Comparison between ELISA and other serological tests for diagnosis of brucellosis in sheep in Ninevah Province

Transcript

1 مقارنة اختبار االليزا واالختبارات المصلية األخرى لتشخيص مرض البروسلوسز في الضأن في محافظة نينوى عمر خزعل الحنكاوي وماجد شيال رحيمة فرع الطب الباطني والوقائي كلية الطب البيطري جامعة الموصل موصل العراق الخالصة استھدفت الدراسة مقارنة بين اختبار اإلليزا واالختبارات المصلية األخرى (اختبار وردية البنكال Rose bengal test واختبار وردية البنكال المحو ر Modified rose bengal test واختبار التالزن األنبوبي Tube agglutination test واختبار المركبتوإيثانول الثنائي- 2 (mercapto ethanol test في تشخيص مرض البروسلوسز في الضأن ومعرفة مدى انتشار المرض.تضمنت الدراسة 72 رأسا من الضأن توزعت على قطيعا إذ تم جمع عينة مصل من الضأن البالغة جنسيا ومن كال الجنسين ومن 7 مواقع جغرافية مختلفة في محافظة نينوى. إذ كانت نسبة انتشار اإلجھاض الكلية (%2.2) في حين تباينت ھذه النسبة تبعا الختالف المناطق, إذ سجلت منطقة تلكيف ومركز مدينة الموصل أعلى نسبة النتشار اإلجھاض وھي (%.) في حين سجلت منطقتي بعشيقة والشمسيات أقل نسبة (%1.9). استخدم اختبار وردية البنكال كاختبار مسحي للكشف عن نسبة تواجد أضداد المرض إذ كانت نسبة اإلنتشار الكلية (%.) وتباينت النسب تبعا للمناطق إذ سجلت في منطقة الشيخان أعلى نسبة النتشار المرض (%22.7) تلتھا منطقة تلكيف (%1.) بينما سجل في مركز مدينة الموصل أقل نسبة وھي (%). كما تباينت نسب انتشار المرض الكلية قد تباينت طبقا لنوع االختبار المستخدم إذ سجل اختبار اإلليزا أعلى نسبة بلغت (%1.9) وتاله اختبار وردية البنكال المحور (%1.) واختبار وردية البنكال (%.) واختبار التالزن األنبوبي ).9 %) ثم اختبار المركبتوإيثانول الثنائي (%.2). وعند مقارنة النتائج الموجبة الختبار اإلليزا مع نتائج االختبارات المصلية األخرى (اختبار وردية البنكال واختبار وردية البنكال المحو ر واختبار التالزن األنبوبي واختبار المركبتوإيثانول الثنائي) كانت نسبة التوافق بين نتائج اختبار اإلليزا وھذه االختبارات (%7.1) و( %. ) و( %.1 ) و( %1.7 ) على التوالي. وقد ظھر وجود فرق معنوي بين اختبار اإلليزا واالختبارات المصلية األخرى عند مستوى معنوية (0.0>P). Comparison between ELISA and other serological tests for diagnosis of brucellosis in sheep in Ninevah Province Abstract O.KH. Al-Hankawe and M.S. Rhaymah Department of Internal and Preventive Medicine, College of Veterinary Medicine, University of Mosul, Mosul, Iraq The study was conducted to compare between the ELISA test and other serological tests (Rose bengal, modified rose bengal, tube agglutination and 2-mercapto-ethanol tests), for diagnosis of Brucellosis in sheep, and to identify the prevalence of the disease. The study included 72 heads representing flocks, sera were collected from adults of both sexes from different seven geographical areas in Ninevah Province. The total prevalence of abortion was (%2.) this value varied according to different areas. The highest in Telkef and Mosul center was (.%) and the lowest in Bahsheka and Shamseat was (1.9%). using the Rose-bengal test as a screening test to identify the prevalence of the disease, the total prevalence was (%.) and this value varied according to the areas, the highest prevalence was in Al-Shekan (22.7%), then Telkef (1.