IL-6. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 IL-6 For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 IL-6 English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of interleukin 6 (IL-6) in serum, EDTA or heparinized plasma, as an aid in the study of inflammatory diseases. Catalog Number: L2K6P2 (200 tests) Test Code: I6 Color: Dark Green Summary and Explanation Interleukin-6 (IL-6) is a mediator of the immune system, which has a wide variety of biological actions. It is also known as B cell stimulatory factor (BCSF), B cell stimulation factor 2 (BSF-2), hybridoma growth factor (HGF), hepatocyte stimulatory factor (HSF), cytolytic differentiation factor for T lymphocytes (CDF) and many others. The IL-6 cdna is coding for a polypeptide consisting of 212 amino acids. This protein is cleaved to a mature protein of 184 amino acids. Due to different degrees of glycosylation at positions 73 and 172, respectively and phosphorylation, IL-6 has a molecular weight ranging between 21.5 and 28 kda. Many different cells are capable of IL-6 synthesis including monocytes/ macrophages, fibroblasts, endothelial cells, keratinocytes, mast cells, T cells and many tumor cell lines. In vivo and in vitro, IL-6 acts as a differentiation factor for B cells and an activation factor for T cells. In the presence of IL-2, it drives the differentiation of T cells to cytotoxic T cells and induces the proliferation of thymocytes. After stimulation with IL-4, an IL-6 stimulus is necessary for B cells to differentiate into Ig-secreting plasma cells. IL-6 is a potent growth factor of different human myelomas and is active in concentrations less than 10 pg/ml. IL-3 and IL-6 show in vitro synergistic effects in the differentiation of hematopoietic progenitor cells. Elevated IL-6 serum or plasma levels may occur in different diseases including sepsis, autoimmune diseases, lymphomas, AIDS, alcoholic liver disease and in patients with infections, or transplant rejection. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 IL-6 is a solid-phase, enzyme-labeled, chemiluminescent sequential immunometric assay. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufactures may yield differing values, depending on tube materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 IL-6 has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 100 µl serum, EDTA or heparinized plasma. Storage: 1 day at 2 8 C or 6 months at 20 C. Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. 2 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

3 CAUTION: This device contains material of animal origin and should be handled as a potential carrier and transmitter of disease. H312, H412 P280, P273, P302 + P352, P312, P501 Warning! Harmful in contact with skin. Harmful to aquatic life with long lasting effects. Wear protective gloves/protective clothing/ eye protection/face protection. Avoid release to the environment. IF ON SKIN: Wash with plenty of soap and water. Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwell. Dispose of contents and container in accordance with all local, regional, and national regulations. Contains: sodium azide; IL-6 Adjustors Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. IL-6 Bead Pack (L26P12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti-il-6. Stable at 2 8 C until expiration date. L2K6P2: 1 pack. IL-6 Reagent Wedge (L26PA2) With barcode ml protein/buffer matrix and 18.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to polyclonal sheep anti-il-6 in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2K6P2: 1 wedge. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. IL-6 Adjustors (L6PL, L6PH) Two vials (Low and High) of lyophilized IL-6 in a protein/buffer matrix, with preservative. Reconstitute each vial with 3.0 ml distilled or deionized water. Mix by gentle swirling or inversion until the lyophilized material is fully dissolved. Stable at 2 8 C for 3 days after reconstitution, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2K6P2: 1 set. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) For the on-board dilution of patient samples. One vial of concentrated (readyto-use), nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcode can be read by the on-board reader. L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 3

4 LILCM: A bi-level, human serum-based IMMULITE Cytokine Control Module containing IL-6. Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of IL-6. Expected Values A reference range study for IMMULITE 2000 IL-6 was performed on serum samples collected from 60 healthy laboratory volunteers into plain glass serum tubes. The non-parametric lower 95% range was from nondetectable to 3.4 pg/ml. The absolute range was from nondetectable to 5.9 pg/ml. Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges. Limitation Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in pg/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Calibration Range: Up to 1,000 pg/ml NIBSC 1st IS 89/548 (IU/mL): IU/mL = 0.1 pg/ml. Analytical Sensitivity: 2 pg/ml High-dose Hook Effect: None up to 60,000 pg/ml. Precision: Samples were repeatedly assayed in duplicate over the course of several days for a total of 40 runs and 80 replicates. (See "Precision" table.) Linearity: Samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with three IL-6 solutions (1,000, 4,000, and 8,000 pg/ml) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for IL-6. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of conjugated and unconjugated bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 550 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 12 volunteers into plain glass and plastic serum tubes, plastic heparinized and EDTA tubes, and plastic gel barrier tubes (SST ). All tubes were from Becton Dickinson. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of IL-6, to obtain values throughout the calibration range of 4 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

