cobas MPX Πολλαπλή εξέταση νουκλεϊκών οξέων των HIV, HCV και HBV για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800 Για διαγνωστική χρήση in vitro

Πολλαπλή εξέταση νουκλεϊκών οξέων των HIV, HCV και HBV για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800 Για διαγνωστική χρήση in vitro cobas MPX 96 P/N: 06997708190 cobas MPX 480 P/N: 06997716190 cobas MPX Control Kit P/N: 06997724190 cobas NHP Negative Control Kit P/N: 07002220190

Πίνακας περιεχομένων Προβλεπόμενη χρήση... 4 Σύνοψη και επεξήγηση της εξέτασης... 4 Αντιδραστήρια και υλικά... 7 Αντιδραστήρια και οροί ελέγχου cobas MPX... 7 Αντιδραστήρια cobas omni για προετοιμασία δειγμάτων... 11 Απαιτήσεις φύλαξης και χειρισμού αντιδραστηρίων... 12 Πρόσθετα απαιτούμενα υλικά... 13 Όργανα και λογισμικό που απαιτούνται... 13 Προφυλάξεις και απαιτήσεις χειρισμού... 14 Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις... 14 Χειρισμός αντιδραστηρίων... 15 Ορθή εργαστηριακή πρακτική... 15 Συλλογή, μεταφορά, φύλαξη και δεξαμενοποίηση δειγμάτων... 16 Δείγματα αίματος ζώντων δοτών... 16 Πτωματικά δείγματα αίματος... 18 Οδηγίες χρήσης... 19 Αυτόματη μεταφορά δειγμάτων με πιπέτα και δεξαμενοποίηση δειγμάτων (προαιρετικά)... 19 Σημειώσεις διαδικασίας... 19 Εκτέλεση της εξέτασης cobas MPX... 19 Αποτελέσματα... 20 Ποιοτικός έλεγχος και εγκυρότητα των αποτελεσμάτων... 20 Ερμηνεία των αποτελεσμάτων... 21 Επανάληψη εξέτασης μεμονωμένων δειγμάτων... 21 Περιορισμοί της διαδικασίας... 21 Αξιολόγηση απόδοσης μη κλινικών δειγμάτων... 22 Κύρια χαρακτηριστικά απόδοσης... 22 Δείγματα ζώντων δοτών... 22 Όριο ανίχνευσης (LoD)... 22 Αναπαραγωγιμότητα... 26 Doc Rev. 3.0 2

Επαλήθευση γονότυπου... 29 Δείγματα ποιοτικού ελέγχου ορομετατροπής... 34 Αναλυτική ειδικότητα... 37 Αναλυτική ειδικότητα παρεμβαλλόμενες ουσίες... 38 Συσχέτιση... 39 Ολική αστοχία συστήματος... 40 Διασταυρούμενη Μόλυνση... 40 Δείγματα πτωματικών δοτών... 41 Ευαισθησία... 41 Ειδικότητα... 42 Αναπαραγωγιμότητα... 43 Πρόσθετες πληροφορίες... 46 Βασικά χαρακτηριστικά εξέτασης... 46 Κατασκευαστής και διανομείς... 48 Εμπορικά σήματα και διπλώματα ευρεσιτεχνίας... 48 Copyright... 48 Βιβλιογραφία... 49 Αναθεώρηση εγγράφου... 51 cobas MPX Doc Rev. 3.0 3

Προβλεπόμενη χρήση cobas MPX Η εξέταση cobas MPX είναι μια in vitro εξέταση ποιοτικού προσδιορισμού για την άμεση ανίχνευση RNA του ιού ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας τύπου 1 (HIV-1) ομάδας M, RNA του HIV-1 ομάδας O, RNA του ιού ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας τύπου 2 (HIV-2), RNA του ιού ηπατίτιδας C (HCV) και DNA του ιού ηπατίτιδας B (HBV) σε ανθρώπινο πλάσμα και ορό. Η παρούσα εξέταση προορίζεται για τον έλεγχο δειγμάτων δοτών για RNA του HIV-1 ομάδας M, RNA του HIV-1 ομάδας O, RNA του HIV-2, RNA του HCV και DNA του HBV σε δείγματα ανθρώπινου πλάσματος και ορού από μεμονωμένους δότες, συμπεριλαμβανομένων δοτών ολικού αίματος και συστατικών αίματος, καθώς και άλλων ζώντων δοτών. Η εξέταση αυτή προορίζεται επίσης για τον έλεγχο δοτών οργάνων και ιστών, όταν τα δείγματα δοτών λαμβάνονται από ζώντες δότες, καθώς και για δείγματα από πτωματικούς (νεκρούς) δότες. Το πλάσμα και ο ορός όλων των δοτών μπορεί να ελεγχθεί με τη μορφή μεμονωμένων δειγμάτων. Για δείγματα δοτών ολικού αίματος και συστατικών αίματος, τα δείγματα πλάσματος και ορού μπορούν να εξεταστούν μεμονωμένα ή μπορεί να γίνει εξέταση του πλάσματος σε δεξαμενές αποτελούμενες από κλάσματα μεμονωμένων δειγμάτων. Για δείγματα δοτών προερχόμενα από πτωματικούς (νεκρούς) δότες οργάνων και ιστών, τα δείγματα μπορούν να εξεταστούν μόνο ως μεμονωμένα δείγματα. Για ένα μεμονωμένο δείγμα, πραγματοποιείται ταυτόχρονα ανίχνευση και διάκριση των αποτελεσμάτων για HIV, HCV και HBV. Η εξέταση cobas MPX μπορεί να θεωρηθεί ως μια συμπληρωματική εξέταση που επιβεβαιώνει τη μόλυνση από HIV σε δείγματα που εμφανίζονται επανειλημμένως ως αντιδρώντα σε εξέταση CE-IVD για αντισώματα έναντι του HIV και αντιδρώντα στην εξέταση cobas MPX. Η εξέταση cobas MPX μπορεί να θεωρηθεί ως μια συμπληρωματική εξέταση που επιβεβαιώνει τη μόλυνση από HCV σε δείγματα που εμφανίζονται επανειλημμένως ως αντιδρώντα σε εξέταση CE-IVD για αντισώματα έναντι του HCV και αντιδρώντα στην εξέταση cobas MPX. Η εξέταση cobas MPX μπορεί να θεωρηθεί ως μια συμπληρωματική εξέταση που επιβεβαιώνει τη μόλυνση από HBV σε δείγματα που εμφανίζονται επανειλημμένως ως αντιδρώντα σε εξέταση CE-IVD για επιφανειακό αντιγόνο της ηπατίτιδας B και αντιδρώντα στην εξέταση cobas MPX. Η εξέταση αυτή δεν προορίζεται για χρήση ως βοήθημα στη διάγνωση λοίμωξης από HIV, HCV ή HBV. Σύνοψη και επεξήγηση της εξέτασης Ιστορικό: Ανοσοαιματολογικός έλεγχος για ιικές λοιμώξεις μεταδιδόμενες με τη μετάγγιση Ένα σημαντικό πρόβλημα που αφορά τη μετάγγιση αίματος και συστατικών αίματος είναι η πιθανότητα μετάδοσης ιικών λοιμώξεων, και συγκεκριμένα λοιμώξεων από τον ιό ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας τύπου 1 (HIV-1) και τύπου 2 (HIV-2), τον ιό της ηπατίτιδας C (HCV) και τον ιό της ηπατίτιδας B (HBV). Αυτοί οι παράγοντες μεταδίδονται κυρίως με έκθεση σε μολυσμένο αίμα ή παράγωγα αίματος και πλάσματος, με έκθεση σε ορισμένους σωματικούς ιστούς ή υγρά, με τη σεξουαλική επαφή ή από τη μολυσμένη μητέρα στο νεογνό. Ο HIV-1 επικρατεί σε παγκόσμιο επίπεδο, με εκτιμώμενο συνολικό επιπολασμό 1,1% (0,56% στη Βόρεια Αμερική και 0,25% στη Δυτική Ευρώπη). 1 Άτομα που έχουν προσβληθεί από HIV-1 μπορεί να εμφανίσουν μια σύντομη, αρχικά οξεία ασθένεια με συμπτώματα γρίπης, η οποία θα συσχετίζεται με υψηλά επίπεδα ιαιμίας στο περιφερικό αίμα εντός 3 έως 6 εβδομάδων από την αρχική μόλυνση. Επί του παρόντος υπάρχουν τρεις βασικές γενετικές ομάδες για τον HIV-1: Ομάδα M (main), Ομάδα N (non-m-non-o), και Ομάδα O (outlier). Η ομάδα M εμφανίζει εξαιρετικά υψηλό επιπολασμό και χωρίζεται σε 9 υποτύπους, καθώς και σε διάφορες κυκλοφορούσες ανασυνδυασμένες μορφές του ιού (CRF). 2-4 Ο ιός HIV-2 απομονώθηκε για πρώτη φορά το 1986 σε ασθενείς στη Δυτική Αφρική. Οι ιοί HIV-1 και HIV-2 έχουν τον ίδιο τρόπο μετάδοσης και σχετίζονται με παρόμοιες ευκαιριακές λοιμώξεις και το Σύνδρομο επίκτητης ανοσοανεπάρκειας (AIDS). 5, 6 Ο επιπολασμός του HIV-2 σε ορισμένα αφρικανικά κράτη υπερβαίνει το 1%, ενώ τα ποσοστά του HIV-2 αυξάνονται ανησυχητικά σε ορισμένες περιοχές της Ευρώπης και της Ινδίας. 7-11 Doc Rev. 3.0 4

