Monolisa HBs Ag ULTRA 1 Πλακέτα - 96 δοκιµές 72346 5 Πλακέτες - 480 δοκιµές 72348

Monolisa HBs Ag ULTRA 1 Πλακέτα - 96 δοκιµές 72346 5 Πλακέτες - 480 δοκιµές 72348 Κιτ για την ανίχνευση του επιφανειακού αντιγόνου του ιού της ηπατίτιδας Β στον ορό ή στο πλάσµα ανθρώπου µέσω ανοσοενζυµικής τεχνικής Έλεγχος ποιότητας εκ µέρους του κατασκευαστή Όλα τα προϊόντα που κατασκευάζονται και διατίθενται στο εµπόριο από την εταιρία Bio- Rad υποβάλλονται σε όλες τις διεργασίες του συστήµατος διασφάλισης ποιότητας, από την παραλαβή των πρώτων υλών έως την εµπορευµατοποίηση των τελικών προϊόντων. Κάθε παρτίδα τελικού προϊόντος υποβάλλεται σε έλεγχο ποιότητας και διατίθεται στο εµπόριο µόνον όταν συµµορφώνεται µε τα κριτήρια αποδοχής. Η τεκµηρίωση σχετικά µε την παραγωγή και τον έλεγχο της κάθε παρτίδας τηρείται εντός της εταιρίας.

ΠΙΝΑΚΑΣ ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΩΝ 1 - ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΟΚΙΜΗΣ 2 - ΚΛΙΝΙΚΗ ΑΞΙΑ 3 - ΒΑΣΙΚΗ ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΟΚΙΜΗΣ ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΗΣ Monolisa HBs Ag ULTRA 4 - ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Monolisa HBs Ag ULTRA 5 - ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ 6 - Ο ΗΓΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΓΙΕΙΝΗ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑ 7 - ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΟ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΟ ΥΛΙΚΟ 8 - ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΩΝ ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ 9 - ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ - ΧΡΟΝΟΣ ΙΑΤΗΡΗΣΗΣ 10 - ΕΙΓΜΑΤΑ 11 - ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ ΟΚΙΜΗΣ 12 - ΠΡΟΣΑΡΜΟΓΗ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΕΚΠΛΥΣΗΣ 13 - ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 14 - ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΤΗΣ ΑΠΟΘΕΣΗΣ ΕΙΓΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΣΥΖΥΓΟΥΣ 15 - ΕΠΙ ΟΣΕΙΣ 16 - ΟΡΙΑ ΤΗΣ ΟΚΙΜΗΣ 17 - ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ

1 -ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΟΚΙΜΗΣ Το Monolisa HBs Ag ULTRA είναι µια ανοσοενζυµική τεχνική τύπου «σάντουιτς» µιας φάσης για την ανίχνευση του επιφανειακού αντιγόνου του ιού της ηπατίτιδας Β (Ag HBs) στον ορό ή το πλάσµα ανθρώπου. 2 - ΚΛΙΝΙΚΗ ΑΞΙΑ Η παρουσία του Ag HBs στον ορό καταδεικνύει τη µόλυνση από τον ιό της ηπατίτιδας Β. Πρόκειται για τον πρώτο δείκτη που εµφανίζεται και µπορεί να προηγείται της εµφάνισης των κλινικών και βιολογικών συµπτωµάτων της ασθένειας κατά 2 έως 3 εβδοµάδες. Η παρουσία του µπορεί να είναι πολύ σύντοµης (ορισµένες ηµέρες) ή πολύ µεγάλης διάρκειας (πολλά έτη). Εάν το Ag HBs συνεχίζει να υπάρχει πέραν των 6 µηνών, η ηπατίτιδα χαρακτηρίζεται ως «χρόνια». Η ύπαρξη µεγάλου αριθµού χρόνιων ασυµπτωµατικών φορέων καθιστά την ηπατίτιδα Β έναν σηµαντικό κίνδυνο κατά τις µεταγγίσεις. Η πρόληψη της µετάδοσης βασίζεται στην ανίχνευση του Ag HBs σε κάθε αιµοδοσία. 3 - ΒΑΣΙΚΗ ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΟΚΙΜΗΣ Monolisa HBs Ag ULTRA Το Monolisa HBs Ag ULTRA είναι µια ανοσοενζυµική τεχνική τύπου «σάντουιτς» µίας φάσης κατά την οποία χρησιµοποιούνται µονοκλωνικά και πολυκλωνικά αντισώµατα τα οποία επιλέγονται για την ικανότητά τους να δεσµεύονται µε τους διάφορους, επί του παρόντος αναγνωρισµένους από τον ΠΟΥ, υπο-τύπους του Ag HBs καθώς και µε τις περισσότερες παραλλαγές των στελεχών της ηπατίτιδας Β. Η στερεά φάση του Monolisa HBs Ag ULTRA ευαισθητοποιείται µε µονοκλωνικά αντισώµατα. Τα συζυγή του Monolisa HBs Ag ULTRA βασίζονται στη χρήση µονοκλωνικών αντισωµάτων ποντικιού και πολυκλωνικών αντισωµάτων αίγας κατά του Ag HBs. Τα αντισώµατα αυτά είναι συζευγµένα µε υπεροξειδάση. Η δοκιµή περιλαµβάνει τα ακόλουθα στάδια: 1) Κατανοµή των δειγµάτων και του ορού µάρτυρα στις κοιλότητες της µικροπλάκας. Η κατανοµή αυτή µπορεί να ελέγχεται οπτικά: πράγµατι, υπάρχει εµφανής διαφορά χρωµατισµού µεταξύ µιας κενής κοιλότητας και µιας κοιλότητας που περιέχει δείγµα. Μπορεί επίσης να ελεγχθεί µε φασµατοφωτοµετρική ανάγνωση στα 490/620-700 nm (προαιρετικό). 2) Κατανοµή του συζυγούς. Η κατανοµή αυτή µπορεί επίσης να ελέγχεται οπτικά: πράγµατι, µετά την προσθήκη του συζυγούς, η κοιλότητα γίνεται κόκκινη. Μπορεί να ελέγχεται µε φασµατοφωτοµετρική ανάγνωση στα 490/620-700 nm (προαιρετικό), όπως και η κατανοµή δειγµάτων µπορεί επίσης να ελέγχεται στο στάδιο αυτό της διαδικασίας µε φασµατοφωτοµετρική ανάγνωση στα 490/620-700 nm. 3) Μετά την επώαση επί µιάµιση ώρα στους 37 C το µη δεσµευµένο συζυγές απορρίπτεται µε έκπλυση.

4) Κατανοµή του διαλύµατος ανάπτυξης της ενζυµικής δραστικότητας. Η κατανοµή αυτή µπορεί επίσης να ελέγχεται οπτικά: υπάρχει σαφής διαφορά χρωµατισµού µεταξύ µιας κενής κοιλότητας και µιας κοιλότητας που περιέχει υπόστρωµα ροζ χρώµατος. Μπορεί να ελέγχεται και φασµατοφωτοµετρικά στα 490 nm (προαιρετικό). 5) Μετά από 30 λεπτά επώασης παρουσία υποστρώµατος στο σκοτάδι και σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (18-30 C), η παρουσία του συζυγούς καταδεικνύεται από την αλλαγή χρώµατος. 6) Κατανοµή του διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης. Η κατανοµή αυτή µπορεί επίσης να ελέγχεται οπτικά: Ο χρωµατισµός του υποστρώµατος, ροζ (για τα αρνητικά δείγµατα) ή µπλε (για τα θετικά δείγµατα), εξαφανίζεται από τις κοιλότητες οι οποίες γίνονται άχρωµες (για τα αρνητικά δείγµατα) ή κίτρινες (για τα θετικά δείγµατα) µετά από την προσθήκη διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης. 7) Ανάγνωση της οπτικής πυκνότητας (DO) στα 450/620-700 nm και ερµηνεία των αποτελεσµάτων.

