بعض الفطريات المسببة لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء ومقاومتها ببعض جامعة الف ارت االوسط التقنية/ الكلية التقنية المسيب

Transcript

1 عزل وتشخيص المستخلص بعض الفطريات المسببة لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء ومقاومتها ببعض المستخلصات النباتية عهد عبد علي هادي مطلوب والفطر االحيائي Trichoderma viride محمد احمد عم ارن كيف الكيف جامعة الف ارت االوسط التقنية/ الكلية التقنية المسيب بينت نتائج المسح الحقلي الذي اجري في 5 حقال مزروعة بنبات الباقالء تابعة لمحافظة بابل انتشار مرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء في جميع المناطق التي شملها المسح وبنسب اصابة ت اروحت بين %00-40 وبشدة اصابة ت اروحت بين % وبينت نتائج العزل والتشخيص تباين في وجود وكانت الفطريات solani ظهو ار. solani Fusarium و Rhizoctonia اثبتت نتائج التشخيص الجزيئي لهذه الفطريات ان الفطريات و Macrophomina phaseolina اكثرها 2 عزالت من الفطر.M phaseolina تابعة لهذا الفطر ما عدا الفطر solani االختبار عدم حصول تفاعل الب اريمر الخاص به مع عزلتين تابعة له عزلة من الفطر R. solani تابعة له و 9.F فقد تبين من خالل هذا باستخدام تقنية Polymerase Chain. Reaction PCR بينت نتائج االختبار للمقدرة االم ارضية للفطريات المدروسة تفاوت في نسب االنبات وتغاير في شدة االصابة. واظهرت نتائج الكشف الكيميائي للمستخلصات النباتية ( اللزيج االلبيزيا عرف الديك( احتوائها على مركبات فعالة قادرة على تثبيط الفطريات الممرضة واظهر مستخلص نبات اللزيج تفوقه في نسبة التثبيط للفطريات المدروسة اذ بلغ معدل تثبيط الفطريات R. solani و solani M. و F. % phaseolina على التوالي بتركيز %5 ايضا.اظهر الفطر T. viride قدرته التثبيطية العالية على الفطريات المدروسة. الكلمات المفتاحية: الباقالء تعفن الجذور الفطريات البكتريا معايير النمو Isolation and identification of some Fungi caused Broad bean root and crown root disease by some plant extracts and Bioagents Trichoderma viride in Ahed A H Matloob Mohamed A I K Alkaif Al furat Al Alawsat tech. Uni. Al Musaib Tech. College Abstract A field survey was conducted in 5 Broad bean plant fields in Babylon province/iraq in growth season 204 this survey was to evalnate the incidence and severity of root and crown rot disease on Broad bean crop. The results showed that the disease was faund in all studied fields with varions incidence (between 40 to 00%) and severity between (26.7 to 75%). Additionally,the The results of isolation and indentification of the disease pathogens domenstreted a Variation in presence of different causal agents. For example,the pathogens Rhizoctonia solani, Fusarium 88

2 solani and Macrophomina phaseolina wer the most existion in whole tested fields. Also, the molecular diagnosis of these three fungal pathogens using Polymerase Chain Reaction test showed that 2 isolates were belonging to R. solani and 9 isolates to M. phaseolina. However, tow isolatesof F. solani were not detected while 0 isolates were detected clearly. The pathogensity test of these three fungi showed a variation in germination prcentage of tested seeds and differentiontion in disease severity.as well as, the chemicals detection test of three different plant extracts (Cocklebur, Albizzia, Redrot pigwed) indicated to exiting active compounds that were capable in inhibiting the three pathogens growth. The extract of Cocklebur plant was the most effective one by inhibiting percentage F. solani (00%), R. solani (9.47%)and M. phaseolina (88.7%).furthermore, the bioagent Trichoderma viride showed high efficiency in inhibition of the three cusal agents. Key words: Broad bean, root rot, fungi, bacteria, growth standards المقدمة 89 يعود نبات الباقالء. L Vicia faba إلى العائلة البقولية Leguminaceae ويعد من النباتات االقتصادية المهمة في العديد من بلدان العالم وتأتي بالمرتبة الثانية بعد العائلة النجيلية من حيث األهمية االقتصادية وتعد بالد الج ازئر الموطن األصلي لها )28,26( يزرع نبات الباقالء في اغلب المناطق الز ارعية في الع ارق إذ بلغت المساحة المزروعة فيها لعام 202 حوالي دونما وكمية االنتاج 4600 طن )6( تصاب الباقالء بالعديد من األم ارض الفطرية وأهمها مرض تعفن الجذور وقواعد السيقان والذي يعد من األم ارض ذات التأثير الكبير على محصول الباقالء في العديد من مناطق العالم لوحا انخفاض في معدالت االنتاج في محصول الباقالء في الع ارق اذ بلغ االنتاج في سنة )34,9( ففي السنوات االخيرة 2000 حسب ما اشارة اليه المركز االحصائي السنوي 22,524 طن اما في سنة 20 بلغ االنتاج 54,400 طن بينما في عام 202 فبلغ االنتاج 4,600 طن وان هذا االنخفاض في االنتاج قد يعود الى اسباب كثيرة منها االصابة بالعديد من المسببات المرضية للنبات التي تتواجد في التربة وأهمها الفطر spp. Rhizoctonia solani Fusarium و Macrophomina phaseolina و spp.,pythium إذ تقوم هذه الفطريات بمهاجمة البذور والباد ارت وجذور هذا المحصول مسببة تعفنها ط ارئق عدة مما يؤدي إلى حدوث خسائر كبيرة في اإلنتاج )57(. استخدمت لمكافحة مرض تعفن جذور وقواعد سيقان نبات الباقالء منها استخدام المكافحة الكيميائية )8(. لكن وجد أن للمبيدات الكيميائية بعض التأثي ارت السلبية على البيئة وصحة اإلنسان واالحياء غير المستهدفة نتيجة لالستعمال المكثف والخاطئ )50,36( لذلك بداء التفكير في البدائل التي من أبرزها استعمال الكائنات الحية الدقيقة في ب ارمج المكافحة اإلحيائية لخفض لقاح المسببات المرضية وزيادة اإلنتاج مثل استعمال الفطر viride Trichoderma لما يمتلكه من خصائص تضادية متنوعة تجاه المسببات المرضية وأهميته في تحسين نمو

