(Áéìüëõìá) Êùä.: A11A01702 ¼ãêïò R1: ¼ãêïò R2: ¼ãêïò R3: 1 x 110 ml ¼ãêïò R4: 2 x 21 ml ¼ãêïò R5: ABX Pentra Áéìüëõìá ÁíôéäñáóôÞñéï ãéá in-vitro ðïóïôéêü ðñïóäéïñéóìü ôçò Áéìïóöáéñßíçò A1c (HbA1c). 2010/06/01 A93A01052P EL A11A01702 Κλινικό ενδιαφέρον (1-7) H HbA1c προκύπτει από τη μη ενζυματική σταθεροποίηση του Ν-τελικού τμήματος της αλυσίδας της αιμοσφαιρίνης A0. Τα επίπεδα HbA1c που είναι ανάλογα προς τα επίπεδα γλυκόζης του αίματος, αντιστοιχούν στη μέση ημερήσια συγκέντρωση γλυκόζης κατά τους δύο μήνες πριν από τη λήψη του δείγματος. Πρόσφατες μελέτες έδειξαν ότι τακτικές μετρήσεις της HbA1c μπορούν να οδηγήσουν σε αλλαγές στη θεραπεία του διαβήτη και σε καλύτερο μεταβολικό έλεγχο όπως υποδεικνύει η μείωση των τιμών της HbA1c. Η παρούσα διαγνωστική μέθοδος in vitro χρησιμοποιείται για τον ποσοτικό προσδιορισμό της αιμοσφαιρίνης A1c (HbA1c), που αποτελεί ένδειξη διαβήτη, στο ανθρώπινο αίμα. Οι μετρήσεις που λαμβάνονται με αυτή τη διαδικασία μπορούν να χρησιμοποιηθούν για μακροχρόνιο έλεγχο των διαβητικών. Μέθοδος Η HbA1c εκφράζεται ως ποσοστό της περιεκτικότητας ολικής αιμοσφαιρίνης. Για τον προσδιορισμό των συγκεντρώσεων THb με τη μέθοδο της φασματοφωτομετρίας, οι διαφορετικές μορφές αιμοσφαιρίνης πρέπει να μετατραπούν σε μία ενιαία μορφή με ομοιόμορφο φάσμα απορρόφησης. Οι τιμές της HbA1c και της ολικής αιμοσφαιρίνης (THb) σε μmol που λαμβάνονται από την ανάλυση χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό του λόγου HbA1c/THb και δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται μεμονωμένα για διαγνωστικούς σκοπούς. Αρχή (8): Οι συγκεντρώσεις της HbA1c και της ολικής αιμοσφαιρίνης μετρώνται και ο λόγος εκφράζεται ως ποσοστό της HbA1c. Για τον προσδιορισμό του ποσοστού της HbA1c, απαιτείται η χρήση πέντε αντιδραστηρίων: του Antibody Reagent (R1) αραιωμένου με Diluent I (R5), Agglutinator Reagent (R2), του Hemolysis Reagent (R3) και Total Hemoglobin Reagent(R4). Tο δείγμα ολικού αίματος αναμιγνύεται χειροκίνητα με το Hemolysis Reagent (R3) (1 όγκος δείγματος για 50 όγκους R3): Πραγματοποιείται λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων και υδρόλυση της αλυσίδας αιμοσφαιρίνης με τη δράση μιας πρωτεάσης που υπάρχει στο αντιδραστήριο. 1 x 110 ml 2 x 21 ml HORIBA ABX SAS BP 7290 34184 Montpellier- cedex 4 - France Η αντίδραση προκαλείται από την προσθήκη δείγματος αίματος που έχει υποβληθεί σε προεπεξεργασία με το Total Hemoglobin Reagent (R4), με αποτέλεσμα τη λήψη διαλύματος πράσινου χρώματος. Η μετατροπή των διαφορετικών τύπων αιμοσφαιρίνης σε αλκαλική αιματίνη με καθορισμένο φάσμα απορρόφησης επιτρέπει τον υπολογισμό της συγκέντρωσης της ολικής αιμοσφαιρίνης. Η αιμοσφαιρίνη μετράται με τη μέθοδο τελικού σημείου στα 550 nm. Τα επίπεδα αιμοσφαιρίνης είναι ευθέως ανάλογα προς την οπτική πυκνότητα (OD) που παρατηρείται. Για τη μέτρηση της ειδικής HbA1c χρησιμοποιείται μέθοδος συμπλοκοποίησης λάτεξ με αναστολή. Μια συγκολλητίνη (συνθετικό πολυμερές που περιέχει πολλαπλά αντίγραφα του ανοσοαντιδραστικού τμήματος της HbA1c) προκαλεί τη συμπλοκοποίηση των σωματιδίων λάτεξ που καλύπτονται με ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα ποντικιού της HbA1c. Απουσία