ñþóç óå öïñýá áíôéäñáóôçñßùí A11A01907 22 ml 8 ml ABX Pentra Προοριζόμενη χρήση Äéáãíùóôéêü áíôéäñáóôþñéï ãéá ôïí in-vitro ðñïóäéïñéóìü ôçò êñåáôéíßíçò óå ïñü, ðëüóìá êáé ïýñá ìå ñùìáôïìåôñßá. 2009/09/15 A93A01230A EL A11A01907 22 ml Form-0846 Rev. 3 Κλινικό ενδιαφέρον (1,2) Η κρεατινίνη, που σχηματίζεται στους μύες, είναι ένα προϊόν μεταβολισμού της φωσφορικής κρεατίνης, η οποία αποτελεί σημαντική αποθηκευτική μορφή φωσφορικών δεσμών υψηλής ενέργειας. Τα επίπεδα της κρεατινίνης στο αίμα είναι αρκετά σταθερά (αντίθετα από την ουραιμία) και εξαρτώνται κυρίως από τη μυϊκή μάζα. Δεν επηρεάζονται ιδιαίτερα από τη διατροφή, την ηλικία, το φύλο ή την άσκηση. Η κρεατινίνη καθαίρεται από το πλάσμα με σπειραματική διήθηση και στη συνέχεια απεκκρίνεται στα ούρα. Ο προσδιορισμός της κρεατινίνης στα ούρα επιτρέπει τον υπολογισμό της κάθαρσης που είναι ανεξάρτητη παράμετρος διούρησης και πρωτεϊνικής συμμετοχής. Η συγκέντρωση της κρεατινίνης στο αίμα αποτελεί εξαιρετικό δείκτη της νεφρικής λειτουργίας, ωστόσο, τα επίπεδα της κρεατινίνης ορού δεν αυξάνονται εάν δεν έχει μειωθεί η νεφρική λειτουργία κατά 50% τουλάχιστον. Μέθοδος Αυτή η ενζυματική μέθοδος για τη μέτρηση της κρεατινίνης υιοθετεί μια προσέγγιση πολλαπλών βημάτων με φωτομετρική αντίδραση τελικού σημείου. Το ένζυμο αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης χρησιμοποιείται για τη μετατροπή της κρεατινίνης σε κρεατίνη. Η κρεατίνη καταλύεται σε σαρκοσίνη και ουρία από το ένζυμο αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης. Τα περαιτέρω βήματα της ενζυματικής μεθόδου, με την οξειδάση και υπεροξειδάση της σαρκοσίνης, παράγουν χρωμογόνο ορατό στα 545 nm. Κρεατινίνη + H 2 O Κρεατίνη + H 2 O Σαρκοσίνη + H 2 O + O 2 2 H 2 O 2 + 4-Αμινοαντιπυρίνη + ESPMT Αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης Αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης Οξειδάση σαρκοσίνης Υπεροξειδάση ESPMT: N-αιθυλ-N-σουλφοπροπυλ-m-τολουιδίνη Κρεατίνη Σαρκοσίνη + Ουρία Γλυκίνη + HCHO + H 2 O 2 Quinoneimine Dye + 4 H 2 O 8 ml HORIBA ABX SAS BP 7290 34184 Montpellier- cedex 4 - France Αντιδραστήρια Το ABX Pentra είναι έτοιμο για χρήση. Αντιδραστήριο 1: Ρυθμιστικό διάλυμα (ph 7,5 στους 25 C) Αμιδινοϋδρολάση της κρεατίνης (μικροβιακή) Οξειδάση της σαρκοσίνης (μικροβιακή) N-αιθυλ-N-σουλφοπροπυλm-τολουιδίνη Ασκορβική οξειδάση (βοτανική) Σταθεροποιητές Επιφανειοδραστικά Συντηρητικό Αντιδραστήριο 2: Ρυθμιστικό διάλυμα (ph 7,5 στους 25 C) Αμιδινοϋδρολάση της κρεατινίνης (μικροβιακή) 4-αμινοαντιπυρίνη Υπεροξειδάση (βοτανική) Σταθεροποιητές Επιφανειοδραστικά Αζίδιο του νατρίου > 12.000 U/l > 4.000 U/l > 0,24 mmol/l > 135.000 U/l > 1,5 mmol/l > 2.000 U/l 7,7 mmol/l Το ABX Pentra πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις παρούσες οδηγίες. Ο κατασκευαστής δεν μπορεί να παρέχει καμία εγγύηση για την απόδοσή του εάν χρησιμοποιηθεί με διαφορετικό τρόπο.
