ELISA PeliClass human IgG subclass kit REF M1551

Transcript

1 Sanquin Reagents Plesmanlaan 5 0 CX Amsterdam The Netherlands Phone: Fax: reagents@sanquin.nl Website: M55/ November 007 ELISA PeliClass human IgG subclass kit REF M55 Κιτ ELISA για τον ποσοτικό προσδιορισμό των υποτάξεων ανθρώπινης IgG στον ορό (el) Ab BLACK BUF CAL CONJ CONTROL el Αντισώματα για Μαύρο Ρυθμιστικό διάλυμα Βαθμονομητής Σύζευγμα Μάρτυρας DIL GREEN HRP HUM H O MOU el Αραίωση Πράσινο HRP Ανθρώπινος Υπεροξείδιο του υδρογόνου Ποντικιού RED SEALS STOCK STOP SUB SUBS el Κόκκινο Σφραγίδες πλάκας Μητρικό Διακοπή Υποκλάσεις Υπόστρωμα WASH WELL YELLOW el Πλύση Πηγαδάκια Kίτρινο Εύρος ELISA REF PeliClass ELISA kit M800 x8 WELL aigg, aigg RED BLACK M80 x8 WELL aigg, aigg YELLOW GREEN M80 0. ml CAL M80 0. ml CONTROL M80 0. ml HRP MOU Ab HUM IgG CONJ M ml BUF WASH STOCK :0 M80 0 ml BUF DIL STOCK :0 M808 5 ml BUF SUBS STOCK :0 M80.0 ml ABTS STOCK :50 M ml H O STOCK :00 M807 0 ml BUF STOP SEALS

2 I. ΕΙΣΑΓΩΓΗ Η ανθρώπινη IgG περιλαμβάνει τέσσερις υποτάξεις: IgG, IgG, IgG και IgG. Τα βιοχημικά χαρακτηριστικά των υποκατηγοριών IgG έχουν περιγραφεί εκτενώς (5). Οι διαφορές ανάμεσα στις υποτάξεις IgG αντικατοπτρίζονται σε αρκετές σημαντικές βιολογικά λειτουργίες όπως αναγνώριση αντιγόνου, ενεργοποίηση συμπληρώματος και πρόσδεση σε υποδοχείς της επιφάνειας των κυττάρων. Πολλές μελέτες έχουν αναδείξει ότι ανωμαλίες των επιπέδων των υποτάξεων IgG στον ορό μπορεί να σχετίζονται με διάφορες καταστάσεις νόσων. Ιδιαίτερα, έχει ευρύτατα τεκμηριωθεί (, 5) η συσχέτιση επιλεκτικής έλλειψης της υπόταξης IgG με αυξημένη ευπάθεια σε ιϊκές ή βακτηριακές λοιμώξεις. Χαμηλά επίπεδα IgG ή IgG στον ορό έχουν αναφερθεί σε ασθενείς με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις της ανώτερης και κατώτερης αναπνευστικής οδού. Άλλοι ερευνητές έχουν βρει σχέση ανάμεσα σε πολύ χαμηλές συγκεντρώσεις IgG στον ορό και υποτροπιάζουσες λοιμώξεις που αφορούν τους παραρρινίους κόλπους και τους πνεύμονες(). Ανωμαλίες στα επίπεδα των υποτάξεων IgG στον ορό έχουν επίσης παρατηρηθεί σε αυτοάνοσες νόσους, νευρολογικές διαταραχές και λοιμώξεις του ιού HIV (). el II. ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΤΕΧΝΙΚΗΣ Το κιτ ELISA PeliClass ανθρώπινης υπόταξης είναι ένα ένζυμο ανοσοδοκιμής τύπου "sandwich". Το κιτ περιέχει σειρές μικροκοιλοτήτων καλυμμένες με μονοκλωνικά αντισώματα μεγάλης ισχύος, η καθεμιά από τις οποίες αντιστοιχεί σε μια υποτάξη ανθρώπινης IgG. Τα δείγματα δοκιμών, οι οροί βαθμονομητή και οροί μάρτυρες επωάζονται στις αντίστοιχες κοιλότητες. Η υποτάξη IgG που