Π ΑΡΑΡΤΗΜΑ! Οι μέθοδοι προσδιορισμού των ορθοφωσφορικών αλάτων, του B.O.D. και του C.O.D.! Το ερωτηματολόγιο.! Μία συνέντευξη.
Οι μέθοδοι προσδιορισμού των ορθοφωσφορικών αλάτων, του B.O.D και του C.O.D. 1. Ορθο-φωσφορικά άλατα 3,4. Ο φώσφορος υπάρχει, στα φυσικά νερά και στα απόβλητα, σχεδόν αποκλειστικά σαν φωσφορικά άλατα (phosphates). Αυτά ταξινομούνται σε ορθο-φωσφορικά (PO 3-4, HPO 2-4, H 2 PO - 4, H 3 PO 4 ), πολυ-φωσφορικά (condensed phosphates) και οργανικά δεσμευμένα φωσφορικά. Υπάρχουν σε διάλυση, σε σωματίδια ή τρίμματα, ή στο σώμα των υδρόβιων οργανισμών. Σε φυσικό υδάτινο περιβάλλον, η συγκέντρωση των ενώσεων φωσφόρου, υπολογισμένη σε όξινα φωσφορικά ιόντα (HPO 2-4, και H 2 PO - 4 ), είναι γενικά μικρότερη από 0.1 mg/l. Υψηλότερες συγκεντρώσεις σε επιφανειακά και υπόγεια νερά, είναι πολύ συνηθισμένες και θεωρούνται σαν αποτέλεσμα του ανθρώπινου παράγοντα στον πλανήτη μας. Η μέθοδος που χρησιμοποιήσαμε για τον προσδιορισμό των ορθο-φωσφορικών αλάτων είναι η ascorbic acid method 3. 1.1. Ascorbic Acid Method. 1.1.1. Γενικά. Τα ορθοφωσφορικά ανιόντα αντιδρούν με σύμπλοκα, όπως αμμωνιακό μολυβδαίνιο (ammonium molybdate) σχηματίζοντας ενώσεις που απορροφούν στην υπεριώδη και στην ορατή ακτινοβολία. Συγκεκριμένα με την προσθήκη ammonium molybdate σε δείγμα νερού σχηματίζονται τα εξής σύμπλοκα: (NH 4 ) 3 PO 4. 12MoO 3 ή NH 4 [P(Mo 12 O 40 )] ή (ΝΗ 4 ) 3 [P(Mo 3 O 10 ) 4 ] τα οποία έχουν μπλε χρώμα και απορροφούν στα 880 nm. i
Έτσι, φασματοφωτομετρικές μέθοδοι είναι κατάλληλες και χρησιμοποιούνται ευρέως για τον προσδιορισμό τέτοιων ενώσεων. Η φασματοφωτομετρία είναι μέθοδος ποσοτικού προσδιορισμού διαφόρων ουσιών που στηρίζεται στη μέτρηση της σχετικής απορρόφησης ακτινοβολίας, που περνά από διάλυμα ουσίας, της οποίας την συγκέντρωση θέλουμε να προσδιορίσουμε. Το χρώμα μιας διαλυμένης ουσίας οφείλεται στην απορρόφηση ορισμένου μήκους κύματος της ορατής ακτινοβολίας και την διαπερατότητα των υπολοίπων. Οι ακτίνες που δεν απορροφήθηκαν μας δίνουν το χρώμα με το οποίο εμφανίζεται η ουσία. Μέτρο της απορρόφησης του φωτός για ένα ορισμένο μήκος κύματος είναι ή διαπερατότητα (Τ) ή η απορρόφηση (Α) της ουσίας. Διαπερατότητα είναι ο λόγος του φωτός που διέρχεται προς το ποσό του φωτός που προσπίπτει στην επιφάνεια και εκφράζει το ποσό της μη απορροφούμενης ακτινοβολίας κατά την δίοδο της από το διάλυμα της ουσίας (παίρνει τιμές από 0 μέχρι 1). Η απορρόφηση (Α) αυξάνεται όταν αυξηθεί η συγκέντρωση της έγχρωμης ουσίας στο διάλυμα και με την αύξηση του μήκους διαδρομής του φωτός στο διάλυμα. Τα παραπάνω εκφράζουν το νόμο των Beer και Lambert: Α = ε λ. c. l όπου: Α = απορρόφηση του διαλύματος. ε λ = μοριακός συντελεστής απορρόφησης και είναι χαρακτηριστικός για την ουσία για ορισμένο μήκος κύματος λ και ορισμένη θερμοκρασία (l/mol. cm). c = συγκέντρωση του διαλύματος σε mol/l. l = μήκος διαδρομής του φωτός στο διάλυμα της ουσίας σε cm. Το όργανο που χρησιμοποιούμε για την μέτρηση της έντασης της ακτινοβολίας που έχει απορροφηθεί από ένα διάλυμα, ονομάζεται φασματοφωτόμετρο και ανεξάρτητα από τον τύπο του, η μέτρηση της ακτινοβολίας είναι πάντα σχετική. ii
