BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin

Transcript

1 PA Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΕΤΟΙΜΑ ΠΡΟΣ ΧΡΗΣΗ ΥΛΙΚΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΕ ΤΡΥΒΛΙΑ PA Αναθ.: Dec 2013 BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ Το BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin και το BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin είναι εκλεκτικά υλικά για την απομόνωση Haemophilus influenzae από κλινικά δείγματα. ΑΡΧΕΣ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Μικροβιολογική μέθοδος. Μολονότι τα είδη Haemophilus αποτελούν φυσικό μέρος της χλωρίδας της άνω αναπνευστικής οδού στον άνθρωπο, ορισμένοι ορότυποι του H. influenzae, όπως οι b και f (και πολύ σπανιότερα ο c), συνιστούν σημαντικό αίτιο μηνιγγίτιδας, σήψης, επιγλωττίτιδας και πολλών άλλων σοβαρών λοιμώξεων. Σε πολλές χώρες, μέχρι την υλοποίηση εμβολιασμού, ο H. influenzae ήταν μια από τις τρεις κύριες αιτίες βακτηριακής μηνιγγίτιδας στον κόσμο. 1 Σε συνηθισμένα υλικά με άγαρ αίματος προβάτου δεν είναι δυνατή η ανάπτυξη H. influenzae και ορισμένων άλλων ειδών Haemophilus γιατί χρειάζονται τους παράγοντες X (=αίμη) και V (=NAD) για την ανάπτυξή τους. Το BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin περιέχει αιμοσφαιρίνη που παρέχει αίμη και BD IsoVitaleX που παρέχει NAD (=νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο) και άλλες βιταμίνες. Τα γενικά θρεπτικά στοιχεία παρέχονται από τη βάση Σοκολατούχου Άγαρ GC II. Στο BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, τα γενικά θρεπτικά συστατικά παρέχονται από το Άγαρ Έγχυσης Εγκεφάλου Καρδιάς και το αίμα αλόγου παρέχει αίμη (παράγοντας X) και NAD (παράγοντας V) για την υποστήριξη της ανάπτυξης του H. influenzae. Η ανάπτυξη αυτού του οργανισμού μπορεί να ενισχυθεί τοποθετώντας ταινίες παράγοντα V (π.χ. ταινίες παράγοντα V BD Taxo) στο υλικό μετά τον ενοφθαλμισμό του. Και στα δύο υλικά προστίθεται βακιτρακίνη για να αναστείλει το μεγαλύτερο μέρος της φυσικής χλωρίδας, δεδομένου ότι ο H. influenzae είναι ανθεκτικός σε αυτόν τον αντιμικροβιακό παράγοντα. 1-4 Το BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin και το BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin χρησιμοποιούνται για την απομόνωση Haemophilus influenzae από κλινικά δείγματα που περιέχουν φυσική χλωρίδα. ΑΝΤΙ ΡΑΣΤΗΡΙΑ Συνθέσεις* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Παγκρεατικό αφομοίωμα της καζεΐνης 7,5 g Έγχυση Εγκεφάλου Καρδιάς από 8,0 g Στερεά υλικά Επιλεγμένη πεπτόνη κρέατος 7,5 Πεπτικό αφομοίωμα ζωϊκού ιστού 5,0 Άμυλο αραβοσίτου 1,0 Παγκρεατικό αφομοίωμα της 16,0 καζεΐνης Όξινο φωσφορικό κάλιο 4,0 Χλωριούχο νάτριο 5,0 ισόξινο φωσφορικό κάλιο 1,0 Γλυκόζη 2,0 Χλωριούχο νάτριο 5,0 Όξινο φωσφορικό δινάτριο 2,5 Άγαρ 14,0 Άγαρ 13,5 Βακιτρακίνη IU Βακιτρακίνη IU Αιμοσφαιρίνη 10,0 Αίμα αλόγου, απινωδογονωμένο 50,0 ml IsoVitaleX 10,0 ml ph 7,4 +/- 0,2 ph 7,2 +/- 0,2 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης.