πρέπει να καθοριστεί θα προσδεθεί στην στερεά φάση και η μη προσδεδεμένη IgG αφαιρείται με ξέπλυμα. Στη συνέχεια, αντιορός αντιανθρώπινης IgG συζευγμένος με υπεροξειδάση προστίθεται σε κάθε κοιλότητα και το μη προσδεδεμένο σύζευγμα αφαιρείται με ξέπλυμα. Μετά από την επώαση με διάλυμα υποστρώματος (ABTS) και H O, η αντίδραση σταματά με κάποιο όξινο ρυθμιστικό διάλυμα. Το προϊόν της αντίδρασης που έχει πράσινο χρώμα υπολογίζεται σύμφωνα με την απορρόφηση και τη συγκέντρωση υπόταξης IgG στο δοκιμαστικό δείγμα, το οποίο υπολογίζεται σε σχέση με τις τιμές μιας καμπύλης αναφοράς. Ο ορόςμάρτυρας των υποτάξεων IgG αναλύεται για έλεγχο της αξιοπιστίας των καμπυλών βαθμονόμησης και της ακρίβειας των προσδιορισμών των υποτάξεων IgG. Τα επίπεδα των υποτάξεων IgG στο(στους) βαθμονομητή(ές) καθορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα βαθμονομητή που προήλθε από την προετοιμασία αναφοράς WHO 7/97. Χρησιμοποιήθηκαν οι συνιστώμενες τιμέςστόχοι 5,0 g/l για IgG,, g/l για IgG, 0, g/l για IgG και 0,5 g/l για IgG (7). III. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ Το κιτ ELISA υποτάξεων ανθρώπινης IgG PeliClass πρέπει να φυλάσσεται σε όρθια θέση στους 8 C και μπορεί να χρησιμοποιηθεί μέχρι την αναγραφόμενη ημερομηνία λήξης στην ετικέτα. Η σταθερότητα όλων των συστατικών στοιχείων μετά από το άνοιγμα ισχύει για μία εβδομάδα, αν αποθηκευτούν σε 8 C. Οι συνθήκες μεταφοράς μπορεί να διαφέρουν από τις συνθήκες αποθήκευσης. IV. ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΑ ΤΟΥ ΚΙΤ Δείτε τον Πίνακα στηv αρχή του ένθετου της συσκευασίας αυτής. Το κιτ ELISA PeliClass ανθρώπινης υπόταξης περιέχει επαρκή αντιδραστήρια για την διεξαγωγή 8 τεστ για την κάθε υπόταξη, συμπεριλαμβανομένων βαθμονομητών, μαρτύρων και κενών. Το μονοκλωνικά αντισώματα καθαρίστηκαν από το μέσο καλλιέργειας ιστού, χρησιμοποιώντας χρωματογραφία στήλης (ανταλλαγή ιόντων και χρωματογραφία συγγένειας). Ο βαθμονομητής και ο μάρτυρας είναι ανθρώπινοι οροί σε υγρή κατάσταση. V. ΠΡΟΣΘΕΤΑ ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ Απεσταγμένο νερό για αραίωση των ρυθμιστικών διαλυμάτων πλύσης, αραίωσης και υποστρώματος. Πιπέτες για τη σωστή μεταφορά των όγκων. Ένας επωαστής (7 ± C). Μια πρότυπη συσκευή έκπλυσης ELISA ή έναν πλαστικό υδροβολέα για αυτόματη ή χειροκίνητη έκπλυση των σειρών. Έναν πρότυπο αναγνώστη ELISA για τον υπολογισμό της απορρόφησης στα nm ή στα 05 nm. Γραμμικό χαρτί ημερολογίου. VI. ΧΕΙΡΙΣΜΟΣ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ ΕΞΕΤΑΣΗΣ Μόνο δείγματα ορών πρέπει να εξετάζονται. Τα δείγματα θα πρέπει να είναι όσο το δυνατόν πιο πρόσφατα ή να έχουν φυλαχτεί στην κατάψυξη. Τα δείγματα θα πρέπει να έχουν αραιωθεί χειροκίνητα πριν τη χρήση (δείτε ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟ ΑΝΑΛΥΣΗΣ VII). VII. ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟ ΑΝΑΛΥΣΗΣ Φέρτε όλα τα αντιδραστήρια σε θερμοκρασία δωματίου (85 C) και αναμίξτε καλά. Αποφύγετε το σχηματισμό φυσαλίδων ή αφρού. Συνιστάται ο έλεγχος όλων των δειγμάτων, μαρτύρων και των αραιώσεων βαθμονόμησης εις διπλούν.. ΠΛΑΚΑ ΜΙΚΡΟΤΙΤΛΟΠΟΙΗΣΗΣ Το κιτ ELISA PeliClass ανθρώπινης υπόταξης IgG προσφέρει την επιλογή χρησιμοποίησης τμημάτων πλακών σε ξεχωριστές περιπτώσεις. Προτού ανοίξετε το πλαστικό σακουλάκι, καθορίστε τον αριθμό των σειρών που απαιτούνται για τον έλεγχο του επιθυμητού αριθμού δειγμάτων συν κοιλότητες που απαιτούνται για την εκτέλεση των βαθμονομητών, των μαρτύρων και των κενών εις διπλούν. Αφαιρέστε τις σειρές που δεν θα χρησιμοποιηθούν από το πλαίσιο της πλάκας και συσκευάστε τις ξανά σε πλαστικό σακουλάκι που περιλαμβάνει και τη συσκευή ξήρανσης και αποθηκεύστε τις σε 8 C.. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΕΣ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟΎ ΔΙΑΛΥΜΑΤΟΣ Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης: Προετοιμάστε το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης προσθέτοντας το σύνολο του περιεχομένου του συμπυκνώματος του διαλύματος πλύσης με 950 ml απεσταγμένο νερό. Το αραιωμένο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης πρέπει να αποθηκεύεται σε 8 C και παραμένει σταθερό επί μία εβδομάδα. Σημείωση: Το συμπυκνωμένο ρυθμιστικό διάλυμα ενδέχεται να περιλαμβάνει κρυστάλλους άλατος. Προτού προετοιμάσετε το ρυθμιστικό διάλυμα ισχύος εργασίας, θερμάνετε το διάλυμα ΕΛΑΦΡΑ στους 7 C για να διαλύσετε τους κρυστάλλους. Ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης: Υπολογίστε την ποσότητα του απαιτούμενου ρυθμιστικού διαλύματος αραίωσης (περίπου ml μη αραιωμένου ρυθμιστικού διαλύματος ανά σειρά μικροκοιλοτήτων) και προετοιμάστε ένα διάλυμα ισχύος εργασίας, αραιώνοντας το ρυθμιστικό διάλυμα σε αναλογία /0 με απεσταγμένο νερό.. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΩΝ ΟΡΩΝ ΒΑΘΜΟΝΟΜΗΣΗΣ ΚΑΙ ΟΡΩΝ ΜΑΡΤΥΡΟΣ Για συγκεντρώσεις, βλ. Πίνακες και του ενημερωτικού φυλλαδίου που περιέχεται στη συσκευασία. Βαθμονομητής: (Βλ. Πίνακα του παρεχόμενου φυλλαδίου) Τοποθετήστε μια ετικέτα πάνω σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα 0 ml που θα αναγράφει ':500' και σε άλλους οχτώ δοκιμαστικούς σωλήνες ml που θα αναγράφουν 'Cal έως και Cal8' αντίστοιχα.

