ΕΛΕΓΧΟΣ ΝΟΘΕΙΑΣ ΣΕ ΠΡΟΙΟΝΤΑ ΑΛΟΗΣ ΓΑΡΥΦΑΛΛΙΔΗ Ι. ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ
Τμήματα του φύλλου του φυτού της αλόης φλοιός υποφλοιώδης χιτώνας (sap) στρώμα κόλλας (latex)
Συστατικά της αλόης Σάκχαρα Ανθρακινόνες Βιταμίνες Ένζυμα Λεκτίνες Λιπαρά οξέα και στεροειδή Ιχνοστοιχεία Λιγνίνη Αμινοξέα Διάφορες άλλες ενώσεις
Ευεργετικές ιδιότητες της αλόης Αντιγηραντική-αντιοξειδωτική αντιοξειδωτική δράση Αντιμικροβιακή-αντιμυκητιακή αντιμυκητιακή δράση Ενίσχυση του ανοσοποιητικού συστήματος Αντιτοξική δράση στο πεπτικό σύστημα Επουλωτική δράση Δράση στο κυκλοφορικό σύστημα Αντιφλεγμονώδης και αντιική δράση Clin Exp Pharmacol Physiol. 2006 Mar;33(3):232-7. Aliment Pharmacol Ther. 2006 Feb 1;23(3):341-9. J Urol. 2006 Jan;175(1):343-7. 7. J Ethnopharmacol. 2006 Feb 20;103(3):468-77. Epub 2006 Jan 6.
Εφαρμογές και χρήσεις της αλόης Στην κοσμετολογία (προϊόντα περιποίησης προσώπου και σώματος) Στη βιομηχανία τροφίμων (χυμοί, προϊόντα υγιεινής διατροφής) Στη βιομηχανία φαρμάκων (ενέσιμα, διάφορα σκευάσματα) Τα τελευταία χρόνια η χρήση της αλόης στη βιομηχανία επεκτάθηκε και σε παραγωγή πληθώρας άλλων προϊόντων (απορρυπαντικά, προϊόντα ατομικής υγιεινής, πάνες, γάντια, κ.ά.).)
Ασεμαννάνη
Η δράση της ασεμαννάνης Δρα ως ισχυρός αντιφλεγμονώδης παράγοντας Διεγείρει τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος Βοηθάει στην εξόντωση βακτηριδίων, ιών, μυκήτων και παρασίτων Βοηθά στην απορρόφηση ύδατος Βελτιώνει το συνολικό μεταβολισμό και τη λειτουργία του κυττάρου Διεγείρει τη δραστηριότητα του μυελού των οστών Βελτιώνει την αλλεργική συμπεριφορά του οργανισμού Διεγείρει την παραγωγή ινοβλαστών για την απελευθέρωση κολλαγόνου Προκαλεί λιπαντική δράση στις αρθρώσεις
ΝΟΘΕΙΑ ΠΡΟΪΟΝΤΩΝ ΑΛΟΗΣ Δεξτρίνη ή δεξτράνη αντί ασεμαννάνης Τιμή αλόης: (1,0% β/ο σε ασεμαννάνη 200% τιμή αλόης)
ΣΚΟΠΟΣ ΤΗΣ ΔΙΑΤΡΙΒΗΣ Έλεγχος νοθείας των προϊόντων με βάση την αλόη, μέσω του προσδιορισμού του βιολογικά ενεργού πολυσακχαρίτη ασεμαννάνη. Η εργασία εστιάστηκε σε προϊόντα όπως ανθρακούχοι χυμοί, γέλη αλόης, σκευασματα υγιεινής διατροφής. Έλεγχος ποιότητας των προϊόντων αυτών ως προς την παρουσία αλοΐνης νης, που είναι φυσικό συστατικό του φυτού και για την οποία έχουν θεσπιστεί όρια (Ε.Ε, Ελληνική νομοθεσία).
