 06997503190 Σάκος στερεών αποβλήτων 07435967001 Δοχείο στερεών αποβλήτων 07094361001 Όργανα και λογισμικό που απαιτούνται Το λογισμικό cobas 6800/8800 και το πακέτο ανάλυσης cobas HEV θα εγκατασταθούν στο(α) όργανο(α). Ο διακομιστής πύλης οργάνου (IG) παρέχεται μαζί με το σύστημα. Πίνακας 8 Όργανα Εξοπλισμός P/N Σύστημα cobas 6800 (με δυνατότητα μετακίνησης προαιρετικά) 05524245001 και 06379672001 Σύστημα cobas 6800 (σταθερό) 05524245001 και 06379664001 Σύστημα cobas 8800 05412722001 Όργανο cobas p 680 (προαιρετικό για χρήση πιπέτας και δεξαμενοποίηση) 06578624001 Μονάδα παροχής δειγμάτων 06301037001 Για πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τα κύρια και δευτερεύοντα σωληνάρια δειγμάτων που είναι αποδεκτά για τα όργανα, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800 και στο εγχειρίδιο χειριστή του οργάνου cobas p 680. Σημείωση: Επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της Roche για έναν λεπτομερή κατάλογο παραγγελιών με υποδοχείς δειγμάτων, υποδοχείς για φραγμένα ακροφύσια και δίσκους υποδοχέων που είναι αποδεκτοί για τα όργανα. Doc Rev. 3.0 12

Προφυλάξεις και απαιτήσεις χειρισμού Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Όπως συμβαίνει με όλες τις διαδικασίες εξέτασης, η ορθή εργαστηριακή πρακτική είναι απαραίτητη για τη σωστή εκτέλεση αυτής της ανάλυσης. Λόγω της υψηλής ευαισθησίας της παρούσας εξέτασης, θα πρέπει να είστε ιδιαίτερα προσεκτικοί, ώστε να αποφευχθεί η επιμόλυνση των αντιδραστηρίων και των μιγμάτων ενίσχυσης. Μόνο για διαγνωστική χρήση in vitro. Όλα τα δείγματα θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικά και ο χειρισμός τους να γίνεται με ορθές εργαστηριακές διαδικασίες, όπως αυτές που περιγράφονται στην έκδοση Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories και στο έγγραφο M29-A4 του CLSI. 38,39 Η διαδικασία αυτή πρέπει να εκτελείται μόνο από προσωπικό καταρτισμένο στον χειρισμό μολυσματικών υλικών και τη χρήση της εξέτασης cobas HEV, των συστημάτων cobas 6800/8800 και του οργάνου cobas p 680 (προαιρετικό). Όλα τα υλικά ανθρώπινης προέλευσης πρέπει να θεωρούνται εν δυνάμει μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις γενικές προφυλάξεις. Σε περίπτωση διάχυσης υγρών, απολυμάνετε αμέσως με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό (αραιώστε λευκαντικό οικιακής χρήσης σε αναλογία 1:10) ή ακολουθήστε τις κατάλληλες διαδικασίες του κέντρου σας. Το cobas HEV Control Kit και το cobas NHP Negative Control Kit περιέχουν πλάσμα προερχόμενο από ανθρώπινο αίμα. Το υλικό προέλευσης έχει ελεγχθεί με εγκεκριμένες εξετάσεις αντισωµάτων και έχει διαπιστωθεί ότι είναι μη αντιδρών υπό την παρουσία: αντισωμάτων έναντι του HCV, αντισωμάτων έναντι του HIV-1/2, HBsAg, και αντισωµάτων έναντι του HBc. Η εξέταση φυσιολογικού ανθρώπινου πλάσματος με τις μεθόδους PCR δεν έδειξε, επίσης, ανιχνεύσιμο RNA του HEV, RNA του HIV-1 (ομάδες M και O), RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του WNV ή DNA του CMV. Καμία γνωστή μέθοδος εξέτασης δεν διασφαλίζει απόλυτα ότι τα προϊόντα που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα δεν μεταδίδουν μολυσματικούς παράγοντες. Μην καταψύχετε το ολικό αίμα. Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένων πιπετών μίας χρήσης με ακροφύσια χωρίς νουκλεάση. Χρησιμοποιείτε μόνο τα παρεχόμενα ή τα καθορισμένα απαιτούμενα αναλώσιμα υλικά για τη διασφάλιση της βέλτιστης απόδοσης της εξέτασης. Διατίθενται Δελτία Δεδομένων Ασφάλειας (SDS), κατόπιν αιτήματος, από τον τοπικό αντιπρόσωπο της Roche. Ακολουθήστε προσεκτικά τις διαδικασίες και τις οδηγίες, για να βεβαιωθείτε ότι η εξέταση εκτελείται σωστά. Οποιαδήποτε απόκλιση από τις διαδικασίες και τις οδηγίες μπορεί να επηρεάσει τη βέλτιστη απόδοση της εξέτασης. Μπορεί να προκύψουν ψευδώς θετικά αποτελέσματα, αν η επιμόλυνση των δειγμάτων δεν τεθεί αποτελεσματικά υπό έλεγχο κατά τη διάρκεια του χειρισμού και της επεξεργασίας των δειγμάτων. Doc Rev. 3.0 13

