2015/12/07 A93A00282MEL A11A01670 60 ml 15 ml 400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό του ουρικού οξέος σε ορό, πλάσμα και ούρα με χρωματομετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: UA (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) 4.xx Ούρα: UA-U (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) 3.xx Προοριζόμενη χρήση (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό του ουρικού οξέος σε ανθρώπινο ορό, πλάσμα και ούρα με ενζυματικό χρωματομετρικό προσδιορισμό του ουρικού οξέος παρουσία υπεροξειδάσης και ουρικάσης (μέθοδος Trinder). Οι μετρήσεις που λαμβάνονται από τη συσκευή αυτή χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση και τη θεραπεία πολλών νεφρικών και μεταβολικών διαταραχών, όπως είναι η νεφρική ανεπάρκεια, η ουρική νόσος, η λευχαιμία, η ψωρίαση, η ασιτία ή άλλες διαταραχές που προκαλούν καχεξία, καθώς και σε ασθενείς που λαμβάνουν κυτταροτοξικά φάρμακα. Κλινικό ενδιαφέρον (1, 2) Το ουρικό οξύ είναι το τελικό προϊόν του ενδογενούς και εξωγενούς (από τις τροφές) καταβολισμού των πουρινών (αδενοσίνη και γουανιδίνη). Ο μετασχηματισμός αυτός γίνεται κατά βάσιν στο συκώτι. Το 75% του ουρικού οξέος αποβάλλεται από τους νεφρούς και το υπόλοιπο απελευθερώνεται στην γαστρεντερική οδό όπου διασπάται από την εντερική χλωρίδα. Το ουρικό οξύ έχει μικρή διαλυτότητα στο νερό. Όταν τα επίπεδα συγκέντρωσης είναι παθολογικά υψηλά μπορούν να σχηματιστούν μικροκρύσταλλοι στα ούρα. Μικροκρύσταλλοι μπορούν να σχηματιστούν και στο πλάσμα ενώ εναποτίθενται κατά προτίμηση στις αρθρώσεις προκαλώντας επώδυνες φλεγμονές (γνωστή παλαιότερα ως ποδάγρα). Η αύξηση του ουρικού οξέος στον ορό μπορεί να οφείλεται σε διάφορες αιτίες όπως: αύξηση της παραγωγής πουρίνης, διαταραχές του μεταβολισμού (σύνδρομο Lesch-Nyhan για παράδειγμα), διατροφικές διαταραχές, αύξηση εναλλαγής νουκλεϊνικού οξέος, ιδιαίτερα κατά τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό όγκων, λευχαιμία, ψωρίαση, κυτταροστατική αγωγή, νεφρικές διαταραχές... Έτσι, ο προσδιορισμός του ουρικού οξέος χρησιμοποιείται στη διάγνωση όλων αυτών των παθολογικών καταστάσεων και γενικότερα, στην παρακολούθηση νεφρικών βλαβών και διαταραχών του μεταβολισμού όπως η νεφρική ανεπάρκεια, η ουρική νόσος. Η υποουριχαιμία είναι περισσότερο ασυνήθης. Η μείωση αυτή μπορεί να παρατηρηθεί σε διάφορες περιπτώσεις όπως σε περίπτωση μείωσης της νεφρικής απέκκρισης (σύνδρομο Fanconi), της νόσου Hodgkin για παράδειγμα. Μέθοδος (3) Ενζυματικός προσδιορισμός του ουρικού οξέος με χρήση των ακόλουθων αντιδράσεων (μέθοδος Trinder): Ουρικάση Ουρικό οξύ + 2H 2 O + O 2 Αλλαντοΐνη + CO2 + H 2 O 2 Υπεροξειδάση 2H 2 O 2 + 4AAP + EHSPT Κινονιμίνη Mg ++ (EHSPT = N-αιθυλ-N-(2-υδροξυ-3- σουλφοπροπυλεστέρας) n-τολουϊδίνη, 4 AAP = 4- αμινοαντιπυρίνη) 1 / 6
Αντιδραστήρια To είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο 1: Ρυθμιστικό διάλυμα 125 mmol/l φωσφορικών, ph 7,00 EHSPT Ασκορβική οξειδάση Βόεια λευκωματίνη 0,2% 1,38 mmol/l 1100 U/L Αζίδιο του νατρίου < 0,1% Αντιδραστήριο 2: 4-αμινοαντιπυρίνη Ουρικάση Υπεροξειδάση Σιδηροκυανιούχο άλας 1,8 mmol/l 700 U/L Βόεια λευκωματίνη 0,2% 7500 U/L 250 Αζίδιο του νατρίου < 0,1% To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του 400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Multical, Κωδ. A11A01652 (δεν 10 x 3 ml (λυοφιλιωμένο) Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: N Control, κωδ. A11A01653 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) P Control, κωδ. A11A01654 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 (δεν 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: 400 Βαθμονομητής: Multical, κωδ. A11A01652 Υλικά ελέγχου: N Control, κωδ. A11A01653 και P Control, κωδ. A11A01654 Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα (4, 5) Ορός. Πλάσμα σε ηπαρίνη λιθίου. Φρέσκα ούρα που έχουν υποστεί φυγοκέντριση. Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα ορού/πλάσματος (4): 3 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου. Σταθερότητα ούρων (5): 4 ημέρες στους 20-25 C εάν ph > 8,0. Εύρος τιμών αναφοράς (6, 7) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Ορός, πλάσμα (6): 2 / 6