ΠΟΡΕΙΑ ΕΡΓΑΣΙΑΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΝΟΘΕΙΑΣ Φασματομετρία απορρόφησης ( ανάλυση δειγμάτων χυμών αλόης, συμπυκνωμένης γέλης αλόης και σκευασμάτων αλόης) Αεριοχρωματογραφία Φασματοσκοπία μάζας (ανάλυση δειγμάτων συμπυκνωμένης γέλης αλόης και σκευασμάτων αλόης) Μαγνητικός Πυρηνικός Συντονισμός (ανάλυση δειγμάτων σκευασμάτων αλόης) ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΑΛΟΪΝΗΣ Υγροχρωματογραφία Υψηλής Απόδοσης ( ανάλυση δειγμάτων χυμών αλόης και συμπυκνωμένης γέλης αλόης)
Πορεία απομόνωσης ασεμαννάνης από τη γέλη του φυτού της αλόης Τροποποιημένη μέθοδος από US Patent 4,959,214 Ομογενοποίηση της γέλης υπό πίεση 500 psi Οξίνιση με ΗCl 6 M σε ph περίπου 3,2 Εκχύλιση με περίσσεια αιθανόλης (>24 ώρες) Φυγοκέντρηση για την παραλαβή του στερεού υπολείμματος και έκπλυση με αιθανόλη Λυοφιλίωση για την καταβύθιση λευκής σκόνης σε μορφή πούδρας
Συμπλοκοποίηση με ερυθρό του κογκό US PATENT 5,512,488 Απορρόφηση διαλύματος Ερυθρού του Κογκό 0,7 0,6 0,5 Ερυθρό του Κογκό Απορρόφηση 0,4 0,3 0,2 0,1 Πειραματικές συνθήκες: NaOH 0,2 M 0,0 400 500 600 700 800 λ (nm) Υδατικό διάλυμα ερυθρού του κογκό 2x10-4 Μ Διάλυμα ασεμαννάνης
ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ Φασματομετρική μελέτη εργαστηριακά απομονωμένης ασεμαννάνης, συμπλοκοποιημένης με Ερυθρό του Κογκό Απορρόφηση 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 488nm 513nm 540nm 400 500 600 700 800 λ (nm) Διάλυμα ερυθρού του κογκό Διάλυμα συμπλόκου ασεμαννάνης ερυθρού του κογκό Απορρόφηση 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15 0,10 0,05 r 2 =0,9996 0,00 0 20 40 60 80 100 Συγκέντρωση ασεμαννάνης (μg/ml) Μεταβολή της απορρόφησης του συμπλόκου ασεμαννάνης ερυθρού του κογκό συναρτήσει της συγκέντρωσης της ασεμαννάνης
Φασματομετρική μελέτη σκευάσματος ασεμαννάνης του εμπορίου, συμπλοκοποιημένης με Ερυθρό του Κογκό Απορρόφηση 1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0 488nm 513nm 540nm 400 500 600 700 800 λ (nm) Διάλυμα ερυθρού του κογκό Συγκέντρωση ασεμαννάνης= 2,52 % β/β Διάλυμα συμπλόκου ασεμαννάνης ερυθρού του κογκό
Φασματομετρική μελέτη ομογενοποιημένης γέλης αλόης, συμπλοκοποιημένης με Ερυθρό του Κογκό 1,0 0,8 488nm 513nm 540nm 0,5 0,4 Απορρόφηση 0,6 0,4 0,2 Απορρόφηση 0,3 0,2 0,1 r 2 =0,9994 0,0 400 500 600 700 800 λ (nm) 0,0 0 2 4 6 8 10 % ομογενοποιημένη γέλη αλόης Διάλυμα ερυθρού του κογκό Διάλυμα συμπλόκου ασεμαννάνης ερυθρού του κογκό Μεταβολή της απορρόφησης του συμπλόκου ασεμαννάνης ερυθρού του κογκό συναρτήσει της % ομογενοποιημένης γέλης αλόης (σε υδατικό διάλυμα)
