BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate)

Transcript

1 ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA Αναθ.: Sep 2011 BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖONTAI Το BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο / Εντερικό άγαρ Hektoen (διπλό τρυβλίο)) χρησιμοποιείται για την απομόνωση των Salmonella και Shigella από δείγματα ανθρώπινων κοπράνων. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Το άγαρ DCLS, τροποποιημένο είναι μια τροποποίηση του υλικού δεσοξυχολικού κιτρικού άγαρ που περιγράφει ο Leifson. 1 Κολοβακτηριδιόμορφοι οργανισμοί, ικανοί για ζύμωση λακτόζης ή σακχαρόζης, γενικά αναστέλλονται. Τα Gram θετικά βακτήρια καταστέλλονται. Κατά τη μελέτη του υλικού Endo, οι Holt-Harris και Teague χρησιμοποίησαν λακτόζη και σακχαρόζη στην ενός θρεπτικού άγαρ που περιείχε κυανό του μεθυλενίου και ηωσίνη. Ορισμένα κολοβακτηριοειδή ζυμώνουν τη σακχαρόζη πιο εύκολα από τη λακτόζη. 2 Η προσθήκη σακχαρόζης επιτρέπει στους μη παθογόνους οργανισμούς που ζυμώνουν τη σακχαρόζη να παράγουν ρόδινες-ερυθρές (ροζ) αποικίες, οι οποίες αναγνωρίζονται εύκολα, μειώνοντας τον αριθμό των ψευδώς θετικών αντιδράσεων. Υπάρχουν αρκετές τροποποιήσεις της αρχική σύνθεσης του άγαρ DCLS. 3,4 Η σύνθεση αυτού του υλικού περιέχει περισσότερη λακτόζη και σακχαρόζη και λιγότερο κιτρικό και συνεπώς υποστηρίζει την του Shigella ελαφρώς καλύτερα από το κανονικό άγαρ DCLS. Επιπλέον, επιτρέπει την ανίχνευση του Yersinia enterocolitica. Στο άγαρ DCLS, τροποποιημένο, το εκχύλισμα κρέατος και οι πεπτόνες παρέχουν άζωτο και το εκχύλισμα ζυμομυκήτων παρέχει βιταμίνες. Η λακτόζη και η σακχαρόζη είναι ζυμώσιμοι υδατάνθρακες που χρησιμοποιούνται από πολλά μη παθογόνα Gram αρνητικά ραβδία, όπως το Escherichia coli, αλλά όχι από τα Salmonella και Shigella. Το κιτρικό νάτριο, το θειοθειικό νάτριο και το δεσοξυχολικό νάτριο είναι επιλεκτικοί παράγοντες. Το ουδέτερο ερυθρό είναι ο δείκτης ph. Το εντερικό άγαρ Hektoen (Hektoen Enteric Agar (HEA)) αναπτύχθηκε το 1967 από τους King και Metzger του Ινστιτούτου Hektoen προκειμένου να βελτιωθεί η απομόνωση των οργανισμών Shigella και Salmonella σε σύγκριση με άλλα υλικά που χρησιμοποιούνταν συχνά εκείνη την εποχή. 5 Το υλικό αυτό θεωρείται μετρίως επιλεκτικό και είναι ιδιαίτερα χρήσιμο στην απομόνωση ειδών Shigella. Η παρούσα σύνθεση διαφέρει από τη σύνθεση του αρχικού υλικού γιατί έχει εξαλειφθεί το δεσοξυχολικό νάτριο και έχει μειωθεί η συγκέντρωση χολικών αλάτων. Επιπλέον, η συγκέντρωση πεπτόνης αυξήθηκε, προκειμένου να αντισταθμιστούν οι ανασταλτικές επιπτώσεις των χολικών αλάτων. 3 Τα χολικά άλατα καθιστούν αυτό το υλικό ένα επιλεκτικό υλικό που αναστέλλει Gram θετικούς οργανισμούς και μειώνει την ορισμένων Gram αρνητικών βακτηρίων πλην των ειδών Salmonella και Shigella. Η λακτόζη, η σακχαρόζη και η σαλικίνη περιλαμβάνονται για βέλτιστη διαφοροποίηση σύμφωνα με το χρώμα των αποικιών και του παρακείμενου στις αποικίες υλικού. Τα είδη Salmonella και Shigella δεν ζυμώνουν αυτές τις ενώσεις άνθρακα και επομένως δεν οδηγούν σε μεταβολή του χρώματος του συστήματος δείκτη ph, ενώ οι οργανισμοί που ζυμώνουν μία ή αρκετές από αυτές τις ενώσεις σε οξέα, π.