Third Generation PSA. For use on IMMULITE 2000 systems

Third Generation For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Third Generation English Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of prostate-specific antigen () in human serum, as an aid in the detection of prostate cancer when used in conjunction with digital rectal examination (DRE) in men aged 50 years or older. This assay is further indicated as an adjunctive test aid in the management of prostate cancer patients. Catalog Number: L2KUP2 (200 tests) L2KUP6 (600 tests) Test Code: sps Color: Red Caution: In the United States, Federal law restricts this device sale by or on the order of a physician. The concentration of in a given specimen determined with different assays can vary due differences in assay methods and reagent specificity. The results reported by the laborary the physician must include the identity of the assay used. Values obtained with different assays cannot be used interchangeably. Before changing assays, the laborary must confirm the baseline values for patients being serially monired. Summary and Explanation Prostate specific antigen (), first identified and characterized by Wang, et al in 1979, is a glycoprotein monomer with protease activity. 1,2 has an isoelectric point of approximately 6.9 and a molecular weight of approximately 33 34 kilodalns; it contains approximately 10% carbohydrate by weight. 1,2 The amino acid sequence of was reported, 3 and the gene has been cloned. 4 is biochemically and immunologically distinct from PAP and es not exhibit enzymatic phosphatase activity. 5 is localized in the cyplasm of prostatic ductal epithelium and in secretions of the ductal lumina. 6 Because is a secrery protein of the prostate, it can be recovered and purified both from prostatic tissue and from seminal plasma. 7 has been found be exclusively associated with prostate tissue; 17 and elevated serum has been found in patients with prostate cancer, benign prostatic hypertrophy, and inflammary conditions of other adjacent geniurinary tissues, but not in healthy men, men with nonprostatic carcinoma, healthy women or women with cancer. 5,8 Measurement of serum is not suitable as a screen for prostate cancer because elevated concentrations are also observed in patients with benign prostatic hypertrophy (BPH) 8 ; nor is it recommended as a guide in disease staging. The combination of measurement and rectal examination with ultrasonography in the event of abnormal findings may provide a better method of detecting prostate cancer than rectal examination alone. Measurement of offers several advantages over digital rectal examination or ultrasonography in detecting prostate cancer: the result is objective, quantitative, and obtained independent of the examiner's skill, and the procedure is more acceptable patients than other procedures. 9 Determinations of tal immunoreactive can be useful in detecting metastatic or persistent disease in patients following surgical or medical treatment of prostate cancer. 10,11 Persistent elevation of following treatment or an increase in the pretreatment concentrations is indicative of recurrent or residual disease. 12 16 Hence, is widely accepted as an aid in the management of prostate cancer patients. 12 16 The American Cancer Society has recommended that both the blood test and digital rectal examination be offered annually, beginning at age 50, men who have at least a 10-year life expectancy, as well as younger men who 2 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

are at high risk. Patients should be given information regarding potential risks and benefits of early detection and treatment. Men in high risk groups, such as those with two or more affected first-degree relatives may consider screening at a younger age, perhaps 45. 27 Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Third Generation is a solid-phase, sequential chemiluminescent immunometric assay. The solid phase (bead) is coated with specific murine anti- monoclonal antibody. The patient sample is incubated with the bead during the first cycle, at which time in the sample binds the monoclonal antibody-coated bead. Unbound serum is then removed by a centrifugal wash. The reagent containing alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated polyclonal goat anti- antibody specific for is introduced in the second cycle and binds on the bead form an antibodysandwich complex. Unbound enzyme conjugate is then removed by a centrifugal wash. Finally, chemiluminescent substrate is added the bead and signal is generated in proportion the bound enzyme. Incubation Cycles: 2 30 minutes. Specimen Collection Samples should be obtained before biopsy, prostatecmy or prostatic massage, since manipulation of the prostate gland may lead elevated levels persisting for up 3 weeks using conventional assays. 18 Studies have shown conflicting results on the existence of an effect of digital rectal examination on level using conventional assays. 19,20 Therefore, when possible, obtain samples before digital rectal examination. The use of an ultracentrifuge is recommended clear lipemic samples. Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laborary; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activars and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Third Generation has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 50 µl serum. Srage: 48 hours at 2 8 C or for longer at 20 C. 21 Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Sre at 2 8 C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies HIV 1 and 2; for hepatitis B surface antigen; and for antibodies hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dl, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water. Materials Supplied Components are a matched set. The barcode labels are needed for the assay. Third Generation Bead Pack (L2UP12) With barcode. 200 beads, coated with monoclonal murine anti- antibody. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KUP2: 1 pack. L2KUP6: 3 packs. IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 3

Third Generation Reagent Wedge (L2UPA2) With barcode. 11.5 ml of a protein buffer/serum matrix, with preservative. 11.5 ml alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated polyclonal goat anti- antibody in buffer, with preservative. Stable at 2 8 C until expiration date. L2KUP2: 1 wedge. L2KUP6: 3 wedges. Before use, tear off the p of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the p of wedge; snap the sliding cover wn in the ramps on the reagent lid. Third Generation Adjusrs (LUPL, LUPH) Two vials (Low and High), 3 ml each, of in a serum matrix, with preservative. Stable at 2 8 C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20 C. L2KUP2: 1 set. L2KUP6: 2 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader. Kit Components Supplied Separately Multi-Diluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) For the on-board dilution of high samples. One vial containing concentrated (ready-use), nonhuman protein/buffer matrix, with preservative. Srage: 30 days (after opening) at 2 8 C or 6 months (aliquotted) at 20 C. L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml. Barcode labels are provided for use with the diluent. Before use, place an appropriate label on a 16 100 mm test tube, so that the barcodes can be read by the on-board reader. L2M2Z: 3 labels L2M2Z4: 5 labels L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes (16 100 mm) L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps TMCO: Tri-level, multi-constituent control LUPCM: Single-level Third Generation Control Module Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls. Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operar's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operar's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 4 weeks. Quality Control Samples: Use controls or sample pools with at least two levels (low and high) of. Expected Values in Detection of Prostate Cancer In a retrospective study at one clinical site for prostate cancer detection purposes, samples were collected from 477 men, aged 50 or older. Of these, 20 (4%) were Asian; 8 (2%) were African American; 440 (92%) were Caucasian; 7 (<1%) were other and 2 (<1%) provided no ethnic information. All patients also underwent digital rectal examination (DRE). Of these, 52 were biopsied for elevated (> 4.0 ng/ml) and/or suspicious DRE. The following table summarizes these clinical studies: No. of Subjects (%) No. of Biopsies (%) No. of Prostate % Positive Biopsies Cancers All Subjects 477 52 18 34.6% > 4.0 85 45 16 35.6% 17.8% 52.9% (22.8% 51.2%) DRE + 54 17 8 47.1% 11.3% 31.5% (25.3% 72.2%) 4 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