5 the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 IL-6 procedure. (EDTA Plastic) = 0.98 (Serum Glass) pg/ml (Heparin Plastic) = 0.92 (Serum Glass) pg/ml (SST Plastic) = 0.71 (Serum Glass) pg/ml (Serum Plastic) = 0.76 (Serum Glass) pg/ml Means: 186 pg/ml (Serum Glass) 188 pg/ml (EDTA Plastic) 180 pg/ml (Heparin Plastic) 142 pg/ml (SST Plastic) 148 pg/ml (Serum Plastic) Method Comparison 1: The assay was compared to a commercially available assay for IL-6 (Kit A) on 109 patient samples. (Concentration range: approximately 3 to 300 pg/ml. See graph 1.) By linear regression: (IML 2000) = 0.80 (Kit A) pg/ml r = Means: 100 pg/ml (IMMULITE 2000) 124 pg/ml (Kit A) Method Comparison 2: The assay was also compared to IMMULITE IL-6 on 150 patient samples. (Concentration range: approximately 3 to 870 pg/ml. See graph 2.) By linear regression: (IML 2000) = 1.08 (IML) 3.8 pg/ml r = Means: 215 pg/ml (IMMULITE 2000) 203 pg/ml (IMMULITE) References 1) Hirano T, Akira S, Taga T, Kishimoto T. Biological and clinical aspects of interleukin-6. Immunol Today 1990;11: ) Saito S, Kasahara T, Kato Y, Ishihara Y, Ichijo M. Elevation of amniotic fluid interleukin 6 (IL-6), IL- 8 and granulocyte colony stimulating factor (G- CSF) in term and preterm parturition. Cytokine 1993;5: ) Waage A, Brandtzaeg P, Halstensen A, Kierulf P, Espevik, T. The complex pattern of cytokines in serum from patients with meningococcal septic shock. J Exp Med 1989; 169: ) Hack CE, De Groot ER, Felt-Bersma RJF, Nuijens JH, Strack Van Schijndel RJM, Eerenberg-Belmer AJM, Thijs LG, Aarden LA. Increased plasma levels of interleukin-6 in sepsis. Blood 1989;74/5: ) Steinmetz HT, Herbertz A, Bertram M, Diehl V. Increase in interleukin-6 serum level preceding fever in granulocytopenia and correlation with death from sepsis. J Infect Dis 1995;171: ) Buck C, Bundschu J, Gallati H, Bartmann P, Pohlandt F. Interleukin-6: A sensitive parameter for the early diagnosis of neonatal bacterial infection. Pediatrics 1994;93: ) Hummel M, Czerlinski S, Friedel N, Liebenthal C, Hapser D, von Baehr R, Hetzer R, Volk HD. Interleukin-6 and interleukin- 8 concentrations as predictors of outcome in ventricular assist device patients before heart transplantation. Critical Care Med 1994;22: ) National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the collection of diagnostic blood specimens by venipuncture; approved standard. 4th ed. NCCLS Document H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (pg/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV % % % % % % % % % % % % Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 5

6 Linearity (pg/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E in in % 2 in % 1 in % 2 8 in in % 2 in % 1 in % 3 8 in in % 2 in % 1 in % 4 8 in in % 2 in % 1 in % Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Specificity Compound 1 pg/ml Added 2 Apparent pg/ml 3 % Crossreactivity 4 IL-1α 10,000 ND ND IL-1β 10,000 ND ND IL-2 10,000 ND ND IL-4 10,000 ND ND IL-8 10,000 ND ND TNFα 10,000 ND ND Interferon Gamma 10,000 ND ND ND: not detectable. 5 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 Zjevná koncentrace, 4 % Zkřížená reaktivita, 5 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 Εμφανής συγκέντρωση, 4 % ιασταυρ.αντίδραση, 5 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dodana, 3 Ilość stwierdzona, 4 % reaktywności krzyżowej, 5 Nieoznaczlne. Recovery (pg/ml) Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % A % B % C % Česky. 1 Roztok, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 ιάλυμα, 2 Παρατηρούμενη (O), 3 Αναμενόμενη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O. Method Comparison 1 IMMULITE 2000 IL Kit A, pg/ml (IML 2000) = 0.80 (Kit A) pg/ml r = IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

7 Method Comparison 2 IMMULITE 2000 IL IMMULITE IL-6, pg/ml (IML 2000) = 1.08 (IML) 3.8 pg/ml r = English. IL 6 Česky. IL 6. Ελληνικά. IL 6. Polski. IL 6. Česky IMMULITE 2000 IL-6 Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace interleukinu 6 (IL-6) v séru, EDTA nebo heparinizované plazmě, jakožto pomůcky při zkoumání zánětlivých onemocnění. Katalogové číslo: L2K6P2 (200 stanovení) Kód metody: I6 Barva: tmavě zelená Shrnutí a vysvětlení Interleukin-6 (IL-6) je mediátorem imunitního systému, který se vyznačuje širokým spektrem biologického působení. Je rovněž známý jako stimulační faktor B-lymfocytů (BCSF), stimulační faktor B-lymfocytů 2 (BSF-2), růstový faktor hybridomu (HGF), stimulační faktor hepatocytů (HSF), cytolyticky diferenciační faktor pro T-lymfocyty (CDF) a mnoho dalších. cdna IL-6 kóduje polypeptid obsahující 212 aminokyselin. Tento protein se štěpí na protein o 184 aminokyselinách. Vzhledem k různým stupňům glykace v místě 73 a 172 a fosforylaci, se molekulová hmotnost IL-6 pohybuje od 21,5 do 28 kda. Syntéza IL-6 může probíhat v různých buňkách, např. monocytech/ makrofázích, fibroblastech, endoteliálních buňkách, keratinocytech, žírných buňkách, T- lymfocytech a v mnohých nádorových buňkách. In vivo a in vitro se IL-6 chová jako diferenciační faktor pro B-lymfocyty a aktivační faktor pro T-lymfocyty. V přítomnosti IL-2 řídí diferenciaci T- lymfocytů na cytotoxické T-lymfocyty a indukuje proliferaci tymocytů. Po stimulaci IL-4 je impuls IL-6 nezbytný k diferenciaci B-lymfocytů na plazmatické buňky produkující imunoglobuliny. IL-6 je silným růstovým faktorem různých lidských myelomů a je účinný v koncentracích menších než 10 pg/ml. IL-3 a IL-6 vykazují in vitro synergistický účinek při diferenciaci hematopoetických kmenových buněk. Zvýšené koncentrace IL-6 v séru nebo plazmě se vyskytují při různých onemocněních včetně sepsí, autoimunitních onemocněních, lymfomů, AIDS, onemocnění jater u alkoholiků a u pacientů s infekcí nebo u rejekce transplantátů. Princip Stanoveni Stanovení IL-6 na analyzátorech IMMULITE 2000 představuje sekvenční enzymeme značenou chemiluminiscenční imunometrickou reakci v pevné fázi. Inkubační cykly: 2 30 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. Centrifugací vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. Některé vzorky, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může přinášet rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů sraženin a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení IL-6 na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 7

