2016/09/29 A93A01362AEL A11A01721 103 ml 10 x 10 ml Pentra C200 Διαγνωστικό αντιδραστήριο για τον in vitro ποσοτικό προσδιορισμό του γαλακτικού οξέος στο πλάσμα με χρωματομετρία. QUAL-QA-TEMP-0846 Rev.9 Έκδοση εφαρμογής Πλάσμα: Lact 1.xx Προοριζόμενη χρήση Το αντιδραστήριο προορίζεται για τον διαγνωστικό in vitro ποσοτικό προσδιορισμό του γαλακτικού οξέος στο πλάσμα με χρωματομετρία. Η μέτρηση του γαλακτικού οξέος για αξιολόγηση της οξεοβασικής κατάστασης χρησιμοποιείται για τη διάγνωση και τη θεραπεία της γαλακτικής οξέωσης (μη φυσιολογικά υψηλή οξύτητα του αίματος). Κλινικό ενδιαφέρον (1) Το γαλακτικό οξύ είναι το τελικό προϊόν της αναερόβιας διάσπασης της γλυκόζης και αντιπροσωπεύει την κύρια πηγή ενέργειας για ορισμένους ιστούς. Θεωρείται ως ο καλύτερος δείκτης της κατάστασης οξυγόνωσης των ιστών. Χρησιμοποιείται κυρίως για την ανάνηψη στη θεραπεία καταστάσεων αποπληξίας, είτε αυτές είναι υπογκαιμικές, τοξικομολυσματικές ή καρδιογενείς καθώς και για τη θεραπεία νεογνικής αναπνευστικής οξέωσης. Ο παρών προσδιορισμός χρησιμοποιείται επίσης σε φαρμακευτικά παρασκευάσματα αθλητών στην αθληϊατρική για τη βελτίωση της απόδοσης των αθλητών. Μέθοδος (2, 3, 4) Ενζυματική χρωματομετρική μέθοδος. Μέθοδος Trinder. Το γαλακτικό οξύ είναι ένας ενδιάμεσος μεταβολίτης της γλυκόλυσης που συμμετέχει στη διατήρηση της τιμής ph του αίματος. Η γαλακτική οξειδάση ενεργοποιεί την απελευθέρωση υπεροξειδίου του υδρογόνου, το οποίο αντιδρά με 4-αμινοαντιπυρίνη και με ESPAS σε ένα έγχρωμο σύμπλεγμα υπό την παρουσία περοξειδάσης. Η ένταση του χρώματος είναι ανάλογη προς την ποσότητα γαλακτικού οξέος του δείγματος. Γαλακτική οξειδάση Γαλακτικό οξύ + O 2 Πυροσταφιλικό οξύ + H 2 O 2 Υπεροξειδάση 2H 2 O 2 + 4AAP + ESPAS Κινονιμίνη + 4H 2 O (4 AAP = 4-αμινοαντιπυρίνη, ESPAS = N-αιθυλ-Nσουλφοπροπυλ-m-ανισιδίνη) Αντιδραστήρια To είναι λυοφιλιωμένο. Αντιδραστήριο 1: Φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα ph 7,50 ESPAS 100 mmol/l 1 mmol/l Αζίδιο του νατρίου 0,05% Υδροξείδιο του νατρίου 0,0009% Αντιδραστήριο 2: Γαλακτική οξειδάση Υπεροξειδάση 4-αμινοαντιπυρίνη 450 U/L Βόεια λευκωματίνη 0,3% 2000 U/L 0,40 mmol/l To πρέπει να χρησιμοποιείται σύμφωνα με το παρόν φυλλάδιο αντιδραστηρίου. Εάν χρησιμοποιηθεί διαφορετικά, ο κατασκευαστής δεν μπορεί να εγγυηθεί την απόδοσή του. 1 / 5
Χειρισμός σε Κασέτα 1. Αραιώστε το περιεχόμενο του αντιδραστηρίου 2 σε 10 ml του αντιδραστηρίου 1, όπως απεικονίζεται στο φιαλίδιο του αντιδραστηρίου 2. 2. Επανατοποθετήστε το πώμα του φιαλιδίου και ομοιογενοποιήστε το μείγμα με ελαφριά αναστροφή. Το διάλυμα θα είναι έτοιμο για χρήση ύστερα από 15 λεπτά. 3. Για την αναγνώριση της κασέτας χρησιμοποιήστε τα αυτοκόλλητα για τα αντιδραστήρια με το ραβδοκώδικα (604). 4. Μεταφέρετε το απαιτούμενο αντιδραστήριο για τις αναλύσεις μίας ημέρας στο διαμέρισμα 1 (χωρητικότητα 30 ml) της κασέτας 30/10 (βλ. διάγραμμα παρακάτω). Το διαμέρισμα 2 της κασέτας δεν θα χρησιμοποιηθεί. ομοσπονδιακούς, πολιτειακούς και τοπικούς κανονισμούς. Τα αποτελέσματα πρέπει να βρίσκονται εντός των καθορισμένων ορίων εμπιστοσύνης. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθορίσει τη διαδικασία που θα ακολουθείται όταν τα αποτελέσματα υπερβαίνουν τα καθορισμένα όρια εμπιστοσύνης. Απαιτούμενα αλλά μη παρεχόμενα υλικά Αυτόματος βιοχημικός αναλυτής: Pentra C200 Βαθμονομητής: Multical, Κωδ.A11A01652 Υλικά ελέγχου: N Control, Κωδ.A11A01653, και P Control, Κωδ. A11A01654 Συνήθης εργαστηριακός εξοπλισμός. Δείγμα (5) Πλάσμα σε ηπαρίνη λιθίου. 5. Εάν έχει σχηματιστεί αφρός, αφαιρέστε τον με μία πλαστική πιπέτα. 6. Τοποθετήστε την κασέτα αντιδραστηρίων στο θάλαμο ψύξης αντιδραστηρίων του Pentra C200. Βαθμονομητής Για τη βαθμονόμηση χρησιμοποιήστε: Multical, Κωδ. A11A01652 (δεν περιλαμβάνεται) 10 x 3 ml (λυοφιλιωμένο) Ορός ελέγχου Για τον εσωτερικό ποιοτικό έλεγχο, χρησιμοποιήστε: N Control, κωδ. A11A01653 (δεν περιλαμβάνεται) 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) P Control, κωδ. A11A01654 (δεν περιλαμβάνεται) 10 x 5 ml (λυοφιλιωμένο) Κάθε ορός ελέγχου πρέπει να υποβάλλεται σε δοκιμασία καθημερινά και/ή μετά από βαθμονόμηση. Η συχνότητα ανάλυσης ορών ελέγχου και τα διαστήματα εμπιστοσύνης πρέπει να ανταποκρίνονται στους κανονισμούς του εκάστοτε εργαστηρίου και στις οδηγίες που ισχύουν στη συγκεκριμένη χώρα. Για την εξέταση υλικών ποιοτικού ελέγχου πρέπει να ακολουθείτε τους Άλλα αντιπηκτικά εκτός από τα αναγραφόμενα δεν έχουν αξιολογηθεί από την HORIBA Medical και συνεπώς δεν συνιστάται η χρήση τους στην ανάλυση αυτή. Σταθερότητα: Στους 20-25 C: 3 ημέρες Στους 4-8 C: 3 ημέρες Στους -20 C: 3 ημέρες Εύρος τιμών αναφοράς (6) Κάθε εργαστήριο πρέπει να καθιερώνει το δικό του εύρος φυσιολογικών τιμών. Οι τιμές που αναφέρονται εδώ χρησιμοποιούνται ως ενδεικτικές μόνο. 0,50-2,20 mmol/l (4,5-20 mg/dl). Φύλαξη και σταθερότητα Τα αντιδραστήρια, σε φιαλίδια που δεν έχουν ανοιχτεί, παραμένουν σταθερά μέχρι την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στην ετικέτα εφόσον φυλάσσονται στους 2-8 C. Αφού ανασυσταθεί, το παραμένει σταθερό για: 8 ώρες σε θερμοκρασία 20-25 C 7 ημέρες σε θερμοκρασία 2-8 C 2 / 5
Διαχείριση Αποβλήτων Ανατρέξτε στις κατά τόπους νομικές απαιτήσεις. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει λιγότερο από 0,1% αζίδιο του νατρίου ως συντηρητικό. Το αζίδιο του νατρίου ενδέχεται να αντιδράσει με μόλυβδο και χαλκό σχηματίζοντας εκρηκτικά αζίδια μετάλλων. Γενικές προφυλάξεις Το αντιδραστήριο αυτό προορίζεται μόνο για επαγγελματική διαγνωστική χρήση in vitro. Για προδιαγραφές χρήσης μόνο. Το αντιδραστήριο αυτό ταξινομείται ως μη επικίνδυνο σύμφωνα με τον κανονισμό αρ.1272/2008 (EC). Αποφύγετε οποιαδήποτε επαφή ανάμεσα στο αντιδραστήριο και το δέρμα, ώστε να αποφευχθεί τυχόν μόλυνση από το γαλακτικό οξύ που περιέχεται στον ιδρώτα. Αποφύγετε την κατάποση. Αποφύγετε την επαφή με το δέρμα και τις βλεννογόνους. Λαμβάνετε τις τυπικές εργαστηριακές προφυλάξεις ασφαλούς χρήσης. Τα φιαλίδια αντιδραστηρίων είναι μίας χρήσης και πρέπει να απορρίπτονται σύμφωνα με τις κατά τόπους νομικές διατάξεις. Παρακαλούμε να ανατρέξετε στο Δελτίο Δεδομένων Ασφαλείας Προϊόντος που αφορά το αντιδραστήριο. Μη χρησιμοποιείτε το προϊόν εάν υπάρχει εμφανής ένδειξη βιολογικής, χημικής ή φυσικής φθοράς. Είναι ευθύνη των χρηστών να ελέγξουν εάν το έγγραφο αυτό αφορά το αντιδραστήριο που χρησιμοποιείται. Απόδοση στον Pentra C200 Τα χαρακτηριστικά απόδοσης που αναγράφονται παρακάτω ελήφθησαν από τον αναλυτή Pentra C200. Αριθμός εξετάσεων: περίπου 260 εξετάσεις Σταθερότητα αντιδραστηρίου μετά την τοποθέτηση στον αναλυτή: Αφού ανοιχθεί, η κασέτα αντιδραστηρίου που έχει τοποθετηθεί στο θάλαμο ψύξης του Pentra C200 παραμένει σταθερή για 7 ημέρες. Όγκος δείγματος: 3,0 µl/ανάλυση Όριο ποσοτικοποίησης: Το όριο ποσοτικοποίησης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (7) και ισούται με 0,03 mmol/l (0,27 mg/dl). Όριο ανίχνευσης: Το όριο ανίχνευσης καθορίζεται σύμφωνα με το πρωτόκολλο EP17-A του CLSI (NCCLS) (7) και ισούται με 0,0067 mmol/l (0,06 mg/dl). Ακρίβεια και ορθότητα: Επαναληψιμότητα (ακρίβεια εντός της ανάλυσης) 5 δείγματα χαμηλής, μέσης και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύθηκαν 20 φορές, σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου Valtec (8). ελέγχου 1 ελέγχου 2 mmol/l Μέση τιμή CV % mg/dl 1,57 14,18 2,13 3,74 33,73 0,53 Δείγμα 1 0,15 1,39 4,42 Δείγμα 2 1,06 9,58 1,30 Δείγμα 3 3,03 27,28 1,35 Δείγμα 4 7,88 71,04 1,28 Δείγμα 5 11,81 106,45 1,80 Αναπαραγωγιμότητα (συνολική ακρίβεια) 5 δείγματα χαμηλής, μέτριας και υψηλής συγκέντρωσης και 2 οροί ελέγχου (μάρτυρες) αναλύονταν εις διπλούν επί 20 ημέρες (2 σειρές ημερησίως) σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP5-A του CLSI (NCCLS) (9). ελέγχου 1 ελέγχου 2 mmol/l Μέση τιμή CV % mg/dl 1,59 14,31 1,69 3,65 32,91 1,99 Δείγμα 1 0,17 1,50 3,29 Δείγμα 2 1,02 9,22 2,10 Δείγμα 3 3,02 27,25 2,48 Δείγμα 4 8,16 73,56 1,94 Δείγμα 5 12,16 109,56 1,62 Εύρος μέτρησης: Η δοκιμασία επιβεβαίωσε εύρος μέτρησης από 0,03 έως 13 mmol/l (0,27 έως 117,13 mg/dl), με αυτόματη μεταγενέστερη αραίωση έως και 39 mmol/l (351,39 mg/dl). 3 / 5
Η γραμμικότητα του αντιδραστηρίου αξιολογήθηκε έως τα 13 mmol/l (117,13 mg/dl), σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP6-A του CLSI (NCCLS) (10). Συσχέτιση Δείγματα ασθενών: Ορού Αριθμός δειγμάτων ασθενών: 122 Τα δείγματα συσχετίστηκαν με αντιδραστήριο του εμπορίου που χρησιμοποιήθηκε ως υλικό αναφοράς σύμφωνα με τις υποδείξεις του πρωτοκόλλου EP9-A3 του CLSI (NCCLS) (11). Οι τιμές κυμάνθηκαν από 1,19 έως 11,54 mmol/l (10,72 έως 103,97 mg/dl). Η εξίσωση της αλλομετρικής γραμμής που προέκυψε με τη διαδικασία παλινδρόμησης Passing-Bablock (12) είναι: Y = 0,99 X + 0,09 (mmol/l) Y = 0,99 X + 0,81 (mg/dl) με συντελεστή συσχέτισης r 2 = 0,9947. Αλληλεπιδράσεις: Αιμοσφαιρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 290 µmol/l (500 mg/dl). Τριγλυκερίδια: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση για επίπεδα Intralipid (για προσομοίωση λιπαιμίας) έως και 5,76 mmol/l (504 mg/dl). Ολική χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 