4 - ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Monolisa HBs Ag ULTRA Όλα τα αντιδραστήρια προορίζονται αποκλειστικά για διαγνωστική χρήση in vitro. ΣΗΜΑΝΣΗ ΤΥΠΟΣ ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ ΠΑΡΟΥΣΙΑΣΗ 72346 72348 R1 ΜΙΚΡΟΠΛΑΚΑ: 1 5 12 ταινίες των 8 κοιλοτήτων µικροπλακέτα µικροπλακέτες ευαισθητοποιηµένες µε µονοκλωνικά αντισώµατα αντι-hbs (ποντικιού) R2 ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ΙΑΛΥΜΑ ΕΚΠΛΥΣΗΣ 1 φιαλίδιο 1 φιαλίδιο συµπυκνωµένο (20 φορές): 70 ml 1 x 235 ml Ρυθµιστικό διάλυµα Tris NaCI, ph = 7,4 Συντηρητικό : Προκλίνη 0,04% R3 ΑΡΝΗΤΙΚΟΣ ΜΑΡΤΥΡΑΣ : 2 φιαλίδια 2 φιαλίδια Ρυθµιστικό διάλυµα Tris HCl που περιέχει 2 x 2,5 ml 2 x 2,5 ml BSA. Συντηρητικό : Proclin 300 (0,1 %) R4 ΘΕΤΙΚΟΣ ΜΑΡΤΥΡΑΣ (Ανθρώπου): 1 φιαλίδιο 1 φιαλίδιο Ρυθµιστικό διάλυµα Tris HCl, που περιέχει 2,5 ml 2,5 ml BSA, στο οποίο προστέθηκε µίγµα καθαρών Ag HBs των υποτύπων ad και ay (ανθρώπου) Συντηρητικό : Proclin 300 (0,1 %) R6 ΙΑΛΥΜΑ ΣΥΖΥΓΟΥΣ: 1 φιαλίδιο 2 φιαλίδια Ρυθµιστικό διάλυµα Tris HCl ph 7,4 στο 8 ml 2 x 18 ml οποίο έχουν προστεθεί BSA, Tween 20, ανοσοσφαιρίνες βοείες και ποντικιού καθώς και ένας δείκτης χρώµατος ως µάρτυρας της απόθεσης Συντηρητικό : Ciprofloxacine (10 µg/ml), ProClin TM 300 (0,1 %) R7 ΣΥΖΥΓΕΣ : 1 φιαλίδιο 2 φιαλίδια Μονοκλωνικά αντισώµατα αντι-hbs qsp qsp ποντικιού και πολυκλωνικά αντισώµατα 8 ml 2 x 18ml αντι-hbs αίγας συζευγµένα µε την υπεροξειδάση. Λυοφιλιωµένο. R8 ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ΙΑΛΥΜΑ 1 φιαλίδιο 2 φιαλίδια ΥΠΟΣΤΡΩΜΑΤΟΣ ΜΕ ΥΠΕΡΟΞΕΙ ΑΣΗ 60 ml 2 x 60 ml ιάλυµα κιτρικού οξέως και ανθρακικού νατρίου ph 4,0 που περιέχει 0,015% υπεροξειδίου του υδρογόνου (H 2 O 2 ) και 4% διµεθυλοσουλφοξειδίου (DMSO) R9 ΧΡΩΜΟΓΟΝΟ ροζ χρώµατος: 1 φιαλίδιο 2 φιαλίδια διάλυµα τετραµεθυλικής βενζιδίνης (TMB) 5 ml 2 x 5 ml R10 ΙΑΛΥΜΑ ΙΑΚΟΠΗΣ ΤΗΣ 1 φιαλίδιο 3 φιαλίδια ΑΝΤΙ ΡΑΣΗΣ: 28 ml 3 x 28 ml ιάλυµα θειικού οξέως 1 Ν

5 - ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ Η αξιοπιστία των αποτελεσµάτων εξαρτάται από την ορθή τήρηση της ακόλουθης καλής εργαστηριακής πρακτικής : Μην χρησιµοποιείτε αντιδραστήρια των οποίων η ηµεροµηνία λήξης έχει παρέλθει. Μην αναµιγνύετε αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες κατά τη διάρκεια της ίδιας δοκιµής. Παρατήρηση : Η χρήση άλλων παρτίδων ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης ( R2, µε την σήµανση στην ετικέτα 20Χ, πράσινου χρώµατος) ρυθµιστικού διαλύµατος υποστρώµατος (R8 µε τη σήµανση στην ετικέτα TMB buf., µπλε χρώµατος), χρωµογόνου (R9 µε τη σήµανση στην ετικέτα TMB sol., πράσινου χρώµατος) και διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης (R10, µε τη σήµανση στην ετικέτα 1N, κόκκινου χρώµατος) διαφορετικών από αυτές που παρέχονται στο κιτ είναι εφικτή, υπό την προϋπόθεση να χρησιµοποιείται µόνο η ίδια παρτίδα κατά τη διάρκεια της ίδιας δοκιµής. Αυτά τα αντιδραστήρια µπορούν να χρησιµοποιούνται µε άλλα προϊόντα της Bio-Rad και, για περισσότερες πληροφορίες, επικοινωνήστε µε τις τεχνικές µας υπηρεσίες. Επιπλέον, το ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης (R2 µε την σήµανση στην ετικέτα 20Χ, πράσινου χρώµατος) µπορεί να παρασκευασθεί µε ανάµιξη µε τα άλλα 2 ρυθµιστικά διαλύµατα πλύσης που περιέχονται στις συσκευασίες διαφορετικών αντιδραστηρίων της εταιρείας Bio-Rad (R2 µε την σήµανση στην ετικέτα 10Χ, µπλέ χρώµατος ή 10Χ, πορτοκαλί χρώµατος) όταν πραγµατοποιείται σωστή ανασύσταση, παρέχοντας όµοια συγκέντρωση του υλικού σε κάθε κύκλο αναλύσεων. Πριν από τη χρήση, περιµένετε 30 λεπτά για τη σταθεροποίηση των αντιδραστηρίων σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (18-30 ) και µία ώρα για το αραιωµένο διάλυµα έκπλυσης (R2). Προβείτε σε προσεκτική ανασύσταση των αντιδραστηρίων, αποφεύγοντας κάθε µόλυνση. Μην διεξάγετε το τεστ παρουσία αντιδρώντων υδρατµών (οξέα, αλκαλικά, αλδεΰδες) ή κόνεων που θα µπορούσαν να αλλοιώσουν την ενζυµική δραστικότητα των συζυγών. Χρησιµοποιείτε γυάλινα είδη καλά πλυµένα και ξεπλυµένα µε απεσταγµένο νερό ή, κατά προτίµηση, υλικά µιας χρήσης. Μην αφήνετε τη µικροπλάκα να στεγνώσει κατά το διάστηµα µεταξύ της ολοκλήρωσης της έκπλυσης και της έναρξης κατανοµής των αντιδραστηρίων. Η ενζυµική αντίδραση είναι εξαιρετικά ευαίσθητη σε όλα τα µέταλλα ή στα ιόντα µετάλλων. Κατά συνέπεια, κανένα µεταλλικό στοιχείο δεν πρέπει να έρχεται σε επαφή µε τα διάφορα διαλύµατα που περιέχουν συζυγή ή υπόστρωµα. Το διάλυµα ανάπτυξης (ρυθµιστικό διάλυµα υποστρώµατος + χρωµογόνο) πρέπει να λαµβάνει ροζ χρώµα. Η εµφάνιση άλλου χρώµατος λίγα λεπτά µετά από την ανασύσταση υποδεικνύει ότι το αντιδραστήριο δεν είναι χρησιµοποιήσιµο και πρέπει να αντικατασταθεί. Για το παρασκεύασµα αυτό, χρησιµοποιείτε κατά προτίµηση τα πλαστικά δοχεία και το υλικό κατανοµής µίας χρήσης ή γυαλικά που έχουν πλυθεί προηγουµένως µε υδροχλωρικό οξύ 1 Ν, ξεπλυθεί µε απεσταγµένο νερό και είναι στεγνά. Φυλάξτε το διάλυµα αυτό µακριά από το φως. Χρησιµοποιείτε νέο ακροστόµιο κατανοµής για κάθε ορό. Η έκπλυση των κοιλοτήτων αποτελεί βασικό στάδιο της διαδικασίας : τηρείτε τον αριθµό κύκλων έκπλυσης που προδιαγράφεται, και βεβαιωθείτε ότι όλες οι κοιλότητες γεµίζονται πλήρως και, στη συνέχεια, εκκενώνονται πλήρως. Μια ανεπαρκής έκπλυση µπορεί να αποφέρει εσφαλµένα αποτελέσµατα. Ποτέ µην χρησιµοποιείτε το ίδιο δοχείο για να κατανείµετε το συζυγές και το διάλυµα ανάπτυξης χρώµατος. Επαληθεύστε την ακρίβεια των πιπετών και την καλή λειτουργία των χρησιµοποιούµενων συσκευών. Μην τροποποιείτε το πρωτόκολλο της διαδικασίας.