8 testováno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 100 μl séra, EDTA nebo heparinizované plazmy. Skladování: 1 den při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců při 20 C. Upozornění a bezpečnostní opatření Určeno pro in vitro diagnostické použití. UPOZORNĚNÍ: Souprava obsahuje material živočišného původu, se kterým je třeba zacházet jako s potenciálním nosičem a přenašečem nemocí. H312, H412 P280, P273, P302 + P352, P312, P501 Výstraha! Zdraví škodlivý při styku s kůží. Škodlivý pro vodní organismy, s dlouhodobými účinky. Používejte ochranné rukavice/ochranný oděv/ ochranné brýle/obličejový štít. Zabraňte uvolnění do životního prostředí. PŘI STYKU S KŮŽÍ: Omyjte velkým množstvím vody a mýdla. Necítíte-li se dobře, volejte TOXIKOLOGICKÉ INFORMAČNÍ STŘEDISKO nebo lékaře. Odstraňte obsah a obal v souladu se všemi místními, regionálními a národními předpisy. Obsahuje: azid sodný; IL 6 kalibrátory Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HBsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, by se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. IL-6 zásobník s kuličkami (L26P12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potažených monoklonální myší anti-il-6. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2K6P2: 1 balení. IL-6 reagencie (L26PA2) Opatřeno čárovým kódem. 18,5 ml roztoku bílkovino/pufrové matrice a 18,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální ovčí anti-il-6 v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2K6P2: 1 nádobka. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. IL-6 kalibrátory (L6PL, L6PH) Dvě ampulky s nízkou a vysokou koncentrací lyofilizovaného IL-6 v bílkovino/pufrové matrici, s konzervačním prostředkem. K rekonstituci každé ampule použijte 3,0 ml destilované nebo deionizované vody. Promíchejte jemnými krouživými pohyby nebo převracením až do úplného rozpuštění lyofilizovaného materiálu. Stabilní při teplotě 2 8 C tři dny po rekonstituci nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2K6P2: 1 sada. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. 8 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

9 Materiál dodávaný zvlášť Multidiluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Určeno k automatickému ředění vzorků pacientů analyzátorem. Jedna ampulka koncentrované (připravené k použití) nehumánní bílkovino/pufrové matrice s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C třicet dnů po otevření nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2M2Z: 3 štítky L2M2Z4: 5 štítků L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 Testovací zkumavky na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 Uzávěru na testovací zkumavky na diluent vzorků LILCM: Dvojúrovňový kontrolní modul IMMULITE Cytokinový kontrolní modul s IL-6 na bázi lidského séra. Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; testovací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 2 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontrolní vzorky nebo směsný vzorek s alespoň dvěma koncentracemi IL-6 (nízkou a vysokou). Očekávané hodnoty Výzkum referenčního rozmezí pro stanovení IL-6 na analyzátorech IMMULITE 2000 se uskutečnil na vzorcích séra od 60 zdravých dobrovolnících odebraných do sérových zkumavek z obyčejného skla. Neparametrické spodní 95% rozmezí bylo stanoveno od nezjistitelného množství do 3,4 pg/ml. Celkové referenční rozmezí bylo od nezjistitelného množství do 5,9 pg/ml. Tyto hodnoty považujte pouze za orientační. Každá laboratoř by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavených kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, anamnézou pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v pg/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových separátorů nebo přísad podporujících srážlivost.) Kalibrační rozsah: Do pg/ml NIBSC 1st IS 89/548 (IU/ml): IU/ml = 0,1 pg/ml. Analytická citlivost: 2 pg/ml High-dose Hook Effect: Do pg/ml žádný. IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 9

10 Přesnost metody: Vzorky byly opakovaně stanovovány dvojmo v průběhu několika dní, celkem 40 cyklů a 80 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. (Reprezentativní hodnoty najdete v tabulce "Linearita".) Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků s přídavkem tří roztoků anti-il-6 (1 000, a pg/ml) v poměru 1:19. (Reprezentativní údaje najdete v tabulce "Zpětná výtěžnost".) Specificita: Protilátka proti IL-6 je silně specifická. (Viz tabulka Specificita.) Bilirubin: Přítomnost konjugovaného a nekonjugovaného bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 550 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K určení dopadu použití alternativních typů vzorků pro toto stanovení jsme odebrali krev 12 dobrovolníkům do obyčejných skleněných a plastových zkumavek na sérum, plastových heparinizovaných a EDTA zkumavek a plastových zkumavek s gelovou bariérou (SST ). Všechny zkumavky pocházely od firmy Becton Dickinson. Abychom získali hodnoty v rámci celého kalibračního rozsahu tohoto stanovení, přidali jsme do stejných objemů odpovídajících vzorků IL-6 různých koncentrací. Vzorky jsme následně stanovili metodou IL-6 na analyzátorech IMMULITE (EDTA plast) = 0,98 (sérum sklo) + 5,2 pg/ml (Heparin plast) = 0,92 (sérum sklo) + 8,3 pg/ml (SST plast) = 0,71 (sérum sklo) + 9,1 pg/ml (sérum plast) = 0,76 (sérum sklo) + 7,1 pg/ml Střední hodnoty: 186 pg/ml (sérum sklo) 188 pg/ml (EDTA plast) 180 pg/ml (Heparin plast) 142 pg/ml (SST plast) 148 pg/ml (sérum plast) Srovnání metody 1: Stanovení bylo porovnáno s komerčně dostupným stanovením IL-6 (Kit A) na 109 vzorcích pacientů. (Koncentrační rozsah: přibližně 3 až 300 pg/ml. Viz graf Srovnání metody 1.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/ml r = 0,975 Střední hodnoty: 100 pg/ml (IMMULITE 2000) 124 pg/ml (Kit A) Srovnání metody 2: Stanovení bylo rovněž porovnáno se stanovením IL-6 na analyzátoru IMMULITE společnosti na 150 vzorcích pacientů. (Koncentrační rozsah: přibližně 3 až 870 pg/ml. Viz graf Srovnání metody 2.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 1,08 (IML) 3,8 pg/ml r = 0,994 Střední hodnoty: 215 pg/ml (IMMULITE 2000) 203 pg/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 IL-6 Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποσοτικό προσδιορισμό της ιντερλευκίνης 6 (IL-6) στον ορό ή το πλάσμα (EDTA ή ηπαρινισμένο), ως βοήθημα στη μελέτη φλεγμονωδών νόσων. Αριθμός καταλόγου: L2K6P2 (200 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: I6 Χρώμα: Σκούρο πράσινο 10 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

