2014/10/13 A93A01300BEL A11A01665 29.5 ml Pentra C400 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό του φωσφόρου σε ορό, πλάσμα και ούρα με χρωματομετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Ορός, πλάσμα: Phos Ούρα: Phos-U Προοριζόμενη χρήση Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό του φωσφόρου σε ανθρώπινο ορό, πλάσμα και ούρα βάσει μεθόδου UV με χρήση φωσφομολυβδαινικού συμπλόκου. Η μέτρηση του φωσφόρου (ανόργανου) χρησιμοποιείται για τη διάγνωση και τη θεραπεία διαφόρων διαταραχών, όπως είναι, μεταξύ άλλων, οι παθήσεις των παραθυρεοειδών αδένων και των νεφρών, καθώς και η ανισορροπία της βιταμίνης D. Κλινικό ενδιαφέρον (1) Ο φώσφορος που περιέχεται στο ανθρώπινο σώμα (80% στα οστά) υπάρχει μόνο με τη μορφή ανόργανων φωσφορικών αλάτων. Τα απαραίτητα επίπεδα φωσφορικών αλάτων παρέχονται μέσω της διατροφής. Τα φωσφορικά άλατα διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην αποθήκευση και κατανομή της ενέργειας που απαιτείται για το μεταβολισμό των κυττάρων. Τα φωσφορικά ιόντα που εντοπίζονται κυρίως στα εξωκυτταρικά υγρά, διαθέτουν επίσης και ιδιότητες ρυθμιστικού διαλύματος. Αύξηση των φωσφορικών ιόντων μπορεί να παρατηρηθεί σε περίπτωση υπερβιταμίνωσης D, υποπαραθυρεοειδισμού και νεφρικής ανεπάρκειας. Μείωση των τιμών του φωσφόρου ορού παρατηρείται σε περιπτώσεις έλλειψης βιταμίνης D και υπερπαραθυρεοειδισμού. Η πλασματική συγκέντρωση του μεταλλικού φωσφόρου εξαρτάται από τη δίαιτα και την εντερική απορρόφηση, τη νεφρική εξουδετέρωση, τη σωληναριακή επαναπορρόφηση και τον οστικό μεταβολισμό. Ενώ οι μετρήσεις των επιπέδων ανόργανου φωσφόρου συνήθως πραγματοποιούνται σε δείγματα αίματος, για την παρακολούθηση της αποβολής του φωσφόρου από τους νεφρούς μπορούν να χρησιμοποιηθούν και οι μετρήσεις του φωσφόρου στα ούρα σε διάφορες χρονικές στιγμές. Όλα αυτά τα φαινόμενα επηρεάζονται από τις ρυθμιστικές ορμόνες και τη συγκέντρωση ασβεστίου (παραθορμόνη PTH, καλσιτονίνη και βιταμίνη D). Κατά συνέπεια, η ρύθμιση του πλασματικού φωσφορικού άλατος σχετίζεται στενά με αυτήν του ασβεστίου. Οι διάφορες μορφές της υπερφωσφαταιμίας (PTH που διεγείρει τους νεφρούς για την εξουδετέρωση φωσφορικού άλατος και την κατακράτηση ασβεστίου), που οφείλονται σε δυσλειτουργία των προαναφερόμενων μηχανισμών, είναι συχνά αντίστροφες με αυτές της υπερασβεσταιμίας. Μέθοδος (2) Μέθοδος UV με χρήση φωσφομολυβδαινικού. Ο φώσφορος αντιδρά με το μολυβδαινικό αμμώνιο σε όξινο μέσο και σχηματίζει ένα κίτρινο φωσφομολυβδαινικό σύμπλοκο: Φώσφορος Μολυβδαινικό αμμώνιο+θειϊκό οξύ > Φωσφομολυβδαινικό σύμπλοκο Η ένταση της απόχρωσης είναι ανάλογη με τη συγκέντρωση του ανόργανου φωσφόρου στο δείγμα. Αντιδραστήρια Το είναι έτοιμο για χρήση. 1 / 5
Αντιδραστήριο: Θειϊκό οξύ Μολυβδαινικό αμμώνιο 210 650 µmol/l To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. Χειρισμός 1. Αφαιρέστε το καπάκι της κασέτας. 2. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 3. Τοποθετήστε την κασέτα στο ψυγείο αντιδραστηρίων του Pentra C400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Multical, Κωδ. A11A01652 (δεν 10 x 3 ml (λυοφιλιωμένο) Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: N Control, κωδ. A11A01653 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) P Control, κωδ. A11A01654 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 (δεν 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: Pentra C400 Βαθμονομητής: Multical, κωδ. A11A01652 Υλικά ελέγχου: N Control, κωδ. A11A01653 και P Control, κωδ. A11A01654 Urine Control L/H, κωδ. A11A01674 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα Μη αιμολυμένος ορός. Πλάσμα σε ηπαρίνη λιθίου. Φρέσκα ούρα που έχουν υποστεί φυγοκέντριση. Τα ούρα 24 ώρου πρέπει να συλλέγονται με HCl 6N Σταθερότητα: Ορός, πλάσμα (3): 1 εβδομάδα στους 2-8 C Ούρα (4, 5): 2 ημέρες στους 20-25 C εάν ph < 5,0 Εύρος τιμών αναφοράς Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Ορός, πλάσμα (1): Ούρα (6): Φύλαξη και σταθερότητα 27-45 mg/l 2,7-4,5 0,87-1,45 Ενήλικες: 12,9-42,0 mmol/24 h (0,4-1,3 g/24h) Τα αντιδραστήρια, σε κασέτες που δεν έχουν ανοιχτεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα στους 2-8 C. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο "Απόδοση στον Pentra C400". Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. 2 / 5
Γενικές προφυλάξεις a Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Προειδοποίηση: το προϊόν αυτό προκαλεί ερεθισμό λόγω παρουσίας θειικού οξέος. Xi: Ερεθιστικό. R36/38: Ερεθίζει τα μάτια και το δέρμα. S26: Σε περίπτωση επαφής με τα μάτια, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονο νερό και ζητήστε ιατρική συμβουλή. S37/39: Φοράτε κατάλληλα γάντια και προστασία για τα μάτια/πρόσωπο. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον Pentra C400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω είναι αντιπροσωπευτικά της απόδοσης στα συστήματα της HORIBA Medical. Ορός, πλάσμα Αριθμός εξετάσεων: 100 εξετάσεις b Αν ο απαιτούμενος αριθμός εξετάσεων είναι μικρός και ο χρήστης του Pentra C400 επιθυμεί να εξαντλήσει τη μέγιστη διάρκεια σταθερότητας της κασέτας μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή, η HORIBA Medical συνιστά να χρησιμοποιείται το αναλώσιμο εξάρτημα XEC083 (μεμβράνη κιτ) για να επιτευχθεί ο αριθμός των εξετάσεων που αναφέρονται σε αυτό το φυλλάδιο. Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400 παραμένει σταθερή για 70 ημέρες. Όγκος δείγματος: 2,8 µl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο Valtec (7) και ισούται με 0,09 (0,28 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 υλικά ελέγχου αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (7). 1,32 4,08 1,25 2,04 6,34 0,77 Δείγμα 1 0,77 2,39 2,48 Δείγμα 2 1,12 3,48 1,61 Δείγμα 3 2,96 9,19 1,38 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (χαμηλής και υψηλής συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (8). 1,29 4,01 2,50 2,05 6,35 1,82 Δείγμα 1 0,81 2,50 3,56 Δείγμα 2 3,69 11,44 1,38 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 0,10 έως 7,77 (0,30 έως 24,08 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 31,20 (96,72 ). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 7,80 (24,18 ), σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (9). Συσχέτιση: 132 δείγματα ασθενών (ορός) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (10). Οι τιμές a Τροποποίηση: τροποποίηση γενικών προφυλάξεων. b Τροποποίηση: αλλαγή κωδικού αναφοράς μεμβράνης κιτ. 3 / 5
κυμάνθηκαν από 0,10 έως 7,77 (0,30 έως 24,08 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (11) είναι: Y = 1,04 X + 0,05 () Y = 1,04 X + 0,15 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,998. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 72,5 µmol/l (125 ). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 3 (262,5 ). Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 102 µmol/l (6 ). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 385 µmol/l (22,5 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (12, 13). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 34 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: Ούρα Αριθμός εξετάσεων: 100 εξετάσεις b Αν ο απαιτούμενος αριθμός εξετάσεων είναι μικρός και ο χρήστης του Pentra C400 επιθυμεί να εξαντλήσει τη μέγιστη διάρκεια σταθερότητας της κασέτας μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή, η HORIBA Medical συνιστά να χρησιμοποιείται το αναλώσιμο εξάρτημα XEC083 (μεμβράνη κιτ) για να επιτευχθεί ο αριθμός των εξετάσεων που αναφέρονται σε αυτό το φυλλάδιο. Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C400 παραμένει σταθερή για 70 ημέρες. Όγκος δείγματος: 5 µl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο Valtec (7) και ισούται με 0,41 (1,28 ). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 5 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύθηκαν 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (7). 6,1 19,0 1,67 14,3 44,2 0,80 Δείγμα 1 2,1 6,6 3,87 Δείγμα 2 12,8 39,8 1,21 Δείγμα 3 19,6 60,9 0,94 Δείγμα 4 47,0 145,6 1,78 Δείγμα 5 53,4 165,4 0,79 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 2 δείγματα (χαμηλής και υψηλής συγκέντρωσης) και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (8). 6,3 19,5 2,82 14,8 45,9 2,06 Δείγμα 1 2,3 7,1 5,95 Δείγμα 2 29,8 92,4 1,97 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 0,41 έως 64 (1,28 έως 198,4 ), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 128,00 (396,80 ). b Τροποποίηση: αλλαγή κωδικού αναφοράς μεμβράνης κιτ. 4 / 5
Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 64 (198,4 ), σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (9). Συσχέτιση: 119 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (10). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 0,71 έως 63,48 (2,2 έως 196,8 ). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (11) είναι: Y = 1,07 X - 0,35 () Y = 1,07 X - 1,10 () με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9892. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 213 µmol/l (367 ). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 650 µmol/l (38 ). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (12, 13). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 34 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 2. Daly JA, Ertingshausen G. Direct method for determining inorganic phosphorus in serum with the Centrifichem. Clin. Chem. (1972) 18: 263. 3. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: THBooks Verlagsgesellshaft (1998): 241-247. 4. Guder WG, Zawta B. The quality of diagnostics samples. Samples: from the patient to the laboratory. 1 st ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B, (WHILEY- VCH, Darmstadt, Germany), (2001): 52-53. 5. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Urinalysis and Collection, Transportation, and Preservation of Urine Specimens; Approved Guideline-Second Edition; NCCLS document GP16- A2 (2001). 6. Roberts WL, McMillin GA, Burtis CA, Bruns DE. Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4 th ed., Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA), (2006): 2290. 7. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 8. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 9. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 10. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2 (2002) 22 (19). 11. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 12. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 13. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. Συντελεστής μετατροπής: x 31 = mg/l x 3,1 = Βιβλιογραφία 1. Endres DB, Rude RK. Mineral and bone metabolism. Tietz Fundamentals of Clinical Chemestry, Burtis CA and Ashwood ER (WB. Saunders eds. Philadelphia USA), (2001): 795. 5 / 5