Χειρισμός αντιδραστηρίων Ο χειρισμός όλων των αντιδραστηρίων, ορών ελέγχου και δειγμάτων θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική, ώστε να αποφεύγεται η επιμόλυνση των δειγμάτων ή των ορών ελέγχου. Πριν από τη χρήση, ελέγχετε οπτικά κάθε κασέτα αντιδραστηρίου, αραιωτικό, αντιδραστήριο λύσης και αντιδραστήριο πλύσης, για να βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχουν ενδείξεις διαρροής. Εάν παρατηρήσετε ενδείξεις διαρροής, μη χρησιμοποιήσετε τα υλικά αυτά για εξέταση. Το cobas omni Lysis Reagent περιέχει θειοκυανική γουανιδίνη, μια δυνητικά επικίνδυνη χημική ουσία. Αποφεύγετε την επαφή των αντιδραστηρίων με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού, διαφορετικά μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Τα κιτ εξέτασης cobas HEV, το cobas omni MGP Reagent και το cobas omni Specimen Diluent περιέχουν αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Αποφεύγετε την επαφή των αντιδραστηρίων με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού, διαφορετικά μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Εάν τα αντιδραστήρια αυτά χυθούν, αραιώστε με νερό πριν σκουπίσετε τη διαρροή. Μην αφήσετε το cobas omni Lysis Reagent, που περιέχει θειοκυανική γουανιδίνη, να έρθει σε επαφή με διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου (λευκαντικό). Το μίγμα αυτό μπορεί να παράγει ένα ιδιαίτερα τοξικό αέριο. Η απόρριψη όλων των υλικών που έχουν έρθει σε επαφή με δείγματα και αντιδραστήρια θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους εθνικούς, περιφερειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Ορθή εργαστηριακή πρακτική Μην εκτελείτε αναρρόφηση με πιπέτα από το στόμα. Απαγορεύεται η κατανάλωση τροφίμων και ποτών και το κάπνισμα στους καθορισμένους χώρους εργασίας. Φοράτε εργαστηριακά γάντια, εργαστηριακές ποδιές και προστατευτικά γυαλιά όταν χειρίζεστε δείγματα και αντιδραστήρια. Θα πρέπει να αλλάζετε γάντια μεταξύ του χειρισμού δειγμάτων και του χειρισμού των κιτ εξέτασης cobas HEV και των αντιδραστηρίων cobas omni, ώστε να αποφευχθεί τυχόν επιμόλυνση. Φροντίστε να μην μολυνθούν τα γάντια κατά τον χειρισμό των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Πλένετε καλά τα χέρια σας μετά τον χειρισμό δειγμάτων και κιτ αντιδραστηρίων, καθώς και μετά την αφαίρεση των γαντιών. Καθαρίζετε καλά και απολυμαίνετε όλες τις επιφάνειες εργασίας του εργαστηρίου με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό (αραιώστε λευκαντικό οικιακής χρήσης σε αναλογία 1:10). Στη συνέχεια, σκουπίστε την επιφάνεια με 70% αιθανόλη. Σε περίπτωση διαρροής υγρού πάνω στα όργανα cobas 6800/8800, ακολουθήστε τις οδηγίες του εγχειριδίου χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800 όσον αφορά τον σωστό καθαρισμό και την απολύμανση της επιφάνειας του(ων) οργάνου(ων). Doc Rev. 3.0 14

Συλλογή, μεταφορά, φύλαξη και δεξαμενοποίηση δειγμάτων Σημείωση: Όλα τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται ανάλογα. Φυλάσσετε όλα τα δείγματα δοτών στις καθορισμένες θερμοκρασίες. Η σταθερότητα των δειγμάτων επηρεάζεται από υψηλές θερμοκρασίες. Δείγματα ζώντων δοτών cobas HEV Πλάσμα που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό EDTA, CPD, CPDA1, CP2D και 4% κιτρικό νάτριο (πλασμαφαίρεση) επιτρέπεται να χρησιμοποιείται με την εξέταση cobas HEV. Ακολουθείτε τις οδηγίες του κατασκευαστή του σωληναρίου/ασκού συλλογής δειγμάτων για τον χειρισμό και τη φυγοκέντριση. Αίμα που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό EDTA πρέπει να φυλάσσεται για έως 12 ημέρες υπό τις ακόλουθες συνθήκες: o Τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρούνται εντός 72 ωρών από τη συλλογή. o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται σε θερμοκρασία έως 25 C για 72 ώρες και, κατά τη διάρκεια των 72 ωρών, σε θερμοκρασία έως 30 C για 24 ώρες. Με την εξαίρεση των παραπάνω, τα δείγματα φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2-8 C. Επίσης, το πλάσμα που έχει διαχωριστεί από τα αιμοκύτταρα μπορεί να φυλαχθεί για έως 12 μήνες σε θερμοκρασία -18 C με τρεις κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Ανατρέξτε στην Εικόνα 1. Εικόνα 1 Συνθήκες φύλαξης δειγμάτων σε αντιπηκτικό EDTA 30 Αντιπηκτικό EDTA Θερμοκρασία C 25 8 Ολικό αίμα 2-18 1 3 12 Κατεψυγμένο πλάσμα (κατάψυξη-απόψυξη έως 3 φορές) 0 Μήνες 12 Doc Rev. 3.0 15