No. of Subjects (%) No. of Biopsies (%) No. of Prostate Cancers % Positive Biopsies > 4.0 DRE + 25 13 7 53.8% 5.2% 52.0% (26.0% 77.6%) <= 4.0 DRE + 29 4 1 25.0% 6.1% 13.8% (1.3% 75.1%) > 4.0 DRE 60 32 9 28.1% 12.6% 53.3% (15.2% 46.2%) <= 4.0 DRE 363 3 1 33.3% 76.1% 0.8% (0.8% 90.6%) The study demonstrated that testing, when used in conjunction with DRE, was more effective in detecting prostate cancer than DRE alone. determinations detected 50% (9/18) of cancers that DRE did not; elevations greater than 4 ng/ml may warrant additional testing even if the DRE is negative. However, the converse is also true: a subject with suspicious DRE and a normal may also require additional testing since DRE detected 6% (1/18) of cancers that determinations did not. In the same study, 363 participants were identified as asympmatic subjects. The following table contains the distribution of values by age decade for these asympmatic subjects in the clinical study who had both a negative and DRE, and therefore, were not biopsied as well as for those subjects who were negative for cancer biopsy. There is no certainty that all of these subjects were indeed free of prostate disease. Therefore, these data should be interpreted with caution since it is questionable whether these subjects represent a truly normal population. There are presently no data proving that the use of age-specific reference ranges are safe or effective. Distribution of Levels n Median 95 th %ile All subjects 363 1.02 3.20 50 59 age group 157 0.88 2.83 60 69 age group 137 1.12 3.15 70 age group 69 1.48 3.58 In studies performed at four clinical sites, 2,618 samples collected from 1,965 patients were tested. Shown below is the distribution of IMMULITE results from this study. Number of Subjects / 0 4 4 10 10 20 20 40 >40 Samples ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml Female Subjects 253/253 100% 0% 0% 0% 0% Healthy 149/149 100% 0% 0% 0% 0% Nonmalignant Diseases 28/28 100% 0% 0% 0% 0% Malignant Diseases 76/76 100% 0% 0% 0% 0% Healthy Male Subjects 473/473 99.4% 0.6% 0% 0% 0% Non-Malignant Diseases 548/548 76.2% 19.3% 3.5% 0.9% 0% BPH 333/333 67.9% 25.8% 5.4% 0.9% 0% Other Prostatic Diseases 66/66 80.3% 18.2% 1.5% 0% 0% Other Nonprostatic Diseases 149/149 93.2% 5.4% 0% 1.3% 0% Non-Prostatic Malignancies 312/312 93.0% 6.1% 0.6% 0.3% 0% Prostate Cancer (single specimens) 274/274 42.3% 21.2% 13.1% 7.3% 16.1% Prostate Cancer (serially monired) 105/758 54.8% 11.7% 10.7% 7.5% 15.3% IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 5

Number of Subjects / Samples Stage A 0 4 4 10 10 20 20 40 >40 ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml 17/174 64.9% 9.8% 9.2% 3.5% 12.6% Stage B 31/200 54.0% 14% 12% 8.5% 11.5% Stage C 19/102 56.9% 6.9% 7.8% 8.8% 19.6% Stage D 38/282 48.2% 13.1% 11.7% 8.9% 18.0% Total: 1,965/2,618 1,962 275 138 83 160 Consider these limits as guidelines only. Each laborary should establish its own reference ranges. Limitations Serum concentrations should not be interpreted as absolute evidence for the presence or absence of malignant disease. 8 Prediction of malignant prostatic disease recurrence should be based on a complete clinical evaluation of the patient, which may also include serial serum determinations. Samples should be obtained before biopsy, prostatecmy or prostatic massage. 18 expression may be altered due hormonal therapy for prostate cancer. Consequently, a low result following hormonal treatment may not adequately reflect the presence of residual or recurrent disease. 25 This device is not intended be used for early detection of prostate cancer. Some individuals have antibodies mouse protein which can cause interference in immunoassays that employ antibodies derived from mice. In particular, specimens from patients who have received preparations of mouse monoclonal antibodies for diagnosis or therapy may contain human anti-mouse antibodies (HAMA). These specimens may show erroneous results in such assays. 22-24 Therefore, results should be interpreted with caution for such patients. Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Bosca LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical hisry, and other findings. Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assay's performance. Results are expressed in ng/ml. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Calibration Range: 0.005 20 ng/ml The assay is traceable an internal standard manufactured using qualified materials and measurement procedures. Analytical Sensitivity: 0.005 ng/ml Functional Sensitivity: 0.01 ng/ml, as demonstrated by the studies summarized in the Precision section. (Functional sensitivity is defined as the lowest concentration that can be measured with an interassay CV of 20%.) High-se Hook Effect: None up 112,000 ng/ml. Precision: Samples were assayed in duplicate over the course of 20 days, two runs per day, for a tal of 40 runs and 80 replicates. Within-Run Total Mean SD CV SD CV 1 0.028 0.002 7.1% 0.003 10.7% 2 3.0 0.11 3.7% 0.20 6.7% 3 8.3 0.25 3.0% 0.57 6.9% 6 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

A second study included lowconcentration pools, prepared from unspiked patient samples. Within-Run Total Mean SD CV SD CV 1 0.0067 0.00136 20.3% 0.00141 21.0% 2 0.0098 0.00183 18.7% 0.00183 18.7% 3 0.027 0.0020 7.3% 0.0021 7.8% 4 0.050 0.0024 4.8% 0.0028 5.6% 5 0.086 0.0042 4.9% 0.0056 6.5% 6 0.294 0.0129 4.4% 0.0134 4.6% 7 0.430 0.0173 4.0% 0.0183 4.3% 8 0.861 0.0321 3.7% 0.0334 3.9% Dilution Observed Expected %O/E 3 8 in 8 6.5 4 in 8 3.3 3.2 101% 2 in 8 1.7 1.6 106% 1 in 8 0.81 0.81 100% 4 8 in 8 12.3 4 in 8 6.1 6.2 98% 2 in 8 3.0 3.1 97% 1 in 8 1.5 1.5 100% 5 8 in 8 17.7 4 in 8 8.8 8.9 99% 2 in 8 4.4 4.4 100% 1 in 8 2.1 2.2 95% Precision Profile: Based on within-run CVs from three Master Curve studies, 10 or 20 replicates per sample, in addition the within-run CVs tabulated. The bowlshaped conur line traces the approximate path of these points (open circles). For reference, the run--run ("tal") CVs tabulated are plotted as solid squares. Coefficient of Variation (CV) 20 15 10 5 0 0.01 0.03 0.1 0.3 1.0 3.0 10, ng/ml Linearity: Samples were assayed under various dilutions. Dilution Observed Expected %O/E 1 8 in 8 0.109 4 in 8 0.054 0.055 98% 2 in 8 0.026 0.027 96% 1 in 8 0.014 0.014 100% 2 8 in 8 1.5 4 in 8 0.73 0.75 97% 2 in 8 0.38 0.38 100% 1 in 8 0.17 0.19 89% Recovery: Samples spiked 1 19 with three solutions (10.2, 46 and 91 ng/ml) were assayed. Spiking Solution Observed Expected %O/E 1 0.87 A 1.8 1.8 100% B 2.8 2.8 100% C 4.7 5.0 94% 2 1.7 A 2.5 2.6 96% B 3.6 3.6 100% C 5.2 5.8 90% 3 8.3 A 9.0 8.8 102% B 9.6 9.9 97% C 11 12 92% 4 9.1 A 8.9 9.6 93% B 11 11 100% C 12 13 92% 5 16 A 17 17 100% B 18 17 106% C 19 19 100% 6 16 A 17 17 100% B 17 17 106% C 18 19 95% IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 7