Περιεκτικότητα σε ασεμαννάνη προϊόντων αλόης Όνομα Προϊόντος Bioactive Aloe Vera juice- cranberry flavor- AloePura Laboratories * Nature s s Fruit Health Drink (Aloe vera of Australia) AOPeach Mineral Water with Aloe Vera- Austar Natural Products Aloe Plus Naturopathic formulation (lime- celery extract) Aloe vera of Australia Stabilized aloe vera gel- Forever Living Products. * Herbal Aloe concentrate- Herbalife* Cασεμαννάνης (μg/ml) % β/ο ασεμαννάνη % Τιμή αλόης > 1000 > 0,10 > 20 85,16 8,52x10-3 1,7 18,57 1,86x10 10-3 0,37 35,22 3,52x10-3 0,70 885,7 8,86x10-2 17,7 228 2,28x10-2 4,56
Έλεγχος συμπλοκοποίησης άλλων απλών σακχάρων με το Ερυθρό του Κογκό 1,0 γλυκόζη-ερυθρό του κογκό μαννόζη-ερυθρό του κογκό ερυθρό του κογκό ασεμαννάνη-ερυθρό του κογκό 0,8 Απορρόφηση 0,6 0,4 0,2 0,0 400 500 600 700 800 λ (nm)
Έλεγχος συμπλοκοποίησης του Ερυθρού του Κογκό με άλλους πολυσακχαρίτες 1,0 δεξτρίνη-ερυθρό του κογκό δεξτράνη-ερυθρό του κογκό ερυθρό του κογκό ασεμαννάνη-ερυθρό του κογκό 0,8 Απορρόφηση 0,6 0,4 0,2 0,0 400 500 600 700 800 λ (nm)
Έλεγχος συμπλοκοποίησης ασεμαννάνης με Ιώδες του μεθυλίου Ιώδες του μεθυλίου 1,0 0,8 ιώδες του μεθυλίου ασεμαννάνη (20 μg/ml) - ιώδες του μεθυλίου ασεμαννάνη (30 μg/ml) - ιώδες του μεθυλίου ασεμαννάνη (40 μg/ml) - ιώδες του μεθυλίου ασεμαννάνη (50 μg/ml) - ιώδες του μεθυλίου ασεμαννάνη (100 μg/ml) - ιώδες του μεθυλίου Απορρόφηση 0,6 0,4 0,2 0,0 400 500 600 700 800 λ (nm)
Έλεγχος συμπλοκοποίησης ασεμαννάνης με Κυανό της τολουιδίνης Κυανό της τολουιδίνης 7 ιώδες της τολουιδίνης ασεμαννάνη (20 μg/ml)-ιώδες της τολουιδίνης ασεμαννάνη (50 μg/ml)-ιώδες της τολουιδίνης ασεμαννάνη (100 μg/ml)-ιώδες της τολουιδίνης 6 5 Απορρόφηση 4 3 2 1 0 400 500 600 700 800 λ (nm)
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Είναι δυνατός ο προσδιορισμός ασεμαννάνης σε ένα προϊόν, με τη συμπλοκοποίηση ομογενοποιημένης γέλης αλόης με ερυθρό του κογκό, εύκολα, γρήγορα και με ακρίβεια Εκλεκτική αντίδραση ασεμαννάνης με το Ερυθρό του Κογκό Τα απλά σάκχαρα δεν παρουσιάζουν παρόμοια τάση σύνδεσης με το Ερυθρό του Κογκό Άλλα αντιδραστήρια συμπλοκοποίησης (Ιώδες του μεθυλίου, Κυανό της τολουιδίνης) δεν έχουν αντίστοιχη συμπεριφορά
Πορεία υδρόλυσης και παραγωγοποίησης πολυσακχαριτών ΠΟΛΥΣΑΚΧΑΡΙΤΗΣ TFA
Παραγωγοποίηση μαννόζης 1 2 Αρ. Rt (min) Ένωση m/z Φάσμα μάζας της κορυφής 1 1 18,14 Οξίμη της μαννόζης 6TMS 2 18,55 Οξίμη της μαννόζης 6TMS* 73,147,205, 319,524,612 73,147,205, 319,524,612 Οξίμη της μαννόζης 6TMS. Ποσοστό ομοιότητας 98%
Παραγωγοποίηση γλυκόζης 1 2 Αρ. Rt (min) Ένωσης m/z Φάσμα μάζας της κορυφής 1 1 18,26 Οξίμη της γλυκόζης 6TMS 2 18,55 Οξίμη της γλυκόζης 6TMS* 73,147,205, 319,524,612 73,147,205, 319,524,612 Ποσοστό ομοιότητας 99%
Όξινη υδρόλυση και παραγωγοποίηση ασεμαννάνης 1 2 3 Φάσμα μάζας της κορυφής 1 Αριθμός κορυφής Rt (min) Ένωση Εμβαδό κορυφής (αφθονία ιόντων) 1 18,14 Οξίμη της μαννόζης 6 TMS 2 18,26 Οξίμη της γλυκόζης 6 TMS 3097899 774475 Ποσοστό ομοιότητας 97% 3 18,55 Οξίμη της γλυκόζης/μανν όζης 6 TMS* 231309