Ο HCV θεωρείται ως ο κύριος αιτιολογικός παράγοντας που ευθύνεται για το 90% έως 95% των περιστατικών ηπατίτιδας κατόπιν μετάγγισης, τα οποία δεν αναγνωρίζονται ως περιστατικά ηπατίτιδας A ούτε ηπατίτιδας B. 12-14 Σύμφωνα με αναφορές, ο επιπολασμός του HCV κυμαίνεται από 0,5 έως 2,0% στη Δυτική Ευρώπη 15 και μεταξύ 6% και 40% στην Αίγυπτο. 16 Περισσότερα από 2 δισεκατομμύρια άτομα που βρίσκονται σήμερα εν ζωή μολύνθηκαν με τον ιό HBV κάποια στιγμή στη ζωή τους. Από αυτά, περίπου 350 εκατομμύρια είναι χρόνιοι φορείς του ιού. 17-19 Τόσο ο HCV όσο και ο HBV μπορούν να επιφέρουν χρόνια ηπατική νόσο και αποτελούν την πιο συνήθη αιτία κίρρωσης του ήπατος και καρκίνου στο ήπαρ, καθώς ευθύνονται για το 78% των περιστατικών σε παγκόσμιο επίπεδο. 20 Σκεπτικό για την εξέταση NAT Οι μέθοδοι ορολογικής εξέτασης έχουν μειώσει σημαντικά, αλλά δεν έχουν εξαλείψει, τον κίνδυνο μετάδοσης ιικών λοιμώξεων μέσω της μετάγγισης αίματος και προϊόντων αίματος. Η εξέταση δειγμάτων δοτών ολικού αίματος και πλάσματος (που λαμβάνεται με πλασμαφαίρεση) για HBV ξεκίνησε με τις αναλύσεις για HBsAg στις αρχές της δεκαετίας του '70 και συνεχίστηκε με τις αναλύσεις για anti-hbc τη δεκαετία του '80. Εκτός από την εξέταση για HBV, τα δείγματα δοτών αίματος και πλάσματος ελέγχονται στο πλαίσιο των εξετάσεων ρουτίνας για αντισώματα έναντι του HIV και του HCV, με τη χρήση ενζυμικών ανοσοπροσδιορισμών (EIA). 21,22 Υπολειπόμενος κίνδυνος μετάδοσης υφίσταται σε σχέση με τη λήψη αίματος από δότες κατά τη χρονική διάρκεια της ορομετατροπής, η οποία εκτιμάται ότι αντιστοιχεί σε 19 ημέρες για τον HIV-1, 65 ημέρες για τον HCV και 36 ημέρες για τον HBV. 23 Η εξέταση για νουκλεϊκά οξέα των ιών (RNA του HIV-1, RNA του HCV και DNA του HBV), με χρήση της τεχνολογίας ενίσχυσης νουκλεϊκών οξέων (NAT), μπορεί να μειώσει σημαντικά αυτόν τον κίνδυνο. 24,25 Έπειτα από την εισαγωγή της εξέτασης NAT, ο τρέχων υπολειπόμενος κίνδυνος μετάδοσης των ιών από μετάγγιση στις ΗΠΑ είναι 1:1,5 εκατομμύρια για τον HIV-1, 1:1,2 εκατομμύρια για τον HCV και 1:280.000 1:355.000 για τον HBV. 26,27 Παρόμοιες εκτιμήσεις ισχύουν για τη Γερμανία, όπου η εξέταση NAT εισήχθη το 1999 και ο εκτιμώμενος υπολειπόμενος κίνδυνος μετάδοσης λοιμώξεων από μετάγγιση είναι 1:4,3 εκατομμύρια για τον HIV-1, 1:10,9 εκατομμύρια για τον HCV και 1:360.000 για τον HBV. 24 Επιπλέον, στην περίπτωση του HBV, η εξέταση NAT αποκλείει και δότες με λανθάνουσα λοίμωξη από HBV, κατά την οποία το DNA του HBV είναι ανιχνεύσιμο, αλλά δεν ανιχνεύεται HBsAg, 28 καθώς και εμβολιασμένους δότες που εμφανίζουν λοίμωξη παρά τον εμβολιασμό, σε υποκλινική μορφή. 29-31 Επεξήγηση της εξέτασης Η εξέταση cobas MPX είναι μια πολλαπλή εξέταση ποιοτικού προσδιορισμού που εκτελείται στο σύστημα cobas 6800 και στο σύστημα cobas 8800. Η εξέταση cobas MPX επιτρέπει την ταυτόχρονη ανίχνευση και διάκριση του RNA του HIV, του RNA του HCV, του DNA του HBV και του εσωτερικού ορού ελέγχου με μία εξέταση που διενεργείται σε μολυσμένα μεμονωμένα δείγματα πλάσματος δοτών ή σε πλάσμα δεξαμενής προερχόμενο από μεμονωμένα δείγματα δοτών. Η εξέταση δεν πραγματοποιεί διάκριση μεταξύ των HIV-1 ομάδας M, HIV-1 ομάδας O και HIV-2. Βασικές αρχές της διαδικασίας Η εξέταση cobas MPX βασίζεται στην πλήρως αυτοματοποιημένη παρασκευή δείγματος (εκχύλιση και καθαρισμός νουκλεϊκών οξέων), ακολουθούμενη από ενίσχυση και ανίχνευση PCR. Τα συστήματα cobas 6800/8800 αποτελούνται από τη μονάδα παροχής δειγμάτων, τη μονάδα μεταφοράς, τη μονάδα επεξεργασίας και τη μονάδα ανάλυσης. Το λογισμικό cobas 6800/8800 πραγματοποιεί αυτοματοποιημένη διαχείριση δεδομένων, αποδίδοντας σε όλες τις εξετάσεις τα αποτελέσματα: μη αντιδρών, αντιδρών ή μη έγκυρο. Τα αποτελέσματα εμφανίζονται απευθείας στην οθόνη του συστήματος και εκτυπώνονται με τη μορφή αναφοράς. Τα δείγµατα μπορούν είτε να εξεταστούν μεμονωμένα είτε, προαιρετικά, σε δεξαμενές αποτελούμενες από πολλαπλά δείγματα. Το όργανο cobas p 680 μπορεί προαιρετικά να χρησιμοποιηθεί στο προαναλυτικό στάδιο, εάν πρόκειται να πραγματοποιηθεί δεξαμενοποίηση. Doc Rev. 3.0 5

Το νουκλεϊκό οξύ από το δείγμα και τα μόρια πρόσθετου εσωτερικού ορού ελέγχου (IC) Armored RNA (που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της διαδικασίας παρασκευής και ενίσχυσης/ανίχνευσης δειγμάτων) εκχυλίζεται ταυτόχρονα. Επιπλέον, η εξέταση χρησιμοποιεί τέσσερις εξωτερικούς ορούς ελέγχου: τρεις θετικούς και έναν αρνητικό ορό ελέγχου. Με την προσθήκη πρωτεϊνάσης και αντιδραστηρίου λύσης στο δείγμα αποδεσμεύεται ιικό νουκλεϊκό οξύ. Το αποδεσμευμένο νουκλεϊκό οξύ δεσμεύεται στην επιφάνεια από πυρίτιο των προστιθέμενων μαγνητικών σωματιδίων γυαλιού. Οι μη δεσμευμένες ουσίες και οι ακαθαρσίες, όπως η μετουσιωμένη πρωτεΐνη, τα κυτταρικά υπολείμματα και πιθανοί αναστολείς της PCR (όπως η αιµοσφαιρίνη) απομακρύνονται με επόμενα βήματα χρήσης αντιδραστηρίου πλύσης και το καθαρό νουκλεϊκό οξύ εκλούεται από τα μαγνητικά σωµατίδια γυαλιού με ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης σε αυξημένη θερμοκρασία. Η εκλεκτική ενίσχυση του νουκλεϊκού οξέος στόχου από το δείγμα δότη επιτυγχάνεται με τη χρήση ειδικών για τον ιό εκκινητών πρόσθιας και αντίστροφης φοράς που επιλέγονται από περιοχές υψηλού βαθμού συντήρησης του ιικού νουκλεϊκού οξέος. Τόσο για την αντίστροφη μεταγραφή όσο και για την ενίσχυση χρησιμοποιείται ένα θερμοσταθερό ένζυμο, η DNA πολυμεράση. Το κύριο μίγμα περιλαμβάνει τριφωσφορική δεοξυουριδίνη (dutp), αντί για τριφωσφορική δεοξυθυμιδίνη (dttp), η οποία είναι ενσωματωμένη στο νεοσυντιθέμενο DNA (αμπλικόνιο). 32-34 Τυχόν επιμολυντικά αμπλικόνια από προηγούμενες αναλύσεις PCR καταστρέφονται από το ένζυμο AmpErase [ουρακιλ-n-γλυκοζυλάση], το οποίο περιέχεται στο κύριο μίγμα PCR, όταν θερμαίνεται στο πρώτο στάδιο θερμοκυκλοποίησης. Ωστόσο, τα νεοσυντιθέμενα αμπλικόνια δεν καταστρέφονται, καθώς το ένζυμο AmpErase αδρανοποιείται μόλις εκτεθεί σε θερμοκρασίες πάνω από 55 C. Το κύριο μίγμα cobas MPX περιέχει ειδικούς ιχνηθέτες ανίχνευσης για τα νουκλεϊκά οξέα των HIV-1 (ομάδας M και O), HIV-2, HCV, HBV και του εσωτερικού ορού ελέγχου (IC). Οι ειδικοί για HIV, HCV, HBV και IC ιχνηθέτες ανίχνευσης έχουν σημανθεί με μία από τις τέσσερις μοναδικές φθορίζουσες χρωστικές, οι οποίες δρουν ως χρωστικές αναφοράς. Κάθε ιχνηθέτης περιέχει επίσης μια πέμπτη χρωστική που δρα ως παρεμποδιστής. Οι τέσσερις χρωστικές αναφοράς μετρώνται σε καθορισμένα μήκη κύματος, επιτρέποντας έτσι την ταυτόχρονη ανίχνευση και διάκριση των ενισχυμένων στόχων HIV, HCV και HBV και του IC. 35,36 Το σήμα φθορισμού των ανέπαφων ιχνηθετών αναστέλλεται από τη χρωστική παρεμπόδισης, όταν δεν είναι δεσμευμένο στην ακολουθία-στόχο. Κατά το στάδιο ενίσχυσης μέσω PCR, ο υβριδισμός των ιχνηθετών σε ειδικό μονόκλωνο DNA-μήτρα οδηγεί στην αποδόμηση από την 5' προς 3' δράση της νουκλεάσης της DNA πολυμεράσης, με αποτέλεσμα τον διαχωρισμό των χρωστικών αναφοράς και παρεμπόδισης και τη δημιουργία σήματος φθορισμού. Με κάθε κύκλο PCR, δημιουργούνται αυξανόμενες ποσότητες διασπώμενων ιχνηθετών και παράλληλα αυξάνεται το συνολικό σήμα της χρωστικής αναφοράς (reporter). Καθώς οι τέσσερις ειδικές χρωστικές αναφοράς μετρώνται σε καθορισμένα μήκη κύματος, είναι εφικτή η ταυτόχρονη ανίχνευση και διάκριση των ενισχυμένων στόχων HIV, HCV και HBV, και του IC. Doc Rev. 3.0 6