11 Περίληψη και επεξήγηση Η ιντερλευκίνη-6 (IL-6) είναι ένας μεσολαβητής του ανοσοποιητικού συστήματος με ευρύ φάσμα βιολογικών δράσεων. Είναι γνωστή και ως διεγερτικός παράγοντας Β κυττάρων (BCSF), παράγοντας 2 διέγερσης κυττάρων Β (BSF-2), παράγοντας ανάπτυξης υβριδωμάτων (HGF), διεγερτικός παράγοντας ηπατοκυττάρων (HSF), κυτταρολυτικός παράγοντας διαφοροποίησης T λεμφοκυττάρων (CDF) και με πολλές άλλες ονομασίες. Ως IL-6 cdna νοείται η κωδικοποίηση ενός πολυπεπτιδίου που αποτελείται από 212 αμινοξέα. Η πρωτεΐνη αυτή υποβαθμίζεται σε ώριμη πρωτεΐνη 184 αμινοξέων. Εξαιτίας των διαφόρων βαθμών γλυκοζυλίωσης στις θέσεις 73 και 172 αντίστοιχα και φωσφορυλίωσης, η IL-6 έχει μοριακό βάρος που κυμαίνεται μεταξύ 21,5 και 28 kda. Πολλά διαφορετικά είδη κυττάρων μπορούν να συνθέσουν IL-6, συμπεριλαμβανομένων των μονοκυττάρων/ μακροφάγων, ινοβλαστών, ενδοθυλιακών κυττάρων, κερατινοκυττάρων, μαστοκυττάρων, κυττάρων T και πολλών άλλων κυττάρων όγκων. In vivo και in vitro, η IL-6 δρα ως παράγοντας διαφοροποίησης των κυττάρων Β και ως παράγοντας ενεργοποίησης των κυττάρων Τ. Με την παρουσία της η IL-2, καθοδηγεί τη διαφοροποίηση των κυττάρων Τ σε κυτταροτοξικά κύτταρα Τ και προκαλεί αναπαραγωγή των θυμοκυττάρων. Μετά τη διέγερση με IL-4, απαιτείται η διέγερση με IL-6, ώστε τα κύτταρα Β να διαφοροποιηθούν σε κύτταρα πλάσματος, τα οποία εκκρίνουν Ig. Η IL-6 είναι πιθανός παράγοντας ανάπτυξης διαφόρων ανθρώπινων μυελωμάτων και είναι ενεργή σε συγκεντρώσεις κάτω των 10 pg/ml. Η IL-3 και η IL-6 παρουσιάζουν in vitro συνεργειακή δράση για τη διαφοροποίηση των αιμοποιητικών πρόδρομων κυττάρων. Αυξημένα επίπεδα της IL-6 στον ορό ή το πλάσμα παρατηρούνται σε διάφορες νόσους, συμπεριλαμβανομένης της σήψης, των αυτοάνοσων παθήσεων, των λεμφωμάτων, του AIDS, της αλκοολικής ηπατοπάθειας και σε ασθενείς με μολύνσεις ή απόρριψη μοσχευμάτων. Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 IL-6 είναι μια ξηρής φάσης, ενζυμική, χημειοφωταυγής, αλληλοδιάδοχη, ανοσομετρική ανάλυση. Κύκλοι επώασης: 2 x 30 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Τα αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 IL-6 δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 100 µl ορού ή πλάσματος (ηπαρινισμένου ή EDTA). Αποθήκευση: 1 ημέρα στους 2 8 C ή 6 μήνες στους 20 C. Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. ΠΡΟΣΟΧΗ: Η συσκευή αυτή περιέχει υλικό ζωικής προέλευσης και ο χειρισμός της πρέπει να γίνεται ως εάν επρόκειτο περί δυνητικού φορέα και παράγοντα μετάδοσης νόσου. IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 11

12 H312, H412 P280, P273, P302 + P352, P312, P501 Προειδοποίηση! Επιβλαβές σε επαφή με το δέρμα. Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. Να φοράτε προστατευτικά γάντια/προστατευτικά ενδύματα/μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια/πρόσωπο. Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο σαπούνι και νερό. Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. Απορρίψτε το περιεχόμενο και τον περιέκτη σε συμμόρφωση με όλους τους τοπικούς, περιφερειακούς και εθνικούς κανονισμούς. Περιέχει: αζίδιο νατρίου, Ρυθμιστές IL 6 Συσκευασία σφαιριδίων IL-6 (L26P12) Με ραβδοκώδικα. 200 σφαιρίδια, με επικάλυψη μονοκλωνικού αντί-il-6 ποντικού. Σταθερά στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2K6P2: 1 συσκευασία. οχείο αντιδραστηρίου IL-6 (L26PA2) Με ραβδοκώδικα. 18,5 ml μήτρας πρωτεΐνης/ ρυθμιστικού και 18,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (βόειο έντερο) συζευγμένης με πρόβειο πολυκλωνικό αντί-il-6 σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2K6P2: 1 δοχείο. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Αντιδραστήρια: Αποθήκευση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για το επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας Β και για τα αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Ρυθμιστές IL-6 (L6PL, L6PH) ύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) λυοφιλοποιημένης IL-6 σε μήτρα πρωτεΐνης/ ρυθμιστικού διαλύματος, με συντηρητικό. Κάντε ανασύσταση κάθε φιαλιδίου με 3,0 ml απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Αναμείξτε με απαλές κινήσεις ή με αναστροφή έως ότου το λυοφιλοποιημένο υλικό διαλυθεί πλήρως. Σταθερά στους 2 8 C για 3 ημέρες μετά την ανασύσταση ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2K6P2: 1 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) πάνω σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα του αναλυτή. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά Πολύ-αραιωτικό 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Για την αραίωση των δειγμάτων των ασθενών στο μηχάνημα. Ένα φιαλίδιο που περιέχει συμπυκνωμένη (έτοιμη για χρήση), μήτρα μη ανθρώπινης πρωτεΐνης/ ρυθμιστικού, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C επί 30 ημέρες μετά το άνοιγμα ή επί 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml. 12 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

