QUANTA Lite ACA Screen III 708620 Για In Vitro Διαγνωστική Χρήση CLIA σύνθετος: ψηλός Σκοπό Χρήση Το QUANTA Lite TM ACA Screen III αποτελεί μια ανοσοπορροφητική ανάλυση συνδεδεμένη με ένζυμο (ELISA) για τον ποσοτικό εντοπισμό αντισωμάτων καρδιολιπινών στον ανθρώπινο ορό. Η παρουσία των αντικαρδιολιπινικών αντισωμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με άλλες ορολογικές εξετάσεις και κλινικά δεδομένα για τον προσδιορισμό της προδιάθεσης για θρομβώσεις σε άτομα με Συστηματικό Ερυθηματώδη Λύκο (ΣΕΛ) ή με νοσήματα παρεμφερή με ΣΕΛ. Περιληψη Και Αρχη Μεθοδου Τα αντικαρδιολιπινικά αντισώματα έχουν συσχετιστεί άμεσα με τη φλεβική και αρτηριακή θρόμβωση. 1 Τα ευρήματα αυτά παρατηρήθηκαν για πρώτη φορά σε μελέτες του Συστηματικού Ερυθηματώδη Λύκου (ΣΕΛ), μια νόσος όπου πολλά συμπτώματα της συμπεριλαμβάνουν θρομβώσεις. Από τα πολλά αυτοαντισώματα που ανιχνεύονται στον ΣΕΛ, δύο έχουν βρεθεί ότι παράγονται έναντι των φωσφολιπιδίων όπως οι καρδιολιπίνες. 2 Αρχη Μεθοδου Το κεκαθαρμένο αντιγόνο καρδιολιπίνης είναι συνδεδεμένο στα πηγαδάκια της μικροπλάκας από πολυστυρένιο υπό συνθήκες όπου διατηρούνται οι φυσικοχημικές ιδιότητες του. Προαραιωμένοι πρότυποι οροί ελέγχου (controls) και αραιωμένα δείγματα ασθενών προσθέτονται στις πηγαδάκια επιτρέποντας τα αντισώματα καρδιολιπίνης να συνδεθούν με το ακινητοποιημένο αντιγόνο. Μη αντιδρώντα αντισώματα ξεπλένονται και προσθέτεται αντι ανθρώπινο IgGAM αντίσωμα συνδεδεμένο με ένζυμο. Η δεύτερη επώαση επιτρέπει την σύνδεση του αντι ανθρώπινου IgGAM αντισώματος με τα σχηματισμένα συμπλέγματα αντισώματος ακινητοποιημένου αντιγόνου καρδιολιπίνης. Στη συνέχεια η προσθήκη υποστρώματος υπεροξειδάσης προκαλεί χρωματική αλλαγή ανάλογη με τη συγκέντρωση των αντισωμάτων καρδιολιπίνης. Μετά τη διακοπή της ενζυματικής παραγωγής χρώματος, η παρουσία ή η απουσία αντισωμάτων καρδιολιπίνης συγκρίνεται με την οπτική πυκνότητα των πρότυπων ορών ελέγχου. Αντιδραστηρια 1. Μικροπλάκα πολυστυρενίου ELISA με επικάλυψη από κεκαθαρμένο αντιγόνο καρδιολιπίνης καθώς και πρωτεΐνη β 2 GPI βοοειδών (12-1 x 8 πηγαδάκια), με βάση σε αλουμινένια συσκευασία που περιλαμβάνει υλικό απορρόφησης της υγρασίας 2. ACA Negative Control, Ένα φιαλίδιο, προαραιωμένο, των 1.2 ml ACA αρνητικός πρότυπο ελέγχου (control) που περιέχει ανθρώπινο ορό αρνητικό για αντισώματα καρδιολιπίνης και συντηρητικά σε ρυθμιστικό διάλυμα 3. ACA III Decision Point, Ένα φιαλίδιο, προαραιωμένο, των 1.2 ml που περιέχει ανθρώπινο ορό θετικό για αντισώματα καρδιολιπίνης και συντηρητικά σε ρυθμιστικό διάλυμα 4. ACA III Screen Control, Ένα φιαλίδιο, προαραιωμένο, των 1.2 ml που περιέχει ανθρώπινο ορό θετικό για αντισώματα καρδιολιπίνης και συντηρητικά σε ρυθμιστικό διάλυμα 5. ACA III Sample Diluent, Ένα φιαλίδιο, χρωματισμένο ροζ, των 50 ml ACA αραιωτικό δειγμάτων που περιέχει PBS ρυθμιστικό φυσιολογικό διάλυμα με σταθεροποιητές πρωτεϊνών και συντηρητικά 5. ACA III PBS Concentrate, Ένα φιαλίδιο των 50 ml ACA συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης PBS 20x, χρώματος ερυθρού. Ανατρέξτε στο τμήμα Μεθόδων για οδηγίες αραίωσης. 6. HRP Conjugate IgGAM (αίγας), αντι-ανθρώπινη IgGAM, 1 φιαλίδιο χρώματος κίτρινος, που περιέχει ρυθμιστικό διάλυμα, σταθεροποιητές πρωτεΐνης και συντηρητικό, 10ml 7. TMB Chromogen, 1 φιαλίδιο που περιέχει σταθεροποιητές, 10ml 8. HRP Stop Soulution, 0.344M θειικό οξύ, 1 φιαλίδιο άχρωμο, 10ml Προσοχή 1. ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΗ: Αυτό το προϊόν περιέχει ένα χημικό (0.02% chloramphenicol) στο αραιωτικό δείγματος, στους ορούς ελέγχου και στο σύζευγμα, το οποίο είναι γνωστό στην Πολιτεία της Καλιφόρνιας ότι προκαλεί καρκίνο. 2. Όλα τα αντιδραστήρια ανθρώπινης προέλευσης κατά τη διάρκεια της προετοιμασίας των μαρτύρων αυτού του προϊόντος έχουν ελεγχθεί και είναι αρνητικά για αντισώματα έναντι HIV, HBsAg, HCV όπως ορίζεται από τους κανονισμούς του FDA. Καμία μέθοδος πάντως δεν είναι σε θέση να αποκλείσει την παντελή απουσία μολυσματικών παραγόντων όπως και για HIV, HBV, HCV. Γι αυτό και όλοι οι ανθρώπινης προέλευσης μάρτυρες θα πρέπει να χρησιμοποιούνται ως δυνητικά μολυσματικά υλικά. 3 3. Το αζίδιο του νατρίου χρησιμοποιείται ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου είναι δηλητήριο και μπορεί να είναι τοξικό σε περίπτωση κατάποσης. Το αζίδιο νατρίου μπορεί να αντιδράσει με μολύβδινες ή χάλκινες σωληνώσεις με αποτέλεσμα την πρόκληση δυνητικά εκρηκτικών μεταλλικών ενώσεων αζιδίων. Αν για την απόρριψη του αντιδραστηρίου χρησιμοποιούνται λεκάνες απόπλυσης, η συγκέντρωση των αζιδίων μπορεί να αποφευχθεί ξεπλένοντας με άφθονο νερό. 4. Το σύζευγμα περιέχει μια δηλητηριώδη/διαβρωτική χημική ουσία η οποία μπορεί να είναι τοξική εάν γίνει κατάποσή της σε μεγάλες ποσότητες. Aποφύγετε πιθανά εγκαύματα αποφεύγετε επαφή με τα μάτια και το δέρμα. 1
5. Το TMB χρωμογόνο περιέχει μία ερεθιστική ουσία που μπορεί να είναι επικίνδυνη εάν την εισπνεύσετε εάν καταποθεί ή εάν απορροφηθεί από το δέρμα. Αποφύγετε κάποιο τραυματισμό, την εισπνοή, κατάποση και επαφή με το δέρμα ή τα μάτια. 6. Το διάλυμα διακοπής της αντίδρασης (Stop Solution) περιέχει θειικό οξύ το οποίο είναι δηλητηριώδες, διαβρωτικό και τοξικό. Για να αποφύγετε χημικά εγκαύματα αποφύγετε την επαφή του με το δέρμα και τα μάτια. 7. Να χρησιμοποιείτε τον κατάλληλο προστατευτικό εξοπλισμό όταν δουλεύετε με τα αντιδραστήρια. 