RIDA qline Allergy. Κωδ. είδους: A6242 ASAN/BY/CA/DOHA/H/IAARI/IND/KO/KSA/ KZ/MA/ME/MENA/MOFID/TR/UZ/VE

RIDA qline Allergy Κωδ. είδους: A6142 Panel 1 (20 different allergens) Κωδ. είδους: A6242 Panel 2 (20 inhalative allergens) Κωδ. είδους: A6342 Panel 3 (20 food allergens) Κωδ. είδους: A6442 Panel 4 (20 pediatric allergens) Κωδ. είδους: A6142 ASAN/BAHAR/BY/HVEN/IND/IR/KO/KZ/MA/NP/ OUSA/PE/PY/RAF/TH/TW/UY/UZ/VE/VIET Κωδ. είδους: A6242 ASAN/BY/CA/DOHA/H/IAARI/IND/KO/KSA/ KZ/MA/ME/MENA/MOFID/TR/UZ/VE Κωδ. είδους: A6342 BY/CA/DOHA/H/IND/KO/KSA/KZ/MA/ ME/MENA/MOFID/RO/SK/TR/UZ/VE Κωδ. είδους: A6442 BY/KO/KZ/MA/UA1/UA2/UZ/VE (See relevant accompanying certificate for allergenic composition) R-Biopharm AG, An der neuen Bergstraße 17, D-64297 Darmstadt, Γερµανία, Τηλ.: (+49) 615181020 / Φαξ: (+49) 6151810220

1. Πεδίο εφαρµογής Για τη διάγνωση in vitro. Αυτή η δοκιµή αποτελεί ενζυµικό ανοσολογικό προσδιορισµό σε µεµβράνη νιτροκυτταρίνης (ανοσοστύπωση) για τον ποσοτικό προσδιορισµό αντισωµάτων IgE συγκεκριµένων αλλεργιογόνων σε ανθρώπινο ορό και πλάσµα (κιτρικό άλας). 2. Σύνοψη και επεξήγηση της δοκιµής Έργο του ανοσοποιητικού συστήµατος είναι η αντίσταση σε παθογενή βακτήρια, ιούς και άλλους µικροοργανισµούς. Η αµυντική αντίδραση χρησιµεύει στην προστασία του οργανισµού κατά την πρώτη επαφή µε τους παθογόνους παράγοντες αλλά και στην ανοσοποίησή του, σε περίπτωση επαναλαµβανόµενης επαφής. Πριν από τις αλλεργικές αντιδράσεις προηγείται, επίσης, η πρώτη επαφή, χωρίς συµπτώµατα, κατά την οποία έχουν δηµιουργηθεί ήδη συγκεκριµένα αντισώµατα της κλάσης Ε (αντισώµατα ανοσοσφαιρίνης Ε) Κατά την επαναλαµβανόµενη επαφή µε τα αλλεργιογόνα που προκαλούν την αντίδραση, αυτά τα αντισώµατα ανοσοσφαιρίνης Ε αντιδρούν στο αλλεργιογόνο και προκαλούν την έκκριση µεσολαβητών (συνήθως από µαστοκύτταρα), όπως ισταµίνη, λευκοτριένια, προσταγλανδίνη, κτλ., τα οποία, µε τη σειρά τους οδηγούν στη συµπτωµατολογία της αλλεργίας. Μέσω του εντοπισµού των συγκεκριµένων αντισωµάτων IgE στον ορό, εφόσον υπάρχουν αλλεργικές αντιδράσεις, είναι εφικτή η ταυτοποίηση των αλλεργιογόνων που τις προκαλούν. Ακόµη και υφιστάµενες ευαισθητοποιήσεις, χωρίς συµπτώµατα, µπορούν να ανιχνευτούν µε αυτόν τον τρόπο. 3. Αρχή δοκιµής Η παρακάτω δοκιµή βασίζεται στην αρχή της διαδικασίας ανοσοστύπωσης. Στην επιφάνεια της µεµβράνης νιτροκυτταρίνης υπάρχουν δεσµευµένα διάφορα αλλεργιογόνα, σε ξεχωριστές σειρές, ανάλογα µε τη σύνθεση του πάνελ. Τα συγκεκριµένα αντισώµατα IgE ανά αλλεργιογόνο, τα οποία υπάρχουν στα δείγµατα ασθενών, αντιδρούν µε τα αντίστοιχα αλλεργιογόνα. Στα συνδεδεµένα αντισώµατα, συνδέονται, σε δεύτερη φάση, αντιανθρώπινα αντισώµατα IgE συζευγµένα µε βιοτίνη. Κατά τη διάρκεια της τρίτης φάσης επώασης, η βιοτίνη δεσµεύεται σε ένα σύζευγµα στρεπταβιδίνης-υπεροξειδάσης. Η υπεροξειδάση µετατρέπει στην τελική φάση επώασης τον άχρωµο φορέα χρωστικής από τετραµεθυλβενζιδίνη (ΤΜΒ) σε ένα τελικό προϊόν µπλε-µωβ χρώµατος. Μεταξύ των µεµονωµένων φάσεων επώασης παρεµβάλλεται αντίστοιχα µια φάση πλύσης, προκειµένου να αποµακρυνθεί το µη δεσµευµένο υλικό. Η ένταση της µπλε χρώσης αντιστοιχεί στην 2 RIDA qline Allergy 2014-01-07