3 النبات وانتاجه فضال عن ما يتميز به من سهولة العزل واإلكثار وامكانية استعماله في مدى واسع من الظروف المختلفة وتنميته وتحميله على العديد من األوساط الغذائية رخيصة الثمن )55,40,39( كما كان الستخدام المستخلصات النباتية فعالية في خفض لقاح المسببات الممرضه واخت ازل شدة المرض لعدد من مسببات ام ارض التربة الفطرية مثل Fusarium oxysporum Fusarium solani Rhizoctonia solani moniliforme )27( Phytophthora cinnumoni Fusarium حيث عند تحلل االج ازء النباتية المضافة للتربة تطلق مركبات تؤدي الى تثبيط الممرضات النباتية وتزيد من فعالية االحياء المجهرية ذات القدرة التثبيطية لهذه الممرضات مما يزيد من فعاليةعملية المكافحة وبصورة تازرية مع عامل المكافحة االحيائية )5(. وألهمية مرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء صممت هذه الد ارسة بهدف:- - تحديد مدى انتشار مرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء في محافظة بابل / الع ارق 2- محاولة مكافحة مسببات هذا المرض باستعمال بعض المستخلصات النباتية والفطر االحيائي.Trichoderma viride المواد وط ارئق العمل مسح مرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء في بعض مناطق محافظة بابل تم أج ارء مسح لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء خالل للفترة من 204/2/25 ولغاية 204/3/8 اذ انتخب 5 حقل ت اروحت مساحتها 7.5- دونم في محافظة بابل )جدول ( اخذت العينات بصورة عشوائية وذلك بقلع النباتات باحت ارس ووضعها في أكياس بولي اثلين مع تسجيل بعض المالحظات منها مكان وتاريخ جمع العينة ونوع الز ارعة والمساحة وموعد الز ارعة وغيرها ثم تم حساب النسبة المئوية لإلصابة وحسب المعادلة التالية: %االصابة= عدد النباتات المصابة / عدد الكلي 00 x و حساب شدة االصابة وفق الدليل المرضي الموصى به للجذور وحسب معادلة )43( Mckinney وكما يأتي: 0= جذور سليمة. = تلون)تعفن( الجذور الثانوية.2= تلون الجذور الثانوية وجزء من الجذر الرئيسي. 3= تلون الجذر الرئيسي دون تلون قاعدة الساق. 4= تلون الجذر الرئيسي وتهرؤه وتلون قاعدة الساق. 5= موت النبات. % لشدة اإلصابة=)عدد النباتات في الدرجة 0() 0 عدد النباتات في الدرجة )... ) عدد النباتات في الدرجة 5 5(/ مجموع النباتات المفحوصة

4 جدول )( مسح مرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء في بعض مناطق محافظة بابل التاريخ املساحة املوقع رقم العينة التاريخ املساحة املوقع رقم العينة احلقل/دومن احلقل/دومن 204/3/6 3.5 املهناوية 9 204/2/ حمرم 204/3/6 ايب غرق 0 204/2/25 4 قرية االمام 2 املنتظر 204/3/6 6 القاسم/الدروع 204/2/ االمام/الصباغية 3 204/3/6 2 اهلامشية 2 204/2/26 3 البدعة 4 204/3/6 3 املدحتية 3 204/2/28 2 النيل 5 204/3/9 2 العزاوية 4 204/3/ 2.5 الطاهرية 6 204/3/8 مويلحة 5 204/3/2.5 الوطيفية 7 204/3/3 3 جبلة 8 عزل وتشخيص الفطريات الم ارفقة لجذور وقواعد سيقان الباقالء:- جلبت النباتات التي ظهرت عليها أع ارض اإلصابة ( )صورة إلى المختبر اخذ أج ازء من الجذور وقواعد السيقان التي ظهرت عليها أع ارض التعفن والتقرحات غسلت وعقمت سطحيا بمحلول هايبوكلو ارت الصوديوم )%0.5 كلور حر( وحسب الطرق الموصى بها ونشفت بورق الترشيح المعقم ونقلت بواسطة ملقط معقم وزرعت Potato Dextrose )PDA( 9 بواقع 4 قطع نباتية في كل طبق بتري قطر الوسط الزرعي على سم حاوي Agar المضاف إلية المضاد الحيوي Tetracycline 200 بتركيز المؤصدة )2 أيام وضغط مº كغم/سم ) لمدة ملغم / لتر وذلك بعد تعقيم الوسط دقيقة حضنت األطباق في درجة ح اررة مº ±25 بجهاز 3 لمدة 9

5 ب- مجلة كربالء للعلوم الز ارعية )المجلد الثاني العدد ال اربع ) أ- - التشخيص الجزيئي: صورة. أع ارض اإلصابة بمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء أ- األع ارض على الجذور وقاعدة الساق ب-اع ارض على الجذر الرئيسي والثانوية لكون الفحص المظهري والمجهرية وخاضع للتحيز ومعرضة مع لالخطاء صعوبة تشخيصها مجهريا solani و R. solani والتي قد.F. بات ال يعتمد في الكثير من دول العالم النها تستهلك وقت اكبر باإلضافة إلى تشابه الفطريات في الصفات المظهرية على األوساط الزرعية ال تعطي ادلة كافية وقاطعة للتفريق بين انواع االجناس الفطرية و M. phaseolina وألهمية التشخيص اذ ينبغي تحديد الجنس والنوع باستعمال طرق معتمدة مثل التشخيص الجزيئي الذي يكون ذا حساسية وتخصصية عاليتين وفقا لتعليمات منظمتي الغذاء والز ارعة Food and Agriculture Organization )FAO( والصحة العالمية World )WHO( Health Organization ) 45 (اجري التشخيص الجزيئي لتأكيد تشخيص العزالت. تم تنفيذ هذه الد ارسة في مختبر األبحاث الجزيئية/ شعبة األغذية المحورة جينيا/ تلوث الغذاء/ دائرة بحوث البيئة والمياه التابع لو ازرة العلوم والتكنولوجيا/ بغداد/ الع ارق. قسم البايلوجي الجزيئي/ مركز 92

6 البادئ الخاص المستخدم في عملية تشخيص الفطريات اسم الجين S 5.8 Rrna جدول )2 ) بعض الصفات الخاصة بالبادئات التي تم استخدامها للكشف عن الفطريات حجم الحزمة التي تنتجه )bp( 700 تسلسل النيوكليوتيدات من 5 الى 3 5 ' -TCC GTA GGT GAA CCT GCG G- ' 3 5 ' -TCC TCC GCT TAT TGA TAT ' GC-3 5-ATCGGCCACGTCGACTCT-3 اسم البادئ ITSF اسم الفطر R. solani F. solani M. phaseolina ITS4R TEF- F.s4F TEF- F.s4R MpKF MpKR 5-GGCGTCTGTTGATTGTTAGC-3 5-CCGCCAGAGGACTATCAAAC-3 5-CGTCCGAAGCGAGGTGTATT TEF-α MPK ط ارئق العمل الخاصة بتقنية ال PCR أوال : إستخالص الحامض النووي DNA وتنقيته تم استخدام 2 عزلة من الفطر Rhizoctonia solani و 2 عزلة من Fusarium solani و 9 عزلة من Macrophomina phaseolina والتي سبق عزلها من جذور وقواعد سيقان الباقالء المصابة من محافظة بابل اذ استخدم الطقم الخاص باالستخالص من شركة Reagent Genomic DNA ( الصينية Geneaid )Kit نميت هذة العزالت على الوسط الزرعي Potato Dextrose Broth لمدة 7 ايام وحضنت على درجة ح اررة ±25 مº رشح الغزل الفطري بواسطة ورق الترشيح للتخلص من الوسط المغذي وضع الغزل الفطري المرشح داخل الهود تحت درجة ح اررة كثافة كبيرة من الغزل الفطري. o 45 م لغرض تجفيف العينة والتخلص من الرطوبة ال ازئدة وللحصول على وضعت كمية من الغزل الفطري في هاون خزفي ثم طحن بوجود النتروجين السائل نقلت كمية منه الى أنبوب ابندروف tube) )Eppendroffe حاوية على 293 مايكروليتر من محلول سحق بواسطة عيدان خشبية.أضيف 7.5 مايكروليتر من 20 ملغم/مل انزيم Lyticase مع EDTA ثم التحريك بلطف أربع م ارت لغرض المزج.ح ضنت العينات بدرجة ح اررة 37 م لمدة دقيقة لكي يقوم األنزيم بتحطيم الجدار الخلوي ثم ب ردت الى درجة ح اررة الغرفة.ن بذت مركزيا بسرعة دورة/دقيقة لمدة دقيقتين وأزيل ال ارئق )Supernatant).اضيف 300 مايكروليتر من محلول التحلل Cell Lysis Buffer 0 دقائق على درجة ح اررة الى كل أنبوبة ابندروف الحاوية على ال ارسب الفطري وحركت بلطف لغرض المزج.حضنت لمدة 60 م مع التقليب المستمر كل 3 دقائق.اضيف 5 مايكروليتر من انزيم تحطيم ال 93