Μπορείτε να φυλάσσετε αίμα που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό CPD, CPDA1, CP2D, σωληνάρια παρασκευής πλάσματος με EDTA Becton-Dickinson (BD PPT ) ή σωληνάρια K2EDTA πλάσματος Greiner Vacuette με γέλη για έως 12 ημέρες υπό τις ακόλουθες συνθήκες: o Τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρούνται εντός 72 ωρών από τη συλλογή. o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται σε θερμοκρασία έως 25 C για 72 ώρες και, κατά τη διάρκεια των 72 ωρών, σε θερμοκρασία έως 30 C για 24 ώρες. Με την εξαίρεση των παραπάνω, τα δείγματα φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2-8 C. Επίσης, το πλάσμα που έχει διαχωριστεί από τα αιμοκύτταρα μπορεί να φυλαχθεί για έως 30 ημέρες σε θερμοκρασία -18 C με τρεις κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Ανατρέξτε στην Εικόνα 2. Εικόνα 2 Συνθήκες φύλαξης δειγμάτων 30 Αντιπηκτικό CPD, CPDA1, CP2D, σωληνάρια BD PPT TM ή σωληνάρια K2EDTA πλάσματος Greiner Vacuette με γέλη 25 Θερμοκρασία C 8 Ολικό αίμα 2-18 1 3 12 Κατεψυγμένο πλάσμα (κατάψυξη-απόψυξη έως 3 φορές) 0 30 Ημέρες Το πλάσμα από πλασμαφαίρεση που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό 4% κιτρικό νάτριο μπορεί να φυλαχθεί για έως 30 ημέρες σε θερμοκρασία 2-8 C. o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται σε θερμοκρασία έως 25 C για 72 ώρες και, κατά τη διάρκεια των 72 ωρών, σε θερμοκρασία έως 30 C για 24 ώρες. Επιπλέον, μπορείτε να φυλάσσετε το διαχωρισμένο από τα αιμοκύτταρα πλάσμα για έως 12 μήνες σε θερμοκρασία -18 C με έως τρεις κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Εάν τα δείγματα πρόκειται να μεταφερθούν, θα πρέπει να συσκευαστούν και να τοποθετηθούν ετικέτες σύμφωνα με τους ισχύοντες εθνικούς ή/και διεθνείς κανονισμούς που αφορούν τη μεταφορά δειγμάτων και αιτιολογικών παραγόντων. Doc Rev. 3.0 16

Οδηγίες χρήσης Αυτόματη μεταφορά δειγμάτων με πιπέτα και δεξαμενοποίηση δειγμάτων (προαιρετικά) Το όργανο cobas p 680 είναι ένα προαιρετικό στοιχείο των συστημάτων cobas 6800/8800, το οποίο χρησιµοποιείται για την αυτόματη μεταφορά με πιπέτα και δεξαμενοποίηση κλασμάτων πολλαπλών πρωτογενών δειγμάτων σε ένα ενιαίο δείγμα δεξαμενής. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χειριστή του οργάνου cobas p 680. Σημειώσεις διαδικασίας Μην χρησιμοποιείτε τα αντιδραστήρια της εξέτασης cobas HEV, το cobas HEV Control Kit, το cobas NHP Negative Control Kit ή τα αντιδραστήρια cobas omni μετά την ημερομηνία λήξης τους. Μην επαναχρησιμοποιείτε τα αναλώσιμα. Προορίζονται για μία μόνο χρήση. Για τη σωστή συντήρηση των οργάνων, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800. Εκτέλεση της εξέτασης cobas HEV Η διαδικασία της εξέτασης περιγράφεται αναλυτικά στο εγχειρίδιο χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800 και στο εγχειρίδιο χειριστή του οργάνου cobas p 680. Η Εικόνα 3 παρακάτω παρουσιάζει συνοπτικά τη διαδικασία. Εικόνα 3 Διαδικασία εξέτασης cobas HEV Doc Rev. 3.0 17

Αποτελέσματα Τα συστήματα cobas 6800/8800 ανιχνεύουν αυτόματα και ταυτόχρονα το RNA του HEV για τα δείγματα και τους ορούς ελέγχου. Ποιοτικός έλεγχος και εγκυρότητα των αποτελεσμάτων Με κάθε παρτίδα γίνεται επεξεργασία ενός αρνητικού ορού ελέγχου [( )C] και ενός θετικού ορού ελέγχου [HEV (+)C]. Στο λογισμικό cobas 6800/8800 ή/και στην αναφορά, ελέγξτε αν υπάρχουν ενδείξεις, καθώς και τα αντίστοιχά τους αποτελέσματα, για να διασφαλίσετε την εγκυρότητα της παρτίδας. Η παρτίδα θεωρείται έγκυρη όταν δεν εμφανίζονται ενδείξεις για τους δύο ορούς ελέγχου. Το λογισμικό cobas 6800/8800 ακυρώνει αυτόματα τα αποτελέσματα βάσει των αποτυχιών των αρνητικών και θετικών ορών ελέγχου. Ενδείξεις ορών ελέγχου Πίνακας 9 Ενδείξεις ορών ελέγχου για αρνητικούς και θετικούς ορούς ελέγχου Αρνητικός ορός ελέγχου Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία ( ) C Q02 Invalid Ολόκληρη η παρτίδα χαρακτηρίζεται ως μη έγκυρη αν το αποτέλεσμα για το ( ) C είναι μη έγκυρο. Θετικός ορός ελέγχου Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία HEV (+) C Q02 Invalid Ολόκληρη η παρτίδα χαρακτηρίζεται ως μη έγκυρη αν το αποτέλεσμα για το HEV (+) C είναι μη έγκυρο. Εάν η παρτίδα δεν είναι έγκυρη, επαναλάβετε την εξέταση ολόκληρης της παρτίδας, συμπεριλαμβανομένων των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Doc Rev. 3.0 18