ποσότητα των αντισωµάτων της συγκεκριµένης αλλεργίας που υπάρχει στον ορό του ασθενούς. Η αξιολόγηση διεξάγεται µέσω ενός κοινού τρισδιάστατου έγχρωµου επίπεδου σαρωτή εγκεκριµένου από την R-Biopharm AG, σε συνδυασµό µε το λογισµικό RIDA qline Soft. Οι εντάσεις των χρωµάτων στις ταινίες αλλεργιογόνων αξιολογούνται ποσοτικά, µε τη βοήθεια µιας πρότυπης καµπύλης που υπάρχει επάνω στην ταινία, προκειµένου να διαπιστωθεί η αντίστοιχη σχέση τιµών IU/ml ή κλάσης RAST. Εναλλακτικά, αντί µε τον τρισδιάστατο σαρωτή, οι ταινίες µπορούν να αξιολογηθούν και µε την Οθόνη Χ της RIDA, σε συνδυασµό µε το λογισµικό RIDA qline Soft. 4. Πρότυπη καµπύλη και έλεγχος λειτουργικότητας: Η RIDA qline Allergy αποτελεί µια ποσοτική δοκιµή, λόγω της πρότυπης καµπύλης της, η οποία έχει βαθµονοµηθεί σύµφωνα µε το πρότυπο του ΠΟΥ. Πάνω σε κάθε ταινία υπάρχουν 5 πρότυπα. Τα 5 πρότυπα αντιστοιχούν στις κλάσεις δοκιµασίας RAST 1-5, όπου η κλάση δοκιµασίας RAST 6 προεκβάλλεται στο λογισµικό. Επειδή η πρότυπη καµπύλη είναι ορατή και πληρούνται τα κριτήρια εγκυρότητας, µόνο, εάν η δοκιµή έχει διεξαχθεί ορθά και όλα τα αντιδραστήρια βρίσκονται σε καλή κατάσταση, τα πρότυπα πληρούν και τις προϋποθέσεις του ελέγχου λειτουργικότητας. Τα κριτήρια εγκυρότητας της πρότυπης καµπύλης / του ελέγχου λειτουργικότητας πληρούνται, εφόσον είναι ορατά και έχουν αναγνωριστεί από το λογισµικό και τα 5 πρότυπα, το µικρότερο πρότυπο έχει πετύχει τουλάχιστον την ένταση 3, ενώ η ένταση του προτύπου 1 ανταποκρίνεται στη σχέση: πρότυπο 1 < πρότυπο 2 < πρότυπο 3 < πρότυπο 4 < πρότυπο 5. Ο έλεγχος θετικότητας σε ηµιποσοτικά συστήµατα, τα οποία δε διαθέτουν πρότυπη καµπύλη σε κάθε ταινία, αποτελείται συνήθως από βιοτινυλιωµένο BSA, ενώ ελέγχει µόνο την 3 η και την 4 η επώαση, όπου, σε περίπτωση εναλλαγής της 2 ης και της 3 ης επώασης ή παράλειψης της 2 ης επώασης οι ταινίες του ελέγχου θετικότητας θα είναι µεν ορατές, ωστόσο δεν είναι επιτεύξιµα τα θετικά αποτελέσµατα της δοκιµής, αφού η δοκιµή δεν έχει διεξαχθεί κανονικά. Συνεπώς, αυτός ο έλεγχος θετικότητας δεν πληροί τις προϋποθέσεις του ελέγχου θετικότητας, αφού ακόµη και σε περίπτωση µη ορθής διεξαγωγής του προσοµοιάζει τη σωστή διεξαγωγή, οδηγώντας σε εσφαλµένα αρνητικά αποτελέσµατα, τα οποία εκλαµβάνονται ως σωστά. Για τον λόγο αυτό ακόµη και ο έλεγχος θετικότητας δεν µπορεί να εκληφθεί ως έλεγχος λειτουργικότητας, αφού ακόµη και η ορθή διεξαγωγή της διαδικασίας ή η καλή κατάσταση των αντιδραστηρίων µπορεί να ελεγχθεί µόνο εν µέρει. 3 RIDA qline Allergy 2014-01-07