Γυναίκες: 26-60 mg/l 2,6-6 155-357 Άντρες: 35-72 mg/l 3,5-7,2 208-428 Ούρα (μέση διατροφή) (7): 250-750 mg/24h 1480-4430 µmol/24h Φύλαξη και σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε κασέτες που δεν έχουν ανοιχτεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα στους 2-8 C. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στον 400". Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0,1% αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με μόλυβδο και χαλκό σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλων. Γενικές προφυλάξεις Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Το αντιδραστήριο αυτό ταξινομείται ως μη επικίνδυνο σύμφωνα με τον κανονισμό αρ.1272/2008 (EC). Προειδοποίηση: Το παρόν αντιδραστήριο λαμβάνεται από ουσίες ζωικής προέλευσης. Συνεπώς, πρέπει να αντιμετωπίζεται ως δυνητικά μολυσματικό και να χρησιμοποιείται με την ανάλογη προσοχή σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική (8). Αποφύγετε την κατάποση. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και τις βλεννογόνους. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον 400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω ελήφθησαν από τον αναλυτή 400. Ορός, πλάσμα (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) Αριθμός αναλύσεων: 220 αναλύσεις a Αν ο απαιτούμενος αριθμός εξετάσεων είναι μικρός και ο χρήστης του 400 επιθυμεί να εξαντλήσει τη μέγιστη διάρκεια σταθερότητας της κασέτας μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή, η HORIBA Medical συνιστά να χρησιμοποιείται το αναλώσιμο εξάρτημα XEC232 (μεμβράνη κιτ) για να επιτευχθεί ο αριθμός των εξετάσεων που αναφέρονται σε αυτό το φυλλάδιο. Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του 400 παραμένει σταθερή για 41 ημέρες. Όγκος δείγματος: 5,0 µl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο Valtec (9) και ισούται με 11 (0,19 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (9). 274,7 4,62 0,45 692,1 11,63 0,34 a Τροποποίηση: αλλαγή κωδικού αναφοράς μεμβράνης κιτ. 3 / 6
Δείγμα 1 150,8 2,53 1,24 Δείγμα 2 272,8 4,58 0,91 Δείγμα 3 428,2 7,19 1,02 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (χαμηλής και υψηλής συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (10). 276,0 4,64 2,81 698,4 11,73 1,39 Δείγμα 1 277,7 4,67 2,64 Δείγμα 2 401,0 6,74 2,51 Εύρος μέτρησης: b Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 11 έως 1487 (0,19 έως 25,0 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 4461 (75,0 ). Συσχέτιση: 132 δείγματα ασθενών (ορός και πλάσμα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (11). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 11 έως 1404 (0,18 έως 23,59 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (12) είναι: Y = 0,95 X + 5,36 () Y = 0,95 X + 0,09 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,996. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 (500 ). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 7 mmol/l (612,5 ). Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 610 (36 mg/l). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 513 (30 ). N-ακετυλοκυστεΐνη Οι ασθενείς που έλαβαν θεραπεία (NAC): με N-ακετυλοκυστεΐνη (NAC) λόγω υπερδοσολογίας παρακεταμόλης μπορεί να εμφανίσουν ψευδώς χαμηλό αποτέλεσμα. Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (13, 14). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 4.xx Ούρα (δεν χρησιμοποιείται στις ΗΠΑ) Αριθμός αναλύσεων: 220 αναλύσεις a Αν ο απαιτούμενος αριθμός εξετάσεων είναι μικρός και ο χρήστης του 400 επιθυμεί να εξαντλήσει τη μέγιστη διάρκεια σταθερότητας της κασέτας μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή, η HORIBA Medical συνιστά να χρησιμοποιείται το αναλώσιμο εξάρτημα XEC232 (μεμβράνη κιτ) για να επιτευχθεί ο αριθμός των εξετάσεων που αναφέρονται σε αυτό το φυλλάδιο. Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του 400 παραμένει σταθερή για 41 ημέρες. b Τροποποίηση: τροποποίηση στο εύρος μέτρησης. a Τροποποίηση: αλλαγή κωδικού αναφοράς μεμβράνης κιτ. 4 / 6
Όγκος δείγματος: 5,0 µl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (15) και ισούται με 113 (1,9 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύθηκαν 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (9). 712 11,96 2,45 484 8,13 3,01 Δείγμα 1 486 8,16 3,26 Δείγμα 2 1520 25,53 2,19 Δείγμα 3 3662 61,52 0,78 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (χαμηλής και υψηλής συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (10). 724 12,17 4,13 530 8,91 4,36 Δείγμα 1 1565 26,29 2,84 Δείγμα 2 3806 63,94 2,41 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 113 έως 14875 (1,90 έως 249,90 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 45000 (756 ). Συσχέτιση: 113 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (11). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 314 έως 14808 (5,3 έως 248,8 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (12) είναι: Y = 1,01 X + 55,27 () Y = 1,01 X + 0,99 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9949. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 (500 ). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 576 (33,7 ). Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 350 (6,16 ). Ειδικό βάρος: Σε εύρος από 1,005 έως 1,035, δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση. Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (13, 14). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 3.xx Συντελεστής μετατροπής: x 0,168 = mg/l x 0,0168 = Βιβλιογραφία 1. First M.R. Renal function. Clinical Chemistry: Theory, Analysis, Correlation. 4 ème Ed. Kaplan LA, Pesce AJ, Kazmierczack SC. (Mosby Inc. eds St Louis USA), (2003): 477-appendice. 2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 3 rd Ed, (W.B. Saunders eds. Philadelphia USA), (1995): 624. 5 / 6
3. Fossati P, Prencipe L and Berti G. Use of 3,5- dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonic acid 4- aminophenazone chromogenic system in direct enzymatic assay of uric acid in serum and urine. Clin.Chem. (1980) 26: 227. 4. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellshaft (1998): 208-214. 5. Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the patient to the laboratory. 1 st ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY- VCH, Darmstadt, Germany) (2001): 52-53. 6. Tietz N.W. Clinical guide to laboratory tests, 3 rd Ed, (WB. Saunders eds. Philadelphia USA) (1995): 268. 7. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE, Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 ème Ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds., St louis, USA) (2006): 2290. 8. Council Directive (2000/54/EC). Official Journal of the European Communities. No. L262 from October 17, 2000: 21-45. 9. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 10. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 11. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 12. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 13. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 14. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 15. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 6 / 6