3 Τοποθετήστε με πιπέτα,99 ml του ρυθμιστικού διαλύματος αραίωσης στον δοκιμαστικό σωλήνα 0 ml και προσθέστε 0 µl ορού βαθμονόμησης (αρχική αραίωση :500). Τοποθετήστε με πιπέτα,9 ml ρυθμιστικού διαλύματος αραίωσης στον σωλήνα με την ετικέτα 'Cal' και,0 ml στους σωλήνες με τις ετικέτες 'Cal Cal8'. Τοποθετήστε με πιπέτα 00 µl βαθμονομητή που έχει αραιωθεί σε αναλογία :500 στον σωλήνα Cal και κάντε επτά διαδοχικές αραιώσεις ½ προσθέτοντας,0 ml από την προηγούμενη αραίωση στον επόμενο δοκιμαστικό σωλήνα 'Cal'. Επιλέξτε για κάθε υπόταξη IgG τις εξής σειρές αραιώσεων βαθμονόμησης: IgG : : IgG, IgG and IgG :0.000 : Μάρτυρας: Τοποθετήστε ετικέτα πάνω σε έναν δοκιμαστικό σωλήνα που θα αναγράφει :500, καθώς και σε δύο δοκιμαστικούς σωλήνες ml που θα αναγράφουν :0.000 (για IgG,, ) και :0.000 (για IgG) αντίστοιχα. Διανέμετε με πιπέτα στο σωλήνα με την ετικέτα που αναγράφει :500,99 ml ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης και 0 µl ορό μάρτυρα. Διανέμετε με πιπέτα στο σωλήνα με την ετικέτα που αναγράφει : µl ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης και 5 µl αραίωσης :500. Διανέμετε με πιπέτα στο σωλήνα με την ετικέτα που αναγράφει : µl ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης και 5 µl αραίωσης : Προετοιμάστε έναν δοκιμαστικό σωλήνα των of ml με ml ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης ως κενό.. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Αραιώστε τα δοκιμαστικά δείγματα με ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης, σύμφωνα με το ίδιο πρωτόκολλο, που ισχύει και για τον ορό μάρτυρα. Για αποτελέσματα που βρίσκονται εκτός των δοθέντων ορίων (δείτε τον Πίνακα του εσώκλειστου φυλλαδίου πληροφοριών), θα πρέπει να επαναληφθεί η εξέταση με διαφορετική αραίωση δείγματος. 5. ΠΡΩΤΟ ΒΗΜΑ ΕΚΠΛΥΣΗΣ Ξεπλύνετε τις απαιτούμενες μικροκοιλότητες στο πλαίσιο πλάκας τέσσερις φορές με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης. Κατά τη χειροκίνητη έκπλυση, γεμίστε πλήρως τις κοιλότητες (> 00 µl) με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης και στη συνέχεια απορρίψτε το. Επαναλάβετε τη διαδικασία αυτή τρεις φορές. Στο τέλος, οι κοιλότητες θα είναι εντελώς άδειες. Στη συνέχεια, θα πρέπει να προστεθεί άμεσα αντιδραστήριο. Μην αφήνετε τις κοιλότητες να στεγνώσουν για μεγάλο χρονικό διάστημα.. ΠΡΩΤΟ ΒΗΜΑ ΕΠΩΑΣΗΣ Προσθέστε 00 µl αραιωμένων βαθμονομητών, μαρτύρων, δειγμάτων και κενών στις κατάλληλες κοιλότητες. Καλύψτε την πλάκα με αυτοκόλλητη ταινία ασφαλείας, και ανακινήστε απαλά χτυπώντας ελαφρά την άκρη της πλάκας μικροτιτλοποίησης για λίγα δευτερόλεπτα, προκειμένου να αναμίξετε τα περιεχόμενα κάθε κοιλότητας. Επωάστε για ώρα στους 7 C. Λίγο πριν την έκπλυση, προετοιμάστε το επόμενο αντιδραστήριο επώασης, όπως περιγράφεται στο σημείο ΔΕΥΤΕΡΟ ΒΗΜΑ ΕΚΠΛΥΣΗΣ Αναρροφήστε υπερκείμενο από τις κοιλότητες και ξεπλύνετε την πλάκα, όπως περιγράφεται στο σημείο ΕΠΩΑΣΗ ΜΕ ΣΥΖΕΥΓΜΕΝΟ ΜΕ HRP ΑΝΤΙΣΩΜΑ ΣΕ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗ IgG Αραιώστε το σύζευγμα :500 τοποθτας με πιπέτα 0 µl του συζεύγματος προς,97 ml ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης. Αραιώστε το σύζευγμα περαιτέρω: :000 με διανομή με πιπέτα, ml της αραίωσης :500 προς,0 