Αντιδραστήρια και υλικά Αντιδραστήρια και οροί ελέγχου cobas MPX Όλα τα μη ανοιγμένα αντιδραστήρια και οροί ελέγχου θα φυλάσσονται όπως περιγράφει ο Πίνακας 1 έως και ο Πίνακας 4. Πίνακας 1 Εξέταση cobas MPX Εξέταση cobas MPX Φυλάσσετε στους 2 8 C κασέτα 96 εξετάσεων (P/N 06997708190) κασέτα 480 εξετάσεων (P/N 06997716190) Περιεχόμενα κιτ Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ 96 εξετάσεις 480 εξετάσεις Διάλυμα πρωτεϊνάσης (PASE) Εσωτερικός ορός ελέγχου (IC) Ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης (EB) Αντιδραστήριο κύριου μίγματος 1 (MMX-R1) Αντιδραστήριο κύριου μίγματος MPX 2 (MPX MMX-R2) Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, < 0,05% EDTA, χλωριούχο ασβέστιο, οξικό ασβέστιο, πρωτεϊνάση 8% (κ.ό.) EUH210: Τα δελτία δεδομένων ασφαλείας παρέχονται εφόσον ζητηθούν. EUH208: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική αντίδραση. Περιέχει: σουμπτιλισίνη, 9014-01-1 Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, < 0,05% EDTA, < 0,001% σύνθεση εσωτερικού ορού ελέγχου Armored RNA (μη μολυσματικό RNA που περιβάλλεται από βακτηριοφάγο MS2), < 0,002% Poly ra RNA (συνθετικό), < 0,1% αζίδιο του νατρίου Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, 0,2% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ Οξικό μαγγάνιο, υδροξείδιο του καλίου, < 0,1% αζίδιο του νατρίου Ρυθμιστικό διάλυμα Tricine, οξικό κάλιο, γλυκερόλη, 18% διμεθυλοσουλφοξείδιο, Tween 20, EDTA, < 0,06% datp, dgtp, dctp, < 0,14% dutp, < 0,01% ανοδικοί και καθοδικοί εκκινητές HIV-1, HCV, HBV και εσωτερικού ορού ελέγχου, < 0,01% ιχνηθέτες HIV, HCV και HBV με φθορίζουσα σήμανση, < 0,01% ιχνηθέτες εσωτερικού ορού ελέγχου με φθορίζουσα σήμανση, < 0,01% ολιγονουκλεοτίδιο (απταμερές), < 0,01% DNA πολυμεράση ZO5D, < 0,01% ένζυμο (μικροβιακό) AmpErase (ουρακιλ-n-γλυκοζυλάση), < 0,1% αζίδιο του νατρίου 13 ml 38 ml 13 ml 38 ml 13 ml 38 ml 5,5 ml 14,5 ml 6 ml 17,5 ml Doc Rev. 3.0 7

Πίνακας 2 cobas MPX Control Kit cobas MPX Control Kit Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997724190) Περιεχόμενα κιτ Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ Σύμβολο και προειδοποίηση ασφάλειας Πολλαπλός θετικός ορός ελέγχου MPX (MPX M (+) C) < 0,001% συνθετικό (armored) RNA του HIV-1 ομάδας M που περιβάλλεται από καψιδιακή πρωτεΐνη βακτηριοφάγου MS2, < 0,001% συνθετικό (armored) RNA του HCV που περιβάλλεται από καψιδιακή πρωτεΐνη βακτηριοφάγου MS2, < 0,001% συνθετικό (πλασμιδιακό) DNA του HBV που περιβάλλεται από καψιδιακή πρωτεΐνη βακτηριοφάγου λ, φυσιολογικό ανθρώπινο πλάσμα μη αντιδρών σύμφωνα με εγκεκριμένες εξετάσεις για αντισώματα έναντι του HCV, αντισώματα έναντι του HIV-1/2, HBsAg, αντισώματα έναντι του HBc. Μη ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1, RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του HEV, RNA του WNV και DNA του CMV με μεθόδους PCR. 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 4 ml (4 x 1 ml) Προσοχή H317: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική δερματική αντίδραση. P261: Aποφεύγετε να αναπνέετε σκόνη/ αναθυμιάσεις/ αέρια/ σταγονίδια/ ατμούς/ εκνεφώματα. P272: Τα μολυσμένα ενδύματα εργασίας δεν πρέπει να βγαίνουν από το χώρο εργασίας. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια. P302 + P352: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο νερό και σαπούνι. P333 + P313: Εάν παρατηρηθεί ερεθισμός του δέρματος ή εμφανιστεί εξάνθημα: Συμβουλευθείτε / Επισκεφθείτε γιατρό. P363: Πλύνετε τα μολυσμένα ενδύματα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. Θετικός ορός ελέγχου MPX HIV-1 O (MPX O (+) C) < 0,001% συνθετικό (armored) RNA του HIV-1 ομάδας O που περιβάλλεται από καψιδιακή πρωτεΐνη βακτηριοφάγου MS2, φυσιολογικό ανθρώπινο πλάσμα μη αντιδρών σύμφωνα με εγκεκριμένες εξετάσεις για αντισώματα έναντι του HCV, αντισώματα έναντι του HIV-1/2, HBsAg, αντισώματα έναντι του HBc. Μη ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1, RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του HEV, RNA του WNV και DNA του CMV με μεθόδους PCR. 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 4 ml (4 x 1 ml) Προσοχή H317: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική δερματική αντίδραση. P261: Aποφεύγετε να αναπνέετε σκόνη/ αναθυμιάσεις/ αέρια/ σταγονίδια/ ατμούς/ εκνεφώματα. P272: Τα μολυσμένα ενδύματα εργασίας δεν πρέπει να βγαίνουν από το χώρο εργασίας. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια. P302 + P352: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο νερό και σαπούνι. P333 + P313: Εάν παρατηρηθεί ερεθισμός του δέρματος ή εμφανιστεί εξάνθημα: Συμβουλευθείτε / Επισκεφθείτε γιατρό. P363: Πλύνετε τα μολυσμένα ενδύματα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. Doc Rev. 3.0 8

Πίνακας 2 cobas MPX Control Kit cobas MPX Control Kit Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997724190) Περιεχόμενα κιτ Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ Σύμβολο και προειδοποίηση ασφάλειας Θετικός ορός ελέγχου MPX HIV-2 (MPX 2 (+) C) < 0,001% συνθετικό (armored) RNA του HIV-2 που περιβάλλεται από καψιδιακή πρωτεΐνη βακτηριοφάγου MS2, φυσιολογικό ανθρώπινο πλάσμα μη αντιδρών σύμφωνα με εγκεκριμένες εξετάσεις για αντισώματα έναντι του HCV, αντισώματα έναντι του HIV-1/2, HBsAg, αντισώματα έναντι του HBc. Μη ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1, RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του HEV, RNA του WNV και DNA του CMV με μεθόδους PCR. 4 ml (4 x 1 ml) Προσοχή H317: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική δερματική αντίδραση. P261: Aποφεύγετε να αναπνέετε σκόνη/ αναθυμιάσεις/ αέρια/ σταγονίδια/ ατμούς/ εκνεφώματα. 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 P272: Τα μολυσμένα ενδύματα εργασίας δεν πρέπει να βγαίνουν από το χώρο εργασίας. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια. P302 + P352: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο νερό και σαπούνι. P333 + P313: Εάν παρατηρηθεί ερεθισμός του δέρματος ή εμφανιστεί εξάνθημα: Συμβουλευθείτε / Επισκεφθείτε γιατρό. P363: Πλύνετε τα μολυσμένα ενδύματα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. Doc Rev. 3.0 9