497 µmol/l (29 mg/dl). Άμεση χολερυθρίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 236 µmol/l (13,8 mg/dl). Ασκορβικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 340 µmol/l (5,98 mg/dl). Ιβουπροφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 2,43 mmol/l (50,1 mg/dl). Ακεταμινοφαίνη: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 1324 µmol/l (20 mg/dl). Ακετυλοσαλικυλικό οξύ: Δεν παρατηρείται σημαντική επίδραση έως τα 3,62 mmol/l (65 mg/dl). Ο Young έχει δημοσιεύσει έναν κατάλογο με φάρμακα και προαναλυτικές μεταβλητές που είναι γνωστό ότι επηρεάζουν τη μεθοδολογία αυτή (13, 14). Σταθερότητα βαθμονόμησης: Το αντιδραστήριο βαθμονομείται την Ημέρα 0. Η βαθμονόμηση ελέγχεται με ανάλυση 2 δειγμάτων ορού ελέγχου. Η σταθερότητα βαθμονόμησης είναι 7 ημέρες. Σημείωση: Συνιστάται αναβαθμονόμηση όταν αλλάζουν οι αριθμοί παρτίδας των αντιδραστηρίων καθώς και όταν τα αποτελέσματα του ποιοτικού ελέγχου βρίσκονται εκτός του προκαθορισμένου εύρους τιμών. Έκδοση πρωτοκόλλου εφαρμογής: 1.xx Συντελεστής μετατροπής: mmol/l x 9,01 = mg/dl Βιβλιογραφία 1. Thomas L. Lactate. In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1 st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, (1998): 160-166. 2. Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor. Ann. Clin. Biochem. (1969) 6: 24. 3. Barhan D, Trinder P. An improved colour reagent for the determination of blood glucose by the oxidase system. Analyst (1972) 97: 142. 4. Olson GF, Optimal Conditions for the Enzymatic Determination of L-, Clin. Chem. (1962) Feb, 8: 1-10. 5. Guder WG, Zawta B. The Quality of Diagnostics Samples. Samples: From the Patient to the Laboratory. 1 st Ed. Guder WG, Narayanan S, Zawta B. (WHILEY-VCH, Darmstadt, Germany) (2001): 43. 6. Toffaletti J, Hammes ME, Gray R, Lineberry B, Abrams B. Lactate measured in diluted and undiluted whole blood and plasma: comparison of methods and effect on hematocrit. Clin. Chem. (1992) 38: 2430-2434. 7. Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP17-A (2004) 24 (34). 8. Vassault A, Grafmeyer D, Naudin C et al. Protocole de validation de techniques (document B). Ann. Biol. Clin. (1986) 44: 686-745. 9. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP5-A (1999) 19 (2). 10. Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods. Approved Guideline, CLSI (NCCLS) document EP6-A (2003) 23 (16). 11. Measurement Procedure Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples. Approved Guideline, 3 rd ed., CLSI (NCCLS) document EP9-A3 (2013) 33 (11). 4 / 5
12. Passing H, Bablock W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements from two different analytical methods. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. (1983) 21: 709-20. 13. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 4 th Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 143-163. 14. Young DS. Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. 2 nd Edition, Washington, DC, AACC Press (1997) 3: 120-132. 5 / 5