%), while the lowest was in Mosul city center (%). The study revealed that the prevalence of the disease varied according to the type of the serological tests were used. ELISA recorded the highest (1.9%) then the modified Rose-bengal test (1.%), Rosebengal test (.%), tube agglutination test (.9%) and 2-Mercapto-ethanol test recorded (.2%). When comparing the positive results of ELISA and other serological tests (Rose-Bengal, Modified rose-bengal, Tube agglutination, 2-mercapto-ethanol tests) the degree of agreement was (7.1%), (.%), (.1%) and (1.7%) respectively. The results reveals significant (P<0.0) difference between ELISA and other serological tests. Available online at

2 م المقدمة المجلة العراقية للعلوم البيطرية المجلد ٢٦ عدد إضافي (٩٧-١٠٣) ٢٠١٢ ٢ يعد مرض البروسلوسز من األمراض الھامة والمشتركة والذي ال يمكن السيطرة عليه بسھولة السيما في المناطق الموبوءة بالمرض كدول البحر المتوسط والشرق األوسط وأفريقيا وأمريكا الالتينية وجزء من آسيا (1). يحدث المرض من جراء اإلصابة بجراثيم تعود لجنس البروسيال ولھذه الجراثيم القدرة على العيش والتكاثر داخل خاليا المضيف (2,). تأتي األھمية االقتصادية للمرض من خالل تسببه في حاالت اإلجھاض السيما في الثلث األخير من الحمل فضال عن ظھور والدات ضعيفة ال تستطيع العيش طويال مع فشل في التكاثر ونفوق أعداد كبيرة من اإلناث المجھضة نتيجة احتباس المشيمة والتھاب الرحم (,) ويصعب تشخيص المرض اعتمادا على العالمات السريرية نظرا لتعددھا لذا فإن التشخيص بصورة دقيقة يجب أن يؤكد عن طريق عزل المسبب المرضي أو عن طريق قياس االستجابة المناعية ضد المسبب المرضي (7). إن النمو البطيء لجراثيم البروسيال في أثناء العزل األولي يجعل التشخيص يأخذ وقتا طويال مما يسبب حدوث مضاعفات عديدة قبل التوص ل إليه (9 ) لذا فإن اللجوء إلى استخدام االختبارات المصلية في التشخيص يسھل من عملية الكشف عن اإلصابة وعالج الحاالت قبل بلوغھا المراحل المتقدمة (7) فضال عن أن برامج السيطرة على المرض تعتمد كلي ا على طرائق التشخيص المصلي ( ) ومن ھذه االختبارات اختبار وردية البنكال واختبار تثبيت المتمم اللذين يعد ان من االختبارات المعتمدة في الكشف عن المرض في البلدان األوربية الستخدامھا في برامج السيطرة على المرض في المجترات الصغيرة (12) لكن ھذين االختبارين ال يميزان بين الحيوانات المصابة طبيعيا والحيوانات الملقحة (1) فضال عن النتائج الموجبة الكاذبة لھذين االختبارين فقد طو ر حديثا اختبار اإلليزا لتجنب العديد من المشاكل والعيوب التي تحدثھا االختبارات المصلية األخرى (1) إذ يتميز ھذا االختبار بكفاءة عالية في التشخيص فضال عن أنه ذو فائدة في التفريق بين الحيوانات الملقحة والحيوانات المصابة طبيعيا (1). كما سج ل بأنه فعال وكاف لتشخيص المرض في الضأن (1-1) ولغرض دراسة كفاءة اختبار االليزا ومقارنتھا مع االختبارات المصلية األخرى وضعت ھذه الدراسة لمعرفة نسبة انتشار اإلجھاض وداء البروسيال في بعض قطعان الضأن في محافظة نينوى وتقييم أھمية اختبار اإلليزا في التشخيص من خالل مقارنة نتائجه مع نتائج بعض االختبارات المصلية األخرى. المواد وطرائق العمل تضمنت الدراسة 72 رأسا من الضأن توزعت على قطيعا إذ تم جمع عينة دم( 29 من اإلناث المجھضة والحوامل و من الذكور) من الضأن البالغة جنسيا وبصورة عشوائية وبعمر (2- ) سنوات في الفترة من حزيران ٢٠٠٥ ولغاية نيسان ٢٠٠٦ واختيرت سبعة مواقع مختلفة جغرافيا في محافظة نينوى لجمع نماذج الدم. سحبت عينات الدم من الوريد الوداجي باستعمال سرنجات معقمة وبواقع مل ومن ثم وضعت في أنابيب زجاجية حجم مل نظيفة ومعقمة وتركت نماذج الدم في الثالجة بدرجة م لمدة (1-12) ساعة لغرض تكوين الخثرة. في صباح اليوم التالي