Δηλαδή, απαιτείται πάντα σύγκριση της απορρόφησης του δείγματος με την απορρόφηση πρότυπου ή τυφλού δείγματος. Τέλος, θα πρέπει να αναφέρουμε ότι με την μέθοδο αυτή (ascorbic acid method) μπορούν να μετρηθούν συγκεντρώσεις έως 10 μg P/l. 1.1.2. Αντιδραστήρια 3. 1. Sulfuric acid, H 2 SO 4, 5N: Διαλύουμε 70 ml πυκνού H 2 SO 4 σε 500 ml απεσταγμένου νερού.. 2. Potassium antimonyl tartrate solution: Διαλύουμε 1.3715 gr K(SbO)C 4 H 4 O 6 ½H 2 O σε 400 ml απεσταγμένο νερού μέσα σε φιάλη 500 ml και στη συνέχεια αραιώνουμε μέχρι τα 500 ml. 3. Ammonium molybdate solution: Διαλύουμε 20 gr (NH 4 ) 6 Mo 7 O. 24 4H 2 O σε 500 ml απεσταγμένου νερού. 4. Ascorbic acid, 0.1M: Διαλύουμε 1.76 gr ασκορβικού οξέος σε 100 ml απεσταγμένου νερού. Το διάλυμα είναι σταθερό για μία περίπου (1) εβδομάδα στους 4 ο C. 5. Combined reagent: Ανακατεύουμε τα παραπάνω αντιδραστήρια στις ακόλουθες αναλογίες για 100 ml combined reagent: 50 ml 5N H 2 SO 4, 5 ml potassium antimonyl tartrate solution, 15 ml ammonium molybdate solution και 30 ml ascorbic acid solution. Ανακατεύουμε καλά μετά από την προσθήκη κάθε αντιδραστηρίου. Αφήνουμε όλα τα αντιδραστήρια να φτάσουν την θερμοκρασία δωματίου πριν τα ανακατέψουμε και τα αναμειγνύουμε με την σειρά που αναφέρονται. Αν το combined reagent γίνει θολό, το ανακατεύουμε καλά μέχρι να εξαφανιστεί η θολότητα και περιμένουμε μερικά λεπτά πριν να προχωρήσουμε στο επόμενο βήμα. Το αντιδραστήριο είναι σταθερό για 4 ώρες. 6. Standar phosphate solution: Αραιώνουμε 50.0 ml stock phosphate solution στα 1000 ml με απεσταγμένο νερό. (1 ml διαλύματος περιέχει 2.50 μg P). 1.1.3. Διαδικασία. Από το έτοιμο διάλυμα Na 2 HPO 4 (stock solution) παίρνουμε 1 ml και το αραιώνουμε μέχρι τα 100 ml με απεσταγμένο νερό. (Συγκέντρωση 10 mg/l). iii
Από το τελευταίο διάλυμα, αραιώνουμε 2 ml μέχρι τα 200 ml με απεσταγμένο νερό (διάλυμα συγκέντρωσης 100 μg/l-αραιό) και 4 ml μέχρι τα 200 ml με απεσταγμένο νερό (διάλυμα συγκέντρωσης 200 μg/l-πυκνό) σε κωνικές φιάλες των 125 ml. Παίρνουμε 50 ml απ το κάθε διάλυμα, 50 ml απεσταγμένο νερό και 50 ml δείγματος και τα τοποθετούμε σε κωνικές φιάλες των 125 ml. Προσθέτω 0.05 ml (μία σταγόνα) φαινολοφθαλεϊνης σε όλες τις φιάλες. Αν το χρώμα γίνει κόκκινο, προσθέτω διάλυμα 5Ν H 2 SO 4 ώστε το χρώμα μόλις να εξαφανιστεί. Προσθέτω 8.0 ml combined reagent και ανακατεύω τέλεια. Μετά από τουλάχιστον 10 λεπτά (αλλά όχι παραπάνω από 30 λεπτά) μετρώ την απορρόφηση κάθε δείγματος στα 880 nm. Το απεσταγμένο νερό δεν σχηματίζει έγχρωμα σύμπλοκα, δεν απορροφάει στο UV