7 Protein ثم حضنت لمدة 5 دقائق.اضيف 00 مايكروليتر من محلول ترسيب البروتينات RNase Removal Buffer م زجت األنابيب جيدا بواسطة المازج الكهربائي Vortex mix لمدة 0 ثانية.ت ركت العينات على الثلج لمدة خمس دقائق.نبذت مركزيا بسرعة دورة/دقيقة لمدة ثالث دقائق.ن قل ال ارئق الحاوي على الDNA الDNA المستخلص بواسطة ماصة دقيقة الى أنابيب ابندروف نظيفة ومعقمة حاوية على مايكروليتر من األيزوبروبانول بدرجة ح اررة الغرفة.ح ركت األنابيب بلطف عدة م ارت لحين ظهور بشكل تركيب يشبه الخيط.ن بذت مركزيا بسرعة دورة/دقيقة لمدة دقيقتين.أزيل ال ارئق برفق وق لبت األنابيب على ورقة نشاف معقمة. اضيف 300 مايكروليتر بدرجة ح اررة الغرفة من %70 إيثانول وق لبت األنابيب بلطف عدة م ارت لغسل الDNA المترسب.ن بذت مركزيا بسرعة لمدة دقيقتين ثم أزيل اإليثانول برفق.ق لبت األنابيب على ورقة نشاف معقمة لمدة ال ارسب.أضيف ح اررة مايكروليتر من محلول( TEB ) Tris-Borate EDTA buffer دورة/دقيقة دقيقة لغرض تجفيف وحضن على درجة ح اررة 60 م لمدة دقيقة.إذا لم ي نجز التضخيم في نفس يوم االستخالص ت حفا النماذج جاهزة بدرجة 8-2 م. ثانيا : الكشف عن الحامض النووي منقوص األوكسجين (DNA) استخدمت طريقة الترحيل الكهربائي Electrophoresis بإستعمال هالم عن الحامض النووي منقوص األوكسجين وكانت المحاليل المتطلبة هي: Agarose األكاروز بتركيز % وbuffer TBE Bromophenol blue و Ethidium bromide للكشف و و الكولسترول. تم الكشف عن الحامض النووي منقوص األوكسجين حسب طريقة Sambrook واخرون( 48 ). وتم حساب نقاوة وتركيز الحامض النووي المنقوص األوكسجين بواسطة جهاز ثالثا : طريقة عمل استخدمت تقنية الPCR العمل بحجم. Spectrophotometer 20 تفاعل البلمرة المتسلسل Polymerase Chain Reaction لتضخيم مناطق التفاعل باستخدام البادئ المذكور في الجدول )2(. أجريت طريقة مايكروليتر وكما موضح في الجدول )3( اعتمادا على النشرة المرفقة في المصنع من شركة Bioneer بأنبوبة ال.PCR جدول (3( أحجام المواد الكيمياوية المستخدمة في التفاعل. المواد الكيميائية Master Mix Primer Forward Primer Reverse DNA Nuclease Free Water Total الحجم 5 μl 2.5 μl 2.5 μl 5 μl أكمل الحجم إلى μl Master Mix

8 بعد إتمام اإلضافات جميعها العينات إلى جهاز المبلمر الح ارري الحلقي 95 م زجت العينات مركزيا بوساطة جهاز الطرد المركزي الخاص بأنابيب PCR PCR thermal cycler ونقلت اجري تفاعل تضخيم السالسل لدنا العزالت Rhizoctonia solani اعتمادا على البرنامج الموصوف من قبل Stojsinواخرون( 53 ( وكما يلي عدد الدورات الزمن درجة الخطوات رقم الحرارة الخطوة 2 min 95 م Initial Denaturaion 35 Sec م Denaturation 2 min 55 م Annealing 3 min 72 م Extension 4 0 min 72 م Final extension 5 واجري تفاعل تضخيم السالسل لدنا العزالت.F solani اعتمادا على البرنامج الموصوف من قبل واخرون )8(. الخطوات رقم الخطوة Initial Denaturaion Denaturation 2 Annealing 3 Extension 4 Final extension 5 درجة الحرارة 94 م 94 م 58 م 72 م 72 م الزمن عدد الدورات Arif 40 2 min min min 2 min 0 min واجري تفاعل تضخيم السالسل لدنا العزالت Macrophomina phaseolina الموصوف من قبل Babu واخرون )9(. الخطوات رقم الخطوة Initial Denaturaion Denaturation 2 Annealing 3 Extension 4 Final extension 5 درجة الحرارة 95 م 95 م 56 م 72 م 72 م اربعا : طريقة عمل الترحيل الكهربائي لنواتج تقنية الPCR الزمن 2 min 30 Sec. min 2 min 0 min اعتمادا على البرنامج عدد الدورات 25 أستخدمت نفس طريقة الترحيل المذكورة اعاله في الفقرة ثانيا للكشف عن عملية تضخيم الDNA استخدام هالم األكاروز بتركيز %.5 بدال من %. اختبار المقدرة األم ارضية لبعض الفطريات المعزولة تم اختبار القدرة االم ارضية لعزالت الفطريات األكثر تك ار ار عزلة من الفطر.R solani عزالت و 9 من M. phaseolina والتي شملت ( ماعدا 2 عزلة من الفطرsolani.F و 2 ) والتي تم الحصول عليها مسبقا من خالل

9 تاثيرها معرفة في انبات بذور الفجل على الوسط الزرعي االكر والماء ماء مقطر( وذلك حسب طريقة بذور الباقالء 20( Water Agar غم اكر Bolkan و Butler لتر (2( بعد ذلك تم كشف القدرة االم ارضية على انبات وحساب شدة االصابة للباد ارت النابتة وفق الدليل المرضي الموصى به للجذور. تحضير المستخلص المائي الو ارق نبات اللزيج )الحسك( وااللبيزيا وعرف الديك وتاثيرها في تثبيط الفطريات المسببة للمرض على الوسط الزرعي PDA ات بعت طريقة Seema واخرون )49( مع بعض التحوي ارت في تحضير المستخلصات المائية وذلك بمزج 50 غم من المسحوق النباتي لكل من )اللزيج االلبيزيا عرف الديك( مع 000 مل من الماء المقطر كال على حدة في دورق حجمي بسعة 2000 مل ترك المزيج في حمام مائي ه ازز بدرجة ح اررة 30 م لمدة نصف ساعة ثم رشح العالق بواسطة جهاز التفريغ الهوائي pump( )Vacuum ثم ر شح المزيج باستخدام طبقات عدة من الشاش الطبي ثم عقم بالبسترة عند درجة ح اررة 64 o م ولمدة محكمة الغلق في الثالجة لحين االستعمال ) 37 (.تم اتباع طريقة 5 دقيقة )2( وقد ح فا السائل في أوعية khanzada واخرون )37( والقريشي) 5 ( وذلك بمزج المستخلص المائي للنباتات المنتخبة مع الوسط الغذائي PDA الذائب بعد أن ع قم وب رد لدرجة ح اررة 45 م اخذ )5 5 0 مل( من المستخلص واضيف الى مل على التوالي من الوسط الغذائي. PDA بينما أضيف الى معاملة المقارنة ماء مقطر فقط وبمعدل ثالثة مكر ارت لكل تركيز وبعد تصلب الوسط الغذائي لقحت االطباق في مركزها بقرص قطر )0.5 ح اررة سم( من مستعمرة فطرية نامية على وسطPDA وبعمر 7 ايام في مركز الطبق الحاوي على أحد الت اركيز سابقة الذكر وحضنت االطباق عند درجة 225 م نفذت التجربة باستخدام التصميم العشوائي الكامل وبعد وصول قطر المزرعة الفطرية لمعاملة المقارنة ( بدون المستخلص( الى حافة الطبق اخذت النتائج بحساب معدل قطرين متعامدين من نمو كل مستعمرة وتم قياس معدل النمو الفطري وحساب النسبة المئوية للتثبيط وكما في المعادلة % للتثبيط= ( -)النمو الفطري في المعاملة /النمو الفطري في المقارنة(( 00 Montealegre وتخرون 44(.) الكشوفات الكيميائية لبعض المركبات الفعالة في المستخلصات النباتية تم التحري عن بعض المركبات الفعالة في المستخلصات النباتية المستخلصة وكما يأتي : الكشف عن الصابونيات Saponins تم تحضير محلول مائي وذلك بمزج وضع في انبوبة اختبار ورج بشدة لمدة وجود الصابونيات )52(. غم من مسحوق النباتات المختارة 5 مع 5 مل من الماء المقطر ثم دقائق وعند تكون رغوة كثيفة تبقى لمدة طويلة يمكن االستدالل على 96