سحب المصل ووضع في النابذة بسرعة 100 دورة/دقيقة لمدة دقائق ثم سحب المصل بواسطة ماصات باستور المعقمة ووضع في أنابيب بالستيكية صغيرة معقمة وتم إجراء اختبار وردية البنكال في اليوم نفسه ووضعت األمصال في المجمدة -20 لحين إجراء االختبارات المصلية األخرى عليھا (اختبار وردية البنكال وتم إجراؤه حسب تعليمات الشركة المجھزة للمستضد واختبار التالزن األنبوبي وتم إجراؤه حسب (19) و اختبار 2 -مركبتوإيثانول وتم إجراؤه حسب (20) واختبار وردية البنكال المحور وتم إجراؤه حسب (21) واختبار اإلليزا غير المباشر وأجري ھذا االختبار حسب تعليمات الشركة المجھزة لعدة االختبار). إذ تم استخدام مستضد البروسيال الختباري وردية البنكال ووردية البنكال المحور المجھز من شركة _(Omega) أمريكا جھ ز المستضد من شركة (Omega) األمريكية. وھو عبارة عن عالق مرك ز من جرثومة Br. abortus strain 99 مقتولة بالحرارة والفورمالين ومصبوغة بصبغة وردية البنكال ومعايرة ضد المصل القياسي لمنظمة الصحة العالميةWHO بمستوى(> 2 وحدة دولية / مل). و مستضد البروسيال الختباري التالزن األنبوبي و 2- مركبتوإيثانول والمجھ ز من المشروع الوطني للبروسيال والسل / الشركة العامة للبيطرة في بغداد وھو عبارة عن عالق من جرثومة البروسيال المجھضة العترة 99 المقتولة بالحرارة والفينول بتركيز %0. وعدة اختبار االليزا غير المباشر والمجھزة من شركة _(Synbiotics) فرنسا ومحلول الفينول الملحي والمحضر حسب (19) والذي استخدم لتخفيف المصول والمستضد في اختبار التالزن األنبوبي.ومحلول 2- مركبتوإيثانول الذي حضر حسب (20) والذي استخدم لتخفيف المصول والمستضد في اختبار 2- مركبتوإيثانول. التحليل اإلحصائي تم استخدام اختبار مربع كاي (( 2 (Chi-square Test χ) والمعروف ب (اختبار حسن المطابقة Fitting) ((Goodness of للمقارنة بين أنواع االختبارات من ناحية عدد اإلصابات التي كشفھا كل اختبار ويستخدم ھذا االختبار اإلحصائي لغرض المقارنة بين تكرارات نتائج طريقتين مختلفتين مع األخذ بنظر االعتبار العدد الكامل للمشاھدات المدروسة. وقد تم استخدام البرنامج اإلحصائي (1 (Minitab في إجراء التحليل اإلحصائي. وتم من خالل التحليل إيجاد قيمة المختبر اإلحصائي ) 2 χ). و كذلك التعرف على الفروقات المعنوية بين االختبارات من خالل قيمة (P).(22)

3 النتائج كانت نسبة اإلجھاض الكلي في النعاج الحوامل (2. %) أي حدوث (91) حالة إجھاض من المجموع الكلي لإلناث (7) نعجة حامل وتراوحت بين (%1.9) إلى (%.) للمناطق التي شملتھا الدراسة إذ سجلت أعلى نسبة (%.) في منطقة تلكيف ومركز مدينة الموصل. في حين سجلت أقل نسبة لإلجھاض في منطقتي بعشيقة والشمسيات إذ كانت (%1.9) وتراوحت باقي النسب بين ھاتين النسبتين (الجدول 1). بينت نتائج الدراسة بأن النسب المئوية النتشار مرض البروسلوسز في الضأن اختلفت طبقا للمناطق المختلفة التي شملتھا الدراسة وكذلك لنوع االختبار المستخدم حيث كانت النسبة المئوية الكلية النتشار المرض ھي (%1.9) باستخدام اختبار االليزا و( 1. %) باستخدام اختبار وردية البنكال المحور و( %. ) باستخدام اختبار وردية البنكال و( %.9 ) و( %.2 ) باستخدام اختباري التالزن األنبوبي 2- مركبتوإيثانول على التوالي وللمناطق كافة (الجدول 2). وعند مقارنة النتائج المستحصل عليھا إحصائيا تبين عدم وجود اختالف معنوي بين اختبار وردية البنكال من جھة واختباري وردية البنكال المحور و 2- مركبتوإيثانول عند مستوى معنوية >P 0.0 كذلك اليوجد فرق معنوي بين اختباري التالزن األنبوبي و 2- مركبتوإيثانول فيما بينھما.