Specificity: The antibody is highly specific for. Compound Amount Added % Crossreactivity AFP 10,000 ng/ml ND CEA 10 ng/ml ND Ferritin 10,000 ng/ml ND HCG 100,000 miu/ml ND PAP 1,000 ng/ml ND Prolactin 200 ng/ml ND ND: not detectable Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up 200 mg/l has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up 128 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up 3,000 mg/dl has no effect on results, within the precision of the assay. Method Comparison: All four of nonisopic assays were compared using Deming regression analysis. Samples used were within the working range of the assays. The table below presents the results of the Deming regressions, with columns as Y, and rows as X. IMMULITE IML IML 3rd Gen. 3rd Gen. n 477 474 473 Slope Intercept Correlation Coefficient 0.94 (0.93 0.95) 0.11 ( 0.15 0.07) 0.99 (0.98 1.00) 0.05 (0.02 0.09) 1.08 (1.07 1.10) 0.06 (0.02 0.11) 0.992 0.993 0.991 IML IML 3rd Gen. 3rd Gen. IMMULITE 2000 n 477 474 473 Slope 1.06 (1.05 1.08) 1.06 (1.05 1.08) 1.16 (1.14 1.17) 0.12 0.15 0.18 Intercept Correlation Coefficient (0.08 0.16) (0.11 0.20) (0.14 0.23) 0.992 0.988 0.990 IMMULITE 3rd Generation n 474 474 472 Slope 1.01 (1.00 1.03) 0.94 (0.93 0.96) 1.10 (1.09 1.11) 0.06 0.15 0.00 Intercept Correlation Coefficient ( 0.09 0.02) ( 0.19 0.10) ( 0.05 0.05) 0.993 0.988 0.990 IMMULITE 2000 3rd Generation n 473 473 472 Slope 0.92 (0.91 0.94) 0.86 (0.85 0.87) 0.91 (0.90 0.92) 0.06 0.16 0.00 Intercept Correlation Coefficient ( 0.10 0.02) ( 0.20 0.12) ( 0.04 0.04) 0.991 0.990 0.990 The following graph presents the comparison between IMMULITE 2000 Third Generation and IMMULITE Third Generation on 472 samples. (Concentration range: nondetectable approximately 20 ng/ml.) By linear regression: ( 3 rd Gen. ) = 1.10 (IML 3 rd Gen. ) 0.00 ng/ml r = 0.990 8 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

Means: 2.34 ng/ml (IMMULITE 2000) 2.16 ng/ml (IMMULITE) IMMULITE 2000 3rd G en 20 15 10 5 0 y = 1.0994x - 0.0003 0 5 10 15 20 IMMUL ITE 3rd Ge n References 1) Wang MC, et al. Purification of a human prostate specific antigen. Invest Urol 1979;17:159-63. 2) Kuriyama M, et al. Prostatic acid phosphatase and prostate- specific antigen in prostate cancer. In: International Advances in Surgical Oncology. New York: Alan R. Liss, Inc., 1982; 5:29-49. 3) Watt WK, Lee PJ, et al. Human prostate-specific antigen: structural and functional similarity with serine proteases. Proc Natl Acad Sci USA 1986;83:3166-70. 4) Lundwall A., Characterization of the gene for prostate specific antigen, a human glandular kallikrein. Biochem Biophys Res Commun 1989;161:1151-9. 5) Papsidero LD, et al. A prostate antigen in sera of prostatic cancer patients. Cancer Res 1980;40:2428-31. 6) Nadji M, et al. Prostatic-specific antigen: an immunohislogic marker for prostatic neoplasms. Cancer 1981;48:1229-32. 7) Wang MC, et al. Prostate antigen of human cancer patients. In: Methods in cancer research. Academic Press, Inc., 1982; 19:179-97. 8) Kuriyama M, et al. Quantitation of prostatespecific antigen in serum by a sensitive enyzme immunoassay. Cancer Res 1980;40:4658-62. 9) Catalona WJ, et al. Measurement of prostatespecific antigen in serum as a screening test for prostate cancer. New Engl J Med 1991;324:1156-61. 10) Brawer MK, Lange PH. Prostate-specific antigen: its role in early detection, staging, and moniring prostatic carcinoma. J Encrinol 1989;3:227-36. 11) Killian CS, et al. Prognostic importance of prostate specific antigen for moniring patients with stages B2 D1 prostate cancer. Cancer Res 1985;45:886-91. 12) Stamey TA. Prostate specific antigen in the diagnosis and treatment of adenocarcinoma of the prostate. In: Stamey TA, edir. Monographs in Urology. Princen, NJ: Medical Directions Publishing, 1989; 10(4):50-64. 13) Ercole CJ, et al. Prostatic specific antigen and prostatic acid phosphatase in the moniring and staging of patients with prostatic cancer. J Urol 1987;138:1181-4. 14) Chan DW, et al. Prostate-specific antigen as a marker for prostatic cancer: a monoclonal and a polyclonal immunoassay compared. Clin Chem 1987;33:1916-20. 15) Lange PH, et al. The value of serum prostate specific antigen determinations before and after radical prostatecmy. J Urol 1989;141:873-9. 16) Oesterling JE. Prostate specific antigen: a critical assessment of the most useful tumor marker for adenocarcinoma of the prostate. J Urol 1991;145:907-23. 17) Iwakiri J, Grandbois K, et al. An analysis of urinary prostate specific antigen before and after radical protatecmy: evidence for secretion of prostate specific antigen by the periurethral glands. J Urol 1993;149:783-6. 18) Stamey TA, Yang N, et al. Prostate specific antigen as a serum marker for adenocarcinoma of the prostate. N Engl J Med 1987;317:909-16. 19) Brawer MK, et al. The effect of digital rectal examination on serum levels of prostatic specific antigen. Arch Pathol Lab Med 1988;112:1110-2. 20) Hughes HR, et al. Serum prostatic specific antigen: in vitro stability and the effect of ultrasound rectal examination in vivo. Ann Clin Biochem 1987;24(Suppl):206-8. 21) Jacobs DS, Grady HD, edirs. Laborary Test Handbook. 4th ed. Hudson (Cleveland): Lexi-Comp Inc., 1996; 193. 22) Primus FJ, et al. "Sandwich"-type immunoassay of carcinoembryonic antigen in patients receiving murine antibody for diagnosis and therapy. Clin Chem 1988;34:261-4. 23) Hansen HJ, et al. Solving the problem of antibody interference in commercial "sandwich"- type immunoassay of carcinoembryonic antigen. Clin Chem 1989;35:146-51. 24) Schroff RJ, et al. Human anti-murine immunoglobulin responses in patients receiving monoclonal antibody therapy. Cancer Res 1985;45:879-85. 25) Morgan WR, et al. Prostate specific antigen values after radical retropubic prostatecmy for adenocarcinoma of the prostate: impact of adjuvant treatment (hormonal and radiation). J Urol 1991;145:319-23. 26) Ferguson RA, Yu H, Kalyvas M, Zammit S, Diamandis EP. Ultrasensitive detection of prostate-specific antigen by a time-resolved immunofluorometric assay and the IMMULITE immunochemiluminescent third-generation assay. Clin Chem 1996;42:675-84. 27) Smith RA, et al. American Cancer Society guidelines for the early detection of cancer. CA Cancer J Clin 2000; 50(1):34-49. Technical Assistance For technical assistance, contact your National Distribur. www.siemens.com/diagnostics IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 9