6 - Ο ΗΓΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΥΓΙΕΙΝΗ ΚΑΙ ΤΗΝ ΑΣΦΑΛΕΙΑ Όλα τα αντιδραστήρια του κιτ προορίζονται για διαγνωστική χρήση "in vitro". Κατά το χειρισµό των αντιδραστηρίων και των δειγµάτων, φοράτε γάντια µίας χρήσης και, µετά από τον χειρισµό, πλένετε καλά τα χέρια σας. Μην αναρροφάτε µε το στόµα. Ο θετικός µάρτυρας (R4) περιέχει καθαρό Ag HBs υποτύπων ad και ay ανθρώπινου πλάσµατος, αρνητικού στα αντισώµατα αντι-hiv1 και 2 και στα αντισώµατα αντι-hcv, που κατέστη ανενεργός µέσω θερµότητας. εδοµένου ότι καµία γνωστή µέθοδος δεν µπορεί να εγγυηθεί κατά τρόπον απόλυτο την απουσία ιού HIV, HBV, HCV ή άλλων λοιµογόνων παραγόντων, τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης καθώς και τα δείγµατα των ασθενών πρέπει να θεωρούνται ως δυνητικά λοιµογόνα και να λαµβάνονται προφυλάξεις κατά τη χρήση τους. Το υλικό που έρχεται σε απευθείας επαφή µε τα δείγµατα και τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης καθώς και τα ρυθµιστικά διαλύµατα, πρέπει να θεωρούνται ως µολυσµένα προϊόντα. Αποφεύγετε την εκτίναξη δειγµάτων ή διαλυµάτων που περιέχουν δείγµατα. Οι µολυσµένες επιφάνειες πρέπει να καθαρίζονται µε λευκαντικό αραιωµένο 10 %. Εάν το µολυσµατικό ρευστό είναι οξύ, οι µολυσµένες επιφάνειες πρέπει αρχικά να αδρανοποιούνται µε διτανθρακικό νάτριο και στη συνέχεια να καθαρίζονται µε λευκαντικό και να στεγνώνονται µε απορροφητικό χαρτί. Το υλικό που χρησιµοποιείται για τον καθαρισµό πρέπει να απορρίπτεται σε ειδικό δοχείο για µολυσµατικά απορρίµµατα. Τα δείγµατα, τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης καθώς και το µολυσµατικό υλικό και τα προϊόντα πρέπει να απορρίπτονται µετά από απολύµανση : - είτε µέσω διαβροχής σε λευκαντικό τελικής συγκέντρωσης υποχλωριώδους νατρίου 5 % (1 µέρος λευκαντικού για 10 µέρη µολυσµένου ρευστού ή νερού) επί 30 λεπτά, - ή µέσω αποστείρωσης σε αυτόκλειστο κλίβανο στους 121 C επί τουλάχιστον 2 ώρες. Ο αυτόκλειστος κλίβανος αποτελεί την καλύτερη µέθοδο για την αδρανοποίηση των ιών HIV και HBV. ΠΡΟΣΟΧΗ : ΜΗΝ ΕΙΣΑΓΕΤΕ ΣΤΟΝ ΚΛΙΒΑΝΟ ΑΠΟΣΤΕΙΡΩΣΗΣ ΙΑΛΥΜΑΤΑ ΤΑ ΟΠΟΙΑ ΠΕΡΙΕΧΟΥΝ ΥΠΟΧΛΩΡΙΩ ΕΣ ΝΑΤΡΙΟ. Πριν να τα απορρίψετε στον νιπτήρα, µην ξεχνάτε να αδρανοποιείτε και/ή να αποστειρώνετε σε κλίβανο τα διαλύµατα ή τα υπολείµµατα της πλύσης ή οποιοδήποτε ρευστό το οποίο περιέχει βιολογικά δείγµατα. Το δελτίο δεδοµένων ασφαλείας διατίθεται κατόπιν παραγγελίας. Ο χειρισµός και η απόρριψη των χηµικών προϊόντων πρέπει να διεξάγονται σύµφωνα µε την καλή εργαστηριακή πρακτική. Αποφεύγεται οιαδήποτε επαφή του δέρµατος και των βλεννογόνων µε το ρυθµιστικό διάλυµα υποστρώµατος, το χρωµογόνο και το διάλυµα διακοπής της αντίδρασης (κίνδυνοι τοξικότητας, ερεθισµού και εγκαυµάτων). Ορισµένα αντιδραστήρια περιέχουν Προκλίνη 300 (0.04%, 0.1% και/ή 0.5%). R43 : µπορεί να προκαλέσει ερεθισµό εάν έρθει σε επαφή µε το δέρµα. S28-37: Έπειτα απο επαφή µε το δέρµα, πλυθείτε αµέσως µε άφθονο νερό και σαπούνι. Φορέστε ειδικό προστατευτικό ρουχισµό.

7 - ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΟ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΟ ΥΛΙΚΟ Απεσταγµένο νερό. Υποχλωριώδες νάτριο (λευκαντικό) και διτανθρακικό νάτριο. Αυτόµατες ή ηµιαυτόµατες πιπέτες ρυθµιζόµενης ή σταθερής αναρρόφησης, χωρητικότητας 50 µl, 100 µl, 1000 µl και 10 ml. Βαθµονοµηµένοι κύλινδροι χωρητικότητας 100 ml και 1.000 ml. οχείο µολυσµατικών απορριµµάτων. Υδατόλουτρο, ή ξηρός επωαστήρας*, µε δυνατότητα ρύθµισης της θερµοκρασίας στους 37 C ± 1 C(*). Σύστηµα έκπλυσης µικροπλακετών, αυτόµατο*, ηµιαυτόµατο* ή χειροκίνητο. Συσκευή ανάγνωσης* µικροπλακετών εξοπλισµένη µε φίλτρα 450, 490 και 620-700 nm. Απορροφητικό χαρτί. (*) Για εµπεριστατωµένη πληροφόρηση σχετικά µε τις εγκεκριµένες από τις τεχνικές µας υπηρεσίες συσκευές, επικοινωνήστε µαζί µας. 8 - ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΩΝ ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ Πριν από τη χρήση των αντιδραστηρίων του κιτ Monolisa 0 HBs Ag ULTRA, αφήστε τα να σταθεροποιηθούν στη θερµοκρασία περιβάλλοντος (18-30 C). 1) Αντιδραστήρια έτοιµα για χρήση Αντιδραστήριο 1 (R1): Μικροπλάκα Κάθε µικροπλάκα που περιέχει 12 ταινίες είναι πακεταρισµένη σε µία συσκευασία αεροστεγώς κλεισµένη. Ανοίξτε την συσκευασία µε ψαλίδι κόβωντας 0,5 εώς 1 εκατοστό πιο πάνω απο τον µηχανισµό zip της συσκευασίας. Ανοίξτε την συσκευασία και αφαιρέστε την µικροπλάκα. Επανατοποθετήστε τις µη χρησιµοποιηµένες ταινίες µέσα στην συσκευασία. Κλείστε προσεκτικά την συσκευασία και τοποθετήστε την στο ψυγείο στους +2-8 C. Αντιδραστήριο 3 (R3): Αρνητικός µάρτυρας Αντιδραστήριο 4 (R4): Θετικός µάρτυρας Αντιδραστήριο 10 (R10): ιάλυµα διακοπής της αντίδρασης 2) Αντιδραστήρια προς ανασύσταση ιάλυµα έκπλυσης (συµπυκνωµένο 20x): Αντιδραστήριο 2 (R2) Αραιώστε το διάλυµα πλύσης σε αναλογία 1:20 σε απεσταγµένο νερό για να έχετε έτοιµο πρός χρήση ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης. Ετοιµάστε 800 ml για µία µικροπλάκα των 12 ταινιών. Συζυγές (R6 + R7) Κτυπήστε ελαφρά στον πάγκο εργασίας τη φιάλη του λυοφιλιωµένου συζυγούς (R7) για να αποκολληθούν τα συστατικά που ενδεχοµένως έχουν κολλήσει στο ελαστικό πώµα. Ανοίξτε τη φιάλη του λυοφιλιωµένου συζυγούς (R7). Προσθέστε στη φιάλη το περιεχόµενο ενός δοχείου µε αραιωτικό συζυγούς (R6). Κλείστε µε το πώµα και, οµοιογενοποιώντας κατά διαστήµατα προς διευκόλυνση της διάλυσης, αφήστε το διάλυµα να ηρεµήσει επί 10 λεπτά. ιάλυµα ενζυµικής ανάπτυξης (R8 + R9) Αραιώστε το αντιδραστήριο R9 στο αντιδραστήριο R8 κατά 1/11 (παράδειγµα: 1 ml αντιδραστηρίου R9 σε 10 ml αντιδραστηρίου R8) λαµβάνοντας υπόψη ότι τα 10 ml είναι αναγκαία και επαρκή για την επεξεργασία των 12 ταινιών. Αυτό το διάλυµα παραµένει σταθερό στο σκοτάδι επί 6 ώρες. Οµοιογενοποιήστε.

