NOVA Lite Skin Antibody 708330 Primate Esophagus Autoantibody Screen Assay Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός

NOVA Lite Skin Antibody 708330 Primate Esophagus Autoantibody Screen Assay Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός Σκοπό Χρήση Η τεχνική του έμμεσου ανοσοφθορισμού NOVA Lite SA Plus χρησιμοποιείται για βασικό έλεγχο και ημιποσοτικό προσδιορισμού δερματικών αυτοαντισωμάτων στον ανθρώπινο ορό. Η παρουσία των αντι-δερματικών αντισωμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε σύνδεση με άλλες ορολογικές εξετάσεις και κλινικά ευρήματα για την διάγνωση των αυτοάνοσων δερματικών παθήσεων και ειδικότερα της πέμφιγας και του πεμφιγοειδούς. Περιληψη Και Αρχη Μεθοδου Ο όρος «δερματικά αυτοαντισώματα» περιγράφει μία ποικιλία αυτοαντισωμάτων που αντιδρούν με τα συστατικά των δερματικών και βλεννογονικών επιφανειών. Αυτά τα αυτοαντισώματα υφίστανται με μεγάλη συχνότητα σε ασθενείς με αυτοάνοσες δερματικές παθήσεις και ειδικότερα με πέμφιγα ή πεμφιγοειδή.αυτοαντισώματα τα οποία αντιδρούν με ένα μεσοκυττάριο αντιγόνο του δέρματος και του βλεννογόνου υμένα βρίσκονται σε όλες τις ενεργές περιπτώσεις φ λ υ κ τ α ι ν ώ δ ο υ ς π ε μ φ ι γ ο ε ι δ ο ύ ς δ ε ρ μ α τ ο π ά θ ε ι α ς. Ο ι τ ι τ λ ο π ο ι ή σ ε ι ς α υ τ ώ ν τ ω ν α ν τ ι σ δραστηριότητα της ασθένειας και ελαττώνονται με επιτυχημένη θεραπεία. 2,3,4 Η φλυκταινώδης πεμφιγοειδής, άλλη μία σημαντική αυτοάνοση δερματοπάθεια, χαρακτηρίζεται ορολογικά από την παρουσία αντισωμάτων στη βασική μεμβράνη του δέρματος και του βλεννογόνου υμένα. Αντισώματα στη βασική μεμβράνη βρίσκονται στο 70-8 0 % τ ω ν α σ θ ε ν ώ ν μ ε πεμφιγοειδή. 5,6,7 Αν και δεν υπάρχει τόσο έντονη αλληλεξάρτηση μεταξύ της σοβαρότητας της ασθένειας και της τιτλοποίησης στη πεμφιγοειδή όπως υπάρχει στην πέμφιγα, υπάρχει όμως κάποια σχέση. Κατά την διάρκεια ύφεσης, είτε αυθόρμητης είτε έπειτα από θεραπεία, υπάρχει μείωση των αντισωμάτων στην βασική μεμβράνη, συνήθως σε επίπεδο που δεν μπορούν να εντοπιστούν. 7 Στις περισσότερες περιπτώσεις, η υποτροπή συνοδεύεται από την επανεμφάνιση του αυτοαντισώματος της βασικής μεμβράνης. Ο έμμεσος ανοσοφθορισμός είναι η πιο συνηθισμένη μέθοδος για την εξέταση των δερματικών αυτοαντισωμάτων. Τα συνηθισμένα υποστρώματα που χρησιμοποιούνται είναι είτε λεπτά τμήματα τρωκτικών είτε δέρματος και βλεννογόνου υμένα από θηλαστικά με τομές οισοφάγου σαν υπόστρωμα επιλογής. 