ml ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης. :000 με διανομή με πιπέτα,0 ml της αραίωσης :500 προς,0 ml ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης. :000 με διανομή με πιπέτα,5 ml της αραίωσης :500 προς,5 ml ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης. Προσθέστε: 00 µl της αραίωσης :500 στις σειρές μικροκοιλοτήτων αντιigg, 00 µl της αραίωσης :000 στις σειρές μικροκοιλοτήτων αντιigg, 00 µl της αραίωσης :000 στις σειρές μικροκοιλοτήτων αντιigg, 00 µl της αραίωσης :000 στις σειρές μικροκοιλοτήτων αντιigg, Καλύψτε την πλάκα με αυτοκόλλητη ταινία ασφαλείας, και ανακινείστε απαλά χτυπώντας ελαφρά την άκρη για λίγα δευτερόλεπτα, προκειμένου να αναμίξετε τα περιεχόμενα κάθε κοιλότητας. Επωάστε για ώρα στους 7 C. Λίγο πριν την έκπλυση, προετοιμάστε το επόμενο αντιδραστήριο επώασης, όπως περιγράφεται στο σημείο ΤΡΙΤΟ ΒΗΜΑ ΕΚΠΛΥΣΗΣ Αναρροφήστε υπερκείμενο από τις κοιλότητες και ξεπλύνετε την πλάκα, όπως περιγράφεται στο σημείο ΕΠΩΑΣΗ ΜΕ ΥΠΟΣΤΡΩΜΑABTS Υπολογίστε την ποσότητα του διαλύματος υποστρώματος (περίπου 0,9 ml ανά σειρά μικροκοιλοτήτων θα χρειαστούν). Προσθέστε ποσότητα ίση με 00 µl διάλυμα στοκ υπεροξειδίου του υδρογόνου και 00 µl διάλυμα στοκ ABTS με 0 ml ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος ισχύος εργασίας ( ml ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος στοκ + 8 ml απεσταγμένο νερό). Προσθέστε 00 µl ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος σε όλες τις κοιλότητες. Και ανακινείστε απαλά χτυπώντας ελαφρά την άκρη της πλάκας μικροτιτλοποίησης για λίγα δευτερόλεπτα, προκειμένου να αναμίξετε τα περιεχόμενα κάθε κοιλότητας. Επωάστε 0 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (85 C).. ΠΑΥΣΗ ΤΗΣ ΕΝΖΥΜΑΤΙΚΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΗΣ Προσθέστε 50 µl ρυθμιστικού διαλύματος παύσης σε όλες τις κοιλότητες.. ΑΝΑΓΝΩΣΗ ΠΛΑΚΑΣ Διαβάστε εντός ώρας στα (κατά προτίμηση) ή 05 nm σε αναγνώστη ELISA. VIII. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ ΔΕΔΟΜΕΝΩΝ Καταγράψτε την απορρόφηση στα (κατά προτίμηση) ή στα 05 nm για κάθε κοιλότητα και βρείτε το μέσο όρο των τιμών εις διπλούν. Για κάθε δείγμα, τα αντίγραφα δεν θα πρέπει να διαφέρουν περισσότερο από 5% της μέσης τιμής. Αν τα αντίγραφα εμφανίζουν μεγαλύτερη διαφορά, η ανάλυση θα πρέπει να επαναληφθεί. Αναπαραστήστε τις μέσες απορροφήσεις των βαθμονομητών (άξονας y) έναντι της αντίστοιχης συγκέντρωσης υπόταξης σε ng/ml (άξονας x) σε γραμμικό χαρτί ημερολογίου και σχεδιάστε την καμπύλη που σας ταιριάζει περισσότερο. Τα επίπεδα υποτάξεων IgG στους ορούςμάρτυρες θα πρέπει να βρίσκονται εντός των ορίων που αναγράφονται στον Πίνακα του εσώκλειστου πληροφοριακού φυλλαδίου. Παρεμβάλλετε την μέση τιμή απορρόφησης του κάθε δείγματος πάνω στην καμπύλη αναφοράς. Τα δείγματα ελέγχου που εμφανίζουν μέση απορρόφηση εκτός των ορίων αραίωσης της καμπύλης αναφοράς θα πρέπει να αραιώνονται κατάλληλα. Για αποτίμηση της συγκέντρωσης των υποτάξεων IgG σε ένα δείγμα εξέτασης, συγκρίνετε τα επίπεδα που βρέθηκαν με τις φυσιολογικές τιμές των υποτάξεων IgG (δείτε Όρια αναφοράς Χ). IX. ΟΡΙΑ ΑΝΑΛΥΣΗΣ Συμβουλευτείτε τον Πίνακα του εσώκλειστου φυλλαδίου πληροφοριών για τα όρια ανάλυσης του συγκεκριμένου κιτ.