της HbA1c στο δείγμα, πραγματοποιείται συμπλοκοποίηση της συγκολλητίνης στο Agglutinator Reagent (R2) και των μικροσωματιδίων που είναι επικαλυμμένα με Antibody Reagent (R1). Form-0846 Rev. 3 Το Total Hemoglobin Reagent (R4) χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της ολικής αιμοσφαιρίνης. Η μέθοδος βασίζεται στη μετατροπή κάθε μορφής αιμοσφαιρίνης σε αλκαλική αιματίνη σε ένα αλκαλικό διάλυμα μη ιοντικού καθαριστικού όπως περιγράφεται στην αρχική διαδικασία από τους Wolf et al. Η συμπλοκοποίηση οδηγεί σε αύξηση της απορρόφησης του αιωρήματος. Η παρουσία της HbA1c στο δείγμα μειώνει το ρυθμό συμπλοκοποίησης, καθώς η HbA1c ανταγωνίζεται με το Agglutinator Reagent (R2) για τα σημεία πρόσδεσης του αντισώματος των μικροσωματιδίων.
Όσο μεγαλύτερη είναι η ποσότητα HbA1c στο δείγμα, τόσο χαμηλότερος είναι ο ρυθμός συμπλοκοποίησης. Η αντίδραση μετράται με την απορρόφηση στα 550 nm και ο ρυθμός συμπλοκοποίησης χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό της συγκέντρωσης από μια καμπύλη βαθμονόμησης. Το ποσοστό της HbA1c υπολογίζεται στη συνέχεια χρησιμοποιώντας τις τιμές της HbA1c και της ολικής αιμοσφαιρίνης σε µmol. Αντιδραστήρια a Το ABX Pentra είναι κιτ πολλαπλών αντιδραστηρίων. Το κιτ περιλαμβάνει: Αντιδραστήριο 1: Antibody Reagent Αντιδραστήριο 2: Agglutinator Reagent Αντιδραστήριο 3: Hemolysis Reagent Αντιδραστήριο 4: Total Hemoglobin Reagent Αντιδραστήριο 5: Diluent I Το Antibody Reagent (R1) περιέχει: σωματίδια συζευγμένα με αντισώματα HbA1c (ποντικιού), βόεια λευκωματίνη ορού, ρυθμιστικό διάλυμα, επιφανειοδραστικά, συντηρητικά. Το Agglutinator Reagent (R2) περιέχει: πολυμερές απτίνης ομοιοπολικά συζευγμένο, βόεια λευκωματίνη ορού, ρυθμιστικό διάλυμα, συντηρητικό, επιφανειοδραστικό. Το Hemolysis Reagent (R3) περιέχει: χοίρεια πεψίνη, ρυθμιστικό διάλυμα, συντηρητικό. Το παρόν αντιδραστήριο πωλείται και ξεχωριστά με κωδικό αναφοράς A11A01730. Το Total Hemoglobin Reagent (R4) περιέχει: υδροξείδιο του νατρίου, επιφανειοδραστικό. Το Diluent I (R5) περιέχει: συντηρητικό, NaCl. 1 x 110 ml 2 x 21 ml Το ABX Pentra πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις παρούσες οδηγίες. Ο κατασκευαστής δεν μπορεί να παρέχει καμία εγγύηση για την απόδοσή του εάν χρησιμοποιηθεί με διαφορετικό τρόπο. Χειρισμός 1. Αναμίξτε 1 όγκο Antibody Reagent(R1) με 1 όγκο Diluent Ι (R5) σε φιαλίδιο MBU 100 ml, Κωδ. A11A01759. 2. Αναμίξτε προσεκτικά το Agglutinator Reagent (R2) με αναστροφή και μεταγγίστε το σε κατάλληλο δοχείο αντιδραστηρίου. 3. Αναμίξτε προσεκτικά το Total Hemoglobin Reagent (R4) με αναστροφή και μεταγγίστε το σε κατάλληλο δοχείο αντιδραστηρίου. a. Ôñïðïðïßçóç áðü ôçí Ýêäïóç ìå äåßêôç O óôçí Ýêäïóç P: ÍÝïò üãêïò: R5 = 1 x 23 ml. 4. Αφήστε τα αντιδραστήρια να σταθεροποιηθούν στο ψυγείο αντιδραστηρίων του ABX Pentra 400 για μία ώρα πριν τα χρησιμοποιήσετε. Βλέπε διάγραμμα παρακάτω (τα τμήματα B και C λαμβάνονται ως παράδειγμα): Total Hemoglobin Reagent Αντιδραστήριο 4 Agglutinator Reagent Αντιδραστήριο 2 Antibody Reagent Αντιδραστήριο 1 (αραιωμένο) Χρησιμοποιήστε μόνο την απαιτούμενη ποσότητα και, μετά τη χρήση, τοποθετήστε αμέσως τα αντιδραστήρια σε ψυχρό περιβάλλον σε