9 - ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ - ΧΡΟΝΟΣ ΙΑΤΗΡΗΣΗΣ Αποθηκεύστε το κιτ πριν από τη χρήση στους + 2 έως 8 C. Κάθε στοιχείο του το κιτ Monolisa HBs Ag ULTRA που διατηρείται σε θερµοκρασία µεταξύ +2 και 8 C µπορεί να χρησιµοποιηθεί µετά το πρώτο άνοιγµά του µέχρι την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται επάνω στο κουτί, εκτός εάν υπάρχουν ειδικές υποδείξεις: R1 : Μετά το άνοιγµα, οι ταινίες διατηρούνται στο αρχικό τους σακουλάκι το οποίο πρέπει και να κλείνετε προσεκτικά ενώ διατηρούνται σε θερµοκρασία +2 έως 8 C, και µπορούν να χρησιµοποιηθούν σε διάστηµα 4 εβδοµάδων. R2 : Το ανασυστηµένο ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης µπορεί να αποθηκευθεί στους +2-8 C για 2 εβδοµάδες. Το συµπυκνωµένο ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης (R2) µπορεί να αποθηκευθεί στους +2-30 C. R6 + R7 : Το διάλυµα του συζυγούς διατηρείται στους +2 έως 8 C επί ένα µήνα ενώ, σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (18-30 C) µπορεί να χρησιµοποιηθεί επί 8 ώρες. R8+R9 : Μετά την ανασύσταση, το διάλυµα ανάπτυξης διατηρείται στο σκοτάδι και σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (18-30 C) επί 6 ώρες. 10 - ΕΙΓΜΑΤΑ Συλλέξτε δείγµα αίµατος σύµφωνα µε τη συνήθη πρακτική. Οι δοκιµές πραγµατοποιούνται επί µη αραιωµένων δειγµάτων ορού ή πλάσµατος (τα οποία έχουν συλλεχθεί µε αντιπηκτικά όπως τα EDTA, ηπαρίνη, κιτρικό οξύ, ACD). Εξάγετε τον ορό ή το πλάσµα από το πήγµα ή τα ερυθρά αιµοσφαίρια το ταχύτερο δυνατόν για να αποφύγετε την αιµόλυση. Η εκτεταµένη αιµόλυση ενδέχεται να επηρεάσει τις επιδόσεις της δοκιµής. είγµατα τα οποία περιέχουν συσσωµατώµατα πρέπει να καθαρίζονται µε φυγοκέντρηση πριν από τη διεξαγωγή της δοκιµής. Τα αιωρούµενα συσσωµατώµατα ή ινώδη σωµατίδια είναι πιθανόν να προκαλέσουν πλασµατικά θετικά αποτελέσµατα. Τα δείγµατα µπορούν να διατηρηθούν στους + 2 έως 8 C εάν η δοκιµή προσδιορισµού διεξάγεται εντός 7 ηµερών ή µπορούν να διατηρούνται στην κατάψυξη στους -20 C επί πολλούς µήνες. Αποφεύγετε επαναλαµβανόµενες καταψύξεις/αποψύξεις. είγµατα τα οποία έχουν υποστεί κατάψυξη και απόψυξη πάνω από 3 φορές δεν πρέπει να χρησιµοποιούνται. Εάν τα δείγµατα πρόκειται να µεταφερθούν, συσκευάστε τα σύµφωνα µε τους κανονισµούς σχετικά µε τη µεταφορά αιτιολογικών παραγόντων και, κατά προτίµηση, µεταφέρετέ τα κατεψυγµένα. ΜΗΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΕ ΜΟΛΥΣΜΕΝΟΥΣ, ΥΠΕΡΛΙΠΑΙΜΙΚΟΥΣ ΟΡΟΥΣ Ή ΟΡΟΥΣ ΠΟΥ ΕΧΟΥΝ ΥΠΟΣΤΕΙ ΥΠΕΡΑΙΜΟΛΥΣΗ. Παρατήρηση : είγµατα τα οποία περιέχουν έως 90 g/l αλµπουµίνης και 100 mg/l χολυρεθρίνης, λιπαιµικά δείγµατα τα οποία περιέχουν έως και 36 g/l τριελαΐνης, και δείγµατα τα οποία έχουν υποστεί αιµόλυση και τα οποία περιέχουν έως και 1 g/l αιµοσφαιρίνης, δεν επηρεάζουν τα αποτελέσµατα της δοκιµής. 11 - ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ ΟΚΙΜΗΣ Ακολουθήστε αυστηρά το προτεινόµενο πρωτόκολλο. Για την επικύρωση των αποτελεσµάτων της δοκιµής, χρησιµοποιήστε τους θετικούς (R4) και αρνητικούς (R3) µάρτυρες σε κάθε σειρά δοκιµών προσδιορισµού. 97

Ακολουθήστε την ορθή εργαστηριακή πρακτική. 1) Σχεδιάστε µε επιµέλεια την κατανοµή και αναγνώριση των δειγµάτων. 2) Ετοιµάστε το διάλυµα έκπλυσης R2 (βλ. κεφάλαιο 8). 3) Ετοιµάστε το διάλυµα συζυγούς (R6 + R7) (βλ. κεφάλαιο 8). 4) Βγάλτε από την προστατευτική συσκευασία το πλαίσιο στήριξης και τον αναγκαίο αριθµό ταινιών (R1). Βάλτε στη συσκευασία τις ταινίες που δεν χρησιµοποιείτε και κλείστε την. 5) Κατανείµετε στις κοιλότητες µε την εξής σειρά (προτεινόµενο σχέδιο κατανοµής στην πλακέτα): Κοιλότητες A1, B1, C1 και D1 : 100 µl αρνητικού µάρτυρα (R3) Κοιλότητα Ε1: 100 µl θετικού µάρτυρα (R4) Κοιλότητα F1: 100 µl του πρώτου υπό δοκιµή δείγµατος, υπό την προϋπόθεση ότι η κοιλότητα αυτή δεν χρησιµοποιείται ως µάρτυρας επικύρωσης (επιβεβαίωσης) της απόθεσης δειγµάτων και συζυγούς (προαιρετικό) Κοιλότητες G1, H1,... κτλ: 100 µl του υπό δοκιµή δείγµατος. Ανάλογα µε το χρησιµοποιούµενο σύστηµα, η τροποποίηση των θέσεων των µαρτύρων είναι εφικτή. NB: Η κατανοµή των δειγµάτων µπορεί να ελεγχθεί στο στάδιο αυτό της διαδικασίας αφού, πράγµατι, η διαφορά χρωµατισµού µεταξύ µιας κενής κοιλότητας και µιας κοιλότητας που περιέχει δείγµα είναι εµφανής (βλ. κεφάλαιο 14 για την αυτόµατη επιβεβαίωση - ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΗ ΤΗΣ ΑΠΟΘΕΣΗΣ ΕΙΓΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΤΟΥ ΣΥΖΥΓΟΥΣ) 6) Ανακινήστε το διάλυµα του συζυγούς πριν από τη χρήση. Οµοιογενοποιήστε. Κατανείµετε 50 µl διαλύµατος ανασύστασης του συζυγούς (R6 + R7) µέσα σε όλες τις κοιλότητες. NB: Η κατανοµή των δειγµάτων µπορεί επίσης να ελεγχθεί οπτικά στο στάδιο αυτό της διαδικασίας, όπως και η κατανοµή του συζυγούς µπορεί εξίσου να ελεγχθεί οπτικά : µετά την προσθήκη του συζυγούς, οι κοιλότητες που περιέχουν δείγµατα γίνονται κόκκινες. (βλ. κεφάλαιο 14 για την αυτόµατη επιβεβαίωση - ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΗ ΤΗΣ ΑΠΟΘΕΣΗΣ ΕΙΓΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΤΟΥ ΣΥΖΥΓΟΥΣ 7) Εάν είναι εφικτό, καλύψτε µε συγκολλητική ταινία και επωάστε επί 1 ώρα και 30 λεπτά ± 5 λεπτά στους 37± 1 C. 8) Αφαιρέστε την συγκολλητική ταινία, αναρροφήστε το περιεχόµενο κάθε κοιλότητας και πλύνετε τουλάχιστον 5 φορές. Ο υπολειπόµενος όγκος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 10 µl (ενδεχοµένως στεγνώστε την πλακέτα αναποδογυρίζοντάς την σε ένα φύλλο απορροφητικού χαρτιού). 9) Κατανείµετε γρήγορα σε όλες τις κοιλότητες 100 µl διαλύµατος ανάπτυξης της ενζυµικής δραστικότητας (R8 + R9) που ετοιµάσατε εκ των προτέρων. Αφήστε την αντίδραση να εξελιχθεί στο σκοτάδι επί 30 ± 5 λεπτά και σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (18 έως 30 C). Κατά τη διάρκεια αυτής της επώασης µη χρησιµοποιείτε συγκολλητική ταινία. N.B. : Η κατανοµή του διαλύµατος ανάπτυξης, το οποίο γίνεται ροζ χρώµατος, µπορεί να ελεγχθεί οπτικά στο στάδιο αυτό της διαδικασίας: Υπάρχει σαφής διαφορά χρωµατισµού µεταξύ µιας κενής κοιλότητας και µιας κοιλότητας που περιέχει διάλυµα ανάπτυξης ροζ χρώµατος. (βλέπε κεφάλαιο 14 για την αυτόµατη επιβεβαίωση - ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΗ ΤΗΣ ΑΠΟΘΕΣΗΣ ΕΙΓΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΩΝ)

