H. pylori IgG. For the Detection of IgG Antibodies to H. pylori in Human Serum. For use on IMMULITE 2000 systems

Transcript

1 H. pylori IgG For the Detection of IgG Antibodies to H. pylori in Human Serum For use on IMMULITE 2000 systems

2 IMMULITE 2000 H. pylori IgG English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the qualitative detection of IgG antibodies to Helicobacter pylori in human serum from symptomatic adults, as an aid in the diagnosis of Helicobacter pylori infection. Catalog Number: L2KHPG2 (200 tests), L2KHPG6 (600 tests) Test Code: HPG Color: Dark Green Summary and Explanation In 1983, Warren and Marshall described a curved bacillus associated with gastric mucosa in cases of chronic gastritis, tentatively drawing comparisons between that organism and the genus Campylobacter. More recently, investigators have shown a correlation between colonization with this organism (now termed Helicobacter pylori) and gastric and duodenal ulcers and chronic gastritis. H. pylori colonization is chronic in nature and appears to cause histological inflammation of the gastric mucosa. When H. pylori is eliminated from the gastric mucosa, the inflammation tends to decrease. If the organism recolonizes, the inflammation increases in severity and coincides with the appearance of gastrointestinal symptoms. A lack of gastrointestinal symptoms in the presence of H. pylori indicates colonization rather than infection. The most recent clinical studies have confirmed H. pylori to be the causative agent for most cases of chronic gastritis and ulcers. Evidence has been presented that H. pylori is also associated with gastric carcinoma. Current procedures for detecting H. pylori rely on isolation of the organism from tissue obtained from endoscopic biopsy. The tissue is also tested by histology, gram staining, and/or testing for the enzyme urease, which is produced by the organism in abundance. Each of the methods, including histology and gram staining, require biopsy material taken from multiple sites. In addition to the necessity for performing an invasive gastroscopy, each of these methods suffers from other inadequacies. 6 The presence of H. pylori has also been detected with a urea breath test (using radioactive or nonradioactive isotopes) and by serological methods A positive serological response to H. pylori antigens has been determined in individuals with duodenitis, chronic gastritis, and gastric or duodenal ulcer. Further, many people without clinical symptoms are seropositive for H. pylori antibodies, with the prevalence increasing with age. Therefore, while H. pylori serology is a sensitive method to determine colonization, differentiation between colonization and active disease is not possible. Principle of the Procedure IMMULITE 2000 H. pylori IgG is a solidphase, chemiluminescent immunometric assay. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 H. pylori IgG has not been tested with all possible variations of tube types. Consult the section on 2 IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )

3 Alternate Sample Types for details on tubes that have been tested. Volume Required: 10 µl serum. Automatic Predilution Factor: 20 Dispense required volume of diluent (L2HPGZ2) to a suitable test tube with barcode label applied. Storage: 3 days at 2 8 C, or 6 months at 20 C. 17 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. The bead is coated with inactivated H. pylori antigen. However, caution is advised because of the possible presence of residual organism when working with, or disposing of, the materials supplied. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay. H. pylori IgG Bead Pack (L2HPG12) With barcodes. 200 beads, coated with inactivated, partially purified H. pylori antigen. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KHPG2: 1 pack. L2KHPG6: 3 packs. H. pylori IgG Reagent Wedge (L2HPGA2) With barcodes. 2 reagents ml buffer solution ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to monoclonal murine anti-human IgG antibody in buffer. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KHPG2: 1 wedge. L2KHPG6: 3 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid. H. pylori IgG Adjustors (LHPGL, LHPGH) Two vials (Low and High), 4 ml each, of human serum with IgG reactive to H. pylori, in a buffer, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KHPG2: 1 set. L2KHPG6: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. H. pylori IgG Controls (LHPGC1, LHPGC2, LHPGC3) Three vials, (Negative, Low Positive and Positive), 2 ml each. LHPGC1 (Negative Control): One vial containing human serum with IgG nonreactive to H. pylori, with preservative. LHPGC2, LHPGC3 (Low Positive Control, Positive Control): Two vials containing human serum with IgG reactive to H. pylori, with preservative. Stable at 2 8 C for 14 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KHPG2: 1 set. L2KHPG6: 2 sets. The IMMULITE 2000 software performs automatic on-board dilution of control samples, and the results will be tracked in the QC database. Enter controls as controls. For the current control ranges, please refer to the Control insert. Before running adjustors or controls, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes, so that the barcodes can be read by the on-board reader. H. pylori IgG Sample Diluent (L2HPGZ2) For the on-board dilution of patient samples and controls. 55 ml concentrated (ready-to-use) buffer solution, with IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, ) 3

4 preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KHPG2: 1 vial. L2KHPG6: 1 vial. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2HPGZ2: 5 labels. Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes ( mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps LHPGCM: Tri-level H. pylori IgG Control Module Also required Distilled or deionized water; test tubes. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 1 week. Quality Control Samples: Use controls supplied with kit. Interpretation of Results Positive: A result greater than or equal to 1.1 U/mL is considered to be "positive", and indicates that H. pylori IgG antibodies were detected in the sample. Indeterminate: A result greater than or equal to 0.9 U/mL and less than 1.1 U/mL, is considered to be "indeterminate". Indeterminate samples should be retested. Samples still yielding "indeterminate" values should be examined by an alternate method, or a second sample should be collected, if possible, within a reasonable time period (e.g., one week). Negative: A result less than 0.9 U/mL is considered to be "negative", and indicates that H. pylori IgG antibodies were not detected in the sample. Negative results by this test do not preclude recent primary infection. The presence of IgG antibodies to H. pylori is an indication of previous exposure to the organism. A single specimen can only be used to determine the immune status of the individual. The anti-h. pylori IgG results determined for a given specimen with assays from different manufacturers can vary due to differences in assay methods and reagent specificity. Therefore, the results reported by the laboratory to the physician should include: "The following results were obtained with the IMMULITE 2000 H. pylori IgG EIA. Results obtained from other manufacturers' assay methods may not be used interchangeably." Expected Values The majority of individuals exposed to H. pylori possess IgG antibodies to the organism. In addition, the presence of H. pylori antibodies is a function of age, race, geography and clinical condition. 16 Age-specific rates for H. pylori infection are similar for males and females. The prevalence of H. pylori infection is between 30 and 40% in the US and Canada, about 20% in Australia, 70% in Europe, and between 70 and 90% in Africa, South America and Asia. 18 H. pylori has also been identified as a risk factor for gastric cancer. Nearly 100% of patients with duodenal ulcer, 85% of those with gastric ulcer, 19 and % of patients with gastric cancer are infected with H. pylori. 20 A relatively large proportion of patients who have positive levels of antibody are asymptomatic, even though they are colonized with the H. pylori organism. Therefore, antibody levels do not necessarily correlate with the severity of clinical symptoms IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )

5 Limitations For the determination of seroconversion from nonreactive to reactive, two serum samples should be drawn three to four weeks apart, during the acute and convalescent stages of the infection. The acute phase sample should be stored and tested in parallel with the convalescent sample. Individuals with an acute H. pylori infection may not exhibit any detectable IgG antibodies at the early stage of infection. The results in HIV patients, in patients undergoing immunosuppressive therapy, or in patients with other disorders leading to immunosuppression, should be interpreted with caution. The performance characteristics of this assay have not been established for use with specimens from cord blood, neonates, pediatric patients, or pretransplant patients. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in U/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Calibration Range: 0.4 to 8.0 U/mL. The assay is traceable to an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 0.4 U/mL. Precision: Six samples were assayed in triplicate over the course of 6 days, two runs per day, for a total of 12 runs and 36 replicates. (See Precision table.) Specificity: The assay is highly specific for H. pylori IgG antibodies, with no observed crossreactivity to Campylobacter jejuni, Campylobacter fetus and Campylobacter coli microorganisms. This conclusion was drawn from a study using the IMMULITE H. pylori IgG assay. Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 809 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Alternate Sample Type: To assess the effect of alternate sample types, blood was collected from 20 volunteers into plain, heparinized, EDTA and Becton Dickinson SST vacutainer tubes. Equal volumes of the matched samples were spiked with various concentrations of H. pylori IgG, to obtain values throughout the calibration range of the assay, and then assayed by the IMMULITE 2000 H. pylori IgG procedure. (Heparin) = 1.06 (Serum) 0.18 U/mL r = (EDTA) = 1.00 (Serum) 0.09 U/mL r = (SST) = 1.00 (Plain Tubes) 0.04 U/mL r = Means: 2.5 U/mL (Serum) 2.5 U/mL (Heparin) 2.4 U/mL (EDTA) 2.4 U/mL (SST) The results show that heparinized and EDTA plasma yield virtually the same results as serum in the IMMULITE 2000 H. pylori IgG procedure. Method Comparisons: The assay was compared to clinical diagnosis by biopsy on 155 randomly selected retrospective specimens from patients suspected of IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, ) 5

6 H. pylori infection. A specimen was considered clinically positive if the culture test, or both CLO and histology tests, were positive. A specimen was considered clinically negative if none of the biopsy tests were positive. IMMULITE 2000 Clinical Diagnosis Pos Ind Neg Sensitivity Specificity Pos % 100.0% Neg Agreement: 98.7% Central 95% Confidence Limits for Sensitivity and Specificity, respectively: 89.6% 99.6% and 95.7% 100%. The assay was also compared to IMMULITE H. pylori IgG (LKHEQ) procedure on 197 samples. (Concentration range: approximately 0.4 to 7.0 U/mL. See graph.) By linear regression: (IML 2000) = 0.96 (IML) U/mL r = Means: 2.19 U/mL (IMMULITE 2000) 2.23 U/mL (IMMULITE) References 1) Antonescu CG, Marshall BJ. Helicobacter pylori: A potentially curable form of peptic ulcer disease. Gastroenterol J Club 1990;1: ) Barthel JS, Everett ED. Diagnosis of campylobacter pylori infections: the "Gold Standard" and the alternatives. Rev Infec Dis 1990;12 (suppl.1): ) DeCross AJ, Peura DA. Role of H. pylori in peptic ulcer disease. Contemp Gastroenterol 1992;5: ) George LL, Borody TJ, Andrews P, Devine M, Moore-Jones D et al. Cure of duodenal ulcer after eradication of H. pylori. Med J Australia 1990;153. 5) Goodwin CS, Armstrong JA, Marshall BJ. Campylobacterpylori, gastritis, and peptic ulceration. J Clin Pathol 1986;39: ) Graham DY, Klein PD. What you should know about the methods, problems, interpretations, and uses of urea breath tests. Amer J Gastroenterol 1991;86 (9): ) Kosunen TU, Sepälä K, Sarna S, Sipponen P. Diagnostic value of decreasing IgG, IgA, and IgM antibody titers after eradication of Helicobacter pylori. Lancet 1992;339: ) Parsonnet J, Friedman GD, Vandersteen DP, Chang Y, Vogelman JH et al. Helicobacter pylori infection and the risk of gastric carcinoma. New Engl J Med 1991;325: ) Rauws EA, Tytgat GNJ. Cure of duodenal ulcer associated with eradication of Helicobacter pylori. Lancet 1990;335: ) Talley NJ, Newell DG, Ormand JE, Carpenter HA, Wilson WR et al. Serodiagnosis of Helicobacter pylori: Comparison of enzyme-linked immunosorbent assays. J Clin Microbiol 1991;29: ) Jones DM et al. Antibody to the gastric Campylobacter-like organism (Campylobacter pylori) clinical correlations and distribution in the normal population. J Med Microbiol 1986;22: ) Thomas JE, Whatmore AM, Barer MR, Eastham EJ, Kehoe MA. Serodiagnosis of Helicobacter pylori infection in childhood. J Clin Microbiol 1990;28: ) Warren JR, Marshall BJ. Unidentified curved bacillus on gastric epithelium in active chronic gastritis. Lancet 1983;1: ) Fennerty MB. A review of tests for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. Lab Med 1998;29: ) Lichetenstein DR. Peptic ulcer disease: clinical options for detecting and eradicating H. pylori infection. Mod Med 1994;62: 16) Dunn BE, et al. Helicobacter pylori. Clin Microbiol Rev 1997; ) Tietz NW, editor. Clinical guide to laboratory tests. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 1995: ) Bonney RC. The developing market for Helicobactor pylori testing. PJB Publications Ltd, 1997: ) Marshall BJ. Helicobactor pylori: the etiological agent for peptic ulcer. Journal of the American Medical Association 1995; 274: ) Vanagunas A. The link between Helicobactor pylori and gastric cancer. Infec Med 1998;15: ,656. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distributor. The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified to ISO 13485:2003. Tables and Graphs Precision (U/mL) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 < 0.4* % % % % % % % % % % *Results were consistently below 0.4 U/mL. 6 Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační 6 IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )

7 koeficient, 6 Výsledky byly shodně pod 0,4 U/ml. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV, 6 Τα αποτελέσματα ήταν με συνέπεια κάτω από 0,4 U/mL. Polski. 1 W serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV, 6 Wszystkie wyniki były poniżej 0,4 U/mL. Method Comparison IMMULITE 2000 H. pylori IgG IMMULITE H. pylori IgG, U/mL (IML 2000) = 0.96 (IML) U/mL r = Česky IMMULITE 2000 H. pylori IgG Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzátorech IMMULITE 2000 ke stanovení přítomnosti IgG protilátek proti Helicobacter pylori v lidském séru symptomatických dospělých jedinců, jakožto pomůcky při diagnostice infekce Helicobacter pylori. Katalogové číslo: L2KHPG2 (200 stanovení), L2KHPG6 (600 stanovení) Kód metody: HPG Barva: Tmavě zelená Shrnutí a vysvětlení V roce 1983 popsali Warren a Marshall zakřivený bacil, který se v případech chronické gastritidy vyskytuje na žaludeční sliznici, a zkusmo nastínili srovnání mezi tímto organizmem a rodem Campylobacter. Pozdější výzkumy prokázaly korelaci mezi kolonizací tímto organizmem (nyní označeným jako Helicobacter pylori) a žaludečními a dvanáctníkovými vředy a chronickou gastritidou. Kolonizace H. pylori je chronické povahy a zřejmě způsobuje histologické záněty žaludeční sliznice. Po odstranění H. pylori ze sliznice žaludku se zánět ztrácí. Po opětovné kolonizaci je návrat zánětu prudší a časově se shoduje s výskytem GIT symptomů. Chybějící GIT symptomy za přítomnosti H. pylori svědčí spíš o kolonizaci než o infekci. Nejnovější klinické studie potvrdily H. pylori jako původce většiny chronických gastritid a vředů. Byly uvedeny důkazy, že H. pylori rovněž souvisí s karcinomy žaludku. Stávající postupy detekce H. pylori jsou založeny na izolaci organizmu z tkáně získané endoskopickou biopsií. Tkáň je rovněž vyšetřena histologicky, pomocí Gramova barvení a/nebo se zjišťuje přítomnost enzymu ureázy, který H. pylori vylučuje v hojném množství. Každá z těchto metod, včetně histologie a Gramova barvení, si vyžaduje tkáň odebranou biopsií z více míst. Kromě nezbytnosti vykonat invazivní gastroskopii mají tyto metody i jiné nedostatky. 6 Výskyt H. pylori byl rovněž zjištěn pomocí dechové zkoušky močoviny (za použití radioaktivních nebo neradioaktivních izotopů) a sérologických metod Pozitivní sérologická odpověď na antigeny H. pylori byla zjištěna u jedinců se zánětem dvanáctníku, chronickou gastritidou a žaludečními nebo dvanáctníkovými vředy. I mnozí jedinci bez klinických příznaků jsou séropozitivní na protilátky proti H. pylori, přičemž výskyt se zvyšuje s přibývajícím věkem. Sérologické stanovení H. pylori představuje citlivou metodu odhalení kolonizace, ale neumožňuje rozlišení mezi kolonizací a aktivním onemocněním. Princip Stanovení H. pylori IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 je chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Inkubační cykly: 2 30 minut. Odebírání vzorků K úpravě lipemických vzorků se doporučuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím do laboratoře; proto by výsledky měly být interpretovány s obezřetností. IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, ) 7

8 Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přítomnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přítomností fibrinu lze zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžadovat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskytovat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivátorů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení H. pylori IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 nebylo testováno se všemi možnými variantami jednotlivých typů zkumavek. Informace o testovaných zkumavkách najdete v části o alternativních typech vzorků. Potřebný objem vzorku: 10 μl séra. Faktor automatického předředění: 20 Požadovaný objem diluentu (L2HPGZ2) dejte do vhodné testovací zkumavky s nalepeným štítkem s čárovým kódem. Skladování: 3 dny při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců při teplotě 20 C. 17 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Kulička je potažená imobilizovaným antigenem H. pylori. Z důvodu možné přítomnosti zbytkového organizmu se při práci s dodaným materiálem nebo jeho likvidaci doporučuje dbát opatrnosti. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly testovány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg) a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovým kódem na krabici. H. pylori IgG zásobník s kuličkami (L2HPG12) Opatřeno čárovými kódy. 200 kuliček potažených imobilizovaným, ne zcela purifikovaným antigenem H. pylori. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KHPG2: 1 balení. L2KHPG6: 3 balení H. pylori IgG reagencie (L2HPGA2) Opatřeno čárovými kódy. 2 reagencie. 11,5 ml pufrového roztoku. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s monoklonální myší protilátkou proti lidskému IgG v pufru. Stabilní při teplotě 2 8 C do expirace. L2KHPG2: 1 nádobka. L2KHPG6: 3 nádobky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nádobky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte do ramp na víčku reagencie. H. pylori IgG kalibrátory (LHPGL, LHPGH) Dvě ampulky po 4 ml s vysokou a nízkou koncentrací lidského séra s IgG reaktivním vůči H. pylori, v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při 20 C. L2KHPG2: 1 sada. L2KHPG6: 2 sady. Před adjustací nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. H. pylori IgG kontroly (LHPGC1, LHPGC2, LHPGC3) Tři ampulky (negativní, mírně pozitivní a pozitivní), každá 2 ml. LHPGC1 (Negativní kontrola): Jedna ampulka 8 IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )

9 obsahující lidské sérum s IgG nereaktivním vůči H. pylori, s konzervačním prostředkem. LHPGC2, LHPGC3 (Mírně pozitivní kontrola, pozitivní kontrola): Dvě ampulky obsahující lidské sérum s IgG reaktivním vůči H. pylori, s konzervačním prostředkem. Stabilní 14 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při 20 C. L2KHPG2: 1 sada. L2KHPG6: 2 sady. Software analyzátoru IMMULITE 2000 provádí automatické ředění kontrol, výsledky jsou ukládány do QC databáze. Kontroly zadejte jako kontroly. Aktuální rozmezí koncentrací kontrol najdete na letáčku přiloženém ke kontrolám. Před adjustací a testováním kontrol nalepte na testovací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dodané se soupravou) tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. H. pylori IgG diluent vzorků (L2HPGZ2) K automatickému ředění vzorků a kontrol. 55 ml koncentrovaného (připraveného k použití) pufrového roztoku, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo 6 měsíců rozdělené na alikvotní části při 20 C. L2KHPG2: 1 ampulka. L2KHPG6: 1 ampulka. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na testovací zkumavku mm tak, aby zabudovaný snímač mohl přečíst čárové kódy. L2HPGZ2: 5 štítků. Materiál dodávaný zvlášť L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací roztok L2KPM: Čistící roztok na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 testovacích zkumavek na diluent vzorků ( mm) L2ZC: 250 uzávěrů na testovací zkumavky na diluent vzorků LHPGCM: Trojúrovňový H. pylori IgG kontrolní modul Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu, testovací zkumavky. Postup stanovení K dosažení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzátorům IMMULITE V manuálu k analyzátorům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 1 týden. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly dodané se soupravou. Vyhodnocení výsledků Pozitivní: Výsledek vyšší nebo rovný 1,1 U/ml je považován za "pozitivní" a znamená, že protilátky proti H. pylori IgG byly ve vzorku zjištěny. Neurčitý: Výsledek vyšší nebo rovný 0,9 U/ml a menší než 1,1 U/ml je považován za "neurčitý (indeterminate)". Vzorky s neurčitým výsledkem je třeba opět analyzovat. Pokud je výsledek znovu "neurčitý", je výsledky třeba zkontrolovat pomocí alternativní metody, nebo, pokud je to možné, za rozumnou dobu (např. 1 týden) odebrat další vzorek. Negativní: Výsledek nižší než 0,9 U/ml je považován za "negativní" a znamená, že IgG protilátky proti H. pylori nebyly ve vzorku zjištěny. Negativní výsledky tohoto testu nevylučují nedávnou primární infekci. Výskyt IgG protilátek proti H. pylori svědčí o dřívějším kontaktu s organizmem. Jediný vzorek lze použít pouze ke stanovení imunitního stavu daného jedince. Výsledky stanovení IgG protilátek proti H. pylori v daném vzorku pomocí testů od různých výrobců se můžou z důvodu rozdílů v použité metodě a specificitě reagencií lišit. Proto by výsledek stanovení, který laboratoř posílá lékaři, měl obsahovat sdělení: Následující výsledky byly získány prostřednictvím stanovení H. pylori IgG EIA na analyzátorech IMMULITE Výsledky získané pomocí testovacích metod IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, ) 9

10 používaných jinými výrobci se nesmí zaměňovat. Očekávané hodnoty Většina lidí vystavených kontaktu s H. pylori má IgG protilátky proti tomuto organizmu. Přítomnost protilátek proti H. pylori je navíc funkcí věku, rasy a zeměpisných a klinických podmínek. 16 Výskyt infekce H. pylori specifický pro určitou věkovou kategorii je u mužů i žen obdobný. Výskyt infekce H. pylori je 30 až 40% v USA a Kanadě, kolem 20% v Austrálii, 70% v Evropě a mezi 70 a 90% v Africe, jižní Americe a Asii. 18 Infekce H. pylori byla rovněž označená za rizikový faktor rakoviny žaludku. Téměř 100% pacientů s dvanáctníkovými vředy, 85% lidí se žaludečními vředy 19 a % pacientů s rakovinou žaludku je nakaženo H. pylori. 20 Relativně velká část pacientů s pozitivním výsledkem množství protilátek je asymptomatických, i když jsou kolonizováni organizmem H. pylori. Množství protilátek proto nemusí nutně korelovat se závažností klinických příznaků. 16 Omezení Ke stanovení sérokonverze z nereaktivní na reaktivní je třeba odebrat dva vzorky s časovým rozestupem tři až čtyři týdny, během akutní fáze infekce a fáze rekonvalescence. Vzorky odpovídající akutní fázi se skladují a testují paralelně se vzorky odpovídajícími rekonvalescenci. Jedinci s akutní infekcí H. pylori nemusí v ranném stadiu infekce vykázat žádné zjistitelné množství IgG protilátek. Výsledky vzorků od pacientů s HIV, pacientů podstupujících imunosupresivní léčbu nebo pacientů s jinými poruchami vedoucími k imunosupresi, je nutné interpretovat s obezřetností. Tato metoda není určena pro použití se vzorky od novorozenců, vzorky pupečníkové krve, vzorky od pacientů před transplantací a od dětských pacientů. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsaženými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat tento typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Tyto reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky tohoto stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní historií pacienta a ostatními nálezy. Znaky metody Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v U/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných do zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Kalibrační rozsah: 0,4 až 8,0 U/ml. Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost: 0,4 U/ml. Přesnost: Bylo analyzováno šest vzorků po třech v šesti dnech, dva testy denně, celkem 12 testů a 36 replikátů. (Viz tabulka Přesnost.) Specificita: Stanovení je silně specifické vůči IgG protilátkám proti H. pylori bez naměřené zkřížené reaktivity s mikroorganizmy Campylobacter jejuni, Campylobacter fetus a Campylobacter coli. Tento závěr pochází ze studie, která používala stanovení H. pylori IgG na analyzátoru IMMULITE. Bilirubin: Přítomnost bilirubinu v koncentracích do 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přítomnost hemoglobinu v koncentracích do 809 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přítomnost triglyceridů v koncentracích do mg/dl nemá 10 IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )

11 v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Alternativní typ vzorku: K určení vlivu alternativních typů vzorků byly stanoveny vzorky krve odebrané 20 dobrovolníkům do obyčejných, heparinizovaných, EDTA a Becton Dickinson SST vacutainer zkumavek. Do úměrných objemů odpovídajících vzorků byly přidány IgG protilátky proti H. pylori různých koncentrací, aby byly získány hodnoty napříč celým kalibračním rozsahem. Vzorky byly následně stanoveny testem H. pylori IgG na analyzátorech IMMULITE Heparin) = 1,06 (Sérum) 0,18 U/ml r = 0,997 (EDTA) = 1,00 (Sérum) 0,09 U/ml r = 0,993 (SST) = 1,00 (obyčejné zkumavky) 0,04 U/ml r = 0,999 Střední hodnoty: 2,5 U/ml (Sérum) 2,5 U/ml (Heparin) 2,4 U/ml (EDTA) 2,4 U/ml (SST) Výsledky ukázaly, že použití heparinizované a EDTA plazmy při testu H. pylori IgG na analyzátorech IMMULITE 2000 přineslo prakticky stejné výsledky jako použití séra. Srovnání metody: Stanovení bylo porovnáno s klinickými diagnózami určenými pomocí biopsie na 155 náhodně vybraných retrospektivních vzorcích od pacientů s podezřením na infekci H. pylori. Vzorek byl považován za klinicky pozitivní, pokud kultivační test, nebo CLO i histologický test byly pozitivní. Vzorek byl považován za klinicky negativní, pokud žádná ze zkoušek biopsie nebyla pozitivní. Klinická diagnóza Poz. IML 2000 Pozitivní Negativní Ind. (neurč.) Neg. Citlivost Specificita 97,0% 100,0% Shoda: 98,7% Střední 95% intervaly spolehlivosti pro citlivost a specificitu (v uvedeném pořadí): 89,6% 99,6% a 95,7% 100%. Stanovení bylo rovněž porovnáno s testem H. pylori IgG (LKHEQ) na analyzátoru IMMULITE na 197 vzorcích. (Koncentrační rozsah: přibližně 0,4 až 7,0 U/ml. Viz graf.) Podle lineární regrese: (IML 2000) = 0,96 (IML) + 0,05 U/ml r = 0,992 Střední hodnoty: 2,19 U/ml (IMMULITE 2000) 2,23 U/ml (IMMULITE) Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distributora. Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 IgG Ελικ. Πυλωρού Ενδεδειγμένη χρήση: Για in vitro διαγνωστική χρήση με τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για τον ποιοτικό προσδιορισμό αντισωμάτων IgG έναντι του ελικοβακτηρίδιου του πυλωρού στον ανθρώπινο ορό, ως βοήθημα για τη διάγνωση της μόλυνσης από το ελικοβακτηρίδιου του πυλωρού. Αριθμός καταλόγου: L2KHPG2 (200 εξετάσεις), L2KHPG6 (600 εξετάσεις) Κωδικός εξέτασης: HPG Χρώμα: Σκούρο πράσινο Περίληψη και επεξήγηση Το 1983 οι Warren and Marshall περιέγραψαν έναν ελικοειδή βάκιλο, ο οποίος ήταν παρών στο βλεννογόνο του στομάχου σε περιπτώσεις χρόνιας γαστρίτιδας και τον συνέκριναν επιφυλακτικά με τα καμπυλοβακτηρίδια. Πιο πρόσφατα, οι ερευνητές διαπίστωσαν μια σχέση μεταξύ του αποικισμού αυτού του μικροοργανισμού (ο οποίος ονομάστηκε ελικοβακτηρίδιο του πυλωρού) και του έλκους του στομάχου και του δωδεκαδακτύλου ή της χρόνιας γαστρίτιδας. Ο αποικισμός από το ελικ. του πυλωρού είναι χρόνιος και φαίνεται να προκαλεί φλεγμονή στους ιστούς του γαστρικού βλεννογόνου. Όταν το ελικ. του πυλωρού εξουδετερώνεται από το IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, ) 11

12 βλεννογόνο του στομάχου, η φλεγμονή τείνει να υποχωρεί. Εάν ο μικροοργανισμός επεκταθεί, η φλεγμονή επιδεινώνεται και συμπίπτει με την εμφάνιση γαστρεντερικών συμπτωμάτων. Η απουσία γαστρεντερικών συμπτωμάτων με παρουσία του ελικ. του πυλωρού υποδηλώνει αποικισμό και όχι μόλυνση. Οι πιο πρόσφατες κλινικές δοκιμές επιβεβαίωσαν ότι το ελικ. του πυλωρού είναι ο γενεσιουργός παράγοντας στις περισσότερες περιπτώσεις χρόνιας γαστρίτιδας και έλκους. Επιπλέον, τα διαθέσιμα στοιχεία καταδεικνύουν ότι το ελικ. του πυλωρού συνδέεται με τα καρκινώματα του στομάχου. Οι σύγχρονες διαδικασίες εντοπισμού του ελικ. του πυλωρού βασίζονται στην απομόνωση του μικροοργανισμού από ιστό που λαμβάνεται με ενδοσκοπική βιοψία. Ο ιστός εξετάζεται επίσης ιστολογικά, με χρώση gram και/η για παρουσία του ενζύμου ουρεάση, η οποία παράγεται όταν ο μικροοργανισμός υπάρχει σε αφθονία. Κάθε μία από τις μεθόδους αυτές, συμπεριλαμβανομένης της ιστολογικής εξέτασης και της χρώσης gram, απαιτεί υλικό βιοψίας που λαμβάνεται από διάφορα σημεία. Εκτός από την ανάγκη επεμβατικής γαστροσκόπησης, όλες αυτές οι μέθοδοι παρουσιάζουν κι άλλα μειονεκτήματα. 6 Η παρουσία του ελικ. του πυλωρού έχει επίσης ανιχνευθεί με δοκιμασία εισπνοής ουρίας (με χρήση ραδιενεργών ή μη ραδιενεργών ισοτόπων), καθώς και με ορολογικές μεθόδους Θετική ορολογική απόκριση στα αντιγόνα του ελικ. του πυλωρού διαπιστώθηκε σε άτομα με δωδεκαδακτυλίτιδα, χρόνια γαστρίτιδα και έλκος του στομάχου ή του δωδεκαδακτύλου. Επιπλέον, πολλά άτομα χωρίς κλινικά συμπτώματα είναι οροθετικά σε αντισώματα του ελικ. του πυλωρου με συχνότητα, η οποία αυξάνεται ανάλογα με την ηλικία. Συνεπώς, αν και η ορολογικές εξετάσεις για το ελικ. του πυλωρού είναι μια ευαίσθητη μέθοδος εντοπισμού του αποικισμού, δεν είναι δυνατή η διάκριση μεταξύ αποικισμού και ενεργής νόσου. Αρχή της διαδικασίας Η IMMULITE 2000 IgG Ελικ. του Πυλωρού είναι μια ξηρής φάσης, χημειοφωταυγής ανοσομετρική ανάλυση. Κύκλοι επώασης: 2 x 30 λεπτά. Συλλογή δειγμάτων Συνιστάται η χρήση της υπερφυγοκέντρου για να καθαριστούν τα λιπιδαιμικά δείγματα. Αιμολυμένα δείγματα μπορεί να υποδηλώνουν κακή μεταχείριση του δείγματος πριν την παραλαβή του από το εργαστήριο και τα αποτελέσματα πρέπει να ερμηνεύονται με προσοχή. Η φυγοκέντριση των δειγμάτων ορού πριν την πλήρη πήξη μπορεί να έχει ως αποτέλεσμα τη δημιουργία θρόμβων. Για να αποφευχθούν λανθασμένα αποτελέσματα εξαιτίας της παρουσίας θρόμβων, βεβαιωθείτε ότι πριν τη φυγοκέντριση, το αίμα έχει πήξει πλήρως. Κάποια δείγματα, ιδιαιτέρως αυτά των ασθενών που λαμβάνουν αντιπηκτική θεραπεία, ίσως χρειάζονται μεγαλύτερο χρόνο πήξης. Οι σωλήνες συγκέντρωσης αίματος διαφορετικών εταιρειών μπορεί να δώσουν αποκλίνουσες τιμές, ανάλογα με τα υλικά και τα συμπληρώματα, συμπεριλαμβανομένων των με τζελ ή φυσικών σωληναρίων, των ενεργοποιητών πήξεως και/ή των αντιπηκτικών. Η IMMULITE 2000 IgG Ελικ. Πυλωρού δεν έχει δοκιμαστεί με όλους τους τύπους σωληναρίων. Συμβουλευθείτε την παράγραφο για τους εναλλακτικούς τύπους δειγμάτων για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τα σωληνάρια που έχουν δοκιμαστεί. Απαιτούμενος όγκος: 10 µl ορού. Αυτόματος συντελεστής προαραίωσης: 20. Διανείμεντε τον απαιτούμενο όγκο αραιωτικού (L2HPGZ2) σε έναν κατάλληλο δοκιμαστικό σωλήνα που φέρει την ενδεδειγμένη ετικέτα με ραβδοκώδικα. Φύλαξη: 3 ημέρες στους 2 8 C ή 6 μήνες στους 20 C. 17 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Για in vitro διαγνωστική χρήση. Αντιδραστήρια: Διατήρηση στους 2 8 C. Απόρριψη σύμφωνα με την ισχύουσα νομοθεσία. Το σφαιρίδιο είναι επικαλυμμένο με απενεργοποιημένο αντιγόνο ελικ. του πυλωρού. Παρ όλα αυτά συνιστάται προσοχή εξ αιτίας της πιθανής 12 IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )

13 παρουσίας υπολειμματικού μικροοργανισμού κατά την εργασία ή την απόρριψη των παρεχόμενων υλικών. Ακολουθήστε τις γενικές προφυλάξεις και χειριστείτε όλα τα συστατικά σαν να ήταν φορείς μολυσματικών παραγόντων. Όλα τα υλικά της μεθόδου που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα έχουν ελεγχθεί και βρέθηκαν αρνητικά για σύφιλη, για αντισώματα στον HIV 1 και 2, για επιφανειακά αντιγόνα της ηπατίτιδας Β και για αντισώματα της ηπατίτιδας C. Αζίδιο του νατρίου σε συγκεντρώσεις μικρότερες από 0,1 g/dl έχει προστεθεί ως συντηρητικό. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε με άφθονο νερό για την αποφυγή σχηματισμού πιθανών εκρηξιογόνων μεταλλικών αζιδίων στις αποχετεύσεις από μόλυβδο και χαλκό. Χημειοφωταυγές υπόστρωμα: Αποφύγετε τη μόλυνση και την έκθεση στο άμεσο ηλιακό φως. (βλ. ένθετο). Νερό: Χρησιμοποιήστε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό. Υλικά που διατίθενται Τα συστατικά αποτελούν ολοκληρωμένο σετ. Οι ετικέτες στο εσωτερικό του κουτιού είναι απαραίτητες για την ανάλυση. Συσκευασία σφαιριδίων IgG ελικ. του πυλωρού (L2HPG12) Με ραβδοκώδικες. 200 σφαιρίδια επικαλυμμένα με απενεργοποιημένο, μερικώς κεκαθαρμένο αντιγόνο ελικ. του πυλωρού. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KHPG2: 1 συσκευασία. L2KHPG6: 3 συσκευασίες. H. Δοχείο αντιδραστηρίου IgG ελικ. πυλωρού (L2HPGA2) Με ραβδοκώδικες. 2 αντιδραστήρια: 11,5 ml ρυθμιστικό διάλυμα. 11,5 ml αλκαλικής φωσφατάσης (από βόειο έντερο) συζευγμένης με μονοκλωνικό αντίσωμα ποντικού κατά της ανθρώπινης IgG, σε ρυθμιστικό διάλυμα. Σταθερό στους 2 8 C έως την ημερομηνία λήξεως. L2KHPG2: 1 δοχείο. L2KHPG6: 3 δοχεία. Πριν τη χρήση, σχίστε την πάνω ετικέτα στο σημείο διάτρησης, χωρίς να καταστρέψετε το ραβδοκώδικα. Αφαιρέστε (ξεκολλήστε) προσεκτικά το κάλυμμα από την επάνω επιφάνεια του δοχείου, και πιέστε το κάλυμμα κάτω προς τους κεκλιμένους οδηγούς-ράγες. Ρυθμιστές IgG ελικ. πυλωρού (LHPGL, LHPGH) Δύο φιαλίδια (χαμηλό και υψηλό) 4 ml το καθένα ανθρώπινου ορού με IgG, ενεργού στo ελικ. του πυλωρού, σε ρυθμιστικό διάλυμα, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KHPG2: 1 σετ. L2KHPG6: 2 σετ. Πριν κάνετε κάποια ρύθμιση, τοποθετήστε τις κατάλληλες ετικέτες των διαλυμάτων (παρέχονται με το kit) σε δοκιμαστικούς σωλήνες, έτσι ώστε οι ραβδοκώδικες να μπορούν να διαβαστούν από σύστημα του αναλυτή. Έλεγχοι IgG ελικ. πυλωρού (LHPGC1, LHPGC2, LHPGC3) Τρία φιαλίδια, (αρνητικό, χαμηλό θετικό και θετικό), 2 ml το καθένα. LHPGC1 (Αρνητικός έλεγχος): Ένα φιαλίδιο που περιέχει ανθρώπινο ορό με IgG, αρνητικό στο ελικ. του πυλωρού, με συντηρητικό. LHPGC2, LHPGC3 (χαμηλός θετικός έλεγχος, θετικός έλεγχος): Δύο φιαλίδια που περιέχουν ανθρώπινο ορό με IgG, θετικό στο ελικ. του πυλωρού, με συντηρητικό. Σταθερά στους 2 8 C για 14 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KHPG2: 1 σετ. L2KHPG6: 2 σετ. Το λογισμικό IMMULITE 2000 εκτελεί αυτόματη αραίωση των δειγμάτων ελέγχου στο μηχάνημα και τα αποτελέσματα καταγράφονται στη βάση δεδομένων ποιοτικού ελέγχου. Εισάγετε τους ελέγχους ως controls. Για το τρέχον εύρος τιμών των ελέγχων, βλ. το αντίστοιχο ένθετο. Πριν την χρήση, κολλήστε τις κατάλληλες ετικέτες (διατίθενται με το κιτ) στα δοκιμαστικά σωληνάρια, έτσι ο ραβδοκώδικας να μπορεί να αναγνωστεί από τη συσκευή ανάγνωσης του μηχανήματος. Αραιωτικό δείγματος IgG ελικ. πυλωρού (L2HPGZ2) Για την επί του αναλυτή αραίωση των δειγμάτων των ασθενών και των δειγμάτων ελέγχου. 55 ml συμπυκνωμένου (έτοιμου για χρήση) ρυθμιστικού διαλύματος με συντηρητικό. IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, ) 13

14 Σταθερά στους 2 8 C για 30 μέρες μετά το άνοιγμα ή για 6 μήνες (διαχωρισμένα) στους 20 C. L2KHPG2: 1 φιαλίδιο. L2KHPG6: 1 φιαλίδιο. Ετικέτες με ραβδοκώδικες παρέχονται για χρήση με το αραιωτικό. Πριν την χρήση, τοποθετήστε την κατάλληλη ετικέτα σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα 16 x 100 mm, έτσι ώστε ο ραβδοκώδικας να μπορεί να διαβαστεί από τη συσκευή ανάγνωσης του μηχανήματος. L2HPGZ2: 5 ετικέτες. Συστατικά του Kit που προμηθεύονται ξεχωριστά L2SUBM: Χημειοφωταυγές υπόστρωμα L2PWSM: Πλυστικό του ανιχνευτή L2KPM: Kit καθαρισμού του ανιχνευτή LRXT: Σωλήνες αντίδρασης (μιας χρήσεως) L2ZT: 250 δοκιμαστικοί σωλήνες για αραίωση του δείγματος (16 x 100 mm) L2ZC: 250 καπάκια για σωλήνες αραίωσης δείγματος LHPGCM: Μονάδα ελέγχου IgG ελικ. πυλωρού τριών επιπέδων Απαιτούνται επίσης Αποσταγμένο ή απιονισμένο νερό, σωληνάρια. Διαδικασία της ανάλυσης Σημειώστε ότι για το βέλτιστο αποτέλεσμα, είναι σημαντικό να ακολουθηθούν όλες οι τυπικές διαδικασίες όπως ορίζονται στο εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE Βλέπε το εγχειρίδιο χρήστη συστημάτων IMMULITE 2000 για: προετοιμασία, στήσιμο, αραιώσεις, ρυθμίσεις, ανάλυση και διαδικασίες ποιοτικού έλέγχου. Συνιστώμενος χρόνος μεταξύ των ρυθμίσεων: 1 εβδομάδα. Δείγματα ποιοτικού ελέγχου: Χρησιμοποιήστε τα δείγματα ελέγχου που συνοδεύουν το Kit. Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Θετικό: Ένα αποτέλεσμα μεγαλύτερο ή ίσο με 1,1 U/mL θεωρείται "θετικό" και σημαίνει ότι στο δείγμα έχουν εντοπιστεί αντισώματα IgG έναντι του ελικ. του πυλωρού. Ενδιάμεσο: Ένα αποτέλεσμα μεγαλύτερο ή ίσο με 0,9 U/mL και μικρότερο από 1,1 U/mL θεωρείται "ενδιάμεσο". Τα ενδιάμεσα δείγματα πρέπει να επανεξετάζονται. Δείγματα, τα οποία εξακολουθούν να είναι "ενδιάμεσα", θα πρέπει να εξετάζονται από μία εναλλακτική μέθοδο ή αν είναι δυνατό ένα δεύτερο δείγμα να λαμβάνεται μέσα σε λογικό χρονικό πλαίσιο (π.χ. μία εβδομάδα). Αρνητικό: Ένα αποτέλεσμα μικρότερο από 0,9 U/mL θεωρείται "αρνητικό" και σημαίνει ότι στο δείγμα δεν έχουν εντοπιστεί αντισώματα IgG έναντι του ελικ. του πυλωρού. Τα αρνητικά αποτελέσματα αυτής της εξέτασης δεν αποκλείουν πρόσφατη πρωτογενή μόλυνση. Η παρουσία αντισωμάτων IgG έναντι του ελικ. του πυλωρού είναι ένδειξη παρελθούσης έκθεσης στο μικροοργανισμό. Ένα απλό δείγμα μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο για την εξακρίβωση της ανοσολογικής κατάστασης του ατόμου. Τα αποτελέσματα της εξέτασης IgG έναντι του ελικ. του πυλωρού που υπολογίζονται για ένα συγκεκριμένο δείγμα με αναλύσεις από διαφορετικούς κατασκευαστές μπορεί ποικίλουν εξαιτίας διαφορών στις μεθόδους της ανάλυσης και στην ειδικότητα των αντιδραστηρίων. Για τον λόγο αυτό, τα αποτελέσματα που εκδίδονται στους κλινικούς γιατρούς από το εργαστήριο θα πρέπει να αναφέρουν ότι: "Τα παρακάτω αποτελέσματα παράχθηκαν από το IMMULITE 2000 IgG Ελικ. Πυλωρού EIA. Aποτελέσματα εξετάσεων άλλων κατασκευαστών που χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους δεν θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν κατ εναλλαγή." Αναμενόμενες τιμές Η πλειοψηφία των ατόμων που εκτίθεται στο ελικ. του πυλωρού διαθετουν αντισώματα IgG. Επιπλέον, η παρουσία αντισωμάτων έναντι του ελικ. του πυλωρού εξαρτάται από την ηλικία, τη 14 IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )

15 φυλή, την περιοχή και την κλινική κατάσταση. 16 Η συχνότητα εμφάνισης μολύνσεων από ελικ. του πυλωρού ανά ηλικία είναι παρόμοια για άνδρες και γυναίκες. Η συχνότητα μόλυνσης από ελικ. του πυλωρού είναι στις Η.Π.Α. και τον Καναδά 30 έως 40%, στην Αυστραλία 20%, στην Ευρώπη 70% και στην Αφρική, τη Νότιο Αμερική και την Ασία 70 έως 90%. 18 Το ελικ. του πυλωρού θεωρείται παράγοντας κινδύνου για την εμφάνιση καρκίνου του στομάχου. Σχεδόν το 100% των ασθενών με έλκος του δωδεκαδακτύλου, το 85% των ασθενών με έλκος του στομάχου 19 και το % των ασθενών με καρκίνο του στομάχου έχει μολυνθεί με ελικ. του πυλωρού. 20 Ένα σχετικά μεγάλο ποσοστό των ασθενών με θετικά επίπεδα αντισωμάτων δεν εμφανίζει συμπτώματα, αν και έχει μολυνθεί από το ελικ. του πυλωρού. Συνεπώς, το επίπεδο αντισωμάτων δεν συνδέεται απαραίτητα με τη σοβαρότητα των κλινικών συμπτωμάτων. 16 Περιορισμοί Για τον υπολογισμό των οροθετικών από nonreactive σε reactive, θα πρέπει να λαμβάνονται δύο δείγματα ορού με διαφορά μεταξύ τους τριών έως τεσσάρων εβδομάδων, κατά την οξεία φάση και τη φάση ανάρρωσης από τη λοίμωξη. Το δείγμα της οξείας φάσης θα πρέπει να αποθηκεύεται και να εξετάζεται παράλληλα με το δείγμα του σταδίου ανάρρωσης. Άτομα με οξεία μόλυνση από ελικ. του πυλωρού μπορεί να μην παρουσιάζουν ανιχνεύσιμα αντισώματα IgG στο πρώιμο στάδιο της μόλυνσης. Τα αποτελέσματα των ασθενών με HIV, των ασθενών που υποβάλλονται σε ανοσοκατασταλτικές θεραπείες, ή των ασθενών με άλλες νόσους που συνεπάγονται ανοσοκαταστολή, θα πρέπει να αξιολογούνται με προσοχή. Τα χαρακτηριστικά απόδοσης αυτής της εξέτασης δεν έχουν καθοριστεί για χρήση σε δείγματα cord αίματος, νεογνών, νηπίων, ή ασθενών πριν τη μεταμόσχευση. Ετεροφυλικά αντισώματα στον ανθρώπινο ορό μπορεί να αντιδράσουν με τις ανοσοσφαιρίνες που περιέχονται στα συστατικά της μεθόδου προκαλώντας δυσκολίες σε μεθόδους in vitro ανοσοανίχνευσης. [βλ. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Δείγματα ασθενών που εκτίθενται συστηματικά σε ζώα ή προϊόντα ζωικού ορού μπορούν να παρουσιάσουν αυτού του τύπου την αλληλεπίδραση που προκαλεί δυνητικά ένα ανώμαλο αποτέλεσμα. Αυτά τα αντιδραστήρια έχουν μορφοποιηθεί έτσι, ώστε να ελαχιστοποιούν τον κίνδυνο της αλληλεπίδρασης. Παρόλ αυτά, μπορεί να εμφανιστούν πιθανές αλληλεπιδράσεις μεταξύ σπάνιων ορών και των συστατικών της μεθόδου. Για διαγνωστικούς σκοπούς, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται από αυτή τη μέθοδο θα πρέπει πάντα να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με τις κλινικές εξετάσεις, το ιατρικό ιστορικό του ασθενούς και άλλα ευρήματα. Απόδοση Βλέπε Πίνακες και Γραφήματα για αντιπροσωπευτικά δεδομένα της απόδοσης της μεθόδου. Τα αποτελέσματα εκφράζονται σε U/mL. (Εκτός αν κάτι σημειώνεται διαφορετικά, όλα πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα ορού, που συλλέχθηκαν σε σωλήνες χωρίς παρεμποδιστές πηκτών ή προσθετικών που προκαλούν θρόμβους.) Εύρος καμπύλης: 0,4 έως 8,0 U/mL. Η εξέταση είναι ιχνηλάσιμη σε ένα εσωτερικό πρότυπο που κατασκευάστηκε χρησιμοποιώντας κατάλληλα υλικά και μετρήσιμες διαδικασίες. Αναλυτική ευαισθησία: 0,4 U/mL. Ακρίβεια: Έξι δείγματα υποβλήθηκαν σε αναλύσεις εις τριπλούν για διάστημα 6 ημερών, δύο τρεξίματα την ημέρα, σε σύνολο 12 τρεξιμάτων και 36 επαναλήψεων. (Βλ. πίνακα Precision ) Ειδικότητα: Η ανάλυση παρουσιάζει υψηλή ειδικότητα στα αντισώματα IgG για ελικ. του πυλωρού, χωρίς παρατηρούμενη διασταυρούμενη αντίδραση με τους μικροργανισμούς Campylobacter jejuni, Campylobacter fetus και Campylobacter coli. Αυτό το συμπέρασμα προήλθε από μια μελέτη με χρήση της ανάλυσης IMMULITE IgG Ελικ. Πυλωρού. Χολερυθρίνη: Η παρουσία χολερυθρίνης σε συγκεντρώσεις έως 200 mg/l δεν IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, ) 15

16 επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Αιμόλυση: Η παρουσία αιμοσφαιρίνης σε συγκεντρώσεις έως 809 mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης, μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Λιπιδαιμία: Η παρουσία τριγλυκεριδίων σε συγκεντρώσεις έως mg/dl δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα της εξέτασης μέσα στα όρια ακρίβειας της ανάλυσης. Εναλλακτικός τύπος δείγματος: Για να εκτιμηθεί το αποτέλεσμα των εναλλακτικών τύπων δείγματος, συλλέχθηκε αίμα από 20 εθελοντές σε απλούς, ηπαρινισμένους, EDTA και Becton Dickinson SST δοκιμαστικούς (vacutainer) σωλήνες. Ίσες ποσότητες των αντίστοιχων δειγμάτων εμπλουτίστηκαν με διάφορες συγκεντρώσεις IgG ελικ. του πυλωρού, ώστε να ληφθούν τιμές καθ' όλο το εύρος καμπύλης της ανάλυσης και στη συνέχεια αναλύθηκαν σύμφωνα με τη διαδικασία IMMULITE 2000 IgG Ελικ. Πυλωρού. (Ηπαρίνη) = 1,06 (Ορός) 0,18 U/mL r = 0,997 (EDTA) = 1,00 (Ορός) 0,09 U/mL r = 0,993 (SST) = 1,00 (Απλοί σωλήνες) 0,04 U/mL r = 0,999 Μέσοι όροι: 2,5 U/mL (Ορός) 2,5 U/mL (Ηπαρίνη) 2,4 U/mL (EDTA) 2,4 U/mL (SST) Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι το ηπαρινισμένο και EDTA πλάσμα έδωσαν ουσιαστικά τις ίδιες τιμές με τον ορό στη διαδικασία IMMULITE 2000 IgG Ελικ. Πυλωρού. Σύγκριση της μεθόδου: Η μέθοδος συγκρίθηκε με την κλινική διάγνωση μέσω βιοψίας σε 155 τυχαία επιλεγμένα αναδρομικά δείγματα ασθενών με υποψία για μόλυνση από ελικοβακτηρίδιο του πυλωρού. Το δείγμα θεωρήθηκε κλινικά θετικό, εάν η καλλιέργεια ή τόσο η ιστολογική όσο και η εξέταση για καμπυλοβακτηρίδιο (CLO) ήταν θετικές. Το δείγμα θεωρήθηκε κλινικά αρνητικό, εάν καμία από τις βιοψίες δεν ήταν θετική. IMMULITE 2000 Κλινική διάγνωση Θετ. Ενδ. Αρν. Ευαισθ. Ειδικότ. Θετ Αρν ,0% 100,0% Συμφωνία: 98,7% Κεντρικό διάστημα εμπιστοσύνης 95% για σχετική ευαισθησία και ειδικότητα, αντίστοιχα: 89,6% 99,6% και 95,7% 100%. Η μέθοδος συγκρίθηκε επίσης με τη μέθοδο IMMULITE IgG Ελ. Πυλωρού (LKHEQ) σε 197 δείγματα. (Εύρος συγκέντρωσης: περίπου 0,4 to 7,0 U/mL. βλ. γράφ.) Η ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδωσε τα ακόλουθα αποτελέσματα: (IML 2000) = 0,96 (IML) + 0,05 U/mL r = 0,992 Μέσοι όροι: 2,19 U/mL (IMMULITE 2000) 2,23 U/mL (IMMULITE) Τεχνική Υποστήριξη Για τεχνική υποστήριξη αποταθείτε στον αντιπρόσωπο της χώρας σας. Το Σύστημα Ποιότητας της Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. είναι επικυρωμένο με ISO 13485:2003. Polski IMMULITE 2000 H. pylori IgG Przeznaczenie: Test diagnostyczny in vitro dla analizatorów systemów IMMULITE 2000 przeznaczony do jakościowego oznaczenia poziomu przeciwciał klasy IgG przeciw Helicobacter pylori w surowicy osób z objawami sugerującymi zakażenie H. pylori. Numer katalogowy: L2KHPG2 (200 testów), L2KHPG6 (600 testów) Kod testu: HPG Kolor: Ciemnozielony Wprowadzenie W roku 1983 Warren i Marshall opisali organizm w kształcie zakrzywionej laseczki jako czynnik związany z błoną śluzową żołądka w przypadkach 16 IMMULITE 2000 H. pylori IgG (PIEL2KHPG-4 {22}, )