إال انه ظھر اختالف معنوي بين اختبار االليزا واالختبارات األخرى عند مستوى معنوية >P 0.0 (الجدول 2). الجدول (1) النسب المئوية لإلجھاض في الضأن حسب المناطق التي شملتھا الدراسة. أسم المنطقة الموصل تلعفر الحضر الشيخان الشمسيات بعشيقة تلكيف المجموع عدد الحيوانات الكلي عدد اإلناث الحوامل عدد اإلناث المجھضة النسبة المئوية لإلجھاض %. % 2. % 2.1 % 2.2 % 1.9 % 1.9 %. % 2. الجدول (2) النسب المئوية النتشار المرض في الضأن حسب المناطق وطبقا لالختبارات المستخدمة. = عدد العينات الموجبة والنسبة المئوية لإلصابة طبقا لنوع االختبار عدد ELISA 2-Me SAT MRB المفحوصة RB اسم المنطقة 2 2 (%1) (% ) (% ) (% ) (% ) 0 الموصل 7 (%.) (%.2) (%.) (%.9) (%.) 9 تلعفر (%12.) (%.7) (%.7) (%9.) (%9.) الحضر (%2) (%1.) (%9) (%22.7) (%22.7) الشيخان (%.) (%.) (%.) (%.) (%.) 7 الشمسيات 2 1 (%21.7) (%.) (%2.2) (%17.) (%.9) بعشيقة 7 (%20.) (%1) (%.1) (%1.) (%1.) تلكيف (%1.9) (%.2) (%.9) (%1.) (%.) المجموع RB =اختبار وردية البنكال, = MRB اختبار وردية البنكال المحو ر, SAT = اختبار التالزن األنبوبي, 2-Me =اختبار المركبتوإيثانول, ELISAاختبار اإلليزا أظھرت نتائج الدراسة العالقة بين جنس الحيوان وحالته (إناث حوامل أو مجھضة) وتواجد أضداد البروسيال في االختبارات المصلية المختلفة إذ إن النسبة المئوية إلصابة الذكور كانت (%1.2) باستخدام اختبار االليزا وھي األعلى ومن ثم اختبار وردية البنكال و اختبار وردية البنكال المحور( 12.1 %) لكال االختبارين واختبار 2 - مركبتوإيثانول واختبار التالزن

4 (%1.7) في اختبار االليزا و( %27. ) لكل من اختبار وردية البنكال و اختبار وردية البنكال المحور و( %2. ) الختبار 2- مركبتوإيثانول و( %22 ) الختبار التالزن األنبوبي.وعند مقارنة النتائج إحصائيا تبين وجود اختالفات معنوية عند مستوى 0.0 >P في المجاميع المختلفة ولالختبارات المستخدمة (الجدول ). األنبوبي (%.) (%) على التوالي. أما في اإلناث الحوامل فكان اختبار االليزا ھو األعلى (%9.2) ومن ثم اختبار وردية البنكال المحور واختبار وردية البنكال واختبار 2 - مركبتوإيثانول واختبار التالزن األنبوبي (%7.7), (%.), (%1.9),(%1.) على التوالي. وفي اإلناث المجھضة فكانت نسبة االنتشار الجدول () المستخدمة. النسب المئوية النتشار المرض في الضأن وفقا لجنس الحيوان وحالته (إناث حوامل أو مجھضة) وطبقا لالختبارات نوع االختبار الموجبة (+ve) الذكور السالبة (-ve) الموجبة (+ve) إناث حوامل السالبة (-ve) اإلناث إناث مجھضة الموجبة السالبة (-ve) (+ve) الكلي الموجبة (+ve) abc (%.7) bc 1 (%1.) a 2 (%7.7) ab 27 (%9) c (%1.1) 71 2 a 2 bc bc 197 (%27.) (%.) (%12.1) RB a 2 c 1 bc 191 (%27.) (%7.7) (%12.1) MRB a 20 a a 2 20 (%22) (%1.) (%) SAT a 2 ab ab 20 (%2.) (%1.9) (%.) 2-Me a 29 c 19 c 1 ELISA (%1.7) (%9.2) (%1.2) االختبارات التي يظھر بينھا حرف مشترك ال تختلف معنويا عند مستوى معنوية (0.0>P). الجدول () نسب التوافق بين اختبار اإلليزا واالختبارات األخرى للعينات الموجبة في اختبار اإلليزا في ذكور وإناث الضأن. 2-Me (% 0) 2 (%79.) (%21) 0 (%1.7) SAT MRB RB عدد الموجبة بELISA نوع العينات 2 (% 20) (% 0) (% 0) ذكور (%9) (%.2) (%.2) 29 إناث مجھضة 1 (%1.) (%.2) (%2.) 19 إناث حوامل 2 9 (%.1) (%.) (%7.1) ** المجموع القيم تدل على نسبة التوافق بين نتائج اختبار اإلليزا ونتائج االختبارات المصلية األخرى. ** تدل على وجود اختالف معنوي (0.0>P) بين نتائج اختبار اإلليزا بالمقارنة مع نتائج االختبارات المصلية األخرى. وبنسبة توافق (%0) و (2) عينة في اإلناث المجھضة وبنسبة توافق %.2 و () عينات في اإلناث الحوامل وبنسبة توافق (%2.) (الجدول ). وعند إجراء اختبار وردية البنكال المحور أظھرت نتائج الدراسة عند مقارنة العينات التي أعطت نتائج موجبة في اختبار اإلليزا مع نتائج االختبارات المصلية األخرى التي