8,9,10 Εκτός από τον τύπο του υποστρώματος, άλλοι παράγοντες ζωτικής σημασίας για την δράση της εξέτασης του δερματικού αυτοαντισώματος περιλαμβάνει 1) τον στερεωτή που θα χρησιμοποηθεί στην ενσωμάτωση του υποστρώματος στη πλάκα και 2) η ακρίβεια και ο φθορισμός στην πρωτεϊνη (F/P) ανάλογα με τη FITC σεσημασμένη σφαιρίνη που χρησιμοποείται. Κάποια στερεωτικά ή συνδυασμοί τους είναι γνωστό ότι καταστρέφουν κάποια δερματικά α ν τ ι γ ό ν α κ α ι η χ ρ ή σ η τ ο υ ς π ρ έ π ε ι ν α α π ο F\P φ ε αναλογία ύ γ ε τ α ι. της Η σφαιρίνης καθορίζει την ευαισθησία και το βαθμό χρώσης του υποστρώματος. Η ακρίβεια της σφαιρίνης είναι ζωτικής σημασίας. Η συντριπτική πλειονότητα των αυτοαντισωμάτων είναι της τάξεως των IgG. Είναι γνωστό όταν εντοπίζονται αυτοαντισώματα σε υγιείς αιμοδότες, αυτά συνήθως είναι IgM και IgA και σπανίως IgG. 11 Ε ξ α ι τ ί α ς α υ τ ο ύ, η ε ι δ ι κ ό τ η τ α τ η ς σ φ α ι ρ ί ν η γ gg ι α Ι ε ί ν α ι π λ έ ο ν ε ι δ ι κ ή. Τ ο επιλεγμένο υπόστρωμα για NOVA Lite Skin Antibody είναι κυρίως τομή οισοφάγου από θηλαστικό. H συνάφεια της σφαιρίνη είναι απαλλαγμένη από αντι-ανθρώπινα IgG. Αρχη Μεθοδου Σ τ η ν τ ε χ ν ι κ ή τ ο υ έ μ μ ε σ ο υ α ν ο σ ο φ θ ο ρ ι σ μ ο ύ, τ α δ ε ί γ μ α τ α ε π ω ά ζ ο ν τ α ι μ ε υ π ό σ τ ρ ω μ α α ν τ ι γ ό ν ο υ κ α ι τ α δ ε ν έ χ ο υ ν α ν τ ι δ ρ ά σ ε ι ξ ε π λ έ ν ο ν τ α ι. Τ ο υ π ό σ τ ρ ω μ α ε π ω ά ζ ε τ α ι μ ε ε ι δ ι κ ή φ θ ο ρ ί ζ ο υ σ α σ ε σ η μ α σ μ έ ν η σ φ α το ασύνδετο αντιδραστήριο ξεπλένεται. Όταν το δείτε από μικροσκόπιο φθορισμού, τα θετικά δείγματα αυτοαντισωμάτων θα εμφανίσουν φθορισμο πράσινου μήλου που θα ανταποκρίνεται στις περιοχές του κυττάρου ή του πυρήνα όπου το αυτοαντίσωμα έχει προσκολληθεί. Αντιδραστηρια 1. Πλάκες SA (οισοφάγος από Θηλαστικό) υποστρώματος: 8 πηγαδάκια/σειρά 2. Αντι ανθρώπινο IgG σύζευγμα (αίγας) συνδεδεμένο με φλουοροσκεινη σε ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει χρωστική Evans Blue και 0.09% του αζίδιο νατρίου σε φιαλίδιο των 7 ml 3. Θετικό πρότυπος ορός πεμφιγοειδούς, ένα φιαλίδιο που περιέχει 0.09% αζίδιο νατρίου και αντισώματα ανθρωπινου ορού, αραιωμένος, 0.5mL 4. Αρνητικός πρότυπος ορός ελέγχου (control) σε ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει 0.09% αζίδιο του νατρίου σε φιαλίδιο των αραιωμένος 0.5 ml 5. PBS II Συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης PBS II (40x), επαρκές για 1000 ml 6. Λάδι(mounting medium) που περιέχει 0.09% αζίδιο του νατρίου σε φιαλίδιο των 7 ml 7. Καλυπτρίδες 1

Προσοχή 1. Όλα τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας των μαρτύρων αυτού του προϊόντος έχουν ελεγχθεί και είναι αρνητικά για αντισώματα έναντι HIV, HbsAg, HCV όπως ορίζεται από τους κανονισμούς του FDA. Καμία μέθοδος πάντως δεν είναι σε θέση να αποκλείσει την παντελή απουσία μολυσματικών παραγόντων όπως και για HIV, HBV, HCV. Γι αυτό και όλοι οι ανθρώπινης προέλευσης μάρτυρες θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως δυνητικά μολυσματικά υλικά. 12 2. Τ ο α ζ ί δ ι ο τ α ο τ υ ρ ί ν ο υ χ ρ η σ ι μ ο π ο ι ε ί τ α ι ω ς σ υ ν τ η ρ η τ ι κ ό. Τ ο α ζ ί δ ι ο τ ο υ ν α τ ρ ί ο υ τοξικό σε περίπτωση κατάποσης. Το αζίδιο νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Αν για την απόρριψη του αντιδραστηρίου χρησιμοποιούνται λεκάνες απόπλυσης, η συγκέντρωση των αζιδίων μπορεί να αποφευχθεί ξεπλένοντας με άφθονο νερό. 3. Να χρησιμοποιείτε τον κατάλληλο προστατευτικό εξοπλισμό όταν δουλεύετε με τα αντιδραστήρια. 4. Να ακολουθούνται όλοι οι κανονισμοί και νόμιμες διαδικασίες για την απόρριψη των αποβλήτων. Ειδικα Μετρα 1. Αυτό το προϊόν είναι για διαγνωστική χρήση In Vitro. 2. Η υποκατάσταση των συστατικών με άλλα από αυτά που παρέχονται σε αυτή τη συσκευασία μπορεί να οδηγήσουν σε αντιφατικά αποτελέσματα. 3. Ανεπαρκές η αναποτελεσματικό πλύσιμο της πλάκας ανοσοφθορισμού μπορεί να δημιουργήσει έντονο υπόβαθρο. 4. Η λειτουργία αυτής της μεθόδου σε αυτόματο αναλυτη καί άλλες συσκευές διανομής,μπορεί να δώσει δ ι α φ ο ρ ε τ ι κ ά α π ο τ ε λ έ σ μ α τ α α π ο α υ τ ά π ο υ α π ο κ τ ώ ν τ α ι σ τ η χ ε ι ρ ω ν α κ τ ι κ ή δ ι α δ ι κ εργαστηρίου να καθορίσει τις αποδεκτές τιμές και όρια της αυτόματης διαδικασίας. 5. Μια ποικιλία παραγόντων μπορεί να επηρεάσει την απόδοση της μεθόδου: Η θερμοκρασία των αντιδραστ η θερμοκρασία του εργαστηριακού χώρου, η ένταση της λυχνίας του μικροσκοπίου, η ακρίβεια και επαναληψιμότητα του πιπεταρίσματος, η πλύση της μικροπλάκας, οι χρόνοι επώασης. Προσεκτική τήρηση της διαδικασίας είναι απαραίτητη για ακριβή και επαναλήψιμα αποτελέσματα. 6. Με το χρόνο η σφαιρίνη μπορεί να αλλάξει χρώμα λόγω της έκθεσης του στο φώς. Η χρωματική αλλαγή δέν επηρεάζει τα αποτελέσματα. 7. Συνιστάται αυστηρή προσκόλληση στο πρωτόκολλο. Αποθήκευση 1. Αποθηκεύσατε τα αντιδραστήρια στους 2-8 ο C. Να μήν παγώνουν. Είναι σταθερά για χρήση μέχρι τη λήξη τους εάν αποθηκεύονται συμφωνα με τις οδηγίες. 2. Το αραιωμένο PBS II διάλυμα πλύσης είναι σταθερό για τέσσερα εβδομάδα στούς 2-8 ο C. Δείγματα Η διαδικασία μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με δείγματα ορού. Η προσθήκη αζιδίου η άλλων συντηριτικών στο υποό έλεγχο δείγμα μπορεί να επιρεάσει τα αποτελέσματα. Μικροβιακή μόλυνση,θέρμανση η δείγματα περιέχοντα ορατά ξένα στοιχεία δέν πρέπει να χρησιμοποιούνται. Αιμολυθέντα η λιπαιμικά δείγματα η ορός πρέπει να αποφεύγονται. Μ ε τ ά τ η σ υ λ λ ο γ ή τ ο υ δ ε ί γ μ α τ ο ς, ο ο ρ ό ς θ α π ρ έ π ε ι ν α δ ι α χ ω ρ ί ζ ε τ α ι ά μ CLSI ε σ α (NCCLS) α π ό τ ο Document ο λ ι κ ό α ί μ α. H18-A2 προτείνει τις παρακάτω συνθήκες συντήρησης και αποθήκευσης των δειγμάτων: Τα δείγματα πρέπει να διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 8 ώρες. Σε περίπτωση που η δοκιμασία δεν πραγματοποιηθεί άμεσα, τότε τα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία συντήρησης (2 8 ο C ) μ έ χ ρ ι 4 8 ώρες. Για μεγαλύτερο διάστημα, τα δείγματα θα πρέπει να καταψυχθούν στους 20 ο C. Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να αναμιχθούν καλά μετά την απόψυξη και πριν από την εξέταση. Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 10 Πλάκες 8 δερματικά αντισώματα (8well) 1 7ml FITCH IgG ανοσοσφαιρίνη 1 0.5mL Θετικός πρότυπος ορός Πέμφυγκος 1 0.5mL IFA αρνητικός πρότυπος ορός 1 25ml PBS II υπό ανασύσταση διάλυμα (40x) 1 7ml γλυκερίνη 1 10 καλυπτρίδες 2

Αντιδραστήρια και εξοπλισμός που δεν συμπεριλαμβάνονται Μικροπιπέττες όγκου 15-100μL Αποσταγμένο ή μη ιονισμένο νερό Pasteur πιπέττες ή μπουκάλια που λυγίζουν Θάλαμος Υγρασίας 1L δοχείο για PBS II Δοχείο Coplin Μικροσκόπιο φθορισμού με διεγέρτη 495nm ή και 515nm προστατευτικό φίλτρου Μεθοδολογια Πριν ξεκινήσετε 1. Όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (20-26 C) και να έχουν αναδευτεί καλά. 2. Αραίωση του συμπυκνωμένου διαλύματος αραίωσης/πλύσης ( PBS II ): ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αραιώστε το συμπυκνωμένο PBS II 1:40 προσθέτοντας το περιεχόμενο από το φιαλίδιο με το συμπυκνωμένο διάλυμα PBS II σε 975 ml απεσταγμένου νερού και ανακατέψτε το καλά. Το αραιωμένο διάλυμα PBS II θα χρησιμοποιηθεί για την αραίωση των δειγμάτων καθώς επίσης και για διάλυμα πλύσεων. Το αραιωμένο διάλυμα μπορεί να αποθηκευτεί έως και 4 εβδομάδες σε θερμοκρασία συντήρησης 2-8 ο C. 3. Αραίωση δειγμάτων: α. Αρχικός βασικός έλεγχος : Αραίωσε τα δείγματα 1:10 με αραιωμένο διάλυμα PBS II (π.