B Φιαλίδια Καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa Με Συμπλήρωμα Ζωμού Middlebrook 7H9

B Φιαλίδια Καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa Με Συμπλήρωμα Ζωμού Middlebrook 7H9 PP101JAA(02) 2015-05 Ελληνικά ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Τα υλικά καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa (τροποποιημένος ζωμός Middlebrook 7H9 με CO 2 ) με την προσθήκη Συμπληρώματος BACTEC Supplement/F και μείγμα αντιβιοτικών BACTEC PANTA/F, όπου εφαρμόζεται, χρησιμοποιούνται με το όργανο της σειράς φθορισμού BACTEC 9000MB ως μια ποιοτική διαδικασία για καλλιέργεια in vitro και ανάκτηση μυκοβακτηρίων. Τα αποδεκτά δείγματα που μπορούν να χρησιμοποιηθούν είναι κλινικά δείγματα που έχουν υποβληθεί σε πέψη και απολύμανση και στείρα σωματικά υγρά, πλην του αίματος. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ Από τα μέσα της δεκαετίας του 1980 και την εξάπλωση της επιδημίας του AIDS, έχουν επανεμφανιστεί Mycobacterium tuberculosis (MTB) και είδη Mycobacteria πλην αυτού της φυματίωσης (MOTT), ιδιαίτερα το σύμπλεγμα Mycobacterium avium (MAC). Από το 1985 έως το 1992, αυξήθηκε κατά 18% ο αριθμός περιστατικών MTB που αναφέρθηκαν. Η φυματίωση εξακολουθεί να σκοτώνει περίπου 3 εκατομμύρια άτομα παγκοσμίως σε ετήσια βάση, γεγονός που την καθιστά την πρώτη αιτία θανάτου από λοιμώδη νόσο. 1 Μεταξύ του 1981 και του 1987, οι παρακολουθήσεις των περιστατικών AIDS υποδήλωναν ότι 5,5% των ασθενών με AIDS έπασχαν από διάχυτες μη-φυματιώδεις μυκοβακτηριακές λοιμώξεις, π.χ., MAC. Μέχρι το 1990, ο αυξημένος αριθμός περιστατικών διάχυτων μη-φυματιωδών μυκοβακτηριακών λοιμώξεων είχε σαν αποτέλεσμα αθροιστική συχνότητα 7,6%. 2 Εκτός από την επανεμφάνιση του MTB, αυξανόμενη ανησυχία προκαλεί και το MTB (MDR-TB) που παρουσιάζει αντοχή σε πολλαπλά φάρμακα. Οι εργαστηριακές καθυστερήσεις στην ανάπτυξη, ταυτοποίηση και αναφορά αυτών των περιστατικών MDR-TB συμβάλλουν, τουλάχιστον εν μέρει, στην εξάπλωση της νόσου. Τα Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Νοσημάτων (CDC) συνιστούν να καταβάλλεται κάθε προσπάθεια από τα εργαστήρια ώστε να χρησιμοποιούνται οι ταχύτερες διαθέσιμες μέθοδοι για τις διαγνωστικές εξετάσεις μυκοβακτηριδίων. Αυτές οι συστάσεις περιλαμβάνουν τη χρήση τόσο υγρού όσο και στερεού υλικού για μυκοβακτηριακή καλλιέργεια. 3 Το σύστημα BACTEC 9000MB έχει σχεδιαστεί για ταχεία ανίχνευση μυκοβακτηρίων σε κλινικά δείγματα, πλην του αίματος. Το σύστημα περιλαμβάνει ένα υγρό υλικό καλλιέργειας (Φιαλίδιο Καλλιέργειας MYCO/F-Sputa), ένα συμπλήρωμα ανάπτυξης (Supplement/F) και ένα συμπλήρωμα αντιβιοτικών (BACTEC PANTA/F). Το Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F περιέχει ενισχυτές ανάπτυξης για μυκοβακτήρια, και χρησιμοποιείται επίσης για την ανασύσταση του BACTEC PANTA/F. Το BACTEC PANTA/F περιέχει αντιμικροβιακούς παράγοντες που χρησιμοποιούνται για την καταστολή της ανάπτυξης μικροοργανισμών επιμολύνουσας ή φυσιολογικής χλωρίδας, οι οποίοι μπορεί να επιβιώσουν μετά τη διεργασία απολύμανσης και συνιστάται η προσθήκη του σε όλα τα μη στείρα δείγματα. Κάθε φιαλίδιο περιέχει έναν αισθητήρα, ο οποίος είναι σε θέση να ανιχνεύσει μειώσεις στο οξυγόνο που διαλύεται στο υλικό και προέρχεται από το μεταβολισμό και την ανάπτυξη των μικροοργανισμών. Ο αισθητήρας παρακολουθείται από το όργανο για αυξημένο φθορισμό, που είναι ανάλογος του φθίνοντος περιεχομένου διαλυμένου οξυγόνου. Μια θετική μέτρηση υποδηλώνει την συμπερασματική παρουσία βιώσιμων μυκοβακτηρίων στο φιαλίδιο. Η ανίχνευση περιορίζεται στους μικροοργανισμούς που αναπτύσσονται στο υλικό. ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Κλινικά δείγματα, πλην του αίματος, συλλέγονται και υποβάλλονται σε επεξεργασία σύμφωνα με τις τυπικές διαδικασίες για την ανάκτηση μυκοβακτηρίων. Τα επεξεργασμένα δείγματα ενοφθαλμίζονται με βελόνα και σύριγγα στο φιαλίδιο καλλιέργειας BACTEC Myco/F-Sputa που έχει συμπληρωθεί με Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F ή/και BACTEC PANTA/F ανάλογα με τον τύπο δείγματος (ανατρέξτε στην ενότητα Διαδικασία ). Τα στοιχεία του ασθενή εισάγονται στον υπολογιστή του συστήματος και ανατίθεται στο φιαλίδιο μία θέση επώασης μέσω του μενού γραμμωτού κώδικα στο όργανο. Το φιαλίδιο τοποθετείται στο Σύστημα BACTEC 9000MB και επωάζεται συνέχεια στους 37 C, με ανακίνηση μια φορά κάθε δέκα λεπτά για μέγιστη ανάκτηση. Η αναπνοή από βιώσιμους αερόβιους μικροοργανισμούς που υπάρχουν σε ένα φιαλίδιο MYCO/F-Sputa οδηγεί σε μια καθαρή μείωση του οξυγόνου μέσα στο φιαλίδιο. Η αύξηση στο φθορισμό του αισθητήρα που βρίσκεται στο φιαλίδιο προκαλείται από την ελάττωση του διαλυμένου οξυγόνου. Κάθε φιαλίδιο καλλιέργειας παρακολουθείται από το Σύστημα BACTEC 9000MB κάθε δέκα λεπτά για αυξανόμενο φθορισμό. Η ανάλυση του ποσοστού διαλυμένου οξυγόνου χρησιμοποιείται ώστε να προσδιοριστεί εάν το φιαλίδιο είναι θετικό κατά την καλλιέργεια, δηλ. εάν το εξεταζόμενο δείγμα περιέχει βιώσιμους οργανισμούς. Τα φιαλίδια καλλιέργειας που παραμένουν αρνητικά για 42 ημέρες (μέχρι 56 ημέρες) τουλάχιστον και τα οποία δεν εμφανίζουν ορατά σημεία θετικότητας, αφαιρούνται από το όργανο και αποστειρώνονται πριν από την απόρριψη. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ Τα φιαλίδια καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa περιέχουν τα ακόλουθα δραστικά συστατικά πριν από την επεξεργασία: Κατάλογος Συστατικών Επεξεργασμένο νερό... 40 ml Θειικό αμμώνιο...0,05% w/v Βάση Ζωμού 7H9 Middlebrook...0,47% w/v Κιτρικό σιδηρo(iii)αμμώνιο...0,006% w/v Υδρόλυμα καζεΐνης...0,10% w/v Polysorbat 80...0,0025% w/v Συμπλήρωμα H...0,30% w/v Αιμίνη...0,0005% w/v Γλυκερόλη...0,10% w/v Όλα τα υλικά καλλιέργειας BACTEC διανέμονται με πρόσθετο CO 2. Η σύνθεση ενδέχεται να έχει προσαρμοστεί σύμφωνα με τις ειδικές απαιτήσεις απόδοσης. 1

Πριν από τον ενοφθαλμισμό αναπνευστικών και μη στείρων δειγμάτων, κάθε φιαλίδιο 40 ml υλικού BACTEC MYCO/F-Sputa απαιτεί την προσθήκη 2,0 ml διαλύματος Συμπληρώματος Αντιβιοτικών BACTEC PANTA/F όπως ανασυσταίνεται με Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F. Πριν από τον ενοφθαλμισμό στείρων σωματικών υγρών, πλην του αίματος, κάθε φιαλίδιο 40 ml υλικού BACTEC MYCO/F-Sputa πρέπει να συμπληρωθεί με 2,0 ml Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F. Για περισσότερες πληροφορίες δείτε τα Εσώκλειστα Οδηγιών των BACTEC PANTA/F (PP-102) και Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F (PP-103). ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ Προφυλάξεις: in vitro διαγνωστική χρήση. Το προϊόν αυτό περιέχει ξηρό φυσικό ελαστικό. ΔΥΝΗΤΙΚΑ ΜΟΛΥΣΜΑΤΙΚΟ ΔΕΙΓΜΑ ΕΞΕΤΑΣΗΣ. Τηρείτε τις Παγκόσμιες Προφυλάξεις 4,5 και τις οδηγίες των ιδρυμάτων κατά το χειρισμό και την απόρριψη υλικών που επιμολύνουν. Συνιστάται η χρήση πρακτικής, εξοπλισμού και εγκαταστάσεων περιορισμού Επιπέδου Βιολογικής Ασφάλειας 2 κατά την παρασκευή οξεάντοχων χρώσεων και καλλιέργειας κλινικών δειγμάτων. Για δραστηριότητες που περιλαμβάνουν πολλαπλασιασμό και χειρισμό Mycobacterium tuberculosis ή ειδών Mycobacterium που αναπτύσσονται σε καλλιέργεια, απαιτείται πρακτική, εξοπλισμός και εγκαταστάσεις περιορισμού Επιπέδου Βιολογικής Ασφάλειας 3, σύμφωνα με τις συστάσεις του CDC. 6 Πριν από τη χρήση, κάθε φιαλίδιο θα πρέπει να εξετάζεται για τυχόν ενδείξεις επιμόλυνσης, όπως θόλωση, διόγκωση ή υποχώρηση του διαφράγματος ή διαρροή. Σε σπάνιες περιπτώσεις, ο λαιμός της γυάλινης φιάλης ενδέχεται να φέρει ρωγμές και είναι πιθανό να σπάσει κατά τη διάρκεια της αφαίρεσης του αποσπώμενου καπακιού ή κατά το χειρισμό. Επίσης, ένα φιαλίδιο μπορεί να παρουσιάζει ατελή εφαρμογή του πώματος, που υποδεικνύεται όταν το μεταλλικό άκρο στο κάτω μέρος του πώματος δεν εφαρμόζει ομοιόμορφα κάτω από το τελείωμα του λαιμού της φιάλης. Και στις δύο περιπτώσεις, το περιεχόμενο των φιαλιδίων ενδέχεται να διαρρεύσει ή να χυθεί, ιδιαίτερα εάν το φιαλίδιο αναστραφεί. ΜΗ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΕ οποιοδήποτε φιαλίδιο που εμφανίζει ενδείξεις επιμόλυνσης, βλάβη ή ατελή εφαρμογή. Για την ελαχιστοποίηση της πιθανότητας διαρροής κατά τον ενοφθαλμισμό των δειγμάτων σε φιαλίδια καλλιέργειας, χρησιμοποιήστε μια σύριγγα φυματίνης με μόνιμα συνδεδεμένη βελόνα 25-gauge. Θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί μια τεχνική ενοφθαλμισμού με το ένα χέρι και μια κατάλληλη υποδοχή φιαλιδίου για να αποτραπούν τυχαίοι τραυματισμοί από τη βελόνα. ΔΕΝ πρέπει να χρησιμοποιούνται βελόνες μεγαλύτερες των 20-gauge. Για την προσθήκη συμπληρώματος, συμπίεση, αποσυμπίεση ή ανακαλλιέργεια η χρήση μεγαλύτερων βελόνων μπορεί να προκαλέσει μόνιμη βλάβη στο διάφραγμα του φιαλιδίου και διαρροή. Θετικά φιαλίδια καλλιέργειας για ανακαλλιέργεια ή χρώση, κλπ.: Πριν από τη δειγματοληψία, είναι απαραίτητο να απελευθερωθεί αέριο, το οποίο συχνά συσσωρεύεται λόγω μικροβιακού μεταβολισμού. Η δειγματοληψία θα πρέπει να πραγματοποιείται σε θάλαμο βιολογικής ασφάλειας, και θα πρέπει να φοράτε κατάλληλη προστατευτική ενδυμασία, γάντια και μάσκα. Δείτε την ενότητα ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με την ανακαλλιέργεια. Ένα επιμολυσμένο φιαλίδιο θα μπορούσε να είναι υπό θετική πίεση. Εάν ληφθεί υλικό από επιμολυσμένο δείγμα, μπορεί να απελευθερωθεί από το φιαλίδιο αέριο ή/και επιμολυσμένο υλικό καλλιέργειας, δημιουργώντας κίνδυνο αερολυμάτων. Η επιμόλυνση του φιαλιδίου ενδέχεται να μην είναι άμεσα εμφανής. Πριν από την απόρριψη, αποστειρώστε όλα τα ενοφθαλμισμένα φιαλίδια MYCO/F-Sputa σε αυτόκαυστο. ΦΙΑΛΙΔΙΑ ΜΕ ΔΙΑΡΡΟΗ Ή ΣΠΑΣΜΕΝΑ ΦΙΑΛΙΔΙΑ Σε ένα ενοφθαλμισμένο φιαλίδιο που έχει σπάσει ή εμφανίζει διαρροή πρέπει να χρησιμοποιείται η καθιερωμένη διαδικασία του εκάστοτε εργαστηρίου για την αντιμετώπιση μυκοβακτηριακών κηλίδων. Θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν τουλάχιστον οι Παγκόσμιες προφυλάξεις. Συνιστάται μια εγκεκριμένη μορφή αναπνευστικής προστασίας. Κάθε φιαλίδιο που παρουσιάζει ελάχιστη διαρροή που περιορίζεται στο διάφραγμα και το πώμα του φιαλιδίου μπορεί να απολυμαίνεται τοπικά χρησιμοποιώντας μυκοβακτηριοκτόνο απολυμαντικό, και κατόπιν με 70% ισοπροπυλική αλκοόλη. Εάν προκύψει κάτι αντίστοιχο μέσα στο όργανο, υπάρχει πιθανότητα έκθεσης σε αερολύματα. Απενεργοποιήστε το όργανο και κλείστε αμέσως τις πόρτες. Εκκενώστε την περιοχή που έχει επιμολυνθεί. Απευθυνθείτε στους υπεύθυνους για θέματα ασφάλειας ή επιμολύνσεων των εγκαταστάσεών σας. Προσδιορίστε την αναγκαιότητα απενεργοποίησης ή τροποποίησης των ρυθμίσεων των μονάδων κλιματισμού αέρα που εξυπηρετούν την περιοχή που έχει επιμολυνθεί. Μην επιστρέψετε στην περιοχή προτού κατακαθίσουν τα όποια αερολύματα ή προτού απομακρυνθούν με τον κατάλληλο εξαερισμό. Θα πρέπει να ενημερώσετε τον τοπικό αντιπρόσωπο της Becton Dickinson. Οδηγίες για το σωστό χειρισμό τυχαίας μυκοβακτηριδιακής επιμόλυνσης λόγω θραύσης σωληναρίων καλλιέργειας ή εναιωρημάτων ζωμού έχουν εκδοθεί από τα κέντρα CDC. 6 ΟΔΗΓΙΕΣ ΦΥΛΑΞΗΣ Φιαλίδια καλλιέργειας MYCO/F-SPUTA: Φυλάσσετε στους 2 25 C, σε ξηρό μέρος και μακριά από απευθείας έκθεση στο φως. ΜΗΝ χρησιμοποιείτε μετά την ημερομηνία λήξης. Συμπλήρωμα Αντιβιοτικών BACTEC PANTA/F: Φυλάσσετε το μη ανασυσταμένο BACTEC PANTA/F στους 2 8 C. Μετά την ανασύσταση, θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί αμέσως ή να φυλάσσεται κατεψυγμένο στους -20 έως -70 C για διάστημα μέχρι έξι μήνες. ΜΗΝ αποψύχετε και καταψύχετε ξανά. Προστατεύετε από το φως. Πρέπει να αποφεύγεται η υπερθέρμανση. ΜΗΝ χρησιμοποιείτε μετά την ημερομηνία λήξης. ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ Τα πτύελα ή άλλα αναπνευστικά δείγματα πρέπει να υποβληθούν σε πέψη και απολύμανση και να συμπυκνωθούν πριν από τον ενοφθαλμισμό σε φιαλίδια καλλιέργειας MYCO/F-Sputa. Συνιστάται η μέθοδος N-ακετυλ-L-κυστεΐνης-υδροξειδίου του νατρίου. 6,7,8 Εναλλακτικά, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την επεξεργασία του δείγματος το Κιτ BBL MycoPrep. Δεν έχουν εξεταστεί άλλες μέθοδοι απολύμανσης σε συνδυασμό με το υλικό MYCO/F-Sputa. Μετά από φυγοκέντρηση ( 3.000 x g, 15 λεπτά) το ίζημα θα πρέπει να εναιωρηθεί εκ νέου σε στείρο φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα, ph 6,8. 2

Η επεξεργασία μη αναπνευστικών δειγμάτων, πλην του αίματος, θα πρέπει να διενεργείται σύμφωνα με το εγχειρίδιο κλινικής μικροβιολογίας Clinical Microbiology Handbook, 9 το εγχειρίδιο του CDC, ή όπως ορίζεται στο εγχειρίδιο διαδικασιών του εκάστοτε εργαστηρίου. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Το υλικό καλλιέργειας MYCO/F-Sputa πρέπει να χρησιμοποιείται με όργανο της σειράς φθορισμού BACTEC 9000MB. Παρεχόμενα υλικά: Φιαλίδια καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa, Συμπλήρωμα Αντιβιοτικών BACTEC PANTA/F και Συμπλήρωμα Υλικού Supplement/F BACTEC. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται: Φυγόκεντρος, Θάλαμος Βιολογικής Ασφάλειας, Αυτόκαυστο, θάλαμος επώασης CO 2 στους 37 C, σωληνάρια φυγόκεντρου 50 ml Falcon, υδροξείδιο του νατρίου 4%, διάλυμα κιτρικού νατρίου 2,9%, σκόνη N-ακετυλ-L-κυστεΐνης, φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα, αναμείκτης περιδίνησης (vortex) ph 6,8, στείρες πιπέτες μεταφοράς, στείρα σύριγγα φυματίνης με βελόνα 25-gauge, μυκοβακτηριοκτόνο απολυμαντικό, ισοπροπυλική αλκοόλη 70%, μυκοβακτηριακό άγαρ ή υλικό καλλιέργειας με βάση το αυγό, ζωμός 7H9, στείρο αλατούχο διάλυμα, οργανισμοί Ποιοτικού Ελέγχου (Mycobacterium tuberculosis, ATCC 27294, Mycobacterium fortuitum, ATCC 6841, και Mycobacterium kansasii, ATCC 12478), μικροσκόπιο και υλικά για αντικειμενοφόρους πλάκες με χρώση. ΕΝΟΦΘΑΛΜΙΣΜΟΣ ΦΙΑΛΙΔΙΩΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ MYCO/F-SPUTA 1. Αφαιρέστε το αποσπώμενο πώμα από το φιαλίδιο BACTEC και επιθεωρήστε το φιαλίδιο για τυχόν ρωγμές, επιμόλυνση, υπερβολική θόλωση και διόγκωση ή υποχώρηση του διαφράγματος. ΜΗΝ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΗΣΕΤΕ το προϊόν εάν παρατηρήσετε οποιοδήποτε ελάττωμα. 2. Επισημάνετε το φιαλίδιο καλλιέργειας με τα στοιχεία του δείγματος. 3. Κάντε ανασύσταση του λυοφιλοποιημένου φιαλιδίου BACTEC PANTA/F με 10 ml Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F χρησιμοποιώντας μια σύριγγα με ρύγχος Luer-Lok που διαθέτει βελόνα 25-gauge. ΔΕΝ ΠΡΕΠΕΙ να χρησιμοποιούνται βελόνες μεγαλύτερες των 20-gauge. Μεγαλύτερες βελόνες μπορεί να προκαλέσουν μόνιμη ζημιά στο διάφραγμα του φιαλιδίου. Αναμείξτε καλά τα περιεχόμενα. Επιθεωρήστε οπτικά το περιεχόμενο του φιαλιδίου για να βεβαιωθείτε ότι έχει διαλυθεί το Συμπλήρωμα Αντιβιοτικών BACTEC PANTA/F. 4. Για αναπνευστικά και μη στείρα δείγματα, τα φιαλίδια υλικού MYCO/F-Sputa που πρόκειται να ενοφθαλμιστούν πρέπει να συμπληρώνονται με 2,0 ml ανασυσταμένου διαλύματος BACTEC PANTA/F. Τα συμπληρωμένα φιαλίδια θα πρέπει να ενοφθαλμίζονται εντός δύο ωρών από την προσθήκη του διαλύματος BACTEC PANTA/F. Πριν ενοφθαλμίσετε με το διάλυμα BACTEC PANTA/F, σκουπίστε το διάφραγμα με ισοπροπυλική αλκοόλη 70%. Συνιστάται σύριγγα φυματίνης εξοπλισμένη με μη αφαιρούμενη βελόνα 25-gauge. Θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί μια τεχνική ενοφθαλμισμού με το ένα χέρι και μια κατάλληλη υποδοχή φιαλιδίου για να αποτραπούν οι τραυματισμοί από τη βελόνα. Για ιστό ή άλλα δείγματα σωματιδίων, συνιστάται η χρήση μεγαλύτερης βελόνας (20 22 gauge) και σύριγγα με ρύγχος Luer-Lok ή ρύγχος παρόμοιου τύπου. Για στείρα σωματικά υγρά, πλην αίματος, (π.χ. αρθρικό υγρό, περιτοναϊκό υγρό), τα φιαλίδια υλικού καλλιέργειας BACTEC MYCO/ F-Sputa πρέπει να συμπληρώνονται με 2,0 ml Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F πριν από τον ενοφθαλμισμό. Πριν ενοφθαλμίσετε με το Συμπλήρωμα BACTEC Supplement/F, σκουπίστε το διάφραγμα με ισοπροπυλική αλκοόλη 70%. Συνιστάται σύριγγα φυματίνης εξοπλισμένη με μη αφαιρούμενη βελόνα 25-gauge. Θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί μια τεχνική ενοφθαλμισμού με το ένα χέρι και μια κατάλληλη υποδοχή φιαλιδίου για να αποτραπούν τυχαίοι τραυματισμοί από τη βελόνα. 5. Εγχύστε ασηπτικά 0,5 ml από το επεξεργασμένο δείγμα ανά φιαλίδιο χρησιμοποιώντας σύριγγα φυματίνης με βελόνα 25-gauge. Η εισαγωγή και η αφαίρεση της βελόνας θα πρέπει να γίνονται με ευθεία κίνηση, αποφεύγοντας τυχόν δια-πλευρικές κινήσεις που θα μπορούσαν να προκαλέσουν μόνιμη βλάβη στο διάφραγμα. Σκουπίστε το διάφραγμα με μυκοβακτηριοκτόνο απολυμαντικό και κατόπιν με ισοπροπυλική αλκοόλη 70%. Τα ενοφθαλμισμένα φιαλίδια θα πρέπει να τοποθετηθούν στο Σύστημα BACTEC 9000MB το συντομότερο δυνατόν, και ασφαλώς μέσα στην ίδια ημέρα που απολυμάνθηκε, υποβλήθηκε σε επεξεργασία και ενοφθαλμίστηκε το δείγμα στα φιαλίδια καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa. Την ίδια χρονική στιγμή θα πρέπει να ενοφθαλμιστούν συμβατικά υλικά καλλιέργειας, όπως Lowenstein-Jensen ή 7H10/7H11. 6. Τα φιαλίδια που εισάγονται στο όργανο θα εξεταστούν αυτόματα για όλη τη διάρκεια του πρωτοκόλλου εξέτασης. Τα θετικά φιαλίδια θα ταυτοποιηθούν από το Σύστημα BACTEC 9000MB (δείτε το Εγχειρίδιο Χρήσης BACTEC 9000MB, MA-0092). Ο αισθητήρας στο εσωτερικό του φιαλιδίου ενδέχεται να μην εμφανίζεται ορατά διαφορετικός στα θετικά και αρνητικά φιαλίδια, ωστόσο, το Σύστημα BACTEC 9000MB μπορεί να προσδιορίσει τη διαφορά στο φθορισμό του αισθητήρα. 7. Τα θετικά φιαλίδια θα πρέπει να ανακαλλιεργηθούν και να παρασκευαστεί επίχρισμα για οξεάντοχη χρώση. Επεξεργασία φιαλιδίου θετικού ως προς το όργανο: α) Αφαιρέστε το φιαλίδιο από το όργανο. β) Στο θάλαμο βιολογικής ασφάλειας, αερίστε το φιαλίδιο για να εξισορροπηθεί η πίεση του φιαλιδίου με την ατμόσφαιρα. γ) Αναστρέψτε το φιαλίδιο για ανάμειξη του περιεχομένου. δ) Αφαιρέστε κλάσμα από το φιαλίδιο ( περίπου 0,1 ml) για παρασκευάσματα χρώσης (χρώσεις AFB και Gram). ε) Εξετάστε τα επιχρίσματα και τα παρασκευάσματα. Αναφέρετε τα προκαταρκτικά αποτελέσματα μόνο μετά από αξιολόγηση οξεάντοχης χρώσης επιχρίσματος. Εάν το επίχρισμα AFB είναι θετικό, προχωρήστε με ανακαλλιέργεια σε στερεό υλικό καλλιέργειας και αναφέρετε ως: θετικό κατά το όργανο, AFB θετικό, εκκρεμεί ταυτοποίηση. Εάν υπάρχουν μικροοργανισμοί εκτός από οξεάντοχους βακίλους αναφέρετε ως: θετικό κατά το όργανο, AFB αρνητικό, Επιμολυσμένο. Εάν δεν υπάρχουν μικροοργανισμοί στα επιχρίσματα, εισάγετε ξανά το φιαλίδιο στο όργανο ως εξεταζόμενο αρνητικό φιαλίδιο και αφήστε να ολοκληρωθεί το πρωτόκολλο εξέτασης. Δεν υπάρχει αποτέλεσμα δυνάμενο να αναφερθεί. 3

Οι ανακαλλιέργειες για ταυτοποίηση και εξέταση ευαισθησίας φαρμάκων μπορούν να εκτελεστούν χρησιμοποιώντας υγρό από τα φιαλίδια καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa. Ανακαλλιέργεια και Εκ νέου Εισαγωγή Φιαλιδίου: Η ανακαλλιέργεια πρέπει να πραγματοποιείται σε θάλαμο βιολογικής ασφάλειας, και θα πρέπει να φοράτε κατάλληλο ρουχισμό, γάντια και μάσκες. Πριν από την ανακαλλιέργεια, τοποθετήστε το φιαλίδιο σε όρθια θέση, και τοποθετήστε ένα ταμπόν αλκοόλης πάνω από το διάφραγμα. Για να εκτονώσετε την όποια θετική πίεση στο φιαλίδιο, η οποία θα μπορούσε να προκαλείται από την ανάπτυξη επιμολυνόντων παραγόντων, εισαγάγετε μια αποστειρωμένη βελόνα 25-gauge (ή μικρότερη) με κατάλληλο φίλτρο ή επίθεμα μέσω του ταμπόν αλκοόλης και του διαφράγματος. Η βελόνα θα πρέπει να αφαιρείται μετά την εκτόνωση της όποιας πίεσης και πριν από τη δειγματοληψία του φιαλιδίου για ανακαλλιέργεια. Η εισαγωγή και η αφαίρεση της βελόνας θα πρέπει να γίνονται με ευθεία κίνηση, αποφεύγοντας τυχόν δια-πλευρικές κινήσεις που θα μπορούσαν να προκαλέσουν μόνιμη βλάβη στο διάφραγμα. Για να ανακαλλιεργήσετε το εξαερωμένο φιαλίδιο, αναστρέψτε για να αναμειχθεί το περιεχόμενό του καλά και εισάγετε μια νέα σύριγγα, με βελόνα 25-gauge, για να αφαιρέσετε υλικό καλλιέργειας για περαιτέρω επεξεργασία. Μην επανατοποθετείτε το καπάκι της βελόνας. Απορρίπτετε τις βελόνες και τις σύριγγες σε αδιάτρητο δοχείο βιολογικά επικίνδυνων υλικών. Ο χρήστης μπορεί να επιθυμεί να επιστρέψει ένα φιαλίδιο με αρνητικό αποτέλεσμα επιχρίσματος στο όργανο για να εξακολουθήσει η παρακολούθηση μέσω του πρωτοκόλλου εξέτασης. Στο τέλος των έξι εβδομάδων επώασης, εκτελέστε έναν οπτικό έλεγχο όλων των αρνητικών κατά το όργανο φιαλιδίων. Εάν το φιαλίδιο εμφανίζεται οπτικά να είναι θετικό (δηλ. θολό, με πιθανούς σβώλους μυκοβακτηρίων) θα πρέπει να ανακαλλιεργηθεί, να υποβληθεί σε οξεάντοχη χρώση και να αντιμετωπιστεί ως συμπερασματικά θετικό, εφόσον το αποτέλεσμα της οξεάντοχης χρώσης είναι θετικό. Εάν το φιαλίδιο δεν εμφανίζει σημεία θετικότητας, θα πρέπει να αποστειρωθεί πριν από την απόρριψη ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ Κάθε χαρτονένιο κουτί υλικών καλλιέργειας συνοδεύεται από πιστοποιητικά ποιοτικού ελέγχου. Συνιστάται κάθε νέα παραλαβή ή παρτίδα υλικού καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa να εξετάζεται με τους οργανισμούς ελέγχου ATCC που ταυτοποιούνται στο παρακάτω διάγραμμα ως θετικοί μάρτυρες και ένα μη ενοφθαλμισμένο φιαλίδιο ως αρνητικός μάρτυρας. Οργανισμός Εύρος χρόνου έως την ανίχνευση (ημέρες) Mycobacterium tuberculosis, H37Rv, ATCC 27294 8 έως 12 Mycobacterium fortuitum, ATCC 6841 1 έως 3 Mycobacterium kansasii, ATCC 12478 6 έως 12 Για να παρασκευάσετε ένα φιαλίδιο θετικού ελέγχου: 1. Αναπτύξτε τον οργανισμό σε ζωμό 7H9. 2. Παρασκευάστε ένα εναιώρημα #1 McFarland (»10 7 CFU/mL) του οργανισμού χρησιμοποιώντας στείρο αλατούχο διάλυμα. 3. Αραιώστε το εναιώρημα σε 10 4 CFU/mL χρησιμοποιώντας στείρο αλατούχο διάλυμα. 4. Ενοφθαλμίστε 1 ml αυτού του εναιωρήματος σε ένα φιαλίδιο καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa που έχει συμπληρωθεί με 2,0 ml ανασυσταμένου BACTEC PANTA/F. Το ενοφθάλμισμα 1 ml προορίζεται για χρήση μόνο για τους οργανισμούς Ποιοτικού Ελέγχου. Τα φιαλίδια θετικού και αρνητικού ελέγχου θα πρέπει να σαρώνονται στο όργανο και να εξετάζονται. Το φιαλίδιο θετικού ελέγχου θα πρέπει να ανιχνεύεται ως θετικό από το όργανο εντός του χρονικού εύρους που αναγράφεται στο παραπάνω διάγραμμα. Το αρνητικό φιαλίδιο ελέγχου θα πρέπει να παραμείνει αρνητικό. Εάν οποιοδήποτε από αυτά τα φιαλίδια δεν δώσει τα αναμενόμενα αποτελέσματα, μη χρησιμοποιήσετε το υλικό καλλιέργειας εάν δεν επικοινωνήσετε πρώτα με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με τον ποιοτικό έλεγχο για το Σύστημα BACTEC 9000MB, ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χρήσης BACTEC 9000MB (MA-0092). ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Ένα δείγμα θετικό κατά την καλλιέργεια προσδιορίζεται από το Σύστημα BACTEC 9000MB και επιβεβαιώνεται από οξεάντοχη χρώση επιχρίσματος. Ένα θετικό αποτέλεσμα υποδεικνύει την πιθανή παρουσία βιώσιμων μικροοργανισμών στο φιαλίδιο. ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Επιμόλυνση Πρέπει να προσέχετε έτσι ώστε να αποτρέψετε τυχόν εξωτερική επιμόλυνση του δείγματος κατά τη συλλογή, την πέψη, την απολύμανση και τον ενοφθαλμισμό στο φιαλίδιο BACTEC. Λόγω του πλούτου του υλικού και τον μη εκλεκτικό χαρακτήρα της ανίχνευσης φθορισμού της κατανάλωσης οξυγόνου, ενδέχεται να προκύψει επιμόλυνση. Οι διαδικασίες πέψης και απολύμανσης πρέπει να εκτελούνται προσεκτικά ώστε να μειώνονται οι επιμολύνσεις από μη μυκοβακτηριακούς οργανισμούς. Θα πρέπει να εξετάζονται μόνο οι ενδεικνυόμενοι τύποι δείγματος. Ένα επιμολυσμένο φιαλίδιο θα δώσει θετική μέτρηση από το όργανο, αλλά δε θα υποδεικνύει σχετικό κλινικό αποτέλεσμα. Αυτός ο προσδιορισμός πρέπει να γίνει από το χρήστη, με βάση παράγοντες όπως το αποτέλεσμα της οξεάντοχης χρώσης επιχρίσματος, του τύπου οργανισμού που ανακτάται, της εμφάνισης του ίδιου οργανισμού σε πολλαπλές καλλιέργειες, το ιστορικό του ασθενή, κλπ. (Ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χρήσης BACTEC 9000MB, MA-0092, για τη διαδικασία εκ νέου απολύμανσης του φιαλιδίου.) Συνιστάται απολύμανση με τη μέθοδο N-ακετυλ-L-κυστεΐνης-υδροξειδίου του νατρίου (NALC-NaOH). Δεν έχουν εξεταστεί άλλες μέθοδοι απολύμανσης σε συνδυασμό με το υλικό BACTEC MYCO/F-Sputa. Τα διαλύματα πέψης/ απολύμανσης ενδέχεται να έχουν βλαβερές επιπτώσεις στα μυκοβακτήρια. 4

Τύπος δείγματος Τα φιαλίδια καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa με προσθήκη Supplement/F BACTEC και BACTEC PANTA/F, όπου εφαρμόζεται, προορίζονται για χρήση για την καλλιέργεια και ανάκτηση κλινικών δειγμάτων που έχουν υποβληθεί σε πέψη και απολύμανση και στείρων σωματικών υγρών, πλην του αίματος. Το ελάχιστο επίπεδο ανίχνευσης αυτής της εξέτασης μπορεί να ποικίλει ανάλογα με τα μυκοβακτηριακά είδη που υπάρχουν στο δείγμα. ΜΗ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΕ τα φιαλίδια καλλιέργειας με υλικό BACTEC MYCO/F-Sputa για την ανάκτηση μυκοβακτηρίων από αίμα. Τα πλευριτικά υγρά ενδέχεται να περιέχουν ερυθρά και λευκά αιμοσφαίρια 10 τα οποία παρουσιάζουν μεγάλο ποσοστό οξειδωτικού μεταβολισμού, που μπορεί να οδηγήσει σε ψευδή θετικότητα. Γενικές Παρατηρήσεις Η ανίχνευση μυκοβακτηριακών ειδών σε κλινικά δείγματα εξαρτάται από τον αριθμό των οργανισμών που βρίσκεται στο δείγμα, τις μεθόδους συλλογής δείγματος, παράγοντες που σχετίζονται με τον ασθενή όπως η παρουσία συμπτωμάτων, προηγούμενη φαρμακευτική αγωγή και τη μέθοδο επεξεργασίας. Η τήρηση των διαδικαστικών οδηγιών είναι κρίσιμη για βέλτιστη ανάκτηση μυκοβακτηρίων. Η επιμόλυνση με σαπροφυτικά μυκοβακτήρια στο νερό της βρύσης ή άλλα εργαστηριακά αντιδραστήρια και εξοπλισμό μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Η βέλτιστη ανάκτηση απομονωμένων στελεχών επιτυγχάνεται με την προσθήκη 0,5 ml επεξεργασμένου και εκ νέου εναιωρημένου ενοφθαλμίσματος δείγματος σε κάθε φιαλίδιο. Η αυστηρότητα του πρωτοκόλλου πέψης και απολύμανσης που χρησιμοποιείται για την επεξεργασία του δείγματος μπορεί επίσης να επηρεάσει την ανάκτηση και το χρόνο μέχρι την ανίχνευση. Η αντοχή των μυκοβακτηριδίων σε οξέα ενδέχεται να διαφοροποιείται ανάλογα με το στέλεχος, την ηλικία της καλλιέργειας και άλλες μεταβλητές. Όλα τα θετικά φιαλίδια, όπως υποδεικνύονται από το όργανο ή αυτά που εμφανίζουν θολότητα στο τέλος του πρωτοκόλλου εξέτασης θα πρέπει να ανακαλλιεργούνται τόσο με εκλεκτικά όσο και με μη εκλεκτικά μυκοβακτηριακά υλικά καλλιέργειας. Τα μη μυκοβακτηριακά είδη μπορεί να υπεραναπτυχθούν εις βάρος των μυκοβακτηριδίων που είναι παρόντα. Αυτά τα φιαλίδια καλλιέργειας θα πρέπει να απολυμανθούν και να καλλιεργηθούν εκ νέου. (Ανατρέξτε στο Εγχειρίδιο Χρήσης BACTEC 9000MB, MA-0092, για τη διαδικασία εκ νέου απολύμανσης φιαλιδίων.) Τα χαρακτηριστικά μορφολογίας και χρώσης των αποικιών είναι δυνατό να προσδιοριστούν μόνο σε στερεά υλικά. Μπορούν να εκτελεστούν συμπληρωματικές εξετάσεις ταυτοποίησης για να προσδιοριστεί η μυκοβακτηριακή ειδογένεση από ένα θετικό φιαλίδιο BACTEC MYCO/F-Sputa. Τα φιαλίδια BACTEC MYCO/F-Sputa που εμφανίζονται θετικά ενδέχεται να περιέχουν περισσότερα από ένα είδος μυκοβακτηρίων ή/και άλλα μη μυκοβακτηριακά είδη. Η ταυτοποίηση των μυκοβακτηρίων που υπάρχουν απαιτεί ανακαλλιέργεια σε στερεό υλικό καλλιέργειας και συμπληρωματικές διαδικασίες για την ταυτοποίηση των υπαρχόντων οργανισμών. Η συνέπεια της μικροσκοπικής μορφολογίας σε υλικό BACTEC MYCO/F-Sputa δεν έχει προσδιοριστεί. Τα φιαλίδια BACTEC MYCO/F-Sputa επωάζονται στους 37 C, αποκλείοντας δυνητικά την ανάκτηση μυκοβακτηρίων που απαιτούν άλλες θερμοκρασίες επώασης (π.χ., M. marinum, M. ulcerans, M. haemophilum). Για την ανάκτηση αυτών των οργανισμών απαιτούνται συμπληρωματικές μέθοδοι καλλιέργειας. Οι οργανισμοί με ειδικές απαιτήσεις ανάπτυξης (π.χ., M. haemophilum) ενδέχεται να μην ανακτηθούν σε BACTEC MYCO/F-Sputa εφόσον επωάζονται στην κατάλληλη θερμοκρασία. Τα απομονωμένα στελέχη που ακολουθούν ανιχνεύτηκαν ως θετικά στο Σύστημα BACTEC 9000MB χρησιμοποιώντας BACTEC MYCO/F-Sputa τόσο στις εσωτερικές μελέτες όσο και στις κλινικές δοκιμές: Mycobacterium abscessus, Mycobacterium avium, Mycobacterium bovis, Mycobacterium celatum, Mycobacterium chelonae, Mycobacterium fortuitum, Mycobacterium gordonae, Mycobacterium intracellulare, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium malmoense, Mycobacterium simiae, Mycobacterium szulgai, Mycobacterium terrae, Mycobacterium tuberculosis και Mycobacterium xenopi. Η χρήση του Συμπληρώματος Αντιβιοτικών BACTEC PANTA/F, παρόλο που είναι απαραίτητη για όλα τα μη στείρα δείγματα, μπορεί να έχει ανασταλτικά αποτελέσματα σε ορισμένα μυκοβακτήρια. Οι τελικές ανακαλλιέργειες δεν εκτελέστηκαν κατά κανόνα κατά τη διάρκεια κλινικών μελετών. Συνεπώς, δεν μπορεί να προσδιοριστεί επί του παρόντος πραγματικό ψευδώς αρνητικό ποσοστό, που ορίζεται ως ένα φιαλίδιο καλλιέργειας MYCO/F-Sputa που παρέμεινε αρνητικό για όλη τη διάρκεια των έξι εβδομάδων της περιόδου επώασης ανακαλλιεργήθηκε και ανέπτυξε μυκοβακτηριακό οργανισμό. 5

ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Η κατανομή συχνότητας χρόνων ανάκτησης για αναπνευστικά δείγματα κλινικής δοκιμής που ήταν θετικά στο Σύστημα BACTEC 9000MB παρουσιάζεται στην ακόλουθη εικόνα. 60 50 40 MTB MAC MOTT 30 20 10 0 ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ Αναπνευστικά Δείγματα Το Σύστημα BACTEC 9000MB αξιολογήθηκε σε τέσσερις κλινικούς τόπους, που περιελάμβαναν εργαστήρια δημόσιας υγείας καθώς και μεγάλα νοσοκομεία οξείας φροντίδας σε διαφορετικές γεωγραφικές περιοχές. Οι πληθυσμοί των τόπων περιελάμβαναν ασθενείς με λοίμωξη HIV, ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς και ασθενείς μεταμόσχευσης. Το Σύστημα BACTEC 9000MB συγκρίθηκε με το ραδιομετρικό σύστημα BACTEC 460TB καθώς και με συμβατικά στερεά υλικά καλλιέργειας ανάπτυξης για την ανάκτηση και ανίχνευση μυκοβακτηρίων από αναπνευστικά δείγματα. Εξετάστηκαν συνολικά 3135 αναπνευστικά δείγματα κατά τη διάρκεια των δοκιμών. Ο συνολικός αριθμός θετικών απομονωμένων στελεχών παθογόνων μυκοβακτηρίων που ανακτήθηκαν στη μελέτη ήταν 348. Από αυτά τα θετικά στελέχη, 292 (84%) ανακτήθηκαν στο Σύστημα BACTEC 9000MB, 260 (75%) ανακτήθηκαν στο ραδιομετρικό σύστημα BACTEC 460TB και 178 (51%) ανακτήθηκαν χρησιμοποιώντας στερεά υλικά καλλιέργειας (Lowenstein- Jensen). Το Σύστημα BACTEC 9000MB σε συνδυασμό με τα στερεά υλικά καλλιέργειας ανέκτησαν 89,6% του συνολικού αριθμού παθογόνων απομονωμένων στελεχών. Αναφορικά με τα μη παθογόνων οργανισμών ΜΟΤΤ* (Μυκοβακτήρια πλην της Φυματίωσης), ο συνολικός αριθμός θετικών απομονωμένων στελεχών που ανακτήθηκε στη μελέτη ήταν 40. Από αυτά τα θετικά απομονωμένα στελέχη, 16 (40%) ανακτήθηκαν στο Σύστημα BACTEC 9000MB, 24 (60%) ανακτήθηκαν στο ραδιομετρικό σύστημα BACTEC 460TB και πέντε (13%) ανακτήθηκαν στα στερεά υλικά καλλιέργειας. Το Σύστημα BACTEC 9000MB σε συνδυασμό με τα στερεά υλικά καλλιέργειας ανέκτησαν 50% του συνολικού αριθμού μη παθογόνων οργανισμών ΜΟΤΤ. (*Οι μη παθογόνοι οργανισμοί MOTT περιελάμβαναν M. gordonae, M. abscessus, M. terrae.) Το Σύστημα BACTEC 9000MB απέτυχε στην ανάκτηση 1,8% των παθογόνων απομονωμένων στελεχών που ανακτήθηκαν σε ένα ή περισσότερα συστήματα αναφοράς (BACTEC 460TB ή συμβατικά στερεά υλικά καλλιέργειας). Παρόλο που αυτό το ποσοστό αντιπροσωπεύει δυνητική απώλεια ανάκτησης, δεν είναι ενδεικτικό πραγματικού ψευδώς αρνητικού προσδιορισμού (ανατρέξτε στην Ενότητα των Περιορισμών). Η χρήση δεύτερου υλικού, σύμφωνα με τις συστάσεις, αυξάνει την πιθανότητα ανάκτησης μυκοβακτηριακών οργανισμών. Το Σύστημα BACTEC 9000MB έδειξε ποσοστό ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων 1,5% (θετικά κατά το όργανο, αρνητικά στο επίχρισμα ή/και την ανακαλλιέργεια). Το συνολικό ποσοστό επιμόλυνσης για το Σύστημα BACTEC 9000MB ήταν 6,5%. 6

Περίληψη της ανάκτησης απομονωμένων στελεχών από αναπνευστικά δείγματα στο Σύστημα BACTEC 9000MB σε κλινικές μελέτες Απομονωμένα Είδη Σύνολο απομονωμένων στελεχών ΣΥΝΟΛΟ 9000MB ΜΟΝΟ 9000MB ΣΥΝΟΛΟ 460TB ΜΟΝΟ LJ ΣΥΝΟΛΟ ΜΟΝΟ LJ M. tuberculosis 146 123 14 126 13 93 3 M. avium Complex 162 138 38 114 18 65 4 M. kansasii 10 10 0 9 0 9 0 M. fortuitum 18 11 7 6 3 7 4 M. chelonae 5 4 2 3 1 1 0 M. simiae 1 1 1 0 0 0 0 M. malmoense 1 0 0 1 1 0 0 M. gordonae 34 14 10 23 19 2 1 M. abscessus 3 2 2 1 1 0 0 M. terrae 1 0 0 0 0 1 1 M. phlei 1 0 0 0 0 1 1 M. vaccae 1 0 0 0 0 1 1 Είδη M. (άλλα) 5 5 2 1 0 3 0 ΣΥΝΟΛΟ ΑΠΟΜΟΝΩΜΕΝΩΝ ΣΤΕΛΕΧΩΝ 388 308 76 284 56 183 15 Μη αναπνευστικά δείγματα Σε μια ξεχωριστή μελέτη σε μεγάλο εκπαιδευτικό νοσοκομείο, εξετάστηκαν 803 μη αναπνευστικά δείγματα με υλικό καλλιέργειας BACTEC MYCO/F-Sputa, υλικό καλλιέργειας BACTEC 12B, και συμβατικό υλικό καλλιέργειας (Lowenstein-Jensen). Ο συνολικός αριθμός θετικών απομονωμένων στελεχών παθογόνων μυκοβακτηρίων που ανακτήθηκε στη μελέτη ήταν 38. Από αυτά τα θετικά απομονωμένα στελέχη, 29 (76,3%) ανακτήθηκαν στο Σύστημα BACTEC 9000MB, 30 (78,9%) ανακτήθηκαν στο Σύστημα BACTEC 460TB και 24 (63,2%) ανακτήθηκαν με συμβατικό υλικό καλλιέργειας (Lowenstein-Jensen). Το Σύστημα BACTEC 9000MB σε συνδυασμό με τα στερεά υλικά καλλιέργειας ανέκτησαν 89,5% του συνολικού αριθμού παθογόνων απομονωμένων στελεχών. Το σύνολο των θετικών δειγμάτων (παθογόνα και μη παθογόνα μυκοβακτήρια) κατανέμονται μεταξύ των ακόλουθων πηγών: γαστρικά (5,1%), στείρα σωματικά υγρά, πλην αίματος, (17,9%), κόπρανα (10,3%), υλικό αποστράγγισης επιφανειακού τραύματος στο δέρμα (5,1%), ιστός (53,8%), και ούρα (7,7%). Τα απομονωμένα στελέχη που ακολουθούν ανιχνεύτηκαν ως θετικά σε αυτή την κλινική δοκιμή στο Σύστημα BACTEC 9000MB χρησιμοποιώντας MYCO/F-Sputa: M. tuberculosis, M. avium complex, M. chelonae, M. fortuitum, και M. bovis. Το συνολικό ποσοστό ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων (θετικό κατά το όργανο, αρνητικό με επίχρισμα ή/ και ανακαλλιέργεια) ήταν 5,0%. Εξαιτίας της ποικιλομορφίας των δειγμάτων που συλλέχθηκαν και εξετάστηκαν, το ποσοστό ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων διέφερε σημαντικά από το ποσοστό που αναφέρθηκε προηγουμένως για αναπνευστικά δείγματα. Το ποσοστό επιμόλυνσης για φυσιολογικά στείρα δείγματα (δηλ. ιστός και στείρα σωματικά υγρά, πλην του αίματος) κυμάνθηκε από 4,7% έως 18,9%. Για τα μη στείρα δείγματα (δηλ. γαστρικά, κόπρανα, ούρα, υλικό αποστράγγισης επιφανειακού τραύματος στο δέρμα) κυμάνθηκε από 8,2% έως 73,9%. Το συνολικό ποσοστό επιμόλυνσης ήταν 14,9%. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Bloom, B.R. and Murray, C.J.L., 1992. Tuberculosis: Commentary on a Reemergent Killer. Science, 257:1055-1064. 2. Horsburg Jr., C.R. 1991. Mycobacterium Avium Complex Infection in the acquired immunodeficiency syndrome. New England Journal of Medicine 324:1332-1338. 3. Tenover, F.C., et al., 1993. The resurgence of Tuberculosis: Is Your Laboratory Ready? Journal of Clinical Microbiology 31:767-770 4. Recommendations for preventing transmission of Human Immunodeficiency Virus and Hepatitis B Virus to patients during exposure-prone invasive procedures. MMWR 1991, Vol. 40, No. RR-8. 5. Bloodborne pathogens. Code of Federal Regulations, Title 29, Part 1910.1030, Federal Register 1991, 56:64175-64182. 6. Kent, P.T. et al. Public Health Mycobacteriology; A Guide for the Level III Laboratory, U.S. Department of Health and Human Services Public Health Service/Centers for Disease Control, Atlanta, GA 30333, 1985. pp. 16-19. 7. Kubica, G.P. et al. Sputum digestion and decontamination with N-acetyl-L-cysteine-sodium hydroxide for culture of mycobacteria. Amer. Rev. Resp. Dis. 1963, 87:775-779. 8. Kubica, G.P. et al. Comments on the use of the new mycolytic agent N-acetyl-L-cysteine as a sputum digestant for the isolation of mycobacteria. Amer. Rev. Resp. Dis. 1964. 89:284-286. 9. Master, Ronald N. (ed) Mycobacteriology, 1994, Section 3, in Isenberg, Henry D. (ed): Clinical Microbiology Procedures Handbook, Vol. 1. Washington, D.C., American Society for Microbiology. 10. Krieg, A.F., 1979. Cerebrospinal fluid and other body fluids, p. 635-679. In J.B. Henry (ed), Todd-Sanford-Davidsohn, Clinical Diagnosis and Management by Laboratory methods,.16th ed., vol. 1, W.B. Saunders Co., Philadelphia. Τεχνική Εξυπηρέτηση και Υποστήριξη της BD Diagnostics: παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD ή τη διεύθυνση www.bd.com/ds. 7

Manufacturer / Производител / Výrobce / Fabrikant / Hersteller / Κατασκευαστής / Fabricante / Tootja / Fabricant / Proizvođać / Gyártó / Fabbricante / Атқарушы / Gamintojas / Ražotājs / Tilvirker / Producent / Producător / Производитель / Výrobca / Proizvođač / Tillverkare / Üretici / Виробник Use by / Използвайте до / Spotřebujte do / Brug før / Verwendbar bis / Χρήση έως / Usar antes de / Kasutada enne / Date de péremption / Upotrijebiti do / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Дейін пайдалануға / Naudokite iki / Izlietot līdz / Houdbaar tot / Brukes for / Stosować do / Prazo de validade / A se utiliza până la / Использовать до / Použite do / Upotrebiti do / Använd före / Son kullanma tarihi / Використати до\line YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = края на месеца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec měsíce) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) ΕΕΕΕ-MM-HH / ΕΕΕΕ-MM (MM = τέλος του μήνα) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fin del mes) AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj mjeseca) ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) ЖЖЖЖ-АА-КК / ЖЖЖЖ-АА / (АА = айдың соңы) MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mėnesio pabaiga) GGGG-MM-DD/GGGG-MM (MM = mēneša beigas) JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesiąca) AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) AAAA-LL-ZZ / AAAA-LL (LL = sfârşitul lunii) ГГГГ-ММ-ДД / ГГГГ-ММ (ММ = конец месяца) RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) GGGG-MM-DD / GGGG-MM (MM = kraj meseca) ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet av månaden) YYYY-AA-GG / YYYY-AA (AA = ayın sonu) РРРР-MM-ДД / РРРР-MM (MM = кінець місяця) Catalog number / Каталожен номер / Katalogové číslo / Katalognummer / Αριθμός καταλόγου / Número de catálogo / Katalooginumber / Numéro catalogue / Kataloški broj / Katalógusszám / Numero di catalogo / Каталог нөмірі / Katalogo numeris / Kataloga numurs / Catalogus nummer / Numer katalogowy / Număr de catalog / Номер по каталогу / Katalógové číslo / Kataloški broj / Katalog numarası / Номер за каталогом Authorized Representative in the European Community / Оторизиран представител в Европейската общност / Autorizovaný zástupce pro Evropském společenství / Autoriseret repræsentant i De Europæiske Fællesskaber / Autorisierter Vertreter in der Europäischen Gemeinschaft / Εξουσιοδοτημένος αντιπρόσωπος στην Ευρωπαϊκή Κοινότητα / Representante autorizado en la Comunidad Europea / Volitatud esindaja Euroopa Nõukogus / Représentant autorisé pour la Communauté européenne / Autorizuirani predstavnik u Europskoj uniji / Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben / Rappresentante autorizzato nella Comunità Europea / Европа қауымдастығындағы уәкілетті өкіл / Įgaliotasis atstovas Europos Bendrijoje / Pilnvarotais pārstāvis Eiropas Kopienā / Bevoegde vertegenwoordiger in de Europese Gemeenschap / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo we Wspólnocie Europejskiej / Representante autorizado na Comunidade Europeia / Reprezentantul autorizat pentru Comunitatea Europeană / Уполномоченный представитель в Европейском сообществе / Autorizovaný zástupca v Európskom spoločenstve / Autorizovano predstavništvo u Evropskoj uniji / Auktoriserad representant i Europeiska gemenskapen / Avrupa Topluluğu Yetkili Temsilcisi / Уповноважений представник у країнах ЄС In vitro Diagnostic Medical Device / Медицински уред за диагностика ин витро / Lékařské zařízení určené pro diagnostiku in vitro / In vitro diagnostisk medicinsk anordning / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro διαγνωστική ιατρική συσκευή / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In vitro diagnostika meditsiiniaparatuur / Dispositif médical de diagnostic in vitro / Medicinska pomagala za In vitro Dijagnostiku / In vitro diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medicale per diagnostica in vitro / Жасанды жағдайда жүргізетін медициналық диагностика аспабы / In vitro diagnostikos prietaisas / Medicīnas ierīces, ko lieto in vitro diagnostikā / Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek / In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / Dispozitiv medical pentru diagnostic in vitro / Медицинский прибор для диагностики in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Medicinski uređaj za in vitro dijagnostiku / Medicinteknisk produkt för in vitro-diagnostik / İn Vitro Diyagnostik Tıbbi Cihaz / Медичний пристрій для діагностики in vitro Temperature limitation / Температурни ограничения / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperaturbegrenzung / Περιορισμοί θερμοκρασίας / Limitación de temperatura / Temperatuuri piirang / Limites de température / Dozvoljena temperatura / Hőmérsékleti határ / Limiti di temperatura / Температураны шектеу / Laikymo temperatūra / Temperatūras ierobežojumi / Temperatuurlimiet / Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limites de temperatura / Limite de temperatură / Ограничение температуры / Ohraničenie teploty / Ograničenje temperature / Temperaturgräns / Sıcaklık sınırlaması / Обмеження температури Batch Code (Lot) / Код на партидата / Kód (číslo) šarže / Batch-kode (lot) / Batch-Code (Charge) / Κωδικός παρτίδας (παρτίδα) / Código de lote (lote) / Partii kood / Numéro de lot / Lot (kod) / Tétel száma (Lot) / Codice batch (lotto) / Топтама коды / Partijos numeris (LOT) / Partijas kods (laidiens) / Lot nummer / Batch-kode (parti) / Kod partii (seria) / Código do lote / Cod de serie (Lot) / Код партии (лот) / Kód série (šarža) / Kod serije / Partinummer (Lot) / Parti Kodu (Lot) / Код партії Contains sufficient for <n> tests / Съдържанието е достатъчно за <n> теста / Dostatečné množství pro <n> testů / Indeholder tilstrækkeligt til <n> tests / Ausreichend für <n> Tests / Περιέχει επαρκή ποσότητα για <n> εξετάσεις / Contenido suficiente para <n> pruebas / Küllaldane <n> testide jaoks / Contenu suffisant pour <n> tests / Sadržaj za <n> testova / <n> teszthez elegendő / Contenuto sufficiente per <n> test / <п> тесттері үшін жеткілікті / Pakankamas kiekis atlikti <n> testų / Satur pietiekami <n> pārbaudēm / Inhoud voldoende voor n testen / Innholder tilstrekkelig til <n> tester / Zawiera ilość wystarczającą do <n> testów / Conteúdo suficiente para <n> testes / Conţinut suficient pentru <n> teste / Достаточно для <n> тестов(а) / Obsah vystačí na <n> testov / Sadržaj dovoljan za <n> testova / Innehåller tillräckligt för <n> analyser / <n> test için yeterli malzeme içerir / Вистачить для аналізів: <n> Consult Instructions for Use / Направете справка в инструкциите за употреба / Prostudujte pokyny k použití / Se brugsanvisningen / Gebrauchsanweisung beachten / Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης / Consultar las instrucciones de uso / Lugeda kasutusjuhendit / Consulter la notice d emploi / Koristi upute za upotrebu / Olvassa el a használati utasítást / Consultare le istruzioni per l uso / Пайдалану нұсқаулығымен танысып алыңыз / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Skatīt lietošanas pamācību / Raadpleeg de gebruiksaanwijzing / Se i bruksanvisningen / Zobacz instrukcja użytkowania / Consultar as instruções de utilização / Consultaţi instrucţiunile de utilizare / См. руководство по эксплуатации / Pozri Pokyny na používanie / Pogledajte uputstvo za upotrebu / Se bruksanvisningen / Kullanım Talimatları na başvurun / Див. інструкції з використання Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD 21152 USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laoghaire Co. Dublin, Ireland Australian Sponsor: Becton Dickinson Pty Ltd. 4 Research Park Drive Macquarie University Research Park North Ryde, NSW 2113 Australia ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company. 2015 BD 8