και χρησιμοποιείται σαν τυφλό δείγμα. Κατασκευάζουμε το διάγραμμα συγκέντρωσης προς τη μετρούμενη απορρόφηση, το οποίο σύμφωνα με τον τύπο των Beer - Lambert είναι ευθεία γραμμή με κλίση ε. l. 4 Άρα: (ε. l) -1 = Δ concentration Δabsorbance (ε. l) -1 = Abs 1 00 0 1ο υ δλμ Abs τυφλο ύ [χρησιμοποιώντας το τυφλό και το 1ο διάλυμα που παρασκευάσαμε (αραιό)]. ή (ε. l) -1 = Abs 200 0 Abs 2ο υ δλμ τυφλού [χρησιμοποιώντας το τυφλό και το 2ο διάλυμα (πυκνό)]. Έχοντας υπολογίσει από τους παραπάνω τύπους την ποσότητα ε. l, υπολογίζουμε τώρα την συγκέντρωση του P στο δείγμα μας με βάση τον τύπο των Beer - Lambert: μg ions P/l = (Abs sample - Abs blanc ). (ε. l) -1 iv
2. Biochemical Oxygen Demand, (B.O.D) 1,4. 2.1. Γενικά. Το «Βιοχημικώς Απαιτούμενο Οξυγόνο» (B.O.D.) είναι ένα από τα σπουδαιότερα τεστ με το οποίο προσδιορίζεται η απαίτηση σε οξυγόνο, ενός δείγματος νερού, ή αποβλήτων, για την βιοαποδόμηση της οργανικής ύλης. 2.2. Αρχές της μεθόδου. Η βιοποδόμηση γίνεται από αερόβιους οργανισμούς, οι οποίοι καταναλωνουν το Ο 2 που υπάρχει στο δείγμα, ως διαλυμένο αέριο, και εκφράζεται ως το βάρος του Ο 2 που καταναλώνεται από τους μικροοργανισμούς ανά μονάδα όγκου δείγματος σε ορισμένο χρόνο και θερμοκρασία. Για την πλήρη βιοχημική οξείδωση, στους 20 ο C, χρειάζονται περίπου21-28 μέρες. Επειδή, πρακτικά, το χρονικό αυτό διάστημα είναι πολύ μεγάλο, η μέτρηση γίνεται, κατά συνθήκη στις 5 ημέρες (20 ο C), όπου έχει καταναλωθεί το 70% περίπου του οξυγόνου. Επίσης, η επώαση γίνεται στο σκοτάδι για την αποφυγή δημιουργίας επιπρόσθετου οξυγόνου μέσω της φωτοσύνθεσης 1. Έτσι, οι διάφορες τυποποιημένες μέθοδοι δίνουν αποτελέσματα B.O.D. σε mg O 2 που καταναλώνονται ανά λίτρο δείγματος επί 5 ημέρες επώαση στους 20 0 C. Η μέθοδος προσδιορισμού του B.O.D., η οποία θα χρησιμοποιήσουμε, ονομάζεται μανομετρική, και στηρίζεται στην μέτρηση της πίεσης του Ο 2 που περιέχεται στον κενό χώρο της φιάλης πάνω από το δείγμα, πριν και μετά την επώαση. Η διαφορά στην πίεση, οφείλεται στην κατανάλωση του Ο 2 από τους μικροοργανισμούς. 2.3. Συσκευή. Χρησιμοποιούμε την μανομετρική συσκευή της Velp Scientifica (VELP BOD manometric apparatus, model FTC 90, BMS 6 unit) για την επώαση των δειγμάτων και την μέτρηση του B.O.D. Η παραπάνω συσκευή παίρνει ταυτόχρονα έξι (6) φιάλες δειγμάτων, συνδεμένες η κάθε μια με μανόμετρο και διαθέτει κλίμακες, ανάλογα με τις αναμενόμενες τιμές του B.O.D., οι οποίες προσαρμόζονται σε κάθε μανόμετρο και δίνουν απ ευθείας την τιμή του Ο 2 που καταναλώνεταισε mg/l, μετά τον συγκεκριμένο χρόνο επώασης. v
2.4. Διαδικασία 4. Τοποθετούμε το δείγμα σε μια φιάλη της συσκευής μέτρησης του B.O.D. η οποία είναι συνδεμένη με ένα μανόμετρο, μαζί μ ένα μαγνητικό αναδευτήρα για την συνεχή ανάδευση του δείγματος, και προσαρμόζουμε την κατάλληλη κλίμακα που θα μας δείξει την τιμή του B.O.D. Έπειτα τοποθετούμε, στην ειδική θέση που υπάρχει κάτω από το στόμιο της φιάλης ΚΟΗ, για την προσρόφηση του CO 2, το οποίο παράγεται από την αναπνοή των αερόβιων μικροοργανισμών. Στη συνέχεια κλείνουμε την φιάλη και τοποθετούμε τη συσκευή στο θάλαμο επώασης στους 20 ο C. Μετά από 30 λεπτά όπου έχει επέλθει θερμική ισορροπία, βιδώνουμε και το καπάκι του μανόμετρου και το αφήνουμε για 5 ημέρες στο θάλαμο επώασης. Μετά την πάροδο των 5 ημερών η συσκευή μας δίνει την τιμή του Β.Ο.D. για το δείγμα που μας ενδιαφέρει. vi
3. Chemical Oxygen Demand, (C.O.D.) 2. 3.1. Γενικά. Με τον όρο chemical oxygen demand (C.O.D. χημικά απαιτούμενο οξυγόνο) εννοούμε το ποσό, από χημικά οξειδωτικά, του οξυγόνου, που απαιτείται για την πλήρη οξείδωση των ουσιών που είναι διαλυμένες ή αιωρούνται στο νερό. 3.2. Αρχές της μεθόδου. Με την μέθοδο του C.O.D. είναι δυνατός ο ποσοτικός καθορισμός ουσιών οι οποίες μπορούν να οξειδωθούν από ισχυρά οξειδωτικά μέσα (όπως το potassium dichromate), μέσα σε υψηλά όξινα διαλύματα πυκνού θειικού οξέως. Με τον τρόπο αυτό μπορούν να οξειδωθούν και οργανικές και ανόργανες ουσίες, οι οποίες όμως, δεν οξειδώνονται από την αντίστοιχη βιολογική μέθοδο (B.O.D = Biological Oxygen Demand), όπως για παράδειγμα η κυτταρίνη. Η χημική οξείδωση είναι περισσότερο πλήρης από την βιολογική και γι αυτό οι τιμές του C.O.D. είναι, για δεδομένο δείγμα, υψηλότερες από τις τιμές του B.O.D. Ανάλογα με το χρησιμοποιούμενο οξειδωτικό και την συγκέντρωσή του, την συγκέντρωση του οξέως, τον χρησιμοποιούμενο καταλύτη, το χρόνο και την θερμοκρασία θέρμανσης, άλλες ουσίες που οξειδώνονται πλήρως και άλλες λιγότερο και επομένως οι συνθήκες ανάλυσης πρέπει να καθοριστούν με μεγάλη ακρίβεια. Ο καθορισμός του C.O.D. πετυχαίνεται με την τιτλοδότηση (ογκομέτρηση) return titration περίσσειας διχρωμικού καλίου, το οποίο προστίθεται σε γνωστή ποσότητα, μετά την ολοκλήρωση της οξείδωσης του διαλύματος που περιέχει χημικά οξειδώσιμες ουσίες. Το ποσό των οξειδώσιμων ουσιών οι οποίες υπάρχουν σε ένα δεδομένο δείγμα είναι απ ευθείας ανάλογες με το ποσό του διχρωμικού που καταναλώνεται. Η προσθήκη θειικού αργύρου σαν καταλύτη αυξάνει την ταχύτητα οξείδωσης των αλκοολών και των οξέων, αλλά όχι των αρωματικών υδρογονανθράκων. Η υψηλή συγκέντρωση ιωδιδών, βρωμιδών ή χλωριδών, μπορούν να μας δώσουν αποτελέσματα υψηλότερα από τα πραγματικά. Αυτό αποφεύγεται με την προσθήκη θειικού υδραργύρου (mercuric sulfate) ο οποίος σχηματίζει αδιάλυτα σύμπλοκα με τα αλογόνα. vii