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Για μια έγκυρη παρτίδα, ελέγξτε κάθε μεμονωμένο δείγμα για ενδείξεις, στο λογισμικό cobas 6800/8800 ή/και στην αναφορά. Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων θα πρέπει να είναι ως εξής: Μια έγκυρη παρτίδα μπορεί να περιλαμβάνει έγκυρα και μη έγκυρα αποτελέσματα δείγματος δότη, ανάλογα με τις ενδείξεις που λαμβάνονται για τα μεμονωμένα δείγματα. Τα αποτελέσματα δειγμάτων είναι έγκυρα μόνο αν οι αντίστοιχοι θετικοί οροί ελέγχου και ο αρνητικός ορός ελέγχου της αντίστοιχης παρτίδας είναι έγκυροι. Για κάθε δείγμα, μετρώνται ταυτόχρονα δύο παράμετροι: HEV και εσωτερικός ορός ελέγχου. Τα τελικά αποτελέσματα δειγμάτων για την εξέταση cobas HEV αναφέρονται από το λογισμικό. Μαζί με τα συνολικά αποτελέσματα, στο λογισμικό cobas 6800/8800 θα εμφανίζονται και μεμονωμένα αποτελέσματα στόχων, τα οποία θα πρέπει να ερμηνεύονται ως εξής: Πίνακας 10 Αποτελέσματα στόχων για την ερμηνεία μεμονωμένων αποτελεσμάτων στόχων Αποτελέσματα στόχων Μη αντιδρών για HEV Αντιδρών για HEV Invalid Ερμηνεία Δεν ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HEV και ανιχνεύθηκε σήμα IC. Ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HEV και μπορεί να ανιχνεύθηκε ή να μην ανιχνεύθηκε σήμα IC. Δεν ανιχνεύθηκε σήμα στόχου και σήμα εσωτερικού ορού ελέγχου. Επανάληψη εξέτασης μεμονωμένων δειγμάτων Για τα σωληνάρια δείγματος με μη έγκυρο τελικό αποτέλεσμα στόχου απαιτείται επαναληπτική εξέταση. Περιορισμοί της διαδικασίας Η εξέταση cobas HEV έχει αξιολογηθεί μόνο για χρήση σε συνδυασμό με το cobas HEV Control Kit, το cobas NHP Negative Control Kit, το cobas omni MGP Reagent, το cobas omni Lysis Reagent, το cobas omni Specimen Diluent και το cobas omni Wash Reagent για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800. Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων εξαρτάται από την ορθότητα των διαδικασιών συλλογής, φύλαξης και χειρισμού των δειγμάτων. Μην χρησιμοποιείτε ηπαρινισμένο πλάσμα με αυτή την εξέταση, καθώς έχει καταδειχθεί ότι η ηπαρίνη αναστέλλει την PCR. Η ανίχνευση RNA του HEV εξαρτάται από τον αριθμό σωματιδίων ιού που βρίσκονται στο δείγμα και μπορεί να επηρεαστεί από τις μεθόδους συλλογής, φύλαξης και χειρισμού του δείγματος, παράγοντες του ασθενή (π.χ. ηλικία, παρουσία συμπτωμάτων) ή/και το στάδιο της λοίμωξης και το μέγεθος της δεξαμενής. Σε σπάνιες περιπτώσεις, οι μεταλλάξεις στις περιοχές υψηλής διατήρησης ενός ιικού γονιδιώματος που καλύπτονται από την εξέταση cobas HEV, μπορεί να επηρεάσουν τη δέσμευση εκκινητών ή/και ιχνηθετών, οδηγώντας σε αποτυχία ανίχνευσης της παρουσίας ιού. Λόγω εγγενών διαφορών μεταξύ των τεχνολογιών, πριν από τη μετάβαση στην επόμενη τεχνολογική μέθοδο, συνιστάται η πραγματοποίηση μελετών συσχετισμού μεθόδων από τους χειριστές στο εργαστήριο για την αξιολόγηση των τεχνολογικών διαφορών. Οι χειριστές πρέπει να εφαρμόζουν τις δικές τους ειδικές πολιτικές/διαδικασίες. Doc Rev. 3.0 19

Αξιολόγηση απόδοσης μη κλινικών δειγμάτων Κύρια χαρακτηριστικά απόδοσης Δείγματα ζώντων δοτών Όριο ανίχνευσης (LoD) Διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ Το όριο ανίχνευσης (LoD) της εξέτασης cobas HEV για το RNA του HEV προσδιορίστηκε σύμφωνα με το διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ για τον HEV (κωδ. PEI 6329/10). Για το διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ παρασκευάστηκαν 3 ανεξάρτητες σειρές αραίωσης του ιικού προτύπου, με φυσιολογικό, αρνητικό στον ιό (HEV), πλάσμα ανθρώπινης προέλευσης σε αντιπηκτικό EDTA. Κάθε σειρά αραίωσης εξετάστηκε με χρήση 3 διαφορετικών παρτίδων των κιτ εξέτασης cobas HEV, με περίπου 63 επαναλήψεις ανά παρτίδα, για συνολικά περίπου 189 επαναλήψεις ανά συγκέντρωση. Για τον ιό HEV, χρησιμοποιήθηκε ανάλυση PROBIT στα δεδομένα τα οποία είχαν συνδυαστεί από τις σειρές αραιώσεων και τις παρτίδες αντιδραστηρίων, για την εκτίμηση του LoD, καθώς και του κατώτερου και του ανώτερου διαστήματος εμπιστοσύνης 95% (Πίνακας 11). Ο Πίνακας 12 συνοψίζει τα ποσοστά αντιδραστικότητας που παρατηρήθηκαν στις μελέτες του LoD για τον HEV. Πίνακας 11 Αποτελέσματα της ανάλυσης PROBIT σε δεδομένα LoD που συλλέχθηκαν με ιικό πρότυπο σε πλάσμα με EDTA Παράμετρος εξέτασης Μονάδες μέτρησης LoD Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% Ανώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% HEV IU/mL 18,6 15,9 22,6 Πίνακας 12 Σύνοψη ποσοστών αντιδραστικότητας για τον HEV σε πλάσμα με EDTA Συγκέντρωση RNA του HEV (IU/mL) Αριθμός αντιδρώντων Αριθμός έγκυρων επαναλήψεων % αντιδρώντων Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% (μονόπλευρο) 40 187 187 100,0% 98,4% 20 179 188 95,2% 91,8% 10 165 189 87,3% 82,6% 6 113 187 60,4% 54,2% 2 52 189 27,5% 22,2% Doc Rev. 3.0 20