10) Προσθέστε 100 µl διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης (R10) ακολουθώντας την ίδια αλληλουχία και ρυθµό κατανοµής µε αυτήν του διαλύµατος ανάπτυξης. Οµοιογενοποιήστε το αντιδρών µίγµα. N.B. : Η κατανοµή του διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης, το οποίο είναι άχρωµο, µπορεί να ελεγχθεί οπτικά στο στάδιο αυτό της διαδικασίας. Ο χρωµατισµός του υποστρώµατος, ροζ (για τα αρνητικά δείγµατα) ή µπλε (για τα θετικά δείγµατα), εξαφανίζεται από τις κοιλότητες οι οποίες γίνονται άχρωµες (για τα αρνητικά δείγµατα) ή κίτρινες (για τα θετικά δείγµατα) µετά από την προσθήκη διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης. 11) Σκουπίστε προσεκτικά το κάτω µέρος των πλακετών. Περιµένετε τουλάχιστον 4 λεπτά µετά από την κατανοµή του διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης και προβείτε στην ανάγνωση της οπτικής πυκνότητας στα 450/620 nm µέσω της συσκευής ανάγνωσης πλακετών εντός των 30 λεπτών από την διακοπή της αντίδρασης. 12) Πριν από την καταγραφή των αποτελεσµάτων, βεβαιωθείτε για την συνάφεια µεταξύ ανάγνωσης και σχεδίου κατανοµής και αναγνώρισης των πλακετών των δειγµάτων. 12-ΠΡΟΣΑΡΜΟΓΗ ΤΟΥ ΣΥΣΤΗΜΑΤΟΣ ΕΚΠΛΥΣΗΣ Πλύση: Για την επίτευξη των µέγιστων επιδόσεων του τεστ, η αυστηρή τήρηση των διαδικασιών πλυσίµατος είναι απαραίτητη. Για ορισµένες διατάξεις έκπλυσης, ίσως χρειασθεί να βελτιστοποιήσετε τη διαδικασία πλυσίµατος (αύξηση του αριθµού πλύσεων και/ή του όγκου του ρυθµιστικού διαλύµατος έκπλυσης για κάθε πλύσιµο, διάρκεια διαβροχής) προκειµένου να επιτευχθεί η αποδεκτή στάθµη «θορύβου βάθους» της οπτικής πυκνότητας για τα αρνητικά δείγµατα. Για τις ειδικές διαδικασίες και τις προσαρµογές επικοινωνήστε µαζί µας. 13 - ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ 1) Υπολογισµός της µέσης οπτικής πυκνότητας (DO) του αρνητικού µάρτυρα : DO R3 Παράδειγµα: Αρνητικός µάρτυρας R3 DO 1 2 3 4 0,030 0,031 0,032 0,027 Σύνολο DO R3 = 0,120 Σύνολο DO R3 /4 = 0,030 = µέση DO R3 2) Υπολογισµός της τιµής κατωφλίου Για κάθε πλακέτα, η τιµή κατωφλίου (οριακή) είναι ίση µε: DO R3 + 0,050 Παράδειγµα: DO R3 + 0,030 Τιµή κατωφλίου = 0,030 + 0,050 = 0,080 3)Κριτήρια επικύρωσης της δοκιµής

Όλες οι τιµές του αρνητικού µάρτυρα πρέπει να είναι µικρότερες ή ίσες µε 0,080 µονάδες οπτικής πυκνότητας. Η τιµή του θετικού µάρτυρα (DO R4) πρέπει να είναι µεγαλύτερη ή ίση µε 1,000. Εάν η τιµή κατωφλίου του αρνητικού µάρτυρα δεν ικανοποιεί την πρότυπη τιµή ή είναι µεγαλύτερη περισσότερο από 40 % σε σχέση µε την µέση τιµή των αρνητικών µαρτύρων (DO R3), απορρίψτε την και επαναλάβετε τον υπολογισµό της µέσης τιµής του αρνητικού µάρτυρα µε τις υπόλοιπες 3 τιµές. Μόνο µία τιµή µπορεί να απορριφθεί. Εάν όλοι οι µάρτυρες έχουν τιµές που δεν εµπίπτουν στο εύρος τιµών που υποδεικνύεται παρακάτω, η δοκιµή πρέπει να επαναληφθεί. 4) Υπολογισµός των λόγων Για κάθε δείγµα υπολογίστε τον λόγο: DO δείγµατος Λόγος = --------------------------- τιµή κατωφλίου 5) Ερµηνεία των αποτελεσµάτων Τα δείγµατα των οποίων ο λόγος είναι µικρότερος από 1, σύµφωνα µε τη δοκιµή Monolisa HBs Ag ULTRA θεωρούνται αρνητικά. Τα δείγµατα των οποίων ο λόγος κυµαίνεται µεταξύ 0,9 και 1 πρέπει να ερµηνεύονται µε προσοχή. Όταν τα χρησιµοποιούµενα συστήµατα και οι εργαστηριακές διαδικασίες το επιτρέπουν, συνιστάται η εις διπλούν επανάληψη των σχετικών δειγµάτων. Τα δείγµατα των οποίων ο λόγος είναι µεγαλύτερος του 1, αρχικά θεωρούνται ως θετικά και επιβάλλεται, πριν από την ερµηνεία του αποτελέσµατος, η εις διπλούν επανάληψη της δοκιµής τους. Εάν µετά από την επανάληψη της δοκιµής ενός δείγµατος ο λόγος των 2 ανατύπων είναι µικρότερος από 1, το αρχικό αποτέλεσµα θεωρείται µη αναπαραγώµιµο και το δείγµα, σύµφωνα µε τη δοκιµή Monolisa HBs Ag ULTRA δηλώνεται ως αρνητικό. Εάν µετά από την επανάληψη της δοκιµής ένας τουλάχιστον λόγος από τα 2 ανάτυπα είναι ίσος ή µεγαλύτερος από 1, τα αρχικό αποτέλεσµα είναι αναπαραγώγιµο και το δείγµα, σύµφωνα µε τη δοκιµή Monolisa HBs Ag ULTRA, θεωρείται θετικό, λαµβανοµένων υπόψη των ορίων της δοκιµής που περιγράφονται παρακάτω. Τα δείγµατα που υποβλήθηκαν εις διπλούν δοκιµή και, σύµφωνα µε τη δοκιµή Monolisa HBs Ag ULTRA βρέθηκαν αρνητικά αλλά µία εκ των τιµών τους είναι κοντά στην τιµή κατωφλίου (λόγος µεταξύ 0,9 και 1) θα πρέπει να ερµηνεύονται µε προσοχή. Συνιστάται η επανάληψη της δοκιµής σε αυτούς τους ασθενείς µε άλλες µεθόδους ή επί άλλου δείγµατός τους. Για την επιβεβαίωση της ειδικότητας της αντίδρασης, οιοδήποτε δείγµα που, σύµφωνα µε τα κριτήρια ερµηνείας της δοκιµής Monolisa HBs Ag ULTRA, είναι θετικό, θα πρέπει να επιβεβαιώνεται µέσω τεχνικής αδρανοποίησης του Ag HBs.