13 Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν από τη χρήση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες σε δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι, ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από το σύστημα ανάγνωσης του οργάνου. L2M2Z: 3 ετικέτες L2M2Z4: 5 ετικέτες L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος ( mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος LILCM: ύο επιπέδων μονάδα ελέγχου IMMULITE Κυτοκίνη με ανθρώπινο ορό και IL-6. Απαιτούνται επίσης Απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό, δοκιμαστικοί σωλήνες, δείγματα ελέγχου. ιαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 2 εβδομάδες. είγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιείτε δείγματα ελέγχου σε δύο τουλάχιστον επίπεδα IL-6 (χαμηλό και υψηλό). Αναμενόμενες τιμές Για την IMMULITE 2000 IL-6 διενεργήθηκε μελέτη εύρους αναφοράς σε δείγματα ορού, τα οποία συλλέχθηκαν από 60 υγιείς εθελοντές εργαστηρίου σε απλούς γυάλινους σωλήνες ορού. Το κατώτερο μη παραμετρικό εύρος 95% κυμαινόταν από μη ανιχνεύσιμο έως 3,4 pg/ml. Το απόλυτο εύρος κυμαινόταν από μη ανιχνεύσιμο έως 5,9 pg/ml. Θεωρήστε αυτά τα όρια μόνο ως κατευθυντήριες γραμμές. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να θεσπίσει τις δικές του τιμές αναφοράς. Περιορισμός Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας αλληλεπιδράσεις με in vitro ανοσοαναλύσεις. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] είγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, μπορεί να εμφανιστούν πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε pg/ml. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος καμπύλης: Έως pg/ml NIBSC 1st IS 89/548 (IU/mL): IU/mL = 0,1 x pg/ml. Αναλυτική ευαισθησία: 2 pg/ml High-dose επίδραση φαινομένου Hook: εν παρατηρείται έως τα pg/ml. Ακρίβεια: Για αρκετές ημέρες κάποια δείγματα εξετάστηκαν επανειλημμένα εις διπλούν, συνολικά 40 φορές ή 80 επαναλήψεις. (Βλ. Πίνακα Precision ) IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 13

14 Γραμμικότητα: Τα δείγματα αναλύθηκαν σε διάφορες αραιώσεις. (Βλ. πίνακα "Linearity" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα). Ανάκτηση: Κάποια δείγματα (1 με 19) εμπλουτίστηκαν με τρία διαλύματα IL-6 (1 000, και pg/ml) και αναλύθηκαν. (Βλ. πίνακα "Recovery" για αντιπροσωπευτικά δεδομένα.) Ειδικότητα: Το αντίσωμα παρουσιάζει υψηλή ειδικότητα στην IL-6. (Βλ. πίνακα "Specificity".) Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης (συνδεδεμένης και έμμεσης) σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 550 mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικός τύπος δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 12 εθελοντές σε απλούς γυάλινους και πλαστικούς σωλήνες ορού, σε σωλήνες πλάσματος ηπαρινισμένου και EDTA και σε δοκιμαστικούς σωλήνες SST. Όλοι οι σωλήνες ήταν από την Becton Dickinson. Ίσες ποσότητες των αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες συγκεντρώσεις IL-6, ώστε να ληφθούν τιμές καθόλο το εύρος της καμπύλης της ανάλυσης, και στη συνέχεια εξετάστηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία IMMULITE 2000 IL-6. (EDTA πλαστικός) = 0,98 (Ορού γυάλινος) + 5,2 pg/ml (Ηπαρίνης πλαστικός) = 0,92 (Ορού γυάλινος) + 8,3 pg/ml (SST πλαστικός) = 0,71 (Ορού γυάλινος) + 9,1 pg/ml (Ορού πλαστικός) = 0,76 (Ορού γυάλινος) + 7,1 pg/ml Μέσοι όροι: 186 pg/ml (Ορού γυάλινος) 188 pg/ml (EDTA πλαστικός) 180 pg/ml (Ηπαρίνης πλαστικός) 142 pg/ml (SST πλαστικός) 148 pg/ml (Ορού πλαστικός) Σύγκριση της Μεθόδου 1: Η ανάλυση συγκρίθηκε με μια διαθέσιμη στο εμπόριο ανάλυση IL-6 (Kit A) σε 109 δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 3 έως 300 pg/ml. Βλ. γράφημα 1.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/ml r = 0,975 Μέσοι όροι: 100 pg/ml (IMMULITE 2000) 124 pg/ml (Kιτ A) Σύγκριση της Μεθόδου 2: Η μέθοδος συγκρίθηκε επίσης με τη μέθοδο IMMULITE IL-6 σε 150 δείγματα ασθενών. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 3 έως 870 pg/ml. Βλ. γράφημα 2.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 1,08 (IML) 3,8 pg/ml r = 0,994 Μέσοι όροι: 215 pg/ml (IMMULITE 2000) 203 pg/ml (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 IL-6 Przeznaczenie:Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 do ilościowego oznaczenia interleukiny 6 (IL-6) w surowicy oraz w osoczu heparynowym i EDTA. Test przeznaczony jest do monitorowania chorób wiążących się ze stanami zapalnymi. Numery Katalogowe: L2K6P2 (200 testów) Kod testu: I6 Kolor: Ciemno zielony 14 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

15 Wprowadzenie IL-6 jest jednym z mediatorów układu odpornościowego posiadającym bardzo różnorodną aktywność biologiczną. W piśmiennictwie, zwłaszcza nieco starszym, można znaleźć jej nazwy synonimiczne: BCSF Czynnik Stymulujący Limfocyty B, BSF-2 Drugi Czynnik Stymulujący Limfocyty B, HGF Czynnik Wzrostowy Hybrydoma, HSF Czynnik Stymulujący Hepatocyty, CDF Cytolityczny Czynnik Różnicowania Limfocytów T i wiele innych. Prekursorową formą IL-6, powstałą w wyniku transkrypcji cdna, jest polipeptyd składający się z 212 reszt aminokwasów. Forma ostateczna IL-6, powstała w wyniku rozszczepienia peptydu prekursorowego, liczy 184 reszt aminokwasów. Ze względu na różny stopień glikozylacji w pozycjach 73 i 172 oraz fosforylacji, ciężar cząsteczkowy IL-6 zawiera się pomiędzy 21,5 i 28 kd. IL-6 może być syntetyzowana przez szereg zupełnie różnych komórek: monocyty/makrofagi, fibroblasty, komórki nabłonkowe, keratocyty, mastocyty, limfocyty T i szereg linii komórek nowotworowych. Tak in vivo jak i in vitro IL-6 pełni funkcję czynnika różnicowania limfocytów B i czynnika aktywacji limfocytów T. W obecności interleukiny 2 IL-6 ukierunkowuje różnicowanie limfocytów T w stronę komórek cytotoksycznych oraz indukuje proliferację tymocytów. Po wstępnej stymulacji interleukiną 4 IL-6 stanowi bodziec konieczny dla różnicowania limfocytów B w komórki plazmatyczne produkujące przeciwciała Ig. IL-6 jest silnym czynnikiem wzrostowym dla linii różnych szpiczaków ludzkich, działającym w stężeniach mniejszych niż 10 pg/ml. IL-6 oddziałuje synergistycznie z IL-3 na różnicowanie komórek potomnych w trakcie hemopoezy. Wzrost poziomu IL-6 w surowicy i osoczu stwierdzany jest w przypadku: posocznicy, chorób autoimmunologicznych, AIDS, poalkoholowego uszkodzenia wątroby, infekcji i odrzucania przeszczepu. Zasada Testu IMMULITE 2000 IL-6 to immunoenzymatyczny, chemiluminescencyjny, sekwencyjny test kanapkowy fazy stałej. Czas inkubacji: 2 x 30 minut Preparatyka Próbek Zalecane jest ultrawirowanie próbek lipemicznych. Hemoliza próbki może świadczyć o nieprawidłowym postępowaniu z próbką na etapie przedlaboratoryjnym. Fakt ten należy brać pod uwagę przy interpretacji wyników. Odwirowanie próbki krwi przed zakończeniem wykrzepiania może spowodować, że w supernatancie pozostanie fibryna stanowiąca przyczynę fałszywych wyników. Przed przystąpieniem do wirowania należy mieć pewność, że skrzep jest ostatecznie uformowany. Niektóre próbki, a zwłaszcza pochodzące od osób poddanych leczeniu antykoagulantami, wymagają dłuższego czasu na wytworzenie skrzepu. W zależności od producenta probówki do pobierania krwi mogą różnie wpływać na uzyskiwane wyniki. Istotne jest tworzywo i czynniki dodatkowe jak żel lub bariery oddzielające skrzep, aktywatory krzepnięcia oraz antykoagulanty. Wpływ wszystkich możliwych wariantów probówek na test IMMULITE 2000 IL-6 nie został określony. Informacje o przetestowanych wariantach podano w akapicie Wpływ materiału na oznaczenie. Wymagana objętość próbki: 100 µl surowicy, osocza EDTA lub heparynowego Przechowywanie materiału: 1 dzień 2 8 C lub 6 miesiąc w -20 C. Ostrzeżenia i warunki wstępne Test diagnostyczny in vitro. PRZESTROGA: Materiał pochodzenia zwierzęcego. Postępować tak jak z materiałem potencjalnie zakaźnym. IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 15

16 H312, H412 P280, P273, P302 + P352, P312, P501 Ostrzeżenie! Działa szkodliwie w kontakcie ze skórą. Działa szkodliwie na organizmy wodne, powodując długotrwałe skutki. Stosować rękawice ochronne/odzież ochronną/ ochronę oczu/ochronę twarzy. Unikać uwolnienia do środowiska. W PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: Umyć dużą ilością wody z mydłem. W przypadku złego samopoczucia skontaktować się z OŚRODKIEM ZATRUĆ lub z lekarzem. Pojemnik i zawartość usuwać zgodnie z wszystkimi lokalnymi, regionalnymi i krajowymi przepisami. Zawiera: azydek sodu; IL-6 Kalibratory zestawu Odczynniki: Przechowywać w 2 8 C. Usuwać zgodnie z instrukcją. Zachowywać środki ostrożności konieczne przy pracy z materiałem potencjalnie zakaźnym. W materiałach pochodzących z krwi ludzkiej wykluczono reaktywność w kierunku syfilisu, obecność przeciwciał anty-hiv1/2, HBsAg i przeciwciał anty- HCV. Niektóre składniki zestawu mogą zawierać azydek sodu w stężeniu mniejszym niż 0,1 g/dl, użyty jako konserwant. Wykorzystane odczynniki usuwać w dużejilości wody, by zapobiec osadzaniu azydku sodu w rurach miedzianych lub ołowianych, co może doprowadzić do wytworzenia potencjalnie wybuchowych azydków tych metali. Substrat chemiluminescencyjny:unikać zanieczyszczenia i chronić przed bezpośrednim światłem słonecznym (patrz ulotka). Woda: Dejonizowana lub destylowana. Elementy zestawu Elementy zestawu tworzą całość. Kody na wewnętrznych pokrywach pudełka są niezbędne do wykonania oznaczenia. IL-6 Pojemnik z kulkami (L26P12) Oznakowany kodem kreskowym. 200 kulek opłaszczonych mysim przeciwciałem monoklonalnym anty-il-6. Stabilne w 2 8 o C do daty ważności. L2K6P2: 1 opakowanie IL-6 Kliny z odczynnikiem (L26PA2) Oznakowany kodem kreskowym. 18,5 ml buforowanej matrycy białkowej; 18,5 ml alkalicznej fosfatazy (izolowanej z jelita cieląt) sprzęgniętej z owczym przeciwciałem poliklonalnym anty IL-6 w buforze, z konserwantem. Stabilne w 2 8 o C do daty ważności. L2K6P2: 1 klin Nie uszkadzając kodu kreskowego klina zerwij taśmę zabezpieczającą w okresie transportu przesuwne zamknięcie komór z odczynnikiem. Usuń tymczasowe foliowe uszczelnienie komór i wsuń zamknięcie komór na prowadnice w pokrywie klina. IL-6 Kalibratory zestawu (L6PL, L6PH) Dwie fiolki (kalibrator niski i wysoki) zawierające liofilizat IL-6 w matrycy buforowanej surowicy, z konserwantem. Zawartość fiolki rekonstytuować 3,0 ml wody destylowanej lub dejonizowanej. Mieszać przez delikatne wytrząsanie i obracanie fiołki do całkowitego rozpuszczenia liofilizatu. Po rekonstytucji stabilne 3 dni w 2 8 o C lub 6 miesięcy w 20 o C (rozpipetowane). L2K6P2: 1 zestaw Przed przystąpieniem do kalibracji umocuj na probówkach odpowiednie nalepki z kodem kreskowym (dostarczane z zestawem) rozpoznawane przez czytnik kodów kreskowych aparatu. Materiały Dostarczane Oddzielnie Rozcieńczalnik próbek multidiluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Do automatycznego rozcieńczania próbek. Fiolka zawierająca gotową do użycia, zwierzęcą, buforowaną matrycę białkową z konserwantem. Po otwarciu stabilny 30 dni w 2 8 o C lub do 6 miesięcy w 20 o C (rozpipetowany). L2M2Z: 25 ml; L2M2Z4: 55 ml 16 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