10 الكشف عن ال ارتنجات Resins اخذ 0 مل من كل من المستخلصات السابقة التحضير وأضيف إليها 20 مل ماء مقطر المضاف له حامض الهيدروكلوريك % 40 وان ظهور العكورة Turbidity دليل على وجود ال ارتنجات ( 4 (. الكشف عن الفالفونيد والفالفونول Flavanoides مزج مل من المستخلص المائي مع مل من حامض الكبريتيك المركز فكان ظهور اللون االصفر الداكن دليال على النتيجة الموجبة للكشف )7(. الكشف عن التانينات ( العفصيات( Tannins حضر محلول مائي مكون من غم من المسحوق النباتي لكل نبات وأضيف الى 5 مل من الماء المقطر ثم غلي المحلول وبعد أن بر د اضيف اليه محلول كلوريد الحديديك % اذ يدل ظهور اللون االخضر المزرق او االخضر على وجود المواد العفصية )56,6(. كشف عن الفينوالت تم مزج كمية من كلوريد الحديديك المائي % مع 5 مل من المستخلص المائي للنباتات المختارة وكان ظهور اللون االزرق دليل على وجود المركبات الفينولية )30( الكشف عن القلويدات Alkaloids غ لي المحلول المائي المكون من 0 غم من مسحوق النبات مع 50 مل من الماء المقطر الذي يحتوي على حامضHCL بتركيز %4 ثم رشح المحلول وترك ليبرد ويوضع مل من ال ارشح في انبوبة اختبار مع احد الكواشف األتية )3(: أ كاشف واكنر Wagner reagent حضر باذابة 2 غم من يوديد البوتاسيوم مع.3 غم من اليود في 00 مل من الماء المقطر فأذا ظهر ارسب بني فأن ذلك يدل على ان النتيجة موجبة للكشف. ب كاشف د ارجندروف reagent Dragendrof حضر بمزج 6 غم من يوديد البوتاسيوم مع 0 مل من الماء المقطر ثم أضيف لهما 7 مل من حامض الهيدروكلوريك المركز و 5 مل من الماء المقطر ثم خفف المحلول باضافة 400 مل من الماء المقطر. ج كاشف ماير Mayer reagent تم تحضير محلولين في المحلول )( اذ تم اذابة.36 غم من كلوريد الزئبق في 60 مل من الماء المقطر وفي المحلول )2( اضيف 5 غم من يوديد البوتاسيوم في 0 مل من الماء المقطر ثم مزج المحلوالن جيدا واكمل الحجم الى 00 مل من الماء المقطر )3(. ويتم استبيان النتائج بعد اضافة كل كاشف مع ارشح 97

11 النبات على وجود القلويدات :كاشف د ارجندروف : ظهور ارسب برتقالي; كاشف واكنر : ظهور ارسب بني.كاشف ماير : ظهور ارسب بني او ظهور عكورة. اختبار المقدرة التضادية للفطر Trichoderma viride وقواعد سيقان الباقالء على الوسط الزرعي PDA عزالت ضد الفطريات المسببة لمرض تعفن جذور تم اختبار المقدرة التضادية لعزلة الفطر )Tv( T.viride )التي تم الحصول عليها من جبر كلية الز ارعة/ جامعة بغداد( ضد عزالت الفطريات الممرضة R.solani أ.د. و كامل سلمان F.solani M.phaseolina بطريقة الزرع المزدوج وحسب مقياس واخرون Bell العامل اإلحيائي يغطي الطبق بالكامل دون السماح للفطر الممرض بالنمو ( 2 ) (20( المكون من و خمس درجات () العامل اإلحيائي يغطي ثلثي مساحة الطبق ويغطي الفطر الممرض الثلث الباقي ( 3 (العامل اإلحيائي يغطي نصف مساحة الطبق والفطر الممرض يغطي النصف األخر الثلثين المتبقيين ( 4 (العامل اإلحيائي يغطي ثلث مساحة الطبق بينما يغطي الفطر الممرض ( 5 (يغطي الفطر الممرض الطبق دون السماح للعامل اإلحيائي بالنمو ويعد العامل اإلحيائي فعاال من الناحية التضادية عند درجة تضاد أو 2 مع الفطر الممرض. النتائج والمناقشة المسح الحقلي لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء أظهرت نتائج المسح )جدول 4( الذي اجري في حقول ز ارعة نبات الباقالء وجود وانتشار مرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء في جميع المناطق التي شملها المسح وبنسب إصابة متباينة ت اروحت بين -40 %00 وشدة إصابة من % وكانت اعلى نسبة شدة اصابة في مناطق جبلة الطاهرية المهناوية مويلحة قرية االمام المنتظر وناحية اإلمام/الصباغية على التوالي. وقد يعود سبب ارتفاع نسبة وشدة اإلصابة في هذه المناطق الى إنها مناطق متخصصة في ز ارعة الباقالء إذ يزرع فيها هذا المحصول سنويا وايضا رداءة بناء التربة التي تجهد جذور النباتات وتجعلها حساسة لمسببات المرضية استخدام االصناف الحساسة وبشكل مستمر سنويا لعدم وجود االصناف المقاومة وكذلك الئمة الظروف البيئية لتطور المرض اضافة الى ذلك عدم وجود طريقة فعالة في التخلص من المسببات المرضية المستوطنة في التربة الزر اعية )25(. وال تتفق هذه النتائج مع ما توصلت اليها )( حيث هذا االختالف سبب موعد اج ارء المسح. التباين في الى وجدت ان نسبة وشدة االصابة كانت اعلى وقد مواقع الحقول التي شملها المسح واختالف العوامل البيئية يعزى نتيجة الختالف 98