Επειδή σε ένα σύστηµα Lineblot δεν είναι εφικτός ο εσωτερικός έλεγχος θετικότητας, η RIDA qline Allergy παρέχει το µέγιστο δυνατό έλεγχο λειτουργικότητας, χάρη σε 5 πρότυπα / ελέγχους λειτουργικότητας. Ο πραγµατικός εσωτερικός έλεγχος λειτουργικότητας αποτελεί εξ ορισµού µια ξεχωριστή δοκιµή, µε µια ορισµένη περιεκτικότητα προσδιοριζόµενης ουσίας, η οποία µεταφέρεται µέσω σιφωνίου σε ξεχωριστό κύπελλο και αξιολογείται µε την ίδια πρότυπη καµπύλη, όπως τα δείγµατα ασθενών. Σε ένα σύστηµα Lineblot η ανάλυση διεξάγεται σε µόνο µια λεκάνη, στην οποία, εκτός από το δείγµα του ασθενούς δεν προστίθεται µε σιφώνιο κανένα άλλο δείγµα αναφοράς. 5. Περιεχόµενο συσκευασίας Πίνακας 1: Το περιεχόµενο της συσκευασίας επαρκεί για 10 προσδιορισµούς Membrane Wash 25x Antibody Conjugate Substrate 10 τεµάχια 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml Μεµβράνες δοκιµής (µεµβράνες νιτροκυτταρίνης) RIDA qline Allergy, επιστρωµένες µε αλλεργιογόνο υλικό, σε 20 πεδία δοκιµών και 5 πρότυπα, σε κοιλότητες αντίδρασης Ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης, 25ακις συµπυκνωµένο, Tris / NaCl Αντισώµατα ανίχνευσης, αντιανθρώπινα αντισώµατα IgE (αίγα) συζευγµένα µε βιοτίνη, έτοιµα προς χρήση Σύζευξη στρεπταβιδίνης, στρεπταβιδίνη συζευγµένη µε υπεροξειδάση, έτοιµη προς χρήση Φορέας χρωστικής, ΤΜΒ (τετραµεθυλβενζιδίνη), έτοιµος προς χρήση 6. Τα αντιδραστήρια και η αποθήκευσή τους Οι µεµβράνες δοκιµής θα πρέπει να αποθηκεύονται σε δροσερές, ξηρές και σκοτεινές συνθήκες, µέσα στην πλαστική συσκευασία τους. Το πακέτο δοκιµής θα πρέπει να αποθηκεύεται σε θερµοκρασία 2-8 C. Το διαλυµένο ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης διατηρείται έως και 4 εβδοµάδες, εφόσον αποθηκευτεί σε θερµοκρασία 2-8 C. Να αποφεύγεται η µικροβιακή µόλυνση. Με την επίτευξη της ηµεροµηνίας λήξης παύει και η εγγύηση ποιότητας. Να αποφεύγεται οπωσδήποτε η µόλυνση του διαλύµατος του φορέα χρωστικής µε το προϊόν σύζευξης, εφόσον αυτό θα έχει ως αποτέλεσµα τον αποχρωµατισµό του φορέα χρωστικής. Επιπλέον, να αποφεύγεται η έκθεση του φορέα χρωστικής σε άµεση ηλιακή ακτινοβολία, έτσι ώστε να αποτραπεί η διάσπαση ή ο αποχρωµατισµός 4 RIDA qline Allergy 2014-01-07

του λόγω αυτοοξείδωσης. Σε περίπτωση αποχρωµατισµού ο φορέας χρωστικής αχρηστεύεται και δεν µπορεί να χρησιµοποιηθεί. 7. Επιπροσθέτως απαιτούµενα αντιδραστήρια - απαιτούµενα εξαρτήµατα 7.1. Αντιδραστήρια - Απεσταγµένο ή απιονισµένο νερό 7.2. Εξαρτήµατα - Αναµείκτης περιδίνησης - οκιµαστικός σωλήνας (200 ml) - Μικροµετρική σύριγγα, 1000 µl - Βάση µεµβρανών δοκιµής («χτένα») για την τοποθέτηση 10 µεµβρανών δοκιµής - Cover Box για σκοτεινή επώαση (το σύστηµα µε τη βάση µεµβρανών δοκιµής Cover Box (RIDA qline Incubation Box, κωδ. είδους: ZG2701) διατίθεται για αγορά από την R-Biopharm AG) - Ανακινητήρας ελλειψοειδούς κίνησης (300 στροφές/λεπτό, ελλειψοειδής ακτίνα 3 mm, κωδ. είδους: ZG2601) - Τρισδιάστατος έγχρωµος επίπεδος σαρωτής εγκεκριµένος από την R- Biopharm AG (κωδ. είδους: ZG1106) και ηλεκτρονικός υπολογιστής µε θύρα USB - RIDA qline Soft Software (κωδ. είδους: Z9995) - Συσκευή µέτρησης RIDA X-Screen (προαιρετικά, κωδ. είδους: ZG1101) και ηλεκτρονικός υπολογιστής µε θύρα USB 8. Μέτρα προστασίας Αποκλειστικά για τη διάγνωση in vitro. Αυτή η δοκιµή µπορεί να διεξαχθεί µόνο από καταρτισµένο προσωπικό εργαστηρίου. Θα πρέπει να τηρούνται οι οδηγίες που αφορούν στην εργασία σε ιατρικά εργαστήρια. Οι οδηγίες χρήσης για τη διεξαγωγή των δοκιµών θα πρέπει να τηρούνται στο ακέραιο. Μη χρησιµοποιείτε το στόµα για τη λήψη δειγµάτων και αντιδραστηρίων µε µικροµετρική σύριγγα. Αποφεύγετε την επαφή µε τραυµατισµένη επιδερµίδα ή 5 RIDA qline Allergy 2014-01-07