3.3. Συσκευή. Χρησιμοποιούμε, για την θέρμανση των δειγμάτων στους 150 o C, τον θερμαντικό αντιδραστήρα ECO 6 της Velp Scientifica. 3.4. Αντιδραστήρια 2. 1. Dichromate standard solution 0.250 N: Παίρνουμε 15-20 gr potassioum dichromate ( διχρωμικό κάλιο, K 2 Cr 2 O 7 ) και το θερμαίνουμε στεγνό για δύο ώρες στους 150 ο C και μετά το αφήνουμε να κρυώσει. Ζυγίζουμε από αυτό 12.259 gr και το διαλύουμε σε 400-500 ml απεσταγμένου νερού σε ογκομετρική φιάλη 1000 ml. Στη συνέχεια συμπληρώνουμε μέχρι τα 1000 ml με απεσταγμένο νερό. 2. Sulfuric acid reagent: Προσθέτουμε 5.4 gr silver sulfate (θειικός άργυρος, Ag 2 SO 4 ) σε 1 κιλό συμπυκνωμένου θειικού οξέως 96% (H 2 SO 4 d=1.835). Πλήρη διάλυση απαιτεί δύο ημέρες. Το αντιδραστήριο φυλάσσεται σε καλά σφραγισμένο και σκούρο γυάλινο δοχείο και διατηρείται απεριόριστα. 3. Ammonium ferrous sulfate standard solution 0.125 N: Παίρνουμε 49.02 gr ammonium ferrous sulfate exahydrate ( Fe(NH 4 ) 2 (SO 4 ). 2 6H 2 O ) και τα διαλύουμε σε περίπου μισό λίτρο απεσταγμένου νερού. Προσθέτουμε, αργά, στο ammonium 20 ml συμπυκνωμένου θειικού οξέως (H 2 SO 4 96%, d=1.835) και διάλυμα σιδήρου, ενώ ταυτόχρονα το ανακατεύουμε. Δεν προσθέτουμε το διάλυμα στο πυκνό θειικό οξύ γιατί υπάρχει κίνδυνος εκρήξεως. Στη συνέχεια γεμίζουμε, με απεσταγμένο νερό, μέχρι τα 1000 ml και διατηρούμε το αντιδραστήριο σε σκούρα φιάλη. 4. Solution of ferroin indicator: Παίρνουμε 1.48 gr O-phenanthroline και 0.695 gr ferrous sulfate heptahydrate (FeSO 4. 7H 2 O) και τα διαλύουμε μαζί σε 50 περίπου ml απεσταγμένου νερού. Κατόπιν αραιώνουμε το διάλυμα, με απεσταγμένο νερό, μέχρι τα 100 ml. 5. Mercury (II) sulfate: Μικροί κρύσταλλοι θειικού υδραργύρου (HgSO 4 ). 6. Potassium hydrogen phtalate standard solution: Χρησιμοποιούμε potassium hydrogen phtalate RPE (H 5 C 8 O 4 K) αποξηραμένο στους 120 ο C και παρασκευάζουμε ένα διάλυμα του, που περιέχει 425 mg σε 1000 ml. Το C.O.D. αυτού του διαλύματος είναι 500 μg Ο 2 ανά ml. Διατηρείται στο ψυγείο σε θερμοκρασία +4 ο C και η διάρκεια ζωής του είναι 3-4 μήνες. viii
3.5. Διαδικασία. 3.5.1. Επώαση δείγματος. Τα αντιδραστήρια και το δείγμα που θα αναλυθεί τοποθετούνται σε καθαρές φιάλες επώασης με την σειρά και στα ποσά που αναφέρονται παρακάτω: 1. mercuric sulfate = 400 mg, 2. dichromate 0.25 N = 10 ml, 3. sulfuric acid = 30 ml, 4. δείγμα = 20 ml. Το ποσό του θειικού υδραργύρου, του μόνου στερεού αντιδραστηρίου, μπορεί να μετρηθεί και με ένα μικρό κουτάλι κατάλληλα ρυθμισμένο, λαμβάνοντας υπ όψιν ότι 100 mg θειικού υδραργύρου συμπλοκοποιούν 10 mg ιόντων χλωριούχων αλάτων (chloride ions). Εάν τα δείγματά μας περιέχουν ιόντα χλωριούχων αλάτων σε μεγαλύτερες συγκεντρώσεις, τότε προσθέτουμε θειικό υδράργυρο σε αναλογία 10 προς 1 κατά βάρος προς τα ιόντα των χλωριούχων αλάτων. Η εμφάνιση ιζήματος μετά την προσθήκη δεν επηρεάζει τα αποτελέσματα. Στην συνέχεια τα φιαλίδια τοποθετούνται στον θερμαντήρα της Velp και θερμαίνονται για 120 λεπτά στους 150 ο C * *. Μετά το τέλος της θέρμανσης αφήνονται να κρυώσουν. 3.5.2. Τιτλοδότηση (ογκομέτρηση) δείγματος. Το περιεχόμενο κάθε φιάλης τοποθετείται σε δοχεία με μεγάλο άνοιγμα και προσθέτουμε σε καθένα από αυτά 5-6 σταγόνες ferroin solution. Μετά την ψύξη το περιεχόμενο κάθε δοχείου τιτλοδοτείται με το ammonium iron sulfate standard solution μέχρι το χρώμα να αλλάξει από γαλάζο-πράσινο σε πορτοκαλί. Ο όγκος, σε ml, του ammonium sulfate που καταναλώθηκε χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό του C.O.D. του εξεταζόμενου δείγματος. * Οι 150 ο C είναι το σημείο βρασμού του διαλύματος θειικού οξέως 50%. ix