12 جدول ( 4( نسبة وشدة االصابة بمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء التي شملها المسح لبعض حقول رقم العينة 2 عزل وتشخيص الموقع محرم قرية االمام المنتظر االمام/الصباغية البدعة النيل الطاهرية الوطيفية جبلة محافظة بابل للموسم الز ارعي الفطريات الم ارفقة لجذور وقواعد سيقان الباقالء:- تم عزل وتشخيص أجناس عده من الفطريات من جذور نباتات الباقالء المصابة بمرض تعفن الجذور وقواعد السيقان وقد كانت الفطريات R. solani و.F. solani وphaseolina.M هي االكثر تك ار ار في الظهور باغلب المناطق الجبوري )( وAbo-shady واخرون( 5 ) وقد سجلت وجودا في معظم العينات وان هذه النتائج تتفق مع ما ذكره كل من والمسعودي )7( من ان الفطريات solani.f. solani و R وphaseolina.M نسبة االصابة% شدة االصابة% رقم العينة تعد من اهم المسببات المرضية لتعفن جذور الموقع المهناوية ابي غرق القاسم/الدروع الهاشمية المدحتية العزاوية مويلحة نسبة االصابة% وقواعد سيقان الباقالء. شدة االصابة% F. solani و -2 R. صورة 2. الفطريات االكثر تك ار ار المعزولة من جذور نباتات الباقالء solani - و 3 -. M. phaseolina 99

13 صورة 3. الصفات المجهرية التشخيصة لبعض الفطريات المسببة لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء الصفات التشخيصية للفطر R.solani التي تبين ازوية التفرع والتخصر عند منطقة التفرع والحاجز القريب منها, االبواغ الكونيدية الكبيرة والصغيرة للفطر.F, solani 3- الجسم الحجري للفطر )X40(..M phaseolina التشخيص الجزيئي Molecular Identification عزل الحامض النووي :DNA عزل DNA من عزالت الفطريات المدروسة ويظهر الجدول )5( تركيز ونقاوة الدنا المستخلص إذ بلغ التركيز نانوك ارم /مايكروليتر وت اروحت نقاوته ما بين.5.9. ومن قيم التركيز والنقاوة في الجدول) 5 ( والصورة )4( يتبين ان الدنا المستخلص من العزالت كان بنقاوة كافية ألج ارء تفاعل تضخيم السلسلة إذ ان عملية تضخيم السلسلة )PCR( ال تتطلب كمية كبيرة من الدنا فضال عن ان الكمية العالية من الدنا قد تزيد من تكوين نواتج تضخيم غير محددة بينما الكمية القلية للدنا تقلل دقة التضخيم ( Green و 202,Sambrook (. 00

14 نقاوة DNA , ت الجدول )5( قيم التركيز والنقاوة في DNA رمز العزلة تركيزDNA نانوكرام/ مايكروليتر المستخلص من الفطريات الممرضة رمز ت العزلة تركيزDNA نانوكرام /مايكروليتر FS-6 FS-7 FS-9 FS-0 FS-2 FS-3 FS-4 PM- PM-2 PM-3 PM-6 PM-7 MP-8 PM-9 PM-3 PM-5 FS نقاوة DNA RS- RS-2 RS-4 RS-5 RS-6 RS-7 RS-8 RS-0 RS-2 RS-3 SR-4 RS-5 FS- FS-2 FS-3 FS-4 FS *كل رقم يمثل معدل لمكررين B ] A ] صورة ) 4 (الترحيل الكهربائي لدنا عزالت على هالم األكاروز % C اذ يمثل A.الحامض النووي لعزالت الفطر R. solani F. C solani النووي لعزالت الفطر B.الحامض..M phaseolina النووي لعزالت الفطر C.الحامض 0

15 Polymerase Chain Reaction تفاعل تضخيم السلسلة PCR اظهرت نتائج تفاعل البلمرة المتسلسل لتضخيم دنا العزالت الزوج الباديء التشخيصي )ITS/ITS4( بحجم ونتائج االثنى عشر للنوع R. solani باستخدام الهجرة الكهربائية باستعمال االكاروز بتركيز %.5 حزم 700bp لجميع العزالت الداخلة في التفاعل وهذه النتيجة تؤكد ان الفطر المعزول هو R. solani والتي تتضمن 2 وتتفق هذه النتيجة مع تلك النتائج التي توصل اليها وهذا هو الحجم المتوقع الذي ينتجه هذا الزوج من البادئات عزلة كما هو مبين في الشكل )-5( Helmy واخرون )32( الذي قام بتشخيص 3 عزلة من الفطر Rhizoctonia solani من جذور نبات الباقالء باستخدام البادئ التسلسلي الجزيئي. كما اعطت نتائج التفاعل لتضخيم دنا العزالت للنوع solani ITS-ITS4 F. TEF-F.s4R( )TEF-F.s4F/ حزم ل 0 عزالت من اصل وبنفس الوزن باستخدام الزوج البادئ التشخيصي 2 (2,,9,8,7,6,5,3,2,( ينتجه هذا الزوج من البادئات 658bp بحجم العشر F. الفطر solani جهاز ال عزلة والتي تشمل كما موضح بالشكل )2-5( وهذا هو الحجم المتوقع الذي وهذه النتيجة تؤكد ان العزالت التي اعطت حزمة عند هذا الحجم الجزيئي هو وهذه النتائج تتفق مع ما حققه Arif واخرون )8) PCR خفف العناء في تشخيص انواع من الفطريات العائدة الى الجنس ان استعمال التقانة الجزيئية باستخدام SPP. Fusarium وخاصة النوع.F solani والمعزولة من انواع مختلفة من النباتات ولوحا أيضا من خالل التفاعل لتضخيم دنا اذ استخدم الجين TEF-α العزالت للنوع.M phaseolina التشخيصي )MpKF/MpKR( ظهور حزم لجميع العزالت المستعملة في التفاعل بحجم الخاص لهذا الغرض. باستخدام الزوج البادئ وهذا هو 350bp الحجم المتوقع الذي ينتجه هذا الزوج من البادئات وتؤكد هذه النتيجة ان جميع هذه العزالت هي تابعة للفطر M. phaseolina كما هو مبين في الشكل )3-5( وتتفق هذه النتائج مع ما حصل عليها Babu (9) من ان استعمال البادئ الخاص بالفطر MpKFI MpKRI.M phaseolina التفاعل بحجم.350bp واخرون اعطى حزمة لهذا 02

16 2 صورة 5. الترحيل الكهربائي على هالم األكاروز بتركيز %.5 لنواتج تضاعف الDNA حيث تمثل الصورة - لعزالت الفطر,(2-( R. solani 2 -عزالت الفطر solani 3 F. 3-3 (2,,9,8,7,6,5,3,2,( وعزالت الفطر )9-( M. phaseolina 4-4.اختبار المقدرة األم ارضية لبعض الفطريات المعزولة الكشف عن العزالت الممرضة باستعمال بذور الفجل اتضح من نتائج الجدول )6( إن جميع عزالت الفطريات المختبرة سببت خفض معنوي في النسبة المئوية لالنبات قياسا بمعاملة المقارنة عزالت الفطر solani والتي بلغت النسبة المئوية النبات البذور فيها M. phaseolina و.F. solani و R. التي شملت %98.67 وقد تفوقت بعض RS-5 RS-4 RS- RS-0 RS-8 RS-7 اإلم ارضية و FS-4 FS-7 FS-6 FS-3 في خفض النسب المئوية لالنبات عن باقي العزالت إذ بلغت خفض معنوي بنسبة انبات بنسب متفاوتة ت اروحت بين وMP-9 3 MP-5 %0 % بمقدرتها في حين حققت العزالت االخرى وتتفق هذه النتائج مع ما وجده الجبوري (( وجبر والربيعي )0( وعبدو وتخرون )2( من ان معظم الفطريات المختبرة المسببة لمرض تعفن جذور النباتات المفحوصة أحدثت خفضا معنويا بنسبة انبات البذور في الوسط الزرعي قياسا بمعاملة المقارنة. 03

