ΑΝΟΣΟΒΙΟΧΗΜΙΚΟΣ ΑΝΑΛΥΤΗΣ

Transcript

1 4 ο Απογευματινό Μάθημα ΕΕΚΧ-ΚΒ 15 Μαΐου 2018 Γιάννης Βαμβουκάκης Βιολόγος Product Specialist, LERIVA DIAGNOSTICS

2 Αναλυτικό σύστημα που χρησιμοποιεί μεθοδολογία ανοσοπροσδιορισμού για τη μέτρηση ουσιών που δεν μπορούν να ανιχνευθούν με κοινές χημικές μεθόδους Ο ανοσοπροσδιορισμός (Immunoassay) είναι ετερογενής μεθοδολογία η οποία χρησιμοποιεί αντισώματα για την εκλεκτική δέσμευση των προς ανάλυση ουσιών Η ποσοτικοποίηση της προς ανάλυση ουσίας γίνεται με χημειοφωταύγεια ως μεθοδολογία ανίχνευσης

3 ΧΗΜΕΙΟΦΩΤΑΥΓΕΙΑ Διέγερση ουσίας για την παραγωγή φωτός Η διέγερση μπορεί να προκληθεί από: Ένζυμο (Enzyme chemiluminescence immunoassays) Ηλεκτρικό πεδίο (Electro-chemiluminescence immunoassay) Η ποσότητα του παραγόμενου φωτός είναι ανάλογη της προς μέτρηση ουσίας στο δείγμα. Χαμηλές παρεμβολές, Ηλεκτρονική ενίσχυση σήματος

4 ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ Διαδικασία μέτρησης Διανομή δείγματος και αντιδραστηρίων επώαση Πλύσιμο Προσθήκη υποστρώματος για την παραγωγή φωτός Επώαση για την ενίσχυση του σήματος Ανίχνευση σήματος 36.5 C 36.5 C

5 ΣΤΕΡΕΑ ΦΑΣΗ Οι ανοσοπροσδιορισμοί απαιτούν διαχωρισμό δεσμευμένων με μη δεσμευμένων ουσιών (σύμπλοκο αντιγόνου-αντισώματος από περίσσεια αντιγόνου ή αντισώματος) Επιτυγχάνεται με διαδικασία πλύσης η οποία απαιτεί την προσκόλληση του σύμπλοκου αντιγόνου-αντισώματος σε σταθερή φάση ώστε να αποφευχθεί η έκπλυσή του. Πλύσιμο Οι ανοσοβιοχημικοί αναλυτές χρησιμοποιούν παραμαγνητικά σφαιρίδια ως στερεά φάση ώστε: Η έκπλυση του σύμπλοκου αντιγόνου-αντισώματος αποφεύγεται με την εφαρμογή μαγνητικού πεδίου Μεγαλύτερη συγκέντρωση αντιδρώντων ουσιών

6 ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ Κατά την διαδικασία μέτρησης δείγματος, επικαλυμμένα με αντισώματα παραμαγνητικά σφαιρίδια αντιδρούν με το δείγμα και ειδικά για την εξέταση αντιδραστήρια με αποτέλεσμα το σχηματισμό ανοσοσυμπλέγματος. Μαγνητικό πεδίο ακινητοποιεί τα ανοσοσυμπλέγματα ενώ τα μη συνδεδεμένα συστατικά απομακρύνονται με έκπλυση. Το υπόστρωμα χημειοφωταύγειας αντιδρά με το ένζυμο που υπάρχει συνδεδεμένο στα ανοσοσυμπλέγματα και απελευθερώνει φως. Το παραγόμενο φως μετράται και μετατρέπεται σε συγκέντρωση αναλυόμενης ουσίας

7 ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ

8 ΤΕΧΝΙΚΕΣ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΥ

9 ΕΦΑΡΜΟΓΕΣ ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΩΝ Ορμόνες Θυρεοειδούς Ορμόνες Αναπαραγωγής Καρκινικοί Δείκτες Ιολογικός Έλεγχος Λοιμώδη Προγεννητικός Έλεγχος Καρδιακοί δείκτες «Ειδικοί Δείκτες» TSH, ft3, ft4, TT3, TT4, Tg, Anti-TG, AntiTPO FSH, LH, Προλακτίνη, Προγεστερόνη, Τεστοστερόνη, βhcg AFP, CEA, PSA, fpsa, CA 15-3, CA 19-9, CA 125 Toxo, Rubella, CMV HAV, HBV, HCV, HIV PAPP-A, AMH, INHIBIN Τροπονίνη, CK-MB, Μυοσφαιρίνη Vit D, Κορτιζόλη, Ινσουλίνη, EPO, Φερριτίνη, Vit B12 Περισσότεροι από 60 προσδιορισμοί είναι διαθέσιμοι