استخدمت في الدراسة بأن عدد العينات الموجبة الختبار على العينات الموجبة في اختبار اإلليزا كان عدد العينات الموجبة () () عينة توزعت على اإلليزا في مصول الضأن كان في ھذا االختبار في مصول ذكور الضأن () عينات وبنسبة توافق (%0) في حين كان عدد العينات الموجبة في اإلناث المجھضة (2) عينة وبنسبة توافق (%.2). أما عدد العينات عينات ذكور و (29) عينة إلناث مجھضة و (19) عينة إلناث حوامل وعند إجراء اختبار وردية البنكال على العينات نفسھا كان عدد العينات الموجبة في ھذا االختبار () عينات في الذكور

5 الموجبة في مصول دم إناث الضأن الحوامل فقد كانت (1) عينة وبنسبة توافق (%.2). بينما كان عدد العينات الموجبة الختبار التالزن األنبوبي لمصول دم ذكور الضأن عينتين وبنسبة توافق (%20) في حين وصل عدد العينات الموجبة لمصول النعاج المجھضة إلى (20) عينة وبنسبة توافق (%9) وأخيرا كان عدد العينات الموجبة لمصول النعاج الحوامل ثالث عينات وبنسبة توافق (%1.). وعند إجراء اختبار المركبتوإيثانول على مصول الضأن التي أعطت نتائج موجبة الختبار اإلليزا ظھر بأن عدد العينات الموجبة (0) عينة من مجموع () عينة توزعت على () عينات لمصول ذكور الضأن وبنسبة توافق (%0) و (2) عينة للنعاج المجھضة وبنسبة توافق (%79.) و( ) عينات للنعاج الحوامل وبنسبة توافق (%21) ولوحظ وجود فرق معنوي بين اختبار اإلليزا واالختبارات المصلية األخرى عند مستوى معنوية (0.0>P) عند مقارنة العينات الكلية الموجبة في اختبار اإلليزا مع تلك االختبارات (الجدول ). المناقشة أوضحت نتائج الدراسة إن نسبة انتشار اإلجھاض اختلفت في القطعان المختلفة في المناطق التي شملتھا الدراسة وكذلك انتشار المرض بين إناث وذكور تلك القطعان.إذ تباينت نسبة انتشار المرض بين الباحثين في العراق اعتمادا على نوع االختبارات المستخدمة في المنطقة الواحدة وكذلك اعتمادا على الموقع الجغرافي الذي أجريت فيه الدراسة وعلى حجم العينات المأخوذة ونوع العينة.بينت النتائج اختالف بنسبة انتشار المرض وقد يعود سبب ھذا التفاوت في النسب إلى االختالف في كثافة تربية الحيوانات وانعدام برامج السيطرة على المرض مما أدى إلى وجود بؤر موبؤة بالمرض وأخرى سليمة كذلك حرية انتقال الحيوانات المصابة والحاملة للمرض دون سيطرة ورقابة أدت إلى انتشار المرض في المناطق وبنسب متفاوتة وھذا يتفق مع ماذكر من قبل (2-2) بأن مرض البروسلوسز من األمراض المنتشرة في الضأن في المنطقة الشمالية وباقي مناطق العراق. استخدم اختبار وردية البنكال في ھذه الدراسة كاختبار مسحي وتشخيصي كونه اختبارا سھال وسريعا (27 2) إذ بينت نتائجه أن نسبة اإلصابة في الضأن كانت (%.) وھذا يختلف عما توصل إليه (2) الذين وجدوا بأن نسبة اإلصابة في شمال العراق في الضأن كانت (%1.1) وكذلك تختلف مع نتائج (29) الذين ذكروا بأن نسبة اإلصابة في الضأن كانت (%0.9) وھذا االختالف في النتائج كان يعود الى إن الدراستين السابقتين أجريتا قبل مدة طويلة قاربت 2 عاما مما يشير إلى االرتفاع الحاصل في نسبة انتشار المرض بين القطعان في المدة الممتدة بين ( ) بسبب العوامل التي ذكرت سلفا فضال عن جھل المربيين بخطورة وسرعة انتشار المرض وعدم إتباع الطرائق الصحية في التخلص من األجنة المجھضة والملوثات األخرى وسھولة تنقل الحيوانات من منطقة إلى أخرى دون مراقبة وسوء التغذية وطريقة التربية وإدارة حقول الضأن وكذلك د ور الحيوانات غير المستأنسة التي تعد خزائن مھمة للمرض والتي تقوم بحمل المرض ونشره إلى مناطق عديدة إذ سھلت ھذه العوامل من انتشار المرض بين تلك القطعان (-0) كذلك تختلف عن () وجاء االختالف لكون الفرق بين الدراستين من حيث العامل الزمني كبيرا فضال عن استخدام الدراسة السابقة لمصول دم حيوانات ذبحت في المجزرة. ويعزى سبب اختالف نتائج ھذه الدراسة عن الدراسات السابقة إلى نوع االختبارات المستخدمة وكذلك إلى عدد العينات المأخوذة.