The Quality System of Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. is certified ISO 13485:2003. Česky. 1 Variační koeficient (CV), 2. Ελληνικά. 1 Συντελεστής συσχέτισης (CV), 2. Polski. 1 Współczynnik zmienności (CV), 2. Tables and Graphs Precision 1 (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 0.028 0.002 7.1% 0.003 10.7% 2 3.0 0.11 3.7% 0.20 6.7% 3 8.3 0.25 3.0% 0.57 6.9% Precision 2 (ng/ml) Within-Run 1 Total 2 Mean 3 SD 4 CV 5 SD CV 1 0.0067 0.00136 20.3% 0.00141 21.0% 2 0.0098 0.00183 18.7% 0.00183 18.7% 3 0.027 0.0020 7.3% 0.0021 7.8% 4 0.050 0.0024 4.8% 0.0028 5.6% 5 0.086 0.0042 4.9% 0.0056 6.5% 6 0.294 0.0129 4.4% 0.0134 4.6% 7 0.430 0.0173 4.0% 0.0183 4.3% 8 0.861 0.0321 3.7% 0.0334 3.9% Česky. 1 V rámci stanovení, 2 Celkem, 3 Střední hodnota, 4 Směrodatná odchylka, 5 Variační koeficient. Ελληνικά. 1 Κατά την ίδια περίοδο, 2 Συνολικά, 3 Μέσος όρος, 4 SD, 5 CV. Polski. 1 Wewnątrz serii, 2 Całość, 3 Średnie, 4 SD, 5 CV. Precision Profile Coefficient of Variation (CV) 20 15 10 5 0 0.01 0.03 0.1 0.3 1.0 3.0 10, ng/ml English. Coefficient of Variation (CV) 1, 2. Linearity (ng/ml) Dilution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 8 in 8 5 0.109 4 in 8 0.054 0.055 98% 2 in 8 0.026 0.027 96% 1 in 8 0.014 0.014 100% 2 8 in 8 1.5 4 in 8 0.73 0.75 97% 2 in 8 0.38 0.38 100% 1 in 8 0.17 0.19 89% 3 8 in 8 6.5 4 in 8 3.3 3.2 101% 2 in 8 1.7 1.6 106% 1 in 8 0.81 0.81 100% 4 8 in 8 12.3 4 in 8 6.1 6.2 98% 2 in 8 3.0 3.1 97% 1 in 8 1.5 1.5 100% 5 8 in 8 17.7 4 in 8 8.8 8.9 99% 2 in 8 4.4 4.4 100% 1 in 8 2.1 2.2 95% Česky. 1 Ředění, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 % Naměřená / Očekávaná, 5 8 v 8. Ελληνικά. 1 Αραίωση, 2 Παρατηρούνη (O), 3 Ανανόνη (E), 4 % O/E, 5 8 στα 8. Polski. 1 Rozcieńczenie, 2 Zmierzone (Z), 3 Oczekiwane (O), 4 % Z/O, 5 8 w 8. Specificity Compound 1 Amount Added 2 % Crossreactivity AFP 10,000 ng/ml ND CEA 10 ng/ml ND Ferritin 10,000 ng/ml ND HCG 100,000 miu/ml ND PAP 1,000 ng/ml ND Prolactin 200 ng/ml ND ND: not detectable. 4 Česky. 1 Sloučenina, 2 Přidané množství, 3 % Zkřížená reaktivita, 4 ND: nezjistitelné. Ελληνικά. 1 Μείγμα, 2 Προστέθηκαν, 3 % Διασταυρ.Αντίδραση, 4 ND: Μη ανιχνεύσιμη ποσότητα. Polski. 1 Składnik, 2 Ilość dana, 3 % 10 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

reaktywności Krzyżowej, 4 ND: Nieoznaczlne. IML IML 3rd Gen. 3rd Gen. Recovery (ng/ml) Spiking Solution 1 Observed 2 Expected 3 %O/E 4 1 0.87 A 1.8 1.8 100% B 2.8 2.8 100% C 4.7 5.0 94% 2 1.7 A 2.5 2.6 96% B 3.6 3.6 100% C 5.2 5.8 90% 3 8.3 A 9.0 8.8 102% B 9.6 9.9 97% C 11 12 92% 4 9.1 A 8.9 9.6 93% B 11 11 100% C 12 13 92% 5 16 A 17 17 100% B 18 17 106% C 19 19 100% 6 16 A 17 17 100% B 17 17 106% C 18 19 95% Česky. 1 Rozk, 2 Naměřená, 3 Očekávaná, 4 Naměřená / Očekávaná. Ελληνικά. 1 Διάλυμα, 2 Παρατηρούνη (O), 3 Ανανόνη (E), 4 % O/E. Polski. 1 Roztwór, 2 Zmierzony (Z), 3 Oczekiwany (E), 4 % Z/O. IMMULITE N 3 477 474 473 Slope 4 Intercept 5 0.94 (0.93 0.95) 0.11 ( 0.15 0.07) 0.99 (0.98 1.00) 0.05 (0.02 0.09) 1.08 (1.07 1.10) 0.06 (0.02 0.11) Correlation 6 0.992 0.993 0.991 Coefficient IMMULITE 2000 n 477 474 473 Slope 1.06 (1.05 1.08) 1.06 (1.05 1.08) 1.16 (1.14 1.17) 0.12 0.15 0.18 Intercept Correlation Coefficient (0.08 0.16) (0.11 0.20) (0.14 0.23) 0.992 0.988 0.990 IMMULITE 3rd Generation n 474 474 472 Slope 1.01 (1.00 1.03) 0.94 (0.93 0.96) 1.10 (1.09 1.11) 0.06 0.15 0.00 Intercept Correlation Coefficient ( 0.09 0.02) ( 0.19 0.10) ( 0.05 0.05) 0.993 0.988 0.990 Method Comparison Deming regression analysis 1 The table below presents the results of the Deming regressions, with columns as Y, and rows as X. 2 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 11

IML IML 3rd Gen. 3rd Gen. ( 3 rd Gen. ) = 1.10 (IML 3 rd Gen. ) 0.00 ng/ml r = 0.990 IMMULITE 2000 3rd Generation n 473 473 472 Slope 0.92 (0.91 0.94) 0.86 (0.85 0.87) 0.91 (0.90 0.92) 0.06 0.16 0.00 Intercept Correlation Coefficient ( 0.10 0.02) ( 0.20 0.12) ( 0.04 0.04) 0.991 0.990 0.990 English. Method Comparison Deming regression analysis 1, The table below presents the results of the Deming regressions, with columns as Y, and rows as X. 2, N 3, Slope (95% CI) 4, Intercept 5, Correlation Coefficient 6. Česky. 1 Srovnání medy pomocí Demingovy regresní analýzy, 2 Následující tabulka přináší výsledky Demingovy regrese, přičemž v sloupcích jsou hodnoty Y, v řádcích hodnoty X., 3 N, 4 Směrnice (95% IS), 5 Průsečnice (95% IS), 6 Korelační koeficient. Ελληνικά. 1 Ανάλυσις παλινδρόμισης Deming, 2 Ο πίνακας παρακάτω παρουσιάζει τα αποτελέσματα των παλινδρομίσεων Deming, στήλες Y και γραμμές X, 3 N, 4 κλίση, 5 (95% Cl), 6 Ανακοπή, 7 Συντελεστής συσχέτισης. Polski. 1 Porównanie med amalizą regresji Deminga, 2 W poniższej tabeli zawar wyniki regressji Deminga regressions, z Y w kolumnach i X w rzędach, 3 N, 4 Nachylenie, 5 Odchylenie, 6 Współczynnik korelacji. Method Comparison Graph IMMULITE 2000 3rd G en 20 15 10 5 0 y = 1.0994x - 0.0003 0 5 10 15 20 IMMUL ITE 3rd Ge n English. Third Generation. Česky. 3. Generace. Ελληνικά. Τρίτης γενιάς. Polski. Trzeciej Generacji. Česky IMMULITE 2000 3. Generace Použití: Pro in vitro diagnostické použití na analyzárech IMMULITE 2000 ke stanovení koncentrace antigenu prostaty () v lidském séru, jakož pomůcky při odhalení rakoviny prostaty v kombinaci s digitálním rektálním vyšetřením (DRE) u mužů stáří 50 let a starších. To stanovení je rovněž podpůrným testem v péči o pacienty s rakovinou prostaty. Katalogové číslo: L2KUP2 (200 stanovení) L2KUP6 (600 stanovení) Kód medy: sps Barva: Červená Koncentrace v určitém vzorku stanovené různými medami se mohou lišit s ohledem na rozdíly v použité medě stanovení a specificity reagencií. Výsledky stanovení, které laborař posílá lékaři, musí zahrnovat označení použitého testu. Výsledky získané pomocí rozličných med stanovení se nesmí zaměňovat. Před změnou medy musí laborař provést konfirmaci výchozích hodnot pravidelně slevaných pacientů. Shrnutí a vysvětlení Antigen prostaty (), poprvé identifikovaný a popsaný Wabgem a kol. v roce 1979, je glykoproteinový monomer vykazující proteázovou aktivitu. 1,2 Izoelektrický bod je přibližně 6,9 a molekulová hmotnost přibližně 33 34 kda a asi 10% hmotnosti představují uhlohydráty. 1,2 Bylo objeveno pořadí aminokyselin v 3 a gen byl klonován. 4 je biochemicky i imunologicky odlišný od PAP a nevykazuje enzymatickou fosfatázovou aktivitu. 5 12 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