κλειστό φιαλίδιο. Τα δείγματα όσο και οι οροί ελέγχου πρέπει να αραιωθούν σε κλίμακα 1:51 με το Hemolysis Reagent (R3). Παράδειγμα αραίωσης: 10 µl δειγμάτων/ορών ελέγχου + 500 µl R3 Αναμίξτε προσεκτικά (αποφύγετε το σχηματισμό αφρού) και αφήστε να σταθεροποιηθεί για πέντε λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου πριν διενεργήσετε την ανάλυση στη συσκευή. Τα δείγματα πρέπει να έχουν ομογενοποιηθεί καλά πριν από τη δειγματοληψία. Για το πιπετάρισμα ολικού αίματος συνιστάται η χρήση πιπέτας θετικής εκτόπισης. Σημείωση: Τα αποτελέσματα κάθε μεθόδου (ολικής αιμοσφαιρίνης και HbA1c) δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται ξεχωριστά: μόνο ο λόγος HbA1c/THb πρέπει να χρησιμοποιηθεί. Πρέπει να ζητούνται αναλύσεις χρησιμοποιώντας την προγραμματισμένη αναλογία και να μην ζητούνται αναλύσεις των HbA1c και THb χωριστά. Ο τύπος της αναλογίας πρέπει να δημιουργείται βάσει της αναλογίας NGSP (βλ. ABX Pentra 400 Εγχειρίδιο Χρήσης). Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Το ABX Pentra HbA1C WB Cal, Κωδ. A11A01703 (δεν περιλαμβάνεται) 1 x 8 ml + 5 x 2 ml Η ολική αιμοσφαιρίνη βαθμονομείται με το ABX Pentra HbA1c WB Cal (CAL 1) χρησιμοποιώντας μια τιμή στόχο ολικής αιμοσφαιρίνης. Οι βαθμονομητές και τα αντιδραστήρια δεν εξαρτώνται από την παρτίδα και υποβάλλονται σε εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο στην HORIBA Medical.
Η βαθμονόμηση της μεθόδου HbA1c πραγματοποιείται με τη χρήση του ABX Pentra Cal, το οποίο περιέχει έξι επίπεδα βαθμονομητών HbA1c. Αυτές οι διαδικασίες βαθμονόμησης είναι συμβατές με την πιστοποίηση NGSP/DCCT. Θέση των βαθμονομητών στο φορέα δειγμάτων του βαθμονομητή: Δείγμα (9) Ολικό αίμα σε EDTA. Σταθερότητα (10): 3 ημέρες στους 20-25 C 8 ημέρες στους 2-8 C 60 ημέρες στους -20 C Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να αποψύχονται σε θερμοκρασία δωματίου και στη συνέχεια να αναμειγνύονται προσεκτικά πριν από τη χρήση. Αναμίξτε προσεκτικά τα δείγματα αίματος αμέσως πριν από τη διεξαγωγή της ανάλυσης προκειμένου να εξασφαλίσετε ακριβή αποτελέσματα THb. 1. CAL 1 (200 µl) για THb 2. CAL 1 (200 µl) για HbA1c 3. CAL 2 (150 µl) 4. CAL 3 (150 µl) 5. CAL 4 (150 µl) 6. CAL 5 (150 µl) 7. CAL 6 (150 µl) Σημείωση: ο CAL 1 στη θέση 1 είναι απλώς ενδεικτικός, ο CAL 1 μπορεί να τοποθετηθεί και στη θέση 8, 9 ή 10. Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: Το ABX Pentra HbA1C WB Control, Κωδ. A11A01704 (δεν περιλαμβάνεται) Φυσιολογικός ορός ελέγχου: 2 x 0.25 ml (λυοφιλιωμένο) Παθολογικός ορός ελέγχου: 2 x 0.25 ml (λυοφιλιωμένο) Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να αναλύεται καθημερινά και/ή μετά από κάθε βαθμονόμηση. Η συχνότητα των ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στις οδηγίες του εργαστηρίου και τις οδηγίες της συγκεκριμένης χώρας. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει μία διαδικασία η οποία πρέπει να ακολουθείται σε περίπτωση που τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: ABX Pentra 400 Βαθμονομητής: ABX Pentra Cal, Κωδ. A11A01703 Ορός ελέγχου: ABX Pentra Control, Κωδ. A11A01704 ABX Pentra Hemolysis Reagent, Κωδ. A11A01730 Φιαλίδιο MBU 100 ml, Κωδ. A11A01759 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός Εύρος τιμών αναφοράς (4,11,12,13,14,15,16) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. Κάθε εργαστήριο οφείλει να φροντίζει ώστε οι συνήθεις τιμές του να είναι συμβατές με τις τιμές αναφοράς του NGSP. Η τεχνική αυτή έχει πιστοποιηθεί από το NGSP με 4-6% HbA1c ως φυσιολογική τιμή σε μη διαβητικούς, με θεραπευτικό στόχο τη λήψη τιμής < 7%, όπως συνιστά η ADA (Αμερικανική Διαβητολογική Εταιρεία). Όλα τα αποτελέσματα ασθενών πρέπει να ερμηνεύονται υπό το φως των συνολικών κλινικών εξετάσεων του ασθενή. Όρια της μεθόδου (11): Οι περισσότεροι ασθενείς παρουσιάζουν επίπεδα αιμοσφαιρίνης μεταξύ 4.4 mmol/l και 14.4 mmol/l. Ωστόσο, σύμφωνα με δημοσιεύσεις ειδικών, τα επίπεδα αιμοσφαιρίνης ασθενών με οξεία αναιμία ενδέχεται να είναι χαμηλότερα από 4.4 mmol/l, ενώ τα επίπεδα ασθενών με πολυκυτταραιμία ενδέχεται να υπερβαίνουν τα 14.4 mmol/l. Οι ασθενείς με αυτά τα συμπτώματα θα πρέπει να υποβάλλονται σε ανάλυση με άλλη μέθοδο αν οι τιμές αιμοσφαιρίνης τους βρίσκονται εκτός του εύρους μέτρησης. Κάθε συνθήκη που επηρεάζει το χρόνο ζωής των ερυθρών αιμοσφαιρίων (όπως η αιμολυτική αναιμία ή άλλες αιμολυτικές παθήσεις, εγκυμοσύνη ή σημαντική απώλεια αίματος ) οδηγεί σε μείωση της έκθεσης αυτών των κυττάρων στη γλυκόζη και κατά συνέπεια σε χαμηλότερο ποσοστό των επιπέδων γλυκοζυλιωμένης αιμοσφαιρίνης (Ghb). Τα αποτελέσματα των ποσοστών της Ghb δεν είναι αξιόπιστα σε ασθενείς που πάσχουν από χρόνια απώλεια αίματος και ως εκ τούτου έχουν μεταβλητούς χρόνους ζωής των ερυθροκυττάρων. Δείγματα που περιέχουν αιμοσφαιρίνη C και S ενδέχεται να οδηγήσουν σε αύξηση της αναμενόμενης τιμής της HbA1c.
Επίσης, από δείγματα που περιέχουν υψηλά επίπεδα αιμοσφαιρίνης F (> 15%) ενδέχεται να προκύψουν αποτελέσματα της HbA1c χαμηλότερα από τα αναμενόμενα. Δεν υπάρχουν παρεμβολές από καρβαμιλιωμένη και ακετυλιωμένη αιμοσφαιρίνη. Η εξέταση δεν είναι αξιόπιστη για τη διάγνωση σακχαρώδη διαβήτη (16, 14). Η εξέταση αυτή δεν είναι χρήσιμη για τον καθημερινό έλεγχο της γλυκόζης και δεν πρέπει να χρησιμοποιείται σε αντικατάσταση της καθημερινής εξέτασης της γλυκόζης του αίματος (14). Αποθήκευση και Σταθερότητα Προστατέψτε από υψηλή θερμοκρασία, ηλιακή ακτινοβολία και ψύξη. Διάρκεια ζωής αντιδραστηρίου (σφραγισμένο και μετά το άνοιγμα): Τα αντιδραστήρια παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που υποδεικνύεται στην ετικέτα εφόσον αποθηκεύονται σε θερμοκρασία μεταξύ 2-8 C στην αρχική τους συσκευασία και προστατεύονται από μολύνσεις. Σταθερότητα ανασυσταθέντος διαλύματος λάτεξ: ανατρέξτε στην παράγραφο «Απόδοση στον ABX Pentra 400». Διαδικασία Ανάλυσης Το πρωτόκολλο εφαρμογής της εξέτασης σε αναλυτές πλην του ΑBX Pentra 400 διατίθεται κατόπιν παραγγελίας. Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε τις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Γενικές Προφυλάξεις 1. Αντιδραστήριο, μόνο για επαγγελματική in-vitro διαγνωστική χρήση. 