17 Nalepki z odpowiednimi kodami kreskowymi są dostarczane wraz z rozcieńczalnikiem. Nalepkę umieścić na probówce (16 x 100mm), by umożliwić jej rozpoznanie przez czytnik kodów aparatu. L2M2Z: 3 nalepki; L2M2Z4: 5 nalepek L2SUBM: Substrat chemiluminescencyjny L2PWSM: Roztwór płuczący L2KPM: Roztwór czyszczący LRXT: Probówki reakcyjne (jednorazowe) L2ZT: 250 probówek do rozcieńczania próbek mm L2ZC: 250 korków do probówek na rozcieńczalnik LILCM: Dwupoziomowa kontrola dla cytokin oparta na surowicy ludzkiej zawierająca IL-6. Ponadto niezbędne: woda destylowana lub dejonizowana, probówki, kontrole. Procedura Oznaczenia Przestrzeganie procedur dotyczących utrzymania aparatu, zawartych w Podręczniku operatora do obsługi systemów IMMULITE 2000 poprawia charakterystykę uzyskiwanych wyników. Procedury: przygotowania aparatu, ustawień aparatu, przygotowania i rozcieńczania próbek, rekalibracji, oznaczenia i kontroli jakości zgodnie z Podręcznikiem operatora do obsługi systemów IMMULITE Zalecany odstęp pomiędzy rekalibracjami: 2 tygodnie. Próbki kontrolne: Stosować kontrole lub pule surowic, co najmniej o niskim i wysokim poziomie IL-6. Oczekiwane Wartości Badania referencyjne dla IMMULITE 2000 IL-6 przeprowadzono w grupie 60 zdrowych ochotników z personelu laboratoryjnego. Krew pobierano do zwykłych szklanych probówek. Zakres niższych 95% wyznaczony nieparametrycznie rozciągał się od wartości nieoznaczalnych do 3,4 pg/ml Zakres absolutny od wartości nieoznaczalnych do 5,9 pg/ml. Powyższe wartości należy traktować jako orientacyjne. Każde laboratorium powinno wyznaczyć własne zakresy referencyjne. Ograniczenia Przeciwciała heterofilne obecne w surowicy ludzkiej mogą wchodzić w reakcję z immunoglobulinami będącymi reagentami testu immunologicznego, wpływając na przebieg oznaczenia in vitro. [Porównaj: Boscato L.M., Stuart M.C.: Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays Przeciwciała heterofilne - problem wszystkich testów immunologicznych. Clin. Chem. 1988: 34: 27-33]. Wpływ przeciwciał heterofilnych może ujawnić się w oznaczeniach wykonywanych w surowicy osób mających ciągły kontakt ze zwierzętami lub zwierzęcymi produktami krwiopochodnymi, stanowiąc potencjalną przyczynę błędnych wyników. W teście ryzyko interferencji przeciwciał heterofilnych zostało zminimalizowane przez odpowiedni dobór proporcji odczynników, tym niemniej interferencja taka może potencjalnie nastąpić w rzadkich przypadkach. W postępowaniu diagnostycznym wyniki uzyskane tą metodą powinny być z zasady interpretowane w połączeniu z badaniem klinicznym pacjenta, jego historią choroby oraz innymi okolicznościami. Parametry testu Dane charakteryzujące test przedstawiono w tabelach i wykresach. Wyniki podano w pg/ml. O ile nie podano inaczej, wszystkie wyniki dotyczą surowicy a próbki pobierano do probówek bez bariery żelowej i substancji przyspieszających krzepnięcie. Zakres kalibracji: Do pg/ml; Wg Pierwszego Międzynarodowego Standardu NIBSC 1 st IS 89/548 (IU/mL): IU/mL = 0,1 x pg/ml Czułość analityczna: 2 pg/ml Efekt wysokiej dawki Hook Effect: Nie występuje do stężenia pg/ml Precyzja: Próbki testowano przez okres kilkunastu dni w duplikatach, w sumie w 40 seriach i 80 powtórzeniach (patrz: tabela precyzji). Liniowość: Oznaczano próbki poddane kolejnym rozcieńczeniom (porównaj: tabela Linearity ) IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 17