je lokalizován v cyplazmě duktálního epitelu prostaty a v sekretech duktálního lumina. 6 Prože je sekrečním proteinem, je možné jej odebrat a rafinovat jak z prostatickém tkáně, tak ze semenné plazmy. 7 Bylo zjištěno, že je výhradně spojen s prostatickou tkání 17 a zvýšená hladina v séru byla indikována u pacientů s rakovinou prostaty, benigní hypertrofií prostaty a při zánětech přilehlých tkání, ale nikoli u zdravých mužů, mužů s jiným karcinomem, nebo u žen zdravých nebo s karcinomem. 5,8 Stanovení v séru není vhodné pro screening rakoviny prostaty, prože zvýšená koncentrace se rovněž objevuje u pacientů s benigní prostatickou hypertrofií (BPH) 8 ; rovněž se neporučuje jako vodítko při určování stadia onemocnění. Kombinace měření a ultrasonografického rektálního vyšetření v případě palogického nálezu může představovat lepší medu zjištění rakoviny prostaty než samotné rektální vyšetření. Stanovení má při odhalení rakoviny prostaty oproti digitálnímu rektálnímu vyšetření nebo ultrasonografii několik výhod. Výsledek je objektivní, vyjádřený kvantitativně a získaný nezávisle na vednostech vyšetřujícího. Způsob vyšetření je rovněž pro pacienty přijatelnější než jiné medy. 9 Stanovení celkového imunoreaktivního je užitečné při detekci metastatického nebo přetrvávajícího onemocnění u pacientů po chirurgickém zákroku nebo léčbě rakoviny prostaty. 10,11 Přetrvávající zvýšená hladina po léčbě, nebo nárůst koncentrace vůči stavu před léčbou, jsou znaky recidivy nebo residuálního onemocnění. 12 16 Pro je stanovení obecně akcepváno jako pomůcka při péči o pacienty s rakovinou prostaty. 12 16 American Cancer Society (Americká onkologická společnost) navrhla, aby se 50-letým mužům, kteří mají předpokládanou délku života ještě alespoň 10 roků, a rovněž mladším, ale rizikovějším pacientům, kročně nabídlo stanovení pomocí krevních testů a digitální rektální vyšetření. Pacientům je třeba poskytnout informace o možných rizicích a přínosech časného zjištění onemocnění a léčby. Muži ze skupin s vysokým rizikem, jako například ti, u kterých dva nebo i víc příbuzných prvního stupně bylo zaseno tím onemocněním, můžou zvážit podsupení screeningu v mladším věku, tak kolem 45 let. 27 Princip Stanovení Stanovení IMMULITE 2000 3. Generace je sekvenční chemiluminiscenční imunochemická reakce v pevné fázi. Pevná fáze (kulička) je potená specifickou myší monoklonální protilátkou proti. Vzorek je inkubován s kuličkou v prvním cyklu a v m čase se obsený ve vzorku váže na monoklonální protilátku, kterou je potená kulička. Nenavázané sérum je pak odstraněno centrifigačním promytím. Reagencie obsahující alkalickou fosfatázu (z telecího střeva) konjugovanou s kozí polyklonální protilátkou proti specifickou pro je vložena v druhém cyklu a váže se na, který je na kuličce za vzniku sendvičového komplexu. Nenavázaný konjugát enzymu je poté odstraněn centrifugačním promytím. Na závěr je přidán chemiluminiscenční substrát ke kuličce a vzniklý signal odpovídá navázanému enzymu. Inkubační cykly: 2 30 minut. Odebírání vzorků Vzorky je třeba odebírat před biopsií, prostatekmií nebo prostatickou masáži, prože manipulace s předsjnou žlázou může způsobit zvýšené hodnoty koncentrace, které přetrvávají i tři týdny při použití konvenčních med stanovení. 18 Výzkumy prokázaly odporující si výsledky způsobené existencí vlivu digitálního rektálního vyšetření na množství. 19,20 Pokud je možné, odebírejte tedy vzorky před digitálním rektálním vyšetřením. K úpravě lipemických vzorků se poručuje použití ultracentrifugy. Hemolyzované vzorky můžou být známkou nesprávného zacházení s preparátem ještě před přijetím laboraře; pro by výsledky měly být interprevány s obezřetností. Centrifugace vzorků séra ještě před úplným vysrážením může mít za následek přímnost fibrinu. Chybným výsledkům způsobeným přímností fibrinu lze IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 13