Αναπαραγωγιμότητα Η αναπαραγωγιμότητα της εξέτασης cobas HEV στα συστήματα cobas 6800/8800 προσδιορίστηκε σύμφωνα με το διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ για τον HEV (κωδ. PEI 6329/10). Αυτή η μελέτη αποτελείτο από την εξέταση 3 δειγμάτων ποιοτικού ελέγχου του HEV σε συγκεντρώσεις περίπου 0,5 x, 1 x και 2 x του LoD της εξέτασης cobas HEV. Κατά την εξέταση ελέγχθηκαν τα ακόλουθα στοιχεία μεταβλητότητας: μεταβλητότητα μεταξύ ημερών, για 3 ημέρες μεταβλητότητα μεταξύ παρτίδων, με χρήση 3 διαφορετικών παρτίδων αντιδραστηρίων της εξέτασης cobas HEV μεταβλητότητα μεταξύ οργάνων, με χρήση 3 διαφορετικών συστημάτων cobas 8800 Εξετάστηκαν περίπου 21 επαναλήψεις με καθένα από τα 3 δείγματα ποιοτικού ελέγχου, για συνολικά 63 επαναλήψεις με κάθε παρτίδα αντιδραστηρίων. Όλα τα έγκυρα δεδομένα αναπαραγωγιμότητας αξιολογήθηκαν με υπολογισμό του ποσοστού των αντιδρώντων αποτελεσμάτων εξετάσεων για κάθε επίπεδο συγκέντρωσης, για όλα τα μεταβλητά στοιχεία. Τα όρια αμφίπλευρων διαστημάτων εμπιστοσύνης 95% για κάθε ποσοστό αντιδρώντων υπολογίστηκαν για καθένα από τα τρία επίπεδα HEV που εξετάστηκαν σε 3 ημέρες, με 3 παρτίδες αντιδραστηρίων και 3 συστήματα cobas 8800. Η εξέταση cobas HEV εμφανίζει αναπαραγωγιμότητα μεταξύ πολλαπλών ημερών και κατά τη χρήση με πολλαπλές παρτίδες αντιδραστηρίων και όργανα. Ο Πίνακας 13 συνοψίζει τα αποτελέσματα της μεταβλητότητας μεταξύ παρτίδων αντιδραστηρίων. Πίνακας 13 Σύνοψη αναπαραγωγιμότητας αποτελεσμάτων μεταξύ παρτίδων αντιδραστηρίων της εξέτασης cobas HEV Παράμετρος εξέτασης HEV Συγκέντρωση 2 x LoD 1 x LoD 0,5 x LoD Παρτίδα αντιδραστηρίων % αντιδρώντων (αντιδρώσες/έγκυρες επαναλήψεις) Κατώτατο όριο του διαστήματος εμπιστοσύνης 95% Ανώτατο όριο του διαστήματος εμπιστοσύνης 95% 1 100,0% (61/61) 94,1% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 88,9% (56/63) 78,4% 95,4% 2 96,8% (60/62) 88,8% 99,6% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 82,5% (52/63) 70,9% 90,9% 2 95,2% (60/63) 86,7% 99,0% 3 84,1% (53/63) 72,7% 92,1% Doc Rev. 3.0 21

Επαλήθευση γονότυπου Η απόδοση της εξέτασης cobas HEV όσον αφορά την ανίχνευση 4 γονότυπων του HEV προσδιορίστηκε με εξέταση συνολικά 16 μοναδικών κλινικών δειγμάτων και 7 καλλιεργημένων απομονωμένων στελεχών HEV με γνωστούς γονότυπους. Όλα τα δείγματα ποσοτικοποιήθηκαν με δυνατότητα ιχνηλάτησης ως προς το πρότυπο του ΠΟΥ για τον HEV. Και τα 16 κλινικά δείγματα εξετάστηκαν κατόπιν αραίωσης με φυσιολογικό, αρνητικό στον ιό (HEV) ανθρώπινο πλάσμα με EDTA, σε 5 x LoD της εξέτασης cobas HEV. Από αυτά τα δείγματα, 10 δείγματα εξετάστηκαν και χωρίς αραίωση. Και τα 7 καλλιεργημένα απομονωμένα στελέχη εξετάστηκαν κατόπιν αραίωσης με φυσιολογικό, αρνητικό στον ιό (HEV) ανθρώπινο πλάσμα με EDTA, σε 5 x LoD της εξέτασης cobas HEV. Όλα τα κλινικά δείγματα και τα καλλιεργημένα απομονωμένα στελέχη αναλύθηκαν χωρίς αραίωση ή/και σε 5 x LoD (Πίνακας 14). Πίνακας 14 Κλινικά δείγματα και καλλιεργημένα απομονωμένα στελέχη HEV Γονότυπος Κλινικά δείγματα Καλλιεργημένα απομονωμένα στελέχη % αντιδρώντων (αντιδρώντα/εξεταζόμενα δείγματα) χωρίς αραίωση % αντιδρώντων (αντιδρώντα/εξεταζόμενα δείγματα) με αραίωση σε 5 x LoD % αντιδρώντων (αντιδρώντα/εξεταζόμενα δείγματα) με αραίωση σε 5 x LoD 1 Δεν έγινε εξέταση* Δεν έγινε εξέταση* 100,0% (3/3) 2 Δεν έγινε εξέταση* Δεν έγινε εξέταση* 100,0% (1/1) 3 100,0% (10/10) 100,0% (10/10) Δεν έγινε εξέταση* 4 Δεν έγινε εξέταση* 100,0% (6/6) 100,0% (3/3) *Ανεπαρκής όγκος για εξέταση χωρίς/με αραίωση Doc Rev. 3.0 22