Όξινη υδρόλυση και παραγωγοποίηση εμπορικού προϊόντος ασεμαννάνης 1 2 3 4 5 6 Αριθμ. κορ. Φάσμα μάζας της κορυφής 3 Rt (min) Ένωση Εμβαδό κορυφής (αφθονία ιόντων) 1 15,55 Ινοσιτόλη 1,2, 3,4,5,6- εξάκις O- TMS 2 17,76 Ξυλιτόλη 5 TMS 3 18,13 Οξίμη της μαννόζης 6 TMS 3156745 1219387 3180614 Ποσοστό ομοιότητας 97% 4 18,26 Οξίμη της γλυκόζης 6 TMS 5 18,55 Οξίμη της μαννόζης/ γλυκόζης 6 TMS* 6 19,47 Μυοινοσιτόλη 1,2,3,4,5,6- εξάκις O- TMS 4171154 2528868 3359962
Όξινη υδρόλυση και παραγωγοποίηση δεξτρίνης 3 Αρ. Rt (min) Ένωση εμβαδό κορυφής (αφθονία ιόντων) 1 2 4 5 6 1 11,73 Ινοσιτόλη 1,2,3,4,5,6- εξάκις- O- TMS 2 19,19 Ριβιτόλη- 1,2,3,4,5- πεντα TMS 11480156 2177919 Φάσμα μάζας κορυφής 3 3 18,27 Οξίμη της γλυκόζης 6 TMS 65048432 4 18,53 Οξίμη της γλυκόζης 6 TMS* 15507662 Ποσοστό ομοιότητας 99% 5 27,86 Μαλτόζη οκτάκις ΤΜS 6 33,86 D- τυρανόζη 7 TMS 12768142 13087258
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Με τη μέθοδο της αεριοχρωματογραφίας φασματοσκοπίας μάζας μπορεί να γίνει ταυτοποίηση των παραγώγων της μαννόζης και της γλυκόζης σε προϊόντα ασεμαννάνης Ύπαρξη της κορυφής του παραγώγου της γλυκόζης σε ποσοστό μεγαλύτερο από αυτό της κορυφής του παραγώγου της μαννόζης οδηγεί σε υποψία νοθείας του προϊόντος Η μέθοδος όξινης υδρόλυσης και παραγωγοποίησης δε βρίσκει εφαρμογή σε δείγματα γέλης αλόης
ΜΑΓΝΗΤΙΚΟΣ ΠΥΡΗΝΙΚΟΣ ΣΥΝΤΟΝΙΣΜΟΣ Φάσμα 1 H-NMR ασεμαννάνης Φάσμα 1 H-NMR ασεμαννάνης εργαστηριακά απομονωμένης Φάσμα 1 H-NMR εμπορικού προϊόντος ασεμαννάνης
Φάσμα 13 C-ΝΜR εμπορικού προϊόντος ασεμαννάνης
ΑΛΟΪΝΗ Ανώτατα επιτρεπτά όρια αλοΐνης νης: : 0,1 mg/kg σε τρόφιμα και ποτά χωρίς αλκοόλ και 50 mg/kg σε αλκοολούχα ποτά
Προσδιορισμός αλοΐνης 0,020 0,015 AU 0,010 αλοΐνη 0,005 0,000 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00 50,00 Minutes Χρωματογράφημα διαλύματος αλοΐνης συγκέντρωσης 10 μg/ml 2000000 2000000 Εμβαδό κορυφής 1500000 1000000 500000 0 0 20 40 60 80 100 Εμβαδό κορυφής 1500000 1000000 500000 0 0 20 40 60 80 100 Συγκέντρωση αλοΐνης (μg/ml) r 2 = 0,9998 Συγκέντρωση αλοΐνης (μg/ml) Καμπύλη αναφοράς προτύπων διαλυμάτων αλοΐνης
Ανάλυση δειγμάτων αλόης εμπορίου 2,00 1,80 1,60 1,40 αλοΐνη 1,20 0,007 0,006 AU 1,00 0,005 0,004 0,80 AU 0,003 0,002 0,60 0,001 0,000 20,00 21,00 22,00 23,00 24,00 25,00 26,00 27,00 28,00 0,40 Minutes 0,20 0,00 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 30,00 35,00 40,00 45,00 50,00 Minutes Ονομασία δείγματος Εμβαδό κορυφής Συγκέντρωση αλοΐνης (μg/ml) Stabilized aloe vera gel Forever living products 11482 1,251 Bioactive Aloe Vera juicecranberry flavor- AloePura Laboratories Herbal aloe Concentrate- Herbalife Μη ανιχνεύσιμη Μη ανιχνεύσιμη 13862 1,375
ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ Η μέθοδος προσδιορισμού της αλοΐνης είναι εύκολη, ταχεία και βρίσκει εφαρμογή στη μεγάλη πλειοψηφία των προϊόντων αλόης Αλοΐνη δεν ανιχνεύτηκε παρά μόνο σε προϊόντα γέλης αλόης ή συμπυκνωμένου χυμού αλόης
ΕΥΧΑΡΙΣΤΩ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΡΟΣΟΧΗ ΣΑΣ