ΔIAΛEΞΗ 8 ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΠΟΙΚΙΛΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΒΑΚΤΗΡΙΑ

Transcript

1 ΔIAΛEΞΗ 8 ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΓΕΝΕΤΙΚΗ ΠΟΙΚΙΛΟΤΗΤΑ ΣΤΑ ΒΑΚΤΗΡΙΑ

2 Ο ΔΙΠΛΑΣΙΑΣΜΟΣ ΤΩΝ ΒΑΚΤΗΡΙΑΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ χρωµόσωµα

3 ΑΝΑΠΤΥΞΗ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ ΣΕ ΣΤΕΡΕΑ ΘΡΕΠΤΙΚΑ ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΑΡΙΘΜΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ Αραίωση 1:100 Αραίωση 1:100 Αραίωση 1: ml (50 µl) επιστρώνεται στην επιφάνεια στερεοποιηµένου άγαρ που περιέχει και θρεπτικό υλικό σε ένα τρυβλίο Petri 10 9 E. coli ανά ml 10 3 E. coli ανά ml Επώαση στους 37 ο C για ~12 ώρες ~10 6 κύτταρα ανά αποικία ~50 αποικίες ανά τρυβλίο

4 ΜΕΤΑΛΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΦΥΣΙΚΗ ΕΠΙΛΟΓΗ ΣΕ ΕΝΑ ΠΛΗΘΥΣΜΟ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ 50 µl (1 σταγόνα) Επώαση στους 37 ο C για ~12 ώρες 10 9 E. coli ανα ml αναπτύχθηκαν από ένα και µόνο κύτταρο που ήταν ευαίσθητο στην ριφαµπικίνη Θρεπτικό υλικό που περιέχει ριφαµπικίνη 10 9 E. coli που είναι ανθεκτικά στην ριφαµπικίνη

5 TA ΒΑΚΤΗΡΙΑΚΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΖΕΥΓΑΡΩΝΟΥΝ

6 ΣΧΗΜΑΤΙΚΗ ΑΠΟΔΟΣΗ ΤΗΣ ΒΑΚΤΗΡΙΑΚΗΣ ΣΥΖΕΥΞΗΣ ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΟΤΗΣ χρωµόσωµα ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΟΤΗΣ Πλασµίδιο F Φυλετικό ινίδιο γέφυρα ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΕΚΤΗΣ Σχηµατισµός γέφυρας Αντιγραφή & µεταφορά του πλασµιδίου Διαχωρισµός των κυττάρων ΝΕΟ ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΟΤΗΣ

7 ΣΥΝΘΕΣΗ & ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΤΟΥ DNA ΤΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ F ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΟΤΗΣ Πλασµίδιο F ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΕΚΤΗΣ ΣΠΑΣΙΜΟ ΤΟΥ ΕΝΟΣ ΚΛΩΝΟΥ ΤΟΥ DNA ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΤΟΥ ΕΝΟΣ ΚΛΩΝΟΥ ΣΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΕΚΤΗ ΚΑΙ ΣΥΝΘΕΣΗ DNA ΣΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΟΤΗ ΣΥΝΘΕΣΗ DNA ΚΑΙ ΣΤΟ ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΕΚΤΗ ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΣΥΝΘΕΣΗΣ ΤΟΥ DNA. ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΕΚΤΗΣ

8 ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΓΟΝΙΔΙΩΝ ΤΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΑΚΟΥ ΧΡΩΜΟΣΩΜΑΤΟΣ ΜΕΣΩ ΤΟΥ ΠΛΑΣΜΙΔΙΟΥ F Κύτταρο E. coli ανθεκτικό στη ριφαµπικίνη (rif R ) που φέρει ένα πλασµίδιο F Πλασµίδιο F rif R Ενσωµάτωση του πλασµιδίου F στο βακτηριακό χρωµόσωµα rif R Σύξευξη µε ένα κύτταρο E. coli ευαίσθητο σε ριφαµπικίνη και µεταφορά του γονιδίου αντοχής στη ριφαµπικίνη ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΟΤΗΣ rif R ΚΥΤΤΑΡΟ ΔΕΚΤΗΣ

9 ΜΕΤΑΜΟΡΦΩΣΗ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ Θραύσµα DNA Κύτταρο δέκτης ΛΥΣΗ ΚΑΙ ΚΑΤΑΤΜΗΣΗ ΤΟΥ DNA ΠΡΟΣΛΗΨΗ «ΓΥΜΝΟΥ» ΜΟΡΙΟΥ DNA

10 ΟΜΟΛΟΓΟΣ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΟΣ Σηµείο επιχιασµού Δύο οµόλογες δίκλωνες έλικες DNA Μόρια DNA που έχουν επιχιασθεί

11 Ο ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΔΙΑΣΤΑΥΡΟΥΜΕΝΗΣ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΚΛΩΝΩΝ ΚΑΤΑ ΤΟΝ ΟΜΟΛΟΓΟ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΟ Δύο οµόλογες δίκλωνες έλικες DNA Δύο µόρια DNA που συνδέονται µε µια δοµή ανταλλαγής διασταυρουµενων κλώνων ΕΓΚΟΠΗ ΚΑΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗ ΚΛΩΝΩΝ ΕΓΚΟΠΗ ΚΑΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗ ΚΛΩΝΩΝ ΣΥΝΔΕΣΗ ΚΛΩΝΩΝ ΠΟΥ ΕΧΟΥΝ ΥΠΟΣΤΕΙ ΕΓΚΟΠΗ

12 ΜΟΝΤΕΛΟ ΟΜΟΛΟΓΟΥ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΟΥ

13 ΜΟΝΤΕΛΟ ΟΜΟΛΟΓΟΥ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΟΥ

14 ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΟΜΙΚΡΟΓΡΑΦΙΑ ΜΙΑΣ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΔΙΑΣΤΑΥΡΟΥΜΕΝΩΝ ΚΛΩΝΩΝ - ΣΥΝΔΕΣΗ ΤΟΥ HOLLIDAY

15 Ο ΟΜΟΛΟΓΟΣ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΟΣ ΟΔΗΓΕΙ ΕΙΤΕ ΣΕ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗ DNA Η ΣΕ ΣΥΝΔΥΑΣΜΟ ΔΥΟ ΚΥΚΛΙΚΩΝ ΜΟΡΙΩΝ DNA ΣΕ ΕΝΑ

16 Ο ΚΥΚΛΟΣ ΖΩΗΣ ΕΝΟΣ ΥΠΟΘΕΤΙΚΟΥ ΙΟΥ

17 Ο ΚΥΚΛΟΣ ΖΩΗΣ ΤΟΥ ΒΑΚΤΗΡΙΟΦΑΓΟΥ λ

18 ΜΕΤΑΦΟΡΑ ΤΟΥ DNA ΑΠΟ ΕΝΑ ΒΑΚΤΗΡΙΟ Σ ΕΝΑ ΑΛΛΟ ΜΕ ΜΕΤΑΒΙΒΑΣΗ χρωµόσωµα Ελεύθερα σωµατίδια του ιού που φέρουν και βακτηριακό DNA Ενσωµατωµένο DNA του φάγου λ ΕΠΑΓΩΓΗ EΣΦΑΛΜΕΝΗ ΕΚΤΟΜΗ ΤΟΥ ΙΙΚΟΥ DNA ΑΝΤΙΓΡΑΦΗ ΤΟΥ ΙΟΥ, ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ ΚΑΙΚΑΙ ΛΥΣΗ ΤΟΥ ΚΥΤΤΑΡΟΥ Ο ΙΟΣ ΜΟΛΥΝΕΙ ΕΝΑ ΝΕΟ ΚΥΤΤΑΡΟ- ΞΕΝΙΣΤΗ

19 ΤΡΑΝΣΠΟΖΟΝΙΑ

20 ΤΡΙΑ ΕΙΔΗ ΤΡΑΝΣΠΟΖΟΝΙΩΝ ΑΠΟ ΤΑ ΠΟΛΛΑ ΠΟΥ ΥΠΑΡΧΟΥΝ ΣΤΑ ΒΑΚΤΗΡΙΑ

21 ΔΥΟ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΙ ΜΕ ΤΟΥΣ ΟΠΟΙΟΥΣ ΜΕΤΑΤΙΘΕΝΤΑΙ ΤΑ ΤΡΑΝΣΠΟΖΟΝΙΑ - 1

22 ΔΥΟ ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΙ ΜΕ ΤΟΥΣ ΟΠΟΙΟΥΣ ΜΕΤΑΤΙΘΕΝΤΑΙ ΤΑ ΤΡΑΝΣΠΟΖΟΝΙΑ - 1

23 ΜΗΧΑΝΙΣΜΟΣ ΜΕΤΑΘΕΣΗΣ ΕΝΟΣ ΤΡΑΝΣΠΟΖΟΝΙΟΥ