10 ΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ ΑΝΟΣΟΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΩΝ Μεγαλύτερη ευαισθησία Χαμηλές παρεμβολές Μεγάλο εύρος μέτρησης Μικρή ποσότητα δείγματος Μη τοξικά αντιδραστήρια Ταχύτερα αποτελέσματα Πλήρης αυτοματοποίηση Ανοσοβιοχημικός Αναλυτής

11 Αυτοματοποιεί το σύνολο της αναλυτικής διαδικασίας Όλα τα βήματα πραγματοποιούνται από τον αναλυτή Διανομή δείγματος Διανομή αντιδραστηρίων Έκπλυση Αποτέλεσμα

12 Φόρτωση δειγμάτων Φόρτωση αντιδραστηρίων Μεταφορά δείγματος και αντιδραστηρίου σε κυβέτα αντίδρασης Επώαση Έκπλυση Επώαση και ανάγνωση Απομάκρυνση κυβέτας στα απόβλητα

13 Αυτοματοποιεί το σύνολο της αναλυτικής διαδικασίας Όλα τα βήματα πραγματοποιούνται από τον αναλυτή Αντιδραστήρια και αναλώσιμα διατηρούνται στον αναλυτή Αυτόματη αξιολόγηση ποιοτικού ελέγχου Αυτόματη επαναμέτρηση δειγμάτων Ανακλαστικές εξετάσεις (Reflex tests) Αξιολόγηση ποιότητας και ποσότητας δείγματος

14 Αντιδραστήρια και αναλώσιμα διατηρούνται στον αναλυτή Ψυγείο αντιδραστηρίων, αποθήκευση για μεγάλο χρονικό διάστημα Πολλαπλά αντιδραστήρια στον αναλυτή Μέτρηση πολλαπλών εξετάσεων ανά δείγμα (Random Access) Ενσωματωμένοι κανόνες Westgard Διαγράμματα Levey-Jennings Παραγωγή στατιστικών δεδομένων (, SD, CV)

15 Αποτελέσματα εκτός της γραμμικότητας της εξέτασης επαναμετρώνται αυτόματα με αραίωση του δείγματος από τον αναλυτή Το αποτέλεσμα μιας εξέτασης μπορεί να ενεργοποιήσει την αυτόματη μέτρηση άλλης εξέτασης. Πχ PSA 6 ng/ml ενεργοποιεί μέτρηση fpsa Ο αναλυτής ανιχνεύει την παρουσία στο δείγμα θρόμβου

16 Καθημερινή χρήση Προετοιμασία αναλυτή Βαθμονόμηση εξετάσεων Ποιοτικός έλεγχος εξετάσεων Μέτρηση δειγμάτων Έλεγχος αποτελεσμάτων

17 Προετοιμασία αναλυτή Προετοιμασία αναλωσίμων, πλύσιμο ρυγχών, έλεγχος μηχανικών μερών, συμπλήρωση αντιδραστηρίων Βαθμονόμηση εξετάσεων Δημιουργία πρότυπης καμπύλης ή επιβεβαίωση αυτής Βαθμονόμηση απαιτείται περίπου κάθε μήνα και σε κάθε νέα παρτίδα Ποιοτικός έλεγχος εξετάσεων Προτυποποιημένα διαλύματα γνωστής συγκέντρωσης ουσιών Συχνότητα μέτρησης, καθημερινά σε δύο επίπεδα Επιβεβαίωση καλής λειτουργίας αναλυτή

18 Μέτρηση δειγμάτων Φυγοκεντρημένα, χωρίς πώμα, πρωτογενή σωληνάρια Τοποθέτηση δειγμάτων σε ειδικά στατό του αναλυτή Επικοινωνία μέσω Barcode με LIS Συνεχής φόρτωση δειγμάτων Έλεγχος αποτελεσμάτων Επισήμανση παθολογικών αποτελεσμάτων Αυτόματες επαναμετρήσεις Αυτόματη αποστολή αποτελεσμάτων

19 Τεχνικά χαρακτηριστικά Παραγωγικότητα Έως 440 εξετάσεις ανά ώρα Ευκολία λειτουργίας Συνεχής φόρτωση αντιδραστηρίων και δειγμάτων Ευελιξία εκτέλεσης εξετάσεων Έως 50 εξετάσεις ταυτόχρονα Απλότητα χειρισμού Ανάγνωση Barcode για δείγματα και αντιδραστήρια

20 Προσδιορισμό «ανοσολογικών» εξετάσεων Συνεχούς ετοιμότητας και λειτουργίας Πλήρως αυτοματοποιημένος Απλός στη χρήση και λειτουργία Ελαχιστοποίηση χειριστικών σφαλμάτων Δυνατότητα σύνδεσης με συστήματα αυτοματοποίησης

21 Ευχαριστώ για την προσοχή σας