βλεννογόνο. Κατά τη διάρκεια της διαχείρισης των δειγµάτων, φοράτε γάντια µιας χρήσης και πλένετε τα χέρια σας µετά την ολοκλήρωση της δοκιµής. Στις περιοχές, όπου διεξάγονται εργασίες µε δείγµατα ή αντιδραστήρια δοκιµών, απαγορεύεται το κάπνισµα, το φαγητό ή το ποτό. Τα αντισώµατα και το ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης περιέχουν το συντηρητικό νατραζίδιο. Αποφεύγετε την επαφή µε την επιδερµίδα ή τη βλεννογόνο. Κατά την επαφή µε σωλήνες µόλυβδου ή χαλκού υφίσταται το ενδεχόµενο σχηµατισµού εκρηκτικών µεταλλικών αζωτιδίων. Ο φορέας χρωστικής περιέχει υπεροξείδιο του υδρογόνου, όπως και τα συντηρητικά Χλώριο-µεθυλισοθειαζολόνη και µεθυλισοθειαζολόνη σε υποτοξικές συγκεντρώσεις. Σε περίπτωση φθοράς της εξωτερικής συσκευασίας των µεµονωµένων εξαρτηµάτων απαιτείται ο έλεγχος της ακεραιότητάς τους, πριν από τη χρήση. Τα εξαρτήµατα του πακέτου δεν επιτρέπεται να χρησιµοποιηθούν, σε περίπτωση που οι µεµονωµένες συσκευασίες τους έχουν υποστεί φθορά ή όταν το περιεχόµενό τους δεν είναι στεγανό. Όλα τα µέρη του πακέτου θα πρέπει να απορρίπτονται µετά τη χρήση, σύµφωνα µε τις ισχύουσες διατάξεις και µε ίδια ευθύνη. Όλα τα αντιδραστήρια και τα υλικά, τα οποία έρχονται σε επαφή µε δυνητικά µολυσµατικά δείγµατα θα πρέπει να υποστούν επεξεργασία µε κατάλληλα µέσα απολύµανσης ή να τοποθετηθούν σε αυτόκλειστο στους 121 C για τουλάχιστον µια ώρα. 9. Συλλογή και αποθήκευση των δειγµάτων Η δοκιµή έχει δηµιουργηθεί για την εξέταση ανθρώπινου ορού και πλάσµατος (κιτρικό άλας). Μετά τη λήψη αίµατος ο ορός θα πρέπει να διαχωριστεί άµεσα από το αιµατόπηγµα, έτσι ώστε να αποφευχθεί η αιµόλυση. Τα δείγµατα θα πρέπει να διατηρούνται σε ψύξη ή κατάψυξη, µέχρι τη χρήση τους. Η επανειληµµένη κατάψυξη και απόψυξη του ορού θα πρέπει να αποφευχθεί σε κάθε περίπτωση, όπως και η µικροβιακή µόλυνση. Η χρήση αδρανοποιηµένων µε θέρµανση, λιπιδαιµικών, αιµολυτικών, ικτερικών ή θολών ορών ενδέχεται να οδηγήσει στη λήψη λανθασµένων αποτελεσµάτων. Πίνακας 2: Αποθήκευση δειγµάτων 2-8 C 1 εβδοµάδα 20 C > 1 εβδοµάδα 6 RIDA qline Allergy 2014-01-07

10. ιεξαγωγή δοκιµής 10.1. Γενικά Η αντικατάσταση ή ο συνδυασµός εξαρτηµάτων από πακέτα διαφορετικών παρτίδων είναι αποδεκτός. Τα αναπαραγόµενα αποτελέσµατα εξαρτώνται σε µεγάλο βαθµό από την τήρηση των χρόνων και των θερµοκρασιών επώασης, όπως και από την ορθή πλύση των µεµβρανών δοκιµής. Όλα τα εξαρτήµατα δοκιµής θα πρέπει να αποκτήσουν θερµοκρασία περιβάλλοντος (20-25 C), προτού διεξαχθεί η δοκιµή. 10.2. Παρασκευή του ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης Μεταφέρετε 5 ml συµπυκνώµατος ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης Wash 25x σε δοκιµαστικό σωλήνα και γεµίστε µε απεσταγµένο νερό, µέχρι τα 125 ml (= ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης). Σε περίπτωση ύπαρξης κρυστάλλων στο συµπύκνωµα, µπορείτε να τους διαλύσετε µε θέρµανση (υδατόλουτρο στους 37 C). ιατηρήστε το ρυθµιστικό διάλυµα πλύσης σε δοχείο, στο οποίο είναι εφικτή η πρόσβαση µε σιφώνιο. 10.3. Πρώτη επώαση Αφαιρέστε τις µεµβράνες δοκιµής Membrane από τη συσκευασία. Ο αριθµός των µεµβρανών αντιστοιχεί στον αριθµό των προς διεξαγωγή δοκιµών. Για τη σταθεροποίηση των ταινιών κατά την ανακίνηση, οι κοιλότητες τοποθετούνται στη βάση µεµβρανών δοκιµής («χτένα»). Οι µεµβράνες διαβρέχονται αντίστοιχα µε 500 µl ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης και ανακινούνται για 1 λεπτό στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης (300 στροφές/λεπτό, ελλειψοειδής ακτίνα 3 mm ), µέχρι να σταµατήσει πλήρως η ανάδυση φυσαλίδων. Στη συνέχεια, οι µεµβράνες δοκιµής Membrane εκκενώνονται, τινάζοντάς τες πάνω σε απορροφητικό υπόστρωµα. Στη συνέχεια, οι µεµβράνες δοκιµής Membrane γεµίζουν µε 400 µl ορού του ασθενούς και επωάζονται για 30 λεπτά στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης, σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (20-25 C). Το υγρό θα πρέπει να καλύπτει πλήρως τη µεµβράνη, κατά τη διάρκεια της διαδικασίας. Στην αντίθετη περίπτωση, µπορείτε προσεκτικά να συµπληρώσετε υγρό µε το σιφώνιο, χωρίς να αγγιχτεί η µεµβράνη. 10.4. Πλύση Μετά την επώαση του ορού, οι κοιλότητες εκκενώνονται. Οι µεµβράνες δοκιµής Membrane εκπλένονται, στη συνέχεια, σε τρεις ξεχωριστές φάσεις, µε 400 µl ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης για 1 λεπτό ανά πλύση στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης, υπό τις ίδιες συνθήκες, 7 RIDA qline Allergy 2014-01-07