χ 100 μl oρού σε 900 μl PBS II). β. Τιτλοποίηση (titration) Κ ά ν τ ε δ ι α δ ο χ ι κ έ ς α ρ α ι ώ σ ε ι ς α π ό τ η ν α ρ χ ι κ ή α ρ α ί ω σ η σ ε ό λ α τ α θ ε τ (πχ 1:20, 1: 40,...1: 2650). Διαδικασία 1. Προετοιμασία των πλακιδίων: Αφήστε τα πλακίδια να έρθουν σε θερμοκρασία δωματίου πριν ανοίξετε τις συσκευασίες τους. Σημαδέψτε τα,τοποθετήστε τα σε υγρό περιβάλλον και προσθέστε 1 σταγόνα (70-90μL) από τον θετικό και τον αρνητικό πρότυπο ελέγχου (control) στη 1 και 2 θέση αντιστοίχως. Πρόσθεσε 70-1 σταγόν 90μL) του αραιωμένου δείγματος στις υπόλοιπες θέσεις. 2. Επώαση: Επωάστε τα πλακίδια για 30 + 5 λεπτά σε υγρό περιβάλλον (μία βρεγμένη χαρτοπετσέτα σε ένα πλαστικό κουτί θα μπορεί να κρατήσει την κατάλληλη υγρασία). Μην επιτρέψετε να στεγνώσει το υπόστρωμα κατά τη διαδικασία. 3. Πλύσιμο των πλακιδίων: Μετά την επώαση, χρησιμοποιώντας ένα πλαστικό μπουκάλι ή πλαστική πιπέττα ξεπλύνετε τον ορό με αραιωμένο PBS II. Τ ο π ο θ ε τ ή σ τ ε τ ο π λ α κ ί δ ι α σ ε τ έ τ ο ι α θ έ σ η έ τ σ ι ώ σ τ ε ν α α π ο φ ε ύ γ ε τ ε τ η μεταφορά του δείγματος από τη μια θέση στην άλλη κατά το πλύσιμο. Αποφύγετε να στέλνετε με πίεση το PBS II απευθείας πάνω στις θέσεις έτσι ώστε να μην καταστραφεί το υπόστρωμα. Εάν επιδιώκεται, τοποθετήστε τα πλακίδια σε μπανάκι (Coplin jar) με αραιωμένο PBS II για επιπλέον 5 λεπτά. 4. Προσθήκη φθορίζοντος συζεύγματος (conjugate): Απομακρύνετε όσο PBS II έχει απομείνει στο πλακίδιο (π.χ.με απορροφητικο χαρτί). Τοποθετήστε το πλακίδιο σε υγρό περιβάλλον και προσθέστε αμέσως από μια σταγόνα συζεύγματος (conjugate)σε κάθε θέση. Επωάστε για 30 + 5 λεπτά. 5. Πλύσιμο πλακιδίων: Επανέλαβε τη διαδικασία του σταδίου 3. 6. Καλυπτρίδα: Η διαδικασία τοποθέτησης καλυπτρίδας διαφέρει σε κάθε εργαστήριο. Παρ όλα αυτά προτείνεται η παρακάτω διαδικασία: α. Τοποθετήστε την καλυπτρίδα σε μια χαρτοπετσέτα. β. Προσθέστε λάδι (mounting medium) σε μια γραμμή στο κάτω άκρο της καλυπτρίδας. γ. Αφαιρέστε το επιπλέον PBS II και τοποθετήστε με προσοχή το κάτω μέρος του πλακιδίου στην άκρη τ η ς κ α λ υ π τ ρ ί δ α ς μ ε τ έ τ ο ι ο τ ρ ό π ο ώ σ τ ε τ ο λ ά δ ι ν α μ ε τ α φ ε ρ θ ε ί σ τ ο π ά ν ω μ έ ρ ο ς τ ο υ π λ α δημιουργηθούν φυσαλίδες. Ποιοτικός έλεγχος Ο θ ε τ ός ι κ πρότυπος ορός ελέγχου Πέμφυγκος και ο αρνητικός πρότυπος ορός ελέγχου (IFA Sys tem Negative Control) θα πρέπει να χρησιμοποιούνται σε κάθε πλάκα έτσι ώστε να εξασφαλίζεται ότι τα αντιδραστήρια και οι διαδικασία λειτουργούν σωστά. Επιπλέον κατάλληλοι οροί ελέγχου θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν από δείγματα ρουτίνας τα οποία θα αποθηκεύονται στη βαθιά κατάψυξη < -70 C. Για να θεωρηθούν τα αποτελέσματα έγκυρα θα πρέπει να ισχύουν τα παρακάτω κριτήρια. Σε περίπτωση που κάποιο από τα δύο κριτήρια δεν ισχύει τότε θα πρέπει να επαναληφθεί η εξέταση. 1. Ο θετικός πρότυπος ορός ελέγχου Πέμφυγκος θα πρέπει να βαθμολογείται >3+. 2. Ο αρνητικός πρότυπος ορός ελέγχου θα πρέπει να είναι αρνητικός. 3