كما لوحظ من النتائج بان ھناك فروقات معنوية في نسب اإلصابة طبقا لنوع االختبار المستخدم وأن ھذا االختالف بين االختبارات يعزى الى مستوى دقة وكفاءة االختبار في الكشف عن المرض (19) كون إن ھناك اختبارات بإمكانھا تشخيص الطور الحاد والمزمن من المرض على حد سواء كاختبار اإلليزا في حين يفشل اختبار المركبتوايثانول في تشخيص الطور الحاد من المرض أو قد تتثبط الكلوبيولينات المناعية عند استخدام المضادات الحيوية ومن ث م تظھر نتائج سلبية كاذبة كما إن وجود تفاعالت تصالبية نتيجة اإلصابة بجراثيم أخرى أو نتيجة وجود ملزنات جرثومية غير نوعية إذ يؤدي الى ظھور نتائج ايجابية كاذبة () وتعد جرثومة 9:O Yersinia enterocolitica المسبب الرئيس لظھور حاالت موجبة كاذبة لنتائج االختبارات المصلية (). كما بينت النتائج أن نسبة انتشار المرض في اإلناث ھي األعلى بالمقارنة مع الذكور وھذا يعود الى أن نظام تربية الضأن المتبعة والمتمثلة في تحديد نسبة معي نة للذكور إلى اإلناث والتي دائما تكون اإلناث ھي األكثر فضال عن أن مستوى سكر االريثريتول في الرحم (السيما الرحم الحامل) الذي يلعب دورا مھما كعامل مؤھب لتكاثر جراثيم البروسيال وحدوث اإلجھاض يكون أعلى في اإلناث مقارنة مع ما موجود في الجھاز التناسلي الذكري (7). وعند مقارنة نتائج االختبارات المستخدمة في الدراسة (اختبار وردية البنكال واختبار وردية البنكال المحور واختبار التالزن األنبوبي واختبار المركبتوايثانول) مع نتائج اختبار اإلليزا نالحظ أن اختبار اإلليزا قد تفوق على االختبارات سالفة الذكر في التشخيص مع وجود فرق معنوي بين اختبار اإلليزا وھذه االختبارات وأن ھذا االختالف في النتائج يعزى إلى ما يتميز به اختبار اإلليزا من دقة وكفاءة عاليتين فضال عن إمكانيته في تشخيص أنواع الكلوبيولينات المناعية جميعا في المصل (9 ) إذ أشار () إلى أن اختبار اإلليزا من االختبارات التي يعتمد عليھا في تشخيص مرض البروسلوسز وھو من االختبارات التأكيدية وأضاف بأن اختبار وردية البنكال ھو من االختبارات النوعية فقط ولھذا فالنتائج الموجبة في ھذا االختبار يجب أن تؤكد باختبار تثبيت المتمم أو اختبار اإلليزا.كما لوحظ بأن ھناك اختالف بنسب التوافق بين اختبار اإلليزا واالختبارات المصلية األخرى بسبب دقة وكفاءة االختبارات تجاه الكلوبيولينات المناعية المسؤولة عن المناعة في جسم الحيوان وأن مستوى ظھور الكلوبيولينات المناعية يتباين اعتمادا على مدة اإلصابة أو شكل المرض كونه

6 1. Diaz-Aparicio E, Marin C, Alonso B, Aragon V, Perez S, Pardo M, Blasco J M, Diaz R, and Moriyon I.. Evaluation of serological tests for diagnosis of Br. melitensis infection of goats. J Clin Microbiol 199;2: Blasco J M, Marin C M, Jimenez de Bagues M P, Barberan M, Hernandez A, Molina L, Velasco J, Diaz R, and Moriyon I..Evaluation of allergic and serological tests for diagnosis of Brucella melitensis in sheep. J Clin Microbiol 199b; 2: Jimenes De Bagues M P, Marin C, Blasco J M, Moriyon I., Gamazo C. An ELISA with Brucella lipopolysaccharide antigen for the diagnosis of Br. melitensis infection in sheep and for the evaluation of serological responses following subcutaneous or conjuntival Br. melitensis strain. Rev. 1 vaccination. Vet Microbiol 1992; 0: Alton GG, Jones LM, Angus RD, and Verger JM. Techniques for the brucellosis laboratory 19; INRA, Paris. 20. Alton GG, Jones L M, and Pietz DE. Laboratory techniques in 2 nd ed. World Health Organization 197; Geneva. 21. Blasco JM,Garin-Bastuji B, Marin CM,Gerbier G, Fanlo J, Jimenez de Nagues MP, and Cau C. Efficacy of different rose bengal and complement of fixation antigens for the diagnosis of Brucella melitensis in sheep and goats. Vet Rec 199a; 1: ٢٢. الراوي,خاشع محمود. المدخل إلى اإلحصاء, دار الكتب للطباعة والنشر, جامعة الموصل, الموصل, العراق, (19).. 2. Al-Izzi SA, and Barhoom S S. Prevalence of brucellosis among sheep and goat in Baghdad, Iraq. Iraqi J Vet Sci 19; 1(1-2): Al-Izzi SA, and Al-Bassam LS, and Al-Delaimi A K A. study on ovine brucellosis in Baghdad. Iraqi J Vet Med 19; 9: Salem A A, Al-Khayyat A A, and Aziz T. Studies on brucellosis of goats in Baghdad, Iraq. Iraqi J Vet Med 1977; 1: Garin-Bastuji B, Blasco J M. Caprine and ovine brucellosis (excluding Br. ovis infection). In: Manual of standards for diagnostic tests and vaccines. rd ed. 199, OIE, Paris 1997; Hadad J J, and Al-azawy Z S. Incidence of brucellosis in sheep and goats in Ninevah Province. Iraqi J Vet Sci 1990; (1): Mathur PB, El-Dessouky E I., Karim MA, Mohamed A K, and Ayoud M A. Preliminary survey of brucellosis in cattle, sheep and goat in Northern Iraq. Technical report 197; No (). UNDP/FAO. 29. Karim M A, Penjouian E K, and Dessouky F I. The prevalence of brucellosis among sheep and goat in northern Iraq. Anim Health Prod 1979; : Godfroid J. Brucellosis in Wildlife. Rev Sci Tech 2002; 21: Kabagambe E K, Elzer PH, Geaghan JP, Opuda-Asibo J, Scholl DT, and Miller JE. Risk factor for brucella seropositivity in goat herds in Eastern and Western Uganda. Pre Vet Med 2001; 2: Omer MK, Skjerva E, Woldehiwet Z, and Holstad G. Risk factors for Brucella spp. infection in dairy cattle farms in Asmara State of Eritrea. Prev Vet Med 2000; : Kadohira M, McDermott J J, Shouki M M, and Kyule MN. Variations. in the prevalence of antibody to brucella infection in cattle by farm area and district in Kenya. Epidemiol Infect 1997;: -1.. Al-Dahash S Y, Hadad J J, and Azawi A I. Incidence of brucellosis in sheep in Ninevah. Iraqi J Vet Sci 199 ;1: Thrusfield M. Veterinary epidemiology. Butterworths. London. 19; pp Gerbier G, Garin-Bastuji B, Pouillot R, Very P, Cau C, Berr V, Dufour B, and Moutou F. False positive serological reactions in bovine brucellosis evidence of the role of Yersinia enterocolitica serotype O:9 in a field trial. Vet Res 1997; 2: Charanjeet M S, Katoch R C, Prasenjeet D, and Rajinder K. Application of RBPT, AST and Avidin-Biotin serum ELISA for detecting brucellosis among livestock in himachal Pradesh. Indian J. Comp. Microbiol Immunol Infect Dis 200 ;2(1): Quinn P J, Carter M E, Markey B, and Carter GR. Clinical Veterinary Microbiology. 1 st ed. Elservier Ltd. London 1999; pp: حادا أو مزمنا ومن ث م يؤدي إلى تباين في نتائج االختبارات المصلية التي تعتمد على مستوى الكلوبيونيات المناعية في جسم الحيوان (0) وھذا يتفق مع ما ذكره (2 1) من أن االختبارات المعتمدة على مركب متعدد السكريد الشحمي S-Lps أو ما يعرف بسلسلة - O (O-chain) كمستضد في تشخيص األجسام المضادة كاختبار اإلليزا تمتلك كفاءة أكبر في التشخيص.