Αναλυτική ειδικότητα Η αναλυτική ειδικότητα της εξέτασης cobas HEV αξιολογήθηκε ως προς τη διασταυρούμενη αντιδραστικότητα με 28 μικροοργανισμούς στα 10 6 σωματίδια, αντίγραφα ή PFU/mL, συμπεριλαμβανομένων 21 απομονωμένων ιικών στελεχών, 6 βακτηριακών στελεχών και 1 απομονωμένου στελέχους ζυμομύκητα (Πίνακας 15). Οι μικροοργανισμοί προστέθηκαν σε φυσιολογικό, αρνητικό στον ιό, ανθρώπινο πλάσμα με EDTA και εξετάστηκαν με και χωρίς την προσθήκη HEV σε συγκέντρωση περίπου 3 x LoD της εξέτασης cobas HEV. Οι μικροοργανισμοί που εξετάστηκαν δεν παρουσιάζουν διασταυρούμενη αντίδραση ή παρεμβολή με την εξέταση cobas HEV. Πίνακας 15 Μικροοργανισμοί που εξετάστηκαν για αναλυτική ειδικότητα Ιοί Φλαβοϊός Βακτήρια Ζυμομύκητας Αδενοϊός 5 Ιός Δυτικού Νείλου Escherichia coli Candida albicans Κυτταρομεγαλοϊός Ιός δάγκειου πυρετού τύπου 1 Propionibacterium acnes Ιός Epstein-Barr Ιός Usutu Staphylococcus aureus Ιός απλού έρπητα τύπου 1 Ιός απλού έρπητα τύπου 2 Ιός ηπατίτιδας Α Staphylococcus epidermidis Streptococcus viridans Staphylococcus haemolyticus Ιός ηπατίτιδας Β Ιός ηπατίτιδας C Ιός ηπατίτιδας G Ιός ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV-1, ομάδα Μ) Ιός ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV-2) Ανθρώπινος Τ-λεμφοτρόπος ιός τύπου Ι Ανθρώπινος Τ-λεμφοτρόπος ιός τύπου ΙI Ιός ανθρώπινου έρπητα 6 Ιός γρίπης A Παρβοϊός B19 Ιός Chikungunya Ιός έρπητα ζωστήρα ανεμευλογιάς Doc Rev. 3.0 23

Εξετάστηκαν δείγματα πλάσματος για καθεμία παθολογική κατάσταση (Πίνακας 16) με και χωρίς την προσθήκη HEV σε συγκέντρωση περίπου 3 x LoD της εξέτασης cobas HEV. Αυτές οι παθολογικές καταστάσεις δεν εμφανίζουν διασταυρούμενη αντίδραση ή παρεμβολή με την εξέταση cobas HEV. cobas HEV Πίνακας 16 Δείγματα με παθολογική κατάσταση που εξετάστηκαν για αναλυτική ειδικότητα Παθολογική κατάσταση Αδενοϊός τύπου 5 Ιός ηπατίτιδας Β Ανθρώπινος Τ-λεμφοτρόπος ιός τύπου Ι Κυτταρομεγαλοϊός Ιός ηπατίτιδας C Ανθρώπινος Τ-λεμφοτρόπος ιός τύπου ΙI Ιός δάγκειου πυρετού Ιός απλού έρπητα τύπου 1 Παρβοϊός B19 Ιός Epstein-Barr Ιός απλού έρπητα τύπου 2 Ιός Δυτικού Νείλου Ιός ηπατίτιδας Α Ιός ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV-1) Αναλυτική ειδικότητα παρεμβαλλόμενες ουσίες Ενδογενείς παρεμβαλλόμενες ουσίες Τα δείγματα πλάσματος με μη φυσιολογικά υψηλά επίπεδα τριγλυκεριδίων (έως 33,2 g/l), αιμοσφαιρίνης (έως 4,7 g/l), μη συζευγμένης χολερυθρίνης (έως 0,28 g/l), λευκωματίνης (έως 60 g/l) και ανθρώπινου DNA (έως 0,004 g/l) εξετάστηκαν με και χωρίς την προσθήκη HEV σε συγκέντρωση περίπου 3 x LoD της εξέτασης cobas HEV. Τα δείγματα που περιείχαν αυτές τις ενδογενείς ουσίες δεν προκάλεσαν παρεμβολή στην ευαισθησία ή την ειδικότητα της εξέτασης cobas HEV. Εξωγενείς παρεμβαλλόμενες ουσίες Φυσιολογικά, αρνητικά στον ιό (HEV), δείγματα ανθρώπινου πλάσµατος με EDTA που περιείχαν μη φυσιολογικά υψηλές συγκεντρώσεις φαρμάκων (Πίνακας 17) εξετάστηκαν με και χωρίς την προσθήκη HEV σε συγκέντρωση 3 x LoD της εξέτασης cobas HEV. Οι εξωγενείς αυτές ουσίες δεν προκάλεσαν παρεμβολή στην ευαισθησία ή την ειδικότητα της εξέτασης cobas HEV. Πίνακας 17 Κλινικά δείγματα που εξετάστηκαν μαζί με φάρμακα Όνομα εξεταζόμενου φαρμάκου Ακεταμινοφαίνη Ακετυλοσαλικυλικό οξύ Ασκορβικό οξύ Ατορβαστατίνη Φλουοξετίνη Ιβουπροφαίνη Λοραταδίνη Ναδολόλη Ναπροξένη Παροξετίνη Φαινυλεφρίνη HCL Σερτραλίνη Συγκέντρωση 1324 µmol/l 3620 µmol/l 342 µmol/l 600 µg Eq/L 11,2 µmol/l 2425 µmol/l 0,78 µmol/l 3,88 µmol/l 2170 µmol/l 3,04 µmol/l 491 µmol/l 1,96 µmol/l Doc Rev. 3.0 24