zamezit úplným vysrážením vzorků před jejich centrifugací. U některých vzorků, zejména od pacientů podstupujících antikoagulační léčbu, může srážlivost vyžavat více času. Použití zkumavek pro odběr krve od různých výrobců může poskyvat rozličné hodnoty v závislosti na materiálech a přísadách, včetně gelových nebo fyzických bariér, aktivárů srážení a/nebo antikoagulačních činidel. Stanovení 3. Generace na analyzárech IMMULITE 2000 nebylo tesváno se všemi možnými varianty jednotlivých typů zkumavek. Potřebný objem vzorku: 50 μl séra. Sklavání: 48 hodin při 2 8 C, déle při teplotě 20 C. 21 Upozornění a bezpečnostní opatření Pro in vitro diagnostické použití. Reagencie: Skladujte při teplotě 2 8 C. Likvidujte v souladu s platnými předpisy. Řiďte se obecnými pravidly bezpečnosti práce a se všemi komponenty nakládejte, jako by byly potenciálně infekční. Zdrojové materiály získané z lidské krve byly tesvány a shledány nereaktivní na syfilis, na protilátky proti HIV 1 a 2, na povrchový antigen hepatitidy typu B (HbsAg), a na protilátky proti hepatitidě typu C. Jako konzervační látka byl přidán azid sodný v koncentracích menších než 1 g/l. Při likvidaci vypláchněte velkým množstvím vody, aby se zamezilo nahromadění potenciálně výbušných azidů kovů v olověném a měděném potrubí. Chemiluminiscenční substrát: Vyvarujte se kontaminace a nevystavujte přímému slunečnímu světlu. (Viz připojený letáček.) Voda: Použijte destilovanou nebo deionizovanou vodu. Dodaný materiál Komponenty představují ucelenou sadu. Pro stanovení jsou zapotřebí štítky s čárovými kódy. 3. generace zásobník s kuličkami (L2UP12) Opatřeno čárovým kódem. 200 kuliček potených monoklonální myší protilátkou proti. Stabilní při teplotě 2 8 C expirace. L2KUP2: 1 balení. L2KUP6: 3 balení. 3. generace reagencie (L2UPA2) Opatřeno čárovým kódem. 11,5 ml bílkovinového pufrového/sérového matrixu, s konzervačním prostředkem. 11,5 ml alkalické fosfatázy (z telecího střeva) konjugované s polyklonální kozí protilátkou proti v pufru, s konzervačním prostředkem. Stabilní při teplotě 2 8 C expirace. L2KUP2: 1 nábka. L2KUP6: 3 nábky. Před použitím utrhněte vršek štítku v perforovaném místě, ale nepoškoďte čárový kód. Z vrchu nábky odstraňte uzavírací fólii; posuvný uzávěr zaklapněte ramp na víčku reagencie. 3. generace kalibráry (LUPL, LUPH) Dvě ampulky po 3 ml s nízkou a vysokou koncentrací v sérovém matrixu, s konzervačním prostředkem. Stabilní 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2KUP2: 1 sada. L2KUP6: 2 sady. Před adjustací nalepte na tesvací zkumavky příslušné alikvotní štítky (dané se soupravou) tak, aby zabuvaný snímač mohl přečíst čárové kódy. Materiál dávaný zvlášť Multidiluent 2 (L2M2Z, L2M2Z4) Určeno k aumatickému ředění koncentrovaných vzorků analyzárem. Jedna ampulka koncentrovaného (připraveného k použití), nehumánního bílkovinového/pufrového matrixu, s konzervačním prostředkem. Sklavání: 30 dní po otevření při teplotě 2 8 C nebo rozdělené na alikvotní části 6 měsíců při 20 C. L2M2Z: 25 ml. L2M2Z4: 55 ml. Štítky s čárovými kódy jsou určeny pro diluent. Před použitím nalepte příslušný štítek na tesvací zkumavku 16 100 mm tak, aby zabuvaný snímač 14 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

mohl přečíst čárové kódy. L2M2Z: 3 štítky L2M2Z4: 5 štítků L2SUBM: Chemiluminiscenční substrát L2PWSM: Promývací rozk L2KPM: Čistící rozk na jehly LRXT: Reakční zkumavky (na jedno použití) L2ZT: 250 tesvacích zkumavek na diluent vzorků (16 100 mm) L2ZC: 250 uzávěrů na tesvací zkumavky na diluent vzorků TMCO: Trojúrovňová vícesložková kontrola LUPCM: Jednoúrovňový kontrolní modul Third Generation Dále potřebujete: Destilovanou nebo deionizovanou vodu; tesvací zkumavky, kontroly. Postup stanovení K sení optimálního výkonu je důležité provádět veškerou pravidelnou údržbu stanovenou v manuálu k analyzárům IMMULITE 2000. V manuálu k analyzárům IMMULITE 2000 najdete postupy: přípravy, nastavení, ředění, adjustace, stanovení vzorků a kontrol. Doporučený interval mezi adjustacemi: 4 týdny. Vzorky ke kontrole kvality: Použijte kontroly nebo směsné vzorky s alespoň dvěmi koncentracemi (vysokou a nízkou). Hodnoty očekávané při zjišťování karcinomu prostaty Při retrospektivním výzkumu na oddělení, které se věnuje zjišťování karcinomu prostaty na jedné klinice, byly odebrány vzorky od 477 mužů stáří 50 let a starších. Z té skupiny bylo 20 (4%) mužů asijského původu, 8 (2%) Američanů afrického původu, 440 (92%) Kavkazanů, 7 (<1%) mělo jinou národnost a 2 (<1%) svou národnost neudali. Všichni ti pacienti rovněž prošli digitálním rektálním vyšetřením (DRE). Z té skupiny byla 52 mužům provedena biopsie kvůli zvýšené koncentraci (> 4,0 ng/ml) a/nebo podezřelému výsledku z DRE. Ta klinická studie přinesla následující výsledky: Počet osob (%) Počet biopsií (%) Počet karcinomů % pozitivní biopsie prostaty Všechny osoby 477 52 18 34,6% > 4,0 85 45 16 35,6% 17,8% 52,9% (22,8%-51,2%) DRE + 54 17 8 47,1% 11,3% 31,5% (25,3%-72,2%) > 4,0 DRE + 25 13 7 53,8% 5,2% 52,0% (26,0%-77,6%) <= 4,0 DRE + 29 4 1 25,0% 6,1% 13,8% (1,3%-75,1%) > 4,0 DRE 60 32 9 28,1% 12,6% 53,3% (15,2%-46,2%) <= 4,0 DRE 363 3 1 33,3% 76,1% 0,8% (0,8%-90,6%) Výzkum prokázal, že stanovení ve spojení s DRE představuje účinnější nástroj zjištění karcinomu prostaty než samotné DRE. Stanovení odhalilo 50% (9/18) karcinomů, které DRE neodhalilo. Zvýšená koncentrace převyšující 4 ng/ml může být důvodem pro datečné vyšetření, i když je výsledek DRE negativní. Ale platí i opačný přístup: osoba s podezřelými výsledky DRE a normálním výsledkem ze stanovení může rovněž potřebovat další vyšetření, prože DRE prokázalo 6% (1/18) karcinomů, které stanovení neodhalilo. Stejný výzkum označil 363 mužů jako asympmatické subjekty. V následující tabulce jsou hodnoty rozložení podle dekády věku těch asympmatických osob, u kterých byly výsledky i DRE negativní a pro jim nebyla dělaná biopsie, a rovněž těch mužů, kteří měli výsledek rakovinové biopsie negativní. Nemůžeme s určistí říct, že žádná z těch osob skutečně neměla žádné onemocnění prostaty. Pro je nutné IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 15