χ. E. coli, προκαλούν μεταβολή του χρώματος σε κίτρινο, πορτοκαλί ή ερυθροκίτρινο. Το κιτρικό σιδηρο(ιιι)αμμώνιο και το θειοθειικό νάτριο που περιέχονται στο υλικό επιτρέπουν την ανίχνευση παραγωγής υδροθείου από τον οργανισμό Salmonella. Το σύστημα δείκτη ph αποτελείται από όξινη φουξίνη και κυανό της βρωμοθυμόλης. Αυτή η σύνθεση συνιστάται ως ένα από τα πολλά υλικά καλλιέργειας επίστρωσης για την καλλιέργεια των Enterobacteriaceae από δείγματα κοπράνων. 6-8 Το BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο / Εντερικό άγαρ Hektoen BD (διπλό τρυβλίο)) είναι ένας συνδυασμός δύο επιλεκτικών διαφορικών υλικών για την απομόνωση των Salmonella και Shigella από δείγματα ανθρώπινων κοπράνων. PA

2 ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο / Εντερικό άγαρ Hektoen BD (διπλό τρυβλίο)) Τύποι* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού DCLS Agar, Modified Hektoen Enteric Agar Πεπτόνη κρέατος (παγκρεατική) 5,0 g Πεπτικό αφομοίωμα ζωικού ιστού 12,0 g Εκχύλισμα ζυμομυκήτων 2,5 Εκχύλισμα ζυμομυκήτων 3,0 Εκχύλισμα κρέατος 2,5 Χολικά άλατα 9,0 Λακτόζη 10,0 Λακτόζη 12,0 Σακχαρόζη 10,0 Σακχαρόζη 12,0 Κιτρικό σιδηρoαμμώνιο 1,0 Σαλικίνη 2,0 Δεσοξυχολικό νάτριο 2,5 Χλωριούχο νάτριο 5,0 Θειοθειικό νάτριο 5,0 Θειοθειικό νάτριο 5,0 Κιτρικό νάτριο 1,0 Κιτρικό σιδηρoαμμώνιο 1,5 Ουδέτερο ερυθρό 0,02 Κυανούν της βρωμοθυμόλης 0,064 Άγαρ 10,0 Όξινη φουξίνη 0,1 ph 7,5 +/- 0,2 Άγαρ 13,5 ph 7,6 +/- 0,2 *Προσαρμοσμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται έτσι, ώστε να πληρούνται τα κριτήρια σχετικά με την απόδοση. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Προορίζεται αποκλειστικά για επαγγελματική χρήση. Μη χρησιμοποιείτε τρυβλία που εμφανίζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημάδια αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ ΚΑΙ ΔΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι σε θερμοκρασία μεταξύ 2 και 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες των 10 τρυβλίων για μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε τα τρυβλία στους 35 ± 2 C σε αερόβιο περιβάλλον. Περιστασιακά, τα είδη Shigella ενδέχεται να χρειάζονται επώαση 42 έως 48 ωρών. Εξετάστε τα τρυβλία μετά από 18 έως 24 και μετά από 42 έως 48 ώρες για την ποσότητα της ς, το μέγεθος των αποικιών, τη χρώση και την επιλεκτικότητα. Στελέχη DCLS Agar, Modified Hektoen Enteric Agar Escherichia coli ATCC Enterococcus faecalis ATCC Proteus mirabilis ATCC Salmonella Abony DSM 4224 Απουσία ς έως αρκετά καλή, ρόδινες-ερυθρές (ροζ) αποικίες, ενδεχόμενο ίζημα γύρω από τις αποικίες Πλήρης αναστολή Πορτοκαλί-ερυθρές αποικίες, αρκετά καλή έως καλή αποικίες, καλή έως εξαιρετική Αναστολή μερική ή πλήρης, αποικίες κίτρινες-πορτοκαλί, ενδέχεται να περιβάλλονται από ιζήματα, ερυθροκίτρινοι προς πορτοκαλί δακτύλιοι Αναστολή μερική έως πλήρης, μικροσκοπικές κίτρινες αποικίες, ερυθροκίτρινοι προς πορτοκαλί δακτύλιοι Κυανοπράσινες έως κυανές αποικίες με μαύρο Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, αποικίες πράσινες έως κυανοπράσινες με μαύρο PA