Ανάλυση και Αξιολόγηση Αποτελεσμάτων Αρνητική αντίδραση. Ένα δείγμα θεωρείται αρνητικό όταν ο φθορισμός του πυρήνα είναι ανάλογος ή λιγότερο φωτεινός από τον αρνητικό μάρτυρα. Τα δείγματα μπορεί να παρουσιάζουν διάφορους βαθμούς χρώσης παρασκηνίου λόγω ετερόφιλων αντισωμάτων, ή άλλων ειδικών αντιδράσεων λόγω αντισωμάτων ρετικουλίνης, αντι-πυρηνικών αντισωμάτων, αντισωμάτων αντι-ενδομυΐου ή αντισωμάτων αντι-λείων μυών. Θετική αντίδραση για μεσοκυττάρια αντισώματα και αντισώματα ζώνης βασικής μεμβράνης. Έ ν α δ ε ί γ μ α μ π ο ρ ε ί να θεωρηθεί θετικό εάν παρατηρηθεί ειδική χρώση των μεσοκυττάριων περιοχών ή των περιοχών ζώνης βασικής μεμβράνης του οισοφάγειου βλεννογόνου. Προσδιορίστε το βαθμό ή την ένταση φθορισμού χρησιμοποιώντας τα ακόλουθα κριτήρια: 4+ Πολύ έντονος φθορισμός πράσινου μήλου 3+ Έντονος φθορισμός πράσινου μήλου 2+ Ευδιάκριτος θετικός φθορισμός 1+ Χαμηλότερος ειδικός φθορισμός ο οποίος επιτρέπει την ευδιάκριτη διαφοροποίηση της χρώσης των μ ε σ ο κ υ τ τ ά ρ ι ω ν π ε ρ ι ο χ ώ ν ή τ ω ν π ε ρ ι ο χ ώ ν ζ ώ ν η ς β α άνης σ ι κ από ή ς μ τον ε μ β φθορισμό ρ παρασκηνίου Όρια της Διαδικασίας 1. Η παρουσία δερματικών αυτοαντισωμάτων παραπέμπει σε ορισμένες αυτοάνοσες πομφολυγώδεις δερματικές νόσους αλλά δεν πρέπει να θεωρηθεί διαγνωστική. Το αποτέλεσμα αυτοαντισωμάτων πρέπει να αξιολογηθεί σε συνδυασμό με άλλα οροδιαγνωστικά αποτελέσματα ή αποτελέσματα βιοψίας, καθώς και με το γενικό κλινικό ιστορικό του ασθενούς. 2. Επιπρόσθετα στα δερματικά αυτοαντισώματα, άλλα αυτοαντισώματα μπορεί να αντιδράσουν με το υπόστρωμα του οισοφάγου. Ορισμένα από αυτά περιλαμβάνουν αντι-πυρηνικά αυτοαντισώματα (ANA), αντι-μιτοχονδριακά αυτοαντισώματα (AMA), αυτοαντισώματα αντι-λείων μυών και αντι-σ κ ε λ ε τ ι κ ώ ν μ υ ώ ν. Η π α ρ ο υ σ ί α α υ τ ώ ν τ ω ν αντισωμάτων πρέπει να σημειωθεί και η παρουσία τους πρέπει να επιβεβαιωθεί και να τιτλοποιηθεί σε άλλα εγκεκριμένα υποστρώματα. 3. Πρέπει να σημειωθεί ότι ως επακόλουθο της καταστροφής ιστού, ορισμένοι ασθενείς με εγκαύματα παράγουν ασθενώς αντιδραστικά αντισώματα τα οποία δεσμεύονται επίσης στις μεσοκυττάριες περιοχές. Αυτά τα αποκαλούμενα "πεμφιγοειδή" αντισώματα προκαλούν ασθενή και άνιση χρώση του βλεννογόνου, είναι παροδικής φύσεως και δεν αντιδρούν με το δέρμα του ασθενούς in vivo. 13,14,15 4. Λόγω του ότι ο οισοφάγειος βλεννογόνος μπορεί να περιέχει ορισμένες ουσίες ομάδων αίματος, ισοαντισώματα ομάδας αίματος αντι-a και αντι-b μπορεί να αντιδράσουν με τον οισοφάγο. 