interprevat ty údaje s obezřetností, nakolik je sporné, zda ty osoby skutečně reprezentují normální populaci. V současnosti nemáme žádné údaje, které by potvrdili, že použití referenčního rozmezí na základě věku je spolehlivé a účinné. Rozložení koncentrace n medián 95. percentil Všechny osoby 363 1,02 3,20 věková skupina 50 59 let 157 0,88 2,83 věková skupina 60 69 let 137 1,12 3,15 věková skupina 70 let 69 1,48 3,58 Při výzkumu na čtyřech klinikách bylo odebráno a tesváno 2 618 vzorků od 1 965 pacientů. Následující tabulka přináší rozdělení výsledku stanovení na analyzáru IMMULITE v rámci zmíněného výzkumu. Počet osob/vzorků 0 4 ng/ml 4 10 10 20 20 40 ng/ml ng/ml ng/ml >40 ng/ml Ženy 253/253 100% 0% 0% 0% 0% Zdravé 149/149 100% 0% 0% 0% 0% Nezhoubná onemocnění 28/28 100% 0% 0% 0% 0% Zhoubná onemocnění 76/76 100% 0% 0% 0% 0% Zdraví muži 473/473 99,4% 0,6% 0% 0% 0% Nezhoubná onemocnění 548/548 76,2% 19,3% 3,5% 0,9% 0% BPH 333/333 67,9% 25,8% 5,4% 0,9% 0% Ostatní onemocnění prostaty 66/66 80,3% 18,2% 1,5% 0% 0% Onemocnění jiná než onemocnění prostaty 149/149 93,2% 5,4% 0% 1,3% 0% Zhoubná onemocnění jiné než onemocnění prostaty 312/312 93,0% 6,1% 0,6% 0,3% 0% Počet osob/vzorků 0 4 ng/ml 4 10 10 20 20 40 ng/ml ng/ml ng/ml >40 ng/ml Karcinom prostaty (test jednoho vzorku) 274/274 42,3% 21,2% 13,1% 7,3% 16,1% Karcinom prostaty (opakované testy vzorků) 105/758 54,8% 11,7% 10,7% 7,5% 15,3% Stadium A 17/174 64,9% 9,8% 9,2% 3,5% 12,6% Stadium B 31/200 54,0% 14% 12% 8,5% 11,5% Stadium C 19/102 56,9% 6,9% 7,8% 8,8% 19,6% Stadium D 38/282 48,2% 13,1% 11,7% 8,9% 18,0% Celkem: 1 965/2 618 1 962 275 138 83 160 Uvedené hranice povujte pouze za orientační. Kdá laborař by si měla stanovit svoje vlastní referenční rozmezí. Omezení Koncentrace v séru by neměla být povována za absolutní důkaz přímnosti nebo absence zhoubného onemocnění. 8 Prognóza recidivy zhoubného onemocnění prostaty by se měla zakládat na úplném klinickém hodnocení pacienta, které může rovněž zahrnovat opakované stanovení v séru. Vzorky je třeba odebírat před biopsií, prostatekmií nebo prostatickou masáži. 18 Koncentrace se může měnit následkem hormonální léčby karcinomu prostaty. Pro tedy nízká hladina po léčbě karcinomu prostaty, která zahrnuje i hormonální terapii, nemusí správně odrážet přímnost reziduálního onemocnění nebo recidivy. 25 Ta souprava není určena k časné detekci karcinomu prostaty. Někteří jedinci mají protilátky proti myšímu proteinu, což může ovlivnit imunologické stanovení využívající protilátky získané z myší. Jedná se zejména o vzorky od pacientů, kteří užívali přípravky s myšími monoklonálními protilátkami při diagnóze nebo léčbě. Ty vzorky můžou obsahovat lidské protimyší protilátky (HAMA) a 16 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

výsledky stanovení těch vzorků můžou vykázat chybné výsledky. 22-24 Pro je výsledky těch pacientů nutné vykládat s obezřetností. Heterofilní protilátky v lidském séru můžou reagovat s imunoglobuliny obsenými v komponentech soupravy a způsobit interference s in vitro imunologickým stanovením. [Viz Bosca LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Vzorky pacientů rutinně vystavené kontaktu se zvířaty nebo produkty zvířecího séra můžou vykázat ten typ interference a potenciálně způsobit anomální výsledky. Ty reagencie byly vyvinuty tak, aby bylo riziko interference minimalizováno; nicméně případné interakce mezi ojedinělými séry a komponenty testu se můžou vyskytnout. Pro diagnostické účely by se výsledky ho stanovení měly vždy používat v kombinaci s klinickými zkouškami, zdravotní hisrií pacienta a ostatními nálezy. Znaky medy Reprezentativní výsledky stanovení najdete v části Tabulky a grafy. Výsledky se udávají v ng/ml. (Pokud není uvedeno jinak, všechny výsledky byly získány na vzorcích séra odebraných zkumavek bez gelových bariér nebo přísad podporujících srážlivost.) Kalibrační rozsah: 0,005 20 ng/ml Souprava má návaznost na mezinárodní standard vyrobený s použitím schválených materiálů a měřících procesů. Analytická citlivost: 0,005 ng/ml Funkční citlivost: 0,01 ng/ml, jak bylo kázáno studiemi shrnutými v části Přesnost. (Funkční citlivost je definována jako nejnižší koncentrace měřitelná s 20% variačním koeficientem platným mezi stanoveními.) High-se Hook Effect: Do 112 000 ng/ml žádný. Přesnost: Vzorky byly stanovovány dvojmo v průběhu 20 dní, dva testy denně, celkem 40 testů a 80 replikátů. Střední hodnota V rámci testu Směro datná Variační odchylka koeficient Směro datná odchylka Celkem Variační koeficient 1 0,028 0,002 7,1% 0,003 10,7% 2 3,0 0,11 3,7% 0,20 6,7% 3 8,3 0,25 3,0% 0,57 6,9% Druhá studie zahrnovala směsné vzorky s nízkou koncentrací připravené ze vzorků od pacientů bez přídavků. Střední hodnota V rámci stanovení Směro datná Variační odchylka koeficient Směro datná odchylka Celkem Variační koeficient 1 0,0067 0,00136 20,3% 0,00141 21,0% 2 0,0098 0,00183 18,7% 0,00183 18,7% 3 0,027 0,0020 7,3% 0,0021 7,8% 4 0,050 0,0024 4,8% 0,0028 5,6% 5 0,086 0,0042 4,9% 0,0056 6,5% 6 0,294 0,0129 4,4% 0,0134 4,6% 7 0,430 0,0173 4,0% 0,0183 4,3% 8 0,861 0,0321 3,7% 0,0334 3,9% Profil přesnosti: Založeno na variačních koeficientech v rámci jednoho stanovení ze tří výzkumů hlavní křivky (10 nebo 20 replikátů na jeden vzorek) vedle variačních koeficientů v rámci jednoho stanovení uvedených v tabulce. Čára ve tvaru misky kopíruje přibližnou dráhu těch bodů (prázdné kroužky). Pro srovnání jsou variační koeficienty mezi jednotlivými stanoveními ("celkové"), které jsou uvedené v tabulce, vyznačené jako plné čtverečky. Coefficient of Variation (CV) 20 15 10 5 0 0.01 0.03 0.1 0.3 1.0 3.0 10, ng/ml IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 17

Linearita: Stanovení vzorků bylo provedeno při rozličném ředění. Ředění Naměřená Očekávaná % Naměřená/ Očekávaná 1 8 v 8 0,109 4 v 8 0,054 0,055 98% 2 v 8 0,026 0,027 96% 1 v 8 0,014 0,014 100% 2 8 v 8 1,5 4 v 8 0,73 0,75 97% 2 v 8 0,38 0,38 100% 1 v 8 0,17 0,19 89% 3 8 v 8 6,5 4 v 8 3,3 3,2 101% 2 v 8 1,7 1,6 106% 1 v 8 0,81 0,81 100% 4 8 v 8 12,3 4 v 8 6,1 6,2 98% 2 v 8 3,0 3,1 97% 1 v 8 1,5 1,5 100% 5 8 v 8 17,7 4 v 8 8,8 8,9 99% 2 v 8 4,4 4,4 100% 1 v 8 2,1 2,2 95% Zpětná výtěžnost: Bylo provedeno stanovení vzorků séra s přídavkem tří rozků (10,2 a 46 a 91 ng/ml) v poměru 1:19. % Namě Přidávaný rozk Naměřená Očekávaná řená/ Očeká vaná 1 0,87 A 1,8 1,8 100% B 2,8 2,8 100% C 4,7 5,0 94% 2 1,7 A 2,5 2,6 96% B 3,6 3,6 100% C 5,2 5,8 90% 3 8,3 A 9,0 8,8 102% B 9,6 9,9 97% C 11 12 92% 4 9,1 A 8,9 9,6 93% B 11 11 100% C 12 13 92% 5 16 A 17 17 100% B 18 17 106% C 19 19 100% 6 16 A 17 17 100% B 17 17 106% C 18 19 95% Specificita: Protilátka je silně specifická vůči. Sloučenina Přidané množství % Zkřížená reaktivita AFP 10 000 ng/ml ND CEA 10 ng/ml ND Ferritin 10 000 ng/ml ND HCG 100 000 miu/ml ND PAP 1 000 ng/ml ND Prolaktin 200 ng/ml ND ND: nezjistitelné Bilirubin: Přímnost bilirubinu v koncentracích 200 mg/l nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Hemolýza: Přímnost hemoglobinu v koncentracích 128 mg/dl nemá 18 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)