3 Salmonella Typhimurium ATCC Shigella flexneri ATCC Μη ενοφθαλμισμένο αποικίες, καλή έως εξαιρετική αποικίες, αρκετά καλή έως εξαιρετική Πορτοκαλί-ερυθρό χρώμα, ελαφρώς ιριδίζον Ανάπτυξη καλή έως εξαιρετική, αποικίες πράσινες έως κυανοπράσινες με μαύρο Ανάπτυξη αρκετά καλή έως εξαιρετική, αποικίες ανοικτοπράσινες Πράσινο, σχεδόν διάφανο ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο / Εντερικό άγαρ Hektoen) (διπλά τρυβλία Stacker των 90 mm) Μικροβιολογικά ελεγμένα. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται. Τύποι δειγμάτων Το υλικό αυτό χρησιμοποιείται για δείγματα κοπράνων από ασθενείς με υποψία βακτηριακής εντερικής λοίμωξης και για παρόμοια υλικά, π.χ. πρωκτικά επιχρίσματα (δείτε επίσης την ενότητα ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ). 7,8 Διαδικασία της εξέτασης Επιστρώστε γραμμωτά το δείγμα και στα δύο υλικά του διπλού τρυβλίου το συντομότερο δυνατό μετά την παραλαβή του στο εργαστήριο. Το τρυβλίο επίστρωσης χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση κεκαθαρμένων καλλιεργειών από δείγματα που περιέχουν ανάμεικτη χλωρίδα. Εναλλακτικά, εάν καλλιεργείται υλικό απευθείας από επίχρισμα, κυλήστε το στυλεό σε μια μικρή περιοχή της επιφάνειας στα άκρα. Μετά επιστρώστε για απομόνωση από τις ενοφθαλμισμένες περιοχές. Θα πρέπει επίσης να ενοφθαλμιστεί ένα λιγότερο εκλεκτικό υλικό όπως BD MacConkey II Agar και εκλεκτικό υγρό υλικό εμπλουτισμού, όπως Ζωμός Selenite F προκειμένου να αυξηθεί η πιθανότητα ανάκτησης όταν είναι χαμηλός ο πληθυσμός gram αρνητικών οργανισμών και προκειμένου να παρέχεται μια ένδειξη άλλων οργανισμών που μπορεί να υπάρχουν στο δείγμα. Για πλήρη συζήτηση σχετικά με την απομόνωση και την ταυτοποίηση εντερικών παθογόνων από κλινικά δείγματα, αναφερθείτε στις διαδικασίες που περιγράφονται στις κατάλληλες αναφορές. 6-8 Τα BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο / Εντερικό άγαρ Hektoen BD (διπλό τρυβλίο)) μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως υλικά για την ανακαλλιέργεια από ζωμό Selenite F. Επωάστε τα τρυβλία, προστατευμένα από το φως, στους 35 ± 2 C για 18 έως 24 ώρες. Εάν είναι αρνητικά, επωάστε εκ νέου για επιπλέον διάστημα 18 έως 24 ωρών. Αποτελέσματα Η τυπική μορφολογία των αποικιών με BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο / Εντερικό άγαρ Hektoen BD (διπλό τρυβλίο)) είναι η ακόλουθη: Οργανισμοί DCLS Agar, Modified (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο) E. coli Μεγάλες, επίπεδες, ροζ έως ερυθρές με μια ζώνη χολικού ιζήματος Enterobacter, Klebsiella Μεγάλες, βλεννώδεις, ροζ PA Hektoen Enteric Agar (Εντερικό άγαρ Hektoen) Μεγάλες, χρώματος κίτρινου έως ερυθροκίτρινου. Ορισμένα στελέχη ενδέχεται να ανασταλούν Μεγάλες, χρώματος κίτρινου έως ερυθροκίτρινου Proteus Άχρωμες έως ερυθρές Ποικίλες, κυανοπράσινες έως κυανές ή ερυθροκίτρινες, τα περισσότερα στελέχη έχουν μαύρο