Οι συχνότερες αιτίες της µη επαναληψιµότητας των αποτελεσµάτων των αντιδράσεων είναι: Ακατάλληλη έκπλυση των µικροπλακετών. Μόλυνση των αρνητικών δειγµάτων του ορού ή του πλάσµατος από υψηλή συγκέντρωση Ag HBs.. Μόλυνση του διαλύµατος ανάπτυξης από χηµικούς οξειδωτικούς παράγοντες (λευκαντικό, µεταλλικά ιόντα κτλ ).. ). Μόλυνση του διαλύµατος διακοπής της αντίδρασης. 14-ΦΑΣΜΑΤΟΦΩΤΟΜΕΤΡΙΚΗ ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΗ ΤΗΣ ΑΠΟΘΕΣΗΣ ΤΩΝ ΕΙΓΜΑΤΩΝ ΚΑΙ ΤΟΥ ΣΥΖΥΓΟΥΣ - Επιβεβαίωση της απόθεσης των δειγµάτων και του συζυγούς: 1) Επιβεβαίωση της απόθεσης των δειγµάτων Η παρουσία δειγµάτων µέσα στις κοιλότητες µπορεί να ελεγχθεί, πριν από την κατανοµή του συζυγούς, µε φασµατοφωτοµετρική ανάγνωση στα 490/620-700 nm : µια κοιλότητα που περιέχει δείγµα έχει οπτική πυκνότητα (DO) µεταξύ 0,050 και 0,900. Παρατήρηση : υπάρχει εµφανής διαφορά χρωµατισµού µεταξύ µιας κενής κοιλότητας (διάφανη) και µιας κοιλότητας που περιέχει δείγµα (ελαφρώς κίτρινη). 2) Επιβεβαίωση της απόθεσης του συζυγούς Μετά από την επιβεβαίωση της παρουσίας δειγµάτων µε τη φασµατοφωτοµετρική µέθοδο που περιγράφηκε προηγουµένως, η προσθήκη του συζυγούς µπορεί πλέον να ελεγχθεί µε φασµατοφωτοµετρική ανάγνωση στα 490-620/700 nm: µια κοιλότητα που περιέχει συζυγές, έχει οπτική πυκνότητα µεγαλύτερη από 1,100. Παρατήρηση : Οι κοιλότητες που περιέχουν δείγµατα είναι κιτρινωπού χρώµατος και µετά την προσθήκη χρωµατισµένου συζυγούς γίνονται κόκκινες. 3) Ταυτόχρονη επιβεβαίωση απόθεσης δειγµάτων και συζυγούς (µόνο µε φασµατοφωτοµετρική τεχνική). Εάν η παρουσία δειγµάτων δεν επιβεβαιώνεται µέσω αυτόµατης ανάγνωσης όπως περιγράφηκε προηγουµένως, τότε η ταυτόχρονη παρουσία δειγµάτων και συζυγούς µέσα στις κοιλότητες µπορεί να ελεγχθεί µε αυτόµατη ανάγνωση στα 490/620-700 nm υπό την προϋπόθεση να υπάρχει µια κοιλότητα µόνο µε συζυγές. Η διαφορά των οπτικών τους πυκνοτήτων πρέπει να είναι µεγαλύτερη από 0,35 σύµφωνα µε την παρακάτω εξίσωση: [ DO (δείγµα + συζυγές) - DO συζυγές µόνο ] 0,35 - Επιβεβαίωση της απόθεσης διαλύµατος ανάπτυξης: Η παρουσία του ροζ διαλύµατος ανάπτυξης µπορεί να ελεγχθεί µε αυτόµατη ανάγνωση στα 490nm : µια κοιλότητα που περιέχει διάλυµα ανάπτυξης πρέπει να έχει οπτική πυκνότητα µεγαλύτερη από 0,100 (µικρότερη οπτική πυκνότητα υποδεικνύει ανεπαρκή κατανοµή του διαλύµατος ανάπτυξης). 15 - ΕΠΙ ΟΣΕΙΣ Οι επιδόσεις του Monolisa HBs Ag ULTRA προσδιορίσθηκαν βάσει δοκιµών που διενεργήθηκαν σε δείγµατα τυχαίων αιµοδοτών, δείγµατα νοσηλευοµένων ασθενών προσβεβληµένων από οξεία ηπατίτιδα Β, χρόνια ηπατίτιδα Β, δείγµατα ασθενών που

παρουσιάζουν διάφορες παθολογίες άσχετες µε τον ιό της ηπατίτιδας Β, δείγµατα εµπορίου καθώς και δείγµατα από πάνελ (σύνολα) οροµετατροπής. Το όριο ευαισθησίας αξιολογήθηκε βάσει του γαλλικού συνόλου (πάνελ) της SFTS και του προτύπου του ΠΟΥ. Ειδικότητα Σε 9894 τυχαίους αιµοδότες που προέρχονται από 3 διαφορετικές περιοχές, η ειδικότητα εκτιµήθηκε στο 99,94 % (9887/9893). Μία αντίδραση ενός δείγµατος, η οποία επαναλήφθηκε, επιβεβαιώθηκε ως θετική για το Ag HBs. Η µελέτη της ειδικότητας διεξήχθη σε νοσοκοµειακό εργαστήριο (Κέντρο Αιµατολογίας). Επί 200 νοσοκοµειακών δειγµάτων που υποβλήθηκαν στη δοκιµή, 2 δείγµατα βρέθηκαν κατ' επανάληψη αντιδρώντα (το ένα, αµφισβητούµενο κατά την πρώτη δοκιµή (λόγος = 0,97), επιβεβαιώθηκε ως θετικό µετά από την επανάληψη της δοκιµής (λόγος = 1,87), ενώ το δεύτερο είχε λόγους 2,29 και 1,99). 289 ασθενείς µε παθολογίες ή καταστάσεις άσχετες προς την ηπατίτιδα Β (έγκυες γυναίκες, ρευµατοειδής παράγοντας, αντι-πυρηνικό Ig, Ig ποντικού ή άλλες ιικές ή βακτηριακές µολύνσεις) υπεβλήθησαν σε δοκιµή µε Monolisa HBs Ag ULTRA. 11 δείγµατα βρέθηκαν κατ' επανάληψη θετικά και ελέγχθηκαν µε µια δοκιµή EIA του εµπορίου καθώς και µε τη βοήθεια δοκιµής αδρανοποίησης. 10 από τα 11 κατ' επανάληψη θετικά δείγµατα που δοκιµάσθηκαν µε το MONOLISA HBs Ag ULTRA, επιβεβαιώθηκαν ως θετικά µε τη δοκιµή αυτή Ag HBs EIA του εµπορίου. Ένα εκ των δειγµάτων προέκυψε απροσδιόριστο µε τη δοκιµή αδρανοποίησης και αφαιρέθηκε από τον τελικό υπολογισµό. 2 εκ των δειγµάτων δεν αδρανοποιήθηκαν. Το ένα προερχόταν από δείγµα θετικό στο IgG HSV και το άλλο από δείγµα µε µυέλωµα, επίσης θετικό µε τη δοκιµή EIA του εµπορίου που χρησιµοποιήθηκε και η ειδικότητά του εκτιµήθηκε στο 99,28 % (276/278). Τα υπόλοιπα 9 θετικά στο IgG HSV δείγµατα και τα 9 δείγµατα µε µυέλωµα βρέθηκαν αρνητικά µε τη δοκιµή Monolisa HBs Ag ULTRA. ιαγνωστική ευαισθησία: Το όριο ευαισθησίας της δοκιµής εκτιµήθηκε ως µικρότερο από 0,06 ng/ml Ag HBs, βάσει του γαλλικού πάνελ SFTS 2001. Το όριο ανίχνευσης έχει υπολογιστεί λιγότερο από 0.130 IU / ml µε τη δοκιµή του ΠΟΥ 2ο Διεθνές πρότυπο Κωδικός NIBSC 00/588 και βρέθηκε σε 0.025 IU / ml ΔΕ95% [0,019 έως 0,037 IU / ml]. Οι ακόλουθοι υποτύποι του πάνελ SFTS 2001: adw2, adw4, adr, ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayw5 και ayr, βρέθηκαν όλοι θετικοί και ο λόγος τους, µε τη δοκιµή Monolisa HBs Ag ULTRA, ήταν µεγαλύτερος από 5. Ευαισθησία Οι µελέτες ευαισθησίας που διεξήχθησαν σε 428 θετικά δείγµατα παρακολουθούµενων ασθενών προσβεβληµένων από χρόνια ηπατίτιδα Β και οξεία ηπατίτιδα Β κατέδειξαν βαθµό ευαισθησίας 100 %. Ένα πάνελ µε 15 ανασυνδυαζόµενες πρωτεΐνες που µιµούνται τις πλέον σηµαντικές µεταλλάξεις των ακολουθιών των αµινοξέων του Ag HBs, υποβλήθηκε σε δοκιµή και ανιχνεύθηκε µε Monolisa HBs Ag ULTRA. Σύνολο από 60 πάνελ του εµπορίου οροµετατροπής ηπατίτιδας Β (293 δείγµατα) υπεβλήθη σε δοκιµή και σύγκριση µε διαθέσιµα στο εµπόριο προϊόντα ανασοενζυµικής δοκιµής. Σε 29 πάνελ οροµετατροπής, µε το Monolisa HBs Ag ULTRA προέκυψαν αποτελέσµατα ισοδύναµα µε αυτά του Monolisa HBs Ag Plus.