Πίνακας 3 cobas NHP Negative Control Kit cobas NHP Negative Control Kit Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 07002220190) Περιεχόμενα κιτ Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ Σύμβολο και προειδοποίηση ασφάλειας Αρνητικός ορός ελέγχου φυσιολογικού ανθρώπινου πλάσματος (NHP-NC) Φυσιολογικό ανθρώπινο πλάσμα, μη αντιδρών σύμφωνα με εγκεκριμένες εξετάσεις για αντισώματα έναντι του HCV, αντισώματα έναντι του HIV-1/2, HBsAg, αντισώματα έναντι του HBc. Μη ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1, RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του HEV, RNA του WNV και DNA του CMV με μεθόδους PCR. < 0,1% Συντηρητικό ProClin 300 16 ml (16 x 1 ml) Προσοχή H317: Μπορεί να προκαλέσει αλλεργική δερματική αντίδραση. P261: Aποφεύγετε να αναπνέετε σκόνη/ αναθυμιάσεις/ αέρια/ σταγονίδια/ ατμούς/ εκνεφώματα. P272: Τα μολυσμένα ενδύματα εργασίας δεν πρέπει να βγαίνουν από το χώρο εργασίας. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια. P302 + P352: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΟ ΔΕΡΜΑ: Πλύνετε με άφθονο νερό και σαπούνι. P333 + P313: Εάν παρατηρηθεί ερεθισμός του δέρματος ή εμφανιστεί εξάνθημα: Συμβουλευθείτε / Επισκεφθείτε γιατρό. P363: Πλύνετε τα μολυσμένα ενδύματα πριν τα ξαναχρησιμοποιήσετε. Doc Rev. 3.0 10

Αντιδραστήρια cobas omni για προετοιμασία δειγμάτων Πίνακας 4 Αντιδραστήρια cobas omni για προετοιμασία δειγμάτων* Αντιδραστήρια Συστατικά αντιδραστηρίου Ποσότητα ανά κιτ Σύμβολο και προειδοποίηση ασφάλειας cobas omni MGP Reagent (MGP) Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997546190) cobas omni Specimen Diluent (SPEC DIL) Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997511190) cobas omni Lysis Reagent (LYS) Φυλάσσετε στους 2 8 C (P/N 06997538190) cobas omni Wash Reagent (WASH) Φυλάσσετε στους 15-30 C (P/N 06997503190) Μαγνητικά σωματίδια γυαλιού, ρυθμιστικό διάλυμα Tris, 0,1% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ, < 0,1% αζίδιο του νατρίου Ρυθμιστικό διάλυμα Tris, 0,1% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ, < 0,1% αζίδιο του νατρίου 42,56% (κ.β.) θειοκυανική γουανιδίνη, 5% (κ.ό.) πολυδοκανόλη, 2% (κ.ό.) διθειοθρεϊτόλη, δισόξινο νάτριο κιτρικό Κιτρικό νάτριο διυδρικό, 0,1% μεθυλ-4 υδροξυβενζoϊκό οξύ 480 εξετάσεις Δεν εφαρµόζεται 4 x 875 ml Δεν εφαρµόζεται 4 x 875 ml Κίνδυνος H302: Επιβλαβές σε περίπτωση καταπόσεως. H318: Προκαλεί σοβαρή οφθαλμική βλάβη. H412: Επιβλαβές για τους υδρόβιους οργανισμούς, με μακροχρόνιες επιπτώσεις. EUH032: Σε επαφή με οξέα ελευθερώνονται πολύ τοξικά αέρια. P301 + P312: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΚΑΤΑΠΟΣΗΣ: Καλέστε το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. P264: Πλύνετε το δέρμα σχολαστικά μετά το χειρισμό. P270: Μην τρώτε, πίνετε ή καπνίζετε, όταν χρησιμοποιείτε αυτό το προϊόν. P273: Να αποφεύγεται η ελευθέρωση στο περιβάλλον. P280: Να φοράτε προστατευτικά γάντια/ μέσα ατομικής προστασίας για τα μάτια / πρόσωπο. P305 + P351 + P338: ΣΕ ΠΕΡΙΠΤΩΣΗ ΕΠΑΦΗΣ ΜΕ ΤΑ ΜΑΤΙΑ: Ξεπλύνετε προσεκτικά με νερό για αρκετά λεπτά. Εάν υπάρχουν φακοί επαφής, αφαιρέστε τους, εφόσον είναι εύκολο. Συνεχίστε να ξεπλένετε. P310: Καλέστε αμέσως το ΚΕΝΤΡΟ ΔΗΛΗΤΗΡΙΑΣΕΩΝ ή ένα γιατρό εάν αισθανθείτε αδιαθεσία. P330: Ξεπλύνετε το στόμα. 4,2 L Δεν εφαρµόζεται * Αυτά τα αντιδραστήρια δεν περιλαμβάνονται στο κιτ εξέτασης cobas MPX. Δείτε τον κατάλογο με τα πρόσθετα απαιτούμενα υλικά (Πίνακας 7). Doc Rev. 3.0 11

Απαιτήσεις φύλαξης και χειρισμού αντιδραστηρίων Η φύλαξη και ο χειρισμός των αντιδραστηρίων θα πρέπει να γίνονται σύμφωνα με όσα αναφέρει ο Πίνακας 5 και ο Πίνακας 6. Όταν τα αντιδραστήρια δεν είναι φορτωμένα στα συστήματα cobas 6800/8800, φυλάξτε τα στην αντίστοιχη θερμοκρασία, όπως αναφέρει ο Πίνακας 5. Πίνακας 5 Φύλαξη αντιδραστηρίων (όταν το αντιδραστήριο δεν είναι τοποθετημένο στο σύστημα) Αντιδραστήριο cobas MPX 96 cobas MPX 480 cobas MPX Control Kit cobas NHP Negative Control Kit cobas omni Lysis Reagent cobas omni MGP Reagent cobas omni Specimen Diluent cobas omni Wash Reagent Θερμοκρασία φύλαξης 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 2 8 C 15 30 C Τα αντιδραστήρια που τοποθετούνται στα συστήματα cobas 6800/8800 φυλάσσονται στις κατάλληλες θερμοκρασίες και η λήξη τους παρακολουθείται από το σύστημα. Το σύστημα επιτρέπει τη χρήση αντιδραστηρίων μόνο αν πληρούνται όλες οι προϋποθέσεις που αναφέρει ο Πίνακας 6. Το σύστημα αποτρέπει αυτόματα τη χρήση αντιδραστηρίων που έχουν λήξει. Ο Πίνακας 6 βοηθά τον χρήστη να κατανοήσει τις προϋποθέσεις χειρισμού των αντιδραστηρίων που επιβάλλουν τα συστήματα cobas 6800/8800. Πίνακας 6 Προϋποθέσεις λήξης αντιδραστηρίων που επιβάλλονται από τα συστήματα cobas 6800/8800 Αντιδραστήριο Ημερομηνία λήξης κιτ Σταθερότητα ανοιγμένου κιτ Αριθμός αναλύσεων για τις οποίες μπορεί να χρησιμοποιηθεί το κιτ Σταθερότητα επί του οργάνου (αθροιστικός χρόνος επί του οργάνου εκτός ψυγείου) cobas MPX 96 Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την πρώτη χρήση Έως 10 αναλύσεις Έως 8 ώρες cobas MPX 480 Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την πρώτη χρήση Έως 20 αναλύσεις Έως 20 ώρες cobas MPX Control Kit cobas NHP Negative Control Kit Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται Έως 8 ώρες Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται Έως 10 ώρες cobas omni Lysis Reagent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται cobas omni MGP Reagent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται cobas omni Specimen Diluent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται cobas omni Wash Reagent Η ημερομηνία δεν έχει παρέλθει 30 ημέρες από την τοποθέτηση* Δεν εφαρµόζεται Δεν εφαρµόζεται * Ο χρόνος υπολογίζεται από την πρώτη φορά κατά την οποία το αντιδραστήριο τοποθετείται στα συστήματα cobas 6800/8800. Doc Rev. 3.0 12

Πρόσθετα απαιτούμενα υλικά Πίνακας 7 Υλικά και αναλώσιμα για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800 Υλικό P/N cobas omni Processing Plate 05534917001 cobas omni Amplification Plate 05534941001 cobas omni Pipette Tips 05534925001 cobas omni Liquid Waste Container 07094388001 cobas omni Lysis Reagent 06997538190 cobas omni MGP Reagent 06997546190 cobas omni Specimen Diluent 06997511190 cobas omni Wash Reagent 06997503190 Σάκος στερεών αποβλήτων 07435967001 Δοχείο στερεών αποβλήτων 07094361001 Όργανα και λογισμικό που απαιτούνται Το λογισμικό cobas 6800/8800 και το πακέτο ανάλυσης cobas MPX θα εγκατασταθούν στο(α) όργανο(α). Ο διακομιστής πύλης οργάνου (IG) παρέχεται μαζί με το σύστημα. Πίνακας 8 Όργανα Εξοπλισμός P/N Σύστημα cobas 6800 (με δυνατότητα μετακίνησης προαιρετικά) 05524245001 και 06379672001 Σύστημα cobas 6800 (σταθερό) 05524245001 και 06379664001 Σύστημα cobas 8800 05412722001 Όργανο cobas p 680 (προαιρετικό για χρήση πιπέτας και δεξαμενοποίηση) 06578624001 Μονάδα παροχής δειγμάτων 06301037001 Για πρόσθετες πληροφορίες σχετικά με τα κύρια και δευτερεύοντα σωληνάρια δειγμάτων που είναι αποδεκτά για τα όργανα, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800 και στο εγχειρίδιο χειριστή του οργάνου cobas p 680. Σημείωση: Επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της Roche για έναν λεπτομερή κατάλογο παραγγελιών με υποδοχείς δειγμάτων, υποδοχείς για φραγμένα ακροφύσια και δίσκους υποδοχέων που είναι αποδεκτοί για τα όργανα. Doc Rev. 3.0 13

Προφυλάξεις και απαιτήσεις χειρισμού Προειδοποιήσεις και προφυλάξεις Όπως συμβαίνει με όλες τις διαδικασίες εξέτασης, η ορθή εργαστηριακή πρακτική είναι απαραίτητη για τη σωστή εκτέλεση αυτής της ανάλυσης. Λόγω της υψηλής ευαισθησίας της παρούσας εξέτασης, θα πρέπει να είστε ιδιαίτερα προσεκτικοί, ώστε να αποφευχθεί η επιμόλυνση των αντιδραστηρίων και των μιγμάτων ενίσχυσης. Μόνο για διαγνωστική χρήση in vitro. Όλα τα δείγματα θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως μολυσματικά και ο χειρισμός τους να γίνεται με ορθές εργαστηριακές διαδικασίες, όπως αυτές περιγράφονται στην τεκμηρίωση Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories και στο έγγραφο CLSI M29-A4. 37,38 Η διαδικασία αυτή πρέπει να εκτελείται μόνο από προσωπικό καταρτισμένο στον χειρισμό μολυσματικών υλικών και τη χρήση της εξέτασης cobas MPX, των συστημάτων cobas 6800/8800 και του οργάνου cobas p 680 (προαιρετικό). Όλα τα υλικά ανθρώπινης προέλευσης πρέπει να θεωρούνται εν δυνάμει μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις γενικές προφυλάξεις. Σε περίπτωση διάχυσης υγρών, απολυμάνετε αμέσως με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό (αραιώστε λευκαντικό οικιακής χρήσης σε αναλογία 1:10) ή ακολουθήστε τις κατάλληλες διαδικασίες του κέντρου σας. Το cobas MPX Control Kit και cobas NHP Negative Control Kit περιέχουν πλάσμα προερχόμενο από ανθρώπινο αίμα. Το υλικό προέλευσης έχει ελεγχθεί με εγκεκριμένες εξετάσεις αντισωµάτων και έχει διαπιστωθεί ότι είναι μη αντιδρών υπό την παρουσία: αντισωμάτων έναντι του HCV, αντισωμάτων έναντι του HIV-1/2, HBsAg, και αντισωµάτων έναντι του HBc. Η εξέταση φυσιολογικού ανθρώπινου πλάσματος με τις μεθόδους PCR δεν έδειξε, επίσης, ανιχνεύσιμο RNA του HIV-1 (ομάδες M και O), RNA του HIV-2, RNA του HCV, DNA του HBV, RNA του HEV, RNA του WNV ή DNA του CMV. Καμία γνωστή μέθοδος εξέτασης δεν διασφαλίζει απόλυτα ότι τα προϊόντα που προέρχονται από ανθρώπινο αίμα δεν μεταδίδουν μολυσματικούς παράγοντες. Μην καταψύχετε το ολικό αίμα. Συνιστάται η χρήση αποστειρωμένων πιπετών μίας χρήσης με ακροφύσια χωρίς νουκλεάση. Χρησιμοποιείτε μόνο τα παρεχόμενα ή τα καθορισμένα απαιτούμενα αναλώσιμα υλικά για τη διασφάλιση της βέλτιστης απόδοσης της εξέτασης. Διατίθενται Δελτία Δεδομένων Ασφάλειας (SDS), κατόπιν αιτήματος, από τον τοπικό αντιπρόσωπο της Roche. Ακολουθήστε προσεκτικά τις διαδικασίες και τις οδηγίες, για να βεβαιωθείτε ότι η εξέταση εκτελείται σωστά. Οποιαδήποτε απόκλιση από τις διαδικασίες και τις οδηγίες μπορεί να επηρεάσει τη βέλτιστη απόδοση της εξέτασης. Μπορεί να προκύψουν ψευδώς θετικά αποτελέσματα, αν η επιμόλυνση των δειγμάτων δεν τεθεί αποτελεσματικά υπό έλεγχο κατά τη διάρκεια του χειρισμού και της επεξεργασίας των δειγμάτων. Doc Rev. 3.0 14

Χειρισμός αντιδραστηρίων Ο χειρισμός όλων των αντιδραστηρίων, ορών ελέγχου και δειγμάτων θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με την ορθή εργαστηριακή πρακτική, ώστε να αποφεύγεται η επιμόλυνση των δειγμάτων ή των ορών ελέγχου. Πριν από τη χρήση, ελέγχετε οπτικά κάθε κασέτα αντιδραστηρίου, αραιωτικό, αντιδραστήριο λύσης και αντιδραστήριο πλύσης, για να βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχουν ενδείξεις διαρροής. Εάν παρατηρήσετε ενδείξεις διαρροής, μη χρησιμοποιήσετε τα υλικά αυτά για εξέταση. Το cobas omni Lysis Reagent περιέχει θειοκυανική γουανιδίνη, μια δυνητικά επικίνδυνη χημική ουσία. Αποφεύγετε την επαφή των αντιδραστηρίων με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού, διαφορετικά μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Τα κιτ εξέτασης cobas MPX, το cobas omni MGP Reagent και το cobas omni Specimen Diluent περιέχουν αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Αποφεύγετε την επαφή των αντιδραστηρίων με το δέρμα, τα μάτια ή τους βλεννογόνους. Σε περίπτωση επαφής, ξεπλύνετε αμέσως με άφθονη ποσότητα νερού, διαφορετικά μπορεί να προκληθούν εγκαύματα. Εάν τα αντιδραστήρια αυτά χυθούν, αραιώστε με νερό πριν σκουπίσετε τη διαρροή. Μην αφήσετε το cobas omni Lysis Reagent, που περιέχει θειοκυανική γουανιδίνη, να έρθει σε επαφή με διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου (λευκαντικό). Το μίγμα αυτό μπορεί να παράγει ένα ιδιαίτερα τοξικό αέριο. Η απόρριψη όλων των υλικών που έχουν έρθει σε επαφή με δείγματα και αντιδραστήρια θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τους εθνικούς, περιφερειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Ορθή εργαστηριακή πρακτική Μην εκτελείτε αναρρόφηση με πιπέτα από το στόμα. Απαγορεύεται η κατανάλωση τροφίμων και ποτών και το κάπνισμα στους καθορισμένους χώρους εργασίας. Φοράτε εργαστηριακά γάντια, εργαστηριακές ποδιές και προστατευτικά γυαλιά όταν χειρίζεστε δείγματα και αντιδραστήρια. Θα πρέπει να αλλάζετε τα γάντια μεταξύ του χειρισμού δειγμάτων και του χειρισμού των κιτ cobas MPX και των αντιδραστηρίων cobas omni, ώστε να αποφευχθεί τυχόν επιμόλυνση. Φροντίστε να μην μολυνθούν τα γάντια κατά τον χειρισμό των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Πλένετε καλά τα χέρια σας μετά τον χειρισμό δειγμάτων και κιτ αντιδραστηρίων, καθώς και μετά την αφαίρεση των γαντιών. Καθαρίζετε καλά και απολυμαίνετε όλες τις επιφάνειες εργασίας του εργαστηρίου με φρέσκο διάλυμα 0,5% υποχλωριώδους νατρίου σε απεσταγμένο ή απιονισμένο νερό (αραιώστε λευκαντικό οικιακής χρήσης σε αναλογία 1:10). Στη συνέχεια, σκουπίστε την επιφάνεια με 70% αιθανόλη. Σε περίπτωση διαρροής υγρού πάνω στο όργανο cobas 6800/8800, ακολουθήστε τις οδηγίες του εγχειριδίου χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800 όσον αφορά τον σωστό καθαρισμό και την απολύμανση της επιφάνειας του(ων) οργάνου(ων). Doc Rev. 3.0 15

Συλλογή, μεταφορά, φύλαξη και δεξαμενοποίηση δειγμάτων Σημείωση: Όλα τα δείγματα και οι οροί ελέγχου πρέπει να θεωρούνται μολυσματικά και ο χειρισμός τους πρέπει να γίνεται ανάλογα. Φυλάσσετε όλα τα δείγματα δοτών στις καθορισμένες θερμοκρασίες. Η σταθερότητα των δειγμάτων επηρεάζεται από υψηλές θερμοκρασίες. cobas MPX Συνιστάται να πραγματοποιείτε την εξέταση δειγμάτων ορού εντός 8 ωρών από τη φυγοκέντρηση, όταν έχουν φυγοκεντρηθεί με ταχύτητα 1600 x g για 20 λεπτά, ή εντός 24 ωρών από τη φυγοκέντρηση, για δείγματα που έχουν φυγοκεντρηθεί με υψηλή ταχύτητα (π.χ 2600 x g για 20 λεπτά). Δείγματα αίματος ζώντων δοτών Με την εξέταση cobas MPX επιτρέπεται η χρήση πλάσματος, που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό EDTA, CPD, CPDA1, CP2D και 4% κιτρικό νάτριο (πλασμαφαίρεση), και ορού, που έχει συλλεχθεί σε σωληνάρια με επιταχυντή πήξης ορού. Ακολουθείτε τις οδηγίες του κατασκευαστή του σωληναρίου/ασκού συλλογής δειγμάτων για τον χειρισμό και τη φυγοκέντριση. Μπορείτε να φυλάσσετε αίμα που έχει συλλεχθεί σε αντιπηκτικό EDTA, CPD, CPDA1, CP2D ή σε σωληνάρια παρασκευής πλάσματος με EDTA Becton-Dickinson (BD PPT ) για έως 12 ημέρες υπό τις ακόλουθες συνθήκες: o Τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρούνται εντός 72 ωρών από τη συλλογή. o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται σε θερμοκρασία έως 25 C για 72 ώρες και, κατά τη διάρκεια των 72 ωρών, σε θερμοκρασία έως 30 C για 24 ώρες. Με την εξαίρεση των παραπάνω, τα δείγματα φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2 8 C. Επίσης, το πλάσμα που έχει διαχωριστεί από τα αιμοκύτταρα μπορεί να φυλαχτεί για έως 30 ημέρες σε θερμοκρασία -18 C με τρεις κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Ανατρέξτε στην Εικόνα 1. Doc Rev. 3.0 16

Εικόνα 1 Συνθήκες φύλαξης δειγμάτων για δείγματα ζώντων δοτών 30 Αντιπηκτικό EDTA, CPD, CPDA1, CP2D ή PPT Θερμοκρασία C 25 8 2 < - 18 18 Ολικό αίμα 1 3 12 Κατεψυγμένο πλάσμα (κατάψυξη-απόψυξη έως 3 φορές) 0 30 Ημέρες Μπορείτε να φυλάσσετε δείγματα αίματος που έχουν συλλεχθεί σε σωληνάρια με επιταχυντή πήξης ορού για έως 7 ημέρες σε θερμοκρασία 2 8 C υπό τις ακόλουθες συνθήκες: o Τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρούνται εντός 72 ωρών από τη συλλογή. o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται σε θερμοκρασία έως 25 C για 72 ώρες και, κατά τη διάρκεια των 72 ωρών, σε θερμοκρασία έως 30 C για 24 ώρες. Με την εξαίρεση των παραπάνω, τα δείγματα φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2 8 C. Επίσης, ο ορός που έχει διαχωριστεί από τα αιμοκύτταρα μπορεί να φυλαχθεί για έως 30 ημέρες σε θερμοκρασία < -18 C με τρεις κύκλους κατάψυξης/απόψυξης. Το πλάσμα από πλασμαφαίρεση που έχει συλλεχθεί σε σωληνάριο με αντιπηκτικό 4% κιτρικό νάτριο μπορεί να φυλαχθεί για έως 30 ημέρες σε θερμοκρασία 2 8 C υπό τις ακόλουθες συνθήκες: o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, τα δείγματα μπορούν να φυλάσσονται σε θερμοκρασία έως 25 C για 72 ώρες και, κατά τη διάρκεια των 72 ωρών, σε θερμοκρασία έως 30 C για 24 ώρες. Doc Rev. 3.0 17

Πτωματικά δείγματα αίματος Τα πτωματικά δείγματα αίματος που έχουν συλλεχθεί σε σωληνάρια με αντιπηκτικό EDTA ή/και σε σωληνάρια με επιταχυντή πήξης ορού μπορούν να χρησιμοποιηθούν με την εξέταση cobas MPX. Ακολουθείτε τις οδηγίες του κατασκευαστή του σωληναρίου/ασκού συλλογής δειγμάτων για τον χειρισμό και τη φυγοκέντριση. Μπορείτε να φυλάσσετε πτωματικά δείγματα αίματος που έχουν συλλεχθεί με αντιπηκτικό EDTA για έως 8 ημέρες σε θερμοκρασία 2 8 C υπό τις ακόλουθες συνθήκες: o Τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρούνται εντός 72 ωρών από τη συλλογή. o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, μπορείτε να φυλάσσετε τα δείγματα σε θερμοκρασία έως 30 C για 24 ώρες, εντός των 72 ωρών. Με την εξαίρεση των παραπάνω, μπορείτε να φυλάσσετε τα πτωματικά δείγματα πλάσματος (που έχει διαχωριστεί από τα αιμοκύτταρα) με EDTA για έως 14 ημέρες σε θερμοκρασία < -18 C. Ανατρέξτε στην Εικόνα 2. Εικόνα 2 Συνθήκες φύλαξης πτωματικών δειγμάτων 30 Αντιπηκτικό EDTA 25 Θερμοκρασία C 8 Ολικό αίμα <-18 2 1 8 Καταψυγμένο πλάσμα 0 Ημέρες 14 Μπορείτε να φυλάσσετε τα πτωματικά δείγματα αίματος που έχουν συλλεχθεί σε σωληνάρια με επιταχυντή πήξης ορού για έως 5 ημέρες σε θερμοκρασία 2 8 C υπό τις ακόλουθες συνθήκες: o Τα δείγματα πρέπει να φυγοκεντρούνται εντός 72 ωρών από τη συλλογή. o Για φύλαξη σε θερμοκρασία άνω των 8 C, μπορείτε να φυλάσσετε τα δείγματα για 24 ώρες σε θερμοκρασία έως 30 C, στη διάρκεια 72 ωρών. Εάν τα δείγματα ζώντων ή/και πτωματικών δοτών πρόκειται να μεταφερθούν, θα πρέπει να συσκευαστούν και να επισημανθούν σύμφωνα με τους ισχύοντες εθνικούς ή/και διεθνείς κανονισμούς που αφορούν τη μεταφορά δειγμάτων και αιτιολογικών παραγόντων. Doc Rev. 3.0 18

Οδηγίες χρήσης Αυτόματη μεταφορά δειγμάτων με πιπέτα και δεξαμενοποίηση δειγμάτων (προαιρετικά) Το όργανο cobas p 680 είναι ένα προαιρετικό στοιχείο των συστημάτων cobas 6800/8800, το οποίο χρησιµοποιείται για την αυτόματη μεταφορά με πιπέτα και δεξαμενοποίηση κλασμάτων πολλαπλών πρωτογενών δειγμάτων σε ένα ενιαίο δείγμα δεξαμενής. Για περισσότερες πληροφορίες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χειριστή του οργάνου cobas p 680. Σημειώσεις διαδικασίας Μην χρησιμοποιείτε τα αντιδραστήρια της εξέτασης cobas MPX, το cobas MPX Control Kit, το cobas NHP Negative Control Kit ή τα αντιδραστήρια cobas omni μετά την ημερομηνία λήξης τους. Μην επαναχρησιμοποιείτε τα αναλώσιμα. Προορίζονται για μία μόνο χρήση. Για τη σωστή συντήρηση των οργάνων, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800. Εκτέλεση της εξέτασης cobas MPX Η διαδικασία της εξέτασης περιγράφεται αναλυτικά στο εγχειρίδιο χειριστή των συστημάτων cobas 6800/8800 και στο εγχειρίδιο χειριστή του οργάνου cobas p 680. Η Εικόνα 3 παρακάτω παρουσιάζει συνοπτικά τη διαδικασία. Εικόνα 3 Διαδικασία εξέτασης cobas MPX Doc Rev. 3.0 19

Αποτελέσματα Τα συστήματα cobas 6800/8800 ανιχνεύουν αυτόματα και ταυτόχρονα πραγματοποιούν διάκριση μεταξύ των RNA του HIV, RNA του HCV και DNA του HBV για τα δείγματα και τους ορούς ελέγχου. Ποιοτικός έλεγχος και εγκυρότητα των αποτελεσμάτων Με κάθε παρτίδα γίνεται επεξεργασία ενός αρνητικού ορού ελέγχου [( ) C] και τριών θετικών ορών ελέγχου [MPX M (+) C, MPX O (+) C και MPX 2 (+) C]. Στο λογισμικό cobas 6800/8800 ή/και στην αναφορά, ελέγξτε αν υπάρχουν ενδείξεις, καθώς και τα αντίστοιχά τους αποτελέσματα, για να διασφαλίσετε την εγκυρότητα της παρτίδας. Η παρτίδα θεωρείται έγκυρη όταν δεν εμφανίζονται ενδείξεις για τους τέσσερις ορούς ελέγχου. Το λογισμικό cobas 6800/8800 ακυρώνει αυτόματα τα αποτελέσματα βάσει των αποτυχιών των αρνητικών και θετικών ορών ελέγχου. Ενδείξεις ορών ελέγχου Πίνακας 9 Αρνητικός ορός ελέγχου Ενδείξεις ορών ελέγχου για αρνητικούς και θετικούς ορούς ελέγχου Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία (-) C Q02 Invalid Ολόκληρη η παρτίδα χαρακτηρίζεται ως μη έγκυρη αν το αποτέλεσμα για το (-) C είναι μη έγκυρο. Θετικός ορός ελέγχου Ένδειξη Αποτέλεσμα Ερμηνεία MPX M (+) C Q02 Invalid Ολόκληρη η παρτίδα χαρακτηρίζεται ως μη έγκυρη αν το αποτέλεσμα για το MPX M (+) C είναι μη έγκυρο. MPX O (+) C Q02 Invalid Ολόκληρη η παρτίδα χαρακτηρίζεται ως μη έγκυρη αν το αποτέλεσμα για το MPX O (+) C είναι μη έγκυρο. MPX 2 (+) C Q02 Invalid Ολόκληρη η παρτίδα χαρακτηρίζεται ως μη έγκυρη αν το αποτέλεσμα για το MPX 2 (+) C είναι μη έγκυρο. Εάν η παρτίδα δεν είναι έγκυρη, επαναλάβετε την εξέταση ολόκληρης της παρτίδας, συμπεριλαμβανομένων των δειγμάτων και των ορών ελέγχου. Doc Rev. 3.0 20

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων Για μια έγκυρη παρτίδα, ελέγξτε κάθε μεμονωμένο δείγμα για ενδείξεις, στο λογισμικό cobas 6800/8800 ή/και στην αναφορά. Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων θα πρέπει να είναι ως εξής: Μια έγκυρη παρτίδα μπορεί να περιλαμβάνει έγκυρα και μη έγκυρα αποτελέσματα δείγματος δότη, ανάλογα με τις ενδείξεις που λαμβάνονται για τα μεμονωμένα δείγματα. Τα αποτελέσματα δειγμάτων είναι έγκυρα μόνο αν οι αντίστοιχοι θετικοί οροί ελέγχου και ο αρνητικός ορός ελέγχου της αντίστοιχης παρτίδας είναι έγκυροι. Για κάθε δείγμα, μετρώνται ταυτόχρονα τέσσερις παράμετροι: HIV, HCV, HBV και ο εσωτερικός ορός ελέγχου. Τα τελικά αποτελέσματα δειγμάτων για την εξέταση cobas MPX αναφέρονται από το λογισμικό. Μαζί με τα συνολικά αποτελέσματα, στο λογισμικό cobas 6800/8800 θα εμφανίζονται και μεμονωμένα αποτελέσματα στόχων, τα οποία θα πρέπει να ερμηνεύονται ως εξής: Πίνακας 10 Αποτελέσματα στόχων για την ερμηνεία μεμονωμένων αποτελεσμάτων στόχων Αποτελέσματα στόχων Μη αντιδρών για HIV Αντιδρώντα για HIV Μη αντιδρών για HCV Αντιδρώντα για HCV Μη αντιδρών για HBV Αντιδρώντα σε HBV Invalid Ερμηνεία Δεν ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HIV και ανιχνεύθηκε σήμα IC. Ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HIV και μπορεί να ανιχνεύθηκε ή να μην ανιχνεύθηκε σήμα IC. Δεν ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HCV και ανιχνεύθηκε σήμα IC. Ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HCV και μπορεί να ανιχνεύθηκε ή να μην ανιχνεύθηκε σήμα IC. Δεν ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HBV και ανιχνεύθηκε σήμα IC. Ανιχνεύθηκε σήμα στόχου για HBV και μπορεί να ανιχνεύθηκε ή να μην ανιχνεύθηκε σήμα IC. Δεν ανιχνεύθηκε σήμα στόχου και σήμα εσωτερικού ορού ελέγχου. Επανάληψη εξέτασης μεμονωμένων δειγμάτων Για τα σωληνάρια δείγματος με μη έγκυρο τελικό αποτέλεσμα για έναν στόχο απαιτείται επανάληψη της εξέτασης, ανεξάρτητα από τα έγκυρα αποτελέσματα των άλλων στόχων. Περιορισμοί της διαδικασίας Η εξέταση cobas MPX έχει αξιολογηθεί μόνο για χρήση σε συνδυασμό με το cobas MPX Control Kit, το cobas NHP Negative Control Kit, το cobas omni MGP Reagent, το cobas omni Lysis Reagent, το cobas omni Specimen Diluent και το cobas omni Wash Reagent για χρήση στα συστήματα cobas 6800/8800. Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων εξαρτάται από την ορθότητα των διαδικασιών συλλογής, φύλαξης και χειρισμού των δειγμάτων. Μην χρησιμοποιείτε ηπαρινισμένο πλάσμα με αυτήν την εξέταση, καθώς έχει καταδειχθεί ότι η ηπαρίνη αναστέλλει την PCR. Η ανίχνευση του RNA του HIV-1 ομάδας M, του RNA του HIV-1 ομάδας O, του RNA του HIV-2, του RNA του HCV και του DNA του HBV εξαρτάται από τον αριθμό σωματιδίων του ιού που υπάρχουν στο δείγμα και μπορεί να επηρεαστεί από τις μεθόδους συλλογής, φύλαξης και χειρισμού του δείγματος, παράγοντες του ασθενή (π.χ. ηλικία, παρουσία συμπτωμάτων) ή/και το στάδιο της λοίμωξης και το μέγεθος της δεξαμενής. Σε σπάνιες περιπτώσεις, οι μεταλλάξεις στις περιοχές υψηλής διατήρησης ενός ιικού γονιδιώματος που καλύπτονται από την εξέταση cobas MPX, μπορεί να επηρεάσουν τη δέσμευση εκκινητών ή/και ιχνηθετών, οδηγώντας σε αποτυχία ανίχνευσης της παρουσίας ιού. Λόγω εγγενών διαφορών μεταξύ των τεχνολογιών, πριν από τη μετάβαση στην επόμενη τεχνολογική μέθοδο, συνιστάται η πραγματοποίηση μελετών συσχετισμού μεθόδων από τους χειριστές στο εργαστήριο για την αξιολόγηση των τεχνολογικών διαφορών. Οι χειριστές πρέπει να εφαρμόζουν τις δικές τους ειδικές πολιτικές/διαδικασίες. Doc Rev. 3.0 21

Αξιολόγηση απόδοσης μη κλινικών δειγμάτων Κύρια χαρακτηριστικά απόδοσης Δείγματα ζώντων δοτών Όριο ανίχνευσης (LoD) Διεθνή πρότυπα του ΠΟΥ/Κύρια πρότυπα της Roche Τα όρια ανίχνευσης (LoD) της εξέτασης cobas MPX για RNA του HIV-1 ομάδας M, RNA του HIV-1 ομάδας O, RNA του HIV-2, RNA του HCV και DNA του HBV καθορίστηκαν με χρήση των ακόλουθων προτύπων: 3 ο Διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ για το RNA του HIV-1 ομάδας M (κωδικός NIBSC 10/152) Διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ για το RNA του HIV-2 (κωδικός NIBSC 08/150) 39 Κύρια πρότυπα της Roche για το RNA του HIV-1 ομάδας O 2 ο Διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ για το RNA του HCV (κωδικός NIBSC 96/798) 3 ο Διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ για το DNA του HBV (κωδικός NIBSC 10/264) Επί του παρόντος δεν υπάρχει διεθνές πρότυπο για το RNA του HIV-1 ομάδας O. Το πρότυπο της Roche για το RNA του HIV-1 ομάδας O μπορεί να ιχνηλατηθεί ως προς το CBER HIV-1 Subtype RNA Reference Panel #1, Lot 01. Τα κύρια πρότυπα της Roche για το RNA του HIV-1 ομάδας O προέρχονται από αποθέματα καλλιεργημένου ιού που διατίθενται στο εμπόριο, P/N 2420 (Αρ. Κατ. 500493, SeraCare Life Sciences). Για τα διεθνή πρότυπα του ΠΟΥ σχετικά με τους HIV-1 ομάδας M, HCV, HBV και HIV-2 και για τα κύρια πρότυπα της Roche σχετικά με τον HIV-1 ομάδας O, παρασκευάστηκαν 3 ανεξάρτητες σειρές αραίωσης με φυσιολογικό, αρνητικό στους ιούς (HIV, HBV και HCV) ανθρώπινο πλάσμα με EDTA για κάθε ιικό πρότυπο, από κοινού για HIV-1 ομάδας M, HCV και HBV και μεμονωμένα για HIV-1 ομάδας O και HIV-2. Κάθε σειρά αραίωσης εξετάστηκε με χρήση 3 διαφορετικών παρτίδων των κιτ εξέτασης cobas MPX, με περίπου 63 επαναλήψεις ανά παρτίδα, για συνολικά περίπου 189 επαναλήψεις ανά συγκέντρωση. Για το διεθνές πρότυπο του ΠΟΥ για τον HIV-2, εξετάστηκαν 33 επαναλήψεις ανά παρτίδα από 3 ανεξάρτητες αραιώσεις και 3 παρτίδες αντιδραστηρίων, για συνολικά 99 επαναλήψεις ανά συγκέντρωση. Για κάθε ιό, χρησιμοποιήθηκε ανάλυση PROBIT στα δεδομένα τα οποία είχαν συνδυαστεί από τις σειρές αραίωσης και τις παρτίδες αντιδραστηρίων, για την εκτίμηση του LoD, καθώς και του κατώτερου και του ανώτερου διαστήματος εμπιστοσύνης 95% (Πίνακας 11). Ο Πίνακας 12 έως και ο Πίνακας 16 συνοψίζουν τα ποσοστά αντιδραστικότητας που παρατηρήθηκαν στις μελέτες του LoD για κάθε ιό. Doc Rev. 3.0 22

Πίνακας 11 Αποτελέσµατα της ανάλυσης PROBIT σε δεδομένα LoD που συλλέχθηκαν με ιικά πρότυπα σε πλάσμα με EDTA και ορό Μήτρες Παράμετρος εξέτασης Μονάδες μέτρησης LoD Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% Ανώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% HIV-1 ομάδας M IU/mL 25,7 21,1 32,8 HIV-1 ομάδας O αντίγραφα/ml 8,2 7,0 10,0 Πλάσμα EDTA Ορός HIV-2 IU/mL 4,0 3,3 5,2 HCV IU/mL 7,0 5,9 8,6 HBV IU/mL 1,4 1,2 1,7 HIV-1 ομάδας M IU/mL 23,7 20,0 29,1 HIV-1 ομάδας O αντίγραφα/ml 12,2 10,3 14,9 HIV-2 IU/mL 4,4 3,5 5,8 HCV IU/mL 8,1 6,8 10,1 HBV IU/mL 1,3 1,1 1,5 Πίνακας 12 Σύνοψη ποσοστών αντιδραστικότητας για τον HIV-1 ομάδας M σε πλάσμα με EDTA και ορό Μήτρες Πλάσμα EDTA Ορός Συγκέντρωση RNA του HIV-1 ομάδας M (IU/mL) Αριθμός αντιδρώντων Αριθμός έγκυρων επαναλήψεων % αντιδρώντων Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% (μονόπλευρο) 30 186 188 98,9% 96,7% 15 170 189 89,9% 85,6% 7,5 124 189 65,6% 59,5% 4,5 96 189 50,8% 44,6% 1,5 50 189 26,5% 21,2% 30 186 189 98,4% 95,9% 15 170 189 89,9% 85,6% 7,5 123 189 65,1% 59,0% 4,5 85 189 45,0% 38,8% 1,5 31 189 16,4% 12,1% Doc Rev. 3.0 23

Πίνακας 13 Σύνοψη ποσοστών αντιδραστικότητας για τον HIV-1 ομάδας O σε πλάσμα με EDTA και ορό Μήτρες Πλάσμα EDTA Ορός Συγκέντρωση RNA του HIV-1 ομάδας O (αντίγραφα/ml) Αριθμός αντιδρώντων Αριθμός έγκυρων επαναλήψεων % αντιδρώντων Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% (μονόπλευρο) 18 187 187 100,0% 98,4% 9 181 187 96,8% 93,8% 4,5 162 189 85,7% 80,8% 2,7 117 189 61,9% 55,7% 0,9 57 189 30,2% 24,7% 18 186 187 99,5% 97,5% 9 173 188 92,0% 88,0% 4,5 142 189 75,1% 69,4% 2,7 79 189 41,8% 35,8% 0,9 39 189 20,6% 15,9% Πίνακας 14 Σύνοψη ποσοστών αντιδραστικότητας για τον HIV-2 σε πλάσμα με EDTA και ορό Μήτρες Πλάσμα EDTA Ορός Συγκέντρωση RNA του HIV-2 (IU/mL) Αριθμός αντιδρώντων Αριθμός έγκυρων επαναλήψεων % αντιδρώντων Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% (μονόπλευρο) 10 98 98 100,0% 97,0% 5 98 99 99,0% 95,3% 2,5 80 98 81,6% 74,0% 1,5 71 99 71,7% 63,3% 0,5 26 99 26,3% 19,1% 10 98 98 100,0% 97,0% 5 98 99 99,0% 95,3% 2,5 81 99 81,8% 74,2% 1,5 63 98 64,3% 55,6% 0,5 28 98 28,6% 21,1% Doc Rev. 3.0 24

Πίνακας 15 Σύνοψη ποσοστών αντιδραστικότητας για τον HCV σε πλάσμα με EDTA και ορό Μήτρες Πλάσμα EDTA Ορός Συγκέντρωση RNA του HCV (IU/mL) Αριθμός αντιδρώντων Αριθμός έγκυρων επαναλήψεων % αντιδρώντων Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% (μονόπλευρο) 12 187 188 99,5% 97,5% 6 178 189 94,2% 90,6% 3 148 189 78,3% 72,8% 1,8 112 189 59,3% 53,0% 0,6 50 189 26,5% 21,2% 12 186 189 98,4% 95,9% 6 173 189 91,5% 87,4% 3 139 189 73,5% 67,7% 1,8 112 189 59,3% 53,0% 0,6 41 189 21,7% 16,9% Πίνακας 16 Σύνοψη ποσοστών αντιδραστικότητας για τον HBV σε πλάσμα με EDTA και ορό Μήτρες Συγκέντρωση DNA του HBV (IU/mL) Αριθμός αντιδρώντων Αριθμός έγκυρων επαναλήψεων % αντιδρώντων Κατώτατο όριο εμπιστοσύνης 95% (μονόπλευρο) 3,40 188 188 100,0% 98,4% 1,70 184 189 97,4% 94,5% Πλάσμα EDTA 0,85 165 189 87,3% 82,6% 0,51 126 189 66,7% 60,6% 0,17 58 189 30,7% 25,2% 3,40 189 189 100,0% 98,4% 1,70 184 189 97,4% 94,5% Ορός 0,85 166 189 87,8% 83,2% 0,51 140 189 74,1% 68,3% 0,17 52 189 27,5% 22,2% Doc Rev. 3.0 25

Αναπαραγωγιμότητα Η αναπαραγωγιμότητα της εξέτασης cobas MPX στα συστήματα cobas 6800/8800 προσδιορίστηκε σύμφωνα με τα ακόλουθα πρότυπα: Δευτερεύοντα πρότυπα της Roche για HIV-1 ομάδας M, HCV και HBV Κύρια πρότυπα της Roche για HIV-1 ομάδας O και HIV-2. Αυτή η μελέτη αποτελείτο από την εξέταση 3 δειγμάτων ποιοτικού ελέγχου που παρασκευάστηκαν από κοινού για HIV-1 ομάδας M, HCV και HBV και μεμονωμένα για HIV-1 ομάδας O και HIV-2 σε συγκεντρώσεις περίπου 0,5 x, 1 x και 2 x του LoD της εξέτασης cobas MPX για κάθε ιό. Κατά την εξέταση ελέγχθηκαν τα ακόλουθα στοιχεία μεταβλητότητας: μεταβλητότητα μεταξύ ημερών, για 3 ημέρες μεταβλητότητα μεταξύ παρτίδων, με χρήση 3 διαφορετικών παρτίδων αντιδραστηρίων της εξέτασης cobas MPX μεταβλητότητα μεταξύ οργάνων, με χρήση 3 διαφορετικών συστημάτων cobas 8800 Εξετάστηκαν περίπου 21 επαναλήψεις με καθένα από τα 3 δείγματα ποιοτικού ελέγχου, για συνολικά 63 επαναλήψεις με κάθε παρτίδα αντιδραστηρίων. Όλα τα έγκυρα δεδομένα αναπαραγωγιμότητας αξιολογήθηκαν με υπολογισμό του ποσοστού των αντιδρώντων αποτελεσμάτων εξετάσεων για κάθε επίπεδο συγκέντρωσης, για όλα τα μεταβλητά στοιχεία. Τα όρια αμφίπλευρων διαστημάτων εμπιστοσύνης 95% για κάθε ποσοστό αντιδρώντων υπολογίστηκαν για καθένα από τα τρία επίπεδα των HIV-1 ομάδας M, HIV-1 ομάδας O, HIV-2, HCV και HBV που εξετάστηκαν σε 3 ημέρες, με 3 παρτίδες αντιδραστηρίων και 3 συστήματα cobas 8800. Η εξέταση cobas MPX εμφανίζει αναπαραγωγιμότητα μεταξύ πολλαπλών ημερών και κατά τη χρήση με πολλαπλές παρτίδες αντιδραστηρίων και όργανα. Ο Πίνακας 17 συνοψίζει τα αποτελέσματα της μεταβλητότητας μεταξύ παρτίδων αντιδραστηρίων. Doc Rev. 3.0 26

Πίνακας 17 Σύνοψη αναπαραγωγιμότητας αποτελεσμάτων μεταξύ παρτίδων αντιδραστηρίων της εξέτασης cobas MPX Παράμετρος εξέτασης HIV-1 ομάδας M HIV-1 ομάδας O Συγκέντρωση 2 x LoD 1 x LoD 0,5 x LoD 2 x LoD 1 x LoD 0,5 x LoD Παρτίδα αντιδραστηρίων % αντιδρώντων (αντιδρώσες/έγκυρες επαναλήψεις) Κατώτατο όριο του διαστήματος εμπιστοσύνης 95% Ανώτατο όριο του διαστήματος εμπιστοσύνης 95% 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 98,4% (62/63) 91,5% 100,0% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 85,7% (54/63) 74,6% 93,3% 2 95,2% (60/63) 86,7% 99,0% 3 92,1% (58/63) 82,4% 97,4% 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 92,1% (58/63) 82,4% 97,4% 2 93,7% (59/63) 84,5% 98,2% 3 93,7% (59/63) 84,5% 98,2% 1 74,6% (47/63) 62,1% 84,7% 2 76,2% (48/63) 63,8% 86,0% 3 74,6% (47/63) 62,1% 84,7% Doc Rev. 3.0 27

Παράμετρος εξέτασης HIV-2 HCV HBV Συγκέντρωση 2 x LoD 1 x LoD 0,5 x LoD 2 x LoD 1 x LoD 0,5 x LoD 2 x LoD 1 x LoD 0,5 x LoD Παρτίδα αντιδραστηρίων % αντιδρώντων (αντιδρώσες/έγκυρες επαναλήψεις) Κατώτατο όριο του διαστήματος εμπιστοσύνης 95% Ανώτατο όριο του διαστήματος εμπιστοσύνης 95% 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 98,4% (62/63) 91,5% 100,0% 1 82,5% (52/63) 70,9% 90,9% 2 93,7% (59/63) 84,5% 98,2% 3 87,3% (55/63) 76,5% 94,4% 1 74,6% (47/63) 62,1% 84,7% 2 71,4% (45/63) 58,7% 82,1% 3 73,0% (46/63) 60,3% 83,4% 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 98,4% (62/63) 91,5% 100,0% 1 77,8% (49/63) 65,5% 87,3% 2 98,4% (62/63) 91,5% 100,0% 3 93,7% (59/63) 84,5% 98,2% 1 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 2 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 3 100,0% (63/63) 94,3% 100,0% 1 90,5% (57/63) 80,4% 96,4% 2 90,5% (57/63) 80,4% 96,4% 3 93,7% (59/63) 84,5% 98,2% 1 84,1% (53/63) 72,7% 92,1% 2 76,2% (48/63) 63,8% 86,0% 3 77,8% (49/63) 65,5% 87,3% Doc Rev. 3.0 28