8. Αντιδραστήρια που έχουν χυθεί πρέπει να καθαρίζονται αμέσως. Τηρείτε όλους τους ομοσπονδιακούς, εθνικούς και τοπικούς περιβαλλοντικούς κανονισμούς για την απόρριψη αποβλήτων. Ειδικα Μετρα 1. Αυτό το προϊόν είναι γδια διαγνωστική χρήση In Vitro. 2. Η αντικατάσταση συστατικών με διαφορετικά από τα παρεχόμενα σε αυτό το σύστημα μπορεί να οδηγήσει σε ανακριβή αποτελέσματα. 3. Ανεπαρκές πλύσιμο της μικροπλάκας ή αναποτελεσματική αφαίρεση των διαλυμάτων στα ενδιάμεσα στάδια μπορεί να επηρεάσει την ακρίβεια της μεθόδου. 4. Η λειτουργία αυτής της μεθόδου σε αυτόματο αναλυτη καί άλλες συσκευές διανομής, μπορεί να δώσει διαφορετικά αποτελέσματα απο αυτά που αποκτώνται στη χειρωνακτική διαδικασία. Είναι στήν ευθύνη του κάθε εργαστηρίου να καθορίσει τις αποδεκτές τιμές και όρια της αυτόματης διαδικασίας. 5. Μια ποικιλία παραγόντων μπορεί να επηρεάσει την απόδοση της μεθόδου: Η θερμοκρασία των αντιδραστηρίων, η θερμοκρασία του εργαστηριακού χώρου, η ακρίβεια και επαναληψιμότητα του πιπεταρίσματος, η πλύση και η αφαίρεση των διαλυμάτων από τη μικροπλάκα, η ποιότητα του φωτόμετρου, οι χρόνοι επώασης. Προσεκτική τήρηση της διαδικασίας είναι απαραίτητη για ακριβή και επαναλήψιμα αποτελέσματα. 6. Συνιστάται η ακριβής τήρηση του πρωτοκόλλου. 7. Ανεπαρκής συντήρηση της μικροπλάκας (κλείσιμο της αχρησιμοποίητης πλάκας) μπορεί να προκαλέσει αποδομή του συνδεδεμένου αντιγόνου και αποτελέσματα χαμηλής ακρίβειας. 8. Μη αποδεκτές χαμηλές τιμές απορρόφησης μπορεί να παρατηρηθούν αποδύο η περισσότερες χρήσεις της σφαιρίνης απο το ίδιο φιαλίδιο. Είναι σημαντικό να ακολουθείτε τις οδηγίες χρήσης της σφαιρίνης. 9. Χημική μόλυνση της σφαιρίνης μπορεί να προέλθει απο ανεπαρκή καθαρισμό των τμημάτων διανομής των αναλυτών. Κατάλοιπα απο εργαστηριακά χημικά όπως φορμαλίνη, χλωρίνη, εθανόλη, η απορρυπαντικά θα προκαλέσουν υποβιβασμό της σφαιρίνης με το χρόνο. Συνιστάται ο καθαρισμός των οργάνων και συσκευών μετα τη χρήση χημικών καθαριστικών. Αποθήκευση 1. Αποθηκεύσατε τα αντιδραστήρια στους 2-8 ο C. Να μήν παγώνουν. Είναι σταθερά για χρήση μέχρι τη λήξη τους εάν αποθηκεύονται συμφωνα με τις οδηγίες. 2. Οι μη χρησιμοποιούμενες σειρές επικαλυμένων με αντιγόνο πηγαδιών πρέπει να ασφαλίζονται στην αλουμινένια συσκευασία τους, η οποία περιέχει απορροφητικό υγρασίας, και να φυλάσονται στούς 2-8 ο C. 3. Το αραιωμένο διάλυμα πλύσης είναι σταθερό για μία εβδομάδα στούς 2 8 ο C. Δείγματα Η διαδικασία μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με δείγματα ορού. Η προσθήκη αζιδίου η άλλων συντηριτικών στο υποό έλεγχο δείγμα μπορεί να επιρεάσει τα αποτελέσματα.