18 Odzysk: Oznaczano próbki wzbogacane w stosunku objętościowym 1 do 19 roztworami IL-6 o stężeniach, kolejno: 1 000, i pg/ml (porównaj: tabela Recovery ) Specyficzność: Przeciwciało jest wysoce specyficzne w stosunku do IL-6 (patrz: tabela Specificity ) Bilirubina: Obecność bilirubiny związanej i niezwiązanej w stężeniu do 200 mg/l nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Hemoliza: Obecność hemoglobiny w stężeniu do 550 mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Lipemia: Obecność trójglicerydów w stężeniu do mg/dl nie wpływa na wynik w charakterystycznym dla testu zakresie precyzji. Rodzaje pobieranego materiału:wpływ rodzaju próbki na oznaczenie określano w próbkach krwi pobieranych od 12 ochotników do probówek zwykłych szklanych i plastikowych, plastikowych z heparyną i z EDTA oraz plastikowych probówek z barierą żelową SST. Producentem wszystkich był Becton Dickinson. Jednakowe objętości porównywanych próbek wzbogacano stężeniami IL-6 dobieranymi tak, by pokryć zakres liniowości testu i oznaczano w teście IMMULITE 2000 IL-6. (EDTA plastik) = 0,98 (Surowica szkło) + 5,2 pg/ml (Heparyna plastik) = 0,92 (Surowica szkło) + 8,3 pg/ml (SST plastik) = 0,71 (Surowica szkło) + 9,1 pg/ml (Surowica plastik) = 0,76 (Surowica szkło) + 7,1 pg/ml Średnie: 186 pg/ml (Surowica szkło) 188 pg/ml (EDTA plastik) 180 pg/ml (Heparyna plastik) 142 pg/ml (SST plastik) 148 pg/ml (Surowica plastik) Porównanie metod 1: Test porównywano z obecnym na rynku testem dla IL-6 zakodowanym jako Kit A w grupie 109 próbek (zakres stężeń od ok. 3 do 300 pg/ml). Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 0,80 (Kit A) + 0,97 pg/ml r = 0,975 Średnie: 100 pg/ml (IMMULITE 2000) 124 pg/ml (Kit A) Porównanie metod 2: Test porównywano również z testem IMMULITE IL-6 w grupie 150 próbek (zakres stężeń od ok. 3 do 870 pg/ml). Otrzymano następujące równanie regresji liniowej: (IML 2000) = 1,08 (IML) 3,8 pg/ml r = 0,994 Średnie: 215 pg/ml (IMMULITE 2000) 203 pg/ml (IMMULITE) Pomoc techniczna i konsultacje Krajowy Dystrybutor udziela wszechstronnej pomocy technicznej. System Kontroli Jakości Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. posiada Certyfikat Jakości ISO 13485:2003. IMMULITE is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Siemens Healthcare Diagnostics. All rights reserved. Made in: UK Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. Glyn Rhonwy, Llanberis, Gwynedd LL55 4EL United Kingdom PIEL2K6P 2 {16} Changes in this Edition: cc#eu22521: 1) Under Warnings and Precautions, added required GHS pictogram(s)/signal word/hazard and precautionary information, offending chemicals and source, and Caution statement. 2) Changed Origin: UK to Made in: UK. 3) Updated the manufacturer address to include Glyn Rhonwy. 4) In Understanding the Symbols, revised the symbol for catalog number, added a GHS pictogram for health hazard, and updated existing symbols with GHS pictograms and terminology for exclamation mark, corrosion, skull and crossbones, and environment. 18 IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, )

19 Understanding the Symbols Understanding the Symbols En English Vysvětlivky symbolů Επεξήγηση των συμβόλων Znaczenie symboli Cz Česky El Ελληνικά Pl Polski The following symbols may appear on the product labeling: / Na štítku výrobku mohou být uvedeny následující symboly: / Τα ακόλουθα σύμβολα ενδέχεται να εμφανίζονται στην επισήμανση του προϊόντος: / Na etykietach produktu mogą pojawiać się poniższe symbole: Symbol Definition En: In vitro diagnostic medical device Cz: Zdravotnický prostředek pro in vitro diagnostiku El: In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή Pl: Sprzęt do medycznej diagnostyki in vitro En: Catalog Number Cz: Katalogové číslo El: Αριθμός καταλόγου Pl: Numer katalogowy En: Manufacturer Cz: Výrobce El: Κατασκευαστής Pl: Producent En: Authorized Representative in the European Community Cz: Autorizované zastoupení v Evropské unii El: Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα Pl: Autoryzowany przedstawiciel w Unii Europejskiej En: CE Mark Cz: CE značka El: Σήμανση CE Pl: Znak CE En: CE Mark with identification number of notified body Cz: CE značka s identifikačním číslem notifikovaného orgánu El: Σήμανση CE με αριθμό αναγνώρισης του φορέα πιστοποίησης Pl: Znak CE z numerem identyfikacyjnym jednostki notyfikowanej LOT Symbol Definition En: Consult instructions for use Cz: Postupujte podle návodu k použití El: Συμβουλευτείτε τις οδηγίες λειτουργίας Pl: Zapoznać się z instrukcją użycia En: Caution! Potential Biohazard Cz: Pozor! Potenciální biohazard El: Πρoσοχή! υνητικός βιολογικός κίνδυνος Pl: Uwaga! Potencjalne zagrożenie biologiczne En: Temperature limitation (2 8 C) Cz: Teplotní rozsah (2 8 C) El: Περιορισμός θερμοκρασίας (2 8 C) Pl: Zakres temperatury (2 8 C) En: Upper limit of temperature ( -20 C) Cz: Horní teplotní limit ( -20 C) El: Ανώτερο όριο θερμοκρασίας ( -20 C) Pl: Górny zakres temperatury ( -20 C) En: Lower limit of temperature ( 2 C) Cz: Spodní teplotní limit ( 2 C) El: Κατώτερο όριο θερμοκρασίας ( 2 C) Pl: Dolny zakres temperatury ( 2 C) En: Do not freeze (> 0 C) Cz: Nezmrazovat (> 0 C) El: Μην καταψυχετε (> 0 C) Pl: Nie zamrażać (> 0 C) En: Do not reuse Cz: Pro jednorázové použití El: Μην κάνετε επαναληπτική χρήση Pl: Nie używać powtórnie En: Keep away from sunlight Cz: Chraňte před slunečním světlem El: ιατηρείτε μακριά από το ηλιακό φως Pl: Chronić przed światłem słonecznym En: Batch code Cz: Šarže El: Κωδικός παρτίδας Pl: Kod serii IMMULITE 2000 IL-6 (PIEL2K6P-2 {16}, ) 19