3.6. Έλεγχος του όγκου του διαλύματος Ammonium ferrous sulfate standard solution 0.125 N. Ο τίτλος (όγκος) του Ammonium ferrous sulfate standard solution 0.125 N πρέπει να ελέγχεται κάθε μέρα που γίνεται ανάλυση, επειδή αυτός μειώνεται με τον χρόνο. Ο έλεγχος επιτυγχάνεται με την εισαγωγή σε ογκομετρική φιάλη των ακόλουθων όγκων αντιδραστηρίων (για κανονικότητα 0.125): 1. Bichromate 0.25 N = 10 ml, 2. απεσταγμένο νερό = 100 ml, 3. πυκνό θειικό οξύ = 30 ml. Μετά την ψύξη γίνεται τιτλοδότηση με ammonium ferrous sulfate solution μέχρι το χρώμα να γίνει πορτοκαλί. Ο όγκος, σε ml, που χρησιμοποιήθηκε για την τιτλοδότηση αυτή χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό του παράγοντα διόρθωσης. Εάν ο όγκος του διαλύματος (Ammonium ferrous sulfate standard solution 0.125 N) είναι ακριβής, τότε απαιτούνται 20 ml για την τιτλοδότηση, ενώ για χαμηλότερη κανονικότητα απαιτούνται μεγαλύτεροι όγκοι dichromate. Ο παράγοντας διόρθωσης δίνεται από τον τύπο: F = 20/n [1] όπου n είναι ο αριθμός των ml που πραγματικά χρησιμοποιήθηκαν για την τιτλοδότηση του Ammonium ferrous sulfate standard solution 0.125 N. 3.7. Μέτρηση του blank. Η ίδια διαδικασία που χρησιμοποιήθηκε και παραπάνω ( 2.5.2), χρησιμοποιείται για την μέτρηση του ammonium ferrous sulfate standard solution που απαιτείται για να αλλάξει το χρώμα σε ένα όγκο απεσταγμένου νερού. 3.8. Υπολογισμός του C.O.D. Το C.O.D. στο εξεταζόμενο δείγμα υπολογίζεται από τον παρακάτω τύπο x
C.O.D.( mg/l) = (b-a). 8000.N X. F c όπου: b = ml του ammonium ferrous sulfate solution που χρησιμοποιήθηκε για να τιτλοδοτηθεί το blank. a = ml του ammonium ferrous sulfate solution που χρησιμοποιήθηκε για να τιτλοδοτηθεί το εξεταζόμενο δείγμα. Ν = Η κανονικότητα του ammonium ferrous sulfate. X = ml του δείγματος που εξετάζονται. F c = Ο παράγοντας διόρθωσης όμως υπολογίζεται από τον τύπο [1] ( 2.6). Βιβλιογραφία. 1.B.O.D., BIOCHEMICAL OXYGEN DEMAND, (1993), Operation Manual, VELP, SCIENTIFICA, June. 2.C.O.D., CHEMICAL OXYGEN DEMAND, (1991), Operational Manual, VELP SCIENTIFICA, May. 3.Arnold E. Greenberg - Lenore S. Clesceri - Andrew D. Eaton (1992) (Eds), Standar Methods for the examination of water and wastewater, 18th edition,, pp. 4-115 έως 4-116. 4.Σημειώσεις Εργαστηριακών Ασκήσεων στο Μάθημα «ΘΕΜΑΤΑ ΠΡΟΣΤΑΣΙΑΣ ΠΕΡΙΒΑΛΛΟΝΤΟΣ», Υπευθ. καθ.: Ευάγγελος Διαμαντόπουλος, Επιμέλεια: Ελισ. Κουκουράκη - Χημικός, Χανιά 1993, σελ. 16-21. xi