v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Lipémie: Přímnost triglyceridů v koncentracích 3 000 mg/dl nemá v rámci přesnosti stanovení žádný vliv na výsledky. Srovnání medy: Všechny čtyři neizopové testy byly porovnání pomocí Demingovy regresní analýzy. Použité vzorky spadaly pracovního rozmezí těch stanovení. Následující tabulka přináší výsledky Demingovy regrese, přičemž v sloupcích jsou hodnoty Y, v řádcích hodnoty X. IMMULITE IML IML 3. Generace 3. Generace n 477 474 473 Směrnice Průsečnice Korelační koeficient 0,94 (0,93 0,95) 0,11 ( 0,15 0,07) 0,99 (0,98 1,00) 0,05 (0,02 0,09) 1,08 (1,07 1,10) 0,06 (0,02 0,11) 0,992 0,993 0,991 IMMULITE 2000 n 477 474 473 Směrnice 1,06 (1,05 1,08) 1,06 (1,05 1,08) 1,16 (1,14 1,17) 0,12 0,15 0,18 Průsečnice Korelační koeficient (0,08 0,16) (0,11 0,20) (0,14 0,23) 0,992 0,988 0,990 IML IML 3. Generace 3. Generace IMMULITE 3. Generace n 474 474 472 Směrnice 1,01 (1,00 1,03) 0,94 (0,93 0,96) 1,10 (1,09 1,11) 0,06 0,15 0,00 Průsečnice Korelační koeficient ( 0,09 0,02) ( 0,19 0,10) ( 0,05 0,05) 0,993 0,988 0,990 IMMULITE 2000 3. Generace n 473 473 472 Směrnice 0,92 (0,91 0,94) 0,86 (0,85 0,87) 0,91 (0,90 0,92) 0,06 0,16 0,00 Průsečnice Korelační koeficient ( 0,10 0,02) ( 0,20 0,12) ( 0,04 0,04) 0,991 0,990 0,990 Následující graf přináší srovnání stanovení 3. generace na analyzárech IMMULITE 2000 a analyzáru IMMULITE na 472 vzorcích od pacientů. (Koncentrační rozsah: nezjistitelné množství přibližně 20 ng/ml.) Podle lineární regrese: ( 3. generace ) = 1,10 (IML 3. generace ) 0,00 ng/ml r = 0,990 Střední hodnoty: 2,34 ng/ml () 2,16 ng/ml (IML) IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29) 19

IMMULITE 2000 3rd G en 20 15 10 5 0 y = 1.0994x - 0.0003 0 5 10 15 20 IMMUL ITE 3rd Ge n Technická Podpora Pro technickou podporu kontaktujte vašeho národního distribura. www.siemens.com/diagnostics Systém kontroly jakosti společnosti Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. je certifikovaný podle ISO 13485:2003. Ελληνικά IMMULITE 2000 Τρίτης γενιάς Ενδεδειγμένη χρήση: Για εργαστηριακή διαγνωστική χρήση τα συστήματα αναλυτών IMMULITE 2000 για την ποσοτική μέτρηση του προστατικού ειδικού αντιγόνου () στον ανθρώπινο ορό, ως βοήθημα για την ανίχνευση του καρκίνου του προστάτη όταν χρησιμοποιείται σε συνδυασμό την πρωκτική εξέταση (DRE) σε άνδρες ηλικίας 50 ετών και άνω. Η μέθοδος συνιστάται περαιτέρω σαν προσθετική ανάλυση για να βοηθήσει στη διαχείριση της κατάστασης των ασθενών καρκίνο του προστάτη. Αριθμοί καταλόγου: L2KUP2 (200 αναλύσεις) L2KUP6 (600 αναλύσεις) Κωδικός ανάλυσης: sps Χρώμα: Κόκκινο Η συγκέντρωση του σε ένα δεδομένο δείγμα που προσδιορίζεται διαφορετικές θόδους μπορεί να διαφέρει εξαιτίας των διαφορών των αναλυτικών θόδων και της ακρίβειας των αντιδραστηρίων. Τα αποτελέσματα που αναφέρονται από το εργαστήριο στο γιατρό πρέπει να περιλαμβάνουν και το ποια μέθοδος χρησιμοποιήθηκε. Οι τιμές που αποκτώνται διαφορετικές αναλύσεις δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται κατ εναλλαγήν. Πριν αλλάξει θοδολογίες, το εργαστήριο πρέπει να επιβεβαιώσει τις βασικές τιμές για τους ασθενείς που ελέγχονται Περίληψη και Επεξήγηση Το προστατοειδικό αντιγόνο (), πρωτοταυτοποιήθηκε και χαρακτηρίστηκε από τους Wang, et al το 1979, σαν ένα μονορές γλυκοπρωτεΐνης δράση πρωτεάσης. 1,2 Το έχει ισοηλεκτρικό σηίο περίπου 6.9 και μοριακό βάρος περίπου 33-34 kilodalns, περιέχει περίπου 10% υδατάνθρακα κατά βάρος. 1,2 Η αλληλουχία των αμινοξέων του έχει αναφερθεί 3 και το γονίδιο κλωνοποιήθηκε. 4 Το είναι βιοχημικά και ανοσολογικά διακριτό από την PAP (προστατική όξινο φωσφατάση) και δεν εμφανίζει ενζυμική δραστηριότητα φωσφατάσης. 5 Το εντοπίζεται στο κυτταρόπλασμα του επιθηλίου του αγωγού του προστάτη και τις εκκρίσεις της ουρήθρας. 6 Επειδή το είναι μια εκκρινόνη πρωτεΐνη του προστάτη, μπορεί να ανακτηθεί και να καθαριστεί και από τον προστατικό ιστό και από σπέρμα. 7 Το βρέθηκε να σχετίζεται αποκλειστικά τον προστατικό ιστό 17 και αυξημένο στον ορό βρέθηκε σε ασθενείς καρκίνο του προστάτη, καλοήθη υπερτροφία του προστάτη και καταστάσεις φλεγμονών παρακείνων γεννητικών ιστών, αλλά όχι σε υγιείς άνδρες, άνδρες όχι προστατικό καρκίνωμα, υγιείς γυναίκες ή γυναίκες καρκίνο. 5,8 Η μέτρηση του στον ορό από μόνη της δεν είναι κατάλληλη για τον έλεγχο του καρκίνου του προστάτη, επειδή αυξημένες συγκεντρώσεις παρατηρούνται επίσης και σε ασθενείς καλοήθη υπερπλασία του προστάτη (BPH) 8 ούτε συνιστάται και σαν οδηγός 20 IMMULITE 2000 Third Generation (PIEL2KUP-7 {24}, 2009-07-29)