Χειρισμός Αφαιρέστε και τα δύο καπάκια της κασέτας. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. Τοποθετήστε το αντίστοιχο προστατευτικό καπάκι, το καπάκι με τον κωδ. GBM0969 στο αντιδραστήριο R1 και το καπάκι με τον κωδ. GBM0970 στο αντιδραστήριο R2 και τοποθετήστε τα στο ψυγείο του ABX Pentra 400. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: ABX Pentra MultiCal, Κωδ. A11A01652 (δεν 10 x 3 ml (λυοφιλιωμένο) Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: ABX Pentra N Control, Κωδ. A11A01653 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) ABX Pentra P Control, Κωδ. A11A01654 (δεν 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) ABX Pentra Urine Control L/H, Κωδ. A11A01674 (δεν 1 x 10 ml + 1 x 10 ml Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να αναλύεται καθημερινά και/ή μετά από κάθε βαθμονόμηση. Η συχνότητα των ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στις οδηγίες του εργαστηρίου και τις οδηγίες της συγκεκριμένης χώρας. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει μία διαδικασία η οποία πρέπει να ακολουθείται σε περίπτωση που τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: ABX PENTRA 400 Βαθμονομητής: ABX Pentra Multical, Κωδ. A11A01652 Ορός ελέγχου: ABX Pentra N Control, Κωδ. A11A01653 ABX Pentra P Control, Κωδ. A11A01654 ABX Pentra Urine Control L/H, Κωδ. A11A01674 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός Δείγμα Ορός Πλάσμα σε ηπαρίνη λιθίου Πλάσμα σε EDTA Φρέσκα ούρα που έχουν υποστεί φυγοκέντριση Σταθερότητα (3): Ορός, πλάσμα: 2 ημέρες στους 20-25 C 7 ημέρες στους 4-8 C 3 μήνες στους -20 C Ούρα: 2 ημέρες στους 20-25 C 6 ημέρες στους 4-8 C 6 μήνες στους -20 C Εύρος τιμών αναφοράς (4) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Ορός/Πλάσμα: Άνδρες Γυναίκες 6.2-11.0 mg/l 4.5-7.5 mg/l 0.62-1.10 mg/dl 0.45-0.75 mg/dl 55-96 μmol/l 40-66 μmol/l Ούρα (24ώρου): 14-26 mg/kg/ημέρα 11-20 mg/kg/ημέρα 124-230 µmol/kg/ημέρα 97-177 µmol/kg/ημέρα Αποθήκευση και Σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε κασέτες που δεν έχουν ανοιχτεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα εφόσον φυλάσσονται καλά σφραγισμένα σε θερμοκρασία 2-10 C, μακριά από το φως και προστατεύονται από κάθε μορφή μόλυνσης. Σταθερότητα μετά το άνοιγμα: ανατρέξτε στην παράγραφο «Απόδοση στον ABX Pentra 400». Αλλοίωση συσκευασίας Σε περίπτωση που έχει αλλοιωθεί η προστατευτική συσκευασία, μη χρησιμοποιείτε το αντιδραστήριο εάν η φθορά ενδέχεται να έχει επιρρεάσει την απόδοση του προϊόντος. Διαδικασία Ανάλυσης Οι οδηγίες της ανάλυσης για άλλα αυτοματοποιημένα συστήμα εκτός του ABX Pentra 400, διατίθεται μετά από αίτηση (δεν διατίθεται στις ΗΠΑ). Διαχείριση Αποβλήτων 1. Ανατρέξτε τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. 2. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0.1 % αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Επειδή το αζίδιο του νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μόλυβδο ή χαλκό, σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλου, το παρόν αντιδραστήριο πρέπει να απορρίπτεται με άφθονη ποσότητα νερού.