2. Antibody Reagent (R1) : Για την παρασκευή αυτού του προϊόντος χρησιμοποιήθηκαν συστατικά ανθρώπινης προέλευσης. Κάθε αιμοδότης έχει υποβληθεί σε ατομική ανάλυση και, με την εφαρμογή εγκεκριμένων μεθόδων της Διεύθυνσης Τροφίμων και Φαρμάκων των ΗΠΑ (FDA), έχει βρεθεί αρνητικός στο επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας B (HBsAg) και αρνητικός για αντισώματα στον ιό της ανθρώπινης ανοσολογικής ανεπάρκειας (HIV-1 και HIV-2) και στον ιό της ηπατίτιδας C (HCV). Προσοχή! Ωστόσο, καθώς καμία μέθοδος ανάλυσης δεν μπορεί να αποκλείσει τον πιθανό κίνδυνο μόλυνσης με απόλυτη βεβαιότητα, το υλικό θα πρέπει να αντιμετωπίζεται το ίδιο προσεκτικά όπως τα δείγματα των ασθενών, ως εν δυνάμει μολυσματικό και να χρησιμοποιείται με την ανάλογη προσοχή. Σε περίπτωση έκθεσης, τηρείτε τις οδηγίες των αρμόδιων υγειονομικών αρχών. Ερεθιστικό. S24: Αποφεύγετε την επαφή με το δέρμα. S37: Να φοράτε κατάλληλα γάντια. R43: Η επαφή με το δέρμα μπορεί να προκαλέσει ευαισθητοποίηση. 3. Agglutinator Reagent (R2): Ερεθιστικό. S24: Αποφεύγετε την επαφή με το δέρμα. S37: Να φοράτε κατάλληλα γάντια. R43: Η επαφή με το δέρμα μπορεί να προκαλέσει ευαισθητοποίηση. 4. Antibody Reagent (R1), Agglutinator Reagent (R2), Hemolysis Reagent (R3), Total Hemoglobin Reagent (R4): Αποφύγετε την επαφή με τα μάτια, το δέρμα και την ενδυμασία. Ξεπλύνετε τα χέρια σας προσεκτικά με νερό μετά τη χρήση του προϊόντος. Απαγορεύεται η κατάποση. 5. Diluent I (R5): Ερεθιστικό. R36/38: Μπορεί να προκαλέσει ερεθισμούς στα μάτια και το δέρμα. R43: Η επαφή με το δέρμα μπορεί να προκαλέσει ευαισθητοποίηση. 6. Τα φιαλίδια αντιδραστηρίων πρέπει να απορρίπτονται μετά από κάθε χρήση. 7. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Απόδοση στον ABX Pentra 400 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω προσδιορίστηκαν στον αναλυτή ABX Pentra 400. Αριθμός αναλύσεων: 381 αναλύσεις Διάρκεια ζωής του ανασυσταθέντος διαλύματος λάτεξ: Η διάρκεια ζωής του ανασυσταθέντος διαλύματος λάτεξ είναι 60 ημέρες εφόσον αποθηκευτεί σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 8 C μετά την ανασύσταση. Χρησιμοποιήστε μόνο την απαιτούμενη ποσότητα και τοποθετήστε αμέσως τα αντιδραστήρια σε ψυχρό περιβάλλον μετά τη χρήση. Όγκος δείγματος (μετά τη θεραπεία): Hb 25 µl/εξέταση HbA1c: 3 µl/εξέταση Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (17) και ισούται με 1.60 µmol/l (0.42 g/dl). Ελάχιστο όριο ερμηνείας: Το ελάχιστο όριο ερμηνείας (MIL) της HbA1c εκτιμάται βάσει πολλαπλού προσδιορισμού δείγματος χαμηλής συγκέντρωσης και ισούται με 0.17 µmol/l (0.05 g/dl).
Ακρίβεια και Επαναληψιμότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου υποβλήθηκαν σε ανάλυση 20 φορές σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (18). Μέση τιμή %HbA1c CV % Δείγμα ορού ελέγχου 1 4.94 0.88 Δείγμα ορού ελέγχου 2 10.24 1.33 Δείγμα 1 5.14 0.64 Δείγμα 2 6.97 1.06 Δείγμα 3 9.32 1.16 Αναπαραγωγιμότητα (ακρίβεια μεταξύ των αναλύσεων) 3 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (δύο φορές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A2 του CLSI (NCCLS) (19). Μέση τιμή %HbA1c CV % Δείγμα ορού ελέγχου 1 4.90 1.79 Δείγμα ορού ελέγχου 2 9.83 2.23 Δείγμα 1 4.76 1.37 Δείγμα 2 6.75 1.90 Δείγμα 3 9.15 1.44 Γραμμικότητα και εύρος μέτρησης: Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου καθορίστηκε σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (20). Κάτω