Συσχέτιση Αξιολόγηση της απόδοσης της εξέτασης cobas HEV σε σύγκριση με την εξέταση Realstar HEV RT-PCR Kit 1.0 Πραγματοποιήθηκε σύγκριση της απόδοσης της εξέτασης cobas HEV και της εξέτασης Realstar HEV RT-PCR Kit 1.0 (Altona Diagnostics) με χρήση 100 μεμονομένων δειγμάτων πλάσματος θετικών για HEV στην εξέταση NAT. Εξετάστηκαν 100 θετικά δείγματα χωρίς αραίωση και 67 θετικά δείγματα με αραίωση σε αναλογία 1:6. Επιπλέον, εξετάστηκαν 100 αρνητικά για HEV δείγματα πλάσματος χωρίς αραίωση και με τις δύο μεθόδους. Τα οροαρνητικά δείγματα κατέδειξαν ειδικότητα 100%, αποδίδοντας 100 στα 100 μη αντιδρώντα αποτελέσματα και με τις δύο μεθόδους. Για τα θετικά δείγματα, τα αποτελέσματα και των δύο μεθόδων συμφωνούσαν, με βάση τον έλεγχο McNemars, ο οποίος κατέδειξε ότι η απόδοση της εξέτασης cobas HEV είναι ισοδύναμη της απόδοσης της εξέτασης Realstar HEV RT-PCR Kit 1.0 (Πίνακας 18). Πίνακας 18 Συσχέτιση θετικών δειγμάτων (χωρίς αραίωση) Μέθοδοι Αποτελέσματα για HEV Εξέταση Realstar HEV RT-PCR Kit 1.0 cobas HEV Δείγμα χωρίς αραίωση Αραίωση 1:6 Μη αντιδρώντα Μη αντιδρώντα 0 3 Αντιδρώντα Μη αντιδρώντα 0 3 Μη αντιδρώντα Αντιδρώντα 1 9 Αντιδρώντα Αντιδρώντα 99 52 Σύνολο 100 67 Έλεγχος McNemar, τιμή p (αμφίπλευρος, α=0,05) Ολική αστοχία συστήματος 1,00 0,09 Το ποσοστό ολικής αστοχίας συστήματος για την εξέταση cobas HEV προσδιορίστηκε κατόπιν εξέτασης 100 επαναλήψεων πλάσματος με EDTA στο οποίο είχε προστεθεί HEV. Αυτά τα δείγματα εξετάστηκαν σε συγκέντρωση-στόχο περίπου 3 x LoD και αναλύθηκαν σε δεξαμενές 1 δείγματος (χωρίς αραίωση). Η μελέτη πραγματοποιήθηκε με χρήση του συστήματος cobas 8800 με όργανο cobas p 680 (για μεταφορά με πιπέτα και δεξαμενοποίηση). Τα αποτελέσµατα αυτής της μελέτης κατέδειξαν ότι όλες οι επαναλήψεις ήταν αντιδρώσες για HEV, οδηγώντας σε ποσοστό ολικής αστοχίας συστήματος 0%. Το ακριβές διάστηµα εµπιστοσύνης 95% δύο άκρων ήταν 0% για το κατώτατο όριο και 3,62% για το ανώτατο όριο [0%: 3,62%]. Doc Rev. 3.0 25

Πρόσθετες πληροφορίες Βασικά χαρακτηριστικά εξέτασης Τύπος δείγματος Πλάσμα Απαιτούμενη ποσότητα δείγματος 1000 µl Επεξεργαζόμενη ποσότητα δείγματος 850 µl Διάρκεια εξέτασης Τα αποτελέσματα είναι διαθέσιμα μέσα σε λιγότερο από 3,5 ώρες μετά την τοποθέτηση του δείγματος στο σύστημα. Doc Rev. 3.0 26

Τα παρακάτω σύμβολα χρησιμοποιούνται για την επισήμανση των διαγνωστικών προϊόντων PCR της Roche. Πίνακας 19 Σύμβολα που χρησιμοποιούνται για την επισήμανση των διαγνωστικών προϊόντων PCR της Roche Βοηθητικό Λογισμικό In Vitro Διαγνωστικό Ιατροτεχνολογικό προϊόν Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Κατώτατο Όριο Αποδιδόμενου Εύρους Δελτίο Δεδομένων Γραμμωτού Κώδικα Κατασκευαστής Αριθμός Παρτίδας Αποθηκεύστε σε σκοτεινό χώρο Βιολογικοί Κίνδυνοι Περιεχόμενο επαρκές για <ν> εξετάσεις Αριθμός καταλόγου Περιορισμοί θερμοκρασίας Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης Αρχείο Ορισμού Εξέτασης Περιεχόμενο του κιτ Ανώτατο Όριο Αποδιδόμενου Εύρους Διανέμεται από Ημερομηνία Χρήση Έως Μόνο για Αξιολόγηση Απόδοσης IVD Διεθνής Κωδικός Μονάδας Εμπορίας Το προϊόν αυτό πληροί τις απαιτήσεις της Ευρωπαϊκής Οδηγίας 98/79/ΕΚ για τα in vitro διαγνωστικά ιατροτεχνολογικά βοηθήματα. Τεχνική Υποστήριξη Πελατών Η.Π.Α. 1-800-526-1247 Doc Rev. 3.0 27