4 Salmonella Άχρωμες έως ανοικτές ροζ Κυανοπράσινες έως κυανές αποικίες, τα περισσότερα στελέχη με μαύρο Shigella Άχρωμες έως ανοικτές ροζ Πράσινες και υγρές, ανασηκωμένες Pseudomonas Άχρωμες έως καφέ ή Ακανόνιστες, πράσινες έως καφέ πράσινες Gram θετικοί Απουσία ς Απουσία ς έως ελαφρά ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟΔΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑΣ Το BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) (Άγαρ DCLS, τροποποιημένο / Εντερικό άγαρ Hektoen BD (διπλό τρυβλίο)) χρησιμοποιείται για την απομόνωση των Salmonella και Shigella από δείγματα ανθρώπινων κοπράνων και πρωκτικά επιχρίσματα. 3,6-9 Αν ο αριθμός των παθογόνων στο δείγμα είναι χαμηλός, ενδεχομένως να μην ανιχνευθούν σε ιδιαίτερα επιλεκτικά υλικά. Συνιστάται να συμπεριλάβετε ένα υλικό με χαμηλότερου βαθμού επιλεκτικότητα, π.χ. το BD MacConkey II Agar (Άγαρ MacConkey ΙΙ) ή/και ένα υγρό επιλεκτικού εμπλουτισμού. 6-8 Οι αποικίες Proteus mirabilis μπορεί να ομοιάζουν με αυτές του Salmonella σε αυτά τα υλικά. Ορισμένα στελέχη Shigella ενδέχεται να χρειάζονται επώαση 42 έως 48 ωρών. Παρότι ορισμένες διαγνωστικές εξετάσεις είναι δυνατό να εκτελεστούν απευθείας στα υλικά καλλιέργειας, για πλήρη ταυτοποίηση είναι απαραίτητες βιοχημικές και, εάν υποδεικνύεται, ανοσολογικές εξετάσεις, με χρήση καθαρών καλλιεργειών. Οι αποικίες για τις οποίες υπάρχει υποψία ότι είναι Salmonella ή Shigella πρέπει να επιβεβαιώνονται και να ταυτοποιούνται ορολογικά. 6 Καθώς οι θρεπτικές απαιτήσεις των οργανισμών ποικίλλουν, ενδέχεται να παρουσιαστούν ορισμένα στελέχη τα οποία δεν θα αναπτυχθούν ή θα αναπτυχθούν ασθενώς σε αυτά τα υλικά. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Leifson, E New culture media based on sodium desoxycholate for the isolation of intestinal pathogens and for the enumeration of colon bacilli in milk and water. J. Pathol. Bacteriol. 40: Holt-Harris, J. E., and O. Teague A new culture medium for the isolation of Bacillus typhosus from stools. J. Infect. Dis. 18: MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 4. Hajna, A. A., and S. R. Damon New enrichment and plating medium for the isolation of Salmonella and Shigella organisms. Appl. Microbiol. 4: King, S., and W.I. Metzger A new plating medium for the isolation of enteric pathogens. I. Hektoen enteric agar. Appl. Microbiol. 16: Bopp, C.A., Brenner, F.W., Fields, P.I., Wells, J.G., and N.A. Strockbine Escherichia, Shigella, and Salmonella. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Isenberg, H. D. (ed.) Clinical microbiology procedures handbook, vol.1. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kist, M., et al Infektionen des Darmes. In: Mauch, H., Lόttiken, R., and S. Gatermann (eds.): MiQ - Qualitδtsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 9. Urban & Fischer, Munich, Germany. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ΔΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD DCLS Agar, Modified / Hektoen Enteric Agar (Biplate) Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία PA

5 ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD logo and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company 2011 BD PA