2 Ο Εμπλουτισμός BD IsoVitaleX, που περιλαμβάνεται στο BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin, περιέχει τους ακόλουθους παράγοντες ανάπτυξης (σύνθεση* ανά λίτρο κεκαθαρμένου νερού): Βιταμίνη B 12 0,01 g L-γλουταμίνη 10,0 Αδενίνη 1,0 Υδροχλωρική γουανίνη 0,03 π-αμινοβενζοϊκό οξύ 0,013 Νικοτιναμιδο-αδενινο-δινουκλεοτίδιο (NAD) 0,25 Πυροφωσφορική θειαμίνη 0,1 Νιτρικός σίδηρος 0,02 Υδροχλωρική θειαμίνη 0,003 Υδροχλωρική κυστεΐνη 25,9 L-κυστίνη 1,1 Γλυκόζη 100,0 *Ρυθμισμένο ή/και συμπληρωμένο όπως απαιτείται, έτσι ώστε να πληρούνται τα κριτήρια απόδοσης. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ. Για επαγγελματική χρήση μόνον. Μη χρησιμοποιείτε τα τρυβλία εάν παρουσιάζουν ενδείξεις μικροβιακής μόλυνσης, αποχρωματισμό, ξηρότητα, ρωγμές ή άλλα σημεία αλλοίωσης. Συμβουλευτείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ σχετικά με τις ασηπτικές διαδικασίες χειρισμού, τους βιολογικούς κινδύνους και την απόρριψη του χρησιμοποιημένου προϊόντος. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΙΑΡΚΕΙΑ ΖΩΗΣ Κατά την παραλαβή, φυλάσσετε τα τρυβλία στο σκοτάδι στους 2 έως 8 C, στην αρχική συσκευασία τους έως τη στιγμή της χρήσης τους. Αποφεύγετε την κατάψυξη και την υπερβολική θέρμανση. Τα τρυβλία είναι δυνατό να ενοφθαλμιστούν έως την ημερομηνία λήξης (δείτε την ετικέτα της συσκευασίας) και να επωαστούν στους συνιστώμενους χρόνους επώασης. Είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν τρυβλία από ανοιγμένες στοίβες 5 ή 10 τρυβλίων επί μία εβδομάδα, εφόσον φυλάσσονται σε καθαρό χώρο στους 2 έως 8 C. ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ ΧΡΗΣΤΗ Ενοφθαλμίστε αντιπροσωπευτικά δείγματα με τα ακόλουθα στελέχη (για λεπτομέρειες, δείτε το έγγραφο ΓΕΝΙΚΕΣ Ο ΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ). Επωάστε για 24 έως 48 ώρες σε αερόβιο περιβάλλον εμπλουτισμένο με διοξείδιο του άνθρακα. Στελέχη Haemophilus influenzae ATCC BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin Αποδεκτή έως καλή ανάπτυξη, μικρές διάφανες έως γκρίζες αποικίες BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Ικανοποιητική ανάπτυξη, διάφανες μικρές αποικίες, καλή έως εξαιρετική ανάπτυξη γύρω από τις ταινίες παραγόντων V που τοποθετούνται στο υλικό Staphylococcus aureus Αναστολή μερική έως Αναστολή μερική έως ATCC Streptococcus pneumoniae Αναστολή μερική έως Αναστολή μερική έως ATCC 6305 Streptococcus pyogenes Αναστολή μερική έως Αναστολή μερική έως ATCC Streptococcus mitis Αναστολή μερική έως Αναστολή μερική έως DSM Μη ενοφθαλμισμένο Σοκολατί καφέ, αδιαφανές Ερυθρό (χρώμα αίματος) PA

3 ΙΑ ΙΚΑΣΙΑ Παρεχόμενα υλικά BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin ή BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin, και τα δύο παρέχονται με τρυβλία Stacker των 90 mm). Μικροβιολογικά ελεγμένο. Υλικά που δεν παρέχονται Βοηθητικά υλικά καλλιέργειας, αντιδραστήρια και εργαστηριακός εξοπλισμός, όπως απαιτείται ταινίες Παράγοντα V BD Taxo (μόνο για το BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin). Τύποι δειγμάτων Τα υλικά αυτά προορίζονται για χρήση στην απομόνωση Haemophilus influenzae από δείγματα αναπνευστικής οδού, π.χ. φαρυγγικά επιχρίσματα, ή άλλα δείγματα που περιέχουν φυσική χλωρίδα, π.χ., επιχρίσματα επιπεφυκώτος (δείτε επίσης ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ). Συλλογή και μεταφορά των δειγμάτων Ο Haemophilus influenzae είναι ευαίσθητος στις δυσμενείς περιβαλλοντικές συνθήκες. Συνεπώς, για όλα τα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται κατάλληλα υλικά μεταφοράς. Τα δείγματα πρέπει να αποστέλλονται στο εργαστήριο το συντομότερο δυνατόν και δεν πρέπει να είναι παλαιότερα από 24 ώρες, ακόμη κι αν χρησιμοποιούνται υλικά μεταφοράς. Η βέλτιστη θερμοκρασία μεταφοράς είναι 20 έως 25 C. Μην συντηρείτε τα δείγματα στο ψυγείο! ιαδικασία της εξέτασης Επιστρώστε το δείγμα αμέσως μόλις πραγματοποιηθεί η παραλαβή του στο εργαστήριο. Το τρυβλίο επίστρωσης χρησιμοποιείται κυρίως για την απομόνωση καθαρών καλλιεργειών από δείγματα που περιέχουν ανάμεικτη χλωρίδα. Εναλλακτικά, εάν καλλιεργείται υλικό απευθείας από επίχρισμα, κυλήστε το στυλεό σε μια μικρή περιοχή της επιφάνειας στο άκρο και μετά επιστρώστε από αυτή την ενοφθαλμισμένη περιοχή. Η ταινία παράγοντα V μπορεί να τοποθετηθεί στο BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin μετά τον ενοφθαλμισμό για βελτιωμένη ανάπτυξη. Επωάστε τα τρυβλία για 24 έως 48 ώρες σε υγρό περιβάλλον. Παρόλο που ο H. influenzae δεν εξαρτάται από αυξημένη συγκέντρωση CO 2, η επώαση σε βάζο BD GasPak εξοπλισμένο με φάκελο σχηματισμού διοξειδίου BD GasPak μπορεί να ενισχύσει την ανάπτυξη του οργανισμού. Για την απομόνωση όλων των παραγόντων που βρίσκονται στο δείγμα, θα πρέπει να ενοφθαλμιστεί επίσης BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) ή BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Αποτελέσματα BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin: Μετά την επώαση, εξετάστε τα τρυβλία για διάφανες έως γκρίζες αποικίες διαμέτρου μικρότερης από 2 mm μετά από 48 ώρες επώασης. Σε αυτό το υλικό μπορεί επίσης να αναπτυχθούν είδη Haemophilus πλην του H. influenzae. BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin: Μετά την επώαση, εξετάστε τα τρυβλία για μικρές, διάφανες αποικίες μετά από 48 ώρες επώασης. Η ανάπτυξη του H. influenzae ενισχύεται γύρω από την ταινία παράγοντα V. Μπορεί να αναπτυχθούν άλλα είδη Haemophilus χωρίς το συμπλήρωμα του παράγοντα V. Ο οργανισμός H. influenzae είναι μη αιμολυτικός και ο H. haemolyticus είναι συνήθως β-αιμολυτικός. Για οριστική ταυτοποίηση των απομονωμένων οργανισμών από αυτά τα υλικά απαιτούνται συμπληρωματικές βιοχημικές ή ορολογικές εξετάσεις. ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΑΠΟ ΟΣΗΣ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΙΑ ΙΚΑΣΙΑΣ Τα υλικά αυτά χρησιμοποιούνται για την απομόνωση Haemophilus influenzae από κλινικά δείγματα από περιοχές του σώματος που περιέχουν φυσική χλωρίδα. Τα υλικά αυτά δεν πρέπει να χρησιμοποιούνται για πρωτογενή απομόνωση ειδών Haemophilus από εγκεφαλονωτιαίο PA