17 جدول) 6 ( الكشف عن العزالت الممرضة الم ارفقة لجذور وقواعد سيقان الباقالء المصابة باستعمال بذور الفجل. المعدل نسبة االنبات المعدل المعامالت نسبة االنبات المعامالت PM PM RS FS RS RS FS FS RS PM RS RS MP-8 8,00 FS RS FS PM RS RS SR FS PM FS FS PM RS FS المقارنة 3.33 PM FS L.S.D RS PM-9 R.S-8 F.s-6 Mph-9 control صورة 6.تأثير الفطريات الممرضة في انبات بذور الفجل في الوسط الزرعي األكر والماء قياسا باالنبات الطبيعي في معاملة المقارنة. اختبار تأثير بعض الفطريات الممرضة في إنبات بذور الباقالء وباد ارتها اشارت نتائج هذه التجربة )الجدول 7( الى التفاوت بين العزالت في خفض نسب االنبات والتغاير في شدة االصابة لذا تم انتخاب عزلة واحدة من كل فطر الستعمالها في التجارب الالحقة والتي تشمل RS-8 و FS- 6 و.MP-9 تشير النتائج الى ان جميع العزالت اظهرت قدرة ام ارضية عالية في اصابة الباد ارت ولكنها 04

18 El )7) () تباينت في قدرتها االم ارضية وهذا يتفق مع ما وجده جبر (9( و الجبوري والمسعودي و. )24( جدول )7( تاثير بعض العزالت الفطرية في انبات بذور الباقالء El ShamyوGamal المعامالت نسبة االنبات شدة االصابة% المعامالت نسبة االنبات شدة االصابة% FS-3 FS-5 FS-0 MP-2 FS- FS-9 FS-3 MP-6 MP-3 MP-5 FS-2 MP- MP-8 MP-7 MP-3 المقارنة L.S.D RS-5 RS-8 RS-0 RS-4 RS- RS-7 RS-3 RS-2 RS-6 RS-5 FS-6 RS-2 RS-4 FS-7 FS-4 MP-5 MP-9 كل رقم يمثل معدل لثالثة مكر ارت تاثير بعض المستخلصات النباتية في تثبيط عزالت الفطريات المسببة لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء على الوسط الزرعي PDA اظهرت النتائج الموضحة في الجدول )8( ان المستخلص المائي لللزيج وااللبيزيا وعرف الديك وبالت اركيز ( 5 و 0 و %5 ) له فعالية تثبيطية ضد الفطريات الممرضة المدروسة R. solani و 05

19 06 و F.solani M. phaseolina الفطريات اعاله لجميع المستخلصات عند التركيز و ( قياسا بمعاملة المقارنة بدون المستخلص فقد بلغت النسبة المئوية لتثبيط %5 و (% على التوالي وبلغت عند التركيز ( % و و )% وفي التركيز %5 بلغت ( و و ) %46.70 على التوالي. ومن خالل هذه النتائج يتضح تفوق مستخلص او ارق نبات اللزيج معنويا في جميع ت اركيزه المضافة الى الوسط الزرعي والمعامل بها الفطريات الممرضة اعاله يليه في الفعالية مستخلص او ارق نبات عرف الديك حيث اثبت تفوقه على مستخلص او ارق شجرة االلبيزيا وبفروق معنوية قياسا بمعاملة المقارنة. جدول (8( تاثير المستخلص المائي لنباتات اللزيج )الحسك( وااللبيزيا وعرف الديك في نمو الفطريات المستخلصات النباتية اللزيج االلبيزيا عرف الديك المقارنة الممرضة R. solani تركيز المستخلص % و F.solani و.M phaseolina على الوسط الزرعي PDA معدل النمو MP-9 F.s-6 R.s-8 نسبة التثبيط % معدل النمو نسبة التثبيط % معدل النمو نسبة التثبيط % L.S.D معدل النمو L.S.D. نسبة التثبيط.98 وتعزى الكفاءة التثبيطية العالية لمستخلص اورق نبات اللزيج وعرف الديك وااللبيزيا ضد ضد هذه الفطريات كما موضح بالصورة )7( لوجود مركبات الصابونينات والتانينات وال ارتنجات والفينوالت والقلويدات والفالفونات التي لها الفعل التثبيطي لكثير من االحياء المجهرية كما انها تحمي النبات من الحش ارت الضارة

20 فتساعد على نمو النبات طبيعيا )4). اتفقت هذه النتائج مع ما وجده Marian واخرون (42( تبين مختبريا ان استخدام مستخلص نبات اللزيج كان له تاثير في االقالل من النمو االشعاعي للفطرين Aspergillus Abdul وكذلك بين.PDA على الوسط الزرعي Acremonium وchrysogenum ochraceus Aspergillus niger واخرون )4( ان مستخلص او ارق شجرة االلبيزيا لها فعل تثبيطي للفطرين Shakoor وflavus. Aspergillus البيزيا عرف الديك اللزيج R.s-8 البيزيا عرف الديك اللزيج F.s-6 البيزيا عرف الديك اللزيج صورة 7. تاثير المستخلص المائي للنبات اللزيج وااللبيزيا وعرف الديك في نمو الفطريات الممرضة على الوسط PDA بتركيز %5 الكشوفات الكيميائية لبعض المركبات الفعالة في المستخلصات النباتية. اظهرت نتائج وااللبيزيا وعرف الديك تمتلك خواص 07 الكشف الكيميائي عن المكونات الفعالة الموجودة في المستخلصات النباتية الخام لللزيج تضادية ضد الجدول )9( احتواء المستخلصات على اغلب المركبات الفعالة الموجودة في النباتات التي الميكروبات. وقد تباين وجود هذه المركبات الفعالة من مستخلص الى اخر فنجد ان المستخلص الخام لللزيج احتوى على مركبات القلويدات والصابونينات والتانينات والفالفونيدات وال ارتنجيات والفينوالت وهذه النتائج مطابقة لما وجده Suresh واخرون )54( عالية ضد انواع من الفطريات مثل Alternaria zinnia حيث ان هذه المركبات وcinerea Botrytis تمتلك MP-9 فعالية تثبيطية وPhoma narcissi و

21 Fusarium وsolani phytophthora وcapsici Fusarium وoxysporum solani Rhizoctonia.)35,33.22( واحتوى مستخلص االلبيزيا الخام على الصابونينات والتانينات والفينوالت والفالفونيدات واتفقت النتائج مع ماوجده Rahul واخرون )46(. واحتوى مستخلص عرف الديك الخام على الصابونينات والتانينات وال ارتنجات والفينوالت والقلويدات والفالفونات والتثبيطي) 47 ( وجاءت هذه النتائج مطابقة لنتائج الد ارسات السابقة التي شملت هذه النباتات فقد ذكر )23( Cowan ان استخدام الماء في تحضير المستخلصات الخام كان جيدا في استخالص العديد من المركبات الفعالة الموجودة في النباتات مثل الصابونينات والتانينات والكومارينات والفالفونات. جدول )9( الكشوفات الكيميائية لبعض المركبات الفعالة في المستخلصات النباتية المجموعة الفعالة طريقة الكشف النتيجة الديك عرف البيزيا اللزيج - القلويدات كاشف واكنر ارسب بني - كشف دارجندوف ارسب برتقالي - كشف ماير ارسب بني او عكورة الفالفونات حامض الكبريتيك المركز لون اصفر داكن التانينات كلوريد الحديديك % لون اخضر - %4 ال ارتنجات حامض الهايدروكلوريك عكوره الصابونينات ماء مقطر ارسب ابيض الفينوالت كلوريد الحديديك لون ازرق )( النتيجه موجبة ) ( النتيجه سالبة اختبار المقدرة التضادية للفطر T.viride الباقالء على الوسط الزرعي PDA أظهرت النتائج أن فطر المدروسة على الوسط الزرعي المقاومة األحيائية ضد عزالت الفطريات المسببة لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان T. viride 08 PDA (FS-6( solani بلغت بنسبة تثبيط %00 بنسبة حيث مختبريا وبلغت الدرجة %75 اي او 2 الدرجة حقق نسبة تثبيط عالية ضد الفطريات الممرضة لوحا تثبيطه للفطر )RS-8(.R solani والفطر.F اما الفطر الممرض (MP-9).M phaseolina حسب السلم الذي وضعه Bell.)4( واخرون )20( كما مبين تتفق هذه النتائج مع ما توصل اليه الرجبو ومحمود )3( من ان الفطر االحيائي.T viride نموا من الفطر الممرض Rhizoctonia solani حيث فقد بالصورة كان اسرع غطى بنموه كامل مساحة الطبق دون السماح للفطر