όριο γραμμικότητας: Άνω όριο γραμμικότητας: για Ολική αιμοσφαιρίνη: για HbA1c: για Ολική αιμοσφαιρίνη: για HbA1c: 1.60 µmol/l (0.42 g/dl) 0.17 µmol/l (0.05 g/dl) 85.00 µmol/l (22.41 g/dl) 10.8 µmol/l (2.85 g/dl) Το εύρος της μεθόδου ολικής αιμοσφαιρίνης όπου το %HbA1c είναι ακριβές, κυμαίνεται μεταξύ 17.5 και 85.0 µmol/l (4.61 και 22.41 g/dl). Η ανάλυση επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 4.44 έως 16.68 % HbA1c. Τα δείγματα δεν πρέπει να αραιώνονται σε περίπτωση που η συγκέντρωση HbA1c είναι υψηλότερη από το υψηλότερο σημείο βαθμονόμησης των 10.80 µmol/l (2.85 g/dl). Σε περίπτωση που η συγκέντρωση σε HbA1c είναι υψηλότερη από το υψηλότερο σημείο βαθμονόμησης, τα δείγματα δεν πρέπει να αραιώνονται. Ωστόσο, μπορεί να υπολογιστεί η χαμηλότερη τιμή του %HbA1c του δείγματος με τη συγκέντρωση στην THb που προκύπτει και δίνει το αποτέλεσμα ως εξής: «Higher than...xxx» (Πάνω από...xxx). Παράδειγμα: εάν η συγκέντρωση της THb είναι 44.0 µmol/l (11.6 g/dl), τότε η χαμηλότερη τιμή %HbA1c για τη μέθοδο είναι: - σε µmol/l: (10.80)/44.00 x 100 = 20.00 %HbA1c (η εφαρμογή του δίνει το διορθωτικό συντελεστή της NGSP = 15.9%). Το αποτέλεσμα του %HbA1c για το δείγμα αυτό είναι: «Higher than 15.9% (Πάνω από 15.9%). - σε g/dl (2.85)/11.6 x 100 = 24.6 %HbA1c (η εφαρμογή του δίνει το διορθωτικό συντελεστή της NGSP = 15.9%). Το αποτέλεσμα του %HbA1c για το δείγμα αυτό είναι: «Higher than 15.9% (Πάνω από 15.9%). Συσχετισμός: 120 δείγματα ολικού αίματος ασθενών συσχετίζονται με ένα αντιδραστήριο του εμπορίου που λαμβάνεται ως σημείο αναφοράς σύμφωνα με τις υποδείξεις στο πρωτόκολλο EP9-A του CLSI (NCCLS) (21). Οι τιμές κυμάνθηκαν μεταξύ 4.51 έως 12.56 % της HbA1c. Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προκύπτει χρησιμοποιώντας τη μέθοδο παλινδρόμησης Passing- Bablock(22) είναι: Y = 1.10 X - 0.58 (%HbA1c) με συντελεστή συσχετισμού r 2 = 0.9944. Αλληλεπιδράσεις: Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 7 mmol/l (612.5 mg/dl). (με χρήση Intralipid, για προσομοίωση λιπαιμίας). Ολική Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως χολερυθρίνη: και 561 µmol/l (32.8 mg/dl) Άμεση Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως χολερυθρίνη: και 587 µmol/l (34.3 mg/dl) Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως και 3.40 mmol/l (59.8 mg/dl) Ασταθής Δεν υπάρχει παρεμβολή με την ασταθή αιμοσφαιρίνη: αιμοσφαιρίνη. Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (23, 24). Σταθερότητα Βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα της βαθμονόμησης είναι 30 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι παρτίδες των αντιδραστηρίων, όταν αλλάζει το αιώρημα λάτεξ και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Αναλογία NGSP: Y = (58140*(HbA1c/Hb) + 1564)/1000
Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής για την ανάλυση της HbA1c (A1c-H): 5.xx Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής για την ανάλυση της ολικής αιμοσφαιρίνης (THb-H): 5.xx Προειδοποίηση Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Βιβλιογραφία 1. Mayer TK and Freedman ZR: Protein glycosylation in diabetes mellitus: A review of laboratory measurements and of their clinical utility. Clin. Chim. Acta 127; 147-184 (1983). 2. Baynes JW.Bunn HF, Goldstein DE, et al : National Diabetes Group; Report of the expert committee on glucosylated hemoglobin. Diabetes Care 7; 602-606 (1984). 3. Koenig RJ, Peterson CM, Kilo C. et al: Hemoglobin A1c as an indicator of the degree of glucose intolerance in diabetes. Diabetes 25; 230-232 (1976). 4. Nathan DM, Singer DE, Hurxthal K, and Goodson JD: The clinical information value of the glycosylated hemoglobin assay. NE J. Med. 310; 341-346 (1984). 5. McCarren M: DCCT; and it works: Intensive therapy reduces the risk of diabetic eye, kidney, and nerve disease. Diabetes forecast 49-51 (September 1993). 6. Larsen ML, Horder M, and Mogensen EF: Effect of longterm monitoring of glycosylated hemoglobin levels in insulin-dependent diabetes mellitus. NE. J. Med. 323; 1021-1025 (1990). 7. Nathan DM: Hemoglobin A 1c. Infatuation or the real thing? NE. J. Med. 323; 1062-1063 (1990). 8. Wolf HU, Lang W, and Zander R; Alkaline haematin D-575, a new tool for the determination of haemoglobin as an alternative to the cyanhaemoglobin method. Clin. Chim. Acta. 136; 83-104 (1984). 9. Guder W.G., Zawta B., The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st ed. Guder W.G., Narayanan S., Zawta B., (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany), (2001), 31. 10. HORIBA Medical Internal studies. 11.Knowles BJ, Haigh WB, and Michaud GC: A monoclonal antibody-based immunoassay for hemoglobin A 1c. Diabetes 35; Supplement: 94A (1986). 12.Sacks D.B., Carbohydrates, Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 th Ed., Burtis C.A., Ashwood E.R., Bruns D.E., (Elsevier Saunders eds., St Louis, USA), (2006), 884. 13.Goldstein DE, Little RR, Wiedmayer HM, et al: Glycated hemoglobin: Methodologies and clinical applications Clin. Chem. 32; 864-870 (1986). 14.Burtis CA and Ashwood ER, eds: Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2 nd edition, WB Saunders Company, Philadelphia, PA. p.2021 (1994). 15.Diabetes Care 2002; 25 (suppl. 1); 33-49. 16. Ellis G. Diamandis EP, Giesbrecht EE, et al. An automated «high pressure» liquid chromatographic assay for hemoglobin A 1c. Clin. Chem. 30: 1746-11752 (1984). 17. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation, Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A, Vol. 24, No. 34, 2004. 18.Vassault A., Grafmeyer D. Naudin C. et al., Protocole de validation de techniques (document B), Ann. Biol. Clin., 1986, 44, 686-745. 19. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices, Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A2, Vol. 24, No. 25, august 2004. 20.Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods, Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A, Vol. 23, No. 16, april 2003. 21. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples, Approved Guideline, 2 nd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A2, Vol. 22, No. 19, 2002. 22. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 23. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 24. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132.