μικροβιακή μόλυνση, θέρμανση η δείγματα περιέχοντα ορατά ξένα στοιχεία δέν πρέπει να χρησιμοποιούνται. Αιμολυθέντα η λιπαιμικά δείγματα η ορός πρέπει να αποφεύγονται. Μετά τη συλλογή του δείγματος, ο ορός θα πρέπει να διαχωρίζεται άμεσα από το ολικό αίμα. CLSI (NCCLS) Document H18-A3 προτείνει τις παρακάτω συνθήκες συντήρησης και αποθήκευσης των δειγμάτων: Τα δείγματα πρέπει να διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 8 ώρες. Σε περίπτωση που η δοκιμασία δεν πραγματοποιηθεί άμεσα, τότε τα δείγματα μπορούν να διατηρηθούν σε θερμοκρασία συντήρησης (2 8 ο C) μέχρι 48 ώρες. Για μεγαλύτερο διάστημα, τα δείγματα θα πρέπει να καταψυχθούν στους 20 ο C. Τα κατεψυγμένα δείγματα πρέπει να αναμιχθούν καλά μετά την απόψυξη και πριν από την εξέταση. Διαδικασία Υλικά που παρέχονται 1 ACA ELISA μικροπλάκα (12-1x8 πηγαδάκια) με βάση 1 1.2 ml ACA αρνητικός πρότυπο ελέγχου (control) (έτοιμος προς χρήση) 1 1.2mL αραιωμένος ACA III Decision Point (έτοιμος προς χρήση) 1 1.2mL αραιωμένος ACA III Screen Control Θετικός πρότυπος ορός ελέγχου (έτοιμος προς χρήση) 1 50 ml ACA III αραιωτικό δειγμάτων που περιέχει PBS 1 50 ml ACA III συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης PBS 20x 1 10ml HRP Conjugate, HRP Σύζευγμα IgG (αίγας), 1 10ml TMB Chromogen, TMB Χρωμογόνο 1 10ml HRP Stop Solution, HRP Διάλυμα διακοπής, 0.344M θεεινικό οξύ 2
Αντιδραστήρια και εξοπλισμός που δεν συμπεριλαμβάνονται Μικροπιπέτες ρυθμιζόμενου όγκου 5, 100, 200 300 και 500 μl Απορριπτόμενα ρύγχη για μικροπιπέττες Σωληνάρια για την διάλυση δειγμάτων των ασθενών όγκου 4 ml Αποσταγμένο ή μη ιονισμένο νερό 1L δοχείο για το διάλυμα ACA III Wash Concentrate (Διάλυμα πλυσίματος) Φωτόμετρο μέτρησης της μικροπλάκας με δυνατότητα φίλτρου στα 450 και 620 nm Μεθοδολογια Πριν ξεκινήσετε 1. ΣΗΜΑΝΤΙΚΟΣ: Όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου (20-26 C) και να έχουν αναδευτεί καλά. 2. Αραιώστε το συμπυκνωμένο PBS 1:20 προσθέτοντας το περιεχόμενο του φιαλιδίου PBS σε 950 ml απεσταγμένου νερού. Σε περίπτωση που δέν θα χρησιμοποιήσετε ολόκληρη τη μικροπλάκα μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μικρότερη ποσότητα ετοιμάζοντας 4 ml συμπυκνωμένου PBS και 76 ml απεσταγμένου νερού για κάθε 16 πηγαδάκια. 3. Ετοιμάστε τις αραιώσεις 1:101 των δειγμάτων υπό εξέταση προσθέτοντας 5 μl ορού σε 500μl αραιωτικό δείγματος. Η προετοιμασία των δειγμάτων θα πρέπει να γίνεται εντός 8 ωρών. Τα διαλύματα αναφοράς, οι μάρτυρες και ο αρνητικός μάρτυρας δεν χρειάζονται αραίωση. 4. Για την αποτελεσματικότερη ακρίβεια των αποτελεσμάτων προτείνεται η εις διπλούν τοποθέτηση όλων των διαλυμάτων αναφοράς, πρότυπων ορών ελέγχου και δειγμάτων. Συνιστάται η επανάληψη της εξέτασης των δειγμάτων. Διαδικασία 1. Όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα θα πρέπει να βρίσκονται σε θερμοκρασία δωματίου και να έχουν αναδευτεί καλά. Υπολογίστε τον απαραίτητο αριθμό πηγαδίων που απαιτούνται, και φυλάξτε τις υπόλοιπες στην ειδική θήκη την οποία θα πρέπει να την κλείσετε καλά ώστε να προστατέψετε την μικροπλάκα από την υγρασία. 2. Προσθέστε 100 μl από τα δείγματα αναφοράς, τους πρότυπους ορούς και τα αραιωμένα δείγματα υπό έλεγχο στις προκαθορισμένες θέσεις. Καλύψτε την μικροπλάκα και επωάστε για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Ο χρόνος επώασης ξεκινάει με τη προσθήκη του τελευταίου δείγματος. 3. Πλύση: Ξεπλύνετε καλά κάθε πηγαδάκι από τα περιεχόμενα. Προσθέστε 200-300µL αραιωμένου ρυθμιστικού διαλύματος ACA III PBS σε όλα τα πηγαδάκια και ξεπλύνετε. Επαναλάβετε τη διαδικασία δύο ακόμα φορές, για τρεις πλύσεις συνολικά. Αναποδογυρίστε την μικροπλάκα και τινάξτε την σε απορροφητικό υλικό για να αφαιρέσετε το εναπομείναν υγρό κατόπιν της τελικής πλύσης. Είναι σημαντικό κάθε πηγαδάκι να είναι εντελώς άδειο μετά από κάθε πλύση. Ακολουθήστε την ίδια διαδικασία για την πλύση όπως και για την προσθήκη των δειγμάτων. 4. Προσθέστε 100 μl HRP IgGAM συζεύγματος σε όλες τις πηγαδάκια Το σύζευγμα πρέπει να αφαιρεθεί από τα φιαλίδια χρησιμοποιώντας τυπικές ασηπτικές συνθήκες και καλές εργαστηριακές πρακτικές. Αφαιρέστε από το φιαλίδιο την ποσότητα συζεύγματος που είναι απαραίτητη για την ανάλυση. ΠΡΟΣ ΑΠΟΦΥΓΗ ΕΝΔΕΧΟΜΕΝΗΣ ΜΙΚΡΟΒΙΟΛΟΓΙΚΗΣ Ή/ΚΑΙ ΧΗΜΙΚΗΣ ΜΟΛΥΝΣΗΣ, ΔΕΝ ΠΡΕΠΕΙ ΠΟΤΕ ΝΑ ΕΙΣΑΓΕΤΕ ΞΑΝΑ ΣΤΟ ΦΙΑΛΙΔΙΟ ΤΗΝ ΠΟΣΟΤΗΤΑ ΣΥΖΕΥΓΜΑΤΟΣ ΠΟΥ ΔΕΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΘΗΚΕ. Πραγματοποιήστε επώαση στα πηγαδάκια για 30 λεπτά, όπως στο βήμα 2. 5. Πλύση: Επαναλάβετε το βήμα 3. 6. Προσθέστε 100 μl TMB χρωμογόνου και επωάστε τη μικροπλάκα για 30 λεπτά σε σκοτεινό μέρος. 7. Προσθέστε 100µL διαλύματος διακοπής αντίδρασης (HRP Stop Solution) σε κάθε πηγαδάκι. Ακολουθήστε την ίδια διαδικασία και πρόγραμμα του πρόσθετου διαλύματος διακοπής της αντίδρασης (HRP Stop Solution) όπως χρησιμοποιήθηκε για το χρωμογόνο TMB. Τινάξτε ελαφρά την μικροπλάκα με το δάκτυλο, για να αναμιχθούν εκτενώς τα πηγαδάκια. 8. Η μέτρηση της οπτικής πυκνότητας των δειγμάτων θα πρέπει να γίνει εντός μίας ώρας από το τέλος της διαδικασίας, σε φωτόμετρο στα 450 nm και αναφοράς 620 nm. Ποιοτικός έλεγχος 1. Τα διαλύματα αναφοράς, οι πρότυποι οροί θα πρέπει να χρησιμοποιούνται σε κάθε ανοσοενζυμική διαδικασία έτσι ώστε να εξασφαλίζεται ότι τα αντιδραστήρια και οι διαδικασίες λειτουργούν σωστά. 2. Τα διαλύματα αναφοράς, οι πρότυποι οροί είναι ήδη αραιωμένοι. Γι αυτό το λόγο δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως μέτρο ελέγχου της διαδικασίας αραίωσης των αντιδραστηρίων. 3. Επιπλέον κατάλληλοι οροί, μάρτυρες, θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν από δείγματα ρουτίνας τα οποία θα αποθηκεύονται στη βαθιά κατάψυξη. πολιτειακών και\ ή των ομοσπονδιακών κανονισμών ή επικυρωμένων οργανισμών. Μπορείτε να ετοιμάσετε επιπλέον απαραίτητο ορό μάρτυρα διαιρώντας σε ίσα μέρη τα δείγματα ανθρώπινου ορού που βρίσκεται στα πηγαδάκια και φυλάσσοντας στους -20 C. 4. Για να θεωρηθούν τα αποτελέσματα έγκυρα θα πρέπει να ισχύουν τα παρακάτω κριτήρια. Στη περίπτωση που κάποιο κριτήριο δεν ισχύσει τότε θα πρέπει να επαναληφθεί η διαδικασία. α. Η απορρόφηση του διαλύματος αναφοράς ΑCA III Screen Control θα πρέπει να είναι μεγαλύτερη από την απορρόφηση του ACA III Decision Point η οποία θα πρέπει να είναι μεγαλύτερη από την απορρόφηση του ACA Negative Control. β. Η απορρόφηση του διαλύματος αναφοράς ΑCA III Screen Control θα πρέπει να είναι μεγαλύτερη από 1.0 ενώ η απορρόφηση του αρνητικού πρότυπου ορού δεν θα πρέπει να υπερβαίνει το 0.2. 3
γ. Η απορρόφηση του ορού ελέγχου ACA III Decision Point πρέπει να είναι δύο φορές εκείνη του αρνητικού ορού ελέγχου ACA Negative Control ή πάνω από 0.25. δ. Ο ACA Negative Control και ο ACA III Screen Control δείχνουν την εγκυρότητα της διαδικασίας. Ο υψηλός θετικός δέν αντιστοιχεί στό σημείο αποκοπής της μεθόδου. ε. Ο χρήστης θα πρέπει να παραπέμπεται στις οδηγίες που δίνονται από το CLSI (NCCLS) C24-A3 κείμενο για επιπλέον πληροφορίες στα θέματα ποιοτικού ελέγχου. Υπολογισμός Αποτελεσμάτων 1. Υπολογίστε τη μέση τιμή σε όλες τις εις διπλούν μετρήσεις της οπτικής πυκνότητας των δειγμάτων. 2. Συγκρίνετε τη μέση απορρόφηση κάθε δείγματος με αυτήν του σημείου απόφασης. Όλα τα δείγματα που είναι ίσα με ή μεγαλύτερα από αυτή την απορρόφηση στο σημείο απόφασης δυνητικά περιέχουν αντισώματα IgG, A ή M ACA ή κάποιο συνδυασμό. Συνιστάται να επαναληφθεί αυτή η εξέταση των δειγμάτων για τον προσδιορισμό συγκεκριμένων συγκεντρώσεων αντισωμάτων IgG, IgM και IgA έναντι αντικαρδιολιπινών. Ο ορός ελέγχου διαλογής ACA III πρέπει να χρησιμοποιείται μόνο για να καθοριστεί αν το σύστημα δοκιμής λειτουργεί σωστά. Το σημείο απόφασης ACA III δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη λήψη ποσοτικών αποτελεσμάτων σε αυτό το σύστημα. Ερμηνεία των Αποτελεσμάτων Η τεχνική ELISA είναι πολύ ευαίσθητη και ικανή να ανιχνεύει μικρές διαφορές στον ασθενή πλυθησμό. Οι κατωτέρω είναι ενδεικτικές τιμές.κάαθε εργαστήριο πρέπει να καθορίσει τίς δικές του τιμές αναφοράς βάσει τών τεχνικών,ελέγχων,πλυθισμού κ.λ.π. Τα δείγματα που βρέθηκαν θετικά με το QUANTA Lite ACA Screen III πρέπει να εξεταστούν ξανά για ειδικά IgG, IgM ή IgA έναντι ACA και να καθοριστούν οι μονάδες GPL, MPL ή APL. ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Αναμένονται ορισμένα ψευδή θετικά αποτελέσματα κατά τη σύγκριση των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται με το ACA Screen III και τις ειδικές δοκιμές αντισωμάτων IgG, IgA και IgM έναντι αντικαρδιολιπινών. Για τη δοκιμασία ανίχνευσης έχει προβλεφθεί ένας μικρός βαθμός υπερευαισθησίας ως περιθώριο, ώστε να διασφαλιστεί ότι θα εντοπιστούν ακόμα και τα ασθενή θετικά δείγματα. Επιπλέον, ορισμένα δείγματα μπορεί να έχουν χαμηλές συγκεντρώσεις αντισωμάτων IgG, IgA και IgM έναντι αντικαρδιολιπινών ώστε να βρεθούν κάτω από τη θετική οριακή τιμή κάθε μεμονωμένης εξέτασης. Ωστόσο το πρόσθετο αποτέλεσμα μπορεί να έχει θετικά αποτελέσματα για την ανάλυση ACA Screen III. Περιορισμοί της Μεθόδου 1. Η κλινική σημασία της ανίχνευσης των αντικαρδιολιπινικών αντισωμάτων σε άλλα νοσήματα πέραν του ΣΕΛ είναι ακόμα υπό διερεύνηση. 2. Όταν βρεθεί αρνητική ισχύς διαλύματος ACA παρουσία των κλινικών ενδείξεων, ίσως χρειαστεί δοκιμασία για κύτταρα λύκου ή άλλη δοκιμασία, όπως για αντισώματα anti-β 2 GPI. 3. Η ανεύρεση αντισωμάτων καρδιολιπίνης δεν μπορεί να θεωρηθεί διαγνωστικός δείκτης. Τα θετικά αποτελέσματα θα πρέπει να αξιολογούνται σε συνδυασμό με τα κλινικά στοιχεία. 4. Η θεραπευτική αγωγή δεν μπορεί να βασίζεται μόνο στην ανεύρεση αντισωμάτων καρδιολιπίνης. 5. Μερικοί ποσοστό ατόμων με ενεργή ή οροθετική σύφιλη έχουν θετικά ACA. Γι αυτό το λόγο θα πρέπει να γίνεται επιβεβαιωτικός έλεγχος που να αποκλείει την περίπτωση της σύφιλης. 6. Τα ACA μπορεί να εμφανιστούν παροδικά σε περίπτωση μόλυνσης. Στην περίπτωση θετικών αποτελεσμάτων προτείνεται επανέλεγχος με τη πάροδο κάποιου λογικού χρονικού διαστήματος. 7. Η ύπαρξη ρευματειδούς παράγοντα μπορεί να επηρεάσει τη ανίχνευση των IgM τάξης ACA. 8. Ορισμένα δείγματα μπορεί να έχουν χαμηλές συγκεντρώσεις αντισωμάτων IgG, IgA και IgM έναντι αντικαρδιολιπινών ώστε να βρεθούν κάτω από τη θετική οριακή τιμή κάθε μεμονωμένης εξέτασης. Ωστόσο το πρόσθετο αποτέλεσμα μπορεί να έχει θετικά αποτελέσματα για την ανάλυση ACA Screen III. 9. Η παρουσία των άνοσων συμπλεγμάτων ή άλλων ανοσοσφαίρινων στο δείγμα του ασθενή μπορεί να προκαλέσει ένα αυξημένο επίπεδο μη-συγκεκριμένης σύνδεσης και να παράγουν ψευδή θετικά σε αυτή την ανάλυση. 10. Τα αποτελέσματα αυτής της μεθόδου δέν έχουν ελεγχθεί σάν ακριβεί γιά δείγματα εκτός ορού. 11. Τα αποτελέσματα αυτής της ανάλυσης θα πρέπει να χρησιμοποιούνται από κοινού με κλινικά ευρήματα και άλλες ορολογικές εξετάσεις. 12. Αν το διάλυμα ACA III PBS Concentrate δεν θερμανθεί και δεν αναμιχθεί καλά πριν από τη χρήση, μπορεί να προκύψουν ασταθή αποτελέσματα. Αναμενόμενες Τιμές Φυσιολογικές τιμές Εξετάστηκαν 491 δείγματα ορών από τυχαίους, φυσιολογικούς αιμοδότες για την παρουσία αντισωμάτων έναντι καρδιολιπινών. Από αυτά, τα 468 βρέθηκαν αρνητικά. 21 δείγματα ήταν ασθενώς θετικά και 2 ισχυρώς θετικά. Από αυτά τα 23 θετικά δείγματα, τα 5 ήταν ισχυρώς θετικά για αντισώματα IgG (>20GPL), τα 4 ήταν ακαθόριστα για αντισώματα IgM (<20MPL) και τα 6 ήταν ισχυρώς θετικά για αντισώματα IgM (>20 MPL) έναντι αντικαρδιολιπινών με ειδικές εξετάσεις παρακολούθησης. 7 4
Ευαισθησία και Ειδικότητα Συσχετισμός με το Screen έναντι ACA δεύτερης γενιάς της INOVA Εξετάστηκαν συνολικά 625 δείγματα για Screen έναντι ACA δεύτερης γενιάς και Screen έναντι ACA τρίτης γενιάς. Αυτά τα δείγματα περιλαμβάνουν 491 δείγματα από φυσιολογικούς δότες που αναφέρονται στη μελέτη Normal Range καθώς και 135 δείγματα από εξεταζόμενους που είναι θετικοί ή ακαθόριστοι σε αντισώματα IgG, IgM ή/και IgA έναντι καρδιολιπινών. Τα αποτελέσματα συνοψίζονται παρακάτω. QUANTA Lite ACA Screen III (τρίτης γενιάς) - + - 469 13 Σχετική Ευαισθησία 94.4% ACA Screen ELISA Σχετική Ειδικότητα 97.3% δεύτερης γενιάς + 8 136 Σχετική Ευκρίνεια 96.6% Ακρίβεια και Αναπαραγωγικότητα Η επαναληψιμότητα μεταξύ των εκτελέσεων και η αναπαραγωγιμότητα της ανάλυσης μετρήθηκε μέσω της εκτέλεσης δύο αντιγράφων, ενός θετικού και ενός Aρνητικός, σε τέσσερις ξεχωριστές αναλύσεις, τέσσερις διαφορετικές ημέρες. Η επαναληψιμότητα κατά τη διάρκεια της εκτέλεσης και η αναπαραγωγιμότητα της ανάλυσης μετρήθηκε μέσω της εκτέλεσης δεκαέξι αντιγράφων, ενός θετικού και ενός Aρνητικός, σε μία μεμονωμένη ανάλυση. Η μέση τιμή, τυπική απόκλιση και συντελεστής διακύμανσης για κάθε δείγμα συνοψίζονται παρακάτω. Θετικό Aρνητικός μέση τιμή OD SD %CV μέση τιμή OD SD %CV Σύνολο 2.671 0.065 2.4% 0.203 0.008 3.9% Εντός Διαδικασίας 2.702 0.056 2.1% 0.189 0.004 2.4% Ενδιάμεσα της Διαδικασίας 2.641 0.074 2.8% 0.217 0.012 5.4% Βιβλιογραφία 1. Lancet i, 912-913 (1985). 2. Clinics in Rheumatic Diseases 8, 137-151 (1982). 3. Centers for Disease Control/National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition, 2007. QUANTA Lite και INOVA Diagnostics είναι σήματα κατατεθέντα Copyright 2011 All Rights Reserved Κατασκευαστής: INOVA Diagnostics, Inc. 9900 Old Grove San Diego, CA 92131 United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : 877-829-4745 Technical Service (Outside the U.S.) : 00+ 1 858-805-7950 support@inovadx.com Aντιπροσωπευτικός: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D-66386 St. Ingbert, Germany Tel.: +49-6894-581020 Fax.: +49-6894-581021 www.mt-procons.com 628620GRC July 2011 Revision 15 5