Με το Monolisa HBs Ag ULTRA ανιχνεύθηκαν 28 οροµετατροπές µε 1 λήψη λιγότερο, 2 οροµετατροπές µε δύο λιγότερες λήψης και 1 οροµετατροπή µε 5 λιγότερες λήψης. 25 επιπλέον φρέσκα θετικά δείγµατα (εντός 1 ηµέρας µετά τη συλλογή του αίµατος) ελέγχθηκαν και όλοι βρέθηκαν θετικά. Ακρίβεια Η ακρίβεια της δοκιµής Monolisa HBs Ag ULTRA προσδιορίσθηκε µε ανάλυση 4 δειγµάτων: 1 αρνητικό δείγµα, 2 δείγµατα θετικά στο Ag HBs (δείγµα 2 και 3) και ένα δείγµα άκρως θετικό στο Ag HBs. Η επαναληψιµότητα (εντός της ίδιας δοκιµής) αξιολογήθηκε µε την ανάλυση των 4 αυτών δειγµάτων που δοκιµάσθηκαν 30 φορές µε την ίδια δοκιµή. Η αναπαραγωγιµότητα (σειράς δοκιµών) αξιολογήθηκε µε την ανάλυση των 4 ίδιων δειγµάτων που δοκιµάσθηκαν εις διπλούν επί 20 ηµέρες, µε δύο ανεξάρτητες δοκιµές ηµερησίως. Τα αποτελέσµατα απεικονίζονται στους ακόλουθους πίνακες: Πίνακας 1: Επαναληψιµότητα κατά την ίδια δοκιµή n = 30 δείγµα 1 δείγµα 2 δείγµα 3 δείγµα 4 µέση τιµή λόγων 0.38 3.17 8.92 14.63 τυπική απόκλιση (SD) 0.04 0.12 0.34 0.91 λόγος CV (%) 10.59% 3.83% 3.77% 6.19% Πίνακας 2: Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ δοκιµών n = 40 δείγµα 1 δείγµα 2 δείγµα 3 δείγµα 4 µέση τιµή λόγων 0.48 3.06 8.02 13.85 τυπική απόκλιση (SD) 0.087 0.251 0.751 1.471 λόγος CV (%) 18.1% 8.2% 9.36% 10.63% 16 - ΟΡΙΑ ΤΗΣ ΟΚΙΜΗΣ Ένα αρνητικό αποτέλεσµα σηµαίνει ότι το υπό δοκιµή δείγµα δεν περιέχει Ag HBs ανιχνεύσιµο µε το Monolisa HBs Ag ULTRA. Ωστόσο, δεδοµένου ότι τα πολύ χαµηλά ποσοστά Ag HBs ενδέχεται να µην είναι ανιχνεύσιµα, ένα τέτοιο αποτέλεσµα δεν αποκλείει την πιθανότητα µόλυνσης από τον ιό της ηπατίτιδας Β. Ανάλογα µε το χρησιµοποιούµενο µέσο (πλυστικό, φωτόµετρο, αυτοµατοποιηµένη Επεξεργασία /αυτόµατος αναλυτής), µια ελαφρά διακύµανση των επιδόσεων µπορεί να παρατηρηθεί. Για την επιβεβαίωση της ειδικότητας της αντίδρασης, κάθε δείγµα που βρέθηκε θετικό (σύµφωνα µε τα κριτήρια ερµηνείας της δοκιµής Monolisa HBs Ag ULTRA), πρέπει να επιβεβαιώνεται µέσω µιας τεχνικής αδρανοποίησης των Ag HBs που ενδεχοµένως υπάρχουν στο δείγµα (δοκιµή Monolisa HBs Ag confirmation, κωδικός 72408). Η χρωµατοµετρική µέθοδος επαλήθευσης της απόθεσης δείγµατος και/ή συζυγών και/ή διαλύµατος ανάπτυξης, δεν επιτρέπει έλεγχο της ακρίβειας των κατανεµηθέντων όγκων αλλά µόνο την υπόδειξη της ύπαρξης δείγµατος και/ή συζυγούς. Το ποσοστό πλασµατικών αποτελεσµάτων που προκύπτουν µέσω της παρούσας µεθόδου έχει σχέση µε την ακρίβεια µέτρησης του χρησιµοποιούµενου συστήµατος (συσσωρευµένοι συντελεστές µεταβολής στην κατανοµή των υλικών και στην ανάγνωση των αποτελεσµάτων µεγαλύτεροι από 10% µπορεί να υποβαθµίσουν σηµαντικά την ποιότητα της επαλήθευσης).

Στην περίπτωση µη αποτελεσµατικής πλύσης µετά τη φάση επώασης του συζυγούς, η αυτόµατη επιβεβαίωση της κατανοµής του διαλύµατος ανάπτυξης (µε ανάγνωση της οπτικής πυκνότητας των κοιλοτήτων στα 490 nm) µπορεί να δώσει εσφαλµένα αποτελέσµατα, ήτοι οπτικές πυκνότητες µεγαλύτερες από 0,100 χωρίς να υπάρχει διάλυµα ανάπτυξης. Παρά ταύτα, αυτό το φαινόµενο δεν έχει παρατηρηθεί κατά τη διάρκεια των αξιολογήσεων που έγιναν σε 939 δοκιµασµένα δείγµατα. Επιπλεόν, διάφοροι συγγραφείς έχουν αναφέρει περιπτώσεις λοιµώξεων απο ηπατίτιδα Β (οξεία ή χρόνια) όπου το DNA µπορεί να εντοπιστεί, την απουσία του επιφανειακού αντιγόνου (HBs Ag αρνητικοί ασθενείς). Αυτές οι ασυνήθιστες περιπτώσεις, που ωστόσο είναι σπάνιες, είναι συνέπεια µίας πιθανής γενετικής µετάλλαξης, είτε στο S και pre-s γονίδιο (εµποδίζοντας την αναγνώριση του αντιγόνου απο µερικά ανοσολογικά αντιδραστήρια) είτε, συνήθως, στο X και pol γονίδιο, περιλαµβανοµένου ασθενούς αντιγραφής. Σε αυτές τις σπάνιες περιπτώσεις, συνίσταται για την τελική διάγνωση µίας πιθανής λοιµώξεως, η χρησιµοποίηση επιπλέον αντιδραστηρίων (εξειδικευµένο αντίσωµα HBs Ag ή εάν είναι εφικτό ενίσχυση ιϊκού DNA). 17 - ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 1. COUROUCE A.M., LEE H., DROUET J., CANAVAGGIO M. and SOULIER J.P. (1983) Monoclonal antibodies to HBs Ag : a study of their specificities for eight different HBs subtypes. Developments in Biological Standardization, 54, 527-534. 2. COUROUCE A.M., PLANCON A. and SOULIER J.P. (1983) Distribution of HBs Ag subtypes in the world. Vox Sang. 44, 197-211. 3. DAVID G.S., PRESENT W., MARTINIS J., WANG R., BATHOLOMEW R., DESMOND W. and SEVIER E.D., (1981) Monoclonal antibodies in the detection of hepatitis infection. Medical Laboratory Sciences, 38, 341-.348. 4. DROUET J., COUROUCE A.M., KALIL J., LEE H., and FELLOUS M. (1981) Monoclonal antibodies to HBs Ag produced by murine hybridomas. In viral hepatitis, edited by Szmuness W. Alter H.J., Maynard J.E. The Franklin Institute Press, 706. 5. FIELDS H.A., DAVID C.L., BRADLEY D.W. and MAYNARD J.E. (1983) Experimental conditions affecting the sensitivity of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of hepatitis B surface antigen (HBs Ag) - Bulletin of the World Health Organization, 61, 1, 135-142. 6. LEE H.H., COUROUCE A.M., PERE M., CANAVAGGIO M., DROUET J. and SOULIER J.P. (1983) Monoclonal antibodies to HBs Ag; a study of their specificities against HBs Ag subtypes and their utilization in ELISA. International Association of Biological Standardization. International Symposium on Monoclonal Antibodies : Paris, France. 7. SOULIER J.P., COUROUCE A.M., LEE H. DROUET J., MULLER A. and CANAVAGGIO M. (1983) Monoclonal antibodies against HBs antigen. Bulletin Biotest (vol. 4, 353-358). 8. WANDS J.P., CARLSON R.L., SCHOEMAKER H., ISSELBACHER K.J. and ZURAWSKI V.R. (1981) - Immunodiagnosis of hepatitis B with high-affinity IgM monoclonal antibodies. Proc. Nat. Acad. Sci., 78, 2, 1214-1218. 9. M. CANAVAGGIO, A.M. COUROUCE, M. PERE, H. LEE - Spécificité d'anticorps monoclonaux dirigés contre le déterminant a de l'ag HBs (1985). Nouvelle Revue Française d'immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134. 10. J. DROUET, G. CHARRIER, A.M. COUROUCE, M. PERE, J.F. DELAGNEAU, J. ROISIN (1985) - Nouveaux réactifs de dépistage de l'ag HBs et de dosage de l'anticorps anti-hbs. Nouvelle Revue Française d'immunohématologie (Springer International), 27, 2, 134.