22 الممرض بالنمو وهذا يعني ان التضاد من الدرجة Mallesh بين وقد %00. او واخرون )4( ان المقاوم الحيوي.T viride ثبط نمو الفطر R.solani بنسبة %94.4 ثم تاله الفطر االحيائي.T harzianum بنسبة %86.4 وهذا دليل على تفوق العامل االحيائي.T viride وذلك النتاجه المضاد الحيوي المثبط لسبو ارت الفطريات كما وجد إنه له قدرة Gliotoxin Macrophomina phasiolina R ذو الفعل تضادية ضد العديد من المسببات المرضية النباتية مثل.solani sp..)55,39( Pythium spp. Fusarium فضال عن امتالكه الية التنافس وسرعة نموه وله القدرة على التطفل حيث يلتف على الخيوط الفطرية لعائله ويخترق جد ارن الخاليا) 38 (. Con. Con. Con. MP-9T.V F.s-6T.V R.s-8 T.V االستنتاجات صورة -انتشار مرض تعفن جذور -2 8.القدرة التضادية العالية للفطرT.viride ضد الفطريات الممرضة وقواعد سيقان الباقالء في جميع المناطق التي شملها المسح في محافظة بابل. إن المسببات الرئيسة لمرض تعفن جذور وقواعد سيقان الباقالء في حقول محافظة بابل هي الفطريات Rhizoctonia solani و Fusarium solani و Macrophomina phaseolina الذي اكد تشخيصها تقانة PCR بواسطة 3- إن استعمال على تثبيط اذ سجال انتشا ار واسعا في اغلب الحقول باالضافة الى القدرة االم ارضية العالية لها. الفطر االحيائي Trichoderma viride ومستخلص نبات اللزيج مسببات هذا المرض تحت الظروف المختبرية. وااللبيزيا وعرف الديك عمال 09

23 المصادر -الجبوري حرية حسين شهاب ( 2002 (. تأثير استخدام معيق النمو كلتارCultar وبعض المستخلصات النباتية على اصابة نبات الباقالء بمسببات تعفن الجذور. رسالة ماجستير كلية الز ارعة جامعة بغداد. 2 -الرجبو مها اكرم محمد علي ( 2004 (. د ارسة تاثير مستخلص نبات الزعتر spp. Thymus على بعض الفطريات. اطروحة دكتو اره كلية الز ارعة جامعة الموصل. 3 -الرجبو مها اكرم و محمود نادية قحطان ( 203). تاثير المثبط لنمو الفطرsolani Rhizoctonia باستخدام المستخلص الكحولي لبعض النباتات مجلة علوم ال ارفدين 24 )2( : الشماع علي عبد الحسين) 989 ). العقاقير وكيمياء النباتات الطبية. دار الكتب للطباعة والنشر نينوى الع ارق. 5 -القريشي منار كريم فاضل) 20 ). تقييم فاعلية بعض المستخلصات النباتية في نمو بعض الفطريات الممرضة. رسالة ماجستير.كلية العلوم. جامعة كربالء. 6 -المجموعة االحصائية السنوية) 202(. الجهاز المركزي لالحصاء. و ازرة التخطيط.الع ارق. 7 -المسعودي ابتسام محمد حسين) 202 (.تقييم الدور الحيوي لبعض األنواع البكتيرية في مكافحة مرض تعفن جذور الباقالء وتحسين معيار نمو النبات في محافظة بابل.رسالة ماجستير.الكلية التقنية/المسيب.جامعة الف ارت االوسط. 8 -جاسم ناجي سالم )2007(. د ارسة مرض تعفن جذور وقواعد سيقان محصول الباقالء المتسبب عن الفطر (Kuhn) Rhizoctonia solani في محافظة البصرة ومكافحته إحيائيا وكيميائيا. أطروحة دكتو ار. كلية الز ارعة. جامعة البصرة. 9 -جبر كامل سلمان) 200 (. مسح لمرض تعفن جذور وقواعد وسيقان الباقالء وتشخيص الفطريات المسبب له ومكافحته إحيائيا. مجلة العلوم الز ارعية الع ارقية 32)2( : جبر كامل سلمان. حميد عباس الربيعي) 2008 (. تاثير الفطرsolani Rhizoctonia في انبات بذور القطن ومكافحته باستعمال بعض المستخلصات النباتية. مجلة العلوم الز ارعية الع ارقية )4( : -شامي سامي اغا) 982 ). د ارسة بعض الصفات الدوائية والسمية ألزهار القيصوم. رسالة ماجستير. كلية الطب البيطري. جامعة بغداد. 0

24 2 -عبدو ارنيا حاج بسام بياعة وعباس عباس( البطاطا/البطاطس في سورية. مجلة وقاية النبات العربية : 3 -علوان صباح لطيف و ف ارس علي الركابي 202(. تحديد المجموعات التشابكية لمجتمع الفطر على )200(. تاثير الفطر Rhizoctoni solani ورواشحه على انبات بذور ونمو باد ارت الباميا ومكافحتها كيمياويا وحيويا. مجلة الكوفة للعلوم الز ارعية. 2)(: Abdul S., Amjad U. R., Gul Z., Uzma K., Yasir I., Abdul A. N. and Muhammad N..(204). Biological screening of Albizia lebbek L. and Mimosa himalayana Gamble (Mimosaceae). Journal of Medicinal Plant Research Vol. 8(20): Abo-shady,A.M.,Al-ghaffar,B.A.,Rahhal,M.M.H. and Abd-EL M H.A.(2007). Biological Control of Faba Bean Pathogenic Fungi by Three Cyanobacterial Filtrates. Pakistan. Journal. of Biological Sciences 0 (8): Adewale, A.O. ; David, A.A. ; Abiodun, O.O. and O.A, Craig (2007). Studies on antimicrobial, antioxidant and phytochemical analysis of Urenalobataleave extract. J. Physical & Natural Sci. (2) : Al-Khazragi, S.M. (99). Biopharmacological study of Artemisia herba Alba. M. Sc. Thesis. Baghdad University. 8-Arif M., Shilpi C., Zaidi N. W., Rayar J. K. Variar M. and Singh U. S. (202). Development of specific primers for genus Fusarium and F. solani using RDNA subunit and transcription elongation factor (TEF?) gene. African Journal of Biotechnology Vol. (2): Babu, B. K.; Anil K. S.; Alok K. S.; and Dilip K. A. (2007). Identification and detection of Macrophomina phaseolina by using species -specific oligonucleotide primers and probe. Mycologia, 99(6): Bell, D. K., H. D. Well and G. R. Markham. (982). In vitro antagonism of Trichoderma species against six fungal plant Pathogens. PhytoPathology. 72 : Bolkan, H. H., and E. E. Butler. (974). Studies on Heterokaryosis Virulence of Rhizoctonia solani. Phytopathology. 64: Bonanomi, G. Antignani, V. Barile, E. Lanzotti, V. and F. Scala. (20). Decomposition of Medicago sativa Residues Affects Phytotoxicity, Fungal growth and Soil-born Pathogen Disease. Journal of Plant Pathology 93(): Cowan, M. M. (999). Plant products as antimicrobiol agents. Clinical Microbiology Reviews, 2 (4) : El Gamal, N. G. and El Shamy, A. R. (204) Allelopathic impact of some antioxidants on Fusarium solani causing root rot on faba bean (Vicia fabae). Journal of Agricultural Technology 0(4):95-96.