4 X. ΟΡΙΑ ΑΝΑΦΟΡΑΣ Όρια βαθμονόμησης (g/l) για υποτάξεις IgG σε δείγματα ορού υγιών Λευκών ατόμων (8). Για άλλους πληθυσμούς θα πρέπει να ληφθούν ξεχωριστά όρια αναφοράς. Ηλικία IgG IgG IgG IgG 0 ½ 9 > ½ 9 8 8, 0,,8,7,8 7,0,0 7,7,5 8,,9 8,5, 9,0,5 9,,7 0,0,0 0,8,0,5,7,8,9, 0,87, 0,8, 0,, 0,, 0,8, 0,5, 0,5,8 0,,0 0,7, 0,85, 0,98,8,0,,50, 0, 0,55 0, 0,70 0,5 0,80 0,5 0,97 0,5,07 0,5, 0,,0 0,, 0,, 0,, 0,5,9 0,8, 0,0,0 0,0 0,5 <0,0 0, <0,0 0, <0,0 0, <0,0 0, <0,0 0,79 <0,0,0 <0,0,7 <0,0,58 <0,0,89 0,0,0 0,0,0 0,08,0 XI. a ΕΙΔΙΚΑ ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΠΙΔΟΣΕΩΝ Επαναληψιμότητα Συγκέντρωση υποτάξεων IgG IgG IgG IgG IgG διακύμανση εντός της ίδιας ανάλυσης (%) διακύμανση ανάμεσα στις αναλύσεις (%) 7 7 b Σύγκριση του κιτ υπόταξης ανθρώπινης IgG PeliClass με το Mancini Οι συγκεντρώσεις των IgG, IgG, IgG και IgG σε ορούς προσδιορίστηκαν με ανάλυση ELISA και συγκρίθηκαν με τις αντίστοιχες τιμές που βρέθηκαν σε Mancini. Τεκμηριώθηκαν οι ακόλουθες συσχετίσεις: υπόταξη IgG γραμμή γραμμικής παλινδρόμησης συσχέτιση IgG Y = 0,90X 0,9 0,97 IgG Y =,0X 0,7 0,9 IgG Y = 0,9X + 0,00 0,99 IgG Y = 0,9X 0,0 0,98 Σημείωση: Οι αναφερόμενες τιμές για τα ειδικά χαρακτηριστικά επιδόσεων της εξέτασης αντιπροσωπεύουν τυπικά αποτελέσματα και δεν πρέπει να θεωρούνται ως προδιαγραφές για το παρόν κιτ. XII. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ. Ο χρήστης θα πρέπει να είναι εκπαιδευμένος και εξοικειωμένος με την ανάλυση ELISA και τη διαδικασία εξέτασης.. Δε θα πρέπει να χρησιμοποιούνται δείγματα που έχουν αιμολυθεί χονδροειδώς ή υπερλιπιδαιμικά δείγματα. Μπορεί να ληφθούν μη αναμενόμενα αποτελέσματα για δείγματα που περιέχουν ρευματοειδή παράγοντα, υψηλά επίπεδα χολερυθρίνης ή άλλα κυκλοφορούντα ανοσοσύμπλοκα. Αυτά τα δείγματα θα πρέπει να αναλύονται με άλλη μέθοδο.. Δείγματα εκτός ορίων, π.χ. σε περίπτωση παραπρωτεϊνών, θα πρέπει να επαναλαμβάνονται χρησιμοποιώντας διαφορετικές αραιώσεις.. Η εύρεση μειωμένου επιπέδου σε μία από τις υποτάξεις IgG δεν μπορεί ποτέ να αποτελεί μία οριστική διάγνωση αλλά θα πρέπει μάλλον να θεωρείται ως ένδειξη διαταραχής του ανοσοποιητικού συστήματος που απαιτεί περαιτέρω διαγνωστική διερεύνηση. 