(GB) - CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices) (FR) - Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro) (ES) - Marcado CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro) (IT) - Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro) (DE) - CE Konformitätskennzeichnung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In-vitro-Diagnostika) (PT) - Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro) (SE) - CE-märkning (Europeiskt direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter för in vitro-diagnostik) (DK) - CE-mærkning (Europæisk direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik) (GR) - CE ( 98/79/CE in vitro ) (PL) - CE oznaczenie (Dyrektywa unijna 98/79/CE dotycząca produktów medycznych do badań in vitro) (LT) - CE ženklas (Europos sąjungos direktyva 98/79/CE dėl in vitro diagnostikos medicinos prietaisų) (HU) - CE jelzés (98/79/CE Európai Irányelv az in vitro orvosi diagnosztikai eszközökről) (EE) - CE märgistus (Euroopa direktiiv 98/79/CE in vitro diagnostikameditsiiniseadmete kohta) (SK) - CE označenie o zhode (Európska direktíva 98/79/CE pre in vitro diagnostické zdravotnícke postupy) (CZ) - CE značka (Evropská direktiva 98/79/CE o diagnostických zdravotnických prostředcích in vitro) (NO) - CE-merking (EU-direktiv 98/79/CE om medisinsk utstyr til in vitro-diagnostikk) (RO) - Marca CE (Directiva europeana 98/79/CE pentru dispozitive medicale de diagnostic in vitro) (BG) - СЕ маркировка (Европейска директива 98/79/CE за ин витро диагностичните медицински изделия) (GB) - For in vitro diagnostic use (GB) - Catalogue number (FR) - Pour diagnostic in vitro (FR) - Référence catalogue (ES) - Para diagnóstico in vitro (ES) - Número de catálogo (IT) - Per uso diagnostico in vitro (IT) - Numero di catalogo (DE) - In-vitro-Diagnostikum (DE) - Bestellnummer (PT) - Para uso em diagnóstico in vitro (PT) - Número de catálogo (SE) - In vitro-diagnostik (SE) - Katalognummer (DK) - In vitro-diagnostik (DK) - Katalognummer (GR) - in vitro (GR) - (PL) - Do stosowania in vitro (PL) - Numer katalogu (LT) - in vitro diagnostikai (LT) - Katalogo numeris (HU) - Csak in vitro diagnosztikai alkalmazásra (HU) - Cikkszám (EE) - In vitro diagnostiliseks kasutamiseks (EE) - Katalooginumber (SK) - Na diagnostiku in vitro (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Pro diagnostiku in vitro (CZ) - Katalogové číslo (NO) - Til in vitro-diagnostikk (NO) - Katalognummer (RO) - Pentru diagnostic in vitro (RO) - Număr de catalog (BG) - За ин витро диагностика (BG) - Каталожен номер (GB) - Manufacturer (GB) - Authorised Representative (FR) - Fabricant (FR) - Représentant agréé (ES) - Fabricante (ES) - Representante autorizado (IT) - Produttore (IT) - Distributore autorizzato (DE) - Hersteller (DE) - Bevollmächtigter (PT) - Fabricante (PT) - Representante Autorizado (SE) - Tillverkad av (SE) - Auktoriserad representant (DK) - Fremstillet af (DK) - Autoriseret repræsentant (GR) - (GR) - (PL) - Producent (PL) - Upoważniony Przedstawiciel (LT) - Gamintojas (LT) - Įgaliotasis atstovas (HU) - Gyártó (HU) - Meghatalmazott Képviselő (EE) - Tootja (EE) - Volitatud esindaja (SK) - Výrobca (SK) - Autorizovaný zástupca (CZ) - Výrobce (CZ) - Zplnomocněný zástupce (NO) - Produsent (NO) - Autorisert representant (RO) - Producător (RO) - Reprezentant autorizat (BG) - Производител (BG) - Упълномощен представител (GB) - Batch code (GB) - Expiry date YYYY/MM/DD (FR) - Code du lot (FR) - Date de peremption AAAA/MM/JJ (ES) - Código de lote (ES) - Estable hasta AAAA/MM/DD (IT) - Codice del lotto (IT) - Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG (DE) - Chargen-Bezeichnung (DE) - Verwendbar bis JJJJ/MM/TT (PT) - Código do lote (PT) - Data de expiração AAAA/MM/DD (SE) - Batchnr (SE) - Utgångsdatum ÅÅÅÅ/MM/DD (DK) - Partinummer (DK) - Anvendes før ÅÅÅÅ/MM/DD (GR) - (GR) - YYYY/MM/DD (PL) - Numer serii (PL) - Data ważności YYYY/MM/DD (LT) - Serijos numeris (LT) - Galioja iki YYYY/MM/DD (HU) - Gyártási szám (HU) - Szavatossági idő ÉÉÉÉ/HH/NN (EE) - Partii kood (EE) - Aegumistähtaeg AAAA/KK/PP (SK) - Číslo šarže (SK) - Použiteľné do RRRR/MM/DD (CZ) - Číslo šarže (CZ) - Datum exspirace RRRR/MM/DD (NO) - Partikode (NO) - Utløpsdato ÅÅÅÅ/MM/DD (RO) - Număr de lot (RO) - Data expirarii AAAA/LL/ZZ (BG) - Партиден номер (BG) - Срок на годност година/месец/ден

(GB) - Storage temperature limitation (FR) - Limites de températures de stockage (ES) - Temperatura límite (IT) - Limiti di temperatura di conservazione (DE) - Lagertemperatur (PT) - Limites de temperatura de armazenamento (SE) - Temperaturbegränsning (DK) - Temperaturbegrænsning (GR) - (PL) - Temperatura przechowywania (LT) - Saugojimo temperatūriniai apribojimai (HU) - Tárolási hőmérsékleti határok (EE) - Piirangud säilitustemperatuurile (SK) - Skladovacia teplota od do (CZ) - Teplotní rozmezí od do (NO) - Oppbevaringstemperatur (RO) - Limitele de temperatură la stocare (BG) - Температурни граници на съхранение (GB) - Consult Instruction for use (FR) - Consulter le mode d'emploi (ES) - Consulte las instrucciones de uso (IT) - Consultare le istruzioni per uso (DE) - Siehe Gebrauchsanweisung (PT) - Consulte o folheto informativo (SE) - Se bruksanvisningen (DK) - Se brugsanvisning (GR) - (PL) - Sprawdź instrukcję (LT) - Ieškokite informacijos vartojimo instrukcijoje (HU) - Olvassa el a használati utasítást (EE) - Kasutamisel vaata instruktsiooni (SK) - Katalógové číslo (CZ) - Viz návod k použití (NO) - Se bruksanvisninger (RO) - Consultati prospectul de utilizare (BG) - Виж инструкцията за употреба

Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette - France Tél.: +33 1 47 95 60 00 11/2010 Fax.: +33 1 47 41 91 33 Code: 883608