16 Το σχήμα της αντιδραστικότητας μπορεί, σε ορισμένους ασθενείς, να μιμείται το σχήμα που παρατηρείται με τα πεμφιγώδη ενδοκυττάρια αυτοαντισώματα (αν και το αντίσωμα ομάδας αίματος θα χρωματίσει επίσης τα τριχοειδή αιμοφόρα αγγεία του μυικού συστήματος του τμήματος του οισοφάγου. Αντιδραστικότητα λόγω αντισώματος ομάδας αίματος μπορεί να απορροφηθεί με αντιγόνο ομάδας αίματος. 17 5. Μια ποικιλία εξωτερικών παραγόντων μπορούν να επηρεάσουν την ευαισθησία της εξέτασης συμπεριλαμβανομένων του τύπου του μικροσκοπίου φθορισμού, της έντασης και χρονικής χρήσης της λάμπας, της μεγέθυνσης, του συστήματος φίλτρων και του παρατηρητή. 6. Εάν χρησιμοποιείται band pass filter αντί για 515 barrier filter, μπορεί να παρατηρηθεί αυξημένη μη ειδική χρώση. 7. Πρέπει να χρησιμοποιείται μόνο μολύβι για εγγραφή πάνω στα πλακίδια. Οποιοδήποτε άλλο είδος μπορεί να προκαλέσει μη ειδική χρώση. 8. Ό λ α τ α μ π α ν ά κ ι α π ο υ χ ρ η σ ι μ ο π ο ι ο ύ ν τ α ι σ τ ο π λ ύ σ ι μ ο τ ω ν π λ α μην κ ι δ έχουν ί ω ν κατάλοιπα π ρ έ π ε ι ν χρώσης. α Τα κατάλοιπα χρώσης μπορεί να δώσουν μη ειδική χρώση. 9. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης θα πρέπει να χρησιμοποιούνται από κοινού με κλινικά ευρήματα και άλλες ορολογικές εξετάσεις. 10. Η μέθοδος δέν έχει επιβεβαιωθεί για άλλο δείγμα εκτός ορού. Αναμενόμενες Τιμές Το υπόστρωμα NOVA Lite Skin Antibody χρησιμοποιήθηκε για τη δοκιμασία ασθενών με πεμφιγώδη και πεμφιγοειδή δερματική νόσο, καθώς και 100 τυχαίων δοτών αίματος. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται παρακάτω. Αριθμός θετικών Ομάδα Ασθενών Αρ ι θ μ ό ς Ενδοκυττάρια περιοχή Ζώνη βασικής μεμβράνης Πεμφιγώδης 24 20 0 Πεμφιγοειδής 18 0 12 Φυσιολογικοί 100 0 0 4

Βιβλιογραφία 1. Chorzelski TP, Beutner EH, Jablonska S: "The Role and Nature of Autoimmunity of Pemphigus" in Immunopathology of the Skin, second edition (EH Beutner, TP Chorzelski, SF Bean, eds.) John Wiley and Sons, NY, pp. 183-229, 1979. 2. Chorzelski TP, von Weiss JF, Lever WF: Clinical significance of autoantibodies in pemphigus. Arch. Dermatol.: 93:570, 1966. 3. Jablonska S, et.al.: Pathogenesis of pemphigus erythematosus. Arch. Dermatol. Res. 258:135, 1977. 4. Peck SM, et.al.: Studies in Bullous diseases. Arch. Dermatol. 103:141, 1971. 5. Jordon RE, et.al.: Basement zone antibodies in bullous pemphigoid. JAMA 200:751, 1967. 