όπως κατά την επώαση. Στη συνέχεια, εκκενώστε τις µεµβράνες δοκιµής, τινάζοντάς τες πάνω σε απορροφητικό υπόστρωµα. 10.5. εύτερη επώαση Προστίθενται µε σιφώνιο 400 µl αντισώµατα Antibody σε κάθε µεµβράνη δοκιµής Membrane. Το υγρό θα πρέπει, επίσης, να καλύπτει πλήρως τη µεµβράνη, κατά τη διάρκεια της διαδικασίας. Οι µεµβράνες δοκιµής Membrane επωάζονται για 45 λεπτά στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης, σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (20-25 C). 10.6. Πλύση Πλύσιµο, σύµφωνα µε τις οδηγίες του σηµείου 9.4. 10.7. Τρίτη επώαση Προστίθενται µε σιφώνιο 400 µl φορέα χρωστικής Substrate σε κάθε µεµβράνη δοκιµής Membrane. Το υγρό θα πρέπει κι εδώ να καλύπτει πλήρως τη µεµβράνη, κατά τη διάρκεια της διαδικασίας. Οι µεµβράνες δοκιµής Membrane επωάζονται για 20 λεπτά στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης, σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (20-25 C). 10.8. Πλύση Αυτή η φάση πλύσης είναι καίριας σηµασίας, όσον αφορά στην ποιότητα του αποτελέσµατος Πάνω από νιπτήρα ή άλλο κατάλληλο δοχείο συλλογής η κάθε ταινία εκπλένεται τρεις φορές, µε 1000 µl ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης τη φορά. Κρατήστε τις ταινίες λοξά και οδηγήστε το υγρό από το επάνω προς το κάτω τµήµα της µεµβράνης µε το σιφώνιο, χωρίς να αγγίξετε τη µεµβράνη. Στη συνέχεια, οι µεµβράνες δοκιµής Membrane εκπλένονται σε δυο ξεχωριστές φάσεις, µε 400 µl ρυθµιστικού διαλύµατος πλύσης για 1 λεπτό ανά πλύση στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης, υπό τις ίδιες συνθήκες, όπως κατά την επώαση. Στη συνέχεια, εκκενώστε τις µεµβράνες δοκιµής, τινάζοντάς τες πάνω σε απορροφητικό υπόστρωµα. 10.9. Τέταρτη επώαση Προστίθενται 400 µl φορέα χρωστικής Substrate σε κάθε µεµβράνη δοκιµής Membrane, έτσι ώστε να καλυφθεί πλήρως η µεµβράνη. Οι µεµβράνες δοκιµής Membrane επωάζονται για 15 λεπτά στο σκοτάδι στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης, σε θερµοκρασία περιβάλλοντος (20-25 C). 10.10. Πλύση Μετά την επώαση του φορέα χρωστικής, οι κοιλότητες εκκενώνονται. Οι µεµβράνες δοκιµής Membrane εκπλένονται, στη συνέχεια, µια φορά, µε 400 µl ρυθµιστικού διαλύµατος 8 RIDA qline Allergy 2014-01-07

πλύσης και µετά µε 400 µl απεσταγµένο νερό, για 1 λεπτό αντίστοιχα, στον ανακινητήρα ελλειψοειδούς κίνησης (300 στροφές/λεπτό, ελλειψοειδής ακτίνα 3 mm), υπό τις ίδιες συνθήκες, όπως κατά την επώαση. Στη συνέχεια, εκκενώστε τις µεµβράνες δοκιµής, τινάζοντάς τες πάνω σε απορροφητικό υπόστρωµα. Μετά το στέγνωµα διάρκειας τουλάχιστον 30 λεπτών σε αέρα ή µέχρι να µην υπάρχει καθόλου επίστρωση υγρού επάνω στη µεµβράνη, η δοκιµή είναι έτοιµη για αξιολόγηση. Συνιστούµε το στέγνωµα των µεµβρανών µε τη βοήθεια φυσητήρα ψυχρού αέρα. 11. Ποιοτικός έλεγχος - Ενδείξεις λήξης αντιδραστηρίου Η δοκιµή έχει διεξαχθεί κανονικά, εφόσον το φόντο έχει αποχρωµατιστεί πλήρως και η πρότυπη καµπύλη είναι ορατή από πέντε διαφοροποιηµένες ζώνες (βλ. απεικόνιση). Πρότυπη καµπύλη Ζώνες αλλεργιογόνων Η θόλωση του αντιδραστηρίου ή ο µπλε αποχρωµατισµός του φορέα χρωστικής, πριν από την επαφή τους µε τη µεµβράνη δοκιµής Membrane ενδέχεται να αποτελέσουν ένδειξη λήξης του αντιδραστηρίου. Σε περίπτωση που η πρότυπη καµπύλη δεν είναι ορατά διαφοροποιηµένη, προτού επαναληφθεί η δοκιµή, ελέγξτε τα παρακάτω: - Ηµεροµηνία λήξης των χρησιµοποιούµενων αντιδραστηρίων - Λειτουργικότητα των χρησιµοποιούµενων συσκευών (πχ. βαθµονόµηση) - Σωστή διεξαγωγή δοκιµής - Οπτικός έλεγχος των εξαρτηµάτων του πακέτου για µόλυνση ή έλλειψη στεγανότητας. Το διάλυµα του φορέα χρωστικής µε µπλε αποχρωµατισµό δεν επιτρέπεται να χρησιµοποιηθεί. Εφόσον µετά την επανάληψη της δοκιµής δεν εκπληρωθούν και πάλι οι προϋποθέσεις, απευθυνθείτε στον κατασκευαστή ή τον τοπικό αντιπρόσωπο της R- Biopharm. 12. Αξιολόγηση και ερµηνεία 9 RIDA qline Allergy 2014-01-07

12.1. ιαµόρφωση µεµβρανών RIDA qline Allergy των πάνελ 1, 2, 3, και 4 Πάνελ 1 Πάνελ 2 Πάνελ 3 Πάνελ 4 20 Αλλεργιογόνα 20 Αλλεργιογόνα 20 Αλλεργιογόνα 20 Αλλεργιογόνα Πρότυπο 5 Πρότυπο 5 Πρότυπο 5 Πρότυπο 5 Πρότυπο 4 Πρότυπο 4 Πρότυπο 4 Πρότυπο 4 Πρότυπο 3 Πρότυπο 3 Πρότυπο 3 Πρότυπο 3 Πρότυπο 2 Πρότυπο 2 Πρότυπο 2 Πρότυπο 2 Πρότυπο 1 Πρότυπο 1 Πρότυπο 1 Πρότυπο 1 Derm. pteronyssinus Derm. pteronyssinus Φουντούκι Derm. pteronyssinus Derm. farinae Derm. farinae Αραχίδα Derm. farinae Σκλήθρα Σκλήθρα Καρύδι Σηµύδα Σηµύδα Σηµύδα Αµύγδαλο Μείγµα χόρτων Φουντουκιά Φουντουκιά Γάλα Γάτα Μείγµα χόρτων ρυς Ασπράδι Σκύλος Σίκαλη (γύρη) Μείγµα χόρτων Κρόκος αβγού Alternaria alternata Αψίνθιο το κοινό Σίκαλη (γύρη) Καζεΐνη Γάλα Αρνόγλωσσο το Αψίνθιο το κοινό Πατάτα αα-λακταλβουµίνη Γάτα Αρνόγλωσσο το Σέλινο β-γαλακτοσφαιρίνη Άλογο Γάτα Καρότο Καζεΐνη Σκύλος Άλογο Τοµάτα Ασπράδι Alternaria alternata Σκύλος Μπακαλιάρος Κρόκος αβγού Ασπράδι Ινδικό χοιρίδιο Κάβουρας Αλβουµίνη βόειου ορού Γάλα Χάµστερ Πορτοκάλι Φασόλι σόγιας Αραχίδα Κουνέλι Μήλο Καρότο Φουντούκι Penicillium notatum Σιτάλευρο Πατάτα Καρότο Cladospor. herbarum Αλεύρι σίκαλης Σιτάλευρο Σιτάλευρο Aspergillus fumigatus Σουσάµι Φουντούκι Φασόλι σόγιας Alternaria alternata Φασόλι σόγιας Αραχίδα Οι διαµορφώσεις µεµβρανών για όλα τα άλλα πάνελ ανά χώρα, για την οποία ισχύει η παρούσα συσκευασία, διατίθενται από την R-Biopharm AG ως συµπλήρωµα κάθε πάνελ. 12.2. Αξιολόγηση µέσω τρισδιάστατου έγχρωµου επίπεδου σαρωτή ή RIDA X- Screen και λογισµικό RIDA qline Soft Προκειµένου να γίνει αυτό, η µεµβράνη δοκιµής (ή οι µεµβράνες δοκιµής) τοποθετείται (τοποθετούνται) στη βάση και µε χρήση µιας εκ των προαναφερθέντων συσκευών και του αντίστοιχου λογισµικού διεξάγεται η µέτρηση. Τα IU/ml υπολογίζονται αυτοµάτως από τις τιµές µέτρησης και αντιστοιχίζονται στις κλάσεις 10 RIDA qline Allergy 2014-01-07

RAST 0-6. Η αξιολόγηση βασίζεται στην πρότυπη καµπύλη που βρίσκεται πάνω σε κάθε ταινία, όπου η ένταση της γραµµής κάθε αλλεργιογόνου συγκρίνεται µε αυτήν στην πρότυπη καµπύλη. Για την αξιολόγηση µε τις διάφορες συσκευές µέτρησης, ανατρέξτε στο αντίστοιχο εγχειρίδιο χρήστη. Θα πρέπει να ληφθεί οπωσδήποτε υπόψη, πως τα προς µέτρηση πάνελ αλλεργιογόνων θα πρέπει να αντιστοιχιστούν µε τις αντίστοιχες δοκιµές. Πίνακας 3: Σχέση µεταξύ της υπολογισµένης κλάσης και της περιεκτικότητας IgE του ορού του ασθενούς, ανάλογα µε το αλλεργιογόνο IU / ml Κλάση Περιεκτικότητα IgE ανά αλλεργιογόνο 0,00 0,34 0 (0,0 0,9) µη τεκµηριώσιµη ή σχεδόν ανύπαρκτη 0,35 0,69 1 (1,0 1,9) χαµηλή 0,70 3,49 2 (2,0 2,9) αυξηµένη 3,50 17,49 3 (3,0 3,9) ευκρινώς αυξηµένη 17,50 49,99 4 (4,0 4,9) υψηλή 50,00 99,99 5 (5,0 5,9) εξαιρετικά υψηλή 100,00 6 υπερβολικά υψηλή 12.3. Τεκµηρίωση Τα δεδοµένα µέτρησης (φωτογραφία µεµβράνης δοκιµής και αξιολόγηση) αποθηκεύονται στο σκληρό δίσκο του Η/Υ σε προεπιλεγµένο κατάλογο. Αυτή η βάση δεδοµένων αποσκοπεί στη διαχείριση των δεδοµένων των ασθενών. Για κάθε ορό που έχει ελεγχθεί µπορεί να πραγµατοποιηθεί η εκτύπωση του φύλλου δεδοµένων σε κοινό εκτυπωτή, ο οποίος θα συνδεθεί στον Η/Υ. 11 RIDA qline Allergy 2014-01-07

13. Όρια της µεθόδου Οι συγκεντρώσεις IgE που προκύπτουν από το παρόν σύστηµα δοκιµής επιτρέπουν τον προσδιορισµό του βαθµού ευαισθησίας του ασθενούς, όσον αφορά τα ελεγµένα µεµονωµένα αλλεργιογόνα ή µείγµατα αλλεργιογόνων. Η σχέση µεταξύ του ύψους της προκύπτουσας συγκέντρωσης IgE και της εµφάνισης ή της σοβαρότητας των κλινικών συµπτωµάτων δεν µπορεί να διαπιστωθεί. Τα αποτελέσµατα που προκύπτουν θα πρέπει να αξιολογούνται πάντοτε, έχοντας διαθέσιµη την πλήρη κλινική εικόνα. Λόγω έλλειψης εθνικών ή διεθνών προτύπων και εξαιτίας της πιθανής διαφοροποίησης των δερµατικών δοκιµών νυγµού, όπως και των εκχυλισµάτων αλλεργιογόνων, τα οποία χρησιµοποιούνται στην in vitro δοκιµή, ενέχει το ενδεχόµενο αντιφατικών αποτελεσµάτων µεταξύ δοκιµών in vivo και in vitro. Ακόµη και µετά την εµφάνιση αναφυλακτικών αντιδράσεων υπάρχει το ενδεχόµενο µέτρησης λανθασµένα αρνητικών ή υπερβολικά χαµηλών τίτλων IgE. Σε περίπτωση αντιφατικών αποτελεσµάτων µεταξύ της διάγνωσης in vivo και in vitro, η δοκιµή θα πρέπει να επαναληφθεί µετά από 3-4 εβδοµάδες. Επιπλέον, οι υφιστάµενες αντιφάσεις θα πρέπει να εξεταστούν, µέσω επακόλουθων δοκιµών in-vivo, όπως και δοκιµών προκαλούµενης αλλεργίας από αλλεργιολόγο. Οι δοκιµές προκαλούµενης αλλεργίας ενδέχεται να προκαλέσουν αναφυλακτικό σοκ. Τα θετικά αποτελέσµατα δοκιµών ενδέχεται να αποδειχθούν εσφαλµένα, στην περίπτωση διασταυρούµενης αντιδραστικότητας του ελεγχόµενου αλλεργιογόνου µε άλλα αλλεργιογόνα. 12 RIDA qline Allergy 2014-01-07

14. Χαρακτηριστικά 14.1. Ακρίβεια Intra-Assay Η ακρίβεια Intra-Assay προέκυψε µε τη µέτρηση του ορού QS-P µε 20 ταινίες δοκιµής που προήλθαν από µια παρτίδα. Για κάθε αλλεργιογόνο υπολογίστηκαν ξεχωριστά ο µέσος όρος τιµών (ΜΟ) και ο συντελεστής διακύµανσης (ΣΚ), τα οποία και συνοψίζονται στον πίνακα 4. Στην ακρίβεια Intra-Assay όλων των αλλεργιογόνων µε θετικό πρόσηµο γίνονται αποδεκτές οι τιµές 10 %. Εφόσον αυτό το χαρακτηριστικό κριτήριο δεν είναι εφαρµόσιµο για την περιγραφή της ακρίβειας αλλεργιογόνων µε αρνητικό πρόσηµο, το αποτέλεσµα γίνεται αποδεκτό, εφόσον συµπίπτει η µέτρηση και για τις 20 µετρήσεις. Πίνακας 4: Ακρίβεια Intra-Assay Κωδικός αλλεργιογόνου Αριθµός µετρήσεων ΜΟ (RAST) Σ (%) Αξιολόγηση D1 20 5.0 1.1 Θετική D2 20 4.9 1.6 Θετική T2 20 2.6 2.7 Θετική T3 20 3.0 3.5 Θετική T4 20 1.8 3.9 Θετική GX 20 5.8 2.4 Θετική G12 20 4.6 4.4 Θετική W6 20 2.2 3.6 Θετική W9 20 2.4 3.1 Θετική E1 20 5.2 2.6 Θετική E3 20 0.4 19.9 Αρνητική E5 20 5.0 2.1 Θετική M6 20 2.5 2.3 Θετική F1 20 2.9 4.1 Θετική F2 20 2.9 2.9 Θετική F13 20 5.5 2.6 Θετική F17 20 4.6 2.9 Θετική F31 20 2.0 2.5 Θετική F4 20 3.3 3.7 Θετική F14 20 2.8 5.1 Θετική 13 RIDA qline Allergy 2014-01-07

14.2. Ακρίβεια Inter-Assay Για τον υπολογισµό της ακρίβειας Inter-Assay ελέγχθηκε ο ορός QS-P για 10 διαδοχικές ηµέρες, κάθε φορά µε διπλή διαπίστωση. Η δοκιµή διεξήχθη από τέσσερα διαφορετικά άτοµα. Για κάθε αλλεργιογόνο υπολογίστηκαν ξεχωριστά ο µέσος όρος τιµών (ΜΟ) και ο συντελεστής διακύµανσης (ΣΚ), τα οποία και συνοψίζονται στον πίνακα 5. Στην ακρίβεια Inter-Assay όλων των αλλεργιογόνων µε θετικό πρόσηµο γίνονται αποδεκτές οι τιµές 15 %. Εφόσον αυτό το χαρακτηριστικό κριτήριο δεν είναι εφαρµόσιµο για την περιγραφή της ακρίβειας αλλεργιογόνων µε αρνητικό πρόσηµο, το αποτέλεσµα γίνεται αποδεκτό, εφόσον συµπίπτει η µέτρηση και για τις 20 µετρήσεις. Πίνακας 5: Ακρίβεια Inter-Assay Κωδικός αλλεργιογ όνου Αριθµός ηµερών Αριθµός Αριθµός µετρήσε µετρήσεων ων/ηµέρα ΜΟ (RAST) Σ (%) Αξιολόγηση D1 10 2 20 5.3 4.6 Θετική D2 10 2 20 5.2 4.3 Θετική T2 10 2 20 2.9 7.8 Θετική T3 10 2 20 3.2 8.0 Θετική T4 10 2 20 2.0 9.1 Θετική GX 10 2 20 5.9 1.6 Θετική G12 10 2 20 5.0 7.6 Θετική W6 10 2 20 2.3 4.6 Θετική W9 10 2 20 2.5 6.1 Θετική E1 10 2 20 5.5 5.8 Θετική E3 10 2 20 0.4 19.2 Αρνητική E5 10 2 20 5.3 5.8 Θετική M6 10 2 20 2.6 10.7 Θετική F1 10 2 20 3.1 7.5 Θετική F2 10 2 20 3.0 7.3 Θετική F13 10 2 20 5.8 6.3 Θετική F17 10 2 20 4.8 8.2 Θετική F31 10 2 20 2.0 7.7 Θετική F4 10 2 20 3.4 8.7 Θετική F14 10 2 20 2.8 7.2 Θετική 14 RIDA qline Allergy 2014-01-07

14.3. Σύγκριση µεθόδων µε ποσοτικό σύστηµα αναφοράς IgE in vitro Για τον υπολογισµό της ταύτισης µεταξύ του RIDA qline Allergy και ενός ποσοτικού συστήµατος αναφοράς IgE, µετρήθηκαν σε έρευνα συνολικά 100 οροί ως προς 11 IgEs ανά αλλεργιογόνο έκαστος (συνολικά 1100 προσδιορισµοί) και µε τα δυο συστήµατα δοκιµής. Η σύγκριση των κλάσεων RAST που προκύπτουν από τις µετρήσεις των δύο συστηµάτων δοκιµών αναφέρονται στη συνέχεια (βλ. Πίνακα 6). Πίνακας 6: Σύγκριση µε το σύστηµα αναφοράς IgE Δ qline / Σύστηµα αναφοράς IgE Μέση τιµή (RAST) 0,59 Ταύτιση ( 2 RAST) 1045 Αντίφαση ( > 2 RAST) 55 Σύνολο δειγµάτων 1100 % ταύτιση 95,00% % αντίφαση 5,00% 15 RIDA qline Allergy 2014-01-07

15. Βιβλιογραφία Kjellman, N.I.M.: Prediction and prevention of atopic allergy, Allergy 37, 463-473 (1982) Debelic, M.: Die klinische Bedeutung der Bestimmung von Serum-Gesamt IgE und spezifischem IgE für die Diagnostik und Verlaufsbeobachtung allergischer Krankheitsbilder [The clinical importance of determining total serum IgE and specific IgE in the diagnosis and monitoring of allergenic clinical pictures]. Therapiewoche 29, 2280-2295 (1979) Urbanek, R.: Papier-Radio-Immuno-Sorbent-Test (PRIST) - IgE-Spiegel bei nicht allergischen und allergischen Kindern, [Paper disc Radio Immuno Sorbent Test (PRIST) - IgE levels for non-allergic and allergic children] Monatsschrift Kinderheilkunde 125, 583-585 (1977) Kjellman, N.I.M., et al.: Serum IgE levels in healthy children quantified by a Sandwich technique (PRIST), Clinical Allergy 6, 51-59 (1976) Turner, K.J.: IgE globulins and immunity. Medical Journal of Australia 2, 846 (1974) Johannson, S.G.O.: Raised levels of a new immunoglobulin class (IgND) in asthma. Lancet II, 951-953 (1967) Ishizaka, K., Ishizaka, T., Hornbook, M.M.: Physico-chemical properties of human reaginic antibody. IV. Presence of a unique immunoglobulin as a carrier of reaginic activity. Journqal of Immunol 97, 75 (1966) Bennich, H.H., et al.: Immunoglobulin E, a new class of human immunoglobulin. Bulletin World Health Organisation 38, 151 (1964) 16 RIDA qline Allergy 2014-01-07