Κατασκευαστής και διανομείς Πίνακας 20 Κατασκευαστής και διανομείς Κατασκευάζεται στις ΗΠΑ Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Strasse 116 68305 Mannheim, Germany Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 201, boulevard Armand-Frappier 6343 Rotkreuz, Switzerland H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Roche Diagnostics GmbH Pour toute assistance technique, Sandhofer Strasse 116 appeler le: 1-877-273-3433) 68305 Mannheim, Germany Roche Diagnostics Roche Diagnostics, SL 2, Avenue du Vercors Avda. Generalitat, 171-173 38240 Meylan, France E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Roche Diagnostica Brasil Ltda. Viale G. B. Stucchi 110 Av. Engenheiro Billings, 1729 20052 Monza, Milano, Italy Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal Εμπορικά σήματα και διπλώματα ευρεσιτεχνίας Επισκεφθείτε τη διεύθυνση http://www.roche-diagnostics.us/patents Copyright 2016 Roche Molecular Systems, Inc. Doc Rev. 3.0 28

Βιβλιογραφία 1. Kamar N, Bendall R, Legrand-Abravanel F, et al. Hepatitis E. Lancet. 2012;379:2477-2488. 2. Ahmad I, Holla RP, Jameel S. Molecular virology of hepatitis E virus. Virus Res. 2011;161:47-58. 3. Meng XJ, Purcell RH, Halbur PG, et al. A novel virus in swine is closely related to the human hepatitis E virus. Proc Natl Acad Sci USA. 1997;94:9860-9865. 4. Yugo DM, Meng XJ. Hepatitis E virus: foodborne, waterborne, and zoonotic transmission. Int J Environ Res Public Health. 2013;10:4507-4533. 5. Balayan MS, Andjaparidze AG, Savinskaya SS, et al. Evidence for a virus in non-a, non-b hepatitis transmitted via the fecal-oral route. Intervirology. 1983;20:23-31. 6. Dalton HR, Bendall R, Ijaz S, Banks M. Hepatitis E: an emerging infection in developed countries. Lancet Infect Dis. 2008;8:698-709. 7. Meng XJ. Hepatitis E as a zoonotic disease in the United States. Oral presentation by X.J. Meng at the NIH Research Workshop: Hepatitis E in the United States, Bethesda, Maryland. March 2012;7-8. http://www3.niddk.nih.gov/fund/other/hepe2012/hepatitise2012programbook.pdf 8. Mansuy JM, Péron JM, Abravanel F, et al. Hepatitis E in the south west of France in individuals who have never visited an endemic area. J Med Virol. 2004;74:419-424. 9. Dalton HR, Stableforth W, Thurairajah P, et al. Autochthonous hepatitis E in Southwest England: natural history, complications and seasonal variation, and hepatitis E virus IgG seroprevalence in blood donors, the elderly and patients with chronic liver disease. Eur J Gastroenterol Hepatol. 2008;20:784-790. 10. Wichmann O, Schimanski S, Koch J, et al. Phylogenetic and case-control study on hepatitis E virus in Germany. J Infect Dis. 2008;198:1732-1741. 11. Dalton HR, Fellows HJ, Gane EJ, et al. Hepatitis E in New Zealand. J Gastroenterol Hepatol. 2007;22:1236-1240. 12. Tsang TH, Denison EK, Williams HV, Venczel LV, Ginsberg MM, Vugia DJ. Acute hepatitis E infection acquired in California. Clin Infect Dis. 2000;30:618-619. 13. Teo CG. Much meat, much malady: changing perceptions of the epidemiology of hepatitis E. Clin Microbiol Infect. 2010;16:24-32. 14. Colson P, Borentain P, Queyriaux B, et al. Pig liver sausage as a source of hepatitis E virus transmission to humans. J Infect Dis. 2010;202:825-834. 15. Matsuda H, Okada K, Takahashi K, Mishoro S. Severe hepatitis E virus infection after ingestion of uncooked liver from a wild boar. J Infect Dis. 2003;188:944. 16. Tei S, Kitajima N, Takahashi K, Mishoro S. Zoonotic transmission of hepatitis E virus from deer to human beings. Lancet 2003;362:371-373. 17. Gotanda Y, Iwata A, Ohnuma H, et al. Ongoing subclinical infection of hepatitis E virus among blood donors with an elevated alanine aminotransferase level in Japan. J Med Virol. 2007;79:734-742. 18. Mitsui T, Tsukamoto Y, Suzuki S, et al. Serological and molecular studies on subclinical hepatitis E virus infection using periodic serum samples obtained from healthy individuals. J Med Virol 2005;76:526-533. 19. Nelson KE, Kmush B, Labrique AB. The epidemiology of hepatitis E virus infections in developed countries and among immunocompromised patients. Expert Rev Anti Infect Ther. 2011;9:1133-1148. 20. Navaneethan U, Al Mohajer M, Shata MT. Hepatitis E and pregnancy: understanding the pathogenesis. Liver Int. 2008;28:1190-1199. Doc Rev. 3.0 29