25 25-El-Mougy, N. S., Aly M. D. I. H., Imbabi E. I. and Abdel-Kader M. M. (20). First Record of Sclerotinia Foliage Blight Disease on Pepper under Protected Cultivation System in Egypt. P roc. 2th Egyptian Phytopathological Society, 3-4. ARC, Cairo, Egypt. 26-FAO. (2006). FAO statistical yearbook , Available at: yearbook/vol /index.asp (online, verified July 2008). 27-Goicoechea, N., Aguirreolea J. and Garcia-Mina J. M. (2004). Alleviation of Verticillium wilt in pepper (Capsicum annuum L.) by using the organic amendment COA H of natural origin. Scientia Horticulturae, 0: Graham, P.H.; and C.P. Vance.(2003). Legumes : Importance and constraints to greater use.plant physiological 3: Green, R. M. and Sambrook, J.(202). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition. CSHL Press. 30-Harborne, J.B. (973). Phytochemical methods. Champman and Hall., London, VK. 3-Harborne,J.B. (984). Phytochemical methods. Aguide to modern techniques of plants analysis. 2 nd. ed. Champan Hall, London, VK. 32-Helmy M. M., Gado E., El-Deeb S., Mostafa H. M.. (205) Phenotypic Diversity and Molecular Identification of the Most Prevalent Anastomosis Group of Rhizoctonia solani Isolated from Diseased Faba Bean Plants. American Journal of Life Sciences. 3 (): Houghton P., N. Patel, M. Jurzysta, Z. Biały, C. Cheung. (2006). Antidermatophyte activity of Medicago extracts and contained saponins and their structure-activity relationship. Phytother. Res., 20: Icarda,(2003). Faba bean Pathology progress report. food Legume Improvement program. ICARDA. Aleppo. Syria. 35-Jarecka, A, A. Saniewska, Z. Bialy and M. Jurzysta. (2008). The effect of Medicago sativa saponins on the growth and development of Fusarium oxysporum schlecht F. sp. Tulipae Apt. ACTA Agrobatanica 6.(2): Kasumbwe, K, Venugopala, K.N, Mohanlall, V. and Odhav, B. (204). Antimicrobial and antioxidant activities of substituted halogenated coumarins. Journal of Medicinal Plants Research 8(5): Khanzada, Sh. A., Sh M. Iqbal and A. Akram. (2006). In vitro efficacy of plant leaf extracts against Sclerotium rolfsii Saac.Mycopath., 4() :

26 38-Khare, A., B. K. Singh and R. S. Upadhyay. (200). Biological control of Pythium aphanidermatum causing damping off of mustard by mutants of Trichoderma viride 433. Journal of Agricultural Technology. 6: Krupa P., K. Bandurska; A. Berdowska; M. Myga-Nowak; M. Marczak; A. Godela; S. Bednarek. (204). Improving the nutritional values of plant products through the use of biological agents such as Trichoderma viride in tomato plantations. Journal of Animal &Plant Sciences, 23(3): Kumhar, K. C., Babu, A., Bordoloi M. and Ali A.(204). Evaluation of culture media for biomass production of Trichoderma viride (KBN 24) and their production economics. American Journal of Agriculture and Forestry 2(6): Mallesh, S.B.; Narenderappa, T.; Ramanujam, B. (2008). Evaluation of microbial antagonists and organic amendments on root rot of sage Salvia officinalis by Fusarium solani and Rhizoctonia solani. Karnataka J. Agric. Sci. 2(2), Marian B., Andreea D., Steliana R., Alina B., Dumitru L. (203). Testing of the Antifungal Effect of Extracts of burdock, thyme and rough cocklebur. Studia Universitatis Vasile Goldi Seria. 23(): Mckinney, H.H. (923). Influence of soil temperature and moisture on infection of wheat seedling by Helminthosporum sativum. J. Agric. Research 26: Montealegre, J. R.; R.Rodrigo; P.M. Luz.; H. Rodrigo; S.polyana; and B. Ximena. (2003). Selection of bioantagonstic bacteria to be used in biological contro of Rhizoctonia solani in tomato.j. Biotec. 6: Pommerenke, C.; Musken, M.; Becker, T. and Dotsch, A.(20). Global genotype phenotype correlation in Pseudomonas aeruginosa.plos. Pathog.6 : Rahul, C. ; Pankaj P.; Sarwan S.K. and Mahesh J. K. (200). Phytochemical screening and antimicrobial activity of Albizzia lebbeck. J. Chem. Pharm. Res. 2(5): Saad B, Azaizeh H, Abu-Hijleh GH, Said O (2006). Safety of traditional Arab herbal medicine.evid Based Complement Alternat Med 3: Sambrook, J.; Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (989). Molecular a cloning:laboratory manual (2 th end) Gold Spring Harbor. New York. USA. 49-Seema, M., S. Reenivas, S. S., Rekha, N. D. and N. S. Deraki, (20). In vitro studies of some plant extracts against Rhizoctonia solani Kuhn Infecting 3

27 FCV tobacco in Karnataka Light Soil, Karnataka, India. Journal of Agricultural Technology vol.7(5): Small, M. (2009). Plant Pathology. Colorado state Uni. Extension, Garden Note # 33. 6pp. 5-Smolinska, U Survival of Sclerotium cepivorum sclerotia and Fusarium oxysporum chlamydospores in soil amended with cruciferous residues. J. Phytopath. 48: Sofowora, A. (993).Screening plants for bioactive agents. In : Medicinal Plantsand Traditional Medicinal in Africa. 2 nd. ed. Spectrum Books Ltd. Sunshine House, Ibadan, Nigeria. P: Stojsin, V., Budakov, D., Jacobsen, B., Grimme, E., Bagi, F. and Jasni, S.(2007). Identification of Rhizoctonia solani isolates from Sugar Beet roots by analyzing the ITS region of ribosomal DNA. Proc. Nat. Sci., Matica Srpska Novi Sad. 3, Suresh, J.; Rajan, Dhanya and Nagamani. (203) Anti-diabetic activity of aerial parts of Xanthium Strumarium linn. World Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 3(3): Talla, S. G., Raju, A. S. R., Karri, S., & Kumar, Y. S. (205) Production and antagonistic effect of Trichoderma spp. on pathogenic microorganisms (Botrytis cinerea, Fusarium oxysporium, Macrophomina phasealina and Rhizoctonia solani). African Journal of Biotechnology. 4(8): Trease, G.E. and Evans, W. (2002). Pharmacognosy. 5 th. Esaunders 57-Van Leur, J.A.G.; R.J. South well; and J.M. Mackie. (2008). Aphanomyces root rot on faba bean in northern NSW. Journal Australasian Plant Disease 4