6. Person JR, Rogers RS: Bullous and cicatricial pemphigoid. Mayo Clin. Proc. 52:54,1977. 7. Chorzelski TP, Jablonska S, Beutner EH: "Pemphigoid" in Immunopathology of the Skin, second edition (EH Beutner, TP Chorzelski, SF Bean, eds.) John Wiley and Sons, NY, pp. 243-255, 1979. 8. Sabolinski ML, et.al.: Substrate specificity of anti-ephithelial antibodies of pemphigus vulgaris and pemphigus foliaceous sera in immunofluorescence tests on monkey and guinea pig esophagus sections. J. Invest. Dermatol. 88:545, 1987. 9. O'Loughlin S, Goldman GC, Provost TT: Fate of pemphigus antibody following successful therapy. Preliminary evaluation of pemphigus antibody determination to regulate therapy. Arch. Dermatol. 114:1769, 1978. 10. Feibeleman C, Stolzner G, Provost TT: Pemphigus vulgaris. Superiority of monkey esophagus in the determination of pemphigus antibody. Arch. Dermatol. 117:561, 1981. 11. Wiik A: Antinuclear factors in sera from healthy blood donors. Acta. Path. Microbiol. Scand. 84:215-220, 1976. 12. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 5 th Edition. Centers for Disease Control/National Institute of Health, 2009 13. Ablin RJ, et.al.: Pemphigus-like antibodies in patients with skinburns. Vox Sang 16:73, 1969. 14. Quismorio FP, Bland SL, Friou GJ: Autoimmunity in thermal injury: Occurrence of rheumatoid factors, antinuclear antibodies and antiepithelial antibodies. Clin. Exp. Immunol. 8:701, 1971. 15. Trifthauser C, et.al.: Fluorescent antibody studies of pemphigus-like antibodies in burn sera. Ann. NY Acad. Sci. 177:227, 1971. 16. Szulman AE: The histological distribution of blood group substances A and B in man. J. Exp. Medicine 115:977, 1962. 17. Beutner EH, et. al.: "Defined immunofluorescence-basic concepts and their application to clinical immunodermatology." Immunopathology of the Skin, second edition (EH Beutner, TP Chorzelski, SF Bean, eds.) John Wiley and Sons, NY, pp. 29-75, 1979. 5

Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove Road San Diego, CA 92131 United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : 877-829-4745 Technical Service (Outside the U.S.) : 1 858-805-7950 support@inovadx.com Aντιπροσωπευτικός: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Germany Tel.: +49-6894-581020 Fax.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628330GRC December 2012 Revision 17 Οι επωνυμίες NOVA Lite και INOVA Diagnostics, Inc. είναι σήματα κατατεθέντα. Πνευματικά δικαιώματα 2012 Με επιφύλαξη κάθε νόμιμου δικαιώματος 6