4 υγρό ή από δείγματα που προέρχονται από άλλες στείρες πρωτογενείς περιοχές του σώματος. Αντί αυτού του υλικού, για αυτά τα δείγματα χρησιμοποιήστε μη εκλεκτικά υλικά όπως το BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) ή BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Παρόλο που το BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin και το BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin είναι εκλεκτικά υλικά, ενδέχεται να αναπτυχθούν οργανισμοί πλην του Haemophilus influenzae. Τα υλικά αναστέλλουν τα περισσότερα από τα βακτηριακά είδη της στοματικής χλωρίδας, αλλά δεν αναστέλλουν πλήρως τα στοματικά είδη Neisseria, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Eikenella corrodens και ορισμένους σταφυλόκοκκους. Για την επιβεβαίωση της απομόνωσης του H. influenzae ή άλλων ειδών Haemophilus απαιτούνται χρώσεις Gram και συμπληρωματικές βιοχημικές και ορολογικές εξετάσεις. Ορισμένα στελέχη και είδη Haemophilus, συμπεριλαμβανομένης της ποικιλίας H. influenzae aegyptius (=H. aegyptius) και H. ducreyi, είναι γνωστό ότι αναστέλλονται από τη βακιτρακίνη και συνεπώς, δεν αναπτύσσονται σε αυτά τα υλικά. Για να επιτύχετε πλήρη απομόνωση όλων των παθογόνων του δείγματος, θα πρέπει να ενοφθαλμιστεί με το δείγμα και ένα μη εκλεκτικό υλικό όπως το BD Chocolate Agar (GC Agar with IsoVitaleX) ή BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base). Επειδή τα είδη Haemophilus αποτελούν μέρος της φυσικής χλωρίδας της αναπνευστικής οδού, η παρουσία τους στα δείγματα της άνω αναπνευστικής οδού, όπως φαρυγγικά επιχρίσματα και πτύελα δεν υποδεικνύει απαραίτητα ότι οι οργανισμοί αυτοί είναι αιτία κάποιας μόλυνσης. Απαιτούνται ορολογικές εξετάσεις για να αποδειχθεί ότι ο απομονωμένος οργανισμός ανήκει σε οροομάδες που εμπλέκονται συνήθως σε λοιμώξεις. 1,2 ΑΝΑΦΟΡΕΣ 1. Kilian, M Haemophilus. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 2. Mannheim, W. et al.: Pasteurellaceae. In: Mikrobiologische Diagnostik (ed. F. Burkhardt). Thieme Verlag, Stuttgart Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Chapin, K., and G.V. Doern Selective media for recovery of Haemophilus influenzae from species contaminated with upper respiratory tract microbial flora. J. Clin. Microbiol. 17: ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ/ ΙΑΘΕΣΙΜΟΤΗΤΑ BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία BD Brain Heart Infusion Agar with 5% Horse Blood and Bacitracin Αρ. κατ Έτοιμα προς χρήση υλικά καλλιέργειας σε τρυβλία, 20 τρυβλία ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ Για περισσότερες πληροφορίες, παρακαλούμε επικοινωνήστε με τον τοπικό αντιπρόσωπο της BD. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com PA

5 ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA