FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Estrogen Receptor IS084

FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Estrogen Receptor α Clone EP1 Έτοιµο προς χρήση (Dako Autostainer/Autostainer Plus) Κωδικός IS084 Προοριζόµενη χρήση Συνώνυµα για το αντιγόνο Περίληψη και επεξήγηση Αντιδραστήριο που παρέχεται Για in vitro διαγνωστική χρήση. Το FLEX Monoclonal Rabbit Anti-Human Estrogen Receptor á, Clone EP1, Έτοιµο προς χρήση (Dako Autostainer/Autostainer Plus), προορίζεται για ανοσοϊστοχηµική χρήση σε συνδυασµό µε τα όργανα Autostainer/Autostainer Plus της Dako για τον ηµιποσοτικό εντοπισµό του υποδοχέα ανθρώπινου οιστρογόνου σε τοµές ιστού ανθρώπινου καρκίνου του µαστού, µονιµοποιηµένες σε φορµαλίνη και εγκλεισµένες σε παραφίνη. Το αντίσωµα επισηµαίνει τα θετικά κύτταρα σε υποδοχείς οιστρογόνου τύπου α και είναι χρήσιµο για την αξιολόγηση της κατάστασης του υποδοχέα οιστρογόνων σε καρκινώµατα ανθρώπινου µαστού Η κλινική ερµηνεία της χρώσης ή της απουσίας χρώσης πρέπει να συµπληρώνεται µε µορφολογικές µελέτες που χρησιµοποιούν κατάλληλους µάρτυρες και να αξιολογείται στο πλαίσιο του κλινικού ιστορικού του ασθενούς και άλλων διαγνωστικών εξετάσεων από ειδικό παθολόγο. ER α Οι υποδοχείς στεροειδών εµφανίζουν υψηλό βαθµό συγγένειας και ειδικότητας για τους συνδέτες τους. Ο υποδοχέας οιστρογόνου (ER) στον άνθρωπο είναι µια διµερής πρωτεΐνη των 65 kda που εντοπίζεται κυρίως στην πυρηνική µεµβράνη των κυττάρων και ανήκει στην τάξη των trans-δραστικών πρωτεϊνών οι οποίες διεγείρουν τη µεταγραφή αφού δεσµευτούν σε ειδικά στοιχεία του DNA, γνωστά ως στοιχεία ορµονοαπόκρισης. Με την πρόσδεση του οιστρογόνου, ο ER επάγεται και διεγείρει τη γονιδιακή µεταγραφή και, για το λόγο αυτό, είναι γνωστός και ως επαγώγιµος παράγοντας ενίσχυσης (1, 2). Ιστορικές µελέτες έχουν δείξει διαπιστώσει η κατάσταση του ER συσχετίζεται θετικά µε έκβαση χωρίς αγωγή (δηλ. προγνωστικός για καλά διαφοροποιηµένο, διηθητικό καρκίνο του µαστού) και µε απόκριση σε αντιορµονική θεραπεία, π.χ. ταµοξιφένη (2). Έχει διαπιστωθεί ότι τα οιστρογόνα συγκεντρώνονται κατά προτίµηση στα όργαναστόχους των ζώων και στον καρκίνο του µαστού στους ανθρώπους και είναι καλά τεκµηριωµένο ότι η µιτογόνος επίδραση του οιστρογόνου διαµεσολαβείται από τον ER. Έρευνες για τους βιολογικούς µηχανισµούς της ανάπτυξης καρκίνου του µαστού διαπίστωσαν ότι ο ρυθµός ανάπτυξης εξαρτάται από την παρουσία οιστρογόνου ή προγεστερόνης (ή και των δύο) στους περισσότερους καρκίνους του µαστού (2). Έτσι, η κατάσταση του υποδοχέα οιστρογόνων στα καρκινώµατα του µαστού θεωρείται επικυρωµένος προγνωστικός παράγοντας για τη διαχείριση ασθενών για αντιορµονική θεραπεία (2-4). Ανατρέξτε στις Γενικές οδηγίες για την ανοσοϊστοχηµική χρώση της Dako ή στις οδηγίες του συστήµατος ανίχνευσης των διαδικασιών IHC για: 1) την Αρχή της διαδικασίας, 2) τα Υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται, 3) την Αποθήκευση, 4) την Προετοιµασία δειγµάτων, 5) τη ιαδικασία χρώσης, 6) τον Ποιοτικό έλεγχο, 7) την Αντιµετώπιση προβληµάτων, 8) την Ερµηνεία της χρώσης, 9) τους Γενικούς περιορισµούς. Έτοιµο προς χρήση µονοκλωνικό αντίσωµα κουνελιού που παρέχεται σε υγρή µορφή, σε ρυθµιστικό διάλυµα που περιέχει σταθεροποιητική πρωτεΐνη και νατραζίδιο 0,015 mol/l. Κλώνος: EP1. Ανοσογόνο Ανασυνδυασµένη πρωτεΐνη των αµινοξέων 1-300 του ER α. Ειδικότητα Σε στυπώµατα Western κυτταρολυµάτων MCF7, το αντίσωµα επισηµαίνει µια µείζονα ζώνη περίπου 67 kda, που αντιστοιχεί στο αναµενόµενο µοριακό βάρος του ER α. εν παρατηρήθηκε διασταυρούµενη αντίδραση µε τον ER β. Προφυλάξεις 1. Για in vitro διαγνωστική χρήση. 2. Για επαγγελµατίες χρήστες. 3. Το προϊόν αυτό περιέχει νατραζίδιο (NaN 3), µια ιδιαίτερα τοξική χηµική ουσία σε καθαρή µορφή. Στις συγκεντρώσεις προϊόντος, παρόλο που δεν έχει ταξινοµηθεί ως επικίνδυνο, το νατραζίδιο ενδέχεται να αντιδράσει µε τις µολύβδινες ή χάλκινες υδραυλικές σωληνώσεις και να δηµιουργήσει ιδιαίτερα εκρηκτικές εναποθέσεις µεταλλικών αζιδίων. Κατά την απόρριψη, ξεπλύνετε µε άφθονο νερό για να αποτρέψετε τη συσσώρευση µεταλλικών αζιδίων στις σωληνώσεις. 4. Όπως ισχύει για κάθε προϊόν βιολογικής προέλευσης, πρέπει να εφαρµόζονται οι δέουσες διαδικασίες χειρισµού. 5. Πρέπει να φοράτε κατάλληλο εξοπλισµό ατοµικής προστασίας για να αποφύγετε την επαφή µε τα µάτια και το δέρµα. 6. Όσο διάλυµα δεν χρησιµοποιείται πρέπει να απορρίπτεται σύµφωνα µε τους τοπικούς, κρατικούς και οµοσπονδιακούς κανονισµούς. (121916-002) P01470GR_003_IS084/2015.11 σελ. 1/5

Αποθήκευση Προετοιµασία δειγµάτων καθώς και υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται ιαδικασία χρώσης καθώς και υλικά που απαιτούνται, αλλά δεν παρέχονται Αποθηκεύστε σε θερµοκρασία 2-8 C. Μην το χρησιµοποιείτε µετά την ηµεροµηνία λήξης που αναγράφεται στο φιαλίδιο. Αν τα αντιδραστήρια αποθηκεύονται σε διαφορετικές συνθήκες από εκείνες που προδιαγράφονται, ο χρήστης πρέπει να επαληθεύσει τις συνθήκες. εν υπάρχουν ορατά σηµάδια που να υποδεικνύουν έλλειψη σταθερότητας του προϊόντος αυτού. Για το λόγο αυτό, θετικοί και αρνητικοί µάρτυρες πρέπει να εξετάζονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών. Εάν παρατηρηθεί µη αναµενόµενη χρώση, που δεν µπορεί να ερµηνευτεί από τις διακυµάνσεις των εργαστηριακών διαδικασιών και υπάρχουν υποψίες για πρόβληµα στο αντίσωµα, επικοινωνήστε µε το Τµήµα Τεχνικής Υποστήριξης της Dako. Το αντίσωµα µπορεί να χρησιµοποιηθεί για τη σήµανση τοµών ιστού µονιµοποιηµένων µε φορµαλίνη και εγκλεισµένων σε παραφίνη. Τα δείγµατα των ιστών πρέπει να τεµαχίζονται σε τοµές πάχους περίπου 4 µm. Απαιτείται προκατεργασία µε θερµικά επαγόµενη ανάκτηση του επιτόπου (HIER) χρησιµοποιώντας το Dako PT Link (Κωδικός PT100/PT101/PT200). Ανατρέξτε στον Οδηγό χρήσης του PT Link για λεπτοµέρειες. Βέλτιστα αποτελέσµατα επιτυγχάνονται µε προκατεργασία των ιστών χρησιµοποιώντας το EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Κωδικός K8010/K8004) επί 20 λεπτά σε θερµοκρασία 97 C και, στη συνέχεια, επί 5 λεπτά σε EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007). Τοµές εγκλεισµένες σε παραφίνη: Συνιστάται προεπεξεργασία των µονιµοποιηµένων µε φορµαλίνη και εγκλεισµένων σε παραφίνη τοµών ιστού, µε τη χρήση της διαδικασίας προετοιµασίας δείγµατος 3 σε 1 για το Dako PT Link. Μετά τη χρώση, οι τοµές πρέπει να αφυδατωθούν, να υποστούν διαύγαση και να επικαλυφθούν µε χρήση µέσων µόνιµης επικάλυψης. Οι τοµές ιστού δεν πρέπει να στεγνώνουν κατά τη διάρκεια της κατεργασίας ή κατά τη διάρκεια της παρακάτω ανοσοϊστοχηµικής διαδικασίας χρώσης. Για καλύτερη προσκόλληση των τοµών ιστού στις γυάλινες αντικειµενοφόρους, συνιστάται η χρήση Silanized Slides (Κωδικός S3003). Το συνιστώµενο σύστηµα εποπτικής παρουσίασης είναι το EnVision FLEX, High ph, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (Κωδικός K8010) που χρησιµοποιείται σύµφωνα µε το πρωτόκολλο που περιγράφεται παρακάτω. Τα αντιδραστήρια πρέπει να αραιωθούν κατάλληλα πριν από τη χρήση. Όλα τα βήµατα πρέπει να διεξάγονται σε θερµοκρασία δωµατίου (20-25 C). 1. Επωάστε την τοµή ιστού µε 200 µl EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (DM821) επί 5 (±1) λεπτά 2. Εκπλύνετε σε EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007) επί 1-5 λεπτά 3. Επωάστε την τοµή ιστού µε 200 µl primary antibody (Κωδικός IS084) επί 20 (±1) λεπτά 4. Εκπλύνετε σε EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007) επί 1-5 λεπτά 5. Επωάστε την τοµή ιστού µε 200 µl EnVision FLEX/HRP (Κωδικός DM822) επί 20 (±1) λεπτά 6. Εκπλύνετε σε EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007) επί 1-5 λεπτά 7. Επωάστε την τοµή ιστού µε 200 µl EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007) επί 5 (±1) λεπτά 8. Εκπλύνετε σε EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007) επί 1-5 λεπτά 9. Επωάστε την τοµή ιστού µε 400 µl EnVision FLEX Substrate Working Solution (Κωδικοί DM823 και DM827) επί 10 (±1) λεπτά 10. Εκπλύνετε σε EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007) επί 1-5 λεπτά 11. Πραγµατοποιήστε αντίχρωση της αντικειµενοφόρου µε EnVision FLEX Hematoxylin (Κωδικός K8018) επί 5 (±1) λεπτά 12. Εκπλύνετε σε απιονισµένο νερό επί 1-5 λεπτά 13. Επωάστε την τοµή ιστού µε 200 µl EnVision FLEX Wash Buffer (Κωδικός K8007) επί 5 (±1) λεπτά 14. Εκπλύνετε σε απιονισµένο νερό επί 1-5 λεπτά 15. Καλύψτε τις αντικειµενοφόρους µε υλικό µόνιµης επικάλυψης. (121916-002) P01470GR_003_IS084/2015.11 σελ. 2/5

ιάγραµµα προγραµµατισµού για τον συνιστώµενο προσδιορισµό: Όλα τα βήµατα επώασης πρέπει να εκτελούνται σε θερµοκρασία δωµατίου. Για λεπτοµέρειες, ανατρέξτε στο εγχειρίδιο χρήσης για το συγκεκριµένο όργανο. Το βήµα Auxiliary πρέπει να ρυθµιστεί στο «rinse buffer» σε κύκλους χρώσης µε 10 αντικειµενοφόρους. Για κύκλους χρώσης µε περισσότερες από 10 αντικειµενοφόρους, το βήµα Auxiliary πρέπει να ρυθµιστεί στο «none». Αυτό εξασφαλίζει συγκρίσιµους χρόνους πλύσης. Οι βέλτιστες συνθήκες ενδέχεται να ποικίλλουν ανάλογα µε το δείγµα και τη µέθοδο προετοιµασίας και πρέπει να επικυρώνονται ξεχωριστά από κάθε εργαστήριο (5). Ελέγξτε ότι η απόδοση του τροποποιηµένου πρωτοκόλλου εξακολουθεί να ισχύει, αξιολογώντας ότι το πρότυπο χρώσης είναι πανοµοιότυπο µε το πρότυπο χρώσης που περιγράφεται στην ενότητα «Χαρακτηριστικά απόδοσης». Συνιστάται αντίχρωση µε αιµατοξυλίνη, χρησιµοποιώντας το EnVision FLEX Hematoxylin (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (Κωδικός K8018). Συνιστάται µη υδατικό µέσο µόνιµης επικάλυψης. Συνιστάται οι θετικοί και αρνητικοί µάρτυρες να αναλύονται ταυτόχρονα µε τα δείγµατα ασθενών χρησιµοποιώντας το ίδιο πρωτόκολλο όπως και για τα δείγµατα ασθενών. Ιδανικά, οι θετικοί µάρτυρες πρέπει να περιλαµβάνουν έναν ιστό καρκινώµατος µαστού µε χαµηλή έκφραση του ER. Εναλλακτικά, µπορεί να χρησιµοποιηθεί καλοήθης τράχηλος της µήτρας. Τα κύτταρα ή οι δοµές πρέπει να εκδηλώνουν πρότυπα αντίδρασης, όπως εκείνα που περιγράφονται στην ενότητα «Χαρακτηριστικά απόδοσης», σε όλα τα θετικά δείγµατα. Το συνιστώµενο αντιδραστήριο αρνητικού µάρτυρα είναι το FLEX Universal Negative Control, Rabbit, Έτοιµο προς χρήση (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (Κωδικός IS600). Ερµηνεία χρώσης Ειδικοί περιορισµοί προϊόντος Χαρακτηριστικά απόδοσης Το πρότυπο της κυτταρικής χρώσης είναι πυρηνικό. Εάν παρατηρηθεί κυτταροπλασµατική σήµανση, θα πρέπει να θεωρηθεί ως µη ειδική. Ως θετικό αποτέλεσµα ορίζεται η πυρηνική χρώση σε 1% των ογκοκυττάρων (6). Αυτό συνάδει µε το συνιστώµενο από ASCO/CAP σηµείο αποκοπής 1% θετικών ογκοκυττάρων για θετική αξιολόγηση (3). 1. Τα ψευδώς αρνητικά αποτελέσµατα µπορεί να προκαλούνται από την αποσύνθεση του αντιγόνου στους ιστούς µε την πάροδο του χρόνου. Τα δείγµατα πρέπει να υποβάλλονται σε χρώση εντός 2 µηνών από την τοποθέτηση των ιστών στις αντικειµενοφόρους και εφόσον φυλάσσονται σε θερµοκρασία δωµατίου (7). 2. Για βέλτιστα και επαναλήψιµα αποτελέσµατα, η πρωτεΐνη ER απαιτεί ανάκτηση στόχου όταν οι ιστοί µονιµοποιούνται µε το συνήθη τρόπο (ουδέτερη ρυθµισµένη φορµαλίνη) και εγκλείονται σε παραφίνη. 3. Η χρήση του Dako Monoclonal Rabbit Anti-Human ER α, Clone EP1 σε ιστούς µε µονιµοποιητικά διαφορετικά της φορµαλίνης δεν έχει επικυρωθεί. Πιστότητα: Για την εξέταση συλλέχθηκαν σειρές τοµών από κάθε ένα από τρία διαφορετικά τεµάχια καρκινώµατος µαστού, µονιµοποιηµένα σε φορµαλίνη και εγκλεισµένα σε παραφίνη. Η εξέταση διενεργήθηκε ως εξής: Πιστότητα εντός κύκλων: Με βάση το τυπικό πρωτόκολλο EnVision FLEX, High ph, πραγµατοποιήθηκε χρώση τριών τοµών από κάθε τεµάχιο ιστού χρησιµοποιώντας το, Clone EP1. Ταυτόχρονα, µία τοµή από κάθε τεµάχιο χρωµατίστηκε µε αντιδραστήριο αρνητικού µάρτυρα. Πιστότητα µεταξύ κύκλων: Η παραπάνω διαδικασία χρώσης µίας τοµής από κάθε τεµάχιο ιστού επαναλήφθηκε για δύο ακόµα ηµέρες. Ταυτόχρονα, µία τοµή από κάθε τεµάχιο ιστού χρωµατίστηκε µε αντιδραστήριο αρνητικού µάρτυρα. (121916-002) P01470GR_003_IS084/2015.11 σελ. 3/5

Πιστότητα µεταξύ οργάνων: Η παραπάνω διαδικασία χρώσης τριών τοµών από κάθε τεµάχιο ιστού πραγµατοποιήθηκε σε τρία διαφορετικά όργανα Autostainer. Ταυτόχρονα, µία αντικειµενοφόρος από κάθε τεµάχιο ιστού χρωµατίστηκε µε αντιδραστήριο αρνητικού µάρτυρα. Τα πειράµατα πιστότητας µε το Monoclonal Rabbit Anti-Human ER á, Clone EP1 έδωσαν συνεπή αποτελέσµατα για τις εξετάσεις εντός κύκλων, µεταξύ κύκλων και µεταξύ οργάνων. ιατηρήθηκαν σταθερά οι ίδιες συνθήκες εξέτασης καθόλη τη διάρκεια της µελέτης, ενώ τα αντιδραστήρια µεταξύ των κύκλων παρέµειναν αποθηκευµένα στους 2-8 ºC. Φυσιολογικοί ιστοί: Ο Πίνακας 1 περιέχει µια περίληψη της ανοσοδραστικότητας του Monoclonal Rabbit Anti- Human ER á, Clone EP1 µε την προτεινόµενη σειρά φυσιολογικών ιστών. Όλοι οι ιστοί είχαν µονιµοποιηθεί σε φορµαλίνη και εγκλειστεί σε παραφίνη και, στη συνέχεια, χρωµατίστηκαν µε το Monoclonal Rabbit Anti-Human ER á, Clone EP1, σύµφωνα µε τις οδηγίες στο ένθετο φυλλάδιο της συσκευασίας. Πίνακας 1: Περίληψη της δραστικότητας του Monoclonal Rabbit Anti-Human ER á, Clone EP1 σε φυσιολογικούς ιστούς (8) Τύπος ιστού (αρ. εξετάσεων) Στοιχεία ιστών µε θετική χρώση Αµυγδαλή (3) 2/3 επιθηλιακά κύτταρα ( 1%), πυρήνας 1/3 λεµφοκύτταρα του βλαστικού κέντρου (<1%), πυρήνας έρµα (3) 0/3 Επινεφρίδιο (3) 0/3 Ήπαρ (3) 0/3 Θύµος (3) 0/3 Θυρεοειδής (3) 0/3 Καρδιακός µυς (3) 0/3 Κόλον (3) 0/3 Λεπτό έντερο (3) 0/3 Μαστός (2) 2/2 αδενικά επιθηλιακά κύτταρα (20%), πυρήνας Μεσοθηλιακά κύτταρα (3) 0/3 Μήτρα (3) Μυελός των οστών (3) 0/3 Νεύρο, περιφερικό (3) 0/3 Νεφρός (3) 0/3 Οισοφάγος (3) Όρχεις (3) 0/3 Πάγκρεας (3) 0/3 Παραθυρεοειδής (3) 0/3 Παρεγκεφαλίδα (3) 0/3 Πνεύµονας (3) 0/3 Προστάτης (3) Σιελογόνος αδένας (3) 0/3 Σκελετικός µυς (3) 0/3 Σπλήνας (3) 0/3 Στόµαχος (3) 0/3 Τελικός εγκέφαλος (3) 0/3 Τράχηλος της µήτρας (3) Υπόφυση (3) 0/3 Ωοθήκη (3) 3/3 µυοµήτριο (<1-40%), πυρήνας 3/3 αδενικό επιθήλιο (50-80%), πυρήνας 3/3 στρωµατικά κύτταρα (30-80%), πυρήνας 1/3 επιθηλιακά κύτταρα (<1%), πυρήνας 3/3 στρωµατικά κύτταρα (<5-30%), πυρήνας 3/3 επιθηλιακά κύτταρα (30%), πυρήνας 3/3 στρωµατικά κύτταρα (30%), πυρήνας 3/3 θυλακιώδες επιθήλιο (20-40%), πυρήνας 2/3 στρωµατικά κύτταρα (10-30%), πυρήνας Σύγκριση µεθόδου: Η εξέταση του Monoclonal Rabbit Anti-Human ER á, Clone EP1 διενεργήθηκε χρησιµοποιώντας το EnVision FLEX και βαθµολογήθηκε µε βάση τις κατευθυντήριες οδηγίες ASCO/CAP (σηµείο αποκοπής 1%) (3). Η εξέταση µίγµατος αντι-er α (Κλώνοι 1D5 και ER-2-123) διενεργήθηκε χρησιµοποιώντας το Dako ER/PR pharmdx Kit και βαθµολογήθηκε µε χρήση της οδηγίας βαθµολόγησης Allred που περιγράφεται στο ένθετο της συσκευασίας. Τα δεδοµένα της σύγκρισης µεθόδου παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Με χρήση των αντίστοιχων αυτών οδηγιών βαθµολόγησης, το Monoclonal Rabbit Anti-Human ER α, Clone EP1 παρουσίασε υψηλό ποσοστό συµφωνίας µε το συστατικό αντισώµατος ER α χρώσης του Dako ER/PR pharmdx Kit, επιδεικνύοντας τιµές συνολικής, θετικής και αρνητικής συµφωνίας 96,2%, 98,9% και 92,2% αντίστοιχα. (121916-002) P01470GR_003_IS084/2015.11 σελ. 4/5

Πίνακας 2: Συµφωνία µεταξύ αντι-er α, EP1 και συστατικού αντι-er α του ER/PR pharmdx Kit Συστατικό αντι-er α του ER/PR pharmdx Kit Monoclonal Rabbit Anti- Human ER α, Clone EP1 Θετική Αρνητική Σύνολο Θετική 183 10 193 Αρνητική 2 119 121 Σύνολο 185 129 314 Επί τοις εκατό θετική συµφωνία = 183/185 = 98,9% Επί τοις εκατό αρνητική συµφωνία = 119/129 = 92,2% Επί τοις εκατό συνολική συµφωνία = 302/314 = 96,2% Κ= 0,9203 ιάστηµα εµπιστοσύνης 95%= 0,8761 0,9645 Βιβλιογραφία 1. Kumar V, Green S, Stack G, Berry M, Jin J-R, Chambon P. Functional domains of the human estrogen receptor. Cell 1987;51:941-51. 2. Elledge RM, Fuqua SAW. Ch. 31: Estrogen and Progesterone Receptors. Diseases of the Breast. Harris et al. eds., Lippincott Williams & Wilkins 2000; 471-85. 3. Hammond MEH, Hayes DF, Dowsett M, Allred C, Hagerty KL, Badve S, et al. American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists Guideline Recommendations for Immunohistochemical Testing of Estrogen and Progesterone Receptors in Breast Cancer. Arch Pathol Lab Med 2010;134:907 22. 4. Fitzgibbons FK, Page DL, Weaver D, Thor AD, Allred DC, Clark GM, et al. Prognostic factors in breast cancer: College of American Pathologists Consensus Statement 1999. Arch Pathol Lab Med 2000;124:966-78. 5. Fitzgibbons PL, Murphy DA, Hammond EH, Allred C, Valenstein PN. Recommendations for Validating Estrogen and Progesterone Receptor Immunohistochemistry Assays. Arch Pathol Lab Med 2010:134;930-35. 6. Diaz LK, Sneige N. Estrogen receptor analysis for breast cancer: current issues and keys to increasing testing accuracy. Adv Anat Pathol 2005;12:10-9. Review. 7. Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Quality assurance for immunocytochemistry; Approved guideline. CLSI document MM4-A (1-56238-396-5)- CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400. Wayne, PA 19087-1898 USA 1999. 8. M3634 IHC003-D03803 Report on file. Το Monoclonal Rabbit Anti-Human ER α, Clone EP1 παράγεται από την Epitomics Inc., µε χρήση της ιδιοκτησιακής τεχνολογίας µονοκλωνικού αντισώµατος κουνελιού της Epitomics που καλύπτεται από τις ευρεσιτεχνίες υπ' αριθ. 5,675,063 και 7,402,409. Έκδοση 11/15 (121916-002) P01470GR_003_IS084/2015.11 σελ. 5/5