5. Ο ορός μάρτυρας θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιείται για τον έλεγχο της εγκυρότητας των καμπυλών βαθμονόμησης. Όταν ο ορός μάρτυρας βρίσκεται εκτός εύρους, τα αποτελέσματα των εξεταστικών δειγμάτων δεν είναι αξιόπιστα. Ο έλεγχος θα πρέπει να επαναληφθεί.. Τα αντιδραστήρια από διαφορετικές παρτίδες δεν είναι ανταλλάξιμα. 7. Το υπολείμματα αντιδραστηρίων (π.χ. νεκρός όγκος) δε θα πρέπει να αναμιγνύονται με τα περιεχόμενα φιαλιδίων που ανοίχθηκαν πρόσφατα. 8. Τα πώματα και τα φιαλίδια δεν είναι ανταλλάξιμα. Τα πώματα θα πρέπει να επανατοποθετούνται στα αντίστοιχα φιαλίδια. 9. Παρ όλο που ο ανθρώπινος βαθμονομητής και οι οροίμάρτυρες έχουν ελεγχθεί για δείκτες συγκεκριμένων παραγόντων μετάδοσης νόσων σύμφωνα με τις τρέχουσας οδηγίες της Ευρωπαϊκής Ένωσης για GMP και έχουν βρεθεί ως μη αντιδρώντες, όλα τα συστατικά ανθρώπινης προέλευσης θα πρέπει να θεωρούνται δυνητικώς λοιμογόνα. 0. Συντηρητικό: Thiomersal 0,00%.. Χρησιμοποιήστε νέες σφραγίδες για τις πλάκες για κάθε βήμα επώασης/σταθεροποίησης με το πείραμα ELISA, για να αποφύγετε τη μόλυνση. Μη χρησιμοποιείτε αλουμινόχαρτο.. Χρησιμοποιήστε αναλώσιμα άκρα πιπ για κάθε μεταφορά για να αποφύγετε τη μόλυνση.. Κάθε φορά που χρησιμοποιείται το κιτ, θα πρέπει να γίνονται καινούριες αραιώσεις βαθμονομητών, συζευγμάτων και ρυθμιστικών διαλυμάτων.. Μη χρησιμοποιείτε αντιδραστήρια και σειρές μικροτιτλοποίησης, εκτός από εκείνα που σας παρέχονται με το κιτ. 5. Το αζίδιο του νατρίου απενεργοποιεί το HRP. Μη χρησιμοποιείτε διαλύματα που περιέχουν αζίδιο του νατρίου και μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου στα παρεχόμενα ρυθμιστικά διαλύματα.. Η απόρριψη των αποβλήτων πρέπει να διεξάγεται σύμφωνα με τους κανονισμούς του εργαστηρίου σας.

5 XIII. ΑΝΑΦΟΡΕΣ. Shakib, F. (Editor), Monograph in Allergy, Karger A.G., 9 (98).. Shakib, F. (Editor), The human IgG subclass, Pergamon Press (990).. Vlug, A. et al., Eur. Clin. lab., 8: (989).. Jefferis, R. et al Clin.Exp.Immunol. 8:57 (990). 5. Hamilton, R.C., Clin. Chem., :707 (987).. Beck, C.S. and Heiner, D.C., Am. Rev. Respir. Dis., :9 (98). 7. Klein, F et al., Clin. Chem. Acta., 50 9 (985) 8. Vlug, A. et al., Ann. Biol. Clin. 5:57 (99). 5