Γενικές Προφυλάξεις 1. Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται για χρήση σε επαγγελματικέςin-vitro διαγνωστικές διαδικασίες. 2. Οι κασέτες των αντιδραστηρίων είναι μίας μόνο χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. 3. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Απόδοση στον ABX Pentra 400 Τα δεδομένα απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω προέκυψαν με χρήση εσωτερικού πρωτοκόλλου δοκιμής σε αναλυτή ABX Pentra 400. Ορός, πλάσμα Αριθμός αναλύσεων: 120 αναλύσεις Σταθερότητα μετά την τοποθέτηση: Αφού ανοχτεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο ψυγείο του ABX Pentra 400 παραμένει σταθερή για 30 ημέρες. Όγκος δείγματος: 8 μl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης προσδιορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS)(11) και ισούται με 0.026 mg/dl (2.26 µmol/l). Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης προσδιορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS)(11) και ισούται με 0.11 mg/dl (10.0 µmol/l). Ακρίβεια και Επαναληψιμότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) οροί ελέγχου υποβλήθηκαν σε ανάλυση 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (5). Δείγμα ορού ελέγχου 1 0.90 79.50 2.18 Δείγμα ορού ελέγχου 2 4.05 358.38 0.54 Δείγμα 1 0.56 49.66 2.86 Δείγμα 2 1.52 134.57 1.08 Δείγμα 3 6.46 571.61 0.29 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) οροί ελέγχου αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (δύο φορές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (6). Δείγμα ορού ελέγχου 1 1.29 114.4 2.23 Δείγμα ορού ελέγχου 2 5.20 460.3 2.24 Δείγμα 1 0.57 50.1 4.12 Δείγμα 2 1.51 133.7 2.07 Δείγμα 3 6.32 559.5 1.82 Εύρος μετρήσεων: Η ανάλυση επιβεβαίωσε εύρος μετρήσεων από 0.11 έως 16.95 mg/dl (10.0 έως 1500.0 µmol/l), με αυτόματη επακόλουθη αραίωση έως και 50.85 mg/dl (4500 µmol/l). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου έχει αξιολογηθεί έως και 16.95 mg/dl (1500.0 µmol/l) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (7). Συσχετισμός: 153 δείγματα ασθενών συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που ελήφθη ως σημείο αναφοράς σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (8). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 0.34 έως 16.13 mg/dl (30.3 έως 1427.1 µmol/l). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προκύπτει χρησιμοποιώντας τη μέθοδο παλινδρόμησης Passing- Bablock(12) είναι: Y = 1.00 X - 0.01 (mg/dl) Y = 1.00 X - 0.27 (µmol/l) με συντελεστή συσχετισμού r 2 = 0.9991. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως και 500 mg/dl (290 µmol/l). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως και 612.5 mg/dl (7 mmol/l) (με Intralipid, για προσομείωση λιπαιμίας). Ολική Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως χολερυθρίνη: Άμεση χολερυθρίνη: και 27.4 mg/dl (468 µmol/l). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως και 9.9 mg/dl (170 µmol/l). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία (9,10). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα της βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 2.xx
Ούρα Αριθμός αναλύσεων: 120 αναλύσεις Σταθερότητα μετά την τοποθέτηση: Αφού ανοιχτεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο ψυγείο του ABX Pentra 400 παραμένει σταθερή για 30 ημέρες. Όγκος δείγματος: 8 μl/ανάλυση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης προσδιορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS)(11) και ισούται με 0.66 mg/dl (58.2 µmol/l). Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης προσδιορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS)(11) και ισούται με 1.71 mg/dl (151 µmol/l). Ακρίβεια και Επαναληψιμότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) οροί ελέγχου υποβλήθηκαν σε ανάλυση 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (5). Δείγμα ορού ελέγχου 1 66.52 5887 0.83 Δείγμα ορού ελέγχου 2 148.78 13166 0.87 Δείγμα 1 10.91 965 2.21 Δείγμα 2 89.26 7899 0.83 Δείγμα 3 216.98 19202 1.11 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) οροί ελέγχου αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (δύο φορές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (6). Δείγμα ορού ελέγχου 1 70.5 6242 3.06 Δείγμα ορού ελέγχου 2 157.0 13891 3.08 Δείγμα 1 11.2 994 4.84 Δείγμα 2 92.2 8163 2.55 Δείγμα 3 227.6 20143 2.58 Εύρος μετρήσεων: Η ανάλυση επιβεβαίωσε εύρος μετρήσεων από 3.56 έως 282.5 mg/dl (315 έως 25000 µmol/l), με αυτόματη επακόλουθη αραίωση έως και 846.9 mg/dl (75000 µmol/l). Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου έχει αξιολογηθεί έως και 282.5 mg/dl (25000 µmol/l) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (7). Συσχετισμός: 143 δείγματα ασθενών (ούρα) συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που ελήφθη ως σημείο αναφοράς σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A2 του CLSI (NCCLS) (8). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 6.61 έως 251.31 mg/dl (584.7 έως 22239.4 µmol/l). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προκύπτει χρησιμοποιώντας τη μέθοδο παλινδρόμησης Passing- Bablock(12) είναι: Y = 0.96 X - 0.03 (mg/dl) με συντελεστή συσχετισμού r 2 = 0.9973. Y = 0.96 X + 1.37 (µmol/l) με συντελεστή συσχετισμού r 2 = 0.9976. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως και 390 mg/dl (226 µmol/l). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως και 612.5 mg/dl (7 mmol/l) (με Intralipid, για προσομείωση λιπαιμίας). Άμεση Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως χολερυθρίνη: και 13.4 mg/dl (228 µmol/l). Ασκορβικό οξύ:δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση έως και 5.98 mg/dl (340 µmol/l). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (9,10). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα της βαθμονόμησης είναι 14 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 2.xx Συντελεστής μετατροπής: μmol/l x 0.113 = mg/l μmol/l x 0.0113 = mg/dl Προειδοποίηση Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται.
Βιβλιογραφία 1. Allston, C.A., Non protein nitrogenous compounds and renal function. Clinical Chemistry: Concepts and Application, Anderson, S.C., Cockayne, S. (W.B. Saunders eds. Philadelphia USA), (1993), 369. 2. Newman, D.J., Price C.P., Non protein nitrogen metabolite. Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5 ème Ed., Burtis, C.A. & Ashwood, E.R. (W.B. Saunders eds. Philadelphia USA), (2001), 414. 3. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO Publication WHO/DIL/LAB/99.1 Rev. 2. 202, p28. 4. Roberts W.L., McMillin G.A., Burtis C.A., Bruns D.E., Reference Information for the Clinical Laboratory, TIETZ Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 ème Ed; Burtis C.A., Ashwood E.R., Bruns D.E., (Elsevier Saunders eds. St Louis, USA); 2006, 2264. 5. Vassault A., Grafmeyer D. Naudin C. et al., Protocole de validation de techniques (document B), Ann. Biol. Clin., 1986, 44, 686-745. 6. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices, Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2, Vol. 19, No. 2, february 1999. 7. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods, Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A, Vol. 23, No. 16, april 2003. 8. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples, Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2, Vol. 22, No. 19, 2002. 9. Young D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press, 1995, 3: 143-163. 10. Young D.S., Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests, 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press, 1997, 3: 120-132. 11. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation, Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A, Vol. 24, No. 34, 2004. 12. Passing H., Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21: 709-20.