كما تتفق نتائج ھذة الدراسة مع الدراستين ( ) واللتان أظھرا بان اختبار اإلليزا كان من أفضل االختبارات المصلية المستخدمة في بحوثھم بالمقارنة مع بعض االختبارات المصلية. شكر وتقدير يشكر الباحثان عمادة كلية الطب البيطري لما قدمته من تسھيالت ودعم النجاز البحث. المصادر 1. Refai M. Incidence and control of brucellosis in the Mear East region.vet Microbiol 2002; 20: Ficht TA.Intracellular survival of brucella defining the link with persistence. Vet Microbiol 200; 92: Gorvel J P, and Moreno E. Brucella intracellular life from invasion to Intracellular replication. Vet Microbiol 2002; 90: Quinn P J, Markey B K, Carter M E, Donnelly WJC, and Leonard FC. Veterinary Microbiology and Microbial Disease. 1 st ed.blackwell Science Ltd., London.2002; p Adams LG. The pathology of brucellosis reflects the outcome of the battle Between the host genome and the brucella genome. Vet Microbiol 2002; 90(1-): -1.. Young E J. An overview of human brucellosis. Clin Infect Dis 199; 21: Garrido F, Duran M, Macmillan A, Minas A, Nicoletti P, and Vecchi G. Brucellosis in sheep and goats (Br. melitensis). European commission, Report of Scientific committee on animal health and animal welfare Yagupsky P. Detection of Brucellae in blood culture. J Clin Microbiol 1999; 7: Ariza J. Brucellosis. Curr Opin Infect Dis 199; 9: Mccullough. The application of biotechnology to the diagnosis and control of animal diseases. Rev Sci Tech Off Int Epiz 199;12: 2-.. Wright PF, Nielsen E, Vanroij E M A, Lelenta M, and Jeggo M H. Standardization and validation of enzyme-linked immunosorbent assay techniques for the detection of antibody in infectious disease diagnosis. Rev Sci Tech Off Int Epiz 199; 12: Garin-Bastuji B, Blasco J M, Grayon M, and Verger JM. Brucella melitensis infection in sheep present and future. Vet Res 199; 29: Samartino L,Gall D, Gregoret R, and Nielsen K.Validation of enzymelinked immuno-sorbent assays for the diagnosis of bovine brucellosis. Vet Microbiol 1999; 70: Lucero NE, Escobar G L, Ayala S M, and Lopez G. Sensitivity and specificity of an indirect enzyme-linked immunoassay for the diagnosis of Brucella canis infection in dogs. J Med Microbiol 2002; 1: Cloeckaert A, Baucheron S, Vizcaino N, and Zybmunt MS. Use of recombinant BP2 protein in serological diagnosis of Brucella melitensis infection in sheep. Clin Diag Lab Immunol 2001; :

7 vaccinated from naturally infected cattle. Vet Microbiol 2000; 71 (1-2): Abuharfeil N, and Abo-Shehada M N. A comparison between three serological tests for Brucella melitensis infection in sheep. Tr J Vet Anim Sci 199; 22: Hornitzky M, and Searson J. The relationship between the isolation of Brucella abortus and serological status of infected non- vaccinated cattle. Aust Vet J 19; : Nielsen K H, Wright PF, Kelly WA, and Cherwonogrodzky J H.A review of enzyme immunoassay for detection of antibody to Brucella abortus in cattle. Vet Immunol Immunopath 19; 1: Wilson J D, and Braunwald E, Harrisons principles of international medicine Vol 1 12 th ed. Mc Graw Hill Inc 1991; pp: Nielsen K. Diagnosis of Brucellosis by Serology. Vet Microbiol 2002; 90: Abalos P, Daffner J, and Pinochet L. Evaluation of three Brucella soluble antigens used in an indirect ELISA to discriminate S19